JPH06220096A - Ｃｄ４０ｃｒレセプター及びそれに対するリガンド - Google Patents
Ｃｄ４０ｃｒレセプター及びそれに対するリガンドInfo
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 CD40CRと称される、 CD40 Ｂ細胞抗原に対す
るカウンターレセプター、及びCD40蛋白の少なくとも一
部分を含む融合分子を含む、このレセプターに対する可
溶性リガンド類を提供する。これは、少なくとも部分的
には、可溶性のCD40／免疫グロブリン融合蛋白がヘルパ
ーＴ細胞膜上の新規の39kD蛋白レセプターに結合するこ
とにより、ヘルパーＴ細胞仲介性Ｂ細胞活性化を阻害す
ることができたという発見に基づいている。 【効果】 アレルギー又は自己免疫疾患の治療において
特に有用となりうる。
るカウンターレセプター、及びCD40蛋白の少なくとも一
部分を含む融合分子を含む、このレセプターに対する可
溶性リガンド類を提供する。これは、少なくとも部分的
には、可溶性のCD40／免疫グロブリン融合蛋白がヘルパ
ーＴ細胞膜上の新規の39kD蛋白レセプターに結合するこ
とにより、ヘルパーＴ細胞仲介性Ｂ細胞活性化を阻害す
ることができたという発見に基づいている。 【効果】 アレルギー又は自己免疫疾患の治療において
特に有用となりうる。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、CD40CRと称される、 C
D40 Ｂ細胞抗原に対するカウンターレセプター、及びCD
40蛋白の少なくとも一部分を含む融合分子を含む、この
レセプターに対する可溶性リガンド類に関する。これ
は、少なくとも部分的には、可溶性のCD40／免疫グロブ
リン融合蛋白がヘルパーＴ細胞膜上の新規の39kD蛋白レ
セプターに結合することにより、ヘルパーＴ細胞仲介性
Ｂ細胞活性化を阻害することができたという発見に基づ
いている。本発明は、実質的に精製されたCD40CRレセプ
ター；CD40蛋白の少なくとも一部分を含む融合分子と共
に抗体も含む、CD40CRの可溶性リガンド；及びアレルギ
ー又は自己免疫疾患の治療において特に有用となりう
る、Ｂ細胞活性化の調節方法を提供する。
D40 Ｂ細胞抗原に対するカウンターレセプター、及びCD
40蛋白の少なくとも一部分を含む融合分子を含む、この
レセプターに対する可溶性リガンド類に関する。これ
は、少なくとも部分的には、可溶性のCD40／免疫グロブ
リン融合蛋白がヘルパーＴ細胞膜上の新規の39kD蛋白レ
セプターに結合することにより、ヘルパーＴ細胞仲介性
Ｂ細胞活性化を阻害することができたという発見に基づ
いている。本発明は、実質的に精製されたCD40CRレセプ
ター；CD40蛋白の少なくとも一部分を含む融合分子と共
に抗体も含む、CD40CRの可溶性リガンド；及びアレルギ
ー又は自己免疫疾患の治療において特に有用となりう
る、Ｂ細胞活性化の調節方法を提供する。
【０００２】
【従来の技術】ミッチソン、ベナセラフ及びラフ（Mitc
hison, Benacerraf and Raff）による研究は初めて、 T
h 及びＢ細胞の間の物理的相互作用が体液性の免疫応答
に欠かせないものであることを示唆した。その後の研究
は、 Th がクラスIIの主要組織適合遺伝子複合体(MHC)
に適合性のある、抗原提示Ｂ細胞と物理的共役体を形成
すること（ヴィテッタら（Vitetta et al.) 、イミュノ
ロジカル・レビュー、99巻、第193-239 頁、1987年）及
び Th に応答するのはこれらの共役体中のＢ細胞である
こと（バートレットら（Bartlett et al.)、ジャーナル
・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 143巻、第17
45-1754 頁、1989年）を証明した。 Th 由来のリンフォ
カインがＢ細胞に対して強力な成長及び分化作用を及ぼ
すという発見に伴い、活性化 Th により近位放出された
可溶性因子が相互作用性Ｂ細胞の活性化を媒介すること
が提唱された。しかしながら、分子クローン化されたリ
ンフォカイン類のいずれも、単独又は組み合わせても、
Ｂ細胞周期エントリーを誘導する能力は現さなかった。
可溶性因子とは異なり、活性化 Th からの形質膜分画は
Ｂ細胞周期エントリーを誘導した（ホジキンら（Hodgki
n et al.) 、ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. I
mmunol.)、 145巻、第2025-2034 頁、1990年；ノエルら
（Noelle et al.)、ジャーナル・オブ・イミュノロジィ
（J. Immunol.)、 146巻、第1118-1124 頁、1991年）。
活性化 Th からの精製形質膜分画を用いた研究は、活性
化 Th の膜上に発現された蛋白が体液性免疫の開始の原
因となることを示唆した（ノエルら（Noelle et al.)、
ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 1
46巻、第1118-1124 頁、1991年；バートレットら（Bart
lett et al.)、ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（J.
Immunol.)、 145巻、第3956-3962 頁、1990年）。
hison, Benacerraf and Raff）による研究は初めて、 T
h 及びＢ細胞の間の物理的相互作用が体液性の免疫応答
に欠かせないものであることを示唆した。その後の研究
は、 Th がクラスIIの主要組織適合遺伝子複合体(MHC)
に適合性のある、抗原提示Ｂ細胞と物理的共役体を形成
すること（ヴィテッタら（Vitetta et al.) 、イミュノ
ロジカル・レビュー、99巻、第193-239 頁、1987年）及
び Th に応答するのはこれらの共役体中のＢ細胞である
こと（バートレットら（Bartlett et al.)、ジャーナル
・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 143巻、第17
45-1754 頁、1989年）を証明した。 Th 由来のリンフォ
カインがＢ細胞に対して強力な成長及び分化作用を及ぼ
すという発見に伴い、活性化 Th により近位放出された
可溶性因子が相互作用性Ｂ細胞の活性化を媒介すること
が提唱された。しかしながら、分子クローン化されたリ
ンフォカイン類のいずれも、単独又は組み合わせても、
Ｂ細胞周期エントリーを誘導する能力は現さなかった。
可溶性因子とは異なり、活性化 Th からの形質膜分画は
Ｂ細胞周期エントリーを誘導した（ホジキンら（Hodgki
n et al.) 、ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. I
mmunol.)、 145巻、第2025-2034 頁、1990年；ノエルら
（Noelle et al.)、ジャーナル・オブ・イミュノロジィ
（J. Immunol.)、 146巻、第1118-1124 頁、1991年）。
活性化 Th からの精製形質膜分画を用いた研究は、活性
化 Th の膜上に発現された蛋白が体液性免疫の開始の原
因となることを示唆した（ノエルら（Noelle et al.)、
ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 1
46巻、第1118-1124 頁、1991年；バートレットら（Bart
lett et al.)、ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（J.
Immunol.)、 145巻、第3956-3962 頁、1990年）。
【０００３】活性化 Th からの精製形質膜（PMAct ) は
この効果器の機能を調べるために用いられてきた（ホジ
キンら（Hodgkin et al.) 、ジャーナル・オブ・イミュ
ノロジィ（J. Immunol.)、 145巻、第2025-2034 頁、19
90年；ノエルら（Noelle etal.)、ジャーナル・オブ・
イミュノロジィ（J. Immunol.)、 146巻、第1118-1124
頁、1991年）。活性化 Th からのPMAct は、抗原非特異
的クラスII非制限様式でＢ細胞周期エントリーを誘導す
る活性を発現したが、休眠 Th からのもの(PM rest) は
しなかった。さらに、PMAct により発現される活性は 4
-6時間の活性化時間、すなわち新たな RNA合成を要し、
天然の蛋白であることが示された（バートレットら（Ba
rtlett et al.)、ジャーナル・オブ・イミュノロジィ
（J. Immunol.)、 145巻、第3956-3962 頁、1990年）。
この効果器の機能を調べるために用いられてきた（ホジ
キンら（Hodgkin et al.) 、ジャーナル・オブ・イミュ
ノロジィ（J. Immunol.)、 145巻、第2025-2034 頁、19
90年；ノエルら（Noelle etal.)、ジャーナル・オブ・
イミュノロジィ（J. Immunol.)、 146巻、第1118-1124
頁、1991年）。活性化 Th からのPMAct は、抗原非特異
的クラスII非制限様式でＢ細胞周期エントリーを誘導す
る活性を発現したが、休眠 Th からのもの(PM rest) は
しなかった。さらに、PMAct により発現される活性は 4
-6時間の活性化時間、すなわち新たな RNA合成を要し、
天然の蛋白であることが示された（バートレットら（Ba
rtlett et al.)、ジャーナル・オブ・イミュノロジィ
（J. Immunol.)、 145巻、第3956-3962 頁、1990年）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、CD40CRと称
される、 CD40 Ｂ細胞抗原に対するカウンターレセプタ
ー、及びCD40蛋白の少なくとも一部分を含む融合分子を
含む、このレセプターに対する可溶性リガンド類に関す
る。これは、少なくとも部分的には、可溶性のCD40／免
疫グロブリン融合蛋白がヘルパーＴ細胞膜上の新規の39
kDレセプター蛋白（CD40カウンターレセプターとして
“CD40CR" と称する）に結合することにより、ヘルパー
Ｔ細胞仲介性Ｂ細胞活性化を阻害することができたとい
う発見、及び、 MR1と称される、この39kDレセプターを
指向するモノクローナル抗体がＢ細胞のヘルパーＴ細胞
仲介性活性化を阻害することができたという発見に基づ
いている。
される、 CD40 Ｂ細胞抗原に対するカウンターレセプタ
ー、及びCD40蛋白の少なくとも一部分を含む融合分子を
含む、このレセプターに対する可溶性リガンド類に関す
る。これは、少なくとも部分的には、可溶性のCD40／免
疫グロブリン融合蛋白がヘルパーＴ細胞膜上の新規の39
kDレセプター蛋白（CD40カウンターレセプターとして
“CD40CR" と称する）に結合することにより、ヘルパー
Ｔ細胞仲介性Ｂ細胞活性化を阻害することができたとい
う発見、及び、 MR1と称される、この39kDレセプターを
指向するモノクローナル抗体がＢ細胞のヘルパーＴ細胞
仲介性活性化を阻害することができたという発見に基づ
いている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、実質的に精製
されたCD40CRレセプター；CD40蛋白の少なくとも一部分
を含む融合分子と共に抗体も含む、CD40CRの可溶性リガ
ンド；及びＢ細胞活性化の調節方法を提供する。本発明
の特定の態様において、対象におけるＢ細胞活性化を、
該対象のヘルパーＴ細胞をCD40CRの可溶性リガンドの有
効量に接触させることにより阻害することができる。こ
のようなＢ細胞活性化の阻害は、アレルギー又は自己免
疫疾患の治療において特に有用となりうる。
されたCD40CRレセプター；CD40蛋白の少なくとも一部分
を含む融合分子と共に抗体も含む、CD40CRの可溶性リガ
ンド；及びＢ細胞活性化の調節方法を提供する。本発明
の特定の態様において、対象におけるＢ細胞活性化を、
該対象のヘルパーＴ細胞をCD40CRの可溶性リガンドの有
効量に接触させることにより阻害することができる。こ
のようなＢ細胞活性化の阻害は、アレルギー又は自己免
疫疾患の治療において特に有用となりうる。
【０００６】本発明の一つの利点は、それが抗原特異性
のない免疫応答の局面に介在しうることにある。アレル
ギーに対する現行の治療法の多くは特定の抗原類に対す
る脱感作を含み、感受性に関連した抗原を同定するため
に各患者を検査する必要がある。実際的な問題として、
可能性のあるアレルゲンのそれぞれ及び全てに対する患
者の反応を網羅的に分析することは事実上不可能であ
る。さらに、殆どの自己免疫状態において原因となる抗
原は一般に未知であるか、又は該疾患プロセスに無関係
なことさえある。抗原非特異的 CD40/CD40CR相互作用に
関する本発明は、アレルギー又は自己免疫に関連した抗
原の特性付けの必要性がなくて済む。従って、本発明は
例えば花粉症或いはプロカインアミド誘発性狼瘡におい
てのような免疫原が分かっていない、又は免疫原が複数
の成分を有するアレルギー状態の治療において特に有利
に使用することができる。本発明は、例えばアナフィラ
キシーの治療のような免疫活性化の急性治療においても
有用となりうる。
のない免疫応答の局面に介在しうることにある。アレル
ギーに対する現行の治療法の多くは特定の抗原類に対す
る脱感作を含み、感受性に関連した抗原を同定するため
に各患者を検査する必要がある。実際的な問題として、
可能性のあるアレルゲンのそれぞれ及び全てに対する患
者の反応を網羅的に分析することは事実上不可能であ
る。さらに、殆どの自己免疫状態において原因となる抗
原は一般に未知であるか、又は該疾患プロセスに無関係
なことさえある。抗原非特異的 CD40/CD40CR相互作用に
関する本発明は、アレルギー又は自己免疫に関連した抗
原の特性付けの必要性がなくて済む。従って、本発明は
例えば花粉症或いはプロカインアミド誘発性狼瘡におい
てのような免疫原が分かっていない、又は免疫原が複数
の成分を有するアレルギー状態の治療において特に有利
に使用することができる。本発明は、例えばアナフィラ
キシーの治療のような免疫活性化の急性治療においても
有用となりうる。
【０００７】本明細書中で用いる略号は以下の意味を有
する。 Ig 免疫グロブリン mab モノクローナル抗体 PM Act 活性化ヘルパーＴ細胞から調製した形質膜 PM rest 休眠ヘルパーＴ細胞から調製した形質膜 PAGE ポリアクリルアミドゲル電気泳動 rIL4 組み換えインターロイキン 4 rIL5 組み換えインターロイキン 5 SN 上清 Th ヘルパーＴ細胞 Th 1 D 1.6 の I-Ad - 制限式ウサギ免疫グロブ
リン特異性クローンを起源とする。
する。 Ig 免疫グロブリン mab モノクローナル抗体 PM Act 活性化ヘルパーＴ細胞から調製した形質膜 PM rest 休眠ヘルパーＴ細胞から調製した形質膜 PAGE ポリアクリルアミドゲル電気泳動 rIL4 組み換えインターロイキン 4 rIL5 組み換えインターロイキン 5 SN 上清 Th ヘルパーＴ細胞 Th 1 D 1.6 の I-Ad - 制限式ウサギ免疫グロブ
リン特異性クローンを起源とする。
【０００８】添付の図は以下を示す。 図１．PMAct によるＢ細胞 RNA合成の誘導におけるモノ
クローナル抗体及びCD40-Ig の作用。 パネルＡ．休眠Ｂ細胞を Th 1 からのPM rest 又はPM
Actと共に培養した。25μg/mlの抗-CD4、抗-LFA-1或い
は抗-ICAM-1 、又はこれらのそれぞれの組合せ（各25μ
g/ml）をPM Actの入ったウェルに加え、Ｂ細胞 RNA合成
を[3H]- ウリジンの取り込みによって測定した。Ｂ細胞
RNA合成は、培養開始後42時間から48時間までを評価し
た。表示した結果は３培養の算術平均 +/- s.d. であ
り、そのような５実験を表している。
クローナル抗体及びCD40-Ig の作用。 パネルＡ．休眠Ｂ細胞を Th 1 からのPM rest 又はPM
Actと共に培養した。25μg/mlの抗-CD4、抗-LFA-1或い
は抗-ICAM-1 、又はこれらのそれぞれの組合せ（各25μ
g/ml）をPM Actの入ったウェルに加え、Ｂ細胞 RNA合成
を[3H]- ウリジンの取り込みによって測定した。Ｂ細胞
RNA合成は、培養開始後42時間から48時間までを評価し
た。表示した結果は３培養の算術平均 +/- s.d. であ
り、そのような５実験を表している。
【０００９】パネルＢ．休眠Ｂ細胞を Th 1(●、▲）又
は Th 2(□) からのPM Actと共に培養した。 Th 1 PM
Actを含む培養（●、▲）に、CD40-Ig （▲）又は対照
蛋白であるCD7E-Ig(●）を量を増やしながら加えた。 T
h 2 PM Actを含む培養（□) には、CD40-Ig を量を増や
しながら加えた。Ｂ細胞 RNA合成は、培養開始後42時間
から48時間までを評価した。表示した結果は３培養の算
術平均 +/- s.d. であり、そのような３実験を表してい
