JPH06220084A - ペプチド合成装置 - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
【構成】洗浄・カップリング・洗浄・脱保護の一連の反
応の繰り返しを、気密下および／または不活性ガス気流
中で行う手段を有するとともに試薬デリバリー吸引のニ
ードルを有する装置であって、ペプチド合成後のクリー
ベイジに適したリンカー、およびペプチド鎖の伸長の妨
げにならないようなスペーサーを有する内面壁を有する
マイクロタイタープレート、または該誘導体化されたメ
ンブランフィルターを装填したマイクロタイタープレー
トを用いるペプチド合成装置。 【効果】本発明のペプチド合成装置は、固相支持体の洗
浄が容易で、かつペプチド合成に用いるための試薬の使
用量が少なく、さらに反応槽中でクリーベイジを行うこ
とにより、一連の合成反応に用いる反応槽から合成品を
取り出すことが可能であり、迅速で高効率的な、同時多
種品目固相合成を行うことが可能である。
応の繰り返しを、気密下および／または不活性ガス気流
中で行う手段を有するとともに試薬デリバリー吸引のニ
ードルを有する装置であって、ペプチド合成後のクリー
ベイジに適したリンカー、およびペプチド鎖の伸長の妨
げにならないようなスペーサーを有する内面壁を有する
マイクロタイタープレート、または該誘導体化されたメ
ンブランフィルターを装填したマイクロタイタープレー
トを用いるペプチド合成装置。 【効果】本発明のペプチド合成装置は、固相支持体の洗
浄が容易で、かつペプチド合成に用いるための試薬の使
用量が少なく、さらに反応槽中でクリーベイジを行うこ
とにより、一連の合成反応に用いる反応槽から合成品を
取り出すことが可能であり、迅速で高効率的な、同時多
種品目固相合成を行うことが可能である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、誘導体化された内面壁
を有するマイクロタイタープレート、あるいは誘導体化
されたメンブランフィルターを装填したマイクロタイタ
ープレートを用いるペプチド合成装置に関する。ここに
誘導体化されたとはペプチド合成後のクリーベイジに適
したリンカーおよびペプチド鎖の伸長の妨げにならない
ようなスペーサーを有するように誘導したの意である。
を有するマイクロタイタープレート、あるいは誘導体化
されたメンブランフィルターを装填したマイクロタイタ
ープレートを用いるペプチド合成装置に関する。ここに
誘導体化されたとはペプチド合成後のクリーベイジに適
したリンカーおよびペプチド鎖の伸長の妨げにならない
ようなスペーサーを有するように誘導したの意である。
【０００２】
【従来の技術・発明が解決しようとする課題】従来、Ｄ
ＮＡ、ＲＮＡおよびペプチドの合成（以下、単にペプチ
ド合成と略す）においては、ガラスビーズやレジン粉体
を用いてこれらを固相支持体とし、フィルターの装填さ
れた反応槽内で、洗浄・カップリング・洗浄・脱保護の
一連の反応を繰り返し行っていた。該合成法を用いる場
合、レジンの洗浄はコンタミネーションを防ぐために重
要であるが、メチレンクロライド、ＤＭＦ、アセトニト
リル等の溶媒を用いて反応槽内に存在するレジン粉体の
完全洗浄を行うためには、非常に多量の溶媒と時間が必
要とされる。また、該合成法により得られたレジン−ペ
プチド結合体からペプチドを取り出す際は、別途にクリ
ーベイジを行う必要があった。この二つの問題点はペプ
チド合成を迅速かつ効率よく行う上での障壁となってお
り、改善が強く望まれている。
ＮＡ、ＲＮＡおよびペプチドの合成（以下、単にペプチ
ド合成と略す）においては、ガラスビーズやレジン粉体
を用いてこれらを固相支持体とし、フィルターの装填さ
れた反応槽内で、洗浄・カップリング・洗浄・脱保護の
一連の反応を繰り返し行っていた。該合成法を用いる場
合、レジンの洗浄はコンタミネーションを防ぐために重
要であるが、メチレンクロライド、ＤＭＦ、アセトニト
リル等の溶媒を用いて反応槽内に存在するレジン粉体の
完全洗浄を行うためには、非常に多量の溶媒と時間が必
要とされる。また、該合成法により得られたレジン−ペ
プチド結合体からペプチドを取り出す際は、別途にクリ
ーベイジを行う必要があった。この二つの問題点はペプ
チド合成を迅速かつ効率よく行う上での障壁となってお
り、改善が強く望まれている。
【０００３】すなわち、本発明は、固相支持体の洗浄が
