JPH06181740A - 培養用容器及びその製造方法 - Google Patents
培養用容器及びその製造方法Info
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- JPH06181740A JPH06181740A JP22597593A JP22597593A JPH06181740A JP H06181740 A JPH06181740 A JP H06181740A JP 22597593 A JP22597593 A JP 22597593A JP 22597593 A JP22597593 A JP 22597593A JP H06181740 A JPH06181740 A JP H06181740A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
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- C12M23/10—Petri dish
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
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- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 容器本体２内の底面に、容易に剥がすことが
でき培養用小片となる、透明なゴム状で厚さ０．０５〜
２ｍｍのシリコーンゴムの被覆部を設け、その表面を物
理化学的手段により親水化処理する。 【効果】 小片上培養において、培養中の浮き上がりや
ずれ、取扱い中の破損などがなく、培養後はピンセット
で容易に引き剥がすことが出来、また、スライドグラス
や別の培養用容器の底面に対して容易に密着させること
が出来る。
でき培養用小片となる、透明なゴム状で厚さ０．０５〜
２ｍｍのシリコーンゴムの被覆部を設け、その表面を物
理化学的手段により親水化処理する。 【効果】 小片上培養において、培養中の浮き上がりや
ずれ、取扱い中の破損などがなく、培養後はピンセット
で容易に引き剥がすことが出来、また、スライドグラス
や別の培養用容器の底面に対して容易に密着させること
が出来る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、培養用小片上での組織
培養や細胞培養に使用する、培養用容器に関するもので
ある。
培養や細胞培養に使用する、培養用容器に関するもので
ある。
【０００２】
【従来の技術】組織培養、細胞培養等の分野において
は、培養した組織や細胞の顕微鏡用標本を製作したり、
培養後、培養部分をそっくりそのまま別の系に移して培
養を続けたい時などには、一般にペトリ皿やプレートの
ウェル内に、顕微鏡用プレパラートを作成するときに使
用する硝子製のカバーグラスを留置し、培地中でそのカ
バーグラス上に組織や細胞等を培養する。培養を終えた
らそのカバーグラスを取り出し、スライドグラス上に固
定して顕微鏡用の標本としたり、組織や細胞を培養した
複数のカバーグラスを１つの培養系に移しかえて共培養
し、細胞間の伝達物質の相互作用をみたりする。
は、培養した組織や細胞の顕微鏡用標本を製作したり、
培養後、培養部分をそっくりそのまま別の系に移して培
養を続けたい時などには、一般にペトリ皿やプレートの
ウェル内に、顕微鏡用プレパラートを作成するときに使
用する硝子製のカバーグラスを留置し、培地中でそのカ
バーグラス上に組織や細胞等を培養する。培養を終えた
らそのカバーグラスを取り出し、スライドグラス上に固
定して顕微鏡用の標本としたり、組織や細胞を培養した
複数のカバーグラスを１つの培養系に移しかえて共培養
し、細胞間の伝達物質の相互作用をみたりする。
【０００３】この時、使用されるカバーグラスは非常に
破損しやすく、取扱い途中で割れてしまうことが多いと
いう欠点があった。そこで最近、透明なプラスチックフ
ィルムの表面に親水化処理を施した培養用小片が使用さ
