JPH06197796A - カチオン界面活性剤もしくはポリマー及び４′−ヒドロキシアセトアニリドを含有する化学ルミネセンス組成物、試験キット並びに分析方法におけるそれらの用途 - Google Patents
カチオン界面活性剤もしくはポリマー及び４′−ヒドロキシアセトアニリドを含有する化学ルミネセンス組成物、試験キット並びに分析方法におけるそれらの用途Info
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 化学ルミネセンス信号発生性組成物を提供す
る。 【構成】 分析方法において化学ルミネセンス信号を提
供するのに有用な水性組成物は、特定量の低分子量カチ
オン界面活性剤もしくはカチオンポリマーの存在により
安定化される。また組成物は 2,3−ジヒドロ− 1,4−フ
タラジンジオン誘導体、例えば、ルミノール、及び４′
−ヒドロキシアセトアニリドを含む。化学ルミネセンス
信号は、ペルオキシダーゼ又はペルオキシダーゼ標識特
異的バインディング種（例えば、抗体もしくはオリゴヌ
クレオチド）の存在下で組成物を用いて発生せしめられ
る。
る。 【構成】 分析方法において化学ルミネセンス信号を提
供するのに有用な水性組成物は、特定量の低分子量カチ
オン界面活性剤もしくはカチオンポリマーの存在により
安定化される。また組成物は 2,3−ジヒドロ− 1,4−フ
タラジンジオン誘導体、例えば、ルミノール、及び４′
−ヒドロキシアセトアニリドを含む。化学ルミネセンス
信号は、ペルオキシダーゼ又はペルオキシダーゼ標識特
異的バインディング種（例えば、抗体もしくはオリゴヌ
クレオチド）の存在下で組成物を用いて発生せしめられ
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、生物学的流体中の種々
分析物を検出するための分析化学及び診断化学の分野に
関する。詳細には、それは化学ルミネセンスアッセイに
有用な信号発生性組成物、それを含有する試験キット並
びに該組成物及び試験キットを使用できる分析方法に関
する。
分析物を検出するための分析化学及び診断化学の分野に
関する。詳細には、それは化学ルミネセンスアッセイに
有用な信号発生性組成物、それを含有する試験キット並
びに該組成物及び試験キットを使用できる分析方法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】発光アッセイ及び測光アッセイは、目的
の分析物の存在の結果として光の放出を生じるものであ
る。一般的には光の放出は、それを測定又は検出するの
に十分な存続時間を有し、それによって分析物を検出す
る。化学ルミネセンス信号（chemiluminescent signal)
を発生するのに使用される通常の反応系は、過酸化作用
についての基質として、 2,3−ジヒドロ−1,4 −フタラ
ジンジオン誘導体（本明細書では「ＤＰＤ」と同一であ
る）、例えば、ルミノールもしくはイソルミノールを利
用するものである。ＤＰＤが使用されるものを包含する
複数の試みが化学ルミネセンスアッセイの感度を改良し
てきた。例えば、米国特許第 4,729,950号明細書は、あ
る種の芳香族アミン増強剤（enhancer) の使用を記載す
る。同様にある種の芳香族フェノールが同じ目的で米国
特許第4,598,044号明細書に記載されている。
の分析物の存在の結果として光の放出を生じるものであ
る。一般的には光の放出は、それを測定又は検出するの
に十分な存続時間を有し、それによって分析物を検出す
る。化学ルミネセンス信号（chemiluminescent signal)
を発生するのに使用される通常の反応系は、過酸化作用
についての基質として、 2,3−ジヒドロ−1,4 −フタラ
ジンジオン誘導体（本明細書では「ＤＰＤ」と同一であ
る）、例えば、ルミノールもしくはイソルミノールを利
用するものである。ＤＰＤが使用されるものを包含する
複数の試みが化学ルミネセンスアッセイの感度を改良し
てきた。例えば、米国特許第 4,729,950号明細書は、あ
る種の芳香族アミン増強剤（enhancer) の使用を記載す
る。同様にある種の芳香族フェノールが同じ目的で米国
特許第4,598,044号明細書に記載されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】この技術は幾分成功裏
に商業的に使用されてきたが、しかし非常に低い分析物
濃度における感度、試薬の保存安定性の増強及び速度論
的（kinetic)安定性（すなわち、一定の光を生成してい
る存続時間）に関して更なる改良の必要性が存在する。
種々の系で化学ルミネセンスを改良するためにミセルを
使用することが、多数の文献に記載されている。ミセル
が増強剤と合わさって化学ルミネセンスを更に改良する
ことは明らかであるようであるが、しかし、米国特許第
4,598,044号明細書の増強剤（例えば、ｐ−ヨードフェ
ノール）がミセルと共に使用される場合にはこれが正し
くないことが認められた。
に商業的に使用されてきたが、しかし非常に低い分析物
濃度における感度、試薬の保存安定性の増強及び速度論
的（kinetic)安定性（すなわち、一定の光を生成してい
る存続時間）に関して更なる改良の必要性が存在する。
種々の系で化学ルミネセンスを改良するためにミセルを
使用することが、多数の文献に記載されている。ミセル
が増強剤と合わさって化学ルミネセンスを更に改良する
ことは明らかであるようであるが、しかし、米国特許第
4,598,044号明細書の増強剤（例えば、ｐ−ヨードフェ
ノール）がミセルと共に使用される場合にはこれが正し
くないことが認められた。
【０００４】
【課題を解決するための手段】前記既知化学ルミネセン
ス系で注目された課題は、７〜9.5 のpHを有し、そして ａ） 2,3−ジヒドロ−1,4 −フタラジンジオン誘導体、 ｂ）低分子量カチオン界面活性剤（その臨界ミセル濃度
を越える0.05〜0.25％で存在する）又は0.01〜２％のカ
チオンポリマー、並びに ｃ）４′−ヒドロキシアセトアニリド、を含んで成る化
学ルミネセンス信号を提供するための組成物で解決され
る。
ス系で注目された課題は、７〜9.5 のpHを有し、そして ａ） 2,3−ジヒドロ−1,4 −フタラジンジオン誘導体、 ｂ）低分子量カチオン界面活性剤（その臨界ミセル濃度
を越える0.05〜0.25％で存在する）又は0.01〜２％のカ
チオンポリマー、並びに ｃ）４′−ヒドロキシアセトアニリド、を含んで成る化
学ルミネセンス信号を提供するための組成物で解決され
る。
【０００５】また本発明は、個別に包装された ａ） 2,3−ジヒドロ−1,4 −フタラジンジオン誘導体、
及び１つ以上の以下の試薬、 ｂ）低分子量カチオン界面活性剤（その臨界ミセル濃度
を越える0.05〜0.25％で存在する）又は0.01〜２％のカ
チオンポリマー、 ｃ）４′−ヒドロキシアセトアニリド、並びに ｄ）ペルオキシダーゼもしくはペルオキシダーゼ標識特
異的バインディング種、を含んで成る診断試験キットを
提供する。
及び１つ以上の以下の試薬、 ｂ）低分子量カチオン界面活性剤（その臨界ミセル濃度
を越える0.05〜0.25％で存在する）又は0.01〜２％のカ
チオンポリマー、 ｃ）４′−ヒドロキシアセトアニリド、並びに ｄ）ペルオキシダーゼもしくはペルオキシダーゼ標識特
異的バインディング種、を含んで成る診断試験キットを
提供する。
【０００６】更に本発明は、Ａ．ペルオキシダーゼを、
2,3−ジヒドロ−1,4 −フタラジンジオン誘導体、酸化
体、低分子量カチオン界面活性剤（その臨界ミセル濃度
を越える0.05〜0.25％で存在する）又は0.01〜２％のカ
チオンポリマー、並びに４′−ヒドロキシアセトアニリ
ドの存在下で反応せしめて化学ルミネセンス信号を生成
する工程、そして Ｂ．得られた信号を検出する工程、を含んで成るペルオ
キシダーゼに応じて化学ルミネセンス信号を提供する方
法を提供する。
2,3−ジヒドロ−1,4 −フタラジンジオン誘導体、酸化
体、低分子量カチオン界面活性剤（その臨界ミセル濃度
を越える0.05〜0.25％で存在する）又は0.01〜２％のカ
チオンポリマー、並びに４′−ヒドロキシアセトアニリ
ドの存在下で反応せしめて化学ルミネセンス信号を生成
する工程、そして Ｂ．得られた信号を検出する工程、を含んで成るペルオ
キシダーゼに応じて化学ルミネセンス信号を提供する方
法を提供する。
【０００７】本発明は、Ａ．特異的バインディングリガ
ンドをリガンドに特異的なレセプターと複合せしめて特
異的バインディング複合体を生成せしめる工程、 Ｂ．特異的バインディング複合体をペルオキシダーゼで
標識する工程 Ｃ．ペルオキシダーゼ標識複合体を、2,3−ジヒドロ−
1,4 −フタラジンジオン誘導体、酸化体、低分子量カチ
オン界面活性剤（その臨界ミセル濃度を越える0.05〜0.
25％で存在する）又は0.01〜２％のカチオンポリマー、
並びに４′−ヒドロキシアセトアニリドと接触せしめて
化学ルミネセンス信号を生成する工程、そして Ｄ．得られた信号を検出する工程、を含んで成る特異的
バインディングリガンドを検出するための特異的バイン
ディングアッセイを提供する。
ンドをリガンドに特異的なレセプターと複合せしめて特
異的バインディング複合体を生成せしめる工程、 Ｂ．特異的バインディング複合体をペルオキシダーゼで
標識する工程 Ｃ．ペルオキシダーゼ標識複合体を、2,3−ジヒドロ−
1,4 −フタラジンジオン誘導体、酸化体、低分子量カチ
オン界面活性剤（その臨界ミセル濃度を越える0.05〜0.