容易で、かつペプチド合成に用いるための試薬の使用量
が少なく、さらに反応槽中(in situ) でクリーベイジを
行うことにより、一連の合成反応に用いる反応槽からペ
プチド（またはＤＮＡ）溶液として合成品を取り出すこ
とが可能であるようなペプチド合成装置を提供すること
を課題とする。
容易で、かつペプチド合成に用いるための試薬の使用量
が少なく、さらに反応槽中(in situ) でクリーベイジを
行うことにより、一連の合成反応に用いる反応槽からペ
プチド（またはＤＮＡ）溶液として合成品を取り出すこ
とが可能であるようなペプチド合成装置を提供すること
を課題とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者等は前記課題を
解決するために鋭意検討した。その結果、ペプチド合成
装置に、誘導体化された内面壁を有するか、誘導体化さ
れたメンブランフィルターを装填したマイクロタイター
プレートを用いることが有用であることを見出し、本発
明を完成するに至った。
解決するために鋭意検討した。その結果、ペプチド合成
装置に、誘導体化された内面壁を有するか、誘導体化さ
れたメンブランフィルターを装填したマイクロタイター
プレートを用いることが有用であることを見出し、本発
明を完成するに至った。
【０００５】即ち、本発明の要旨は、洗浄・カップリン
グ・洗浄・脱保護の一連の反応の繰り返しを、気密下お
よび／または不活性ガス気流中で行う手段を有するとと
もに試薬デリバリー吸引のニードルを有する装置であっ
て、ペプチド合成後のクリーベイジに適したリンカー、
およびペプチド鎖の伸長の妨げにならないようなスペー
サーを有する（以下、誘導体化された）内面壁を有する
マイクロタイタープレート、または該誘導体化されたメ
ンブランフィルターを装填したマイクロタイタープレー
トを用いるペプチド合成装置に関する。
グ・洗浄・脱保護の一連の反応の繰り返しを、気密下お
よび／または不活性ガス気流中で行う手段を有するとと
もに試薬デリバリー吸引のニードルを有する装置であっ
て、ペプチド合成後のクリーベイジに適したリンカー、
およびペプチド鎖の伸長の妨げにならないようなスペー
サーを有する（以下、誘導体化された）内面壁を有する
マイクロタイタープレート、または該誘導体化されたメ
ンブランフィルターを装填したマイクロタイタープレー
トを用いるペプチド合成装置に関する。
【０００６】本発明においてクリーベイジとは、ペプチ
ド合成装置により得られた固相支持体とペプチドの結合
体から目的のペプチドを取り出す操作を意味し、クリー
ベイジに適したリンカーとは、例えば、ヒドロキシフェ
ノキシ酢酸（hydroxyphenoxyacetic acid ）等が挙げら
れる。本発明においてペプチド鎖の伸長の妨げにならな
いようなスペーサーとは、例えばポリオキシエチレン等
が挙げられる。また、本発明においてペプチド合成後の
クリーベイジに適したリンカー、およびペプチド鎖の伸
長の妨げにならないようなスペーサーを有することを前
記のように「誘導体化された」と称する。
ド合成装置により得られた固相支持体とペプチドの結合
体から目的のペプチドを取り出す操作を意味し、クリー
ベイジに適したリンカーとは、例えば、ヒドロキシフェ
ノキシ酢酸（hydroxyphenoxyacetic acid ）等が挙げら
れる。本発明においてペプチド鎖の伸長の妨げにならな
いようなスペーサーとは、例えばポリオキシエチレン等
が挙げられる。また、本発明においてペプチド合成後の
クリーベイジに適したリンカー、およびペプチド鎖の伸
長の妨げにならないようなスペーサーを有することを前
記のように「誘導体化された」と称する。
【０００７】本発明において誘導体化された内面壁を有
するマイクロタイタープレートの作製は、ポリプロピレ
ン、ポリスチレンなどのプラスチックよりなるウェルの
内面壁を化学処理し、あるいはウェルの内面壁を誘導化
しやすい物質でコーティングすることにより、内面壁の
誘導体化を行なうことにより作製される。すなわち、各
ウェル内面壁を、これらの官能基（ウェル内面壁がセル
ロース、紙またはコットンの場合は水酸基、ウェル内面
壁がポリマーの場合はアミノエチル基）にリンカー（例
えば、ヒドロキシフェノキシ酢酸）を導入し、ここに第
１の保護アミノ酸を導入する。これらの方法はすべてペ
プチド合成において広く行われている既知の方法であ
