JPH06201699A - 臨床診断及びｈｉｖ感染進行のモニタリングに対するｓｐ−２モノクローナル抗体の使用 - Google Patents

臨床診断及びｈｉｖ感染進行のモニタリングに対するｓｐ−２モノクローナル抗体の使用

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JPH06201699A
JPH06201699A JP3228214A JP22821491A JPH06201699A JP H06201699 A JPH06201699 A JP H06201699A JP 3228214 A JP3228214 A JP 3228214A JP 22821491 A JP22821491 A JP 22821491A JP H06201699 A JPH06201699 A JP H06201699A
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JP
Japan
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antigen
monoclonal antibody
vitro assay
hiv infection
infection
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JP3228214A
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English (en)
Inventor
Stefano Iacobelli
イアコベリ ステファノ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
DEGLI STUDI G DANUNZIO, University of
Consiglio Nazionale delle Richerche CNR
Universita' Degli Studi "G D 'Annunzio" Chieti-Pescara
Original Assignee
DEGLI STUDI G DANUNZIO, University of
Consiglio Nazionale delle Richerche CNR
Universita' Degli Studi "G D 'Annunzio" Chieti-Pescara
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G01N33/56988—HIV or HTLV
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 ＨＩＶ（ヒト免疫不全ビールス）感染の臨床
診断及びモニタリング分析に用いられるキットの提供。 【構成】 ＳＰ−２モノクローナル抗体を含む、生物学
的流体又は組織からの９０Ｋ抗原のインビトロアッセイ
用組成物。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ＨＩＶ（ヒト免疫不全
ビールス）感染の臨床診断及び進行モニタリングのため
並びにその診断及びモニタリング分析を実施するための
キットの調整におけるＳＰ−２モノクローナル抗体の使
用に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＳＰ−２モノクローナル抗体（ＩｇＧ１
サブクラス）は、９０Ｋと示され且つ十分性質の分かっ
ていない９０，０００分子量の抗原と反応し、この抗原
は、腫瘍組織中や乳癌及び他の腫瘍疾患患者の血清中に
見いだされることが良く知られている（Ｓ．Ｉａｃｏｂ
ｅｌｌｉ等；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４６，
３００５−１０，１９８６；Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓｅａｒｃｈ ８，７６１−４，１９８８；Ｂ ｒｅ
ａｓｔ Ｃａｎｓｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔ
ｒｅａｔｍｅｎｔ １１，１９−３０，１９８８；Ｇｙ
ｎｅｃｏｌｏｇｉｃ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，３５，２８６
−９，１９８９）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】抗原９０Ｋが、ＨＩＶ
感染患者の血清中にも存在すること、並びにポジティビ
ティーのパーセントと血清中の抗原の平均濃度とが感染
度合に比例して、無症性患者のＨＩＶ−セロポジティビ
ティーからＡＲＣ（ＡＩＤＳ関連コンプレックス）やＡ
ＩＤＳ（後天性免疫不全症候群）まで通して値が大きく
なるという驚くべきことを発見した。さらに、正常被験
者のそれよりも高い値である９０Ｋレベルが、ＨＩＶ感
染の高いリスクである抗−ＨＩＶセロネガティブ患者の
血清中に見出された。９０Ｋ抗原のアッセイは、本発明
