JPH06229994A - 静電気イオンクロマトグラフィーによる分析体の分離・分析方法、イオンクロマトグラフィー用両荷電具備固定相及び多機能液体クロマトグラフィーによる分析体の分離・分析方法 - Google Patents
静電気イオンクロマトグラフィーによる分析体の分離・分析方法、イオンクロマトグラフィー用両荷電具備固定相及び多機能液体クロマトグラフィーによる分析体の分離・分析方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 溶離液として水を使用でき、且つ陰陽イオン
のみならず、アミノ酸、蛋白質をも同時に容易に分離分
析できる静電気イオン（液体）クロマトグラフィーによ
るイオン分析方法及びこれに用いられる両荷電具備固定
相を提供する。 【構成】 分離カラム内に充填された固定相の一端側
に、複数の分析物質を有する試料液を注入し、その後溶
離液を展開させて各分析物質の保持時間の相違を以て各
分析成分を分析する方法において、固定相としては、多
孔性シリカゲルの支持担体１１と、この表面にオクタデ
シルシランを反応させて得られる疎水性層１２と、疎水
性層の表面に、陽及び陰の両荷電部（アンモニウム塩部
若しくはアミド部等、及びスルホン酸イオン部若しくは
カルボン酸イオン部等）を備える化合物が被覆形成され
る両荷電層１３と、からなる両荷電具備固定相１を用
い、所定の分離イオンを紫外線法或いは電気伝導度法等
にて検出する。
のみならず、アミノ酸、蛋白質をも同時に容易に分離分
析できる静電気イオン（液体）クロマトグラフィーによ
るイオン分析方法及びこれに用いられる両荷電具備固定
相を提供する。 【構成】 分離カラム内に充填された固定相の一端側
に、複数の分析物質を有する試料液を注入し、その後溶
離液を展開させて各分析物質の保持時間の相違を以て各
分析成分を分析する方法において、固定相としては、多
孔性シリカゲルの支持担体１１と、この表面にオクタデ
シルシランを反応させて得られる疎水性層１２と、疎水
性層の表面に、陽及び陰の両荷電部（アンモニウム塩部
若しくはアミド部等、及びスルホン酸イオン部若しくは
カルボン酸イオン部等）を備える化合物が被覆形成され
る両荷電層１３と、からなる両荷電具備固定相１を用
い、所定の分離イオンを紫外線法或いは電気伝導度法等
にて検出する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、静電気イオンクロマト
グラフィーによる分析体の分離・分析方法及びこれに用
いられる両荷電具備固定相に関し、更に詳しく言えば、
固定相の陰陽両荷電相からの静電気の吸引・反撥力を利
用して分析イオンの分離・分析を行う方法に関する。更
に、他の本発明は、多機能液体クロマトグラフィーによ
る分析体の分離・分析方法に関し、更に詳しくは、螺旋
型の両性イオン物質からなる被覆層を有する固定相を用
いて、イオンの分離のみならず、鏡像異性体の分離もで
き、またタンパク質のような大きな有機化合物の迅速な
分離もでき、更に、イオン（無機陽イオン、無機陰イオ
ン、アミノ酸のような有機イオン）及びタンパク質のよ
うな有機化合物等の同時分離をもできる方法に関する。
本発明は、物質の定性分析、定量分析又は分離された成
分の分取、更に特定患者のみに認められるクロマトグラ
ムピークの存在による病気診断等に利用される。
グラフィーによる分析体の分離・分析方法及びこれに用
いられる両荷電具備固定相に関し、更に詳しく言えば、
固定相の陰陽両荷電相からの静電気の吸引・反撥力を利
用して分析イオンの分離・分析を行う方法に関する。更
に、他の本発明は、多機能液体クロマトグラフィーによ
る分析体の分離・分析方法に関し、更に詳しくは、螺旋
型の両性イオン物質からなる被覆層を有する固定相を用
いて、イオンの分離のみならず、鏡像異性体の分離もで
き、またタンパク質のような大きな有機化合物の迅速な
分離もでき、更に、イオン（無機陽イオン、無機陰イオ
ン、アミノ酸のような有機イオン）及びタンパク質のよ
うな有機化合物等の同時分離をもできる方法に関する。
本発明は、物質の定性分析、定量分析又は分離された成
分の分取、更に特定患者のみに認められるクロマトグラ
ムピークの存在による病気診断等に利用される。
【０００２】
【従来の技術】イオンの分析（分離）方法としては、イ
オン交換樹脂固定相を用いたイオンクロマトグラフィー
が知られている。このイオンクロマトグラフィーとし
て、イオン交換法（Anal. Chem. 1975, 47, 1801-180
9)、イオン排除法(Anal. Chem. 1989, 61, 1485-1489)
、イオン相互作用法(Anal. Chem. 1982, 54, 2601-260
3, Anal. Chem. 1986, 58, 2226-2233)、コロイド粒子
除外法(Anal. Chem. 1988, 60,1511-1516) 、電気泳動
クロマトグラフィー(J.Chromatog. 51(1970), 339-34
2)、及び逆相クロマトグラフィーとイオン排除法との組
合せ法（特開平４−１１０６５７号公報）等が知られて
いる。
オン交換樹脂固定相を用いたイオンクロマトグラフィー
が知られている。このイオンクロマトグラフィーとし
て、イオン交換法（Anal. Chem. 1975, 47, 1801-180
9)、イオン排除法(Anal. Chem. 1989, 61, 1485-1489)
、イオン相互作用法(Anal. Chem. 1982, 54, 2601-260
3, Anal. Chem. 1986, 58, 2226-2233)、コロイド粒子
除外法(Anal. Chem. 1988, 60,1511-1516) 、電気泳動
クロマトグラフィー(J.Chromatog. 51(1970), 339-34
2)、及び逆相クロマトグラフィーとイオン排除法との組
合せ法（特開平４−１１０６５７号公報）等が知られて
いる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、上記イオン交
換クロマトグラフィーでは、イオン交換カラムから分析
イオンを置換するために移動相（溶離液）にイオンが含
まれていなければならないし、異種イオンを同時に分析
できない。また、逆相・イオン排除の組合せ法において
も、イオン交換クロマトグラフィーと同欠点があり、し
かも組合せの複雑さがある。更に、その他のイオンクロ
マトグラフィーでは特別な試薬が必要とされるし、上記
電気泳動クロマトグラフィーでは、電圧を加えることが
必要になる。また、従来の液体クロマトグラフィーによ
れば、無機の陽イオン、陰イオン及び有機化合物（アミ
ノ酸及び蛋白質等）の同時分離を達成することはできな
い。
換クロマトグラフィーでは、イオン交換カラムから分析
イオンを置換するために移動相（溶離液）にイオンが含
まれていなければならないし、異種イオンを同時に分析
できない。また、逆相・イオン排除の組合せ法において
も、イオン交換クロマトグラフィーと同欠点があり、し
かも組合せの複雑さがある。更に、その他のイオンクロ
マトグラフィーでは特別な試薬が必要とされるし、上記
電気泳動クロマトグラフィーでは、電圧を加えることが
必要になる。また、従来の液体クロマトグラフィーによ
れば、無機の陽イオン、陰イオン及び有機化合物（アミ
ノ酸及び蛋白質等）の同時分離を達成することはできな
い。
【０００４】本発明は、上記欠点を克服するものであ
り、溶離液として水を使用でき、且つ陰イオン及び陽イ
オンの一方の分析イオンのみならずその両方の分析イオ
ンをも同時に容易に分離分析できる静電気イオンクロマ
トグラフィーによる分析体の分離・分析方法、及びこれ
に用いられる両荷電具備固定相を提供することを目的と
する。更に、本発明は、イオンの分離のみならず、鏡像
異性体の分離もでき、またタンパク質のような大きな有
機化合物の迅速な分離もでき、更に、イオン（無機陽イ
オン、無機陰イオン、アミノ酸のような有機イオン）及
びタンパク質のような有機化合物等の同時分離をもでき
る方法を提供することを目的とする。
り、溶離液として水を使用でき、且つ陰イオン及び陽イ
オンの一方の分析イオンのみならずその両方の分析イオ
ンをも同時に容易に分離分析できる静電気イオンクロマ
トグラフィーによる分析体の分離・分析方法、及びこれ
に用いられる両荷電具備固定相を提供することを目的と
する。更に、本発明は、イオンの分離のみならず、鏡像
異性体の分離もでき、またタンパク質のような大きな有
機化合物の迅速な分離もでき、更に、イオン（無機陽イ
オン、無機陰イオン、アミノ酸のような有機イオン）及
びタンパク質のような有機化合物等の同時分離をもでき
る方法を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記目的を
達成するために、正負両電荷を有する固定相からの静電
気反撥・吸引力を分析体の分離用に利用することを、種
々鋭意検討した結果、本発明を完成するに至ったのであ
る。即ち、本発明の静電気イオンクロマトグラフィーに
よる分析体の分離・分析方法（以下、単に本イオン等の
分離・分析方法又は本分離・分析方法という。）は、分
離カラム内に充填された固定相の一端側に、複数の分析
イオンを有する試料液を注入し、その後、溶離液を展開
させて各分析イオンの保持時間の相違を以て各分析イオ
ンを分析する静電気イオンクロマトグラフィーによるイ
オン等の分離・分析方法において、上記固定相として
は、支持担体と、該支持担体の表面上に、直接に又は間
接に、陽及び陰の両荷電部を有する化合物が被覆されて
形成される両荷電層と、を備える両荷電具備固定相を用
いたことを特徴とする。尚、ここで「分析体の分離・分