る。また、誘導体化されたメンブランフィルターを装填
したマイクロタイタープレートの作製は、ポリプロピレ
ン、ポリビニリデンダイフルオライド、セルロースまた
はグラスフィルター製等のメンブランフィルターを、常
法の化学処理により誘導体化した後、該メンブランフィ
ルターをマイクロタイタープレートのウェルの内径の大
きさにカットし、各ウェル内に装填することにより作製
される。なお、実際にペプチド合成を行う際には、該メ
ンブランフィルター専用のカッターを作製し、目的のマ
イクロタイタープレートのウェルの内径の大きさ及び数
に合わせて一度に該メンブランフィルターのカットを行
い、引き続き該カット片がマイクロタイタープレートの
ウェル内に装填できるようにすることが好ましい。
するマイクロタイタープレートの作製は、ポリプロピレ
ン、ポリスチレンなどのプラスチックよりなるウェルの
内面壁を化学処理し、あるいはウェルの内面壁を誘導化
しやすい物質でコーティングすることにより、内面壁の
誘導体化を行なうことにより作製される。すなわち、各
ウェル内面壁を、これらの官能基（ウェル内面壁がセル
ロース、紙またはコットンの場合は水酸基、ウェル内面
壁がポリマーの場合はアミノエチル基）にリンカー（例
えば、ヒドロキシフェノキシ酢酸）を導入し、ここに第
１の保護アミノ酸を導入する。これらの方法はすべてペ
プチド合成において広く行われている既知の方法であ
る。また、誘導体化されたメンブランフィルターを装填
したマイクロタイタープレートの作製は、ポリプロピレ
ン、ポリビニリデンダイフルオライド、セルロースまた
はグラスフィルター製等のメンブランフィルターを、常
法の化学処理により誘導体化した後、該メンブランフィ
ルターをマイクロタイタープレートのウェルの内径の大
きさにカットし、各ウェル内に装填することにより作製
される。なお、実際にペプチド合成を行う際には、該メ
ンブランフィルター専用のカッターを作製し、目的のマ
イクロタイタープレートのウェルの内径の大きさ及び数
に合わせて一度に該メンブランフィルターのカットを行
い、引き続き該カット片がマイクロタイタープレートの
ウェル内に装填できるようにすることが好ましい。
【０００８】次に、本発明のペプチド合成装置について
詳述する。本発明のペプチド合成装置は、ペプチドライ
ブラリーまたはＤＮＡライブラリー（プライマー）作成
に用いる段階的（ステップワイズ）反応装置であるとと
もに、ペプチド合成に複数のウェルを有するマイクロタ
イタープレートを用いるので、同時に多種品目のペプチ
ドを合成することが可能な多種品目合成装置である。さ
らに本発明のペプチド合成装置は、洗浄・カップリング
・洗浄・脱保護の一連の反応の繰り返しを、気密下およ
び／または不活性ガス気流中で行う手段を有するととも
に試薬デリバリー吸引用のニードルを有する装置であ
る。
詳述する。本発明のペプチド合成装置は、ペプチドライ
ブラリーまたはＤＮＡライブラリー（プライマー）作成
に用いる段階的（ステップワイズ）反応装置であるとと
もに、ペプチド合成に複数のウェルを有するマイクロタ
イタープレートを用いるので、同時に多種品目のペプチ
ドを合成することが可能な多種品目合成装置である。さ
らに本発明のペプチド合成装置は、洗浄・カップリング
・洗浄・脱保護の一連の反応の繰り返しを、気密下およ
び／または不活性ガス気流中で行う手段を有するととも
に試薬デリバリー吸引用のニードルを有する装置であ
る。
【０００９】本発明のペプチド合成装置およびその細部
構造（ニードルの作用とマイクロタイタープレートの関
係）について、図１および図２を用いて以下に説明す
る。図１は、本発明に用いるマイクロタイタープレート
を用いたペプチド合成装置における、各種の試薬ボト
ル、ニードルおよびマイクロタイタープレートの関係を
示す概略構成図である。図２は、誘導体化されたメンブ
ランフィルターを装填したマイクロタイタープレートを
用いたペプチド合成装置における、ニードルとマイクロ
タイタープレート部分の概略構成図である。マイクロタ
イタープレート１の各ウェル２にはメンブランフィルタ
ー３が装填された状態でペプチド合成装置内に載置され
ている。必要に応じた数の各試薬デリバリー吸引用のニ
ードル４は、各ウェル２上にて例えばＴｅｃｈａｎ社製
などのＰｉｐｅｔｉｎｇ Ｒｏｂｂｏｔと同様の動作を
行う。すなわち、各試薬デリバリー吸引用のニードル４