者であるＩａｃｏｂｅｌｌｉ等が１９８６，Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４６，３００５−３０１０で、
Ｉａｃｏｂｅｌｌｉ等，１９８８，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｒｅｓｅｒｃｈａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎ
ｔ，１１，１９−３０で以前記述したように、Ｃ．Ｎ．
Ｃ．Ｍ．にＮ．Ｉ−１０８３で寄託した、対応するハイ
ブリードマセルラインから精製したモノクローナル抗体
ＳＰ−２を用いて行なう。このアッセイは、患者が病徴
を示す前のＨＩＶの早期診断にとって、並びに感染それ
自体の進行のモニタリングにとって非常に有用なもので
ある。従って、治療的処置の必要な患者を選別し、その
後その処置自体の効果を評価する試験をすることができ
る。
【０００４】
【課題を解決するための手段】従って、ＨＩＶ感染に関
する臨床診断に有用な、生物学的流体又は組織からの９
０Ｋ抗原のインビトロアッセイ用ＳＰ−２モノクローナ
ル抗体の使用は、本発明のひとつの目的である。
【０００５】好ましくは、９０Ｋ抗原のインビトロアッ
セイを行なって、ＨＩＶ感染の病期の診断を行ない、抗
ＨＩＶセロポジティブ無症的患者でのＡＲＣ又はＡＩＤ
Ｓを通じて感染の進展を予測し、ＨＩＶ感染の進行をモ
ニターし、特異的（抗ビールス的）又は非特異的治療の
効果を評価し、危険な状態の抗ＨＩＶセロネガティブ患
者の血清変換を早期に指摘する。
【０００６】本発明によれば、このインビトロアッセイ
はイムノアッセイにより行ない、好ましくはリビーリン
グシステムとして、酵素的、ラジオアイソトープ又は化
学ルミネセンスシステムを用いたアッセイの範囲内に含
まれる。この酵素的システムは、ＥＬＩＳＡ又はＥＩＡ
アッセイを含み、このラジオアイソトープシステムは、
ＩＲＭＡ又はＲＩＡシステムを含む。
【０００７】本発明の別の目的は、上記インビトロアッ
セイを実施するための診断キットの製造用モノクローナ
ル抗体ＳＰ−２の使用である。
【０００８】本発明の別の目的は、上記インビトロアッ
セイを実施するための診断キットであり、生物学的流体
又は組織における９０Ｋ抗原の閾値は、９と１３Ｕ／ｍ
ｌの間を含む。
【０００９】本発明を次の実施例を参照して詳述する。
【００１０】
【実施例】 ＨＩＶ感染の臨床診断用及び進行モニタリング用キット −ＳＰ−２マウスモノクローナル１ｇＧで感作した 小ポリスチレンビーズ Ｎｏ．１００ −１２５ＩでラベルしたＳＰ−２マウスモノクローナルＩｇＧ、 バッファー、蛋白 、安定剤及び防腐剤から成るトレーサー； 測定日での最大ラジオ活性＝４９６ＫＢｑ（１３．４μＣｉ） ２１ｍｌ −バッファーのスタンダードＯ蛋白及び防腐剤 ３０ｍｌ −５−１０−２０−４０Ｕ／ｍｌ各濃度の抗原９０Ｋを含む スタンダード１−４，ＨＢｓ Ａｇ−及びＨＩＶ−１−ネガ ティブヒト血清、バッファー、蛋白及び防腐剤 １ｍｌ
【００１１】上記材料を下記被験者から得た血液サンプ
ルを分析するのに使用した。 −６５ コントロール被験者（正常被験者） −８０ ＡＩＤのリスクにのさらされたセロネガティブ
同性愛者 −７２ 無症的セロネガティブ被験者 −３９ エイズ関連コンプレックス（ＡＲＣ）患者 −４１ ＡＩＤＳ患者
【００１２】血液サンプルを遠心分離して血清を分離し
−３０℃で貯蔵した。
【００１３】分析時に、サンプルを溶かし、“ゼロ”ス
タンダード（１０μｌのサンプル＋９９０μｌのゼロス
タンダード）で１／１００希釈し、全ての反応物を室温
（２０−２５℃）で調節した。２０ウェルのプラスチッ
ク性反応プレートを使って、スタンダードとサンプルの
アッセイを２反覆行なうためにウェルを同定した。スタ
ンダードＯ（１００μｌ）を全てのウェルに配分した。
スタンダードＯ−４（１００μｌ）と希釈サンプル（１
００μｌ）を各ウェルに配分した。ひとつの小ビード
（ｂｅａｄ）を各ウェルに置いた。サンプルの蒸発を防
ぐため自己接着ペーパーをウェルにかぶせた。空気の泡
を取除くために反応ウェルをおだやかに攪拌し、小ピー
ドが完全に覆われるように注意深く保持した。
【００１４】反応プレートを３７℃で１時間培養した。
培養の終りに、自己接着ペーパーを除去し、液体を吸引
した。各ウェル及びその中のビードを、サクションと公
知の自動洗條機を用いて全量１５ｍｌの脱イオン水で洗
條を繰り返した。
【００１５】１００μｌの１２５Ｉ標識ＳＰ−２を各ウ
ェルに入れた。プレートを再び３７℃で１時間培養し
た。培養の終りに、各小ビードをウェルから管に、ウェ
ルをひっくり返して移した。各小ビードのラジオアクテ
ィビティーをガンマ計測器で測定した。
【００１６】計測数の平均値を３本の試験管の各セット
でバックグランド値を控除して、評価した。縦軸として
各スタンダードに対する平均ｃｐｍを、そして横軸とし
てそれに対応する抗原９０Ｋ濃度を表わして、スタンダ
ード曲線を直線軸にプロットした。Ｕ／ｍｌとする抗原
９０Ｋ濃度をこのスタンダード曲線から直接読みとっ
た。