析方法」は、各分析体を分離し、この分離された成分等
を検出して分析する場合のみならず、この分離された各
成分等を分取する場合も含まれる意味に用いられる。他
の発明で用いている「分析体の分離・分析方法」の意味
についても、上記と同意味に用いられる。更に、他の発
明のイオンクロマトグラフィー用両荷電具備固定相（以
下、単に両荷電具備固定相という。）は、上記に示す如
く、支持担体と、該支持担体の表面上に、直接に又は間
接に、陽及び陰の両荷電部を有する化合物が被覆されて
形成される両荷電層と、を備えることを特徴とする。
達成するために、正負両電荷を有する固定相からの静電
気反撥・吸引力を分析体の分離用に利用することを、種
々鋭意検討した結果、本発明を完成するに至ったのであ
る。即ち、本発明の静電気イオンクロマトグラフィーに
よる分析体の分離・分析方法（以下、単に本イオン等の
分離・分析方法又は本分離・分析方法という。）は、分
離カラム内に充填された固定相の一端側に、複数の分析
イオンを有する試料液を注入し、その後、溶離液を展開
させて各分析イオンの保持時間の相違を以て各分析イオ
ンを分析する静電気イオンクロマトグラフィーによるイ
オン等の分離・分析方法において、上記固定相として
は、支持担体と、該支持担体の表面上に、直接に又は間
接に、陽及び陰の両荷電部を有する化合物が被覆されて
形成される両荷電層と、を備える両荷電具備固定相を用
いたことを特徴とする。尚、ここで「分析体の分離・分
析方法」は、各分析体を分離し、この分離された成分等
を検出して分析する場合のみならず、この分離された各
成分等を分取する場合も含まれる意味に用いられる。他
の発明で用いている「分析体の分離・分析方法」の意味
についても、上記と同意味に用いられる。更に、他の発
明のイオンクロマトグラフィー用両荷電具備固定相（以
下、単に両荷電具備固定相という。）は、上記に示す如
く、支持担体と、該支持担体の表面上に、直接に又は間
接に、陽及び陰の両荷電部を有する化合物が被覆されて
形成される両荷電層と、を備えることを特徴とする。
【０００６】上記「両荷電具備固定相」に用いられる支
持担体の材質、形状、大きさ等は特に限定されず、その
表面上に両荷電層が形成できるものであればよい。例え
ば、その材質としてシリカゲル、ポリスチレン等を例示
でき、またその表面は担持し易いように多孔性のものが
好ましい。更に、両荷電層は、使用する支持担体上に、
化学的に反応させたり、又は物理的に吸着させて直接形
成させてもよいし、またこの支持担体の表面に疎水性層
を接着層として形成し、この表面に両荷電層を形成（即
ち支持担体の表面上に間接に形成）させてもよい。例え
ば、上記「両荷電具備固定相」において、支持担体は多
孔性シリカゲルからなり、また該支持担体の表面にはア
ルキルシランを反応させて得られる疎水性層が形成さ
れ、更に該疎水性層の表面には上記両荷電層が吸着形成
されているものとすることができる。このアルキルシラ
ンのアルキル基としては、疎水性を付与するために、そ
の炭素数が１２〜２４程度のものが好ましく、通常、１
８のものが用いられる。
持担体の材質、形状、大きさ等は特に限定されず、その
表面上に両荷電層が形成できるものであればよい。例え
ば、その材質としてシリカゲル、ポリスチレン等を例示
でき、またその表面は担持し易いように多孔性のものが
好ましい。更に、両荷電層は、使用する支持担体上に、
化学的に反応させたり、又は物理的に吸着させて直接形
成させてもよいし、またこの支持担体の表面に疎水性層
を接着層として形成し、この表面に両荷電層を形成（即
ち支持担体の表面上に間接に形成）させてもよい。例え
ば、上記「両荷電具備固定相」において、支持担体は多
孔性シリカゲルからなり、また該支持担体の表面にはア
ルキルシランを反応させて得られる疎水性層が形成さ
れ、更に該疎水性層の表面には上記両荷電層が吸着形成
されているものとすることができる。このアルキルシラ
ンのアルキル基としては、疎水性を付与するために、そ
の炭素数が１２〜２４程度のものが好ましく、通常、１
８のものが用いられる。
【０００７】また、上記「陽及び陰の両荷電部を有する
化合物」としては、特に限定されず、アンモニウム塩部
（陽イオン部）、及びスルホン酸イオン部若しくはカル
ボン酸イオン部（陰イオン部）を備える化合物とするこ
とができる。更に、この化合物としては、アミド部（δ
＋部）、及びスルホン酸イオン部若しくはカルボン酸イ
オン部を備える化合物とすることもできる。更に具体的
にいえば、後者の化合物としては、３−〔３−コールア
ミドプロピル）ジメチルアンモニオ〕−１−プロパンス
ルホネート、又は３−〔３−コールアミドプロピル）ジ
メチルアンモニオ〕−２−ヒドロキシ−１−プロパンス
ルホネート、Ｈ29Ｃ14Ｎ+ （ＣＨ3 ）2 （ＣＨ2 ）3 Ｓ
Ｏ3 - （Ｎａ+ ）等を、前者の化合物としては、タウロ
デオキシコール酸ナトリウム又はタウロコール酸ナトリ
ウム等を例示できる。また、これらの２種以上の化合物
を混合して用いることもできる。特に、前者の化合物と
後者の化合物の混合とする場合は、多機能性に優れるの
で、好ましい。
化合物」としては、特に限定されず、アンモニウム塩部
（陽イオン部）、及びスルホン酸イオン部若しくはカル
ボン酸イオン部（陰イオン部）を備える化合物とするこ
とができる。更に、この化合物としては、アミド部（δ
＋部）、及びスルホン酸イオン部若しくはカルボン酸イ
オン部を備える化合物とすることもできる。更に具体的
にいえば、後者の化合物としては、３−〔３−コールア
ミドプロピル）ジメチルアンモニオ〕−１−プロパンス
ルホネート、又は３−〔３−コールアミドプロピル）ジ
メチルアンモニオ〕−２−ヒドロキシ−１−プロパンス
ルホネート、Ｈ29Ｃ14Ｎ+ （ＣＨ3 ）2 （ＣＨ2 ）3 Ｓ
Ｏ3 - （Ｎａ+ ）等を、前者の化合物としては、タウロ
デオキシコール酸ナトリウム又はタウロコール酸ナトリ
ウム等を例示できる。また、これらの２種以上の化合物
を混合して用いることもできる。特に、前者の化合物と
後者の化合物の混合とする場合は、多機能性に優れるの
で、好ましい。
【０００８】上記「分析イオン」は、目的、用途により
種々選択でき、複数の陰イオンのみ、複数の陽イオンの
み又は両性イオンのみ（例えばアミノ酸等）とすること
ができるし、これらの混合物とすることもできる。ま
た、これらのイオンの価数は問わず、価数の異なったイ
オンの混合でもよい。
種々選択でき、複数の陰イオンのみ、複数の陽イオンの
み又は両性イオンのみ（例えばアミノ酸等）とすること
ができるし、これらの混合物とすることもできる。ま
た、これらのイオンの価数は問わず、価数の異なったイ
オンの混合でもよい。
【０００９】上記「溶離液」（移動相ともいう。）は、
所定の分析イオンを移動させることができるものであれ
ばよく、固定相の種類、分析イオンの種類等により種々
選択使用される。これとして、例えば、水（純水等）の
みならず、無機緩衝液、有機緩衝液、無機溶液又は有機
溶液等も使用できる。また、この溶離液がイオン含有液
である場合、このイオン濃度も種々選択できる。本方法
においては、この溶離液中のイオン濃度が増大するに従
って、各分析陰イオンの保持時間が増大するので、この
作用を利用して分離・分析することとなる。
所定の分析イオンを移動させることができるものであれ
ばよく、固定相の種類、分析イオンの種類等により種々
選択使用される。これとして、例えば、水（純水等）の
みならず、無機緩衝液、有機緩衝液、無機溶液又は有機
溶液等も使用できる。また、この溶離液がイオン含有液
である場合、このイオン濃度も種々選択できる。本方法
においては、この溶離液中のイオン濃度が増大するに従
って、各分析陰イオンの保持時間が増大するので、この
作用を利用して分離・分析することとなる。
【００１０】分離された分析イオンを「検出する手段」
としては、特に限定されず、紫外線（以下、ＵＶとい
う。）検出器とすることができるが、これに限らず、他
の公知手段（電気伝導度検出器又は電気化学的検出器
等）を用いることもできる。また、ＵＶ検出器を用いる
場合において使用される分析イオンとしては、ＵＶを吸
収しない成分を含む場合、溶離液を紫外線吸収性物質を
含む溶液（水溶液、有機溶液等）とする（所謂、間接検
出法）ことができる。尚、ここで「ＵＶを吸収しない成
分を含む」とは、ＵＶ非吸収成分のみからなってもよい
し、ＵＶ吸収成分とＵＶ非吸収成分との混合であっても
よいという意味である。このＵＶ吸収性物質としては、
陽イオン分析用としての水溶性銅（ＩＩ）塩若しくは水
溶性セリウム（ＩＩＩ）塩等、又は陰イオン分析用とし
てのサリチル酸塩等を用いることができる。
としては、特に限定されず、紫外線（以下、ＵＶとい
う。）検出器とすることができるが、これに限らず、他
の公知手段（電気伝導度検出器又は電気化学的検出器
等）を用いることもできる。また、ＵＶ検出器を用いる
場合において使用される分析イオンとしては、ＵＶを吸
収しない成分を含む場合、溶離液を紫外線吸収性物質を
含む溶液（水溶液、有機溶液等）とする（所謂、間接検
出法）ことができる。尚、ここで「ＵＶを吸収しない成
分を含む」とは、ＵＶ非吸収成分のみからなってもよい
し、ＵＶ吸収成分とＵＶ非吸収成分との混合であっても
よいという意味である。このＵＶ吸収性物質としては、
陽イオン分析用としての水溶性銅（ＩＩ）塩若しくは水
溶性セリウム（ＩＩＩ）塩等、又は陰イオン分析用とし
てのサリチル酸塩等を用いることができる。
【００１１】他の発明の多機能液体クロマトグラフィー
による分析体の分離・分析方法は、分離カラム内に充填
された固定相の一端側に、分析体を含む試料液を注入