る。
は Th 2(□) からのPM Actと共に培養した。 Th 1 PM
Actを含む培養（●、▲）に、CD40-Ig （▲）又は対照
蛋白であるCD7E-Ig(●）を量を増やしながら加えた。 T
h 2 PM Actを含む培養（□) には、CD40-Ig を量を増や
しながら加えた。Ｂ細胞 RNA合成は、培養開始後42時間
から48時間までを評価した。表示した結果は３培養の算
術平均 +/- s.d. であり、そのような３実験を表してい
る。
【００１０】パネルＣ．休眠Ｂ細胞を LPS（50μg/ml）
又はPM Actと共に培養した。培養に、CD40-Ig （25μg/
ml；斜線）又はCD7E-Ig(25μg/ml；黒色）を加えた。 R
NA合成は、パネルＡに述べたように測定した。表示した
結果は３培養の算術平均 +/-s.d. であり、そのような
３実験を表している。 図２．CD40-Ig はＢ細胞分化及び増殖を阻害した。
又はPM Actと共に培養した。培養に、CD40-Ig （25μg/
ml；斜線）又はCD7E-Ig(25μg/ml；黒色）を加えた。 R
NA合成は、パネルＡに述べたように測定した。表示した
結果は３培養の算術平均 +/-s.d. であり、そのような
３実験を表している。 図２．CD40-Ig はＢ細胞分化及び増殖を阻害した。
【００１１】パネルＡ．休眠Ｂ細胞をPM Act、rIL4 (10
ng/ml)及びrIL5 (5ng/ml) と共に培養した。培養開始
時、又は培養開始後１、２或いは３日目に、CD40-Ig 又
はCD7E-Ig(25μg/ml）を加えた。培養６日目に、個々の
ウェルからSNを採収し、ノエルら（Noelle et al.)、ジ
ャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 146
巻、第1118-1124 頁、1991年、に述べられているよう
に、抗アイソタイプ特異性ELISAを用いて IgM（■）及
び IgG1(●）について定量した。PM Act、rIL4及びrIL5
の存在下で（CD40-Ig は加えていない）、IgM 及び IgG
1 の濃度はそれぞれ4.6μg/ml及び 126 ng/mlであっ
た。０日目にCD7E-Ig(25μg/ml）を加えた培養は、それ
ぞれ 2.4μg/ml及び 89 ng/ml のIgM 及び IgG1 を生産
した。rIL4及びrIL5の非存在下では、IgM 又は IgG1 は
検出されなかった。結果は、そのような３実験を表して
いる。
ng/ml)及びrIL5 (5ng/ml) と共に培養した。培養開始
時、又は培養開始後１、２或いは３日目に、CD40-Ig 又
はCD7E-Ig(25μg/ml）を加えた。培養６日目に、個々の
ウェルからSNを採収し、ノエルら（Noelle et al.)、ジ
ャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 146
巻、第1118-1124 頁、1991年、に述べられているよう
に、抗アイソタイプ特異性ELISAを用いて IgM（■）及
び IgG1(●）について定量した。PM Act、rIL4及びrIL5
の存在下で（CD40-Ig は加えていない）、IgM 及び IgG
1 の濃度はそれぞれ4.6μg/ml及び 126 ng/mlであっ
た。０日目にCD7E-Ig(25μg/ml）を加えた培養は、それ
ぞれ 2.4μg/ml及び 89 ng/ml のIgM 及び IgG1 を生産
した。rIL4及びrIL5の非存在下では、IgM 又は IgG1 は
検出されなかった。結果は、そのような３実験を表して
いる。
【００１２】パネルＢ． Th 1 を抗-CD3と共に16時間休
眠又は活性化させ、放射線を照射し、IL4 (10ng/ml) の
存在下で休眠Ｂ細胞（４×104/培養）と共に培養した
（１×104/ウェル）。０ないし25μg/mlのCD40-Ig(▲）
又はCD7E-Ig(●）を培養に加えた。培養開始後66から72
時間に、ウェルを 1.0μCiの[3H]- チミジンでパルス
し、採収した。点線は、Ｂ細胞の休眠 Th に対する応答
を示す。表示した結果は３培養の算術平均 +/- s.d. で
あり、そのような２実験を表している。
眠又は活性化させ、放射線を照射し、IL4 (10ng/ml) の
存在下で休眠Ｂ細胞（４×104/培養）と共に培養した
（１×104/ウェル）。０ないし25μg/mlのCD40-Ig(▲）
又はCD7E-Ig(●）を培養に加えた。培養開始後66から72
時間に、ウェルを 1.0μCiの[3H]- チミジンでパルス
し、採収した。点線は、Ｂ細胞の休眠 Th に対する応答
を示す。表示した結果は３培養の算術平均 +/- s.d. で
あり、そのような２実験を表している。
【００１３】図３．CD40-Ig は活性化 Th 上に発現され
た分子を検出したが、休眠 Th 上には検出しなかった。
休眠 Th 及び活性化 Th を採収し、融合蛋白と共に20分
間、４℃でインキュベートした後、 FITC-共役化ヤギ抗
-hIgG(25μg/ml）を加えてインキュベートした。陽性の
細胞及び MFIのパーセントを、最低 5000 細胞／サンプ
ルの分析により測定した。結果は、そのような６実験を
表している。CD40-Ig結合はグラフ中の黒い部分により
示されている。
た分子を検出したが、休眠 Th 上には検出しなかった。
休眠 Th 及び活性化 Th を採収し、融合蛋白と共に20分
間、４℃でインキュベートした後、 FITC-共役化ヤギ抗
-hIgG(25μg/ml）を加えてインキュベートした。陽性の
細胞及び MFIのパーセントを、最低 5000 細胞／サンプ
ルの分析により測定した。結果は、そのような６実験を
表している。CD40-Ig結合はグラフ中の黒い部分により
示されている。
【００１４】図４．CD40-Ig は活性化 Th 1 のライセー
トから 39 kD蛋白を免疫沈降させた。 Th 1 を不溶化さ
れた抗-CD3と共に16時間、休眠又は活性化させた。休眠
又は活性化 Th からの[35S]-ラベル化蛋白を、精製抗体
又は融合蛋白 (1-10μ）で免疫沈降させた。該ゲル結果
はそのような３実験を表している。 図５．誘導された 39 kDの Th 膜蛋白に特異的なモノク
ローナル抗体 (mab)は、PMAct によるＢ細胞 RNA合成の
誘導を阻害した。休眠Ｂ細胞及びPMAct を、10μg/mlの
抗- α／β、抗-CD3、CD40-Ig 又は MR1のそれぞれと共
に培養した。 RNA合成を図１で述べたように測定した。
表示した結果は３培養の算術平均 +/- s.d. であり、そ
のような３実験を表している。
トから 39 kD蛋白を免疫沈降させた。 Th 1 を不溶化さ
れた抗-CD3と共に16時間、休眠又は活性化させた。休眠
又は活性化 Th からの[35S]-ラベル化蛋白を、精製抗体
又は融合蛋白 (1-10μ）で免疫沈降させた。該ゲル結果
はそのような３実験を表している。 図５．誘導された 39 kDの Th 膜蛋白に特異的なモノク
ローナル抗体 (mab)は、PMAct によるＢ細胞 RNA合成の
誘導を阻害した。休眠Ｂ細胞及びPMAct を、10μg/mlの
抗- α／β、抗-CD3、CD40-Ig 又は MR1のそれぞれと共
に培養した。 RNA合成を図１で述べたように測定した。
表示した結果は３培養の算術平均 +/- s.d. であり、そ
のような３実験を表している。
【００１５】図６． MR1及びCD40-Ig は活性化 Th 上に
発現された同じ分子を認識した。 パネルＡ．活性化 Th を MR1又は対照 Ig で蛍光染色し
た。CD40-Ig 及び MR1が活性化 Th への結合において競
合するのかどうかを評価するために、徐々に高濃度にし
たMR1 又は対照となるハムスターIg（抗- α／β TCR)
を抗-CD40 (20μg/ml）と共に加えた。４℃で20分間イ
ンキュベートした後、該サンプルを洗浄し、 FITC-共役
化mab 抗- ヒトIgG1と共にインキュベートした。結果
は、そのような３実験を表している。
発現された同じ分子を認識した。 パネルＡ．活性化 Th を MR1又は対照 Ig で蛍光染色し
た。CD40-Ig 及び MR1が活性化 Th への結合において競
合するのかどうかを評価するために、徐々に高濃度にし
たMR1 又は対照となるハムスターIg（抗- α／β TCR)
を抗-CD40 (20μg/ml）と共に加えた。４℃で20分間イ
ンキュベートした後、該サンプルを洗浄し、 FITC-共役
化mab 抗- ヒトIgG1と共にインキュベートした。結果
は、そのような３実験を表している。
【００１６】パネルＢ．[35S]-メチオニンラベル化活性
化 Th からの蛋白をMR1 (10 μg/サンプル）又はCD40-I
g (10 μg/サンプル）と免疫沈降させ、PAGE及びフルオ
ログラフィーにより分析した。結果は、そのような２実
験を表している。 図７．CD40-Ig のヒト細胞株への結合。種々のヒトＴ細
胞株にビオチンラベル化CD40-Ig を与え、流動血球計算
法により結合を評価した。
化 Th からの蛋白をMR1 (10 μg/サンプル）又はCD40-I
g (10 μg/サンプル）と免疫沈降させ、PAGE及びフルオ
ログラフィーにより分析した。結果は、そのような２実
験を表している。 図７．CD40-Ig のヒト細胞株への結合。種々のヒトＴ細
胞株にビオチンラベル化CD40-Ig を与え、流動血球計算
法により結合を評価した。
【００１７】図８及び図９．スタメンコヴィックら（St
amenkovic et al.) 、EMBOジャーナル（EMBO J.)、８
巻、第1403-1410 頁、1989年、による、CD40 cDNA のヌ
クレオチド配列。膜内外領域を下線で示す。 図10．CD40-Ig を発現させるために用いることができる
プラスミドの概略図。ΔCD40の融合部位のアミノ酸配列
をCD40の図解部分の下に示す。
amenkovic et al.) 、EMBOジャーナル（EMBO J.)、８
巻、第1403-1410 頁、1989年、による、CD40 cDNA のヌ
クレオチド配列。膜内外領域を下線で示す。 図10．CD40-Ig を発現させるために用いることができる
プラスミドの概略図。ΔCD40の融合部位のアミノ酸配列
をCD40の図解部分の下に示す。
【００１８】本発明は、実質的に精製されたCD40CRレセ
プター；CD40を含む融合分子と共に抗体も含む、CD40CR
の可溶性リガンド；及びＢ細胞活性化の調節方法を提供
する。開示を明瞭にするために、本発明の詳細な説明を
以下の章に分けて述べるが、限定するためではない： （ｉ）CD40CRに結合するリガンド； （ii）CD40CRの特性決定に用いる方法； (iii）精製CD40CRの調製； （iv）CD40CRに結合するリガンドの使用；及び （ｖ）CD40CRの使用。 （１）CD40CRに結合するリガンド 本発明は、(i) CD40蛋白の少なくとも一部分を含む融合
分子、及び(ii)抗体又は抗体断片、を含むCD40CRの可溶
性リガンドを提供する。
プター；CD40を含む融合分子と共に抗体も含む、CD40CR
の可溶性リガンド；及びＢ細胞活性化の調節方法を提供
する。開示を明瞭にするために、本発明の詳細な説明を
以下の章に分けて述べるが、限定するためではない： （ｉ）CD40CRに結合するリガンド； （ii）CD40CRの特性決定に用いる方法； (iii）精製CD40CRの調製； （iv）CD40CRに結合するリガンドの使用；及び （ｖ）CD40CRの使用。 （１）CD40CRに結合するリガンド 本発明は、(i) CD40蛋白の少なくとも一部分を含む融合
分子、及び(ii)抗体又は抗体断片、を含むCD40CRの可溶
性リガンドを提供する。
【００１９】ここで用いる“可溶性”という用語は、本
発明のリガンドが永久に細胞形質膜に結合しているわけ
ではないことを示している。本発明の可溶性リガンド
は、しかしながら、脂質、蛋白、或いは炭水化物分子を
含む非細胞性固形支持体、ビーズ、小胞、磁気粒子、繊
維等に付着させてもよく、又は移植体或いは小胞内に封
入してもよい。
発明のリガンドが永久に細胞形質膜に結合しているわけ
ではないことを示している。本発明の可溶性リガンド
は、しかしながら、脂質、蛋白、或いは炭水化物分子を
含む非細胞性固形支持体、ビーズ、小胞、磁気粒子、繊
維等に付着させてもよく、又は移植体或いは小胞内に封
入してもよい。
【００２０】このようなリガンドのCD40CRに結合する能
力は、該リガンドが CD40-Ig（以下参照）又は MR1（以
下参照）と同じ蛋白に結合することを証明することによ
り確認できる。本発明のリガンドは適当な担体とともに
医薬用組成物中に含まれてもよい。 (1.1) 融合分子 本発明は、CD40CRのリガンドである可溶性の融合分子を
提供する。このような融合分子は第二の分子に結合した
CD40蛋白の少なくとも一部分を含む。CD40の該部分は、
好ましくはCD40膜内外ドメインを欠く。本発明により用
いてもよいCD40蛋白の部分は、CD40CRに結合できる、例
えば、 MR1又は CD40-Igと同じ蛋白に結合することを示
すことができる部分のような、いずれの部分でもよいと
定義される。
力は、該リガンドが CD40-Ig（以下参照）又は MR1（以
下参照）と同じ蛋白に結合することを証明することによ
り確認できる。本発明のリガンドは適当な担体とともに
医薬用組成物中に含まれてもよい。 (1.1) 融合分子 本発明は、CD40CRのリガンドである可溶性の融合分子を
提供する。このような融合分子は第二の分子に結合した
CD40蛋白の少なくとも一部分を含む。CD40の該部分は、
好ましくはCD40膜内外ドメインを欠く。本発明により用
いてもよいCD40蛋白の部分は、CD40CRに結合できる、例
えば、 MR1又は CD40-Igと同じ蛋白に結合することを示
すことができる部分のような、いずれの部分でもよいと
定義される。
【００２１】使用してもよい第二の分子にはペプチド類
及び蛋白類、脂質類、及び炭水化物類が含まれ、本発明
の好ましい態様においては、免疫グロブリン分子或いは
その部分（Fv、Fab 、F(ab′)2、又は Fab′断片等）或
いは CD8、又は B7 のような他の付着分子でもよい。該
第二分子は非ヒト或いはヒト原料のいずれから誘導して
もよく、キメラ性でもよい。該第二分子はさらに、酵
素、トキシン、成長因子、リンフォカイン、抗増殖剤、
アルキル化剤、代謝拮抗物質、抗生剤、ビンカアルカロ
イド、プラチナ配位化合物、放射性同位元素、又は蛍光
化合物でもよい。
及び蛋白類、脂質類、及び炭水化物類が含まれ、本発明
の好ましい態様においては、免疫グロブリン分子或いは
その部分（Fv、Fab 、F(ab′)2、又は Fab′断片等）或
いは CD8、又は B7 のような他の付着分子でもよい。該
第二分子は非ヒト或いはヒト原料のいずれから誘導して
もよく、キメラ性でもよい。該第二分子はさらに、酵
素、トキシン、成長因子、リンフォカイン、抗増殖剤、
アルキル化剤、代謝拮抗物質、抗生剤、ビンカアルカロ
イド、プラチナ配位化合物、放射性同位元素、又は蛍光
化合物でもよい。
【００２２】本発明の融合分子は、化学合成、又は好ま
しくは組み換えDNA 法によって製造してもよい。例え
ば、CD40蛋白の少なくとも一部分をコード化している核
酸配列は、適当な発現ベクター中で第二分子をコード化
している核酸配列に結合していてもよく、その後、酵
母、バキュロウィルス、又は交差遺伝動物を含む哺乳動
物発現系のような、原核生物又は、好ましくは、真核生
物発現系中に発現されてもよい。
しくは組み換えDNA 法によって製造してもよい。例え
ば、CD40蛋白の少なくとも一部分をコード化している核
酸配列は、適当な発現ベクター中で第二分子をコード化
している核酸配列に結合していてもよく、その後、酵
母、バキュロウィルス、又は交差遺伝動物を含む哺乳動
物発現系のような、原核生物又は、好ましくは、真核生
物発現系中に発現されてもよい。
【００２３】或いは、CD40蛋白の少なくとも一部分を組
み換えDNA 技術を用いて発現させ、その後第二分子に化
学的に共役させてもよい。CD40を含む融合分子は、準備
された混合液から、電気泳動法又は、CD40或いは該第二
分子のいずれかに結合するリガンドを用いるアフィニテ
ィークロマトグラフィーを用いて精製してもよい。CD40
に結合するリガンドには、HB9110の受入れ番号を持ち、
アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託
されているハイブリドーマによって製造されるようなG2
8-5 、及び CD40CR 等の抗-CD40 抗体類が含まれるが、
それらに限定されるものではなく、以下の章（２）及び
（３）でより十分に述べる。該第二分子が免疫グロブリ
ン又は免疫グロブリン断片である場合は、抗−免疫グロ
ブリン抗体を含むアフィニティーカラムを使用してもよ
い；該第二分子が Fc 断片を含む場合は、プロテインＡ
カラムを使用してもよい。
み換えDNA 技術を用いて発現させ、その後第二分子に化
学的に共役させてもよい。CD40を含む融合分子は、準備
された混合液から、電気泳動法又は、CD40或いは該第二