が水平および垂直方向に移動可能となるように配設され
たアーム（特に図示なし）により、各試薬デリバリー吸
引用のニードル４はペプチド合成装置内に保持されてい
る。試薬デリバリー吸引用のニードル４は、原料、試薬
等の反応液をウェル２に吸引注入する、反応液の吸引注
入ライン（特に図示なし）に接続されている。また、気
密下に不活性ガスを流しながら、洗浄・カップリング・
洗浄・脱保護の一連の反応の繰り返しの行われる場所で
あるウェル内に注入するためのガス供給ライン（特に図
示なし）がガス供給部（特に図示なし）よりニードル部
に接続されている。
構造（ニードルの作用とマイクロタイタープレートの関
係）について、図１および図２を用いて以下に説明す
る。図１は、本発明に用いるマイクロタイタープレート
を用いたペプチド合成装置における、各種の試薬ボト
ル、ニードルおよびマイクロタイタープレートの関係を
示す概略構成図である。図２は、誘導体化されたメンブ
ランフィルターを装填したマイクロタイタープレートを
用いたペプチド合成装置における、ニードルとマイクロ
タイタープレート部分の概略構成図である。マイクロタ
イタープレート１の各ウェル２にはメンブランフィルタ
ー３が装填された状態でペプチド合成装置内に載置され
ている。必要に応じた数の各試薬デリバリー吸引用のニ
ードル４は、各ウェル２上にて例えばＴｅｃｈａｎ社製
などのＰｉｐｅｔｉｎｇ Ｒｏｂｂｏｔと同様の動作を
行う。すなわち、各試薬デリバリー吸引用のニードル４
が水平および垂直方向に移動可能となるように配設され
たアーム（特に図示なし）により、各試薬デリバリー吸
引用のニードル４はペプチド合成装置内に保持されてい
る。試薬デリバリー吸引用のニードル４は、原料、試薬
等の反応液をウェル２に吸引注入する、反応液の吸引注
入ライン（特に図示なし）に接続されている。また、気
密下に不活性ガスを流しながら、洗浄・カップリング・
洗浄・脱保護の一連の反応の繰り返しの行われる場所で
あるウェル内に注入するためのガス供給ライン（特に図
示なし）がガス供給部（特に図示なし）よりニードル部
に接続されている。
【００１０】本発明のペプチド合成装置によるペプチド
合成は、誘導体化された内面壁を有するマイクロタイタ
ープレートまたは誘導体化されたメンブランフィルター
を装填したマイクロタイタープレートを用いて行われ
る。図１および図２に示される試薬デリバリー吸引用の
ニードル４から原料、試薬等の反応液を、マイクロタイ
タープレート１の各ウェル２に吸引注入することにより
誘導体化された内面壁またはメンブランフィルター上で
ペプチドの合成が行われる。合成中は反応槽に気密下に
不活性ガスを供給し、洗浄・カップリング・洗浄・脱保
護の一連の反応が必要に応じて繰り返される。該ペプチ
ド溶液は各ウェル中にてそのまま通常の方法で処理する
ことによりクリーベイジが行われ、目的のペプチド溶液
が得られる。該ペプチド溶液は回収後、常法により精製
することが可能である。
合成は、誘導体化された内面壁を有するマイクロタイタ
ープレートまたは誘導体化されたメンブランフィルター
を装填したマイクロタイタープレートを用いて行われ
る。図１および図２に示される試薬デリバリー吸引用の
ニードル４から原料、試薬等の反応液を、マイクロタイ
タープレート１の各ウェル２に吸引注入することにより
誘導体化された内面壁またはメンブランフィルター上で
ペプチドの合成が行われる。合成中は反応槽に気密下に
不活性ガスを供給し、洗浄・カップリング・洗浄・脱保
護の一連の反応が必要に応じて繰り返される。該ペプチ
ド溶液は各ウェル中にてそのまま通常の方法で処理する
ことによりクリーベイジが行われ、目的のペプチド溶液
が得られる。該ペプチド溶液は回収後、常法により精製
することが可能である。
【００１１】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳しく説
明するが、本発明はこれらの実施例等によりなんら限定
されるものではない。 実施例１ 誘導体化された内面壁を有するマイクロタイタープレー
トの作製 マイクロタイタープレートとして、９６ウェルを有する
マイクロタイタープレートを作製した。ポリマーでタイ
タープレートを加工する方法については、例えばポリス
チレンポリエチレングラフト重合体物を用いる方法があ
る（R.H.Berg et al., Peptides 1988, E.Bayer and G.