し、その後、溶離液を展開させて各分析体の保持時間の
相違を以て各分析体を分析する多機能液体クロマトグラ
フィーによる分析体の分離・分析方法において、上記分
析体としては、鏡像異性体、無機イオン、有機イオン及
び非イオン系有機化合物のうちの１種又は２種以上を用
い、上記固定相としては、支持担体と、該支持担体の表
面上に、直接に又は間接に、正・負両電荷を同時に持つ
化合物が被覆されて形成される両荷電層と、を備える両
荷電具備固定相を用いたことを特徴とする。
による分析体の分離・分析方法は、分離カラム内に充填
された固定相の一端側に、分析体を含む試料液を注入
し、その後、溶離液を展開させて各分析体の保持時間の
相違を以て各分析体を分析する多機能液体クロマトグラ
フィーによる分析体の分離・分析方法において、上記分
析体としては、鏡像異性体、無機イオン、有機イオン及
び非イオン系有機化合物のうちの１種又は２種以上を用
い、上記固定相としては、支持担体と、該支持担体の表
面上に、直接に又は間接に、正・負両電荷を同時に持つ
化合物が被覆されて形成される両荷電層と、を備える両
荷電具備固定相を用いたことを特徴とする。
【００１２】更に、他の発明の多機能液体クロマトグラ
フィーによる分析体の分離・分析方法に用いられる両荷
電具備固定相に使用される陽及び陰の両荷電部を有する
化合物としては、３−〔３−コールアミドプロピル）ジ
メチルアンモニオ〕−１−プロパンスルホネート及び３
−〔３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ〕
−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート等の少な
くとも一種と、タウロデオキシコール酸ナトリウム及び
タウロコール酸ナトリウム等の少なくとも一種からなる
混合物とすることができる。上記両荷電具備固定相にお
いても、上記支持担体は多孔性シリカゲルからなり、ま
た該支持担体の表面にはアルキルシランを反応させて得
られる疎水性層が形成され、更に該疎水性層の表面には
上記両荷電層が吸着形成されているものとすることがで
きる。
フィーによる分析体の分離・分析方法に用いられる両荷
電具備固定相に使用される陽及び陰の両荷電部を有する
化合物としては、３−〔３−コールアミドプロピル）ジ
メチルアンモニオ〕−１−プロパンスルホネート及び３
−〔３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ〕
−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート等の少な
くとも一種と、タウロデオキシコール酸ナトリウム及び
タウロコール酸ナトリウム等の少なくとも一種からなる
混合物とすることができる。上記両荷電具備固定相にお
いても、上記支持担体は多孔性シリカゲルからなり、ま
た該支持担体の表面にはアルキルシランを反応させて得
られる疎水性層が形成され、更に該疎水性層の表面には
上記両荷電層が吸着形成されているものとすることがで
きる。
【００１３】
【作用】イオンは荷電粒子であり、同じ荷電や反対の荷
電の間には静電気反撥力と静電気吸引力を生じる。本イ
オン分離・分析方法において用いられる静電気固定相に
は、支持担体の表面上に、陽及び陰の両荷電部を有する
化合物が被覆形成されている両荷電層を有する。従っ
て、図１に示すように、分析イオンが溶離液（移動相）
によって運搬されて、この静電気固定相を通過する時、
静電気固定相の両荷電部から静電気反撥力と静電気吸引
力が同時に生じる。そして、この静電気反撥・吸引力の
連合（総和）は、荷電の数若しくはその強さ（程度）と
水和イオンの半径等に依存し、その力は数１に示すもの
となる。
電の間には静電気反撥力と静電気吸引力を生じる。本イ
オン分離・分析方法において用いられる静電気固定相に
は、支持担体の表面上に、陽及び陰の両荷電部を有する
化合物が被覆形成されている両荷電層を有する。従っ
て、図１に示すように、分析イオンが溶離液（移動相）
によって運搬されて、この静電気固定相を通過する時、
静電気固定相の両荷電部から静電気反撥力と静電気吸引
力が同時に生じる。そして、この静電気反撥・吸引力の
連合（総和）は、荷電の数若しくはその強さ（程度）と
水和イオンの半径等に依存し、その力は数１に示すもの
となる。
【００１４】
【数１】
【００１５】ここで、ｎはイオンの荷電の数、ε1 、ε
2 は静電気伝導度、ｑ（ｓ）+ 、ｑ（ｓ）- は固定相の
陰陽荷電の電子密度、ｑA は分析イオンの電子密度、ｒ
及びｒ′はそれぞれ静電気作用距離を示す。この静電気
力の連合作用力（ΔＦ）は分離カラムの一段の分離能力
となる。このΔＦ＜０の場合、これは静電気反撥力が吸
引力よりも大きいことを意味し、このとき、分析イオン
は静電気カラムに保留されない。それに対して、ΔＦ＞
φ（φは移動相の輸送力）の時、この場合、分析イオン
はカラムから溶離することができない。しかしΔＦがφ
≧ΔＦ≧０の条件を満足する時、分析イオンはカラム上
で分離することができる。例えば、もし、φ（水）≧Δ
Ｆ≧０の場合は、純水を溶離液（移動相）としてでも、
分析イオンを静電気カラムから運び出すことができる。
同様に、φ（溶離液）≧ΔＦ≧０の場合は、この溶離液
を用いて分析イオンをカラムから運び出すことができ
る。以上より、同性イオン間及び異性イオン間における
静電気相互作用を利用して、更に、電荷（イオン）間の
相互作用とイオン交換作用等を同時に利用をして陽イオ
ンと陰イオンとを同時に分離することができる。
2 は静電気伝導度、ｑ（ｓ）+ 、ｑ（ｓ）- は固定相の
陰陽荷電の電子密度、ｑA は分析イオンの電子密度、ｒ
及びｒ′はそれぞれ静電気作用距離を示す。この静電気
力の連合作用力（ΔＦ）は分離カラムの一段の分離能力
となる。このΔＦ＜０の場合、これは静電気反撥力が吸
引力よりも大きいことを意味し、このとき、分析イオン
は静電気カラムに保留されない。それに対して、ΔＦ＞
φ（φは移動相の輸送力）の時、この場合、分析イオン
はカラムから溶離することができない。しかしΔＦがφ
≧ΔＦ≧０の条件を満足する時、分析イオンはカラム上
で分離することができる。例えば、もし、φ（水）≧Δ
Ｆ≧０の場合は、純水を溶離液（移動相）としてでも、
分析イオンを静電気カラムから運び出すことができる。
同様に、φ（溶離液）≧ΔＦ≧０の場合は、この溶離液
を用いて分析イオンをカラムから運び出すことができ
る。以上より、同性イオン間及び異性イオン間における
静電気相互作用を利用して、更に、電荷（イオン）間の
相互作用とイオン交換作用等を同時に利用をして陽イオ
ンと陰イオンとを同時に分離することができる。
【００１６】また、胆汁コロイドの粒子（ミセル）は左
巻きの螺旋形の集塊である（J.Phys.Chem.,1989,93,153
6.）。それらは疎水性相互作用でＯＤＳ固定相上に吸着
されても、尚、螺旋形の構造を保持する（Chromatograp
hia,1992,33,63.)。従って、胆汁コロイド粒子を被覆し
た固定相は、異性体の分離のためのキラルの固定相とし
て働くので、鏡像異性体の分離を行うことができる。
巻きの螺旋形の集塊である（J.Phys.Chem.,1989,93,153
6.）。それらは疎水性相互作用でＯＤＳ固定相上に吸着
されても、尚、螺旋形の構造を保持する（Chromatograp
hia,1992,33,63.)。従って、胆汁コロイド粒子を被覆し
た固定相は、異性体の分離のためのキラルの固定相とし
て働くので、鏡像異性体の分離を行うことができる。
【００１７】
【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。 （１）静電気イオンクロマトグラフィー用装置及びその
使用条件 本装置は、溶離液を供給するポンプと、このポンプに接
続される分離カラムと、この分離カラムから分離される
分析成分を検出するＵＶ検出器と、分離結果を記録する
記録装置と、上記分離カラムとポンプの間に接続される
試料注入バルブ内に試料を注入するための試料注入部
と、からなる。
る。 （１）静電気イオンクロマトグラフィー用装置及びその
使用条件 本装置は、溶離液を供給するポンプと、このポンプに接
続される分離カラムと、この分離カラムから分離される
分析成分を検出するＵＶ検出器と、分離結果を記録する
記録装置と、上記分離カラムとポンプの間に接続される
試料注入バルブ内に試料を注入するための試料注入部
と、からなる。
【００１８】本方法として、以下に示す二つの液体クロ
マトグラフィー（ＬＣ）システムを用いた。 マイクロＬＣシステム：ポンプとしては、０．５ｍｌ
気密注射器（商品名；「ＭＳ−ＧＡＮ ０５０」、伊藤
富士社製）を備えた「ＭＦ−２マイクロフィーダー」
（東電気工業社製）を用いた。試料注入部としては、マ
イクロバルブ（商品名；「ＭＬ−５５２」、ＪＡＳＣＯ
社製、射出量０．０２μｌ）を用いた。分離カラムとし
ては、まず、５μｍの「Develosil ＯＤＳ−５」（商品
名、野村化学社製、多孔性シリカゲルにオクタデシルシ
ラン（ＯＤＳ）を反応させたもの、ＯＤＳ担体とい
う。）を内部に充填したもの〔１５０ｍｍ×０．３５ｍ
ｍ（内径）を準備した。 通常ＬＣシステム：ポンプとしては島津製作所社製
「ＬＣ６Ａ」、流速としては０．７ｍｌ／分、検出器と
してはＵＶ吸収検出器と電気伝導検出器、カラムとして
はＬ−カラム〔化学品検査協会製、４．６ｍｍ×２５０
ｍｍ（内径）〕を用い、他は上記マイクロＬＣシステム
と同様に行った。その後、図１に示すように、以下に示
す〜の陽及び陰の両荷電部を有する化合物（両極イ
オン表面活性剤）１３を、このＯＤＳ担体（ＯＤＳ層１