分子のいずれかに結合するリガンドを用いるアフィニテ
ィークロマトグラフィーを用いて精製してもよい。CD40
に結合するリガンドには、HB9110の受入れ番号を持ち、
アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託
されているハイブリドーマによって製造されるようなG2
8-5 、及び CD40CR 等の抗-CD40 抗体類が含まれるが、
それらに限定されるものではなく、以下の章（２）及び
（３）でより十分に述べる。該第二分子が免疫グロブリ
ン又は免疫グロブリン断片である場合は、抗−免疫グロ
ブリン抗体を含むアフィニティーカラムを使用してもよ
い；該第二分子が Fc 断片を含む場合は、プロテインＡ
カラムを使用してもよい。
【００２４】本発明の好ましい態様により、CD40の一部
分を、膜内外ドメインより上流で切断されたCD40蛋白を
コード化する核酸配列を用いて製造してもよい。そのよ
うな核酸配列は、スタメンコヴィックら（Stamenkovic
et al.) 、EMBOジャーナル（EMBO J.)、８巻、第1403-1
410 頁、1989年、に述べられているような、CD40抗原を
コード化しているcDNAを含むプラスミドを、PstI (P)及
びSau 3A (S3) 制限酵素で切断することにより製造して
もよい。できた P/S3 断片を、P 及びBam HI（B)で切断
した同じプラスミド中にサブクローニングして切断CD40
遺伝子を製造してもよい（図８及び９参照）。
分を、膜内外ドメインより上流で切断されたCD40蛋白を
コード化する核酸配列を用いて製造してもよい。そのよ
うな核酸配列は、スタメンコヴィックら（Stamenkovic
et al.) 、EMBOジャーナル（EMBO J.)、８巻、第1403-1
410 頁、1989年、に述べられているような、CD40抗原を
コード化しているcDNAを含むプラスミドを、PstI (P)及
びSau 3A (S3) 制限酵素で切断することにより製造して
もよい。できた P/S3 断片を、P 及びBam HI（B)で切断
した同じプラスミド中にサブクローニングして切断CD40
遺伝子を製造してもよい（図８及び９参照）。
【００２５】本発明の特定の非限定的な態様において、
免疫グロブリン配列と共にCD40の少なくとも一部分を含
むリガンドを製造するのに用いられる発現ベクターは、
好ましくは、ウィルス由来の ori領域、細菌性 ori領
域、細菌性選択可能マーカー及び、CD40の少なくとも一
部分をコード化する DNA配列をサブクローニングさせる
制限エンドヌクレアーゼ部位によって免疫グロブリン不
変領域をコード化する DNA配列から分離されポリアデニ
ル化シグナル配列が続く真核生物プロモーター及びエン
ハンサー配列を含んでもよい（図10参照）。
免疫グロブリン配列と共にCD40の少なくとも一部分を含
むリガンドを製造するのに用いられる発現ベクターは、
好ましくは、ウィルス由来の ori領域、細菌性 ori領
域、細菌性選択可能マーカー及び、CD40の少なくとも一
部分をコード化する DNA配列をサブクローニングさせる
制限エンドヌクレアーゼ部位によって免疫グロブリン不
変領域をコード化する DNA配列から分離されポリアデニ
ル化シグナル配列が続く真核生物プロモーター及びエン
ハンサー配列を含んでもよい（図10参照）。
【００２６】本発明の特定の態様において、切断された
CD40 遺伝子は、Mlu I 及び B切断を用いて、アルフォ
ら（Aruffo et al.)、セル（Cell）、61巻、第1303-131
3 頁、1990年、に述べられているような免疫グロブリン
融合プラスミド中にサブクローニングして、該融合分子
CD40-IgをコーディングするプラスミドpCD40-Igを形成
してもよい（図８及び９参照）。その後 CD40-Ig融合蛋
白を、pCD40-Igプラスミドを COS細胞中にトランスフェ
クションして一時的発現系を形成することにより製造し
てもよい。製造された CD40-Igは該 COS細胞上清から回
収して、アルフォら（Aruffo et al.)、セル（Cell）、
61巻、第1303-1313 頁、1990年、に述べられているよう
に、プロテインＡカラムクロマトグラフィーにより精製
してもよい。 (1.2) 抗体 本発明の可溶性リガンドは、 CD40CR に結合する抗原結
合部位を含む抗体分子、モノクローナル抗体分子、又は
これらの抗体分子の断片を含んでもよい。このようなリ
ガンドはさらに、蛋白、脂質、炭水化物、酵素、トキシ
ン、成長因子、リンフォカイン、抗増殖剤、アルキル化
剤、代謝拮抗物質、抗生剤、ビンカ・アルカロイド、プ
ラチナ配位化合物、放射性同位元素、又は蛍光化合物で
あってもよく抗体分子又は断片に結合していてもよい第
二分子を含んでもよい。
CD40 遺伝子は、Mlu I 及び B切断を用いて、アルフォ
ら（Aruffo et al.)、セル（Cell）、61巻、第1303-131
3 頁、1990年、に述べられているような免疫グロブリン
融合プラスミド中にサブクローニングして、該融合分子
CD40-IgをコーディングするプラスミドpCD40-Igを形成
してもよい（図８及び９参照）。その後 CD40-Ig融合蛋
白を、pCD40-Igプラスミドを COS細胞中にトランスフェ
クションして一時的発現系を形成することにより製造し
てもよい。製造された CD40-Igは該 COS細胞上清から回
収して、アルフォら（Aruffo et al.)、セル（Cell）、
61巻、第1303-1313 頁、1990年、に述べられているよう
に、プロテインＡカラムクロマトグラフィーにより精製
してもよい。 (1.2) 抗体 本発明の可溶性リガンドは、 CD40CR に結合する抗原結
合部位を含む抗体分子、モノクローナル抗体分子、又は
これらの抗体分子の断片を含んでもよい。このようなリ
ガンドはさらに、蛋白、脂質、炭水化物、酵素、トキシ
ン、成長因子、リンフォカイン、抗増殖剤、アルキル化
剤、代謝拮抗物質、抗生剤、ビンカ・アルカロイド、プ
ラチナ配位化合物、放射性同位元素、又は蛍光化合物で
あってもよく抗体分子又は断片に結合していてもよい第
二分子を含んでもよい。
【００２７】該リガンドがモノクローナル抗体、又はそ
の断片である場合、該モノクローナル抗体は、連続的培
養細胞株による抗体分子の製造を提供する何らかの技術
を用いて CD40CR に対して製造してもよい。例えば、ケ
ーラー及びミルステイン（Kohler and Milstein ；ネイ
チャー（Nature）、256 巻、第495-497 頁、1975年）に
より初めて開発されたハイブリドーマ技術は、ヒトＢ細
胞ハイブリドーマ技術（コズバーら（Kozbar et al.)、
イミュノロジィ・トゥデイ（Immunology Today）、４
巻、第72頁、1983年）及びヒトモノクローナル抗体を製
造するためのEBV-ハイブリドーマ技術（コールら（Cole
et al.)、モノクローナル抗体と癌治療、アラン R. リ
ス（Alan R. Liss）社、第77-96 頁）等のような、より
最近になって利用できるようになった他の技術と同様
に、本発明の範囲に入る。
の断片である場合、該モノクローナル抗体は、連続的培
養細胞株による抗体分子の製造を提供する何らかの技術
を用いて CD40CR に対して製造してもよい。例えば、ケ
ーラー及びミルステイン（Kohler and Milstein ；ネイ
チャー（Nature）、256 巻、第495-497 頁、1975年）に
より初めて開発されたハイブリドーマ技術は、ヒトＢ細
胞ハイブリドーマ技術（コズバーら（Kozbar et al.)、
イミュノロジィ・トゥデイ（Immunology Today）、４
巻、第72頁、1983年）及びヒトモノクローナル抗体を製
造するためのEBV-ハイブリドーマ技術（コールら（Cole
et al.)、モノクローナル抗体と癌治療、アラン R. リ
ス（Alan R. Liss）社、第77-96 頁）等のような、より
最近になって利用できるようになった他の技術と同様
に、本発明の範囲に入る。
【００２８】該分子のイディオタイプを含む抗体断片は
周知の技術により作り出すことができる。例えば、その
ような断片には以下が含まれるが、それらに限定される
ものではない：該抗体分子をペプシンで処理することに
より作り出すことができるF(ab′)2断片；該F(ab′)2断
片のジスルフィド架橋を還元することにより作り出すこ
とができるFab ′断片；該抗体分子をパパインで処理す
ることにより作り出すことができるF(ab′)2断片；及び
該抗体分子をパパイン及び還元剤で処理してジスルフィ
ド架橋を還元することにより作り出すことができる2Fab
又はFab 断片。
周知の技術により作り出すことができる。例えば、その
ような断片には以下が含まれるが、それらに限定される
ものではない：該抗体分子をペプシンで処理することに
より作り出すことができるF(ab′)2断片；該F(ab′)2断
片のジスルフィド架橋を還元することにより作り出すこ
とができるFab ′断片；該抗体分子をパパインで処理す
ることにより作り出すことができるF(ab′)2断片；及び
該抗体分子をパパイン及び還元剤で処理してジスルフィ
ド架橋を還元することにより作り出すことができる2Fab
又はFab 断片。
【００２９】本発明はさらに、モリソンら（Morrison e
t al.)、プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・
アカデミィ・オブ・サイエンス U.S.A. （Proc. Natl.
Acad. Sci. U.S.A.)、81巻、第6851-6855 頁、1984年、
又はモリソンら（Morrison et al.)による欧州特許出願
第85305604.2号（公開第0173494 号、1986年３月５日公
開）に示されているような、当技術分野において周知の
技術によって製造されるキメラ抗体を提供する。
t al.)、プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・
アカデミィ・オブ・サイエンス U.S.A. （Proc. Natl.
Acad. Sci. U.S.A.)、81巻、第6851-6855 頁、1984年、
又はモリソンら（Morrison et al.)による欧州特許出願
第85305604.2号（公開第0173494 号、1986年３月５日公
開）に示されているような、当技術分野において周知の
技術によって製造されるキメラ抗体を提供する。
【００３０】抗体を製造するための免疫源は CD40CR を
含むいずれの材料でもよい。例えば、活性化 Th を免疫
源として用いてもよい。或いは、以下の（３）章で示す
ように製造した実質的に精製された CD40CR を使用して
もよい。活性化 Th を免疫源として使用する場合、抗血
清を活性化 Th 細胞に対する反応性について試験しても
よいが、休眠 Th 細胞に対して試験してはならない。
含むいずれの材料でもよい。例えば、活性化 Th を免疫
源として用いてもよい。或いは、以下の（３）章で示す
ように製造した実質的に精製された CD40CR を使用して
もよい。活性化 Th を免疫源として使用する場合、抗血
清を活性化 Th 細胞に対する反応性について試験しても
よいが、休眠 Th 細胞に対して試験してはならない。
【００３１】本発明の好ましい態様において、該可溶性
リガンドは MR1モノクローナル抗体である。以下の方法
を該 MR1モノクローナル抗体を製造するのに用いたが、
これは CD40CR を指向する他の抗体を作り出すために用
いてもよい。ハムスターに5-10×106 活性化 Th 1 細胞
(D1.6)を腹腔内に一週間おきに６週間投与して免疫化し
た。ネズミ Th 1 に対する血清滴定が約1:10,000よりも
大きくなった時点で、免疫ハムスター脾臓細胞及び NSI
を用いてポリエチレングリコールで細胞融合を行った。
成長過程のハイブリドーマを含むウェルからのSNを、休
眠 Th 1 及び活性化 Th 1 について流動血球計算法によ
りスクリーニングした。活性化 Th を選択的に認識する
mabを製造する特定の一ハイブリドーマをさらに試験し
て、MR1 を誘導するためにサブクローニングした。MR1
は腹水中で生産され、イオン交換 HPLC により精製し
た。ハイブリドーマMR1 はHB11048 の受託番号でアメリ
カン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託されて
いる。
リガンドは MR1モノクローナル抗体である。以下の方法
を該 MR1モノクローナル抗体を製造するのに用いたが、
これは CD40CR を指向する他の抗体を作り出すために用
いてもよい。ハムスターに5-10×106 活性化 Th 1 細胞
(D1.6)を腹腔内に一週間おきに６週間投与して免疫化し
た。ネズミ Th 1 に対する血清滴定が約1:10,000よりも
大きくなった時点で、免疫ハムスター脾臓細胞及び NSI
を用いてポリエチレングリコールで細胞融合を行った。
成長過程のハイブリドーマを含むウェルからのSNを、休
眠 Th 1 及び活性化 Th 1 について流動血球計算法によ
りスクリーニングした。活性化 Th を選択的に認識する
mabを製造する特定の一ハイブリドーマをさらに試験し
て、MR1 を誘導するためにサブクローニングした。MR1
は腹水中で生産され、イオン交換 HPLC により精製し
た。ハイブリドーマMR1 はHB11048 の受託番号でアメリ
カン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託されて
いる。
【００３２】本発明は、MR1 がその標的抗原に、又は C
D40-Igがそのレセプターに結合するのを拮抗阻害するこ
とができるモノクローナル抗体及びその断片を含むリガ
ンドも提供する。 （２） CD40CR の特性決定に用いる方法 CD40CR は（i) CD40 、CD40の少なくとも一部を含む融
合細胞類、及びMR1 のような抗体類に結合できること；
(ii)Ｂ細胞周期エントリー、増殖、及び分化を刺激する
ことができる機能的特性；及び(iii) 細胞内分布、によ
って特徴付けることができる。 (2.1) リガンド結合能 CD40CR は、 CD40 、CD40を含む融合細胞類、及び CD40
CR を指向する抗体類のようなリガンド類に結合できる
ことによって特徴付けることができる。
D40-Igがそのレセプターに結合するのを拮抗阻害するこ
とができるモノクローナル抗体及びその断片を含むリガ
ンドも提供する。 （２） CD40CR の特性決定に用いる方法 CD40CR は（i) CD40 、CD40の少なくとも一部を含む融
合細胞類、及びMR1 のような抗体類に結合できること；
(ii)Ｂ細胞周期エントリー、増殖、及び分化を刺激する
ことができる機能的特性；及び(iii) 細胞内分布、によ
って特徴付けることができる。 (2.1) リガンド結合能 CD40CR は、 CD40 、CD40を含む融合細胞類、及び CD40
CR を指向する抗体類のようなリガンド類に結合できる
ことによって特徴付けることができる。
【００３３】以下でより詳しく考察するように、幾つか
の技術が CD40CR の特性決定に使用された。例えば、 C
D40-Ig及びMR1 は同じ39kD分子を認識することが示され
た。CD40-Ig及びMR1 は両方とも、放射性同位元素でラ
ベルされた Th ライセートからの39kD蛋白を免疫沈降す
ることが見出された（図 5b)。さらに、 CD40-Igによる
39kD蛋白の免疫沈降は、MR1 によって認識される抗原を
Th ライセートから除去した。 (2.2) Ｂ細胞活性化能 CD40CR は又、Ｂ細胞周期エントリー、増殖、及び分化
を刺激することができることによって特徴付けることが
できる。
の技術が CD40CR の特性決定に使用された。例えば、 C
D40-Ig及びMR1 は同じ39kD分子を認識することが示され
た。CD40-Ig及びMR1 は両方とも、放射性同位元素でラ
ベルされた Th ライセートからの39kD蛋白を免疫沈降す
ることが見出された（図 5b)。さらに、 CD40-Igによる
39kD蛋白の免疫沈降は、MR1 によって認識される抗原を
Th ライセートから除去した。 (2.2) Ｂ細胞活性化能 CD40CR は又、Ｂ細胞周期エントリー、増殖、及び分化
を刺激することができることによって特徴付けることが
できる。
【００３４】例えば、活性化 Th 細胞からの形質膜（PM
Act）はＢ細胞 RNA合成を誘導するが、休眠 Th 細胞か
らの形質膜（PM rest ）は誘導しないことが見出された
（図1a)；Ｂ細胞活性化を示すものである、この誘導は
抗-LFA-1、抗-CD4、抗-ICAM-1 のような抗体による影響
を受けなかった。 CD40-Ig又はMR1 は、しかしながら、
図 1b 及び図６に示されるように、PM Act誘導性Ｂ細胞
活性化を阻害できることが見出された。
Act）はＢ細胞 RNA合成を誘導するが、休眠 Th 細胞か
らの形質膜（PM rest ）は誘導しないことが見出された
（図1a)；Ｂ細胞活性化を示すものである、この誘導は