れるようになってきた。しかし、硝子に比べてプラスチ
ックフィルムは比重が小さく、又、培地は比重が大きい
ため、プラスチックフィルムは培地中に浮いてしまった
り完全に沈まないと言う問題がある。そのため細胞を播
種しても、目的とする培養用小片上に細胞が接着しなか
ったり、両面に接着してしまうという欠点がある。
破損しやすく、取扱い途中で割れてしまうことが多いと
いう欠点があった。そこで最近、透明なプラスチックフ
ィルムの表面に親水化処理を施した培養用小片が使用さ
れるようになってきた。しかし、硝子に比べてプラスチ
ックフィルムは比重が小さく、又、培地は比重が大きい
ため、プラスチックフィルムは培地中に浮いてしまった
り完全に沈まないと言う問題がある。そのため細胞を播
種しても、目的とする培養用小片上に細胞が接着しなか
ったり、両面に接着してしまうという欠点がある。
【０００４】また、共培養に用いる場合、比重の重い硝
子製のカバーグラスを用いても、持ち運びの際に培養容
器の中でカバーグラスが動いてしまい、細胞間の伝達物
質の方向性を見たい場合など支障となる。
子製のカバーグラスを用いても、持ち運びの際に培養容
器の中でカバーグラスが動いてしまい、細胞間の伝達物
質の方向性を見たい場合など支障となる。
【０００５】そこで、カバーグラスやプラスチックフィ
ルム製培養用小片の片面に粘着剤などを塗布し、容器内
に固定する方法もあるが、培養後に標本としてプレパラ
ートを作りたい場合、その粘着剤を除去する必要がでて
くる。また、粘着性のあるシート上に培養することも試
みられているが、そのようなシートを量産しようとした
場合、シート同志が粘着し合って取扱上支障をきたすの
で、シート同志の粘着を防止するため、離型紙などでシ
ートをはさむ必要がでてくる。
ルム製培養用小片の片面に粘着剤などを塗布し、容器内
に固定する方法もあるが、培養後に標本としてプレパラ
ートを作りたい場合、その粘着剤を除去する必要がでて
くる。また、粘着性のあるシート上に培養することも試
みられているが、そのようなシートを量産しようとした
場合、シート同志が粘着し合って取扱上支障をきたすの
で、シート同志の粘着を防止するため、離型紙などでシ
ートをはさむ必要がでてくる。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、組織や細胞
の小片上での培養におけるこのような問題点を解決しよ
うとしたもので、その目的とするところは、割れ難く、
培地中で浮き上がらず、培養後の他の培養床やスライド
グラス上への移動と固定が容易で確実にでき、しかも構
造的にシンプルでコストの安い、多目的な小片上での培
養に適した培養用容器を提供することにある。
の小片上での培養におけるこのような問題点を解決しよ
うとしたもので、その目的とするところは、割れ難く、
培地中で浮き上がらず、培養後の他の培養床やスライド
グラス上への移動と固定が容易で確実にでき、しかも構
造的にシンプルでコストの安い、多目的な小片上での培
養に適した培養用容器を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】即ち本発明は、容器本体
内の底面に、容易に剥がすことができ培養用小片とな
る、透明なゴム状の被覆部を設けたことを特徴とする培
養用容器であり、また、透明なプラスチック製の成形品
よりなる容器本体に、液状のシリコーンゴムを注入し硬
化させて、被覆部を形成し、該被覆部の表面に物理化学
的手段により親水性を付与することを特徴とする培養用
容器の製造方法である。
内の底面に、容易に剥がすことができ培養用小片とな
る、透明なゴム状の被覆部を設けたことを特徴とする培
養用容器であり、また、透明なプラスチック製の成形品
よりなる容器本体に、液状のシリコーンゴムを注入し硬
化させて、被覆部を形成し、該被覆部の表面に物理化学
的手段により親水性を付与することを特徴とする培養用
容器の製造方法である。
【０００８】以下、図面により本発明を詳細に説明す
る。図１は本発明の１実施例となる培養用容器の断面図
である。
る。図１は本発明の１実施例となる培養用容器の断面図
である。