２、その支持担体１１）の表面上に担持（被覆）させ
て、両荷電具備固定相１を作製した。
マトグラフィー（ＬＣ）システムを用いた。 マイクロＬＣシステム：ポンプとしては、０．５ｍｌ
気密注射器（商品名；「ＭＳ−ＧＡＮ ０５０」、伊藤
富士社製）を備えた「ＭＦ−２マイクロフィーダー」
（東電気工業社製）を用いた。試料注入部としては、マ
イクロバルブ（商品名；「ＭＬ−５５２」、ＪＡＳＣＯ
社製、射出量０．０２μｌ）を用いた。分離カラムとし
ては、まず、５μｍの「Develosil ＯＤＳ−５」（商品
名、野村化学社製、多孔性シリカゲルにオクタデシルシ
ラン（ＯＤＳ）を反応させたもの、ＯＤＳ担体とい
う。）を内部に充填したもの〔１５０ｍｍ×０．３５ｍ
ｍ（内径）を準備した。 通常ＬＣシステム：ポンプとしては島津製作所社製
「ＬＣ６Ａ」、流速としては０．７ｍｌ／分、検出器と
してはＵＶ吸収検出器と電気伝導検出器、カラムとして
はＬ−カラム〔化学品検査協会製、４．６ｍｍ×２５０
ｍｍ（内径）〕を用い、他は上記マイクロＬＣシステム
と同様に行った。その後、図１に示すように、以下に示
す〜の陽及び陰の両荷電部を有する化合物（両極イ
オン表面活性剤）１３を、このＯＤＳ担体（ＯＤＳ層１
２、その支持担体１１）の表面上に担持（被覆）させ
て、両荷電具備固定相１を作製した。
【００１９】３−〔（３−コールアミドプロピル）ジ
メチル・アンモニオ〕−１−プロパンスルホネート（以
下、ＣＨＡＰＳという。同仁社製、図２に図示。） ３−〔（３−コールアミドプロピル）ジメチル・アン
モニオ〕−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート
（以下、ＣＨＡＰＳＯという。同仁社製、図２に図
示。） タウロデオキシコール酸ナトリウム〔以下、ＮａＴＤ
Ｃという。シグマ社（米国）製、図３に図示。〕及び タウロコール酸ナトリウム〔以下、ＮａＴＣという。
シグマ社（米国）製、図３に図示。〕 「Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ３−１４」〔Ｈ29Ｃ14Ｎ+
（ＣＨ3 ）2 （ＣＨ2）3 ＳＯ3 - （Ｎａ+ ）、図４に
図示。〕
メチル・アンモニオ〕−１−プロパンスルホネート（以
下、ＣＨＡＰＳという。同仁社製、図２に図示。） ３−〔（３−コールアミドプロピル）ジメチル・アン
モニオ〕−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート
（以下、ＣＨＡＰＳＯという。同仁社製、図２に図
示。） タウロデオキシコール酸ナトリウム〔以下、ＮａＴＤ
Ｃという。シグマ社（米国）製、図３に図示。〕及び タウロコール酸ナトリウム〔以下、ＮａＴＣという。
シグマ社（米国）製、図３に図示。〕 「Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ３−１４」〔Ｈ29Ｃ14Ｎ+
（ＣＨ3 ）2 （ＣＨ2）3 ＳＯ3 - （Ｎａ+ ）、図４に
図示。〕
【００２０】この担持方法は、以下の通りである。即
ち、上記ＯＤＳ担体を詰めたカラムに、所定の表面活性
剤のコロイド粒子水溶液（表面活性剤の濃度；例えば３
０〜５０ｍｍｏｌ／ｌ）を、マイクロＬＣシステムでは
２．８μｌ／分の流速で２０〜３０分間、通常ＬＣシス
テムでは０．７ｍｌ／分の流速で４０〜５０分間、通過
させ、その後、同一流速の純水で３０〜４０分間洗浄さ
せた。尚、この表面活性剤の濃度は、臨界コロイド粒子
濃度（ＣＭＣ）より高くなければならない。ＵＶ検出器
（検出波長；２００〜２５３ｎｍ）としては、フローセ
ル付のＵＶ検出器を用い、記録装置としては、「クロマ
トパックＣ−Ｒ４ＡＸデータ・プロセッサー」（商品
名、島津製作所社製）を用いた。
ち、上記ＯＤＳ担体を詰めたカラムに、所定の表面活性
剤のコロイド粒子水溶液（表面活性剤の濃度；例えば３
０〜５０ｍｍｏｌ／ｌ）を、マイクロＬＣシステムでは
２．８μｌ／分の流速で２０〜３０分間、通常ＬＣシス
テムでは０．７ｍｌ／分の流速で４０〜５０分間、通過
させ、その後、同一流速の純水で３０〜４０分間洗浄さ
せた。尚、この表面活性剤の濃度は、臨界コロイド粒子
濃度（ＣＭＣ）より高くなければならない。ＵＶ検出器
（検出波長；２００〜２５３ｎｍ）としては、フローセ
ル付のＵＶ検出器を用い、記録装置としては、「クロマ
トパックＣ−Ｒ４ＡＸデータ・プロセッサー」（商品
名、島津製作所社製）を用いた。
【００２１】溶離液（移動相）の流速はマイクロＬＣシ
ステムで２．８μｌ／分、通常ＬＣシステムで０．７ｍ
ｌ／分、分離は室温で行った。使用された試薬は、試薬
級のものを用い、特記しないかぎり和光純薬工業社製で
ある。これらの試薬は追加処理することなく使用され
た。純水としては、「ミリーＱシステム」（商品名、日
本ミリポーア工業社製）を用いて調製したものを使用し
た。使用される分析イオンは、以下に述べる各実験の目
的により、所定の無機陰イオンのみ、無機陽イオンの
み、無機陰イオン及び陽イオンの混合、有機イオン（ア
ミノ酸）、又はα−アミラーゼ（蛋白質）が選択され
た。そして、無機陰、陽イオンを構成する塩としては、
いずれもそれらのナトリウム塩又は塩化物塩を用いた。
以上の装置及び条件により、以下に述べる実験を行っ
た。尚、以下において特記しない条件は、上記と同じで
ある。
ステムで２．８μｌ／分、通常ＬＣシステムで０．７ｍ
ｌ／分、分離は室温で行った。使用された試薬は、試薬
級のものを用い、特記しないかぎり和光純薬工業社製で
ある。これらの試薬は追加処理することなく使用され
た。純水としては、「ミリーＱシステム」（商品名、日
本ミリポーア工業社製）を用いて調製したものを使用し
た。使用される分析イオンは、以下に述べる各実験の目
的により、所定の無機陰イオンのみ、無機陽イオンの
み、無機陰イオン及び陽イオンの混合、有機イオン（ア
ミノ酸）、又はα−アミラーゼ（蛋白質）が選択され
た。そして、無機陰、陽イオンを構成する塩としては、
いずれもそれらのナトリウム塩又は塩化物塩を用いた。
以上の装置及び条件により、以下に述べる実験を行っ
た。尚、以下において特記しない条件は、上記と同じで
ある。
【００２２】（２）無機陰イオンの分離・分析 溶離液；純水、分離カラムに用いる両極イオン表面活性
剤；ＣＨＡＰＳの条件により、６種類のＵＶ吸収可能な
無機陰イオン（ＩＯ3 - 、Ｓ2 Ｏ3 2- 、ＮＯ2 - 、ＮＯ
3 - 、Ｉ- 及びＳＣＮ- ）を分析し、そのクロマトグラ
ムを図５に示す。この結果によれば、６種類の各イオン
が水を溶離液として、うまく分離されていることを示し
ている。更に、分離カラムに用いる両極イオン表面活性
剤としてＣＨＡＰＳの代わりにＣＨＡＰＳＯを用い、溶
離液として純水、分析イオンとして無機陰イオン（即
ち、ＳＯ4 2-、Ｃｌ- 、ＮＯ2 - 、Ｂｒ- 、ＮＯ3 - 、
Ｉ- 、及びＳＣＮ- ）、検出方法として電気伝導度検出
法（島津製作所製電気伝導度検出器を使用。）を用い、
他の条件は上記ＣＨＡＰＳの場合と同様にして分析した
所、図６のクロマトグラムを示した。この図に示すよう
に、ＣＨＡＰＳＯの場合も、ＣＨＡＰＳと同様にうまく
分離されていることを示している。
剤；ＣＨＡＰＳの条件により、６種類のＵＶ吸収可能な
無機陰イオン（ＩＯ3 - 、Ｓ2 Ｏ3 2- 、ＮＯ2 - 、ＮＯ
3 - 、Ｉ- 及びＳＣＮ- ）を分析し、そのクロマトグラ
ムを図５に示す。この結果によれば、６種類の各イオン
が水を溶離液として、うまく分離されていることを示し
ている。更に、分離カラムに用いる両極イオン表面活性
剤としてＣＨＡＰＳの代わりにＣＨＡＰＳＯを用い、溶
離液として純水、分析イオンとして無機陰イオン（即
ち、ＳＯ4 2-、Ｃｌ- 、ＮＯ2 - 、Ｂｒ- 、ＮＯ3 - 、
Ｉ- 、及びＳＣＮ- ）、検出方法として電気伝導度検出
法（島津製作所製電気伝導度検出器を使用。）を用い、
他の条件は上記ＣＨＡＰＳの場合と同様にして分析した
所、図６のクロマトグラムを示した。この図に示すよう
に、ＣＨＡＰＳＯの場合も、ＣＨＡＰＳと同様にうまく
分離されていることを示している。
【００２３】また、酸性処理したＮａＴＤＣ固定相、溶
離液；純水、及び分析イオン；Ｉ-及びＳＣＮ- 等の５
種類の陰イオンを用いて同様に分析し、その結果を図７
に示す。更に、Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ３−１４固定
相、溶離液；純水、及び分析イオン；ＮＯ2 - 、ＮＯ3
- 及びＩ- を用いて同様に分析し、その結果を図８に示
す。尚、これらの陰イオンは直接にＵＶ吸収により検出
した。この図に示すように、ＮａＴＤＣ及びＺｗｉｔｔ
ｅｒｇｅｎｔ３−１４の場合も、ＣＨＡＰＳと同様にう
まく分離されていることを示している。
離液；純水、及び分析イオン；Ｉ-及びＳＣＮ- 等の５
種類の陰イオンを用いて同様に分析し、その結果を図７
に示す。更に、Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ３−１４固定
相、溶離液；純水、及び分析イオン；ＮＯ2 - 、ＮＯ3
- 及びＩ- を用いて同様に分析し、その結果を図８に示
す。尚、これらの陰イオンは直接にＵＶ吸収により検出
した。この図に示すように、ＮａＴＤＣ及びＺｗｉｔｔ
ｅｒｇｅｎｔ３−１４の場合も、ＣＨＡＰＳと同様にう
まく分離されていることを示している。
【００２４】（３）無機陽イオンの分析 溶離液；純水、分離カラムに用いる両極イオン表面活性
剤；ＣＨＡＰＳの条件により、２種類のＵＶ吸収可能な
無機陽イオン（Ｃｅ3+及びＣｕ2+）を分析し、そのクロ
マトグラムを図９に示す。この結果によれば、２種類の