抗-LFA-1、抗-CD4、抗-ICAM-1 のような抗体による影響
を受けなかった。 CD40-Ig又はMR1 は、しかしながら、
図 1b 及び図６に示されるように、PM Act誘導性Ｂ細胞
活性化を阻害できることが見出された。
【００３５】Ｂ細胞活性化の誘導は、[3H]- ウリジンの
RNAへの取り込み（Ｂ細胞が分化すると、RNA 合成が増
加する）又は細胞増殖に伴う DNA合成を測定する[3H]-
チミジンの取り込み等の技術により、測定してもよい。
Ｂ細胞増殖に対する CD40CRの効果を最適に測定するた
めに、インターロイキン-4（IL-4）を約10 ng/mlの濃度
で培地に加えてもよい。
RNAへの取り込み（Ｂ細胞が分化すると、RNA 合成が増
加する）又は細胞増殖に伴う DNA合成を測定する[3H]-
チミジンの取り込み等の技術により、測定してもよい。
Ｂ細胞増殖に対する CD40CRの効果を最適に測定するた
めに、インターロイキン-4（IL-4）を約10 ng/mlの濃度
で培地に加えてもよい。
【００３６】或いは、Ｂ細胞活性化を免疫グロブリン分
泌の関数として測定してもよい。例えば、実質的に精製
された形態、又は PM 中に存在するかそれ以外の形態の
CD40CR をIL-4(10 ng/ml)及びIL-5（5 ng/ml)と共に休
眠Ｂ細胞に加えてもよい。３日間培養した後、さらに培
地を加えてもよい。培養６日目に、個々の培養からの上
清（SN) を採収し、ノエルら（Noelle et al.)、ジャー
ナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 146巻、
第1118-1124 頁、1991年、に述べられているように IgM
及び IG1を定量してもよい。 (2.3) 細胞内分布 CD40CR は又、その細胞内分布によって特徴付けること
ができる。例えば、 CD40-Igは流動血球計算法により評
価すると、活性化 Th には結合するが休眠 Th1 には結
合しないことが観察された（図３）。さらに CD40-Ig
は、ジャーカット細胞、HSB2細胞、及びヒト末梢血液か
らの活性化Ｔ細胞に結合することが観察されたが、CEM
細胞、HPBALL細胞、又はネズミ胸腺腫細胞には有意の結
合を示さなかった。
泌の関数として測定してもよい。例えば、実質的に精製
された形態、又は PM 中に存在するかそれ以外の形態の
CD40CR をIL-4(10 ng/ml)及びIL-5（5 ng/ml)と共に休
眠Ｂ細胞に加えてもよい。３日間培養した後、さらに培
地を加えてもよい。培養６日目に、個々の培養からの上
清（SN) を採収し、ノエルら（Noelle et al.)、ジャー
ナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 146巻、
第1118-1124 頁、1991年、に述べられているように IgM
及び IG1を定量してもよい。 (2.3) 細胞内分布 CD40CR は又、その細胞内分布によって特徴付けること
ができる。例えば、 CD40-Igは流動血球計算法により評
価すると、活性化 Th には結合するが休眠 Th1 には結
合しないことが観察された（図３）。さらに CD40-Ig
は、ジャーカット細胞、HSB2細胞、及びヒト末梢血液か
らの活性化Ｔ細胞に結合することが観察されたが、CEM
細胞、HPBALL細胞、又はネズミ胸腺腫細胞には有意の結
合を示さなかった。
【００３７】例えば、限定するものではないが、特定の
細胞型("試験細胞")上の CD40CR の存在は次のように流
動血球計算法により評価してもよい。試験細胞は休眠 T
h 細胞（マイナス対照）及び活性化 Th 細胞（プラス対
照）と平行して試験してもよい。全細胞は約１×105 細
胞／50μl の濃度でリガンド（例： CD40-Ig又はMR1）
と共に４℃で20分間インキュベートした後、FITC共役化
抗リガンド抗体で処理してもよい。ヨウ化プロピヂウム
を全サンプルに２μg/mlの最終濃度になるように加えて
もよい。流動血球計算分析をその後、例えば BD FACSCA
N 上で行ってもよい。前方散乱対側面散乱、及び赤色陰
性（ヨウ化プロピヂウム排除のため）により細胞の陽性
ゲート処理した後、生育可能な細胞の対数緑色蛍光を確
認してもよい。 （３）精製 CD40CR の製造 本発明は実質的に精製された CD40CR を提供する。その
ような CD40CR は、以下の方法により、活性化ヘルパー
Ｔ細胞、ジャーカット、及び HSB2 細胞のような CD40C
R を持つ細胞から製造してもよい。
細胞型("試験細胞")上の CD40CR の存在は次のように流
動血球計算法により評価してもよい。試験細胞は休眠 T
h 細胞（マイナス対照）及び活性化 Th 細胞（プラス対
照）と平行して試験してもよい。全細胞は約１×105 細
胞／50μl の濃度でリガンド（例： CD40-Ig又はMR1）
と共に４℃で20分間インキュベートした後、FITC共役化
抗リガンド抗体で処理してもよい。ヨウ化プロピヂウム
を全サンプルに２μg/mlの最終濃度になるように加えて
もよい。流動血球計算分析をその後、例えば BD FACSCA
N 上で行ってもよい。前方散乱対側面散乱、及び赤色陰
性（ヨウ化プロピヂウム排除のため）により細胞の陽性
ゲート処理した後、生育可能な細胞の対数緑色蛍光を確
認してもよい。 （３）精製 CD40CR の製造 本発明は実質的に精製された CD40CR を提供する。その
ような CD40CR は、以下の方法により、活性化ヘルパー
Ｔ細胞、ジャーカット、及び HSB2 細胞のような CD40C
R を持つ細胞から製造してもよい。
【００３８】形質膜は、ノエルら（Noelle et al.)、ジ
ャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 146
巻、第1118-1124 頁、1991年、に述べられているよう
に、活性化 Th 1 細胞のような適当な細胞から不連続性
ショ糖勾配沈降により調製してもよい。 CD40CR はその
後、弱い洗剤により粗膜抽出物を分離し、さらに分子篩
いクロマトグラフィーに続いて、固体支持体に結合した
適当なリガンド（例：MR1 又は CD40-Ig）を用いるアフ
ィニティークロマトグラフィー、免疫沈降（例：CD40-I
g又はMR1 による）、且つ／又はゲル電気泳動のいずれ
かを行うことにより単離してもよい。
ャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 146
巻、第1118-1124 頁、1991年、に述べられているよう
に、活性化 Th 1 細胞のような適当な細胞から不連続性
ショ糖勾配沈降により調製してもよい。 CD40CR はその
後、弱い洗剤により粗膜抽出物を分離し、さらに分子篩
いクロマトグラフィーに続いて、固体支持体に結合した
適当なリガンド（例：MR1 又は CD40-Ig）を用いるアフ
ィニティークロマトグラフィー、免疫沈降（例：CD40-I
g又はMR1 による）、且つ／又はゲル電気泳動のいずれ
かを行うことにより単離してもよい。
【００３９】得られた蛋白は約39kDの分子量を持つと考
えてもよい。本発明は適当な担体と共に医薬用組成物の
中に含まれていてもよい可溶性 CD40CR （すなわち、無
細胞）を提供する。それはさらに、ペプチド、蛋白、脂
質、炭水化物、酵素、トキシン、成長因子、リンフォカ
イン、抗増殖剤、アルキル化剤、代謝拮抗物質、抗生物
質、ビンカアルカロイド、プラチナ配位化合物、放射性
同位元素、又は蛍光化合物であってもよい第二分子に結
合している CD40CR を提供する。
えてもよい。本発明は適当な担体と共に医薬用組成物の
中に含まれていてもよい可溶性 CD40CR （すなわち、無
細胞）を提供する。それはさらに、ペプチド、蛋白、脂
質、炭水化物、酵素、トキシン、成長因子、リンフォカ
イン、抗増殖剤、アルキル化剤、代謝拮抗物質、抗生物
質、ビンカアルカロイド、プラチナ配位化合物、放射性
同位元素、又は蛍光化合物であってもよい第二分子に結
合している CD40CR を提供する。
【００４０】本発明はさらに、化学合成又は組み換え D
NA技術により製造されている実質的に精製された CD40C
R を提供する。例えば、 CD40CR に対する遺伝子は、活
性化ヘルパーＴ細胞から調製されたcDNAをλgt10発現系
中に挿入した後、MR1 又は CD40-Igの結合によりスクリ
ーニングして CD40CR 発現クローンを同定することによ
り単離してもよい。或いは、活性化ヘルパーＴ細胞から
調製されたcDNAを COS細胞中にトランスフェクションし
てもよく、その上清をMR1 又は CD40-Igでスクリーニン
グして CD40CR 生産者を同定してもよい。 CD40CR に対
する遺伝子をその後、当技術分野において周知の発現系
を用いて CD40CR を発現させるのに用いてもよい。 （４） CD40CR に結合するリガンドの使用 本発明は CD40CR に結合するリガンドを利用するＢ細胞
活性化を調節する方法を提供する。特にそれは、 CD40C
R に結合する有効濃度のリガンドにＢ細胞及びTh 細胞
の混合物をさらすことを含む、Ｂ細胞活性化を阻害する
方法を提供する。使用してもよいリガンドは上記の
（１）章に述べられている。本発明の方法はインビトロ
又はインビボで実行してもよい。有効濃度とは、当技術
分野において周知の何らかの技術（上記の（２）章に示
されたものを含む）により測定して、最低約30％、好ま
しくは約75％、Ｂ細胞活性化を阻害するリガンド濃度を
言う。本発明の好ましく、特定の、非限定的な態様によ
ると、 CD40-Igをリガンドとして使用してもよく、その
場合、有効濃度は最低約10μg/mlでもよい。別の特定
の、非限定的な態様では、モノクローナル抗体 MR1を使
用してもよく、その場合、有効濃度は最低約10μg/mlで
もよい。該方法をインビボで実行する場合、リガンドの
有効濃度とはリガンドのプラズマ濃度又は局所濃度のこ
とであってもよい。例えば、全体としての免疫系への影
響を制限するためには局所的な領域中でＢ細胞活性化を
阻害することが望ましい。
NA技術により製造されている実質的に精製された CD40C
R を提供する。例えば、 CD40CR に対する遺伝子は、活
性化ヘルパーＴ細胞から調製されたcDNAをλgt10発現系
中に挿入した後、MR1 又は CD40-Igの結合によりスクリ
ーニングして CD40CR 発現クローンを同定することによ
り単離してもよい。或いは、活性化ヘルパーＴ細胞から
調製されたcDNAを COS細胞中にトランスフェクションし
てもよく、その上清をMR1 又は CD40-Igでスクリーニン
グして CD40CR 生産者を同定してもよい。 CD40CR に対
する遺伝子をその後、当技術分野において周知の発現系
を用いて CD40CR を発現させるのに用いてもよい。 （４） CD40CR に結合するリガンドの使用 本発明は CD40CR に結合するリガンドを利用するＢ細胞
活性化を調節する方法を提供する。特にそれは、 CD40C
R に結合する有効濃度のリガンドにＢ細胞及びTh 細胞
の混合物をさらすことを含む、Ｂ細胞活性化を阻害する
方法を提供する。使用してもよいリガンドは上記の
（１）章に述べられている。本発明の方法はインビトロ
又はインビボで実行してもよい。有効濃度とは、当技術
分野において周知の何らかの技術（上記の（２）章に示
されたものを含む）により測定して、最低約30％、好ま
しくは約75％、Ｂ細胞活性化を阻害するリガンド濃度を
言う。本発明の好ましく、特定の、非限定的な態様によ
ると、 CD40-Igをリガンドとして使用してもよく、その
場合、有効濃度は最低約10μg/mlでもよい。別の特定
の、非限定的な態様では、モノクローナル抗体 MR1を使
用してもよく、その場合、有効濃度は最低約10μg/mlで
もよい。該方法をインビボで実行する場合、リガンドの
有効濃度とはリガンドのプラズマ濃度又は局所濃度のこ
とであってもよい。例えば、全体としての免疫系への影
響を制限するためには局所的な領域中でＢ細胞活性化を
阻害することが望ましい。
【００４１】特定の態様において、本発明はＢ細胞活性
化が関連する疾病を患う対象を治療する方法で、該対象
に治療用量の、 CD40CR に結合するリガンドを投与する
ことを含む方法を提供する。対象はヒトでなくてもよい
が、好ましくはヒトでもよい。Ｂ細胞活性化が関連する
疾病には、アレルギー（アナフィラキシーを含む）；薬
物誘導狼瘡、全身性紅斑性狼瘡、成人慢性関節リューマ
チ、若年性関節リューマチ、強皮症、シェーグレン症候
群などを含む自己免疫状態；エプスタイン−バー感染、
及びヒト免疫不全ウィルスの感染を含むレトロウィルス
感染を含む、Ｂ細胞を伴うウィルス性疾患が含まれる
が、これらに限定されるものではない。
化が関連する疾病を患う対象を治療する方法で、該対象
に治療用量の、 CD40CR に結合するリガンドを投与する
ことを含む方法を提供する。対象はヒトでなくてもよい
が、好ましくはヒトでもよい。Ｂ細胞活性化が関連する
疾病には、アレルギー（アナフィラキシーを含む）；薬
物誘導狼瘡、全身性紅斑性狼瘡、成人慢性関節リューマ
チ、若年性関節リューマチ、強皮症、シェーグレン症候
群などを含む自己免疫状態；エプスタイン−バー感染、
及びヒト免疫不全ウィルスの感染を含むレトロウィルス
感染を含む、Ｂ細胞を伴うウィルス性疾患が含まれる
が、これらに限定されるものではない。
【００４２】Ｂ細胞活性化はヒト免疫不全ウィルス複製
の潜伏期からの誘導に関連することが示唆されているた
め、本発明のリガンドを AIDS 又は ARCがまだ発症して
いない HIV陽性者に投与することが望ましいであろう。
リガンドは、適当な医薬用担体中にあって、静脈内、腹
腔内、皮下、鞘内、関節内、或いは筋肉内注射、及び経
口、鼻腔内、眼内及び直腸投与を含む、当技術分野にお
いて周知の何らかの方法により投与してもよく、ミクロ
スフェア、リポゾーム、且つ／又は徐放移植体中に含ま
れてもよい。
の潜伏期からの誘導に関連することが示唆されているた
め、本発明のリガンドを AIDS 又は ARCがまだ発症して
いない HIV陽性者に投与することが望ましいであろう。
リガンドは、適当な医薬用担体中にあって、静脈内、腹
腔内、皮下、鞘内、関節内、或いは筋肉内注射、及び経
口、鼻腔内、眼内及び直腸投与を含む、当技術分野にお
いて周知の何らかの方法により投与してもよく、ミクロ
スフェア、リポゾーム、且つ／又は徐放移植体中に含ま
れてもよい。
【００４３】治療用量のリガンドとは、Ｂ細胞活性化の
有害な臨床作用を有意に減少させる量と定義され、使用
するリガンド及び治療する状態により変えてもよい。 C
D40-Igを使用する場合、治療濃度は全身（プラズマ濃
度）又は局所のいずれにおいても約10μg/mlでもよい。
MR1を使用する場合、治療濃度は全身（プラズマ濃度）
又は局所のいずれにおいても約10μg/mlでもよい。
有害な臨床作用を有意に減少させる量と定義され、使用
するリガンド及び治療する状態により変えてもよい。 C
D40-Igを使用する場合、治療濃度は全身（プラズマ濃
度）又は局所のいずれにおいても約10μg/mlでもよい。
MR1を使用する場合、治療濃度は全身（プラズマ濃度）
又は局所のいずれにおいても約10μg/mlでもよい。
【００４４】本発明のさらに別の態様において、上記の
方法は、 Th 細胞が殺生されるか又は障害を受け、 Th
細胞の破壊の結果としてＢ細胞活性化が減少するよう
に、トキシン又は代謝拮抗物質を含むリガンドを利用し
てもよい。本発明のリガンドは活性化Ｔ細胞をラベルす
るのに用いてもよく、これはＴ細胞障害の診断において
有用となりうる技術である。この目的で、酵素、放射性
同位元素、蛍光化合物又は他の検出可能ラベルを含むリ
ガンドをインビトロ又はインビボでＴ細胞にさらしても
よく、結合量を定量してもよい。
方法は、 Th 細胞が殺生されるか又は障害を受け、 Th
細胞の破壊の結果としてＢ細胞活性化が減少するよう
に、トキシン又は代謝拮抗物質を含むリガンドを利用し
てもよい。本発明のリガンドは活性化Ｔ細胞をラベルす
るのに用いてもよく、これはＴ細胞障害の診断において
有用となりうる技術である。この目的で、酵素、放射性
同位元素、蛍光化合物又は他の検出可能ラベルを含むリ
ガンドをインビトロ又はインビボでＴ細胞にさらしても
よく、結合量を定量してもよい。
【００４５】本発明のリガンドは又、例えば成長因子等
の物質を活性化Ｔ細胞に届けるのに用いてもよい。 （５） CD40CR の使用 本発明は、上記の（３）章に述べられたように調製され
た CD40CR 又は CD40CR を含む分子を利用するＢ細胞活
性化の調節方法を提供する。特に、Ｂ細胞を有効濃度の
CD40CR にさらすことを含む、Ｂ細胞活性化を促進する
方法を提供する。該方法はインビボ又はインビトロで実
行してもよい。有効濃度とは、当技術分野において周知
の何らかの技術（上記の（３）章に示されたものを含
む）により測定して、最低約30％、Ｂ細胞活性化を誘導
するレセプター濃度を言う。本発明の特定の、非限定的
な態様によると、 CD40CR の濃度は局所又は全身におい
て約10μg/mlでもよい。