【０００９】対象となる培養用容器の形状としては特に
制限はないが、一般には図１に示したように、容器本体
（２）と蓋（１）からなる、ペトリ皿（ａ）や複数のウ
ェルを有するプレート（ｂ）が用いられる。尚、本発明
においては、蓋の有無は特に問題としない。これら培養
用容器の材質としては、透明性を有すること、細胞毒性
のないこと、耐水性を有すること等が必要とされるが、
この他、後述する被覆部（３）の離型性を加味して、形
成品表面の極性の小さいものが好ましい。そのような樹
脂としては、ポリスチレン、ポリエステル、ポリプロピ
レン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニール、ＴＰＸ樹脂等
が挙げられる。
制限はないが、一般には図１に示したように、容器本体
（２）と蓋（１）からなる、ペトリ皿（ａ）や複数のウ
ェルを有するプレート（ｂ）が用いられる。尚、本発明
においては、蓋の有無は特に問題としない。これら培養
用容器の材質としては、透明性を有すること、細胞毒性
のないこと、耐水性を有すること等が必要とされるが、
この他、後述する被覆部（３）の離型性を加味して、形
成品表面の極性の小さいものが好ましい。そのような樹
脂としては、ポリスチレン、ポリエステル、ポリプロピ
レン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニール、ＴＰＸ樹脂等
が挙げられる。
【００１０】被覆部（３）を形成する材質としては、透
明性を有すること、細胞毒性のないこと、ゴムのような
弾性及び柔軟性を有すると共に、前記のような材質の容
器本体の表面から容易に剥がすことが出来ること、耐水
性を有すること等の条件を満たしていれば特に制限はな
いが、培養後に種々の溶剤による処理が行われる可能性
があることから、耐溶剤性を有するものとして、シリコ
ーンゴムが好適である。用いるシリコーンゴムとして
は、主剤と硬化剤よりなる２液性の液状シリコーンゴム
を用いる。できれば室温で硬化するタイプが良い。
明性を有すること、細胞毒性のないこと、ゴムのような
弾性及び柔軟性を有すると共に、前記のような材質の容
器本体の表面から容易に剥がすことが出来ること、耐水
性を有すること等の条件を満たしていれば特に制限はな
いが、培養後に種々の溶剤による処理が行われる可能性
があることから、耐溶剤性を有するものとして、シリコ
ーンゴムが好適である。用いるシリコーンゴムとして
は、主剤と硬化剤よりなる２液性の液状シリコーンゴム
を用いる。できれば室温で硬化するタイプが良い。
【００１１】次に、シリコーンゴムの被覆による、本発
明の製造方法について説明する。まず、所定量の主剤と
硬化剤とを良く混合する。混合の際気泡を巻き込むの
で、混合後、減圧下で脱泡を行う。この様にして調製し
た液状シリコーンゴムを、容器本体（２）内の底面に一
定量づつ分注する。その後、水平に保ちながら、室温で
放置する。液状シリコーンゴムは容器の底面に一様に広
がり、やがて硬化する。
明の製造方法について説明する。まず、所定量の主剤と
硬化剤とを良く混合する。混合の際気泡を巻き込むの
で、混合後、減圧下で脱泡を行う。この様にして調製し
た液状シリコーンゴムを、容器本体（２）内の底面に一
定量づつ分注する。その後、水平に保ちながら、室温で
放置する。液状シリコーンゴムは容器の底面に一様に広
がり、やがて硬化する。
【００１２】硬化した被覆部（３）は、厚さは均等で、
透明性を有し、表面平滑である。被覆部（３）の厚さ
は、液状シリコーンゴムの容器内への分注量により調整
可能であり、０．０５〜２ｍｍの範囲にするのがよい。
０．０５ｍｍより薄いと、培養後に容器底面から剥離さ
せた際、シート状の被覆部（３）の形状が保持しにく
く、後処理時の取扱いが困難となる。また、２ｍｍより
厚いと、顕微鏡観察の際に観察対象標本と対物レンズと
の距離が遠くなり、高倍率での観察が困難となるので好
ましくない。
透明性を有し、表面平滑である。被覆部（３）の厚さ
は、液状シリコーンゴムの容器内への分注量により調整
可能であり、０．０５〜２ｍｍの範囲にするのがよい。