25％で存在する）又は0.01〜２％のカチオンポリマー、
並びに４′−ヒドロキシアセトアニリドと接触せしめて
化学ルミネセンス信号を生成する工程、そして Ｄ．得られた信号を検出する工程、を含んで成る特異的
バインディングリガンドを検出するための特異的バイン
ディングアッセイを提供する。
【０００８】
【具体的な態様】本発明は、ペルオキシダーゼ及び 2,3
−ジヒドロ−1,4 −フタラジンジオン誘導体（本明細書
では「ＤＰＤ」と同定される）の存在に応じて化学ルミ
ネセンス信号を発生するように設計されたいかなる分析
方法でも有利に実施できる。そのようなアッセイには、
ペルオキシダーゼもしくは過酸化水素以外の非免疫学的
分析物の検出のための過酸化水素もしくはペルオキシダ
ーゼ（その遊離状態で）の検出を含む。特に、本発明
は、化学ルミネセンス信号を発生する特異的バインディ
ングアッセイの実施に有用である。本発明の改良された
水性組成物は、化学ルミネセンス増強剤の不存在下で得
られる信号を越えるように信号を増強せしめる化学ルミ
ネセンス増強剤として、４′−ヒドロキシアセトアニリ
ドを含む。
−ジヒドロ−1,4 −フタラジンジオン誘導体（本明細書
では「ＤＰＤ」と同定される）の存在に応じて化学ルミ
ネセンス信号を発生するように設計されたいかなる分析
方法でも有利に実施できる。そのようなアッセイには、
ペルオキシダーゼもしくは過酸化水素以外の非免疫学的
分析物の検出のための過酸化水素もしくはペルオキシダ
ーゼ（その遊離状態で）の検出を含む。特に、本発明
は、化学ルミネセンス信号を発生する特異的バインディ
ングアッセイの実施に有用である。本発明の改良された
水性組成物は、化学ルミネセンス増強剤の不存在下で得
られる信号を越えるように信号を増強せしめる化学ルミ
ネセンス増強剤として、４′−ヒドロキシアセトアニリ
ドを含む。
【０００９】更に、化学ルミネセンス反応中に励起状態
に転換し、次いで光の放出を伴って非励起状態に戻る、
いずれかの遊離又は接合 2,3−ジヒドロ−1,4 −フタラ
ジンジオン誘導体が本発明の実施に際して有用である。
一般的にはこのような化合物は、「ルミノール型ヒドラ
ジド類」として既知であり、それらにはフタル酸ヒドラ
ジド類、ナフタレン−1,2 −ジカルボン酸ヒドラジド
類、アントラセン−2,3−ジカルボン酸ヒドラジド類、
フェナントレンジカルボン酸ヒドラジド類、フルオレン
−1,2 −ジカルボン酸ヒドラジド類、ベンゾ〔g,h,i 〕
ペリレン−1,2 −ジカルボン酸ヒドラジド類、コロネン
−1,2 −ジカルボン酸ヒドラジド類、及び当業者に容易
に明らかである別のものが挙げられる。
に転換し、次いで光の放出を伴って非励起状態に戻る、
いずれかの遊離又は接合 2,3−ジヒドロ−1,4 −フタラ
ジンジオン誘導体が本発明の実施に際して有用である。
一般的にはこのような化合物は、「ルミノール型ヒドラ
ジド類」として既知であり、それらにはフタル酸ヒドラ
ジド類、ナフタレン−1,2 −ジカルボン酸ヒドラジド
類、アントラセン−2,3−ジカルボン酸ヒドラジド類、
フェナントレンジカルボン酸ヒドラジド類、フルオレン
−1,2 −ジカルボン酸ヒドラジド類、ベンゾ〔g,h,i 〕
ペリレン−1,2 −ジカルボン酸ヒドラジド類、コロネン
−1,2 −ジカルボン酸ヒドラジド類、及び当業者に容易
に明らかである別のものが挙げられる。
【００１０】詳細には、ＤＰＤは構造（II) により規定
される。
される。
【化１】
【００１１】上式中、Ｚ1 、Ｚ2 、Ｚ3 及びＺ4 は、独
立して、水素、炭素原子数１〜６のアルキル（例えば、
メチル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、 sec−ペ
ンチル及びヘキシル）、炭素原子数２〜６のアルケニル
〔例えば、エテニル、１−プロペニル、イソブテニル、
２−（ N,N−ジイソプロピルアミノ）ビニル、２−（
N,N−ジイソブチルアミノ）ビニル、２−（ N,N−ジイ
ソペンチルアミノ）ビニル及び２−ヘキセニル〕、ヒド
ロキシ、炭素原子数１〜６のアルコキシ（例えば、メト
キシ、エトキシ、イソプロポキシ、ｔ−ブトキシ及びヘ
キソキシ）、カルボキシ、アミノ〔アルキルもしくはア
ルカノイルで置換されたアミノ、例えば、メチルアミ
ノ、エチルアミノ、アミド（例えば、アセトアミド及び
ヘキサナミド）、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ並び
にジイソブチルアミノを包含する〕、接合アミノアルケ
ニル（例えば、下記）又はアミノアリール〔置換アミノ
アリール、例えば、ｐ−（ N,N−ジメチルアミノ）フェ
ニル、ｐ−（ N,N−ジエチルアミノ）フェニル及び５−
アミノ− 2,3−ジヒドロ− 1,4−フタラジンジオン−８
−イル（またルミニルとして既知である）を包含する〕
である。
立して、水素、炭素原子数１〜６のアルキル（例えば、
メチル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、 sec−ペ
ンチル及びヘキシル）、炭素原子数２〜６のアルケニル
〔例えば、エテニル、１−プロペニル、イソブテニル、
２−（ N,N−ジイソプロピルアミノ）ビニル、２−（
N,N−ジイソブチルアミノ）ビニル、２−（ N,N−ジイ
ソペンチルアミノ）ビニル及び２−ヘキセニル〕、ヒド
ロキシ、炭素原子数１〜６のアルコキシ（例えば、メト
キシ、エトキシ、イソプロポキシ、ｔ−ブトキシ及びヘ
キソキシ）、カルボキシ、アミノ〔アルキルもしくはア
ルカノイルで置換されたアミノ、例えば、メチルアミ
ノ、エチルアミノ、アミド（例えば、アセトアミド及び
ヘキサナミド）、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ並び
にジイソブチルアミノを包含する〕、接合アミノアルケ
ニル（例えば、下記）又はアミノアリール〔置換アミノ
アリール、例えば、ｐ−（ N,N−ジメチルアミノ）フェ
ニル、ｐ−（ N,N−ジエチルアミノ）フェニル及び５−
アミノ− 2,3−ジヒドロ− 1,4−フタラジンジオン−８
−イル（またルミニルとして既知である）を包含する〕
である。
【００１２】Ｚ1 及びＺ2 の少なくとも１つがアミノ
（前記置換アミノを包含する）、接合アミノアルケニル
（前記置換アミノアルケニルを包含する）又はアミノア
リール〔例えば、ｐ−（ N,N−ジメチルアミノ）フェニ
ル、ｐ−（ N,N−ジエチルアミノ）フェニル及び５−ア
ミノ− 2,3−ジヒドロ− 1,4−フタラジンジオン−８−
イル〕である。本明細書で用いられる「接合アミノアル
ケニル」とは、アルケニル基を介してそれが置換されて
いるフタラジンジオンの芳香環にアミノ基から電子共鳴
できる一価基を称し、それらには、ジアルキルアミノビ
ニル基〔例えば、２−（ N,N−ジイソプロピルアミノ）
ビニル、２−（ N,N−ジイソブチルアミノ）ビニル及び
２−（ N,N−ジイソペンチルアミノ）ビニル〕、並びに
ジアルキルアミノブタジエニル基、例えば、４−（ N,N
−ジエチルアミノ）− 1,3−ブタジエン−１−イルが挙
げられる。
（前記置換アミノを包含する）、接合アミノアルケニル
（前記置換アミノアルケニルを包含する）又はアミノア
リール〔例えば、ｐ−（ N,N−ジメチルアミノ）フェニ
ル、ｐ−（ N,N−ジエチルアミノ）フェニル及び５−ア
ミノ− 2,3−ジヒドロ− 1,4−フタラジンジオン−８−
イル〕である。本明細書で用いられる「接合アミノアル
ケニル」とは、アルケニル基を介してそれが置換されて
いるフタラジンジオンの芳香環にアミノ基から電子共鳴
できる一価基を称し、それらには、ジアルキルアミノビ
ニル基〔例えば、２−（ N,N−ジイソプロピルアミノ）
ビニル、２−（ N,N−ジイソブチルアミノ）ビニル及び
２−（ N,N−ジイソペンチルアミノ）ビニル〕、並びに
ジアルキルアミノブタジエニル基、例えば、４−（ N,N
−ジエチルアミノ）− 1,3−ブタジエン−１−イルが挙
げられる。
【００１３】あるいは、Ｚ1 、Ｚ2 、Ｚ3 及びＺ4 のい
ずれか隣接する２つ、隣接する３つ又はすべて（すなわ
ち、２つもしくは３つの隣接基の組み合わせであるか、
又は４つの基すべて）が、一緒になって１つ以上の芳香
環を含有する縮合環系を形成できる。このような縮合環
は、１つ以上のヒドロキシ、アミノ（前記のような置換
もしくは非置換のもの）又は炭素原子数１〜４のアルコ
キシ（例えば、メトキシ、エトキシ及びイソプロポキ
シ）で置換できる。好ましくはこのような縮合環は、１
つ以上の第１、第２もしくは第３アミン、ヒドロキシ又
は前記アルコキシで置換される。
ずれか隣接する２つ、隣接する３つ又はすべて（すなわ
ち、２つもしくは３つの隣接基の組み合わせであるか、
又は４つの基すべて）が、一緒になって１つ以上の芳香
環を含有する縮合環系を形成できる。このような縮合環
は、１つ以上のヒドロキシ、アミノ（前記のような置換
もしくは非置換のもの）又は炭素原子数１〜４のアルコ
キシ（例えば、メトキシ、エトキシ及びイソプロポキ
シ）で置換できる。好ましくはこのような縮合環は、１
つ以上の第１、第２もしくは第３アミン、ヒドロキシ又
は前記アルコキシで置換される。
【００１４】限定される訳ではないが、代表的な有用な
ＤＰＤ化合物には、ルミノール、イソルミノール、Ｎ−
（４−アミノブチル）−Ｎ−エチルイソルミノール ヘ
ミスクシンイミド、Ｎ−（６−アミノヘキシル）−Ｎ−
エチルイソルミノール、Ｎ−エチルイソルミノール及び
７−ジメチルアミノナフタレン− 1,2−ジカルボン酸ヒ
ドラジドが挙げられる。ルミノール（５−アミノ− 2,3
−ジヒドロ− 1,4−フタラジンジオン）及びイソルミノ
ール（６−アミノ− 2,3−ジヒドロ− 1,4−フタラジン
ジオン）が好ましく、そしてルミノールが最も好まし
い。
ＤＰＤ化合物には、ルミノール、イソルミノール、Ｎ−
（４−アミノブチル）−Ｎ−エチルイソルミノール ヘ
ミスクシンイミド、Ｎ−（６−アミノヘキシル）−Ｎ−
エチルイソルミノール、Ｎ−エチルイソルミノール及び
７−ジメチルアミノナフタレン− 1,2−ジカルボン酸ヒ
ドラジドが挙げられる。ルミノール（５−アミノ− 2,3
−ジヒドロ− 1,4−フタラジンジオン）及びイソルミノ
ール（６−アミノ− 2,3−ジヒドロ− 1,4−フタラジン
ジオン）が好ましく、そしてルミノールが最も好まし
い。
【００１５】ＤＰＤ化合物の別の有用なクラスには、置
換もしくは非置換のフタル酸ヒドラジド類、４−置換フ
タルヒドラジド類、アントラセン− 2,3−ジカルボン酸
ヒドラジド類、フェナトレンジカルボン酸ヒドラジド
類、フルオレン−1,2 −ジカルボン酸ヒドラジド類、ベ
ンゾ〔g,h,i 〕ペリレン−1,2 −ジカルボン酸ヒドラジ
ド類及びコロネン−1,2 −ジカルボン酸ヒドラジド類、
例えば、以下の構造により具体的に示されるものが挙げ
られる。
換もしくは非置換のフタル酸ヒドラジド類、４−置換フ
タルヒドラジド類、アントラセン− 2,3−ジカルボン酸
ヒドラジド類、フェナトレンジカルボン酸ヒドラジド
類、フルオレン−1,2 −ジカルボン酸ヒドラジド類、ベ
ンゾ〔g,h,i 〕ペリレン−1,2 −ジカルボン酸ヒドラジ
ド類及びコロネン−1,2 −ジカルボン酸ヒドラジド類、
例えば、以下の構造により具体的に示されるものが挙げ
られる。
【００１６】
【化２】
【００１７】本発明は、低分子量カチオン界面活性剤を
臨界的に使用してミセルを提供するか、又はカチオンポ
リマーを臨界的に使用して感度、保存安定性及び速度論
的安定性の増強された疎水性環境を提供する。一般的に
は、このような物質は合成されるが、しかし幾つかは天
然物である。カチオン界面活性剤は正味の正電荷を有す
る。界面活性剤の正電荷は、限定されるものではない