Jung eds. Walter de Gruyter & Co. Berlin-New York
1989, pp.196-198および R.H.Berg et al., J.Am.Chem.
Soc. 111, 8024-8029, 1989 等の文献に記載されている
)が、本実施例ではこの方法に従ってポリマーを作製
し、タイタープレート型に成形した。さらに、前記文献
に記載の方法に従って、アミノエチル基のアミノ基が表
面に出るようにタイタープレートの内面壁への官能基の
挿入を行い、これらの官能基にリンカー（例えば、ヒド
ロキシフェノキシ酢酸〔hydroxyphenoxyacetic acid
〕) を導入し、ここに第１の保護アミノ酸を導入する
ことにより、誘導体化された内面壁を有するマイクロタ
イタープレートの作製を行った。尚、これらの各手法
は、すべてペプチド合成において広く行われている既知
の方法である。
明するが、本発明はこれらの実施例等によりなんら限定
されるものではない。 実施例１ 誘導体化された内面壁を有するマイクロタイタープレー
トの作製 マイクロタイタープレートとして、９６ウェルを有する
マイクロタイタープレートを作製した。ポリマーでタイ
タープレートを加工する方法については、例えばポリス
チレンポリエチレングラフト重合体物を用いる方法があ
る（R.H.Berg et al., Peptides 1988, E.Bayer and G.
Jung eds. Walter de Gruyter & Co. Berlin-New York
1989, pp.196-198および R.H.Berg et al., J.Am.Chem.
Soc. 111, 8024-8029, 1989 等の文献に記載されている
)が、本実施例ではこの方法に従ってポリマーを作製
し、タイタープレート型に成形した。さらに、前記文献
に記載の方法に従って、アミノエチル基のアミノ基が表
面に出るようにタイタープレートの内面壁への官能基の
挿入を行い、これらの官能基にリンカー（例えば、ヒド
ロキシフェノキシ酢酸〔hydroxyphenoxyacetic acid
〕) を導入し、ここに第１の保護アミノ酸を導入する
ことにより、誘導体化された内面壁を有するマイクロタ
イタープレートの作製を行った。尚、これらの各手法
は、すべてペプチド合成において広く行われている既知
の方法である。
【００１２】実施例２ 誘導体化されたメンブランフィルターを装填したマイク
ロタイタープレートの作製 ポリプロピレンポリエチレンフィルター、コットンの布
地および濾紙（セルロースペーパー）製（厚さ５０〜６
０μｍ程度）のメンブランフィルターを各々、J. Eichl
er et. al., Peptide Research, vol.4, No.5,(1991)
に記載の方法により誘導体化を行なった。すなわち、メ
ンブランフィルターへの官能基の挿入を行い、これらの
官能基（メンブランフィルターがセルロースまたはコッ
トンの場合は水酸基、メンブランフィルターがポリマー
の場合はアミノエチル基）にリンカー（例えば、ヒドロ
キシフェノキシ酢酸) を導入し、ここに第１の保護アミ
ノ酸を導入する。尚、これらの各手法は、すべてペプチ
ド合成において広く行われている既知の方法である。上
記により得られた各メンブランフィルターを、マイクロ
タイタープレート（既成品）のウェルの内径の大きさに
カットし、各ウェル内に装填した。
ロタイタープレートの作製 ポリプロピレンポリエチレンフィルター、コットンの布
地および濾紙（セルロースペーパー）製（厚さ５０〜６
０μｍ程度）のメンブランフィルターを各々、J. Eichl
er et. al., Peptide Research, vol.4, No.5,(1991)
に記載の方法により誘導体化を行なった。すなわち、メ
ンブランフィルターへの官能基の挿入を行い、これらの
官能基（メンブランフィルターがセルロースまたはコッ
トンの場合は水酸基、メンブランフィルターがポリマー
の場合はアミノエチル基）にリンカー（例えば、ヒドロ
キシフェノキシ酢酸) を導入し、ここに第１の保護アミ
ノ酸を導入する。尚、これらの各手法は、すべてペプチ
ド合成において広く行われている既知の方法である。上
記により得られた各メンブランフィルターを、マイクロ
タイタープレート（既成品）のウェルの内径の大きさに
カットし、各ウェル内に装填した。
【００１３】実施例３ ペプチドの合成 実施例２により得られた誘導化メンブランフィルターを