０．０５ｍｍより薄いと、培養後に容器底面から剥離さ
せた際、シート状の被覆部（３）の形状が保持しにく
く、後処理時の取扱いが困難となる。また、２ｍｍより
厚いと、顕微鏡観察の際に観察対象標本と対物レンズと
の距離が遠くなり、高倍率での観察が困難となるので好
ましくない。
【００１３】この様にして形成されたシリコーンゴムの
被覆部（３）は表面が疎水性で、このままでは被覆部
（３）上に組織や細胞が接着しにくいので、表面を親水
化する。親水化処理の方法としては、コロナ放電処理、
低温プラズマ処理、紫外線照射処理等の物理化学的な手
段を用いるのが良い。最後に、パッケイジングを行い、
滅菌を施す。滅菌方法としては、エチレンオキサイドガ
ス、ガンマ線、電子線等による方法が適用できる。
被覆部（３）は表面が疎水性で、このままでは被覆部
（３）上に組織や細胞が接着しにくいので、表面を親水
化する。親水化処理の方法としては、コロナ放電処理、
低温プラズマ処理、紫外線照射処理等の物理化学的な手
段を用いるのが良い。最後に、パッケイジングを行い、
滅菌を施す。滅菌方法としては、エチレンオキサイドガ
ス、ガンマ線、電子線等による方法が適用できる。
【００１４】さらに、初代培養においては、一般の培養
容器の場合と同様に、被覆部（３）即ち培養面に、培養
する細胞の種類や目的に応じて、ファィブロネクチン、
ビトロネクチン、ラミニン等の細胞接着因子や、コラー
ゲン、ゼラチンなど生体由来の細胞外マトリックスをコ
ートすることにより、細胞の伸展、接着等が一層よくな
る。また、神経系の細胞の培養では、ポリリジン、ポリ
オルニチン、ポリエチレンイミン、アミノ化シランなど
の、陽性電荷を有する合成物質をコートすることによ
り、細胞の伸展や接着の他、神経突起の伸長が促進さ
れ、また、長期培養時の細胞の生存率も高くなる。
容器の場合と同様に、被覆部（３）即ち培養面に、培養
する細胞の種類や目的に応じて、ファィブロネクチン、
ビトロネクチン、ラミニン等の細胞接着因子や、コラー
ゲン、ゼラチンなど生体由来の細胞外マトリックスをコ
ートすることにより、細胞の伸展、接着等が一層よくな
る。また、神経系の細胞の培養では、ポリリジン、ポリ
オルニチン、ポリエチレンイミン、アミノ化シランなど
の、陽性電荷を有する合成物質をコートすることによ
り、細胞の伸展や接着の他、神経突起の伸長が促進さ
れ、また、長期培養時の細胞の生存率も高くなる。
【００１５】細胞外マトリックスや陽性電荷を有する合
成物のコートは、前記のようにして親水化処理した被覆
部（３）の表面全体を覆うように、細胞外マトリックス
もしくは陽性電荷を有する合成物を、水、メタノール、
エタノール、水とメタノールの混合溶媒、もしくは水と
エタノールの混合溶媒に溶解した溶液を満たす。そし
て、細胞外マトリックスもしくは陽性電荷を有する合成
物質がゴム状の被覆部に吸着される間、例えば１０分程
度、室温で静置した後、該溶液を排出し、純水で洗浄
し、風乾もしくは４０℃以下の温度で乾燥することによ
り行われる。
成物のコートは、前記のようにして親水化処理した被覆
部（３）の表面全体を覆うように、細胞外マトリックス
もしくは陽性電荷を有する合成物を、水、メタノール、
エタノール、水とメタノールの混合溶媒、もしくは水と
エタノールの混合溶媒に溶解した溶液を満たす。そし
て、細胞外マトリックスもしくは陽性電荷を有する合成
物質がゴム状の被覆部に吸着される間、例えば１０分程
度、室温で静置した後、該溶液を排出し、純水で洗浄
し、風乾もしくは４０℃以下の温度で乾燥することによ
り行われる。
【００１６】次に、本発明による培養用容器の使用方法
を説明する。培養方法は、一般の組織培養用のペトリ皿
やプレート中での培養に準じて行えばよい。この時、被
覆部（３）は、培養用小片と同じ役目をするもので、容
器本体（２）の底面に密着しているため、播種された細
胞や組織は、被覆部（３）の表面上のみに接着して増殖
する。培養途中での倒立顕微鏡による観察も一般の組織
培養用の容器と同様に出来、また、従来の培養用小片の
使用時ような小片の浮き上がりや、移動という、観察中
の不具合が全くない。