【００１７】正常被験者を病原被験者から区別する閾値
は１１Ｕ／ｍｌに設けた。従って、１１Ｕ／ｍｌより大
きい値をポジティブとした。
【００１８】血中に上昇９０Ｋ抗原レベルを有するＨＩ
Ｖ感染のリスクのある抗−ＨＩＶセロネガティブ被験者
の割合は、正常コントロール母集団（５％）に関して高
い（２７％）。これに反して、表１に示すように、４３
％の無症的セロポジティブ被験者、７１％のＡＲＣ患者
及び９４％のＡＩＤＳ患者は、正常レベルよりも高い、
９０Ｋ抗原レベルを示した。
【００１９】
【表１】
【００２０】このデータは、病気の進展、無症的抗−Ｈ
ＩＶセロポジティブ段階を経て、ＡＲＣ及び明白なＡＩ
ＤＳ段階へ至ることが、血中の９０Ｋ抗原レベルの発展
的かつ意味のある増加に関係があることを示している。
【００２１】このことは、血中の９０Ｋ抗原レベルとＣ
Ｄ４リンパ球との副母集団間に見られる関係によっても
又確認されたのであり、末梢血液におけるその減少が疾
病の進展のマーカーである。特に、血中での高レベルの
９０Ｋ抗原は、ＣＤ４計測数の低さと密接な相関（ｐ１
０−６より小）があることが判明した。リンパ球ＣＤ４
の計測数に関して９０Ｋ抗原の利点は、９０Ｋ抗原レベ
ルの増加がＣＤ４リンパ球での減少の開始に先立つこと
にある。実際、ＣＤ４リンパ球の極だった減少が起きる
と、免疫システムのダメージは不可逆である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ１２Ｎ 15/06 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (8)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ＳＰ−２モノクローナル抗体を含む、Ｈ
    ＩＶ感染に関連した診断に有用な生物学的流体又は組織
    からの９０Ｋ抗原のインビトロアッセイ用組成物
  2. 【請求項２】 インビトロアッセイが実施されて、ＨＩ
    Ｖ感染中の病期の診断を行ない、抗ＨＩＶセロポジティ
    ブ無症的被験者でのＡＲＣ又はＡＩＤＳを通じて感染の
    進行を予知し、ＨＩＶ感染の進展をモニターし、特異的
    （抗ビールス）又は非特異的治療の効果を評価し、危険
    な抗ＨＩＶセロネガティブ被験者の血清変換を早期に指
    摘する、請求項１のＳＰ−２モノクローナル抗体を含
    む、ＨＩＶ感染に関連した診断に有用な生物学的流体又
    は組織からの９０Ｋ抗原のインビトロアッセイ用組成物
  3. 【請求項３】 インビトロアッセッセイがイムノアッセ
    イにより実施される請求項２の、ＳＰ−２モノクローナ
    ル抗体を含む、ＨＩＶ感染に関連した診断に有用な生物
    学的流体又は組織からの９０Ｋ抗原のインビトロアッセ
    イ用組成物
  4. 【請求項４】 イムノアッセイが、リビーリングシステ
    ムとして少くともひとつの次のシステム：酵素的、ラジ
    オアイソトープ又は化学ルミネセンスを利用したアッセ
    イを含む請求項３の、ＳＰ−２モノクローナル抗体を含
    む、ＨＩＶ感染に関連した診断に有用な生物学的流体又
    は組織からの９０Ｋ抗原のインビトロアッセイ用組成物
  5. 【請求項５】 酵素的システムが、ＥＬＩＳＡ又はＥＩ
    Ａアッセイを含み、及びラジオアイソトープシステム
    が、ＩＲＭＡ又はＲＩＡアッセイを含む請求項４の、Ｓ
    Ｐ−２モノクローナル抗体を含む、ＨＩＶ感染に関連し
    た診断に有用な生物学的流体又は組織からの９０Ｋ抗原
    のインビトロアッセイ用組成物
  6. 【請求項６】 請求項１及至５のいずれか１項に記載
    の、ＳＰ−２モノクローナル抗体を含む、ＨＩＶ感染に
    関連した診断に有用な生物学的流体又は組織からの９０
    Ｋ抗原のインビトロアッセイ用組成物
  7. 【請求項７】 請求項１及至６のいずれか１項に記載
    の、９０Ｋ抗原のインビトロアッセイを実施するための
    診断キット
  8. 【請求項８】 生物学的流体又は組織内の９０Ｋ抗原の
    閾値が９と１３Ｕ／ｍｌとの間を含む請求項７の診断キ
    ット
JP3228214A 1990-04-23 1991-04-22 臨床診断及びｈｉｖ感染進行のモニタリングに対するｓｐ−２モノクローナル抗体の使用 Pending JPH06201699A (ja)

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EP91830153A EP0453419B1 (en) 1990-04-23 1991-04-17 Use of the SP-2 monoclonal antibody for diagnostics and for monitoring of the HIV infection progress
AT91830153.2 1991-04-17
AT20113-A/90 1991-04-17

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