用い、これに対して大過剰の量のペプチド鎖伸長用の各
種保護アミノ酸を、実施例２より得られた、図２に示さ
れるようなメンブランフィルターを装填したマイクロタ
イタープレート１の各ウェル２内に試薬デリバリー吸引
用のニードル４より吸引注入し、別ラインの試薬デリバ
リー吸引用のニードル４よりＰｙＢＯＰ、ＨＯＢｔおよ
びＮＭＭ等の試薬のほか、通常ペプチド合成に用いる試
薬等の反応液を各々必要量（例えば１０倍過剰量）を各
ウェル２内に吸引注入した。さらに別ラインの試薬デリ
バリー吸引用のニードル４より窒素ガス等を移送してウ
ェル内のバブリングを行いつつカップリング反応を行っ
た。さらに一定時間（３０分から６０分程度）ｖｏｌｔ
ｅｘ様の振盪を行い、マイクロタイタープレートを振動
させて攪拌させた。ペプチド鎖伸長反応終了後、各ウェ
ル２内をＤＭＦでよく洗浄し、次に、２％ＤＢＵまたは
３０％ピペリジン溶液を別ラインの試薬デリバリー吸引
用のニードル４より吸引注入し、一定時間（１０分間）
振盪した。前記と同様に洗浄を行い、次の保護アミノ酸
導入のため活性化したアミノ酸を入れて同じ操作を繰り
返し、ペプチド鎖伸長を行った。以上のプロセスは通常
のＦｍｏｃ化学による固相法ペプチド合成法にしたがう
ものである。
用い、これに対して大過剰の量のペプチド鎖伸長用の各
種保護アミノ酸を、実施例２より得られた、図２に示さ
れるようなメンブランフィルターを装填したマイクロタ
イタープレート１の各ウェル２内に試薬デリバリー吸引
用のニードル４より吸引注入し、別ラインの試薬デリバ
リー吸引用のニードル４よりＰｙＢＯＰ、ＨＯＢｔおよ
びＮＭＭ等の試薬のほか、通常ペプチド合成に用いる試
薬等の反応液を各々必要量（例えば１０倍過剰量）を各
ウェル２内に吸引注入した。さらに別ラインの試薬デリ
バリー吸引用のニードル４より窒素ガス等を移送してウ
ェル内のバブリングを行いつつカップリング反応を行っ
た。さらに一定時間（３０分から６０分程度）ｖｏｌｔ
ｅｘ様の振盪を行い、マイクロタイタープレートを振動
させて攪拌させた。ペプチド鎖伸長反応終了後、各ウェ
ル２内をＤＭＦでよく洗浄し、次に、２％ＤＢＵまたは
３０％ピペリジン溶液を別ラインの試薬デリバリー吸引
用のニードル４より吸引注入し、一定時間（１０分間）
振盪した。前記と同様に洗浄を行い、次の保護アミノ酸
導入のため活性化したアミノ酸を入れて同じ操作を繰り
返し、ペプチド鎖伸長を行った。以上のプロセスは通常
のＦｍｏｃ化学による固相法ペプチド合成法にしたがう
ものである。
【００１４】目的とするアミノ酸の順次導入終了後、Ｎ
α位の保護基を同様にして除去し、各ウェル２内をＤＭ
Ｆついでメタノールで充分洗浄し、別ラインの試薬デリ
バリー吸引用のニードル４より不活性ガス（窒素ガスま
たはアルゴンガス等）によるブローでウェルおよびフィ
ルターを乾燥させた。ここにクリーベイジカクテル（Ｔ
ＦＡ−チオアニソール−エタンジオール等のミクスチャ
ー）を加え、各ウェル２内に目的のペプチドのカクテル
溶液を得た。ウェル２内の溶液を別のテストチューブに
移送した。該テストチューブ内の溶液を不活性ガス（窒
素またはアルゴンガス等）によるブローで乾燥させて容
積を減らしてから乾エーテルを添加して遠心操作を行
い、残渣として目的のペプチドを得た。
α位の保護基を同様にして除去し、各ウェル２内をＤＭ
Ｆついでメタノールで充分洗浄し、別ラインの試薬デリ
バリー吸引用のニードル４より不活性ガス（窒素ガスま
たはアルゴンガス等）によるブローでウェルおよびフィ
ルターを乾燥させた。ここにクリーベイジカクテル（Ｔ
ＦＡ−チオアニソール−エタンジオール等のミクスチャ
ー）を加え、各ウェル２内に目的のペプチドのカクテル
溶液を得た。ウェル２内の溶液を別のテストチューブに
移送した。該テストチューブ内の溶液を不活性ガス（窒
素またはアルゴンガス等）によるブローで乾燥させて容
積を減らしてから乾エーテルを添加して遠心操作を行
い、残渣として目的のペプチドを得た。
【００１５】本発明のペプチド合成装置を用いてペプチ
ド合成を行なう場合、各ウェル毎に異種ペプチドの合成
を行うことが可能であり、例えば９６ウェルのマイクロ
タイタープレートを用いる場合、９６種のペプチドの合
成を行うことが可能である。従って、本発明のペプチド
合成装置は少量の迅速で高効率的な同時多種品目固相合
成を低コストで行うことが可能である。また、試薬デリ
バリー吸引用のニードル４は、単数のものを各ウェル間
で移動させて用いてもよいが、ウェル数のニードルを該
装置内に取り付けて用いることも可能である。