が、第４アンモニウム、第４ホスホニウム、スルホニウ
ム、ピリジニウム、ピリミジニウム、イミダゾリウム及
びオキソニウムを包含するカチオン基より提供されう
る。
臨界的に使用してミセルを提供するか、又はカチオンポ
リマーを臨界的に使用して感度、保存安定性及び速度論
的安定性の増強された疎水性環境を提供する。一般的に
は、このような物質は合成されるが、しかし幾つかは天
然物である。カチオン界面活性剤は正味の正電荷を有す
る。界面活性剤の正電荷は、限定されるものではない
が、第４アンモニウム、第４ホスホニウム、スルホニウ
ム、ピリジニウム、ピリミジニウム、イミダゾリウム及
びオキソニウムを包含するカチオン基より提供されう
る。
【００１８】特に有用なカチオン界面活性剤及びポリマ
ーは、構造（Ｉ）により表すことができる。
ーは、構造（Ｉ）により表すことができる。
【化３】
【００１９】上式中、Ｒ1 は、炭素原子数少なくとも７
の、そして好ましくは炭素原子数10〜20の置換もしくは
非置換のアルキル（例えば、ｎ−オクチル、イソノニ
ル、イソデシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシ
ル、オクタデシル、エイコシル、2,7,8−トリメチルデ
シル、４−エチル−６−メチルドデシル、ベンジル及び
フェネチル）、１つ以上の疎水性基、例えば、炭素原子
数１〜10の直鎖もしくは分枝鎖のアルキル（例えば、メ
チル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチルもしくはヘキ
シル）、ハロ並びに当業者らに既知の別のもので置換さ
れうる芳香核中の炭素原子数６〜14の置換もしくは非置
換のアリール（例えば、フェニル、ナフチルもしくはア
ントリル）である。このような置換アリール基には、限
定されるものではないが、キシリル、トリル、イソノニ
ルフェニル、ジメチルフェニル及びトリクロロフェニル
が挙げられる。また、Ｒ1 は、炭素原子数８〜20の置換
もしくは非置換アルケニル（例えば、１−オクテニル、
１−デセニル及び２−ドデセニル）又はポリマー部分
（下記）であってもよい。
の、そして好ましくは炭素原子数10〜20の置換もしくは
非置換のアルキル（例えば、ｎ−オクチル、イソノニ
ル、イソデシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシ
ル、オクタデシル、エイコシル、2,7,8−トリメチルデ
シル、４−エチル−６−メチルドデシル、ベンジル及び
フェネチル）、１つ以上の疎水性基、例えば、炭素原子
数１〜10の直鎖もしくは分枝鎖のアルキル（例えば、メ
チル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチルもしくはヘキ
シル）、ハロ並びに当業者らに既知の別のもので置換さ
れうる芳香核中の炭素原子数６〜14の置換もしくは非置
換のアリール（例えば、フェニル、ナフチルもしくはア
ントリル）である。このような置換アリール基には、限
定されるものではないが、キシリル、トリル、イソノニ
ルフェニル、ジメチルフェニル及びトリクロロフェニル
が挙げられる。また、Ｒ1 は、炭素原子数８〜20の置換
もしくは非置換アルケニル（例えば、１−オクテニル、
１−デセニル及び２−ドデセニル）又はポリマー部分
（下記）であってもよい。
【００２０】好ましくは、Ｒ1 が炭素原子数14〜16のア
ルキルもしくはアルケニルであり、2,4−ジメチル−６
−エチルデシル、テトラデシル及びヘキサデシルのよう
な基がより好ましい。構造（Ｉ）では、Ｒ2 は、Ｒ1 に
ついて定義されたアルキルもしくはアルケニル、炭素原
子数１〜７の置換もしくは非置換のアルキル（例えば、
メチル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、メトキシ
メチル、ベンジル及びヘキシル）、炭素原子数２〜７の
置換もしくは非置換のアルケニル（例えば、エテニル、
アリル、イソプロペニル及びｎ−ブテニル）、又は環系
中の炭素原子数６〜10の炭素環式アリール（例えば、フ
ェニル、トリル、キシリル、ナフチル及びｐ−メトキシ
フェニル）であることができる。Ｒ2 、Ｒ3 及びＲ4 の
１つは、Ｒ1 について先に定義された非重合基の１つで
あることができる。
ルキルもしくはアルケニルであり、2,4−ジメチル−６
−エチルデシル、テトラデシル及びヘキサデシルのよう
な基がより好ましい。構造（Ｉ）では、Ｒ2 は、Ｒ1 に
ついて定義されたアルキルもしくはアルケニル、炭素原
子数１〜７の置換もしくは非置換のアルキル（例えば、
メチル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、メトキシ
メチル、ベンジル及びヘキシル）、炭素原子数２〜７の
置換もしくは非置換のアルケニル（例えば、エテニル、
アリル、イソプロペニル及びｎ−ブテニル）、又は環系
中の炭素原子数６〜10の炭素環式アリール（例えば、フ
ェニル、トリル、キシリル、ナフチル及びｐ−メトキシ
フェニル）であることができる。Ｒ2 、Ｒ3 及びＲ4 の
１つは、Ｒ1 について先に定義された非重合基の１つで
あることができる。
【００２１】Ｒ3 及びＲ4 は、独立して、炭素原子数１
〜７の置換もしくは非置換のアルキル（例えば、メチ
ル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、メトキシメチ
ル、ベンジル及びヘキシル）、炭素原子数２〜７の置換
もしくは非置換のアルケニル（例えば、エテニル、イソ
プロペニル及びアリル）、又は環系中の炭素原子数６〜
10の炭素環式アリール（例えば、フェニル、トリル、キ
シリル、ナフチル及びｐ−メトキシフェニル）であるこ
とができる。
〜７の置換もしくは非置換のアルキル（例えば、メチ
ル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチル、メトキシメチ
ル、ベンジル及びヘキシル）、炭素原子数２〜７の置換
もしくは非置換のアルケニル（例えば、エテニル、イソ
プロペニル及びアリル）、又は環系中の炭素原子数６〜
10の炭素環式アリール（例えば、フェニル、トリル、キ
シリル、ナフチル及びｐ−メトキシフェニル）であるこ
とができる。
【００２２】あるいは、Ｒ2 、Ｒ3 及びＲ4 のいずれか
２つもしくは３つは、第４アンモニウム原子と共に、一
緒になって５〜16員の複素環式カチオン基を完成するの
に十分な炭素原子及び酸素原子、窒素原子もしくは硫黄
原子を表すことができる。このような基の具体例には、
限定されるものではないが、ピリジニウム、ピペリジニ
ウム、ピロリジニウム、モルホリニウム、キノリニウ
ム、ピリミジニウム、アクリジニウム、ベンゾチアゾリ
ウム、ベンズオキサゾリニウム及びイミダゾリウムが挙
げられる。好ましくは、Ｒ2 、Ｒ3 及びＲ4 が独立して
メチルもしくはエチルである。
２つもしくは３つは、第４アンモニウム原子と共に、一
緒になって５〜16員の複素環式カチオン基を完成するの
に十分な炭素原子及び酸素原子、窒素原子もしくは硫黄
原子を表すことができる。このような基の具体例には、
限定されるものではないが、ピリジニウム、ピペリジニ
ウム、ピロリジニウム、モルホリニウム、キノリニウ
ム、ピリミジニウム、アクリジニウム、ベンゾチアゾリ
ウム、ベンズオキサゾリニウム及びイミダゾリウムが挙
げられる。好ましくは、Ｒ2 、Ｒ3 及びＲ4 が独立して
メチルもしくはエチルである。
【００２３】Ｘ- は、ペルオキシダーゼについての基質
もしくは阻害剤ではない適当な一価の酸アニオンであ
り、それらには、限定されるものではないが、過塩素酸
イオン、ハロゲン化物イオン（例えば、フッ化物イオ
ン、塩化物イオン及び臭化物イオン）、テトラフルオロ
ホウ酸イオン、トリフラート、メチル硫酸イオン、ヘキ
サフルオロリン酸イオン、硝酸イオン及びｐ−トルエン
スルホン酸イオン並びに当業者に容易に明らかである別
のものが挙げられる。ハロゲン化物アニオンが好まし
い。
もしくは阻害剤ではない適当な一価の酸アニオンであ
り、それらには、限定されるものではないが、過塩素酸
イオン、ハロゲン化物イオン（例えば、フッ化物イオ
ン、塩化物イオン及び臭化物イオン）、テトラフルオロ
ホウ酸イオン、トリフラート、メチル硫酸イオン、ヘキ
サフルオロリン酸イオン、硝酸イオン及びｐ−トルエン
スルホン酸イオン並びに当業者に容易に明らかである別
のものが挙げられる。ハロゲン化物アニオンが好まし
い。
【００２４】有用な非重合カチオン界面活性剤の具体例
は、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムクロリド、ド
デシルトリメチルアンモニウムクロリド、セチルトリメ
チルアンモニウムブロミド（またヘキサデシルトリメチ
ルアンモニウムブロミドとして既知である）、ココトリ
メチルアンモニウムクロリド、タロウトリメチルアンモ
ニウムクロリド、ソヤトリメチルアンモニウムクロリ
ド、ミリスチルトリメチルアンモニウムブロミド、ステ
アリルトリメチルアンモニウムクロリド、セチルエチル
ジメチルアンモニウムブロミド、ジドデシルジメチルア
ンモニウムブロミド、セチルピリジニウムクロリド及び
ミリスチルジメチルベンジルアンモニウムクロリドであ
る。セチルトリメチルアンモニウムブロミドが最も好ま
しい。
は、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムクロリド、ド
デシルトリメチルアンモニウムクロリド、セチルトリメ
チルアンモニウムブロミド（またヘキサデシルトリメチ
ルアンモニウムブロミドとして既知である）、ココトリ
メチルアンモニウムクロリド、タロウトリメチルアンモ
ニウムクロリド、ソヤトリメチルアンモニウムクロリ
ド、ミリスチルトリメチルアンモニウムブロミド、ステ
アリルトリメチルアンモニウムクロリド、セチルエチル
ジメチルアンモニウムブロミド、ジドデシルジメチルア
ンモニウムブロミド、セチルピリジニウムクロリド及び
ミリスチルジメチルベンジルアンモニウムクロリドであ
る。セチルトリメチルアンモニウムブロミドが最も好ま
しい。
【００２５】構造（Ｉ）中のＲ1 がポリマー部分である
ようなポリマーの主鎖は、従来のポリエステル類、ポリ
アミド類、ポリエチレンイミン類、ポリカーボネート
類、セルロース材料類、及び所望の正電荷を有するモノ
マーの繰り返し単位から成るビニル付加ホモ及びコポリ
マー類でありうる。これらの物質は、従来の方法を用い
て従来の材料から製造できる。ポリマーは、出発材料由
来の又は製造後の化学反応由来の電荷をその中に取り入
れて担持できる。
ようなポリマーの主鎖は、従来のポリエステル類、ポリ
アミド類、ポリエチレンイミン類、ポリカーボネート
類、セルロース材料類、及び所望の正電荷を有するモノ
マーの繰り返し単位から成るビニル付加ホモ及びコポリ
マー類でありうる。これらの物質は、従来の方法を用い
て従来の材料から製造できる。ポリマーは、出発材料由
来の又は製造後の化学反応由来の電荷をその中に取り入
れて担持できる。
【００２６】特に有用なカチオンポリマーは、必要な正
に荷電した基を有するエチレン系不飽和重合性モノマ
ー、並びに界面活性剤に特有な疎水性領域、架橋領域も
しくは別の適当な性質を提供する１つ以上のコモノマー
より製造されるビニル付加ホモもしくはコポリマーであ
る。
に荷電した基を有するエチレン系不飽和重合性モノマ
ー、並びに界面活性剤に特有な疎水性領域、架橋領域も
しくは別の適当な性質を提供する１つ以上のコモノマー
より製造されるビニル付加ホモもしくはコポリマーであ
る。
【００２７】代表的なカチオンモノマーには、限定され
るものではないが、Ｎ−シクロヘキシル− N,N−ジメチ