の物質を活性化Ｔ細胞に届けるのに用いてもよい。 （５） CD40CR の使用 本発明は、上記の（３）章に述べられたように調製され
た CD40CR 又は CD40CR を含む分子を利用するＢ細胞活
性化の調節方法を提供する。特に、Ｂ細胞を有効濃度の
CD40CR にさらすことを含む、Ｂ細胞活性化を促進する
方法を提供する。該方法はインビボ又はインビトロで実
行してもよい。有効濃度とは、当技術分野において周知
の何らかの技術（上記の（３）章に示されたものを含
む）により測定して、最低約30％、Ｂ細胞活性化を誘導
するレセプター濃度を言う。本発明の特定の、非限定的
な態様によると、 CD40CR の濃度は局所又は全身におい
て約10μg/mlでもよい。
【００４６】特定の態様において、本発明は体液性免疫
の減退が関連する免疫不全疾患を患う対象を治療する方
法で、該対象に治療用量の CD40CR を投与することを含
む方法を提供する。対象はヒトでなくてもよいが、好ま
しくはヒトでもよい。体液性免疫の減退が関連する免疫
不全疾患には、体液性免疫が関わる遺伝疾患と同様に、
後天的免疫不全症候群、悪性腫瘍又は悪液質が関連する
免疫不全症、例えば化学療法又は放射線照射療法によっ
て起きる医原性免疫不全症が含まれる。
の減退が関連する免疫不全疾患を患う対象を治療する方
法で、該対象に治療用量の CD40CR を投与することを含
む方法を提供する。対象はヒトでなくてもよいが、好ま
しくはヒトでもよい。体液性免疫の減退が関連する免疫
不全疾患には、体液性免疫が関わる遺伝疾患と同様に、
後天的免疫不全症候群、悪性腫瘍又は悪液質が関連する
免疫不全症、例えば化学療法又は放射線照射療法によっ
て起きる医原性免疫不全症が含まれる。
【００４７】CD40CR は、適当な医薬用担体中にあっ
て、静脈内、腹腔内、皮下、鞘内、関節内、或いは筋肉
内注射、及び経口、鼻腔内、眼内及び直腸投与を含む、
当技術分野において周知の何らかの方法により投与して
もよく、ミクロスフェア、リポゾーム、且つ／又は徐放
移植体中に含まれてもよい。CD40に対する CD40CR の治
療用量は、免疫グロブリン産生を少なくとも約30％増加
させる量と定義される。
て、静脈内、腹腔内、皮下、鞘内、関節内、或いは筋肉
内注射、及び経口、鼻腔内、眼内及び直腸投与を含む、
当技術分野において周知の何らかの方法により投与して
もよく、ミクロスフェア、リポゾーム、且つ／又は徐放
移植体中に含まれてもよい。CD40に対する CD40CR の治
療用量は、免疫グロブリン産生を少なくとも約30％増加
させる量と定義される。
【００４８】さらに別の態様において、 CD40CR をトキ
シンに共役させた後に、CD40を発現するＢ細胞を破壊す
るのが好ましいと思われる状況下で対象に投与してもよ
い。そのような状況の例には、臓器移植を受けた患者、
多発性骨髄腫或いは他のＢ細胞悪性腫瘍の患者、又は自
己免疫疾患の患者が含まれる。CD40CR はCD40を発現す
るＢ細胞をラベルするのに用いてもよく、これはＢ細胞
障害の診断において有用となりうる技術である。この目
的で、酵素、放射性同位元素、蛍光化合物又は他の検出
可能ラベルに結合したレセプターをインビボ又はインビ
トロでＢ細胞にさらしてもよく、結合量を定量してもよ
い。
シンに共役させた後に、CD40を発現するＢ細胞を破壊す
るのが好ましいと思われる状況下で対象に投与してもよ
い。そのような状況の例には、臓器移植を受けた患者、
多発性骨髄腫或いは他のＢ細胞悪性腫瘍の患者、又は自
己免疫疾患の患者が含まれる。CD40CR はCD40を発現す
るＢ細胞をラベルするのに用いてもよく、これはＢ細胞
障害の診断において有用となりうる技術である。この目
的で、酵素、放射性同位元素、蛍光化合物又は他の検出
可能ラベルに結合したレセプターをインビボ又はインビ
トロでＢ細胞にさらしてもよく、結合量を定量してもよ
い。
【００４９】CD40CR は又、それに結合している分子を
Ｂ細胞に届けるのに用いてもよい。
Ｂ細胞に届けるのに用いてもよい。
【００５０】
【実施例】実施例１ 材料と方法 メスの DBA/2J マウス（ジャクソン・ラボラトリーズ
社、バー・ハーバー、ME）を Th クローンの成長を支え
る充填細胞の調製のために、及び休眠Ｂ細胞の調製で用
いた。
社、バー・ハーバー、ME）を Th クローンの成長を支え
る充填細胞の調製のために、及び休眠Ｂ細胞の調製で用
いた。
【００５１】D 1.6 、 I-Ad - 制限式ウサギ Ig 特異性
Th クローン（カートジョーンズら、（Kurt-Jones et
al.)、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディ
スン(J. Exp. Med.)、166 巻、第1774-1787 頁、1987
年）をウスターのマサチューセッツ大学のディビット・
パーカー博士（Dr. David Parker）から入手した。D 1.
6 をここでは Th 1 と呼ぶことにする。
Th クローン（カートジョーンズら、（Kurt-Jones et
al.)、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディ
スン(J. Exp. Med.)、166 巻、第1774-1787 頁、1987
年）をウスターのマサチューセッツ大学のディビット・
パーカー博士（Dr. David Parker）から入手した。D 1.
6 をここでは Th 1 と呼ぶことにする。
【００５２】Th 1 を、ノエルら（Noelle et al.)、ジ
ャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 146
巻、第1118-1124 頁、1991年、に述べられているよう
に、40μg/4ml の PBS／ウェルでコーティングされたク
ラスターウェル（６ウェル、コーニング社、NY）中で抗
-CD3と共に16時間培養した（８×106/ウェル）。形質膜
を、ノエルら（Noelle et al.)、ジャーナル・オブ・イ
ミュノロジィ（J. Immunol.)、 146巻、第1118-1124
頁、1991年、に述べられているように、不連続性ショ糖
勾配沈降により調製した。
ャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 146
巻、第1118-1124 頁、1991年、に述べられているよう
に、40μg/4ml の PBS／ウェルでコーティングされたク
ラスターウェル（６ウェル、コーニング社、NY）中で抗
-CD3と共に16時間培養した（８×106/ウェル）。形質膜
を、ノエルら（Noelle et al.)、ジャーナル・オブ・イ
ミュノロジィ（J. Immunol.)、 146巻、第1118-1124
頁、1991年、に述べられているように、不連続性ショ糖
勾配沈降により調製した。
【００５３】休眠脾臓Ｂ細胞を、デフランコら（Defran
co et al.)、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・
メディスン(J. Exp. Med.)、155 巻、第1523頁、1982
年、に述べられているように、不連続性パーコール勾配
沈降により調製した。70-75 ％（密度：1.087-1.097)パ
ーコール界面から単離された細胞は典型的には＞95％ m
Ig+ であり、均質の、低い近前方光線散乱を有し、Con
A に反応しなかった。
co et al.)、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・
メディスン(J. Exp. Med.)、155 巻、第1523頁、1982
年、に述べられているように、不連続性パーコール勾配
沈降により調製した。70-75 ％（密度：1.087-1.097)パ
ーコール界面から単離された細胞は典型的には＞95％ m
Ig+ であり、均質の、低い近前方光線散乱を有し、Con
A に反応しなかった。
【００５４】以下の mabを、放射線照射され骨髄再形成
されたマウスの腹水からイオン交換HPLC により精製し
た：抗-CD3:145-2C11 （レオら（Leo et al.) 、プロシ
ーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミィ・オ
ブ・サイエンス U.S.A. （Proc. Natl. Acad. Sci. U.
S.A.)、84巻、第1374-1378 頁、1987年）；抗- α，β:
H57-597；抗-CD4:GK1.5（ワイルドら（Wilde et a
l.）、ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immuno
l.)、 131巻、第2178-2183 頁、1983年）；抗-ICAM:YN1
/1.7.4 （プリエトら（Prieto et al.)、ヨーロピアン
・ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（Eur. J. Immuno
l.）、19巻、第1551-1557 頁、1989年）；抗-LFA-1:FD4
41.8（サルミエントら（Sarmiento et al.）、イミュノ
ロジカル・レビュー（Immunol. Rev.)、68巻、第135
頁、1982年）；及び抗- ラット／ハムスターκ鎖:RG-7
（スプリンガー（Springer）、ハイブリドーマ（Hybri
d.)、１巻、第257-273 頁、1982年）。
されたマウスの腹水からイオン交換HPLC により精製し
た：抗-CD3:145-2C11 （レオら（Leo et al.) 、プロシ
ーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミィ・オ
ブ・サイエンス U.S.A. （Proc. Natl. Acad. Sci. U.
S.A.)、84巻、第1374-1378 頁、1987年）；抗- α，β:
H57-597；抗-CD4:GK1.5（ワイルドら（Wilde et a
l.）、ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immuno
l.)、 131巻、第2178-2183 頁、1983年）；抗-ICAM:YN1
/1.7.4 （プリエトら（Prieto et al.)、ヨーロピアン
・ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（Eur. J. Immuno
l.）、19巻、第1551-1557 頁、1989年）；抗-LFA-1:FD4
41.8（サルミエントら（Sarmiento et al.）、イミュノ
ロジカル・レビュー（Immunol. Rev.)、68巻、第135
頁、1982年）；及び抗- ラット／ハムスターκ鎖:RG-7
（スプリンガー（Springer）、ハイブリドーマ（Hybri
d.)、１巻、第257-273 頁、1982年）。
【００５５】CD40融合蛋白は、CD40抗原をコード化して
いるcDNAを含むプラスミド（スタメンコヴィック及びシ
ード（Stamenkovic and Seed) 、EMBOジャーナル（EMBO
J.)、８巻、第1403-1410 頁、1989年）を、制限酵素Ps
tI (P)及びSau 3A (S3) で切断することにより製造し
た。この P/S3 断片を、P 及びBam HI（B)で切断した同
じプラスミド中にサブクローニングした。これにより、
膜内外ドメインより上流で切断されたCD40蛋白をコード
化するCD40Δが製造された。CD40Δをコード化する DNA
断片をその後、Mlu I 及び B切断を用いて、免疫グロブ
リン融合プラスミド中にサブクローニングした（アルフ
ォら（Aruffo et al.)、セル（Cell）、61巻、第1303-1
313 頁、1990年）。 CD40-Ig融合蛋白を、 COS細胞中に
一時的にトランスフェクションして製造し、アルフォら
（Aruffo et al.)、セル（Cell）、61巻、第1303-1313
頁、1990年、に述べられているように、プロテインＡカ
ラム上で精製した。
いるcDNAを含むプラスミド（スタメンコヴィック及びシ
ード（Stamenkovic and Seed) 、EMBOジャーナル（EMBO
J.)、８巻、第1403-1410 頁、1989年）を、制限酵素Ps
tI (P)及びSau 3A (S3) で切断することにより製造し
た。この P/S3 断片を、P 及びBam HI（B)で切断した同
じプラスミド中にサブクローニングした。これにより、
膜内外ドメインより上流で切断されたCD40蛋白をコード
化するCD40Δが製造された。CD40Δをコード化する DNA
断片をその後、Mlu I 及び B切断を用いて、免疫グロブ
リン融合プラスミド中にサブクローニングした（アルフ
ォら（Aruffo et al.)、セル（Cell）、61巻、第1303-1
313 頁、1990年）。 CD40-Ig融合蛋白を、 COS細胞中に
一時的にトランスフェクションして製造し、アルフォら
（Aruffo et al.)、セル（Cell）、61巻、第1303-1313
頁、1990年、に述べられているように、プロテインＡカ
ラム上で精製した。
【００５６】インターロイキン 4 (IL4)：組み換えマウ
スIL4 は、C.マリツェヴスキィ博士及びK.グラブステイ
ン博士（Drs. C. Maliszewski and K. Grabstein）、イ
ムネックス社、シアトル、WA、の御好意により入手し
た。インターロイキン 5 (IL5)：組み換えマウスIL5
は、R&D リサーチ社、サレント、CA、から購入した。
スIL4 は、C.マリツェヴスキィ博士及びK.グラブステイ
ン博士（Drs. C. Maliszewski and K. Grabstein）、イ
ムネックス社、シアトル、WA、の御好意により入手し
た。インターロイキン 5 (IL5)：組み換えマウスIL5
は、R&D リサーチ社、サレント、CA、から購入した。
【００５７】３×104 休眠Ｂ細胞を A/2微量滴定ウェル
（コスター社、ケンブリッジ、MA）中の50μl cRPMI 中
で培養した。これらのウェルに 0.5μg の Th 1 又は T
h 2膜蛋白を加えた。42から48時間の間に、ウェルを2.5
μCiの 3H-ウリジン（ニューイングランドヌクレア
社、ボストン、MA）でパルス処理し、採収して、放射能
を液体シンチレーション分光測定により測定した。結果
を cpm／培養 +/-s.d.で表した。
（コスター社、ケンブリッジ、MA）中の50μl cRPMI 中
で培養した。これらのウェルに 0.5μg の Th 1 又は T
h 2膜蛋白を加えた。42から48時間の間に、ウェルを2.5
μCiの 3H-ウリジン（ニューイングランドヌクレア
社、ボストン、MA）でパルス処理し、採収して、放射能
を液体シンチレーション分光測定により測定した。結果
を cpm／培養 +/-s.d.で表した。
【００５８】休眠Ｂ細胞を上に述べたように培養した。
培養ウェルに 0.5μg の Th 1 膜蛋白、IL4 （10 ng/m
l）及びIL5 （５ ng/ml）を加えた。培養３日目に、さ
らに50μl の cRPMIを加えた。培養６日目に、個々のウ
ェルからの SN を採収し、ノエルら（Noelle et al.)、
ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 1
46巻、第1118-1124 頁、1991年、に述べられているよう
に、IgM 及び IgG1 を定量した。
培養ウェルに 0.5μg の Th 1 膜蛋白、IL4 （10 ng/m
l）及びIL5 （５ ng/ml）を加えた。培養３日目に、さ
らに50μl の cRPMIを加えた。培養６日目に、個々のウ
ェルからの SN を採収し、ノエルら（Noelle et al.)、
ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 1
46巻、第1118-1124 頁、1991年、に述べられているよう
に、IgM 及び IgG1 を定量した。
【００５９】４×104 休眠Ｂ細胞を A/2微量滴定ウェル
（コスター社、ケンブリッジ、MA）中の50μl cRPMI 中
で培養した。これらのウェルに、１×104 休眠又は活性
化された、放射線照射（500 ラド）された Th 1 及びIL
4 （10 ng/ml）を加えた。培養３日目に、ノエルら（No
elle et al.)、ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（J.
Immunol.)、 146巻、第1118-1124 頁、1991年、に述べ
られているように、ウェルを１μCiの 3H-チミジンでパ
ルス処理した。
（コスター社、ケンブリッジ、MA）中の50μl cRPMI 中
で培養した。これらのウェルに、１×104 休眠又は活性
化された、放射線照射（500 ラド）された Th 1 及びIL
4 （10 ng/ml）を加えた。培養３日目に、ノエルら（No
elle et al.)、ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（J.