ド合成を行なう場合、各ウェル毎に異種ペプチドの合成
を行うことが可能であり、例えば９６ウェルのマイクロ
タイタープレートを用いる場合、９６種のペプチドの合
成を行うことが可能である。従って、本発明のペプチド
合成装置は少量の迅速で高効率的な同時多種品目固相合
成を低コストで行うことが可能である。また、試薬デリ
バリー吸引用のニードル４は、単数のものを各ウェル間
で移動させて用いてもよいが、ウェル数のニードルを該
装置内に取り付けて用いることも可能である。
【００１６】
【発明の効果】本発明のペプチド合成装置は、固相支持
体の洗浄が容易で、かつペプチド合成に用いるための試
薬の使用量が少なく、さらに反応槽中(in situ) でクリ
ーベイジを行うことにより、一連の合成反応に用いる反
応槽からペプチド（またはＤＮＡ）溶液として合成品を
取り出すことが可能である。また、温和な酸に安定なリ
ンカー（Ｐａｍなど）あるいは前述のリンカーを用いる
ことなく、直接ペプチドが固相支持体に結合しているも
のはクリーベイジカクテル処理により、該支持体に結合
したままのペプチドが得られるため、本発明の装置を用
いたペプチド合成により得られたマイクロタイタープレ
ート（またはメンブランフィルター）をそのままイムノ
アッセイなど抗原抗体反応の抗原や酵素の基質として使
用可能となる。さらに、本発明のペプチド合成装置は低
コストで作製することができるうえ、迅速で高効率的
な、低ランニングコストの同時多種品目固相合成を行う
ことが可能である。
体の洗浄が容易で、かつペプチド合成に用いるための試
薬の使用量が少なく、さらに反応槽中(in situ) でクリ
ーベイジを行うことにより、一連の合成反応に用いる反
応槽からペプチド（またはＤＮＡ）溶液として合成品を
取り出すことが可能である。また、温和な酸に安定なリ
ンカー（Ｐａｍなど）あるいは前述のリンカーを用いる
ことなく、直接ペプチドが固相支持体に結合しているも
のはクリーベイジカクテル処理により、該支持体に結合
したままのペプチドが得られるため、本発明の装置を用
いたペプチド合成により得られたマイクロタイタープレ
ート（またはメンブランフィルター）をそのままイムノ
アッセイなど抗原抗体反応の抗原や酵素の基質として使
用可能となる。さらに、本発明のペプチド合成装置は低
コストで作製することができるうえ、迅速で高効率的
な、低ランニングコストの同時多種品目固相合成を行う
ことが可能である。
【図１】図１は、本発明に用いるマイクロタイタープレ
ートを用いたペプチド合成装置における、各種の試薬ボ
トル、ニードルおよびマイクロタイタープレートの関係
を示す概略構成図である。
ートを用いたペプチド合成装置における、各種の試薬ボ
トル、ニードルおよびマイクロタイタープレートの関係
を示す概略構成図である。
【図２】図２は、誘導体化されたメンブランフィルター
を装填したマイクロタイタープレートを用いたペプチド
合成装置における、ニードルとマイクロタイタープレー
ト部分の概略構成図である。
を装填したマイクロタイタープレートを用いたペプチド
合成装置における、ニードルとマイクロタイタープレー
ト部分の概略構成図である。
１ マイクロタイタープレート ２ マイクロタイタープレート中のウェル ３ メンブランフィルター ４ 試薬デリバリー吸引用のニードル
Claims (2)
- 【請求項１】 洗浄・カップリング・洗浄・脱保護の一
連の反応の繰り返しを気密下に不活性ガス気流中で行う
手段を有するとともに試薬デリバリー吸引用のニードル
を有する装置であって、ペプチド合成後のクリーベイジ
に適したリンカーおよびペプチド鎖の伸長の妨げになら
ないようなスペーサーを有する内面壁をもつマイクロタ
イタープレートを用いることを特徴とするペプチド合成
装置。 - 【請求項２】 洗浄・カップリング・洗浄・脱保護の一
連の反応の繰り返しを、気密下および／または不活性ガ
ス気流中で行う手段を有するとともに試薬デリバリー吸
引用のニードルを有する装置であって、ペプチド合成後
のクリーベイジに適したリンカーおよびペプチド鎖の伸
長の妨げにならないようなスペーサーを有するメンブラ
ンフィルターを装填したマイクロタイタープレートを用
いることを特徴とするペプチド合成装置。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2764193A JPH06220084A (ja) | 1993-01-23 | 1993-01-23 | ペプチド合成装置 |