ル−Ｎ−（ｍ＆ｐ−ビニルベンジル）アンモニウムクロ
リド、Ｎ−ベンジル− N,N−ジメチル−Ｎ−（ｍ＆ｐ−
ビニルベンジル）アンモニウムクロリド、３−（２−ヒ
ドロキシプロピル）−１−ビニルイミダゾリウムクロリ
ド及び１−メチル−４−ビニルピリジニウムクロリドが
挙げられる。有用なコモノマーには、限定されるもので
はないが、スチレン及びその誘導体類（例えば、ビニル
トルエン及びｐ−ｔ−ブチルスチレン）、アクリル酸及
びメタクリル酸エステル類（例えば、メチルアクリレー
ト、メチルメタクリレート、ブチルアクリレート及びブ
チルメタクリレート）、架橋可能なモノマー類〔例え
ば、ジビニルベンゼン、エチレンジアクリレート、エチ
レンジメタクリレート及び N,N′−メチレンビス（アク
リルアミド）〕が挙げられる。別の有用なポリマーが、
例えば、米国特許第 4,069,017号及び同第 4,024,839号
明細書に媒染剤（mordant)として記載されている。一般
的にはこのような材料は、ポリマー主鎖からのペンダン
トである第４アンモニイウム基もしくは第４ホスホニウ
ム基を有し、そして好ましくは、このような基を有する
繰り返し単位を誘導する少なくとも40〜100 重量％のエ
チレン系不飽和重合性モノマーを有する。残りの繰り返
し単位は、前記特許に記載される多種多様なエチレン系
不飽和重合性モノマーより誘導できる。
るものではないが、Ｎ−シクロヘキシル− N,N−ジメチ
ル−Ｎ−（ｍ＆ｐ−ビニルベンジル）アンモニウムクロ
リド、Ｎ−ベンジル− N,N−ジメチル−Ｎ−（ｍ＆ｐ−
ビニルベンジル）アンモニウムクロリド、３−（２−ヒ
ドロキシプロピル）−１−ビニルイミダゾリウムクロリ
ド及び１−メチル−４−ビニルピリジニウムクロリドが
挙げられる。有用なコモノマーには、限定されるもので
はないが、スチレン及びその誘導体類（例えば、ビニル
トルエン及びｐ−ｔ−ブチルスチレン）、アクリル酸及
びメタクリル酸エステル類（例えば、メチルアクリレー
ト、メチルメタクリレート、ブチルアクリレート及びブ
チルメタクリレート）、架橋可能なモノマー類〔例え
ば、ジビニルベンゼン、エチレンジアクリレート、エチ
レンジメタクリレート及び N,N′−メチレンビス（アク
リルアミド）〕が挙げられる。別の有用なポリマーが、
例えば、米国特許第 4,069,017号及び同第 4,024,839号
明細書に媒染剤（mordant)として記載されている。一般
的にはこのような材料は、ポリマー主鎖からのペンダン
トである第４アンモニイウム基もしくは第４ホスホニウ
ム基を有し、そして好ましくは、このような基を有する
繰り返し単位を誘導する少なくとも40〜100 重量％のエ
チレン系不飽和重合性モノマーを有する。残りの繰り返
し単位は、前記特許に記載される多種多様なエチレン系
不飽和重合性モノマーより誘導できる。
【００２８】代表的なカチオンポリマーには、限定され
るものではないが、ポリ（ N,N,N−トリメチル−Ｎ−ビ
ニルベンジルアンモニウムクロリド）、ポリ〔スチレン
−コ−ベンジル− N,N−ジメチル−Ｎ−（ｍ＆ｐ−ビニ
ルベンジル）アンモニウムクロリド−コ−ジビニルベン
ゼン〕、ポリ（ N,N,N−トリオクチル−Ｎ−ビニルベン
ジルホスホニウムクロリド）、ポリ〔スチレン−コ−Ｎ
−ビニルベンジル− N,N,N−トリヘキシルアンモニウム
クロリド〕、ポリ（スチレン−コ− N,N,N−トリメチル
−Ｎ−ビニルベンジルアンモニウムクロリド）、ポリ
〔Ｎ−シクロヘキシル− N,N−ジメチル−Ｎ−（ｍ＆ｐ
−ビニルベンジル）アンモニウムクロリド〕、ポリ〔ス
チレン−コ−１−ビニルイミダゾール−コ−３−（２−
ヒドロキシエチル）−１−ビニルイミダゾリウムクロリ
ド〕及び当業者に容易に明らかである別のものが挙げら
れる。好ましいカチオンポリマーは、ポリ〔Ｎ−シクロ
ヘキシル− N,N−ジメチル−Ｎ−（ｍ＆ｐ−ビニルベン
ジル）アンモニウムクロリド〕である。
るものではないが、ポリ（ N,N,N−トリメチル−Ｎ−ビ
ニルベンジルアンモニウムクロリド）、ポリ〔スチレン
−コ−ベンジル− N,N−ジメチル−Ｎ−（ｍ＆ｐ−ビニ
ルベンジル）アンモニウムクロリド−コ−ジビニルベン
ゼン〕、ポリ（ N,N,N−トリオクチル−Ｎ−ビニルベン
ジルホスホニウムクロリド）、ポリ〔スチレン−コ−Ｎ
−ビニルベンジル− N,N,N−トリヘキシルアンモニウム
クロリド〕、ポリ（スチレン−コ− N,N,N−トリメチル
−Ｎ−ビニルベンジルアンモニウムクロリド）、ポリ
〔Ｎ−シクロヘキシル− N,N−ジメチル−Ｎ−（ｍ＆ｐ
−ビニルベンジル）アンモニウムクロリド〕、ポリ〔ス
チレン−コ−１−ビニルイミダゾール−コ−３−（２−
ヒドロキシエチル）−１−ビニルイミダゾリウムクロリ
ド〕及び当業者に容易に明らかである別のものが挙げら
れる。好ましいカチオンポリマーは、ポリ〔Ｎ−シクロ
ヘキシル− N,N−ジメチル−Ｎ−（ｍ＆ｐ−ビニルベン
ジル）アンモニウムクロリド〕である。
【００２９】一般的には、本発明の組成物は、当該技術
分野で周知である１つ以上の適当な緩衝剤を用いてpH７
〜9.5 に緩衝化される。どのくらいのいずれかの緩衝剤
が所望のpHを維持するのに必要であるのかは周知である
ので、緩衝剤の量は当業者に容易に明らかであろう。一
般的にはＤＰＤの量は、少なくとも0.01ミリモルであ
り、 0.1〜10ミリモルの範囲内の量が好ましい。４′−
ヒドロキシアセトアニリドは、一般的には少なくとも0.
01ミリモルの量で存在し、0.05〜５ミリモルの範囲内の
量が好ましい。
分野で周知である１つ以上の適当な緩衝剤を用いてpH７
〜9.5 に緩衝化される。どのくらいのいずれかの緩衝剤
が所望のpHを維持するのに必要であるのかは周知である
ので、緩衝剤の量は当業者に容易に明らかであろう。一
般的にはＤＰＤの量は、少なくとも0.01ミリモルであ
り、 0.1〜10ミリモルの範囲内の量が好ましい。４′−
ヒドロキシアセトアニリドは、一般的には少なくとも0.
01ミリモルの量で存在し、0.05〜５ミリモルの範囲内の
量が好ましい。
【００３０】非重合カチオン界面活性剤は、その臨界ミ
セル濃度を越える0.05〜0.25％の量で存在する。カチオ
ンポリマーが組成物に含まれる場合には、それは0.01〜
２（重量）％の量で存在する。前記安定化水性組成物を
除いて、また本発明は、個別に包装された試薬、装置及
び種々分析方法（下記）を実施するのに有用な使用説明
書のキットを提供する。キット要素の包装方法は当該技
術分野で周知である。
セル濃度を越える0.05〜0.25％の量で存在する。カチオ
ンポリマーが組成物に含まれる場合には、それは0.01〜
２（重量）％の量で存在する。前記安定化水性組成物を
除いて、また本発明は、個別に包装された試薬、装置及
び種々分析方法（下記）を実施するのに有用な使用説明
書のキットを提供する。キット要素の包装方法は当該技
術分野で周知である。
【００３１】ある態様では、キットは、個別に包装され
た、前記ＤＰＤ、及び１つ以上の前記カチオン界面活性
剤もしくはカチオンポリマー、４′−ヒドロキシアセト
アニリド及びペルオキシダーゼもしくはペルオキシダー
ゼ標識特異的バインディング種を含んで成る。好ましく
はキットが、ＤＰＤを除く１成分として４′−ヒドロキ
シアセトアニリドを含有する。「特異的バインディング
種」とは、レセプターと特異的に結合し、そのため別の
物質とは結合しないいずれかの生物学的もしくは化学的
化合物を意味する。有用な特異的バインディング種に
は、限定されるものではないが、抗体類、非免疫反応性
タンパク質類（例えば、アビジン及び数種の酵素類）、
抗原類、ハプテン類、ビタミン類（例えば、ビオチ
ン）、レクチン類、糖類、ペプチド類、ポリペプチド
類、オリゴヌクレオチド類、核酸類及び細胞表面バイン
ディング種が挙げられる。特に有用な標識特異的バイン
ディング種はペルオキシダーゼ標識タンパク質類もしく
はオリゴヌクレオチド類である。このようなタンパク質
は抗体類及びアビジンを包含する。所定の特異的バイン
ディング種に適するレセプターは周知である。アッセイ
に有用な別の成分（例えば、下記酸化体）は、試験キッ
トに含めることができる。
た、前記ＤＰＤ、及び１つ以上の前記カチオン界面活性
剤もしくはカチオンポリマー、４′−ヒドロキシアセト
アニリド及びペルオキシダーゼもしくはペルオキシダー
ゼ標識特異的バインディング種を含んで成る。好ましく
はキットが、ＤＰＤを除く１成分として４′−ヒドロキ
シアセトアニリドを含有する。「特異的バインディング
種」とは、レセプターと特異的に結合し、そのため別の
物質とは結合しないいずれかの生物学的もしくは化学的
化合物を意味する。有用な特異的バインディング種に
は、限定されるものではないが、抗体類、非免疫反応性
タンパク質類（例えば、アビジン及び数種の酵素類）、
抗原類、ハプテン類、ビタミン類（例えば、ビオチ
ン）、レクチン類、糖類、ペプチド類、ポリペプチド
類、オリゴヌクレオチド類、核酸類及び細胞表面バイン
ディング種が挙げられる。特に有用な標識特異的バイン
ディング種はペルオキシダーゼ標識タンパク質類もしく
はオリゴヌクレオチド類である。このようなタンパク質
は抗体類及びアビジンを包含する。所定の特異的バイン
ディング種に適するレセプターは周知である。アッセイ
に有用な別の成分（例えば、下記酸化体）は、試験キッ
トに含めることができる。
【００３２】本発明は、分析物に応じて化学ルミネセン
ス信号を生成することが望ましい、所定の分析物を検出
するためのいずれかの方法に使用できる。多くの場合に
は、分析物であるかもしれないペルオキシダーゼの存在
に応じて信号が発生する。あるいは、ペルオキシダーゼ
を、別の分析物の存在の結果として反応に役立たせるこ
とができる。ＤＰＤ、４′−ヒドロキシアセトアニリド
及び酸化体の存在下、ペルオキシダーゼは、適当な装置
を用いて測定できる光の放出を生ぜしめることができ
る。
ス信号を生成することが望ましい、所定の分析物を検出
するためのいずれかの方法に使用できる。多くの場合に
は、分析物であるかもしれないペルオキシダーゼの存在
に応じて信号が発生する。あるいは、ペルオキシダーゼ
を、別の分析物の存在の結果として反応に役立たせるこ
とができる。ＤＰＤ、４′−ヒドロキシアセトアニリド
及び酸化体の存在下、ペルオキシダーゼは、適当な装置
を用いて測定できる光の放出を生ぜしめることができ
る。
【００３３】ペルオキシダーゼ及び４′−ヒドロキシア
セトアニリドの存在下で光が放出されるので、酸化体は
ＤＰＤの励起を引き起こすのに必要とされる。各種の有
用な酸化体が既知であるが、しかし過ホウ酸イオン及び
過酸化水素が好ましく、後者が最も好ましい。本発明の
幾つかの方法は、ペルオキシダーゼが「遊離状態」（非
接合型）で臨床分析に使用される。特異的バインディン
グ方法では、しかしながら、ペルオキシダーゼが特異的
バインディングリガンドもしくはそれらのレセプター
と、又はリガンドもしくはレセプターのどちらかと反応
性である特異的バインディング分子との接合体として使
用される。リガンド及びレセプターは、このようなアッ
セイで複合せしめられるので、それらは複合体もしくは
未複合物質の最終検出のためにペルオキシダーゼで標識
される。
セトアニリドの存在下で光が放出されるので、酸化体は
ＤＰＤの励起を引き起こすのに必要とされる。各種の有
用な酸化体が既知であるが、しかし過ホウ酸イオン及び
過酸化水素が好ましく、後者が最も好ましい。本発明の
幾つかの方法は、ペルオキシダーゼが「遊離状態」（非
接合型）で臨床分析に使用される。特異的バインディン
グ方法では、しかしながら、ペルオキシダーゼが特異的
バインディングリガンドもしくはそれらのレセプター
と、又はリガンドもしくはレセプターのどちらかと反応