Immunol.)、 146巻、第1118-1124 頁、1991年、に述べ
られているように、ウェルを１μCiの 3H-チミジンでパ
ルス処理した。
【００６０】ハムスターに5-10×106 活性化 Th 1 細胞
(D1.6)を腹腔内に一週間おきに６週間投与して免疫化し
た。ネズミ Th 1 に対する血清滴定が約1:10,000よりも
大きくなった時点で、免疫ハムスター脾臓細胞及び NSI
を用いてポリエチレングリコールで細胞融合を行った。
成長過程のハイブリドーマを含むウェルからのSNを、休
眠 Th 1 及び活性化 Th 1 について流動血球計算法によ
りスクリーニングした。活性化 Th を選択的に認識する
mabを製造する特定の一ハイブリドーマをさらに試験し
て、MR1 を誘導するためにサブクローニングした。MR1
は腹水中で生産され、イオン交換 HPLC により精製し
た。
(D1.6)を腹腔内に一週間おきに６週間投与して免疫化し
た。ネズミ Th 1 に対する血清滴定が約1:10,000よりも
大きくなった時点で、免疫ハムスター脾臓細胞及び NSI
を用いてポリエチレングリコールで細胞融合を行った。
成長過程のハイブリドーマを含むウェルからのSNを、休
眠 Th 1 及び活性化 Th 1 について流動血球計算法によ
りスクリーニングした。活性化 Th を選択的に認識する
mabを製造する特定の一ハイブリドーマをさらに試験し
て、MR1 を誘導するためにサブクローニングした。MR1
は腹水中で生産され、イオン交換 HPLC により精製し
た。
【００６１】休眠 Th 及び活性化 Th （抗-CD3で16時
間）を採収し、１×105 細胞／50μlで、融合蛋白と共
に20分間、４℃でインキュベートした後、 FITC-共役化
ヤギ抗- ヒト(h)IgG(25 μg/ml；サザン・バイオテクノ
ロジィ社、バーミンガム、AL）を加えてインキュベート
した。全サンプルに、ヨウ化プロピヂウムを２μg/mlの
最終濃度になるように加えた。流動血球計算分析を、 B
D FACSCAN 上で行った。前方散乱対側面散乱、及び赤色
陰性（ヨウ化プロピヂウム排除のため）により、細胞の
陽性ゲート処理を行った後、生育可能な細胞の対数緑色
蛍光を確認した。陽性の細胞及び MFIのパーセントを測
定するために、最低 5000 個の生育可能な細胞を分析し
た。MR1 での染色は、FITC- 共役化 RG7、マウス抗- ラ
ット／ハムスターκ鎖 mabを使用した。
間）を採収し、１×105 細胞／50μlで、融合蛋白と共
に20分間、４℃でインキュベートした後、 FITC-共役化
ヤギ抗- ヒト(h)IgG(25 μg/ml；サザン・バイオテクノ
ロジィ社、バーミンガム、AL）を加えてインキュベート
した。全サンプルに、ヨウ化プロピヂウムを２μg/mlの
最終濃度になるように加えた。流動血球計算分析を、 B
D FACSCAN 上で行った。前方散乱対側面散乱、及び赤色
陰性（ヨウ化プロピヂウム排除のため）により、細胞の
陽性ゲート処理を行った後、生育可能な細胞の対数緑色
蛍光を確認した。陽性の細胞及び MFIのパーセントを測
定するために、最低 5000 個の生育可能な細胞を分析し
た。MR1 での染色は、FITC- 共役化 RG7、マウス抗- ラ
ット／ハムスターκ鎖 mabを使用した。
【００６２】Th 1 を不溶化した抗-CD3と共に16時間、
休眠又は活性化させた。休眠及び活性化 Th （20×106/
ml）からの蛋白を 1 mCiの[35S]-メチオニン／システイ
ンで１時間ラベルした時点で、RPMI/10%FCS 中で２回洗
浄し、細胞ペレットをノエルら（Noelle et al.)、ジャ
ーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 137
巻、第1718-1726 頁、1986年、に述べられているよう
に、抽出バッファー中で溶解した。精製抗体又は融合蛋
白(1-10 μg)をライセート 500μl (5×106 細胞当量）
に加え、４℃で16時間処理した。その時点で、該ライセ
ートを50μl の圧縮プロテインＡ−セファロースの入っ
た試験管に移した。ペレット状の該プロテインＡ−セフ
ァロースを再懸濁し、試験管を攪拌しながら４℃で１時
間インキュベートした。該サンプルをその後、高ストリ
ンジェンシー洗浄バッファーで３回洗浄した。ペレット
状の該プロテインＡ−セファロースを30μl の SDSサン
プルバッファーに再懸濁し、10％ポリアクリルアミドゲ
ル上を泳動させた。ゲル泳動の後、該ゲルを固定し蛍光
間接撮影を行った。結果 PM ActによるＢ細胞周期エントリーの誘導を媒介する細
胞表面分子を明らかにするために、 Th 膜蛋白に対する
mab をPM Act及びＢ細胞の培養液に加えた。PM ActはＢ
細胞の RNA合成をPM rest について観察されたものより
８倍誘導した（図1a）。抗-LFA-1、抗-CD4、抗-ICAM-1
を単独で、又は組み合わせて加えても、PM ActによるＢ
細胞 RNA合成の誘導を阻害しなかった。
休眠又は活性化させた。休眠及び活性化 Th （20×106/
ml）からの蛋白を 1 mCiの[35S]-メチオニン／システイ
ンで１時間ラベルした時点で、RPMI/10%FCS 中で２回洗
浄し、細胞ペレットをノエルら（Noelle et al.)、ジャ
ーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 137
巻、第1718-1726 頁、1986年、に述べられているよう
に、抽出バッファー中で溶解した。精製抗体又は融合蛋
白(1-10 μg)をライセート 500μl (5×106 細胞当量）
に加え、４℃で16時間処理した。その時点で、該ライセ
ートを50μl の圧縮プロテインＡ−セファロースの入っ
た試験管に移した。ペレット状の該プロテインＡ−セフ
ァロースを再懸濁し、試験管を攪拌しながら４℃で１時
間インキュベートした。該サンプルをその後、高ストリ
ンジェンシー洗浄バッファーで３回洗浄した。ペレット
状の該プロテインＡ−セファロースを30μl の SDSサン
プルバッファーに再懸濁し、10％ポリアクリルアミドゲ
ル上を泳動させた。ゲル泳動の後、該ゲルを固定し蛍光
間接撮影を行った。結果 PM ActによるＢ細胞周期エントリーの誘導を媒介する細
胞表面分子を明らかにするために、 Th 膜蛋白に対する
mab をPM Act及びＢ細胞の培養液に加えた。PM ActはＢ
細胞の RNA合成をPM rest について観察されたものより
８倍誘導した（図1a）。抗-LFA-1、抗-CD4、抗-ICAM-1
を単独で、又は組み合わせて加えても、PM ActによるＢ
細胞 RNA合成の誘導を阻害しなかった。
【００６３】ヒトの系では、抗-CD40 mab がＢ細胞増殖
を誘導し（クラーク及びレーン（Clark and Lane）、ア
ニュアル・レビュー・オブ・イミュノロジィ（Ann. Re
v. Immunol.) 、９巻、第97-127頁、1991年）、それに
よりCD40をＢ細胞に対する重要な引き金分子として関わ
らせることが示されていた。CD40がPM ActによるＢ細胞
RNA合成の誘導に関わっているのかどうかを測定するた
めに、ヒトCD40の細胞外ドメインの可溶性融合蛋白及び
ヒト IgG1 (CD40-Ig) の Fc ドメインをPM Act及びＢ細
胞の培養液に加えた。 Th 1 及び Th 2 に由来するPM
Actを調製し、Ｂ細胞 RNA合成を刺激するために用い
た。CD40-Ig を培養液に加えることにより、PM Actによ
って Th 1 及び Th 2 から誘導されるＢ細胞 RNA合成の
用量比例的阻害が起きた（図1b）。PM Actによって Th
1 及び Th 2 から誘導されるＢ細胞 RNA合成の 1/2最大
阻害は約５μg/ml CD40-Igであった。CD7E-Ig 融合蛋白
（ダムル及びアルフォ（Damle and Aruffo）、プロシー
ディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミィ・オブ
・サイエンス U.S.A. （Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.
A.)、88巻、第6403-6407 頁、1991年）は25μg/mlを用
いた時でさえも効果を示さなかった。
を誘導し（クラーク及びレーン（Clark and Lane）、ア
ニュアル・レビュー・オブ・イミュノロジィ（Ann. Re
v. Immunol.) 、９巻、第97-127頁、1991年）、それに
よりCD40をＢ細胞に対する重要な引き金分子として関わ
らせることが示されていた。CD40がPM ActによるＢ細胞
RNA合成の誘導に関わっているのかどうかを測定するた
めに、ヒトCD40の細胞外ドメインの可溶性融合蛋白及び
ヒト IgG1 (CD40-Ig) の Fc ドメインをPM Act及びＢ細
胞の培養液に加えた。 Th 1 及び Th 2 に由来するPM
Actを調製し、Ｂ細胞 RNA合成を刺激するために用い
た。CD40-Ig を培養液に加えることにより、PM Actによ
って Th 1 及び Th 2 から誘導されるＢ細胞 RNA合成の
用量比例的阻害が起きた（図1b）。PM Actによって Th
1 及び Th 2 から誘導されるＢ細胞 RNA合成の 1/2最大
阻害は約５μg/ml CD40-Igであった。CD7E-Ig 融合蛋白
（ダムル及びアルフォ（Damle and Aruffo）、プロシー
ディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミィ・オブ
・サイエンス U.S.A. （Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.
A.)、88巻、第6403-6407 頁、1991年）は25μg/mlを用
いた時でさえも効果を示さなかった。
【００６４】CD40-IgがＴ−非依存性活性剤によるＢ細
胞活性化を阻害するかどうかを調べるために、LPS 及び
CD40-Igの存在下でＢ細胞を培養した。２日目に、 RNA
合成を評価した（図1c）。 CD40-IgはLPS によるＢ細胞
活性化の阻害においては効果を示さなかったが、Ｂ細胞
のPM Actに対する応答は阻害した。PM Act、IL4 及び I
L5の存在下では、Ｂ細胞は多クローン的に分化してIgを
生産した（ホジキンら（Hodgkin et al.) 、ジャーナル
・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 145巻、第20
25-2034 頁、1990年；ノエルら（Noelle et al.)、ジャ
ーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 146
巻、第1118-1124 頁、1991年）。この過程における CD4
0 シグナルに必要な条件を評価するために、 CD40-Igを
培養開始時、又はその後の培養中の日に加えた。培養開
始時に CD40-Igを加えると（図2a）、その非存在下にお
ける対照レベルに比較してポリクローナル IgM及び IgG
1 の生産を95％より多く阻害した。対照的に、 CD40-Ig
を培養１日目及び２日目に加えると IgM及び IgG1 生産
に対して、あったとしても、極わずかな阻害効果しか示
さなかった。これらのデータは、24時間後にはもはやCD
40によるシグナルはＢ細胞のIg分泌への分化に対する必
須条件ではないことを示している。
胞活性化を阻害するかどうかを調べるために、LPS 及び
CD40-Igの存在下でＢ細胞を培養した。２日目に、 RNA
合成を評価した（図1c）。 CD40-IgはLPS によるＢ細胞
活性化の阻害においては効果を示さなかったが、Ｂ細胞
のPM Actに対する応答は阻害した。PM Act、IL4 及び I
L5の存在下では、Ｂ細胞は多クローン的に分化してIgを
生産した（ホジキンら（Hodgkin et al.) 、ジャーナル
・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 145巻、第20
25-2034 頁、1990年；ノエルら（Noelle et al.)、ジャ
ーナル・オブ・イミュノロジィ（J. Immunol.)、 146
巻、第1118-1124 頁、1991年）。この過程における CD4
0 シグナルに必要な条件を評価するために、 CD40-Igを
培養開始時、又はその後の培養中の日に加えた。培養開
始時に CD40-Igを加えると（図2a）、その非存在下にお
ける対照レベルに比較してポリクローナル IgM及び IgG
1 の生産を95％より多く阻害した。対照的に、 CD40-Ig
を培養１日目及び２日目に加えると IgM及び IgG1 生産
に対して、あったとしても、極わずかな阻害効果しか示
さなかった。これらのデータは、24時間後にはもはやCD
40によるシグナルはＢ細胞のIg分泌への分化に対する必
須条件ではないことを示している。
【００６５】ここまでのデータはCD40がPM ActによるＢ
細胞活性化に関係していることを示した。無傷の生きた
活性化 Th によるＢ細胞活性化にもCD40が関係すること
を確認するために実験を行った。 Th 1 を不溶化抗-CD3
と共に16時間活性化して、採収し、放射線照射した。放
射線照射した該 Th 1 をIL4 の存在下でＢ細胞と共に培
養し、Ｂ細胞増殖を培養３日目に測定した。 Th 1 がIL
4 を生産しないために、 Th 1 とのＢ細胞増殖を達成す
るのに外からのIL4 源が必要であった（ノエルら（Noel
le et al.)、ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. I
mmunol.)、 143巻、第1807-1814 頁、1989年）。 CD40-
Igは、PM Actについて観察されたのと同様に、放射線照
射された Th によるＢ細胞増殖の誘導を用量比例的に阻
害した（図2b）。マイナス対照であるCD7E-Ig は、測定
できるような効果は表さなかった。
細胞活性化に関係していることを示した。無傷の生きた
活性化 Th によるＢ細胞活性化にもCD40が関係すること
を確認するために実験を行った。 Th 1 を不溶化抗-CD3
と共に16時間活性化して、採収し、放射線照射した。放
射線照射した該 Th 1 をIL4 の存在下でＢ細胞と共に培
養し、Ｂ細胞増殖を培養３日目に測定した。 Th 1 がIL
4 を生産しないために、 Th 1 とのＢ細胞増殖を達成す
るのに外からのIL4 源が必要であった（ノエルら（Noel
le et al.)、ジャーナル・オブ・イミュノロジィ（J. I
mmunol.)、 143巻、第1807-1814 頁、1989年）。 CD40-
Igは、PM Actについて観察されたのと同様に、放射線照
射された Th によるＢ細胞増殖の誘導を用量比例的に阻
害した（図2b）。マイナス対照であるCD7E-Ig は、測定
できるような効果は表さなかった。
【００６６】活性化 Th 1 がCD40に対する結合蛋白を発
現するかどうかを調べるために、休眠及び活性化（16時
間) Th 1 を CD40-Ig又はCD7E-Ig で染色した後、FITC
- 抗-HIgG で処理した。 CD40-Igの結合を流動血球計算
により評価した（図３）。抗-CD3で16時間活性化した T
h 1 は、休眠 Th 1 とは異なり、 CD40-Igで56％が染色
プラスを示したが、対照CD7E-Ig では染まらなかった。
CD40-Ig結合蛋白を同定するために、 Th 1 蛋白を
[35S]-メチオニン／システインで生合成的にラベルし、
CD40-Ig又はCD7E-Ig で蛋白を免疫沈降させた。該免疫
沈降蛋白を SDS-PAGE 及び蛍光間接撮影法により解析し
た（図４）。39kDの見かけの分子量を持つ顕著なバンド
が、１及び10μg のCD40／サンプルで用量比例的に免疫
沈降した。対照として、抗- クラス I mabは 55kD のバ
ンド及び低分子量バンド、β2 ミクログロブリンを免疫
沈降した。 mabの非存在下では、顕著なバンドは見られ
なかった。39kDバンドは、125Iでベクターによりラベル
された活性化 Th からも免疫沈降され、このことは39kD
蛋白が膜蛋白であることを確証付けた。
現するかどうかを調べるために、休眠及び活性化（16時
間) Th 1 を CD40-Ig又はCD7E-Ig で染色した後、FITC
- 抗-HIgG で処理した。 CD40-Igの結合を流動血球計算
により評価した（図３）。抗-CD3で16時間活性化した T
h 1 は、休眠 Th 1 とは異なり、 CD40-Igで56％が染色
プラスを示したが、対照CD7E-Ig では染まらなかった。
CD40-Ig結合蛋白を同定するために、 Th 1 蛋白を
[35S]-メチオニン／システインで生合成的にラベルし、
CD40-Ig又はCD7E-Ig で蛋白を免疫沈降させた。該免疫
沈降蛋白を SDS-PAGE 及び蛍光間接撮影法により解析し
た（図４）。39kDの見かけの分子量を持つ顕著なバンド
が、１及び10μg のCD40／サンプルで用量比例的に免疫
沈降した。対照として、抗- クラス I mabは 55kD のバ
ンド及び低分子量バンド、β2 ミクログロブリンを免疫
沈降した。 mabの非存在下では、顕著なバンドは見られ
なかった。39kDバンドは、125Iでベクターによりラベル
された活性化 Th からも免疫沈降され、このことは39kD
蛋白が膜蛋白であることを確証付けた。
【００６７】休眠 Th に対して活性化 Th 上に選択的に
発現される抗原に特異的な mab類を、 Th 奏効器の相の
活性を左右する Th 分子（類）を同定するために開発し
た。そのようなmab の一つである MR1は、活性化 Th 1
上に選択的に発現される抗原を認識した。 MR1及び CD4
0-Igが同じ分子を認識するかどうかを調べるために、流
動血球計算及び遮蔽実験を行った。 CD40-Ig及び MR1は
活性化 Th を、それぞれ、およそ56％及び61％染色した
が、休眠 Th は染色しなかった（図5a）。 MR1は CD40-
Igでの活性化 Th の染色を用量比例的に遮蔽したが、他
のハムスター抗Ｔ細胞 mabである抗- α／β TCRは遮蔽
しなかった。これらのデータは CD40-Ig及び MR1が、39
kD Th 蛋白上の部分的に重複するか又は同一のエピトー
プを認識することを示唆した。 CD40-Ig及び MR1が同じ
分子を認識することをさらに証明するために、 MR1を結
合する抗原を、放射性同位元素でラベルした Th ライセ
ートからの蛋白を免疫沈降することによって同定した。
CD40-Ig及び MR1は両方とも39kD蛋白を免疫沈降した
（図5b）。最後に、39kD蛋白の CD40-Igとの免疫沈降
は、活性化 Th の放射性同位元素でラベルしたライセー
トから MR1によって認識される抗原を除去し、このこと
は MR1抗原及びCD40結合蛋白が同一であるという教義を
支持した。
発現される抗原に特異的な mab類を、 Th 奏効器の相の
活性を左右する Th 分子（類）を同定するために開発し
た。そのようなmab の一つである MR1は、活性化 Th 1
上に選択的に発現される抗原を認識した。 MR1及び CD4
0-Igが同じ分子を認識するかどうかを調べるために、流
動血球計算及び遮蔽実験を行った。 CD40-Ig及び MR1は
活性化 Th を、それぞれ、およそ56％及び61％染色した
が、休眠 Th は染色しなかった（図5a）。 MR1は CD40-
Igでの活性化 Th の染色を用量比例的に遮蔽したが、他
のハムスター抗Ｔ細胞 mabである抗- α／β TCRは遮蔽
しなかった。これらのデータは CD40-Ig及び MR1が、39
kD Th 蛋白上の部分的に重複するか又は同一のエピトー
プを認識することを示唆した。 CD40-Ig及び MR1が同じ
分子を認識することをさらに証明するために、 MR1を結
合する抗原を、放射性同位元素でラベルした Th ライセ
ートからの蛋白を免疫沈降することによって同定した。
CD40-Ig及び MR1は両方とも39kD蛋白を免疫沈降した
（図5b）。最後に、39kD蛋白の CD40-Igとの免疫沈降
は、活性化 Th の放射性同位元素でラベルしたライセー
トから MR1によって認識される抗原を除去し、このこと
は MR1抗原及びCD40結合蛋白が同一であるという教義を
支持した。
【００６８】この mabがPM Actによって発現される活性
を無効にするかどうかを扱うために、作用試験を MR1に
ついて行った。PM Act及びＢ細胞を単独で、又はハムス
ターmab類或いは CD40-Igの存在下で培養した。二種の
ハムスター mab、抗- α／βTCR及びα-CD3はPM Actに
よる休眠Ｂ細胞の活性化を阻害しなかった。対照的に、
MR1又は CD40-IgはＢ細胞活性化を阻害した（図６）。考察 データは、突出した Th 表面分子（LFA-1 、CD4 、ICAM
-1、CD3 、α／β TCR）の mabによる遮蔽は活性化 Th
のＢ細胞周期エントリーを誘導する能力を妨げなかった
ことを示している。対照的に、 CD40-Ig又はCD40結合蛋
白に特異的な mabは Th 依存性Ｂ細胞活性化を用量比例
的に遮蔽した。さらに、該CD40結合蛋白は、休眠 Th で
はなく、活性化 Th の膜上に選択的に発現される39kD蛋
白と同定された。 CD40-Ig及び 39kD CD40結合蛋白に特
異的な mabはPM ActによるＢ細胞活性化を遮蔽した。
を無効にするかどうかを扱うために、作用試験を MR1に
ついて行った。PM Act及びＢ細胞を単独で、又はハムス
ターmab類或いは CD40-Igの存在下で培養した。二種の
ハムスター mab、抗- α／βTCR及びα-CD3はPM Actに
よる休眠Ｂ細胞の活性化を阻害しなかった。対照的に、
MR1又は CD40-IgはＢ細胞活性化を阻害した（図６）。考察 データは、突出した Th 表面分子（LFA-1 、CD4 、ICAM
-1、CD3 、α／β TCR）の mabによる遮蔽は活性化 Th
のＢ細胞周期エントリーを誘導する能力を妨げなかった
ことを示している。対照的に、 CD40-Ig又はCD40結合蛋
白に特異的な mabは Th 依存性Ｂ細胞活性化を用量比例
的に遮蔽した。さらに、該CD40結合蛋白は、休眠 Th で
はなく、活性化 Th の膜上に選択的に発現される39kD蛋
白と同定された。 CD40-Ig及び 39kD CD40結合蛋白に特
異的な mabはPM ActによるＢ細胞活性化を遮蔽した。
【００６９】数多くの膜蛋白が Th 依存性Ｂ細胞シグナ
ル化との関係を取り沙汰されてきたが、ここに表した証
拠はいくつかの分子（LFA-1 、CD4 、CD3 、α／β TC
R、ICAM-1）の寄与を無いものとし、CD40を Th による