を説明する。培養方法は、一般の組織培養用のペトリ皿
やプレート中での培養に準じて行えばよい。この時、被
覆部（３）は、培養用小片と同じ役目をするもので、容
器本体（２）の底面に密着しているため、播種された細
胞や組織は、被覆部（３）の表面上のみに接着して増殖
する。培養途中での倒立顕微鏡による観察も一般の組織
培養用の容器と同様に出来、また、従来の培養用小片の
使用時ような小片の浮き上がりや、移動という、観察中
の不具合が全くない。
【００１７】培養後、被覆部（３）の端をピンセットで
つまんで持ち上げれば、被覆部（３）は容易に剥がれ
る。剥離した被覆部は、脱水や固定、染色用の溶液中に
浸漬され、乾燥したのち、スライドガラス上に固定化さ
れ、標本として保存される。被覆部はゴム状の柔軟なシ
ート状であるから、スライドガスラ表面に対して容易に
密着させることが出来る。
つまんで持ち上げれば、被覆部（３）は容易に剥がれ
る。剥離した被覆部は、脱水や固定、染色用の溶液中に
浸漬され、乾燥したのち、スライドガラス上に固定化さ
れ、標本として保存される。被覆部はゴム状の柔軟なシ
ート状であるから、スライドガスラ表面に対して容易に
密着させることが出来る。
【００１８】又、細胞からの分泌物の他の細胞への影響
をみる場合、対象となる複数の細胞を別々に本発明の培
養用容器中で培養し、各々の被覆部（３）を剥がして、
一つの培養容器の底面に並べて密着させ、複数の細胞の
共培養を行う。この際も、被覆部（３）は、培養容器底
面にしっかりと密着し、従来の小片上培養のような、取
扱途中における小片の移動がなく、小片同志が接触する
ことはない。又、分泌物の方向性も確実にみることがで
きる。又、複数の種類の細胞の同時観察も可能である。
をみる場合、対象となる複数の細胞を別々に本発明の培
養用容器中で培養し、各々の被覆部（３）を剥がして、
一つの培養容器の底面に並べて密着させ、複数の細胞の
共培養を行う。この際も、被覆部（３）は、培養容器底
面にしっかりと密着し、従来の小片上培養のような、取
扱途中における小片の移動がなく、小片同志が接触する
ことはない。又、分泌物の方向性も確実にみることがで
きる。又、複数の種類の細胞の同時観察も可能である。
【００１９】
【発明の効果】本発明に従うと、容器本体の底面に設け
られ、培養用小片の役目をする被覆部は、培養中の浮き
上がりやずれ、取扱中の破損などの心配がなく、また、
培養後はピンセットにより容易に剥がすことが出来て、
スライドグラス上に固定してプレパラートを作成した
り、別の培養容器に移して培養する場合、粘着剤などを
塗布することなく、容易且つ確実に固定することがで
き、また、倒立顕微鏡による観察の妨げにもならず、多
目的な小片上培養に使用する培養用容器として好適であ
る。
られ、培養用小片の役目をする被覆部は、培養中の浮き
上がりやずれ、取扱中の破損などの心配がなく、また、
培養後はピンセットにより容易に剥がすことが出来て、
スライドグラス上に固定してプレパラートを作成した
り、別の培養容器に移して培養する場合、粘着剤などを
塗布することなく、容易且つ確実に固定することがで
き、また、倒立顕微鏡による観察の妨げにもならず、多
目的な小片上培養に使用する培養用容器として好適であ
る。
【図１】本発明の１実施例となる培養用容器の断面図で
ある。
ある。
１ 蓋 ２ 容器本体 ３ 被覆部
Claims (6)
- 【請求項１】 容器本体内の底面に、容易に剥がすこと
ができ培養用小片となる、透明なゴム状の被覆部を設け
たことを特徴とする培養用容器。 - 【請求項２】 被覆部が厚さ０．０５〜２ｍｍのシリコ
ーンゴム被膜であり、その表面が親水化処理されている
ことを特徴とする、請求項１記載の培養用容器。 - 【請求項３】 被覆部表面に、コラーゲン、ゼラチン、
ラミニン、ファィブロネクチン、ビトロネクチンなど
の、細胞外マトリックスをコートしたことを特徴とす
る、請求項１もしくは請求項２記載の培養用容器。 - 【請求項４】 被覆部表面に、ポリリジン、ポリオルチ
ニン、ポリエチレンイミン、アミノ化シランなどの、陽
性電荷を有する合成物をコートしたことを特徴とする、