性である特異的バインディング分子との接合体として使
用される。リガンド及びレセプターは、このようなアッ
セイで複合せしめられるので、それらは複合体もしくは
未複合物質の最終検出のためにペルオキシダーゼで標識
される。
【００３４】多様な特異的バインディングアッセイフォ
ーマットが本発明の実施に際して有用であり、それらに
は、核酸ハイブリダイゼーションアッセイ類、免疫化学
的アッセイ（例えば、エンザイムイムノアッセイ類、サ
ンドウイッチアッセイ類、競合バインディングアッセイ
類、直接バインディングアッセイ類）及び当該技術分野
で周知の別のものが挙げられる。従って、本発明方法
は、いずれかの多種多様な化学的及び生物学的材料、例
えば、アミノ酸類、ペプチド類、ポリペプチド類、タン
パク質類（酵素類、アビジン、抗体類及び抗原タンパク
質類を包含する）、炭水化物（単糖類、多糖類及びリポ
多糖類を包含する）ホルモン類（例えば、ヒト絨毛性ゴ
ナドトロピン、甲状腺刺激ホルモン、黄体形成ホルモ
ン、サイロキシン、卵胞刺激ホルモン、上皮小体ホルモ
ン及び成長ホルモン）、代謝産物（例えば、グルコー
ス、ラクテート及びピルベート）オリゴヌクレオチド
類、核酸類、ビタミン類（例えば、Ｂ12及びビオチ
ン）、種々生物（微生物を包含する）由来の未処理細胞
並びに薬剤（麻酔薬、治療薬及び誤用されたもの）を検
出するのに使用できる。
ーマットが本発明の実施に際して有用であり、それらに
は、核酸ハイブリダイゼーションアッセイ類、免疫化学
的アッセイ（例えば、エンザイムイムノアッセイ類、サ
ンドウイッチアッセイ類、競合バインディングアッセイ
類、直接バインディングアッセイ類）及び当該技術分野
で周知の別のものが挙げられる。従って、本発明方法
は、いずれかの多種多様な化学的及び生物学的材料、例
えば、アミノ酸類、ペプチド類、ポリペプチド類、タン
パク質類（酵素類、アビジン、抗体類及び抗原タンパク
質類を包含する）、炭水化物（単糖類、多糖類及びリポ
多糖類を包含する）ホルモン類（例えば、ヒト絨毛性ゴ
ナドトロピン、甲状腺刺激ホルモン、黄体形成ホルモ
ン、サイロキシン、卵胞刺激ホルモン、上皮小体ホルモ
ン及び成長ホルモン）、代謝産物（例えば、グルコー
ス、ラクテート及びピルベート）オリゴヌクレオチド
類、核酸類、ビタミン類（例えば、Ｂ12及びビオチ
ン）、種々生物（微生物を包含する）由来の未処理細胞
並びに薬剤（麻酔薬、治療薬及び誤用されたもの）を検
出するのに使用できる。
【００３５】目的のリガンドが少なくとも第１及び第２
レセプターと同時にあるいは所望の順序で複合せしめら
れるので、本発明の特に有用な特異的バインディング方
法は、サンドウイッチアッセイとして当該技術分野で既
知であるものである。レセプターの１つは、吸着、共有
結合又は別の既知付着方法により適当な支持体（例え
ば、マイクロタイタープレート、ポリマー磁気粒子又は
ガラス粒子、フィルム、膜、フィルターペーパー並びに
当該技術分野で既知である別のもの）の上に不溶化され
るか、又は更なる複合もしくは反応を介して不溶化せし
めることができる。例えば、レセプターは、支持体上に
不溶化されている、特異的バインディング部分に対応す
るレセプター部分（例えば、アビジン）と反応性である
特異的バインディング部分（例えば、ビオチン）で標識
できる。
レセプターと同時にあるいは所望の順序で複合せしめら
れるので、本発明の特に有用な特異的バインディング方
法は、サンドウイッチアッセイとして当該技術分野で既
知であるものである。レセプターの１つは、吸着、共有
結合又は別の既知付着方法により適当な支持体（例え
ば、マイクロタイタープレート、ポリマー磁気粒子又は
ガラス粒子、フィルム、膜、フィルターペーパー並びに
当該技術分野で既知である別のもの）の上に不溶化され
るか、又は更なる複合もしくは反応を介して不溶化せし
めることができる。例えば、レセプターは、支持体上に
不溶化されている、特異的バインディング部分に対応す
るレセプター部分（例えば、アビジン）と反応性である
特異的バインディング部分（例えば、ビオチン）で標識
できる。
【００３６】サンドウイッチアッセイでは、目的のリガ
ンドについての第２レセプターは、ペルオキシダーゼで
標識できるか、又は更なる特異的バインディング反応を
介して標識せしめることができる。標識の検出は前記試
薬を用いて達成される。より好ましい態様では、目的の
リガンドが、抗体と反応性である抗原物質であるか、又
は相補的核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）とハイブ
リダイゼーションできる核酸である。
ンドについての第２レセプターは、ペルオキシダーゼで
標識できるか、又は更なる特異的バインディング反応を
介して標識せしめることができる。標識の検出は前記試
薬を用いて達成される。より好ましい態様では、目的の
リガンドが、抗体と反応性である抗原物質であるか、又
は相補的核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）とハイブ
リダイゼーションできる核酸である。
【００３７】前記アッセイは、溶液もしくは乾式フォー
マットで実施できる。一般的には溶液アッセイとは適当
な容器中で溶液状態で実施される方法を称し、そして不
均一な特異的バインディングアッセイの場合には、次い
で適当な分離技術及び装置を使用して結合していない材
料が結合材料から分離される。乾式アッセイでは、化学
的もしくは特異的バインディング反応が乾式要素、試験
ストリップもしくは繊維状シート中で実施でき、そして
本発明の安定化化学ルミネセンス組成物を添加せしめる
ことにより分析物の存在が検出される。
マットで実施できる。一般的には溶液アッセイとは適当
な容器中で溶液状態で実施される方法を称し、そして不
均一な特異的バインディングアッセイの場合には、次い
で適当な分離技術及び装置を使用して結合していない材
料が結合材料から分離される。乾式アッセイでは、化学
的もしくは特異的バインディング反応が乾式要素、試験
ストリップもしくは繊維状シート中で実施でき、そして
本発明の安定化化学ルミネセンス組成物を添加せしめる
ことにより分析物の存在が検出される。
【００３８】
【実施例】以下の例は、本発明の実施を更に具体的に説
明するものであるが、限定しようとするものではない。
すべてのパーセンテージが、特に断らない限り重量パー
セントである。
明するものであるが、限定しようとするものではない。
すべてのパーセンテージが、特に断らない限り重量パー
セントである。
【００３９】例１ カチオン界面活性剤の使用を異なる
増強剤と比較するペルオキシダーゼについての溶液アッ
セイ 増強剤として４′−ヒドロキシアセトアニリドを含有す
る本発明の水性化学ルミネセンス組成物を用いてペルオ
キシダーゼについての溶液アッセイを実施し、そしてそ
れを、増強剤として４−ヨードフェノールを含有する同
様の組成物を用いたものと比較した。
増強剤と比較するペルオキシダーゼについての溶液アッ
セイ 増強剤として４′−ヒドロキシアセトアニリドを含有す
る本発明の水性化学ルミネセンス組成物を用いてペルオ
キシダーゼについての溶液アッセイを実施し、そしてそ
れを、増強剤として４−ヨードフェノールを含有する同
様の組成物を用いたものと比較した。
【００４０】以下のものを 1.5mLポリプロピレンチュー
ブの中で混合せしめて、本発明の安定化組成物（総容量
300μＬ）を生成した：西洋ワサビペルオキシダーゼ
（24.3ピコモル, Sigma Chemical XIIグレード）、ルミ
ノール（１ミリモル）、セチルトリメチルアンモニウム
ブロミド カチオン界面活性剤（ 0.1重量／容量％）、
４′−ヒドロキシアセトアニリド（ 0.333ミリモル）及
びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩緩衝
剤（ 0.1モル，pH８）。
ブの中で混合せしめて、本発明の安定化組成物（総容量
300μＬ）を生成した：西洋ワサビペルオキシダーゼ
（24.3ピコモル, Sigma Chemical XIIグレード）、ルミ
ノール（１ミリモル）、セチルトリメチルアンモニウム
ブロミド カチオン界面活性剤（ 0.1重量／容量％）、
４′−ヒドロキシアセトアニリド（ 0.333ミリモル）及
びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩緩衝
剤（ 0.1モル，pH８）。
【００４１】カチオン界面活性剤を用いずに同様の組成
物（増強剤、対照Ａ，0.333 ミリモル）を調整し、そし
て分離チューブに入れた。対照Ｂは、４−ヨードフェノ
ール（ 0.444ミリモル）を入れたがカチオン界面活性剤
を入れずに調整し、そしてチューブに入れた。対照Ｃ
は、４−ヨードフェノール（ 0.333ミリモル）及びカチ
オン界面活性剤（ 0.1重量／容量％）を入れて調整し、
そしてチューブに入れた。対照Ｄは、増強剤及びカチオ
ン界面活性剤を入れずに調整し、そして対照Ｅは界面活
性剤（ 0.1重量／容量％）を入れたが増強剤を入れずに
調整した。
物（増強剤、対照Ａ，0.333 ミリモル）を調整し、そし
て分離チューブに入れた。対照Ｂは、４−ヨードフェノ
ール（ 0.444ミリモル）を入れたがカチオン界面活性剤
を入れずに調整し、そしてチューブに入れた。対照Ｃ
は、４−ヨードフェノール（ 0.333ミリモル）及びカチ
オン界面活性剤（ 0.1重量／容量％）を入れて調整し、
そしてチューブに入れた。対照Ｄは、増強剤及びカチオ
ン界面活性剤を入れずに調整し、そして対照Ｅは界面活
性剤（ 0.1重量／容量％）を入れたが増強剤を入れずに
調整した。
【００４２】過酸化水素を各チューブに添加し（２ミリ
モル）そして渦状に混合せしめた後、 4.5分後に伝統的
なTurner luminometer（10秒間積分（integral) 光単
位）及び標準方法を用いて各チューブの化学ルミネセン
ス光信号を測定した。結果を下記第Ｉ表に示す。
モル）そして渦状に混合せしめた後、 4.5分後に伝統的
なTurner luminometer（10秒間積分（integral) 光単
位）及び標準方法を用いて各チューブの化学ルミネセン
ス光信号を測定した。結果を下記第Ｉ表に示す。
【００４３】
【表１】
【００４４】データは、増強剤として４′−ヒドロキシ
アセトアニリドを使用した場合（対照Ａ及び本発明）に
は、カチオン界面活性剤の存在が信号に悪影響を及ぼさ
ないことを示している。しかしながら、増強剤として４
−ヨードフェノールを使用した場合には、カチオン界面
活性剤の存在により信号がかなり低減された（対照Ｂ対
対照Ｃ）。対照Ｄ及びＥは、カチオン界面活性剤を含む
場合と含まない場合の組成物のバックグラウンド信号を
示す。個別に認められるように、例１は、光信号の存続
時間がより長いので、対照Ａを越える改良であるとみな
されるが、しかし定着時間測度よりもむしろ連続的な同
様の試験を行った。
アセトアニリドを使用した場合（対照Ａ及び本発明）に
は、カチオン界面活性剤の存在が信号に悪影響を及ぼさ
ないことを示している。しかしながら、増強剤として４
−ヨードフェノールを使用した場合には、カチオン界面
活性剤の存在により信号がかなり低減された（対照Ｂ対
対照Ｃ）。対照Ｄ及びＥは、カチオン界面活性剤を含む
場合と含まない場合の組成物のバックグラウンド信号を
示す。個別に認められるように、例１は、光信号の存続
時間がより長いので、対照Ａを越える改良であるとみな
されるが、しかし定着時間測度よりもむしろ連続的な同
様の試験を行った。
【００４５】例２〜７ 種々カチオン物質の比較使用 これらの例では、数種の異なるカチオン界面活性剤及び
カチオンポリマーを、増強剤として４′−ヒドロキシア