同種のシグナル化に対するＢ細胞レセプターとして関与
させる。データは、 CD40-Ig及びCD40結合蛋白に特異的
な mabは Th 依存性Ｂ細胞活性化を阻害することを示し
ている。
ル化との関係を取り沙汰されてきたが、ここに表した証
拠はいくつかの分子（LFA-1 、CD4 、CD3 、α／β TC
R、ICAM-1）の寄与を無いものとし、CD40を Th による
同種のシグナル化に対するＢ細胞レセプターとして関与
させる。データは、 CD40-Ig及びCD40結合蛋白に特異的
な mabは Th 依存性Ｂ細胞活性化を阻害することを示し
ている。
【００７０】CD40に対するリガンドは、活性化 Th 上に
は発現されるが休眠 Th 上には発現されない 39kD 蛋白
である。生化学実験は、電気泳動時の移動が還元剤によ
って影響を受けなかったことから、該 39kD 蛋白が一本
鎖分子であることを示している。この実験中になされた
作用試験に基づくと、活性化 Th 1 及び Th 2 は両方と
も 39kD CD40結合蛋白を発現する。これは、 Th 1 及び
Th 2 は両方ともＢ細胞周期エントリーを誘導すること
を示す作用試験に合致する。該 39kD 蛋白をさらに特徴
付けする企図で、 39kD の MW 範囲内のcDNAコード化 C
D 蛋白（CD53、CD27及びCD69）を COS細胞中に一時的に
トランスフェクションし、該細胞を CD40-Ig結合につい
て試験した。トランスフェクションされた COS細胞のい
ずれも、CD40-Igを結合する蛋白を発現しなかった。そ
れゆえに、 39kD 蛋白はこれらのCD 蛋白の一種ではな
いことが推測される。
は発現されるが休眠 Th 上には発現されない 39kD 蛋白
である。生化学実験は、電気泳動時の移動が還元剤によ
って影響を受けなかったことから、該 39kD 蛋白が一本
鎖分子であることを示している。この実験中になされた
作用試験に基づくと、活性化 Th 1 及び Th 2 は両方と
も 39kD CD40結合蛋白を発現する。これは、 Th 1 及び
Th 2 は両方ともＢ細胞周期エントリーを誘導すること
を示す作用試験に合致する。該 39kD 蛋白をさらに特徴
付けする企図で、 39kD の MW 範囲内のcDNAコード化 C
D 蛋白（CD53、CD27及びCD69）を COS細胞中に一時的に
トランスフェクションし、該細胞を CD40-Ig結合につい
て試験した。トランスフェクションされた COS細胞のい
ずれも、CD40-Igを結合する蛋白を発現しなかった。そ
れゆえに、 39kD 蛋白はこれらのCD 蛋白の一種ではな
いことが推測される。
【００７１】Th 及びＢ細胞の間のシグナル形質導入に
対する生化学的論拠は分かりにくかった。Ｔ細胞援助の
ためのシグナル形質導入分子としてのCD40の同定は、該
CD40分子に連合することが知られている特定の生化学経
路に注意を集中させる。CD40は、その細胞外領域中の４
個のシステインリッチモチーフの存在によって、神経成
長因子レセプター（NGFR）族の一員である。 mabによる
CD40を通じてのシグナル化は、チロシンキナーゼの活性
化を含み、その結果、トリスリン酸イノシトールの産生
を増加させ、最低４個の別個のセリン／スレオニンキナ
ーゼを活性化させることが示されている（ユークンら
（Uckun et al.) 、ジャーナル・オブ・バイオロジカル
・ケミストリィ（J. Biol. Chem.）、266 巻、第17478-
17485 頁、1991年）。該 NGFレセプター族の他のメンバ
ーを通じてのシグナル化から得られ情報に基づくと、活
性化 Th 及びＢ細胞の間の相互作用は同じ生化学過程の
うちの多くを結果としてもたらすことが予想される。実施例２ 免疫蛍光法結合試験のために、CD40 Ig 融合蛋白をビオ
チン−スクシニミド（シグマ社）を用いてビオチンと共
役化させた。流動血球計算分析をその後、コールターエ
ピックスＣ装置によりフィコエリスリン（PE）−ストレ
パビジン（ベクチン−ディキンソン社）を用いた二段階
染色によって行った。複数のＴ細胞株をスクリーニング
した代表的な結果を以下に表す。ジャーカット及びHSB2
細胞株は特異的に結合することが見出されたが、CEM 、
HPBALL、及びネズミ胸腺腫を含む他のＴ細胞株はCD40 I
g 融合蛋白を結合しなかった（図７）。
対する生化学的論拠は分かりにくかった。Ｔ細胞援助の
ためのシグナル形質導入分子としてのCD40の同定は、該
CD40分子に連合することが知られている特定の生化学経
路に注意を集中させる。CD40は、その細胞外領域中の４
個のシステインリッチモチーフの存在によって、神経成
長因子レセプター（NGFR）族の一員である。 mabによる
CD40を通じてのシグナル化は、チロシンキナーゼの活性
化を含み、その結果、トリスリン酸イノシトールの産生
を増加させ、最低４個の別個のセリン／スレオニンキナ
ーゼを活性化させることが示されている（ユークンら
（Uckun et al.) 、ジャーナル・オブ・バイオロジカル
・ケミストリィ（J. Biol. Chem.）、266 巻、第17478-
17485 頁、1991年）。該 NGFレセプター族の他のメンバ
ーを通じてのシグナル化から得られ情報に基づくと、活
性化 Th 及びＢ細胞の間の相互作用は同じ生化学過程の
うちの多くを結果としてもたらすことが予想される。実施例２ 免疫蛍光法結合試験のために、CD40 Ig 融合蛋白をビオ
チン−スクシニミド（シグマ社）を用いてビオチンと共
役化させた。流動血球計算分析をその後、コールターエ
ピックスＣ装置によりフィコエリスリン（PE）−ストレ
パビジン（ベクチン−ディキンソン社）を用いた二段階
染色によって行った。複数のＴ細胞株をスクリーニング
した代表的な結果を以下に表す。ジャーカット及びHSB2
細胞株は特異的に結合することが見出されたが、CEM 、
HPBALL、及びネズミ胸腺腫を含む他のＴ細胞株はCD40 I
g 融合蛋白を結合しなかった（図７）。
【００７２】種々の出版物をここに引用したが、それら
はことごとく参考文献としてこれに組み込まれるもので
ある。
はことごとく参考文献としてこれに組み込まれるもので
ある。
【図１】PMAct によるＢ細胞 RNA合成の誘導におけるモ
ノクローナル抗体及びCD40-Igの作用を表した図であ
る。
ノクローナル抗体及びCD40-Igの作用を表した図であ
る。
【図２】CD40-Ig によるＢ細胞分化及び増殖の阻害を表
した図である。
した図である。
【図３】CD40-Ig の Th への結合を表した図である。
【図４】Th からの[35S]-ラベル化蛋白の免疫沈降の結
果を表した図である。
果を表した図である。
【図５】Ig又は融合蛋白のＢ細胞 RNA合成に対する作用
を表した図である。
を表した図である。
【図６】MR1及びCD40-Ig の分子の認識を比較した実験
の結果を表した図である。
の結果を表した図である。
【図７】CD40-Ig のヒト細胞株への結合を表した図であ
る。
る。
【図８】CD40 cDNA のヌクレオチド配列を表す図であ
る。
る。
【図９】CD40 cDNA のヌクレオチド配列を表す図であ
る。
る。
【図10】CD40-Ig を発現させるために用いることができ
るプラスミドの概略図である。
るプラスミドの概略図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (71)出願人 593030233 トラスティーズ オブ ダートマス カレ ッジ ディー ビー エイ ダートマス カレッジ アメリカ合衆国 ニューハンプシャー州 03755 ハノーヴァー （番地なし) (71)出願人 593030244 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイ ション ディー ビー エイ マサチュー セッツ ジェネラル ホスピタル アメリカ合衆国 マサチューセッツ州 02114 ボストン フルート ストリート 55 (72)発明者 アレジャンドロ エイ アルッフォ アメリカ合衆国 ワシントン州 98020 エドモンズ スプラース ストリート 1012 (72)発明者 ジェフリー エイ レドベッター アメリカ合衆国 ワシントン州 98177 シアトル ノースウェスト ワンハンドレ ッドアンドサーティンス プレイス 306 (72)発明者 ランドルフ ノエル アメリカ合衆国 ニューハンプシャー州 03781 プレインフィールド フリーマン ヒル ロード （番地なし) (72)発明者 イーヴァン スタメンコヴィック アメリカ合衆国 マサチューセッツ州 02146 ブルックリン バブコック スト リート 59
Claims (41)
- 【請求項１】 実質的に精製されたCD40CRレセプター。
- 【請求項２】 約39キロダルトンの分子量を持つ、請求
項１記載の実質的に精製されたレセプター。 - 【請求項３】 CD40-Ig に結合する、請求項１記載の実
質的に精製されたレセプター。 - 【請求項４】 モノクローナル抗体 MR1に結合する、請
求項１記載の実質的に精製されたレセプター。 - 【請求項５】 CD40蛋白の少なくとも一部分を含む、CD
40CRに対する可溶性リガンド。 - 【請求項６】 膜内外ドメインを欠くCD40蛋白の一部分
を含む、請求項５記載の可溶性リガンド。 - 【請求項７】 免疫グロブリン分子の少なくとも一部分
をさらに含む、請求項５又は６記載の可溶性リガンド。 - 【請求項８】 CD40-Ig である、請求項５記載の可溶性
リガンド。 - 【請求項９】 免疫グロブリン分子の少なくとも一部分
を含む、CD40CRに対する可溶性リガンド。 - 【請求項１０】 当該免疫グロブリン分子がCD40のCD40
CRに対する結合を拮抗阻害することができる、請求項９
記載の可溶性リガンド。 - 【請求項１１】 当該免疫グロブリン分子がモノクロー
ナル抗体 MR1のその標的抗原に対する結合を拮抗阻害す
ることができる、請求項９記載の可溶性リガンド。 - 【請求項１２】 抗増殖剤である第二分子をさらに含
む、請求項９〜１１のいずれかに記載の可溶性リガン
ド。 - 【請求項１３】 アルキル化剤である第二分子をさらに
含む、請求項９〜１１のいずれかに記載の可溶性リガン
ド。 - 【請求項１４】 代謝拮抗物質である第二分子をさらに
含む、請求項９〜１１のいずれかに記載の可溶性リガン
ド。 - 【請求項１５】 抗生剤である第二分子をさらに含む、
請求項９〜１１のいずれかに記載の可溶性リガンド。 - 【請求項１６】 ビンカアルカロイドである第二分子を
さらに含む、請求項９〜１１のいずれかに記載の可溶性
リガンド。 - 【請求項１７】 酵素である第二分子をさらに含む、請
求項９〜１１のいずれかに記載の可溶性リガンド。 - 【請求項１８】 プラチナ配位化合物である第二分子を
さらに含む、請求項９〜１１のいずれかに記載の可溶性
リガンド。 - 【請求項１９】 放射性同位元素である第二分子をさら
に含む、請求項９〜１１のいずれかに記載の可溶性リガ
ンド。 - 【請求項２０】 蛍光化合物である第二分子をさらに含
む、請求項９〜１１のいずれかに記載の可溶性リガン
ド。 - 【請求項２１】 モノクローナル抗体 MR1、又はその断
片。 - 【請求項２２】 CD40CRに結合する有効濃度のリガンド
にＢ細胞及びヘルパーＴ細胞の混合物をさらすことを含
む、Ｂ細胞活性化を阻害する方法。 - 【請求項２３】 当該リガンドがCD40蛋白の少なくとも
一部分を含む、請求項22記載の方法。 - 【請求項２４】 当該リガンドが膜内外ドメインを欠く
CD40蛋白の一部分を含む、請求項２２記載の方法。 - 【請求項２５】 当該リガンドが免疫グロブリン分子の
少なくとも一部分をさらに含む、請求項２３又は２４記
載の方法。 - 【請求項２６】 当該リガンドがCD40-Ig である、請求
項２２記載の方法。 - 【請求項２７】 当該リガンドが免疫グロブリン分子の
少なくとも一部分を含む、請求項２２記載の方法。 - 【請求項２８】 当該免疫グロブリン分子がCD40のCD40
CRに対する結合を拮抗阻害することができる、請求項２
７記載の方法。 - 【請求項２９】 当該免疫グロブリン分子がモノクロー
ナル抗体 MR1のその標的抗原に対する結合を拮抗阻害す
ることができる、請求項２７記載の方法。 - 【請求項３０】 Ｂ細胞活性化が関連する疾病を患う対
象を治療する方法であって、該対象に治療用量の、 CD4
0CR に結合するリガンドを投与することを含む方法。 - 【請求項３１】 当該疾病がアレルギーである、請求項
３０記載の方法。 - 【請求項３２】 当該疾病が自己免疫疾患である、請求
項３０記載の方法。 - 【請求項３３】 当該リガンドがCD40蛋白の少なくとも
一部分を含む、請求項３０記載の方法。 - 【請求項３４】 当該リガンドが膜内外ドメインを欠く
CD40蛋白の一部分を含む、請求項３０記載の方法。 - 【請求項３５】 当該リガンドが免疫グロブリン分子の
少なくとも一部分をさらに含む、請求項３３又は３４記
載の方法。 - 【請求項３６】 当該リガンドがCD40-Ig である、請求
項３０記載の方法。 - 【請求項３７】 当該リガンドが免疫グロブリン分子の
少なくとも一部分を含む、請求項３０記載の方法。 - 【請求項３８】 当該免疫グロブリン分子がCD40のCD40
CRに対する結合を拮抗阻害することができる、請求項３
７記載の方法。 - 【請求項３９】 当該免疫グロブリン分子がモノクロー
ナル抗体 MR1のその標的抗原に対する結合を拮抗阻害す
ることができる、請求項３７記載の方法。 - 【請求項４０】 適当な医薬用担体の中にCD40-Ig を含
む、医薬用組成物。 - 【請求項４１】 適当な医薬用担体の中にモノクローナ
ル抗体 MR1又はその断片を含む、医薬用組成物。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US83579992A | 1992-02-14 | 1992-02-14 | |
| US07/835799 | 1992-02-14 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2003356578A Division JP3984944B2 (ja) | 1992-02-14 | 2003-10-16 | Ｃｄ４０ｃｒレセプター及びそれに対するリガンド |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06220096A true JPH06220096A (ja) | 1994-08-09 |
| JP4148537B2 JP4148537B2 (ja) | 2008-09-10 |
Family
ID=25270498
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP02553093A Expired - Lifetime JP4148537B2 (ja) | 1992-02-14 | 1993-02-15 | Ｃｄ４０ｃｒレセプター及びそれに対するリガンド |
| JP2003356578A Expired - Lifetime JP3984944B2 (ja) | 1992-02-14 | 2003-10-16 | Ｃｄ４０ｃｒレセプター及びそれに対するリガンド |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2003356578A Expired - Lifetime JP3984944B2 (ja) | 1992-02-14 | 2003-10-16 | Ｃｄ４０ｃｒレセプター及びそれに対するリガンド |
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|---|---|
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| KR (1) | KR100301146B1 (ja) |
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| AU (2) | AU3298893A (ja) |
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| NO (1) | NO316024B1 (ja) |
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| ZA (1) | ZA931013B (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| US7405270B2 (en) | 1991-10-25 | 2008-07-29 | Immunex Corporation | CD40-Ligand lacking native-pattern glycosylation |
| US5962406A (en) * | 1991-10-25 | 1999-10-05 | Immunex Corporation | Recombinant soluble CD40 ligand polypeptide and pharmaceutical composition containing the same |
| US5981724A (en) | 1991-10-25 | 1999-11-09 | Immunex Corporation | DNA encoding CD40 ligand, a cytokine that binds CD40 |
| ES2198025T3 (es) * | 1991-10-25 | 2004-01-16 | Immunex Corporation | Anticuerpos contra cd40-l. |
| US5474771A (en) | 1991-11-15 | 1995-12-12 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Murine monoclonal antibody (5c8) recognizes a human glycoprotein on the surface of T-lymphocytes, compositions containing same |
| US7070777B1 (en) * | 1991-11-15 | 2006-07-04 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Method for inhibiting inflammation with an antibody that binds the 5C8 protein |
| IL104684A0 (en) | 1992-02-14 | 1993-06-10 | Bristol Myers Squibb Co | The cd40cr receptor and ligands therefor |
| US5874082A (en) * | 1992-07-09 | 1999-02-23 | Chiron Corporation | Humanized anti-CD40 monoclonal antibodies and fragments capable of blocking B cell proliferation |
| US5397703A (en) | 1992-07-09 | 1995-03-14 | Cetus Oncology Corporation | Method for generation of antibodies to cell surface molecules |
| AU5098493A (en) * | 1992-08-21 | 1994-03-15 | Schering Corporation | Cd40 ligand, anti cd40 antibodies, and soluble cd40 |
| US5540926A (en) * | 1992-09-04 | 1996-07-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Soluble and its use in B cell stimulation |
| ZA946765B (en) | 1993-09-02 | 1996-02-15 | Dartmouth College | Methods of prolonged suppression of humoral immunity |
| US5869049A (en) * | 1993-09-02 | 1999-02-09 | Trustees Of Dartmouth College | Methods of inducing T cell unresponsiveness to bone marrow with gp39 antagonists |
| ES2143553T3 (es) * | 1993-09-02 | 2000-05-16 | Dartmouth College | Anticuerpos anti-gp39 y sus utilizaciones. |
| NZ273208A (en) * | 1993-09-02 | 2000-12-22 | Dartmouth College | Suppressing a humoral immune response against a thymus dependant (TD) antigen |
| WO1995014487A1 (en) * | 1993-11-24 | 1995-06-01 | The Australian National University | Treatment of viral disease with cd40l peptide |
| US5683693A (en) * | 1994-04-25 | 1997-11-04 | Trustees Of Dartmouth College | Method for inducing T cell unresponsiveness to a tissue or organ graft with anti-CD40 ligand antibody or soluble CD40 |
| ATE309267T1 (de) | 1994-04-28 | 2005-11-15 | Boehringer Ingelheim Pharma | Methode zur proliferation und differenzierung von b-zellen und verwendungen dafür |
| US5876950A (en) * | 1995-01-26 | 1999-03-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Monoclonal antibodies specific for different epitopes of human GP39 and methods for their use in diagnosis and therapy |