各陽イオンが水を溶離液として、うまく分離されている
ことを示している。更に、溶離液；硫酸銅（ＩＩ）水溶
液、両極イオン表面活性剤；ＮａＴＤＣの条件により、
間接検出法で無機陽イオン（Ｎａ+ 及びＫ+ ）を分析
し、そのクロマトグラムを図１０に示す。また、溶離
液；塩化セリウム（ＩＩＩ）水溶液、同表面活性剤の条
件により、二価の無機陽イオン（Ｍｇ2+、Ｃａ2+ 及び
Ｂａ2+）を分析し、そのクロマトグラムを図１１に示
す。これらの結果によれば、ＮａＴＤＣ固定相において
も各陽イオンがうまく分離されていることを示してい
る。
剤；ＣＨＡＰＳの条件により、２種類のＵＶ吸収可能な
無機陽イオン（Ｃｅ3+及びＣｕ2+）を分析し、そのクロ
マトグラムを図９に示す。この結果によれば、２種類の
各陽イオンが水を溶離液として、うまく分離されている
ことを示している。更に、溶離液；硫酸銅（ＩＩ）水溶
液、両極イオン表面活性剤；ＮａＴＤＣの条件により、
間接検出法で無機陽イオン（Ｎａ+ 及びＫ+ ）を分析
し、そのクロマトグラムを図１０に示す。また、溶離
液；塩化セリウム（ＩＩＩ）水溶液、同表面活性剤の条
件により、二価の無機陽イオン（Ｍｇ2+、Ｃａ2+ 及び
Ｂａ2+）を分析し、そのクロマトグラムを図１１に示
す。これらの結果によれば、ＮａＴＤＣ固定相において
も各陽イオンがうまく分離されていることを示してい
る。
【００２５】（４）両性有機イオンの分析 溶離液；純水、分離カラムに用いる両極イオン表面活性
剤；ＣＨＡＰＳの条件により、３種類のＵＶ吸収可能な
両性有機イオン（アミノ酸；β，３，４−ジヒドロキ
シフエニルアラニン、フエニルアラニン及びトリプ
トファン）を分析し、そのクロマトグラムを図１２に示
す。この結果によれば、３種類の各アミノ酸が水を溶離
液として、うまく分離されていることを示している。
剤；ＣＨＡＰＳの条件により、３種類のＵＶ吸収可能な
両性有機イオン（アミノ酸；β，３，４−ジヒドロキ
シフエニルアラニン、フエニルアラニン及びトリプ
トファン）を分析し、そのクロマトグラムを図１２に示
す。この結果によれば、３種類の各アミノ酸が水を溶離
液として、うまく分離されていることを示している。
【００２６】（５）溶離液として燐酸塩緩衝液を用いた
場合 純水の代わりに燐酸塩緩衝液（水溶液、ＮａＨ2 ＰＯ
4 １０ｍｍｏｌ＋Ｎａ2 ＨＰＯ4 １０ｍｍｏｌ／リット
ル）を用いたこと、及び分析イオンとして５種類の無
機陰イオン（ＩＯ3 - 、ＮＯ2 - 、ＮＯ3 - 、Ｉ- 及び
ＳＣＮ- ）を用いたこと以外は、上記（２）と同様にし
て、分析した。この結果、図１３に示すクロマトグラム
のように、純水の場合（図５）と同様に、うまく各イオ
ンを分離できた。
場合 純水の代わりに燐酸塩緩衝液（水溶液、ＮａＨ2 ＰＯ
4 １０ｍｍｏｌ＋Ｎａ2 ＨＰＯ4 １０ｍｍｏｌ／リット
ル）を用いたこと、及び分析イオンとして５種類の無
機陰イオン（ＩＯ3 - 、ＮＯ2 - 、ＮＯ3 - 、Ｉ- 及び
ＳＣＮ- ）を用いたこと以外は、上記（２）と同様にし
て、分析した。この結果、図１３に示すクロマトグラム
のように、純水の場合（図５）と同様に、うまく各イオ
ンを分離できた。
【００２７】また、同様に、２種類の二価陰イオン（Ｓ
2 Ｏ3 2-及びＣｒ2 Ｏ7 2- ）と５種類の一価陰イオン
（ＮＯ2 - 、ＮＯ3 - 、Ｉ- 、ＳＣＮ- 及びＩＯ2 - ）
を同時に分析し、そのクロマトグラムを図１４に示す。
この結果によれば、各二価陰イオンが先に溶出し、その
後各一価陰イオンが溶出し、各一価陰イオン間のみなら
ず、各二価陰イオン間もうまく分離できるとともに、一
価及び二価陰イオン間の分離もうまくできた。更に、同
様に、上記（４）で用いた３種類のアミノ酸を分析し、
そのクロマトグラムを図１５に示す。この結果によれ
ば、純水の場合（図１２）と同様に、各アミノ酸をうま
く分離できた。
2 Ｏ3 2-及びＣｒ2 Ｏ7 2- ）と５種類の一価陰イオン
（ＮＯ2 - 、ＮＯ3 - 、Ｉ- 、ＳＣＮ- 及びＩＯ2 - ）
を同時に分析し、そのクロマトグラムを図１４に示す。
この結果によれば、各二価陰イオンが先に溶出し、その
後各一価陰イオンが溶出し、各一価陰イオン間のみなら
ず、各二価陰イオン間もうまく分離できるとともに、一
価及び二価陰イオン間の分離もうまくできた。更に、同
様に、上記（４）で用いた３種類のアミノ酸を分析し、
そのクロマトグラムを図１５に示す。この結果によれ
ば、純水の場合（図１２）と同様に、各アミノ酸をうま
く分離できた。
【００２８】（６）溶離液中のイオン濃度と保持時間と
の関係 溶離液として、燐酸一水素ナトリウム、硫酸第二銅
及び上記燐酸塩緩衝液を用い、また分析イオンとし
て、各一価陰イオン（ＮＯ2 - 、ＮＯ3 - 、Ｉ-、ＳＣ
Ｎ- 及びＩＯ3 - ）を用い，更に各溶離液のイオン濃度
を変えて、同様に、分析した結果を各々図１６、図１７
及び図１８に示す。この結果は、いずれも大変興味深い
関係を示した。即ち、溶離液中のイオン濃度が増大する
とともに、保持時間も増大したのである。通常のイオン
クロマトグラフィーにおいては、このイオン濃度の増大
に伴って、逆に保持時間が減少するのであるが（J. Chr
omatogr.,122(1976) 17-34) 、本例においては、これと
全く逆の結果を示したのである。
の関係 溶離液として、燐酸一水素ナトリウム、硫酸第二銅
及び上記燐酸塩緩衝液を用い、また分析イオンとし
て、各一価陰イオン（ＮＯ2 - 、ＮＯ3 - 、Ｉ-、ＳＣ
Ｎ- 及びＩＯ3 - ）を用い，更に各溶離液のイオン濃度
を変えて、同様に、分析した結果を各々図１６、図１７
及び図１８に示す。この結果は、いずれも大変興味深い
関係を示した。即ち、溶離液中のイオン濃度が増大する
とともに、保持時間も増大したのである。通常のイオン
クロマトグラフィーにおいては、このイオン濃度の増大
に伴って、逆に保持時間が減少するのであるが（J. Chr
omatogr.,122(1976) 17-34) 、本例においては、これと
全く逆の結果を示したのである。
【００２９】（７）ＵＶ非吸収陰イオンの間接測定 ＵＶを吸収しないイオンについては、ＵＶ検出器にて測
定できない。従って、ＵＶを吸収しない複数のイオンの
分析、又はＵＶを吸収しないイオンを含む複数イオンの
分析をするために、間接ＵＶ吸収検出方法（以下、間接
検出方法という。）について検討した。先ず、陰イオン
として、ＮＯ3 - 、Ｃｌ- （ＵＶ非吸収）及びＳＯ4 2-
（ＵＶ非吸収）を用い、そして光吸収移動相としてサリ
チル酸ナトリウム溶液（１ｍｍｏｌのサリチル酸ナトリ
ウムを５容量％のアセトニトリル水溶液１リットルに溶
解させたもの）を用いた。この分析結果を図１９に示
す。同図に示すように、ＵＶ非吸収陰イオンもうまく分
離できたとともに、うまくＵＶ検出もできた。尚、Ｎａ
ＴＤＣの代わりにＮａＴＣを用いた場合も、ほとんど同
クロマトグラム（図示せず。）を示した。
定できない。従って、ＵＶを吸収しない複数のイオンの
分析、又はＵＶを吸収しないイオンを含む複数イオンの
分析をするために、間接ＵＶ吸収検出方法（以下、間接
検出方法という。）について検討した。先ず、陰イオン
として、ＮＯ3 - 、Ｃｌ- （ＵＶ非吸収）及びＳＯ4 2-
（ＵＶ非吸収）を用い、そして光吸収移動相としてサリ
チル酸ナトリウム溶液（１ｍｍｏｌのサリチル酸ナトリ
ウムを５容量％のアセトニトリル水溶液１リットルに溶
解させたもの）を用いた。この分析結果を図１９に示
す。同図に示すように、ＵＶ非吸収陰イオンもうまく分
離できたとともに、うまくＵＶ検出もできた。尚、Ｎａ
ＴＤＣの代わりにＮａＴＣを用いた場合も、ほとんど同
クロマトグラム（図示せず。）を示した。
【００３０】更に、陽イオンとして、Ｌｉ+ 、Ｎａ+ 、
Ｋ+ 、ＮＨ4 + 、Ｒｂ+ 及びＣｓ+（いずれもＵＶ非吸
収）を用い、光吸収移動相として硫酸銅（ＵＶ吸収のあ
るＣｕ2+）を用い、更に両極イオン表面活性剤としてＮ
ａＴＤＣを用いて、上記と同様に分析し、その結果を図
２０に示す。上記陰イオンと同様に、ＵＶ非吸収の各陽
イオンについても、うまく分離できた（尚、Ｌｉ+ とＮ
ａ+ とは非分離、Ｋ+とＮＨ4 + とは非分離）ととも
に、ＵＶ検出器にてうまく検出もできた。
Ｋ+ 、ＮＨ4 + 、Ｒｂ+ 及びＣｓ+（いずれもＵＶ非吸
収）を用い、光吸収移動相として硫酸銅（ＵＶ吸収のあ
るＣｕ2+）を用い、更に両極イオン表面活性剤としてＮ
ａＴＤＣを用いて、上記と同様に分析し、その結果を図
２０に示す。上記陰イオンと同様に、ＵＶ非吸収の各陽
イオンについても、うまく分離できた（尚、Ｌｉ+ とＮ
ａ+ とは非分離、Ｋ+とＮＨ4 + とは非分離）ととも
に、ＵＶ検出器にてうまく検出もできた。
【００３１】（８）両極イオン表面活性剤の種類につい
て 固定相表面上に形成される両荷電相の静電気効果を調べ
るために、二種類の両荷電相具備固定相を用いた。この
１つは、ＯＤＳ固定相の上にＣＨＡＰＳコロイド粒子を
被覆形成させたもの（ＣＨＡＰＳ固定相という。）であ
り、他はＮａＴＤＣコロイド粒子を被覆形成させたもの
（ＮａＴＤＣ固定相という。）である。この前者のもの
では、スルホン酸陰イオン部とアンモニオ陽イオン部を
備える。後者のものでは、アミド基の窒素原子がわずか
に陽荷電（部分的陽荷電、δ+ ）を示すものであり、こ
の陽荷電程度（δ+ ）は、陰イオン（−）と比べるとず
っと小さいので、全体としては陰荷電の影響が大きくな
る。
て 固定相表面上に形成される両荷電相の静電気効果を調べ
るために、二種類の両荷電相具備固定相を用いた。この
１つは、ＯＤＳ固定相の上にＣＨＡＰＳコロイド粒子を
被覆形成させたもの（ＣＨＡＰＳ固定相という。）であ