セトアニリドを用いた場合の化学ルミネセンス信号にお
けるそれらの影響について評価した。様々な量（第II表
参照）の西洋ワサビペルオキシダーゼについてのアッセ
イを実施した。対照Ｆ〜Ｋを、増強剤として４−ヨード
フェノールを用いて同様に実施した。対照Ｌ及びＭを、
それぞれ増強剤として４′−ヒドロキシアセトアニリド
及び４−ヨードフェノールを用いたが、カチオン界面活
性剤もしくはポリマーの不存在下で実施した。
カチオンポリマーを、増強剤として４′−ヒドロキシア
セトアニリドを用いた場合の化学ルミネセンス信号にお
けるそれらの影響について評価した。様々な量（第II表
参照）の西洋ワサビペルオキシダーゼについてのアッセ
イを実施した。対照Ｆ〜Ｋを、増強剤として４−ヨード
フェノールを用いて同様に実施した。対照Ｌ及びＭを、
それぞれ増強剤として４′−ヒドロキシアセトアニリド
及び４−ヨードフェノールを用いたが、カチオン界面活
性剤もしくはポリマーの不存在下で実施した。
【００４６】マイクロタイタープレートの試験ウエル
に、西洋ワサビペルオキシダーゼ（様々な量）、ルミノ
ール（１ミリモル）、過酸化水素（２ミリモル，最後に
添加）、カチオン物質（様々な量）、ジエチレントリア
ミン五酢酸（ 0.1モル）、トリス（ヒドロキシメチル）
アミノメタン塩酸塩（0.05モル，pH８）及び増強剤（0.
15ミリモル）を含有する組成物（総容量 200μＬ）を添
加した。各試験ウエルに過酸化水素を添加してから５分
後に、化学ルミネセンス信号を10秒間隔で伝統的なラボ
システム（Lab. Systems) Luminoskan（商標）マイクロ
プレート・リーダーを用いて測定した。カチオン物質及
び各試験に使用した量は下記の通りであり、そして第II
表は３つの別個の実験の平均値として得られたデータを
示す。
に、西洋ワサビペルオキシダーゼ（様々な量）、ルミノ
ール（１ミリモル）、過酸化水素（２ミリモル，最後に
添加）、カチオン物質（様々な量）、ジエチレントリア
ミン五酢酸（ 0.1モル）、トリス（ヒドロキシメチル）
アミノメタン塩酸塩（0.05モル，pH８）及び増強剤（0.
15ミリモル）を含有する組成物（総容量 200μＬ）を添
加した。各試験ウエルに過酸化水素を添加してから５分
後に、化学ルミネセンス信号を10秒間隔で伝統的なラボ
システム（Lab. Systems) Luminoskan（商標）マイクロ
プレート・リーダーを用いて測定した。カチオン物質及
び各試験に使用した量は下記の通りであり、そして第II
表は３つの別個の実験の平均値として得られたデータを
示す。
【００４７】例２：セチルトリメチルアンモニウムブロ
ミド（ 0.1％）、 例３：ポリ〔Ｎ−シクロヘキシル− N,N−ジメチル−Ｎ
−（ｍ＆ｐ−ビニルベンジル）アンモニウムクロリド〕
（0.25％）、 例４：ポリ〔スチレン−コ−Ｎ−ベンジル− N,N−ジメ
チル−Ｎ−（ｍ＆ｐ−ビニルベンジル）アンモニウムク
ロリド−コ−ジビニルベンゼン〕（モル比4.95：4.95：
0.1 ）（0.05％）、 例５：ポリ〔スチレン−コ−１−ビニルイミダゾール−
コ−３−（２−ヒドロキシエチル）−１−ビニルイミダ
ゾリウムクロリド〕（モル比５：４：１）（ 0.025
％）、 例６：ポリ〔Ｎ−シクロヘキシル− N,N−ジメチル−Ｎ
−（ｍ＆ｐ−ビニルベンジル）アンモニウムクロリド〕
（0.25％）、及び 例７：ポリ〔スチレン−コ−１−ビニルイミダゾール−
コ−３−（２−ヒドロキシエチル）−１−ビニルイミダ
ゾリウムクロリド〕（モル比 4.4：２：3.6 ）（ 0.1
％）。
ミド（ 0.1％）、 例３：ポリ〔Ｎ−シクロヘキシル− N,N−ジメチル−Ｎ
−（ｍ＆ｐ−ビニルベンジル）アンモニウムクロリド〕
（0.25％）、 例４：ポリ〔スチレン−コ−Ｎ−ベンジル− N,N−ジメ
チル−Ｎ−（ｍ＆ｐ−ビニルベンジル）アンモニウムク
ロリド−コ−ジビニルベンゼン〕（モル比4.95：4.95：
0.1 ）（0.05％）、 例５：ポリ〔スチレン−コ−１−ビニルイミダゾール−
コ−３−（２−ヒドロキシエチル）−１−ビニルイミダ
ゾリウムクロリド〕（モル比５：４：１）（ 0.025
％）、 例６：ポリ〔Ｎ−シクロヘキシル− N,N−ジメチル−Ｎ
−（ｍ＆ｐ−ビニルベンジル）アンモニウムクロリド〕
（0.25％）、及び 例７：ポリ〔スチレン−コ−１−ビニルイミダゾール−
コ−３−（２−ヒドロキシエチル）−１−ビニルイミダ
ゾリウムクロリド〕（モル比 4.4：２：3.6 ）（ 0.1
％）。
【００４８】
【表２】
【００４９】これらのデータは、増強剤として４′−ヒ
ドロキシアセトアニリドを用いた場合には、すべてのカ
チオン物質がすべての酵素レベルで化学ルミネセンス信
号を増強したことを示す。この効果は、更に0.25ピコモ
ルの西洋ワサビペルオキシダーゼを用いて実施されたこ
れらのアッセイについて約２を越えるノイズ比に対する
信号によって証明される。増強剤として４−ヨードフェ
ノールを用いた場合には、その濃度におけるＳ／Ｎ比
は、約 1.3以下であり、従って、対照Ｍを上回る明らか
な信号増大はブランク増大のみによるものであったこと
を示している。４−ヨードフェノールを用いた別のレベ
ルの酵素濃度では、カチオン物質は信号の減少を引き起
こしたか、又は何の効果も生じなかった。
ドロキシアセトアニリドを用いた場合には、すべてのカ
チオン物質がすべての酵素レベルで化学ルミネセンス信
号を増強したことを示す。この効果は、更に0.25ピコモ
ルの西洋ワサビペルオキシダーゼを用いて実施されたこ
れらのアッセイについて約２を越えるノイズ比に対する
信号によって証明される。増強剤として４−ヨードフェ
ノールを用いた場合には、その濃度におけるＳ／Ｎ比
は、約 1.3以下であり、従って、対照Ｍを上回る明らか
な信号増大はブランク増大のみによるものであったこと
を示している。４−ヨードフェノールを用いた別のレベ
ルの酵素濃度では、カチオン物質は信号の減少を引き起
こしたか、又は何の効果も生じなかった。
【００５０】例８ 非イオン及びアニオン界面活性剤と
の比較 本例は、カチオン界面活性剤の存在は化学ルミネセンス
組成物を安定化せしめるが、しかし非イオン及びアニオ
ン界面活性剤は同様の結果を達成しないことを具体的に
示すものである。
の比較 本例は、カチオン界面活性剤の存在は化学ルミネセンス
組成物を安定化せしめるが、しかし非イオン及びアニオ
ン界面活性剤は同様の結果を達成しないことを具体的に
示すものである。
【００５１】使用した組成物は、前記例２〜７に示した
ものと類似のものであった。対照Ｎ及びＮ′は全く界面
活性剤を含有しないものであった。例８及び対照Ｏ〜Ｔ
は、増強剤として４′−ヒドロキシアセトアニリドを用
いて実施した。対照Ｓ〜Ｗは、増強剤として４−ヨード
フェノールを用いて実施した。以下の界面活性剤を使用
した（各々 0.1％）： 例８及び対照Ｓ：セチルトリメチルアンモニウムブロミ
ド、 対照Ｏ及びＴ：TRITON（商標）Ｘ−100 オクチルフェノ
キシポリエトキシエタノール非イオン界面活性剤（Rohm
and Haas)、 対照Ｐ及びＵ：BRIJ（商標）35 ポリオキシエチレンラ
ウリルエーテル非イオン界面活性剤（Honeywell-Atlas
Ltd.) 、 対照Ｑ及びＶ：TWEEN （商標）20 ポリオキシエチレン
ソルビタンモノラウレート非イオン界面活性剤（ICI Am
ericas, Inc.) 、及び 対照Ｒ及びＷ：ドデシル硫酸ナトリウム アニオン界面
活性剤。 化学ルミネセンスアッセイを、様々な西洋ワサビペルオ
キシダーゼ濃度で例２〜７に記載したように実施した。
結果を下記第III 表に示す。
ものと類似のものであった。対照Ｎ及びＮ′は全く界面
活性剤を含有しないものであった。例８及び対照Ｏ〜Ｔ
は、増強剤として４′−ヒドロキシアセトアニリドを用
いて実施した。対照Ｓ〜Ｗは、増強剤として４−ヨード
フェノールを用いて実施した。以下の界面活性剤を使用
した（各々 0.1％）： 例８及び対照Ｓ：セチルトリメチルアンモニウムブロミ
ド、 対照Ｏ及びＴ：TRITON（商標）Ｘ−100 オクチルフェノ
キシポリエトキシエタノール非イオン界面活性剤（Rohm
and Haas)、 対照Ｐ及びＵ：BRIJ（商標）35 ポリオキシエチレンラ
ウリルエーテル非イオン界面活性剤（Honeywell-Atlas
Ltd.) 、 対照Ｑ及びＶ：TWEEN （商標）20 ポリオキシエチレン
ソルビタンモノラウレート非イオン界面活性剤（ICI Am
ericas, Inc.) 、及び 対照Ｒ及びＷ：ドデシル硫酸ナトリウム アニオン界面
活性剤。 化学ルミネセンスアッセイを、様々な西洋ワサビペルオ
キシダーゼ濃度で例２〜７に記載したように実施した。
結果を下記第III 表に示す。
【００５２】
【表３】
【００５３】これらのデータは、４′−ヒドロキシアセ
トアニリドの存在下ではカチオン界面活性剤のみが化学
ルミネセンス信号を増強することを示す（例８）。信号
は、両増強剤の存在下では非イオン及びアニオン界面活
性剤で低減される。
トアニリドの存在下ではカチオン界面活性剤のみが化学
ルミネセンス信号を増強することを示す（例８）。信号
は、両増強剤の存在下では非イオン及びアニオン界面活
性剤で低減される。
【００５４】例９ 甲状腺刺激ホルモンについての溶液
アッセイ 本例は、溶液中の甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）の検出
についての本発明の実施を具体的に説明し、そしてそれ
を本発明の範囲外のアッセイと比較するものである。本
発明は、下記のことを除いて、同様の装置及び試薬を使
用して、市販の AMERLITE （商標）ＴＳＨアッセイと同
様に実施した。ＴＳＨキャリブレーター溶液を試験被検
体として使用した。
アッセイ 本例は、溶液中の甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）の検出
についての本発明の実施を具体的に説明し、そしてそれ
を本発明の範囲外のアッセイと比較するものである。本
発明は、下記のことを除いて、同様の装置及び試薬を使
用して、市販の AMERLITE （商標）ＴＳＨアッセイと同
様に実施した。ＴＳＨキャリブレーター溶液を試験被検
体として使用した。
【００５５】使用した化学ルミネセンス信号発生性組成
物は、以下の通りである。 対照Ｘ：ホウ酸緩衝剤（ 0.1モル，pH 8.5）中にルミノ
ール（ 0.125ミリモル）、４−ヨードフェノール（ 0.1
ミリモル) 、過ホウ酸塩（１ミリモル）、ベンゾエート
（0.56ミリモル）及びクエン酸塩（ 3.5ミリモル）を含
有せしめた。 対照Ｙ：対照Ｘ及び更にセチルトリメチルアンモニウム
ブロミド（ 0.1％）を含有せしめた。 例９：４′−ヒドロキシアセトアニリド（0.15ミリモ
ル）、ルミノール（１ミリモル）、過酸化水素（２ミリ
モル）、ジエチレントリアミン五酢酸（ 0.1ミリモ
ル）、セチルトリメチルアンモニウムブロミド（ 0.1
％）及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン，塩
酸塩（0.05モル，pH８）。 対照Ｚ：４′−ヒドロキシアセトアニリドの代わりに４
−ヨードフェノール（0.15ミリモル) を使用したことを
除いて例９と同様であった。
物は、以下の通りである。 対照Ｘ：ホウ酸緩衝剤（ 0.1モル，pH 8.5）中にルミノ
ール（ 0.125ミリモル）、４−ヨードフェノール（ 0.1
ミリモル) 、過ホウ酸塩（１ミリモル）、ベンゾエート
（0.56ミリモル）及びクエン酸塩（ 3.5ミリモル）を含
有せしめた。 対照Ｙ：対照Ｘ及び更にセチルトリメチルアンモニウム
ブロミド（ 0.1％）を含有せしめた。 例９：４′−ヒドロキシアセトアニリド（0.15ミリモ