| US6251957B1 (en) | 1995-02-24 | 2001-06-26 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method of reducing an immune response to a recombinant virus |
| US5652224A (en) * | 1995-02-24 | 1997-07-29 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods and compositions for gene therapy for the treatment of defects in lipoprotein metabolism |
| US5872154A (en) * | 1995-02-24 | 1999-02-16 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method of reducing an immune response to a recombinant adenovirus |
| US6372208B1 (en) | 1999-09-28 | 2002-04-16 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method of reducing an immune response to a recombinant virus |
| AU2556195A (en) | 1995-03-13 | 1996-10-02 | Regents Of The University Of Michigan, The | CD40 binding compositions and methods of using same |
| US7429646B1 (en) | 1995-06-05 | 2008-09-30 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies to human tumor necrosis factor receptor-like 2 |
| US7427492B1 (en) | 1995-06-05 | 2008-09-23 | Human Genome Sciences, Inc. | Polynucleotides encoding human tumor necrosis factor receptor-like2 |
| US7175847B1 (en) | 1995-06-07 | 2007-02-13 | Biogen Idec Inc. | Treating intestinal inflammation with anti-CD80 antibodies that do not inhibit CD80 binding to CTLA-4 |
| US6113898A (en) | 1995-06-07 | 2000-09-05 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies |
| US7153508B2 (en) | 1995-06-07 | 2006-12-26 | Biogen Idec Inc. | Treatment of B cell lymphoma using anti-CD80 antibodies that do not inhibit the binding of CD80 to CTLA-4 |
| US5833987A (en) * | 1995-06-07 | 1998-11-10 | Trustees Of Dartmouth College | Treatment of T cell mediated autoimmune disorders |
| WO1997000895A1 (en) * | 1995-06-22 | 1997-01-09 | Biogen, Inc. | Crystals of fragments of cd40 ligand and their use |
| US6001358A (en) | 1995-11-07 | 1999-12-14 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Humanized antibodies to human gp39, compositions containing thereof |
| US6440418B1 (en) | 1995-11-07 | 2002-08-27 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Methods of treating autoimmune diseases with gp39-specific antibodies |
| EP0892643B2 (en) * | 1996-03-20 | 2009-09-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for inhibiting an immune response by blocking the gp39/cd40 and ctla4/cd28/b7 pathways and compositions for use therewith |
| WO1998001145A1 (en) * | 1996-07-08 | 1998-01-15 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Therapeutic applications of t-bam (cd40l) technology to treat diseases involving smooth muscle cells |
| EP1005372B1 (en) | 1997-06-20 | 2002-01-02 | Tanox Pharma B.V. | Anti-cd40l immunotoxins for the treatment of diseases |
| CA2223225A1 (en) * | 1997-11-28 | 1999-05-28 | Canadian Red Cross Society | Method for inhibiting in vivo immune response |
| JP2002510643A (ja) * | 1998-04-03 | 2002-04-09 | トラスティーズ・オブ・ダートマス・カレッジ | 狼瘡およびその関連腎臓疾患の治療および／または後退のための抗−ｇｐ３９抗体の使用 |
| IL130989A0 (en) * | 1999-07-20 | 2001-01-28 | Compugen Ltd | Variants of alternative splicing |
| AU2001251612A1 (en) | 2000-04-14 | 2001-10-30 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Roles of jak/stat family members in tolerance induction |
| EP1322383B9 (en) | 2000-10-02 | 2006-09-06 | Chiron Corporation | Methods of therapy for b-cell malignancies using antagonist anti-cd40 antibodies |
| US7767643B2 (en) | 2000-12-29 | 2010-08-03 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Protection, restoration, and enhancement of erythropoietin-responsive cells, tissues and organs |
| US7829084B2 (en) | 2001-01-17 | 2010-11-09 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding constructs and methods for use thereof |
| US20030133939A1 (en) * | 2001-01-17 | 2003-07-17 | Genecraft, Inc. | Binding domain-immunoglobulin fusion proteins |
| US7754208B2 (en) | 2001-01-17 | 2010-07-13 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding domain-immunoglobulin fusion proteins |
| US20020159996A1 (en) | 2001-01-31 | 2002-10-31 | Kandasamy Hariharan | Use of CD23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders |
| US20040058445A1 (en) * | 2001-04-26 | 2004-03-25 | Ledbetter Jeffrey Alan | Activation of tumor-reactive lymphocytes via antibodies or genes recognizing CD3 or 4-1BB |
| WO2003070768A2 (en) * | 2002-02-22 | 2003-08-28 | Compugen Ltd. | Cd40 splice variants,method of detection thereof, compositions comprising said variant(s) or nucleic acid encoding the same and use thereof |
| US20080199471A1 (en) * | 2002-03-01 | 2008-08-21 | Bernett Matthew J | Optimized cd40 antibodies and methods of using the same |
| US20030219436A1 (en) * | 2002-03-15 | 2003-11-27 | Ledbetter Jeffrey A. | Compositions and methods to regulate an immune response using CD83 gene expressed in tumors and using soluble CD83-Ig fusion protein |
| WO2003086458A1 (en) | 2002-04-12 | 2003-10-23 | Medimmune, Inc. | Recombinant anti-interleukin-9 antibodies |
| US7132100B2 (en) | 2002-06-14 | 2006-11-07 | Medimmune, Inc. | Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations |
| US7425618B2 (en) | 2002-06-14 | 2008-09-16 | Medimmune, Inc. | Stabilized anti-respiratory syncytial virus (RSV) antibody formulations |
| AU2004229501B2 (en) | 2003-04-11 | 2011-08-18 | Medimmune, Llc | Recombinant IL-9 antibodies and uses thereof |
| US7754209B2 (en) | 2003-07-26 | 2010-07-13 | Trubion Pharmaceuticals | Binding constructs and methods for use thereof |
| WO2005032467A2 (en) | 2003-09-29 | 2005-04-14 | Warren Pharmaceuticals, Inc. | Tissue protective cytokines for the treatment and prevention of sepsis and the formation of adhesions |
| US20050136055A1 (en) * | 2003-12-22 | 2005-06-23 | Pfizer Inc | CD40 antibody formulation and methods |
| US7351739B2 (en) | 2004-04-30 | 2008-04-01 | Wellgen, Inc. | Bioactive compounds and methods of uses thereof |
| AU2005287406B2 (en) | 2004-07-26 | 2011-08-18 | Biogen Ma Inc. | Anti-CD154 antibodies |
| CA2585717A1 (en) | 2004-10-27 | 2006-05-04 | Medimmune Inc. | Modulation of antibody specificity by tailoring the affinity to cognate antigens |
| US20060148080A1 (en) * | 2004-12-30 | 2006-07-06 | Paul Diamond | Methods for supporting and producing human cells and tissues in non-human mammal hosts |
| RU2423381C2 (ru) * | 2005-07-25 | 2011-07-10 | Трабьон Фармасьютикалз, Инк. | Снижение количества в-клеток с использованием cd37-специфических и cd20-специфических связывающих молекул |
| NZ573646A (en) | 2006-06-12 | 2012-04-27 | Wyeth Llc | Single-chain multivalent binding proteins with effector function |
| US20090074711A1 (en) * | 2006-09-07 | 2009-03-19 | University Of Southhampton | Human therapies using chimeric agonistic anti-human cd40 antibody |
| WO2009023816A1 (en) * | 2007-08-15 | 2009-02-19 | Emory University | Methods of making monoclonal antibodies using fusion- peptide epitope adoptive transfer (f-peat) technology |
| RU2531754C2 (ru) | 2008-04-11 | 2014-10-27 | ЭМЕРДЖЕНТ ПРОДАКТ ДИВЕЛОПМЕНТ СИЭТЛ,ЭлЭлСи,US | Связывающееся с cd37 иммунотерапевтическое средство и его комбинация с бифункциональным химиотерапевтическим средством |
| MX2011005691A (es) | 2008-11-28 | 2011-07-20 | Univ Emory | Metodos para el tratamiento de infecciones y tumores. |
| HUE038848T2 (hu) | 2011-04-21 | 2018-11-28 | Bristol Myers Squibb Co | CD40-antagonista antitest polipeptidek |
| EP3113796A1 (en) | 2014-03-07 | 2017-01-11 | Bristol-Myers Squibb Company | Method of using antibody polypeptides that antagonize cd40 to treat ibd |
| MA41459A (fr) | 2015-02-03 | 2017-12-12 | Als Therapy Development Inst | Anticorps anti-cd40l et méthodes pour traiter des maladies ou des troubles liés aux cd40l |
| WO2017053469A2 (en) | 2015-09-21 | 2017-03-30 | Aptevo Research And Development Llc | Cd3 binding polypeptides |
| AU2018231405B2 (en) * | 2017-03-07 | 2024-02-08 | Universität Basel | MR1 restricted T cell receptors for cancer immunotherapy |
| KR102840867B1 (ko) | 2017-05-24 | 2025-07-30 | 에이엘에스 테라피 디벨럽먼트 인스티튜트 | 치료용 항-cd40 리간드 항체 |
| WO2018222506A1 (en) * | 2017-05-27 | 2018-12-06 | Immune-Onc Therapeutics, Inc. | Modulation of immunoglobulin-a-positive cells |
| WO2024211211A1 (en) | 2023-04-03 | 2024-10-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of improving transplant survival using il-2 receptor gamma chain antibodies |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5672347A (en) * | 1984-07-05 | 1997-09-30 | Genentech, Inc. | Tumor necrosis factor antagonists and their use |
| US5247069A (en) * | 1986-06-13 | 1993-09-21 | Oncogen | Ligands and methods for augmenting B-cell proliferation |
| DE3815472A1 (de) * | 1988-05-06 | 1989-11-16 | Centre Regional De Transfusion | Monoklonaler antikoerper und seine verwendung |
| CA2580812A1 (en) * | 1991-06-27 | 1993-01-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Ctla4 receptor, fusion proteins containing it and uses thereof |
| US5474771A (en) * | 1991-11-15 | 1995-12-12 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Murine monoclonal antibody (5c8) recognizes a human glycoprotein on the surface of T-lymphocytes, compositions containing same |
| IL104684A0 (en) | 1992-02-14 | 1993-06-10 | Bristol Myers Squibb Co | The cd40cr receptor and ligands therefor |
| US5876950A (en) | 1995-01-26 | 1999-03-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Monoclonal antibodies specific for different epitopes of human GP39 and methods for their use in diagnosis and therapy |
| US5833987A (en) * | 1995-06-07 | 1998-11-10 | Trustees Of Dartmouth College | Treatment of T cell mediated autoimmune disorders |
| US6001358A (en) | 1995-11-07 | 1999-12-14 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Humanized antibodies to human gp39, compositions containing thereof |
| CN1247472A (zh) | 1997-01-10 | 2000-03-15 | 拜奥根有限公司 | 用抗cd40l化合物治疗狼疮性肾炎 |
| WO1998039026A2 (en) | 1997-03-07 | 1998-09-11 | Biogen, Inc. | Methods of therapeutic administration of anti-cd40l compounds |
| WO1999000143A1 (en) | 1997-06-27 | 1999-01-07 | Biogen, Inc. | Cd154 blockade therapy for autoimmune diseases |
-
1993
- 1993-02-10 IL IL104684A patent/IL104684A0/xx not_active IP Right Cessation
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