請求項１もしくは請求項２記載の培養用容器。 - 【請求項５】 透明なプラスチック製の成形品よりなる
容器本体に、液状のシリコーンゴムを注入し硬化させ
て、被覆部を形成し、該被覆部の表面に物理化学的手段
により親水性を付与することを特徴とする培養用容器の
製造方法。 - 【請求項６】 細胞外マトリックスもしくは陽性電荷を
有する合成物を、水、メタノール、エタノール、水とメ
タノールの混合溶媒、もしくは水とエタノールの混合溶
媒に溶解した溶液を、請求項５に記載された培養用容器
の被覆部表面に満たして室温で静置した後、該溶液を排
出し、純水で洗浄し、風乾もしくは４０℃以下の温度で
乾燥することを特徴とする培養用容器の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22597593A JPH06181740A (ja) | 1992-09-17 | 1993-09-10 | 培養用容器及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4-248158 | 1992-09-17 | ||
| JP24815892 | 1992-09-17 | ||
| JP22597593A JPH06181740A (ja) | 1992-09-17 | 1993-09-10 | 培養用容器及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06181740A true JPH06181740A (ja) | 1994-07-05 |
Family
ID=26526922
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22597593A Pending JPH06181740A (ja) | 1992-09-17 | 1993-09-10 | 培養用容器及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06181740A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003054138A1 (en) * | 2001-12-20 | 2003-07-03 | Applied Cell Biotechnologies, Inc. | Cell culture instrument and method of separating and subculturing cells |
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| JP2007312775A (ja) * | 2006-05-25 | 2007-12-06 | Nalge Nunc Internatl | 細胞培養表面化学 |
| WO2009127975A3 (en) * | 2008-10-31 | 2009-12-30 | Mmi Ag | Petri-dish for cell cultivation and microscopy |
| JP2015107110A (ja) * | 2013-10-22 | 2015-06-11 | 株式会社メニコン | 軟質培養容器 |
| JP2016182091A (ja) * | 2015-03-26 | 2016-10-20 | 国立研究開発法人産業技術総合研究所 | 細胞培養器及び細胞培養方法 |
| JP2018166477A (ja) * | 2017-03-30 | 2018-11-01 | ベセル株式会社 | 細胞培養プレートおよびその製造方法、ならびに細胞培養方法 |
| US10150945B2 (en) | 2004-07-23 | 2018-12-11 | Jnc Corporation | Cell culture device and manufacturing method therof |
-
1993
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