ル）、ルミノール（１ミリモル）、過酸化水素（２ミリ
モル）、ジエチレントリアミン五酢酸（ 0.1ミリモ
ル）、セチルトリメチルアンモニウムブロミド（ 0.1
％）及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン，塩
酸塩（0.05モル，pH８）。 対照Ｚ：４′−ヒドロキシアセトアニリドの代わりに４
−ヨードフェノール（0.15ミリモル) を使用したことを
除いて例９と同様であった。
【００５６】次いで AMERLITE （商標）ＴＳＨアッセイ
プロトコールを、抗ＴＳＨモノクローナル抗体を試験ウ
ェルの壁面上に吸着せしめた市販のマイクロタイタープ
レートを用いて行った。一般的にはこのプロトコールは
下記段階を包含する。 ａ）静菌剤を含有するアッセイ試薬（ 100μＬ）を試験
ウェルに添加する段階。 ｂ）試験被検体（ 100μＬ）を試験ウェルに添加する段
階。 ｃ）37℃で30分間 AMERLITE （商標）振盪機インキュベ
ターでプレートをインキュベーションする段階。 ｄ）流体を吸引し、そしてすべての試験ウェルを AMERL
ITE （商標）洗浄器で洗浄する段階。 ｅ）抗ＴＳＨ西洋ワサビペルオキシダーゼモノクローナ
ル抗体接合体（ 200μＬ）を試験ウェルに添加し、そし
て振盪させながら37℃で約30分間インキュベーションす
る段階。 ｆ）流体を吸引し、そしてすべての試験ウェルを洗浄す
る段階。 ｇ）信号発生性試薬を各試験ウェルに添加する段階。 ｈ）５分以内に、例２〜７に記載されたように生成した
化学ルミネセンス信号を（光単位で）測定する段階。 これらのアッセイの結果を（２つの試験の平均として）
下記第IV表に提供する。
プロトコールを、抗ＴＳＨモノクローナル抗体を試験ウ
ェルの壁面上に吸着せしめた市販のマイクロタイタープ
レートを用いて行った。一般的にはこのプロトコールは
下記段階を包含する。 ａ）静菌剤を含有するアッセイ試薬（ 100μＬ）を試験
ウェルに添加する段階。 ｂ）試験被検体（ 100μＬ）を試験ウェルに添加する段
階。 ｃ）37℃で30分間 AMERLITE （商標）振盪機インキュベ
ターでプレートをインキュベーションする段階。 ｄ）流体を吸引し、そしてすべての試験ウェルを AMERL
ITE （商標）洗浄器で洗浄する段階。 ｅ）抗ＴＳＨ西洋ワサビペルオキシダーゼモノクローナ
ル抗体接合体（ 200μＬ）を試験ウェルに添加し、そし
て振盪させながら37℃で約30分間インキュベーションす
る段階。 ｆ）流体を吸引し、そしてすべての試験ウェルを洗浄す
る段階。 ｇ）信号発生性試薬を各試験ウェルに添加する段階。 ｈ）５分以内に、例２〜７に記載されたように生成した
化学ルミネセンス信号を（光単位で）測定する段階。 これらのアッセイの結果を（２つの試験の平均として）
下記第IV表に提供する。
【００５７】
【表４】
【００５８】データは、対照Ｙ及びＺのように４−ヨー
ドフェノールと共にカチオン界面活性剤を使用すると化
学ルミネセンス信号及び信号／ノイズ（Ｓ／Ｎ）比を低
減することを示す。本発明は、カチオン界面活性剤を
４′−ヒドロキシアセトアニリドと共に使用したので、
低濃度のＴＳＨ分析物で（例えば、0.22μI.U.／mL）改
良された感度を提供した。甲状腺機能正常（正常）体質
と甲状腺機能亢進症を区別するために可能な限り低い濃
度でＴＳＨを検出することが極めて望ましい。２を越え
るＳ／Ｎ比は受入れられる。
ドフェノールと共にカチオン界面活性剤を使用すると化
学ルミネセンス信号及び信号／ノイズ（Ｓ／Ｎ）比を低
減することを示す。本発明は、カチオン界面活性剤を
４′−ヒドロキシアセトアニリドと共に使用したので、
低濃度のＴＳＨ分析物で（例えば、0.22μI.U.／mL）改
良された感度を提供した。甲状腺機能正常（正常）体質
と甲状腺機能亢進症を区別するために可能な限り低い濃
度でＴＳＨを検出することが極めて望ましい。２を越え
るＳ／Ｎ比は受入れられる。
【００５９】例１０ 乾式分析要素で実施したアッセイ 本例は、乾式分析要素を用いる分析物、西洋ワサビペル
オキシダーゼの検出についての本発明の実施を具体的に
説明するものである。要素は以下の構造及び成分を有し
た。
オキシダーゼの検出についての本発明の実施を具体的に
説明するものである。要素は以下の構造及び成分を有し
た。
【００６０】
【表５】
【００６１】化学ルミネセンス信号発生性組成物を以下
の試薬を用いて調整した。ルミノール（１ミリモル）、
過酸化水素（２ミリモル）、ジエチレントリアミン五酢
酸（ 0.1ミリモル）、トリス（ヒドロキシメチル）アミ
ノメタン，塩酸塩（0.05モル，pH８）、セチルトリメチ
ルアンモニウムブロミド（ 0.1％）、４′−ヒドロキシ
アセトアニリド（0.15ミリモル, 例10）又は４−ヨード
フェノール（ 0.4ミリモル，対照ＡＡ）、並びに西洋ワ
サビペルオキシダーゼ（第Ｖ表中の量）。
の試薬を用いて調整した。ルミノール（１ミリモル）、
過酸化水素（２ミリモル）、ジエチレントリアミン五酢
酸（ 0.1ミリモル）、トリス（ヒドロキシメチル）アミ
ノメタン，塩酸塩（0.05モル，pH８）、セチルトリメチ
ルアンモニウムブロミド（ 0.1％）、４′−ヒドロキシ
アセトアニリド（0.15ミリモル, 例10）又は４−ヨード
フェノール（ 0.4ミリモル，対照ＡＡ）、並びに西洋ワ
サビペルオキシダーゼ（第Ｖ表中の量）。
【００６２】対照ＢＢを、カチオン界面活性剤を省いた
が４−ヨードフェノールを用いて同様に調整し、そして
対照ＣＣを、カチオン界面活性剤を省いたが４′−ヒド
ロキシアセトアニリドを用いて同様に調整した。ペルオ
キシダーゼを組成物に添加して渦状に混合せしめた後、
各試料（10μＬ）を個々の要素の展開層（表面領域 16m
m2）に塗布した。５分後、要素中の試薬により発生して
得られた化学ルミネセンス信号を、市販の Turner ルミ
ノメーターにおける37℃で放出された光の10秒間の積分
を用いて測定した。下記第Ｖ表に提供された結果は、各
組成物について２つの試験の平均である。
が４−ヨードフェノールを用いて同様に調整し、そして
対照ＣＣを、カチオン界面活性剤を省いたが４′−ヒド
ロキシアセトアニリドを用いて同様に調整した。ペルオ
キシダーゼを組成物に添加して渦状に混合せしめた後、
各試料（10μＬ）を個々の要素の展開層（表面領域 16m
m2）に塗布した。５分後、要素中の試薬により発生して
得られた化学ルミネセンス信号を、市販の Turner ルミ
ノメーターにおける37℃で放出された光の10秒間の積分
を用いて測定した。下記第Ｖ表に提供された結果は、各
組成物について２つの試験の平均である。
【００６３】
【表６】
【００６４】データは、組成物にカチオン界面活性剤を
添加すると、より低い分析物濃度（例えば、50ピコモ
ル) で化学ルミネセンス信号及び信号／ノイズ（Ｓ／
Ｎ）比を増強したことを示す。４−ヨードフェノールを
含有する組成物にカチオン界面活性剤を添加すると、ほ
とんどの分析物濃度で信号を実際に低減した。分析要素
を製造するために使用される塗膜処方中の塗布助剤とし
ての非常に少量の非イオン界面活性剤 ZONYL（商標） F
SN及び TRITON （商標）Ｘ−100 の存在は、アッセイ中
の化学ルミネセンス信号の発生に悪影響を及ぼさない。
添加すると、より低い分析物濃度（例えば、50ピコモ
ル) で化学ルミネセンス信号及び信号／ノイズ（Ｓ／
Ｎ）比を増強したことを示す。４−ヨードフェノールを
含有する組成物にカチオン界面活性剤を添加すると、ほ
とんどの分析物濃度で信号を実際に低減した。分析要素
を製造するために使用される塗膜処方中の塗布助剤とし
ての非常に少量の非イオン界面活性剤 ZONYL（商標） F
SN及び TRITON （商標）Ｘ−100 の存在は、アッセイ中
の化学ルミネセンス信号の発生に悪影響を及ぼさない。
【００６５】
【発明の効果】本発明は、分析的、免疫化学的及びハイ
ブリダイゼーションアッセイにおける化学ルミネセンス
検出の使用に伴うすべての既知利点を提供する。しかし
ながら、更なる予測しなかった利点、すなわち、より良
好な速度論的安定性、低い分析物濃度における高感度及
びより直線的な較正曲線が達成された。「速度論的安定
性」とは、一定の光出力の存続時間の増大を意味する。
これらの結果は、低分子量カチオン界面活性剤もしくは
カチオン親水性ポリマーより生成されるカチオンミセル
に化学ルミネセンス増強剤として４′−ヒドロキシアセ
トアニリドを使用することによって達成される。別の既
知増強剤は、カチオンミセルの存在下でさえ、このよう
な利点を提供しなかった。
ブリダイゼーションアッセイにおける化学ルミネセンス
検出の使用に伴うすべての既知利点を提供する。しかし
ながら、更なる予測しなかった利点、すなわち、より良
好な速度論的安定性、低い分析物濃度における高感度及
びより直線的な較正曲線が達成された。「速度論的安定
性」とは、一定の光出力の存続時間の増大を意味する。
これらの結果は、低分子量カチオン界面活性剤もしくは
カチオン親水性ポリマーより生成されるカチオンミセル
に化学ルミネセンス増強剤として４′−ヒドロキシアセ
トアニリドを使用することによって達成される。別の既
知増強剤は、カチオンミセルの存在下でさえ、このよう
な利点を提供しなかった。
Claims (4)
- 【請求項１】 ７〜9.5 のpHを有し、そして ａ） 2,3−ジヒドロ−1,4 −フタラジンジオン誘導体、 ｂ）低分子量カチオン界面活性剤（その臨界ミセル濃度
を越える0.05〜0.25％で存在する）又は0.01〜２％のカ
チオンポリマー、並びに ｃ）４′−ヒドロキシアセトアニリド、を含んで成る化
学ルミネセンス信号を提供するための組成物。 - 【請求項２】 個別に包装された ａ） 2,3−ジヒドロ−1,4 −フタラジンジオン誘導体、
及び１つ以上の以下の試薬、 ｂ）低分子量カチオン界面活性剤（その臨界ミセル濃度
を越える0.05〜0.25％で存在する）又は0.01〜２％のカ
チオンポリマー、 ｃ）４′−ヒドロキシアセトアニリド、並びに ｄ）ペルオキシダーゼもしくはペルオキシダーゼ標識特
異的バインディング種、を含んで成る診断試験キット。 - 【請求項３】 Ａ．ペルオキシダーゼを、 2,3−ジヒドロ−1,4 −フタラジンジオン誘導体、 酸化体、 低分子量カチオン界面活性剤（その臨界ミセル濃度を越
える0.05〜0.25％で存在する）又は0.01〜２％のカチオ
ンポリマー、並びに４′−ヒドロキシアセトアニリドの
存在下で反応せしめて化学ルミネセンス信号を生成する
工程、そして Ｂ．得られた信号を検出する工程、を含んで成るペルオ
キシダーゼに応じて化学ルミネセンス信号を提供する方
法。 - 【請求項４】 Ａ．特異的バインディングリガンドをリ
ガンドに特異的なレセプターと複合せしめて特異的バイ
ンディング複合体を生成せしめる工程、 Ｂ．特異的バインディング複合体をペルオキシダーゼで
標識する工程 Ｃ．ペルオキシダーゼ標識複合体を、 2,3−ジヒドロ−1,4 −フタラジンジオン誘導体、 酸化体、 低分子量カチオン界面活性剤（その臨界ミセル濃度を越
える0.05〜0.25％で存在する）又は0.01〜２％のカチオ
ンポリマー、並びに４′−ヒドロキシアセトアニリドと
接触せしめて化学ルミネセンス信号を生成する工程、そ
して Ｄ．得られた信号を検出する工程、を含んで成る特異的
バインディングリガンドを検出するための特異的バイン
ディングアッセイ。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/923,662 US5279940A (en) | 1992-08-03 | 1992-08-03 | Chemiluminescent composition containing cationic surfactants or polymers and 4'-hydroxyacetanilide, test kits and their use in analytical methods |