り、他はＮａＴＤＣコロイド粒子を被覆形成させたもの
（ＮａＴＤＣ固定相という。）である。この前者のもの
では、スルホン酸陰イオン部とアンモニオ陽イオン部を
備える。後者のものでは、アミド基の窒素原子がわずか
に陽荷電（部分的陽荷電、δ+ ）を示すものであり、こ
の陽荷電程度（δ+ ）は、陰イオン（−）と比べるとず
っと小さいので、全体としては陰荷電の影響が大きくな
る。
【００３２】相対的に陰荷電の大きなＮａＴＤＣ固定相
（δ+ ・−）を用いた場合（図７）は、その反撥力によ
り、ＣＨＡＰＳ固定相を用いたクロマトグラム（図５）
と比べると、陰イオンの保持時間が１２分以内に対して
４分以内というように、著しく減少している。
（δ+ ・−）を用いた場合（図７）は、その反撥力によ
り、ＣＨＡＰＳ固定相を用いたクロマトグラム（図５）
と比べると、陰イオンの保持時間が１２分以内に対して
４分以内というように、著しく減少している。
【００３３】また、ＮａＴＤＣ固定相、溶離液；ＣｕＳ
Ｏ4 水溶液、及び分析イオン；Ｌｉ+ 、Ｎａ+ 、Ｋ+ 、
ＮＨ4 + 、Ｒｂ+ 及びＣｓ+ を用いて分析し、その結果
を各々図２０に示す。一方、ＣＨＡＰＳ固定相、溶離
液；ＣｕＳＯ4 、及び分析イオン；Ｌｉ+ 、Ｎａ+ 、
Ｋ+ 、ＮＨ4 + 、Ｒｂ+ 、Ｃｓ+ 、Ｍｇ2+、Ｃａ2+及び
Ｂａ2+を用いて分析し、その結果を図２１に示す。尚こ
れらの陽イオンは間接検出方法〔図２０の分析でのＵＶ
吸収移動相は硫酸銅水溶液、図２１の分析でのＵＶ吸収
移動相は硝酸セリウム（ＩＩＩ）水溶液〕によりＵＶ検
出を行った。ＮａＴＤＣ固定相（図２０）では、８〜１
２分間において各一価陽イオンが比較的うまく分離して
いる。一方、陽荷電が大きくて陽イオンとの反撥力が大
きいと考えられるＣＨＡＰＳ固定相（図２１）では、一
価陽イオングループ間からの分離はできなかったととも
に、その保持時間（約４分）も極めて短く、分離効果が
悪いことを示している。更に、各二価陽イオンも約６分
に溶出し、しかも二価陽イオングループ間からの分離も
できなかった。
Ｏ4 水溶液、及び分析イオン；Ｌｉ+ 、Ｎａ+ 、Ｋ+ 、
ＮＨ4 + 、Ｒｂ+ 及びＣｓ+ を用いて分析し、その結果
を各々図２０に示す。一方、ＣＨＡＰＳ固定相、溶離
液；ＣｕＳＯ4 、及び分析イオン；Ｌｉ+ 、Ｎａ+ 、
Ｋ+ 、ＮＨ4 + 、Ｒｂ+ 、Ｃｓ+ 、Ｍｇ2+、Ｃａ2+及び
Ｂａ2+を用いて分析し、その結果を図２１に示す。尚こ
れらの陽イオンは間接検出方法〔図２０の分析でのＵＶ
吸収移動相は硫酸銅水溶液、図２１の分析でのＵＶ吸収
移動相は硝酸セリウム（ＩＩＩ）水溶液〕によりＵＶ検
出を行った。ＮａＴＤＣ固定相（図２０）では、８〜１
２分間において各一価陽イオンが比較的うまく分離して
いる。一方、陽荷電が大きくて陽イオンとの反撥力が大
きいと考えられるＣＨＡＰＳ固定相（図２１）では、一
価陽イオングループ間からの分離はできなかったととも
に、その保持時間（約４分）も極めて短く、分離効果が
悪いことを示している。更に、各二価陽イオンも約６分
に溶出し、しかも二価陽イオングループ間からの分離も
できなかった。
【００３４】以上より、各固定相は、上記の如くの静電
気状態を備えるので、ＮａＴＤＣ固定相（δ+ ・−）で
は、陰イオンとの反撥力が相対的に大きくなり、陰イオ
ンの溶出が速くなり、逆に、陽イオンの溶出は遅くなる
結果を示している。一方、ＣＨＡＰＳ固定相（＋・δ+
・−）では、ＮａＴＤＣ固定相と逆になり、陽イオンの
溶出が速くなり、逆に陰イオンの溶出は遅くなる結果を
示している。従って、ＮａＴＤＣ固定相（δ+ ・−）は
陽イオンの分離に適し、逆にＣＨＡＰＳ固定相（＋・δ
+ ・−）は、陰イオンに適するといえる。しかし、いず
れにしても、この保持時間（分離能）は、分析イオン種
と両荷電層との、連合（総和）された静電気吸引・反撥
力の大きさにより、規制される。そのため、固定相の両
荷電部の陰陽の程度、使用する分析イオンの種類、溶離
液の種類等により、好ましい保持時間（分離能）は設定
されることとなる。
気状態を備えるので、ＮａＴＤＣ固定相（δ+ ・−）で
は、陰イオンとの反撥力が相対的に大きくなり、陰イオ
ンの溶出が速くなり、逆に、陽イオンの溶出は遅くなる
結果を示している。一方、ＣＨＡＰＳ固定相（＋・δ+
・−）では、ＮａＴＤＣ固定相と逆になり、陽イオンの
溶出が速くなり、逆に陰イオンの溶出は遅くなる結果を
示している。従って、ＮａＴＤＣ固定相（δ+ ・−）は
陽イオンの分離に適し、逆にＣＨＡＰＳ固定相（＋・δ
+ ・−）は、陰イオンに適するといえる。しかし、いず
れにしても、この保持時間（分離能）は、分析イオン種
と両荷電層との、連合（総和）された静電気吸引・反撥
力の大きさにより、規制される。そのため、固定相の両
荷電部の陰陽の程度、使用する分析イオンの種類、溶離
液の種類等により、好ましい保持時間（分離能）は設定
されることとなる。
【００３５】（９）陽イオンと陰イオンとの同時分離
と、溶離液中のイオン濃度又は両極イオン表面活性剤の
種類との関係 溶離液中のイオン濃度について ＮａＴＤＣ固定相、ＵＶ吸収移動相；硫酸銅水溶液（濃
度；１ｍｍｏｌ／ｌ）、及び分析イオン；Ｉ- 、ＳＣＮ
- 、Ｎａ+ 、Ｋ+ 、Ｒｂ+ 及びＣｓ+ を用いて、分析
し、そのクロマトグラムを図２２に示す。また、同固定
相及び同ＵＶ吸収移動相（濃度；５ｍｍｏｌ／ｌ）を用
い、更に分析イオンとしてＩ- 、ＳＣＮ-、Ｎａ+ 及び
Ｋ+ を用いて分析し、そのクロマトグラムを図２３に示
す。尚、この両者において、陰イオンは自身のＵＶ吸収
により、陽イオンは間接検出方法により、検出された。
と、溶離液中のイオン濃度又は両極イオン表面活性剤の
種類との関係 溶離液中のイオン濃度について ＮａＴＤＣ固定相、ＵＶ吸収移動相；硫酸銅水溶液（濃
度；１ｍｍｏｌ／ｌ）、及び分析イオン；Ｉ- 、ＳＣＮ
- 、Ｎａ+ 、Ｋ+ 、Ｒｂ+ 及びＣｓ+ を用いて、分析
し、そのクロマトグラムを図２２に示す。また、同固定
相及び同ＵＶ吸収移動相（濃度；５ｍｍｏｌ／ｌ）を用
い、更に分析イオンとしてＩ- 、ＳＣＮ-、Ｎａ+ 及び
Ｋ+ を用いて分析し、そのクロマトグラムを図２３に示
す。尚、この両者において、陰イオンは自身のＵＶ吸収
により、陽イオンは間接検出方法により、検出された。
【００３６】これらの結果によれば、いずれの場合も、
各陰イオン及び各陽イオンともにうまく分離されて、優
れた分離性能を示している。更に、溶離液中のイオン濃
度が増大する（図２３＞図２２）と、両者共通の陰イオ
ンの保持時間（Ｉ- ；約４分＞約３分、ＳＣＮ- ；約７
分＞約６分）は増大したが、一方、共通の陽イオンにつ
いての保持時間（Ｎａ+ ；約９分＜約１３分、Ｋ+ ；約
１０分＜約１５分）は逆に減少した。
各陰イオン及び各陽イオンともにうまく分離されて、優
れた分離性能を示している。更に、溶離液中のイオン濃
度が増大する（図２３＞図２２）と、両者共通の陰イオ
ンの保持時間（Ｉ- ；約４分＞約３分、ＳＣＮ- ；約７
分＞約６分）は増大したが、一方、共通の陽イオンにつ
いての保持時間（Ｎａ+ ；約９分＜約１３分、Ｋ+ ；約
１０分＜約１５分）は逆に減少した。
【００３７】両極イオン表面活性剤の種類について ＣＨＡＰＳ固定相、ＵＶ吸収移動相；硫酸銅水溶液（濃
度；図２２に示す場合と同じ）、及び分析イオン；
Ｉ- 、ＳＣＮ- 、ＮＯ2 - 、ＮＯ3 - 、ＩＯ3 - 及びＮ
ａ+ を用いて分析し、そのクロマトグラムを図２４に示
す。この結果によれば、各陰イオン及び各陽イオンとも
にうまく分離されているものの、図２２の場合と比べる
と、各イオンの保持時間が近寄っていて、分離性能は逆
に悪くなっている。
度；図２２に示す場合と同じ）、及び分析イオン；
Ｉ- 、ＳＣＮ- 、ＮＯ2 - 、ＮＯ3 - 、ＩＯ3 - 及びＮ
ａ+ を用いて分析し、そのクロマトグラムを図２４に示
す。この結果によれば、各陰イオン及び各陽イオンとも
にうまく分離されているものの、図２２の場合と比べる
と、各イオンの保持時間が近寄っていて、分離性能は逆
に悪くなっている。
【００３８】結果のまとめ いずれの場合もうまく全てのイオンが分離されている。
このことは、適度な静電力を選択すれば、目的とする種
々の分析イオンをうまく分析できることを意味してい
る。尚、ＣＨＡＰＳ固定相（＋・δ+ ・−構造、図２
０）は、ＮａＴＤＣ固定相（図２２）の〔δ+ ・−構
造〕との相違のため、陰イオンの溶出が遅れ（Ｉ- ；約
６分＞約３分、ＳＣＮ- ；約８分＞約６分）、且つ陽イ
オンの溶出が速くなる（Ｎａ+ ；約６分＜約１３分）の
で、図２４に示すように、陰イオンと陽イオンとの保持
時間が接近してくることとなる。更に、本両例に示すよ
うに、陽イオンと陰イオンが同時に１つのクロマトグラ
ムにおいて検出されるのは、極めて斬新なものであり興
味深い結果を示している。
このことは、適度な静電力を選択すれば、目的とする種
々の分析イオンをうまく分析できることを意味してい
る。尚、ＣＨＡＰＳ固定相（＋・δ+ ・−構造、図２
０）は、ＮａＴＤＣ固定相（図２２）の〔δ+ ・−構
造〕との相違のため、陰イオンの溶出が遅れ（Ｉ- ；約
６分＞約３分、ＳＣＮ- ；約８分＞約６分）、且つ陽イ
オンの溶出が速くなる（Ｎａ+ ；約６分＜約１３分）の
で、図２４に示すように、陰イオンと陽イオンとの保持
時間が接近してくることとなる。更に、本両例に示すよ
うに、陽イオンと陰イオンが同時に１つのクロマトグラ
ムにおいて検出されるのは、極めて斬新なものであり興
味深い結果を示している。
【００３９】（１０）α−アミラーゼの分離 溶離液；上記硫酸銅水溶液、両極イオン表面活性剤；Ｎ
ａＴＤＣの条件により、α−アミラーゼと２種類の無機