| EP94100864A EP0608779A1 (en) | 1993-01-23 | 1994-01-21 | Apparatus for peptide synthesis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2764193A JPH06220084A (ja) | 1993-01-23 | 1993-01-23 | ペプチド合成装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06220084A true JPH06220084A (ja) | 1994-08-09 |
Family
ID=12226566
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2764193A Pending JPH06220084A (ja) | 1993-01-23 | 1993-01-23 | ペプチド合成装置 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0608779A1 (ja) |
| JP (1) | JPH06220084A (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19844988A1 (de) * | 1998-09-30 | 2000-04-13 | Stefan Seeger | Parallele Festphasensynthese |
| DE10108892B4 (de) * | 2001-02-23 | 2005-08-18 | Graffinity Pharmaceuticals Ag | Synthesevorrichtung und Verfahren zu deren Herstellung |
| DE10131088B4 (de) * | 2001-06-25 | 2005-01-13 | Peptides&Elephants Gmbh | Vorrichtung zur gleichzeitigen multiplen und parallelen Synthese von Peptiden |
| US20090131311A1 (en) | 2004-12-29 | 2009-05-21 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Method for Preventing Formation of Trisulfide Derivatives of Polypeptides |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4794150A (en) * | 1987-03-11 | 1988-12-27 | Samuel Steel | Synthesis of peptide analogs |
| DE8816749U1 (de) * | 1988-08-23 | 1990-05-10 | Boehringer Ingelheim KG, 6507 Ingelheim | Vorrichtung zur vollautomatischen simultanen Synthese mehrerer Polypeptide |
| DE4005518A1 (de) * | 1990-02-22 | 1991-08-29 | Boehringer Ingelheim Kg | Verfahren und vorrichtung zur simultanen synthese mehrerer polypeptide |
| DK55990D0 (da) * | 1990-03-02 | 1990-03-02 | Risoe Forskningscenter | Faste baerematerialer til anvendelse i biosystemer |
-
1993
- 1993-01-23 JP JP2764193A patent/JPH06220084A/ja active Pending
-
1994
- 1994-01-21 EP EP94100864A patent/EP0608779A1/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0608779A1 (en) | 1994-08-03 |
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