| US923662 | 1997-09-04 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06197796A true JPH06197796A (ja) | 1994-07-19 |
| JP4060380B2 JP4060380B2 (ja) | 2008-03-12 |
Family
ID=25449052
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19100193A Expired - Lifetime JP4060380B2 (ja) | 1992-08-03 | 1993-08-02 | カチオン界面活性剤もしくはポリマー及び４′−ヒドロキシアセトアニリドを含有する化学ルミネセンス組成物、試験キット並びに分析方法におけるそれらの用途 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5279940A (ja) |
| EP (1) | EP0582339B1 (ja) |
| JP (1) | JP4060380B2 (ja) |
| AT (1) | ATE185899T1 (ja) |
| DE (1) | DE69326806T2 (ja) |
| DK (1) | DK0582339T3 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2012173185A1 (ja) * | 2011-06-17 | 2015-02-23 | 協和メデックス株式会社 | 糖化ヘモグロビンの測定方法、測定試薬、及び、測定キット |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5466578A (en) * | 1992-04-09 | 1995-11-14 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Surfactant-enhanced light emission- or absorbance-based binding assays for polynucleic acids |
| US5451347A (en) * | 1993-06-24 | 1995-09-19 | Lumigen, Inc. | Methods and compositions providing enhanced chemiluminescence from chemiluminescent compounds using dicationic surfactants |
| CA2130947C (en) * | 1993-11-12 | 2001-02-06 | Robert E. Emmons | Dry elements, test devices, test kits and methods for chemiluminescent detection of analytes using peroxidase-labeled reagents |
| ATE196689T1 (de) * | 1994-03-30 | 2000-10-15 | Johnson & Johnson Clin Diag | Verringerung der störung in chemilumineszierenden dünnschicht-immuntests |
| US5705357A (en) * | 1994-08-29 | 1998-01-06 | Johnson & Johnson Clinical Diagnostics, Inc. | Chemiluminescent reagent and assay using a substituted acetanilide for light generation |
| US5879885A (en) * | 1995-06-07 | 1999-03-09 | Gen-Probe Incorporated | Compositions for detecting and quantifying biological samples |
| KR19990022598A (ko) * | 1995-06-07 | 1999-03-25 | 다니엘 엘. 캐시앙, 헨리 엘. 노르호프 | 미셀 보호 분석법 |
| GB9514594D0 (en) * | 1995-07-17 | 1995-09-13 | Johnson & Johnson Clin Diag | Chemiluminescent analytical method |
| JP2001249079A (ja) * | 1999-12-28 | 2001-09-14 | Fujirebio Inc | 発光量調節剤を用いた化学発光測定方法及び酵素免疫測定方法 |
| DE60138535D1 (de) * | 2000-02-04 | 2009-06-10 | Children S Hospital Res Founda | Verwendung von lysosomal acid lipase zur behandlung von atherosklerose und ähnlichen krankheiten |
| CA2339030A1 (en) * | 2000-03-02 | 2001-09-02 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | Analytical elements |
| AU2001244391B9 (en) * | 2000-04-03 | 2006-10-05 | Ventaira Pharmaceuticals, Inc. | Devices and formulations |
| EP1343521A2 (en) * | 2000-12-01 | 2003-09-17 | Battelle Memorial Institute | Method for the stabilizing biomolecules (e.g. insulin) in liquid formulations |
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| EP1960487A1 (en) * | 2005-12-08 | 2008-08-27 | Queen's University At Kingston | Optical sensor using functionalized composite materials |
| JPWO2007142314A1 (ja) * | 2006-06-08 | 2009-10-29 | 富士レビオ株式会社 | 発光増幅剤 |
| CN114853738B (zh) * | 2022-04-29 | 2022-11-29 | 广州中医药大学(广州中医药研究院) | 一种鲁米诺衍生物及其制备方法与应用 |
| CN118858262B (zh) * | 2024-07-03 | 2025-04-22 | 上海碧云天生物技术股份有限公司 | 高灵敏单组分化学发光底物、长效储存容器及其应用 |
| CN122104871A (zh) * | 2026-04-28 | 2026-05-29 | 北京清准医学科技有限公司 | 用于荧光原位杂交的生物组织处理方法及应用 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| NL8201713A (nl) * | 1982-04-26 | 1983-11-16 | Impexa International B V | Methoden om de levensduur van het lichteffect van chemiluminiscerende reacties te verlengen. |
| US4462931A (en) * | 1982-06-16 | 1984-07-31 | American Cyanamid Company | Enhanced aqueous chemiluminescent systems |
| US4521511A (en) * | 1982-09-22 | 1985-06-04 | Enzyme Technology Company | Catalyzed colorimetric and fluorometric substrates for peroxidase enzyme determinations |
| US4450305A (en) * | 1982-10-25 | 1984-05-22 | American Cyanamid Company | Poly(ethyleneoxy)-substituted-9,10-bis(phenylethynyl)anthracenes |
| EP0116454B1 (en) * | 1983-02-11 | 1987-04-29 | National Research Development Corporation | Enhanced luminescent or luminometric assay |
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-
1992
- 1992-08-03 US US07/923,662 patent/US5279940A/en not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-07-27 DE DE69326806T patent/DE69326806T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-27 EP EP93202214A patent/EP0582339B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-27 AT AT93202214T patent/ATE185899T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-07-27 DK DK93202214T patent/DK0582339T3/da active
- 1993-08-02 JP JP19100193A patent/JP4060380B2/ja not_active Expired - Lifetime
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|---|---|
| EP0582339B1 (en) | 1999-10-20 |
| JP4060380B2 (ja) | 2008-03-12 |
| EP0582339A3 (en) | 1995-04-12 |
| ATE185899T1 (de) | 1999-11-15 |
| EP0582339A2 (en) | 1994-02-09 |
| DK0582339T3 (da) | 2000-01-03 |
| US5279940A (en) | 1994-01-18 |
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| DE69326806D1 (de) | 1999-11-25 |
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