陽イオン（Ｎａ+ 及びＫ+ ）を分析し、そのクロマトグ
ラムを図２５に示す。この結果によれば、大きな分子で
あるα−アミラーゼは、陽イオンと比べて速く溶出して
おり、この固定相は立体排除固定相のように作用してい
る。また、溶離液；上記燐酸塩緩衝液、両極イオン表面
活性剤；ＣＨＡＰＳの条件により、α−アミラーゼを分
析し、そのクロマトグラムを図２６に示す。この結果に
よれば、α−アミラーゼは３〜５分の間に４つの主ピー
クを示し、１２分までに全てのものが溶出しており、α
−アミラーゼの優れた分離を示している。
ａＴＤＣの条件により、α−アミラーゼと２種類の無機
陽イオン（Ｎａ+ 及びＫ+ ）を分析し、そのクロマトグ
ラムを図２５に示す。この結果によれば、大きな分子で
あるα−アミラーゼは、陽イオンと比べて速く溶出して
おり、この固定相は立体排除固定相のように作用してい
る。また、溶離液；上記燐酸塩緩衝液、両極イオン表面
活性剤；ＣＨＡＰＳの条件により、α−アミラーゼを分
析し、そのクロマトグラムを図２６に示す。この結果に
よれば、α−アミラーゼは３〜５分の間に４つの主ピー
クを示し、１２分までに全てのものが溶出しており、α
−アミラーゼの優れた分離を示している。
【００４０】（１１）２種類の両極イオン表面活性剤を
用いた場合 両極イオン表面活性剤としてＮａＴＤＣ及びＣＨＡＰＳ
（等モル）の混合コロイド粒子を被覆した固定相を用い
て、５種類の無機陽イオン及び３種類の無機陰イオンを
同時に分析し、その結果を図２７に示す。溶離液として
は、２ｍＭの塩化セリウム（ＩＩＩ）水溶液を用いた。
検出波長は２５３ｎｍである。この結果によれば、Ｎａ
+ とＫ+ のグループ間の分離を除いて、他のイオンはう
まく分離できた。
用いた場合 両極イオン表面活性剤としてＮａＴＤＣ及びＣＨＡＰＳ
（等モル）の混合コロイド粒子を被覆した固定相を用い
て、５種類の無機陽イオン及び３種類の無機陰イオンを
同時に分析し、その結果を図２７に示す。溶離液として
は、２ｍＭの塩化セリウム（ＩＩＩ）水溶液を用いた。
検出波長は２５３ｎｍである。この結果によれば、Ｎａ
+ とＫ+ のグループ間の分離を除いて、他のイオンはう
まく分離できた。
【００４１】また、更に、上記イオンにトリプトファン
を加えて、同様に分析した結果を図２８に示す。この結
果によれば、トリプトファンは、他のイオンからうまく
分離できた。更に、α−アミラーゼと４種類の無機陽イ
オンとを、上記と同様にして分析した結果を図２９に示
す。この結果によれば、α−アミラーゼは、他のイオン
からうまく分離できた。尚、図２８及び図２９の結果に
よれば、α−アミラーゼ（蛋白質）とトリプトファン
（アミノ酸）と他の無機イオンの各保持時間が異なるの
で、これらはうまく分離できる。
を加えて、同様に分析した結果を図２８に示す。この結
果によれば、トリプトファンは、他のイオンからうまく
分離できた。更に、α−アミラーゼと４種類の無機陽イ
オンとを、上記と同様にして分析した結果を図２９に示
す。この結果によれば、α−アミラーゼは、他のイオン
からうまく分離できた。尚、図２８及び図２９の結果に
よれば、α−アミラーゼ（蛋白質）とトリプトファン
（アミノ酸）と他の無機イオンの各保持時間が異なるの
で、これらはうまく分離できる。
【００４２】（１２）人間の唾液、尿及び血清の分析 人間の唾液の分析 溶離液；上記塩化セリウム水溶液、上記ＮａＴＤＣ−Ｃ
ＨＡＰＳ固定相を用いて、分析した結果を図３０に示
す。溶離液；上記硫酸銅水溶液、上記ＮａＴＤＣ固定相
を用いて、分析した結果を図３１に示す。溶離液；上記
塩化セリウム水溶液、上記ＮａＴＤＣ固定相を用いて、
分析した結果を図３２に示す。溶離液；上記燐酸塩緩衝
液、上記ＣＨＡＰＳ固定相を用いて、分析した結果を図
３３に示す。これらのうち、特に、図３０の結果によれ
ば、α−アミラーゼとトリプトファンと他の無機イオン
がうまく分離されている。
ＨＡＰＳ固定相を用いて、分析した結果を図３０に示
す。溶離液；上記硫酸銅水溶液、上記ＮａＴＤＣ固定相
を用いて、分析した結果を図３１に示す。溶離液；上記
塩化セリウム水溶液、上記ＮａＴＤＣ固定相を用いて、
分析した結果を図３２に示す。溶離液；上記燐酸塩緩衝
液、上記ＣＨＡＰＳ固定相を用いて、分析した結果を図
３３に示す。これらのうち、特に、図３０の結果によれ
ば、α−アミラーゼとトリプトファンと他の無機イオン
がうまく分離されている。
【００４３】人間の尿の分析 溶離液；上記硫酸銅水溶液、上記ＮａＴＤＣ固定相を用
いて、分析した結果を図３４に示す。溶離液；上記塩化
セリウム水溶液、上記ＮａＴＤＣ固定相を用いて、分析
した結果を図３５に示す。これらの結果によれば、所定
の各陽イオンが分離されている。
いて、分析した結果を図３４に示す。溶離液；上記塩化
セリウム水溶液、上記ＮａＴＤＣ固定相を用いて、分析
した結果を図３５に示す。これらの結果によれば、所定
の各陽イオンが分離されている。
【００４４】人間の血清の分析 溶離液；上記硫酸銅水溶液、上記ＮａＴＤＣ固定相を用
いて、分析した結果を図３６に示す。溶離液；上記塩化
セリウム水溶液、上記ＮａＴＤＣ固定相を用いて、分析
した結果を図３７に示す。これらの結果によれば、所定
の各陽イオンが分離されている。
いて、分析した結果を図３６に示す。溶離液；上記塩化
セリウム水溶液、上記ＮａＴＤＣ固定相を用いて、分析
した結果を図３７に示す。これらの結果によれば、所定
の各陽イオンが分離されている。
【００４５】（１３）鏡像異性体の分離 図３８に示す一対の鏡像異性体〔(R)-(-)-BNDHP 及び
(S)-(+)-BNDHP 〕を、溶離液；純水、上記ＮａＴＤＣ固
定相を用いて、分析した結果を図３８に示す。この結果
によれば、各異性体がうまく分離されている。この分離
は、固定相上に被覆させた胆汁コロイド粒子（ミセル）
の螺旋形構造に起因するものである。尚、本発明におい
ては、前記具体的実施例に示すものに限られず、目的、
用途に応じて本発明の範囲内で種々変更した実施例とす
ることができる。
(S)-(+)-BNDHP 〕を、溶離液；純水、上記ＮａＴＤＣ固
定相を用いて、分析した結果を図３８に示す。この結果
によれば、各異性体がうまく分離されている。この分離
は、固定相上に被覆させた胆汁コロイド粒子（ミセル）
の螺旋形構造に起因するものである。尚、本発明におい
ては、前記具体的実施例に示すものに限られず、目的、
用途に応じて本発明の範囲内で種々変更した実施例とす
ることができる。
【００４６】
【発明の効果】本分離・分析方法及び本両荷電具備固定
相を用いれば、溶離液としてイオンを含む溶液のみなら
ず、水を用いることができ、その適用範囲が広く、ま
た、陰イオン間又は陽イオン間のみならず、陰イオン及
び陽イオンの異種イオン混合の場合でも、各イオンをう
まく且つ簡便に分離でき、極めて有用である。また、本
方法は、イオン性溶離剤を使用した時、この溶離液中の
イオン濃度が増大すると、分析イオンの保持時間が増大
するという、従来と逆の挙動を示す作用を利用するもの
である。更に、両荷電相を形成する陰陽の両荷電部を有
する化合物のこの静電状態（陰陽の程度）を適宜、選択
することにより、幅広く且つ簡便に所望イオンを分離・
分析できる。
相を用いれば、溶離液としてイオンを含む溶液のみなら
ず、水を用いることができ、その適用範囲が広く、ま
た、陰イオン間又は陽イオン間のみならず、陰イオン及
び陽イオンの異種イオン混合の場合でも、各イオンをう
まく且つ簡便に分離でき、極めて有用である。また、本
方法は、イオン性溶離剤を使用した時、この溶離液中の
イオン濃度が増大すると、分析イオンの保持時間が増大
するという、従来と逆の挙動を示す作用を利用するもの
である。更に、両荷電相を形成する陰陽の両荷電部を有
する化合物のこの静電状態（陰陽の程度）を適宜、選択
することにより、幅広く且つ簡便に所望イオンを分離・
分析できる。
【００４７】また、正負両電荷を同時に持ち且つ螺旋形
立体構造を有する化合物を結合した固定相を用いれば、
無機イオンとアミノ酸と蛋白質等との間の分離もでき、
また鏡像異性体の分離もできるので、多機能液体クロマ
トグラフィーとして有用である。以上より、本発明の方
法を用いれば、静電気相互作用、イオン交換作用及び螺
旋形立体構造による作用の１種又は２種以上を利用する
ことにより、同性イオン間の分離・分析、異性イオ
ンとの混合イオン間の同時分離・分析、陽イオン、陰
イオン、有機化合物（アミノ酸、蛋白質等）及び光学異
性体等の２種以上の混合物からの同時分離・分析を行う
ことができる。
立体構造を有する化合物を結合した固定相を用いれば、
無機イオンとアミノ酸と蛋白質等との間の分離もでき、
また鏡像異性体の分離もできるので、多機能液体クロマ
トグラフィーとして有用である。以上より、本発明の方
法を用いれば、静電気相互作用、イオン交換作用及び螺
旋形立体構造による作用の１種又は２種以上を利用する
ことにより、同性イオン間の分離・分析、異性イオ
ンとの混合イオン間の同時分離・分析、陽イオン、陰
イオン、有機化合物（アミノ酸、蛋白質等）及び光学異
性体等の２種以上の混合物からの同時分離・分析を行う
ことができる。
【図１】実施例で用いた両荷電具備固定相に分析イオン
を通過させた状態を示す模式的説明図である。
を通過させた状態を示す模式的説明図である。
【図２】ＣＨＡＰＳ及びＣＨＡＰＳＯの各化学構造を示
す説明図である。
す説明図である。
【図３】ＮａＴＤＣ及びＮａＴＣの化学構造を示す説明
図である。
図である。
【図４】Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ３−１４の化学構造を
示す説明図である。
示す説明図である。
【図５】実施例において、ＣＨＡＰＳ固定相及び溶離
液；純水を用いて６種類のＵＶ吸収無機陰イオンを分析
して得たクロマトグラムの説明図である。
液；純水を用いて６種類のＵＶ吸収無機陰イオンを分析
して得たクロマトグラムの説明図である。
【図６】実施例において、ＣＨＡＰＳＯ固定相及び溶離
液；純水を用いて７種類の無機陰イオンを分析して得た
クロマトグラムの説明図である。
液；純水を用いて７種類の無機陰イオンを分析して得た
クロマトグラムの説明図である。
【図７】実施例において、ＮａＴＤＣ固定相及び溶離
液；純水を用いて５種類の陰イオンを分析して得たクロ
マトグラムの説明図である。
液；純水を用いて５種類の陰イオンを分析して得たクロ
マトグラムの説明図である。
【図８】実施例において、Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ３−
１４固定相及び溶離液；純水を用いて３種類の陰イオン
を分析して得たクロマトグラムの説明図である。
１４固定相及び溶離液；純水を用いて３種類の陰イオン
を分析して得たクロマトグラムの説明図である。
【図９】実施例において、ＣＨＡＰＳ固定相及び溶離
液；純水を用いて２種類のＵＶ吸収無機陽イオンを分析
して得たクロマトグラムの説明図である。
液；純水を用いて２種類のＵＶ吸収無機陽イオンを分析
して得たクロマトグラムの説明図である。
【図１０】実施例において、ＮａＴＤＣ固定相及び溶離
液；硫酸銅水溶液を用いて２種類の無機陽イオンを分析
して得たクロマトグラムの説明図である。
液；硫酸銅水溶液を用いて２種類の無機陽イオンを分析
して得たクロマトグラムの説明図である。
【図１１】実施例において、ＮａＴＤＣ固定相及び溶離
液；塩化セリウム水溶液を用いて３種類の２価陽イオン
を分析して得たクロマトグラムの説明図である。
液；塩化セリウム水溶液を用いて３種類の２価陽イオン
を分析して得たクロマトグラムの説明図である。
【図１２】実施例において、ＣＨＡＰＳ固定相及び溶離
液；純水を用いて３種類のＵＶ吸収アミノ酸を分析して
得たクロマトグラムの説明図である。
液；純水を用いて３種類のＵＶ吸収アミノ酸を分析して
得たクロマトグラムの説明図である。
【図１３】実施例において、ＣＨＡＰＳ固定相及び溶離
液；燐酸塩緩衝液を用いて５種類の無機陰イオンを分析
して得たクロマトグラムの説明図である。
液；燐酸塩緩衝液を用いて５種類の無機陰イオンを分析
して得たクロマトグラムの説明図である。
【図１４】実施例において、ＣＨＡＰＳ固定相及び溶離
液；燐酸塩緩衝液を用いて７種類の無機陰イオンを分析
して得たクロマトグラムの説明図である。
液；燐酸塩緩衝液を用いて７種類の無機陰イオンを分析
して得たクロマトグラムの説明図である。
【図１５】実施例において、ＣＨＡＰＳ固定相及び溶離
液；燐酸塩緩衝液を用いて３種類のアミノ酸を分析して
得たクロマトグラムの説明図である。
液；燐酸塩緩衝液を用いて３種類のアミノ酸を分析して
得たクロマトグラムの説明図である。
【図１６】実施例において、溶離液；燐酸−水素ナトリ
ウム水溶液中の燐酸−水素ナトリウム濃度と保持時間の
関係を示すグラフである。
ウム水溶液中の燐酸−水素ナトリウム濃度と保持時間の
関係を示すグラフである。
【図１７】実施例において、溶離液；硫酸第二銅水溶液
中の硫酸銅濃度と保持時間の関係を示すグラフである。
中の硫酸銅濃度と保持時間の関係を示すグラフである。
【図１８】実施例において、溶離液；燐酸塩緩衝液中の
燐酸塩濃度と保持時間の関係を示すグラフである。
燐酸塩濃度と保持時間の関係を示すグラフである。
【図１９】分離された硫酸イオン、塩素イオン及び硝酸
イオンを間接検出方法にて検出したクロマトグラムの説
明図である。
イオンを間接検出方法にて検出したクロマトグラムの説
明図である。
【図２０】実施例において、ＮａＴＤＣ固定相及び溶離
液；硫酸銅水溶液を用いて分離された陽イオンを間接検
出方法にて検出したクロマトグラムの説明図である。
液；硫酸銅水溶液を用いて分離された陽イオンを間接検
出方法にて検出したクロマトグラムの説明図である。
【図２１】実施例において、ＣＨＡＰＳ固定相及び溶離
液；硝酸セリウム水溶液を用いて分離された陽イオンを
間接検出方法にて検出したクロマトグラムの説明図であ
る。
液；硝酸セリウム水溶液を用いて分離された陽イオンを
間接検出方法にて検出したクロマトグラムの説明図であ
る。
【図２２】実施例において、ＮａＴＤＣ固定相及び溶離
液；硫酸銅水溶液を用いて同時に分離された陰イオン及
び陽イオンを間接検出方法にて検出したクロマトグラム
の説明図である。
液；硫酸銅水溶液を用いて同時に分離された陰イオン及
び陽イオンを間接検出方法にて検出したクロマトグラム
の説明図である。
【図２３】実施例において、ＮａＴＤＣ固定相及び溶離
液；イオン濃度を上げた硫酸銅水溶液を用いて分離され
た陰イオン及び陽イオンを同時に間接検出方法にて検出
したクロマトグラムの説明図である。
液；イオン濃度を上げた硫酸銅水溶液を用いて分離され
た陰イオン及び陽イオンを同時に間接検出方法にて検出
したクロマトグラムの説明図である。
【図２４】実施例において、ＣＨＡＰＳ固定相及び溶離
液；硫酸銅水溶液を用いて分離された陰イオン及び陽イ
オンを間接検出方法にて検出したクロマトグラムの説明
図である。
液；硫酸銅水溶液を用いて分離された陰イオン及び陽イ
オンを間接検出方法にて検出したクロマトグラムの説明
図である。
【図２５】実施例において、ＮａＴＤＣ固定相及び溶離
液；硫酸銅水溶液を用いてα−アミラーゼ及び２種類の
無機陽イオンを分析して得たクロマトグラムの説明図で
ある。
液；硫酸銅水溶液を用いてα−アミラーゼ及び２種類の
無機陽イオンを分析して得たクロマトグラムの説明図で
ある。
【図２６】実施例において、ＣＨＡＰＳ固定相及び溶離
液；燐酸塩緩衝液を用いてα−アミラーゼを分析して得
たクロマトグラムの説明図である。
液；燐酸塩緩衝液を用いてα−アミラーゼを分析して得
たクロマトグラムの説明図である。
【図２７】実施例において、ＮａＴＤＣ−ＣＨＡＰＳ固
定相及び溶離液；塩化セリウム水溶液を用いて５種類の
陽イオン及び２種類の陰イオンを分析して得たクロマト
グラムの説明図である。
定相及び溶離液；塩化セリウム水溶液を用いて５種類の
陽イオン及び２種類の陰イオンを分析して得たクロマト
グラムの説明図である。
【図２８】実施例において、ＮａＴＤＣ−ＣＨＡＰＳ固
定相及び溶離液；塩化セリウム水溶液を用いて陽イオ
ン、陰イオン及びトリプトファンを分析して得たクロマ
トグラムの説明図である。
定相及び溶離液；塩化セリウム水溶液を用いて陽イオ
ン、陰イオン及びトリプトファンを分析して得たクロマ
トグラムの説明図である。
【図２９】実施例において、ＮａＴＤＣ−ＣＨＡＰＳ固
定相及び溶離液；塩化セリウム水溶液を用いて陽イオン
及びα−アミラーゼを分析して得たクロマトグラムの説
明図である。
定相及び溶離液；塩化セリウム水溶液を用いて陽イオン
及びα−アミラーゼを分析して得たクロマトグラムの説
明図である。
【図３０】実施例において、ＮａＴＤＣ−ＣＨＡＰＳ固
定相及び溶離液；塩化セリウム水溶液を用いて人間の唾
液を分析して得たクロマトグラムの説明図である。
定相及び溶離液；塩化セリウム水溶液を用いて人間の唾
液を分析して得たクロマトグラムの説明図である。
【図３１】実施例において、ＮａＴＤＣ−ＣＨＡＰＳ固
定相及び溶離液；硫酸銅水溶液を用いて人間の唾液を分
析して得たクロマトグラムの説明図である。
定相及び溶離液；硫酸銅水溶液を用いて人間の唾液を分
析して得たクロマトグラムの説明図である。
【図３２】実施例において、ＮａＴＤＣ固定相及び溶離
液；塩化セリウム水溶液を用いて人間の唾液を分析して
得たクロマトグラムの説明図である。
液；塩化セリウム水溶液を用いて人間の唾液を分析して
得たクロマトグラムの説明図である。
【図３３】実施例において、ＣＨＡＰＳ固定相及び溶離
液；燐酸塩緩衝液を用いて人間の唾液を分析して得たク
ロマトグラムの説明図である。
液；燐酸塩緩衝液を用いて人間の唾液を分析して得たク
ロマトグラムの説明図である。
【図３４】実施例において、ＮａＴＤＣ固定相及び溶離
液；硫酸銅水溶液を用いて人間の尿を分析して得たクロ
マトグラムの説明図である。
液；硫酸銅水溶液を用いて人間の尿を分析して得たクロ
マトグラムの説明図である。
【図３５】実施例において、ＮａＴＤＣ固定相及び溶離
液；塩化セリウム水溶液を用いて人間の尿を分析して得
たクロマトグラムの説明図である。
液；塩化セリウム水溶液を用いて人間の尿を分析して得
たクロマトグラムの説明図である。
【図３６】実施例において、ＮａＴＤＣ固定相及び溶離
液；硫酸銅水溶液を用いて人間の血清を分析して得たク
ロマトグラムの説明図である。
液；硫酸銅水溶液を用いて人間の血清を分析して得たク
ロマトグラムの説明図である。
【図３７】実施例において、ＮａＴＤＣ固定相及び溶離
液；塩化セリウム水溶液を用いて人間の血清を分析して
得たクロマトグラムの説明図である。
液；塩化セリウム水溶液を用いて人間の血清を分析して
得たクロマトグラムの説明図である。
【図３８】実施例において、ＮａＴＤＣ固定相及び溶離
液；純水を用いて鏡像異性体を分析して得たクロマトグ
ラムの説明図である。
液；純水を用いて鏡像異性体を分析して得たクロマトグ
ラムの説明図である。
１；両荷電具備固定相、１１；支持担体、１２；ＯＤＳ
層、１３；両荷電層。
層、１３；両荷電層。
Claims (19)
- 【請求項１】 分離カラム内に充填された固定相の一端
側に、複数の分析イオンを含む試料液を注入し、その
後、溶離液を展開させて各分析イオンの保持時間の相違
を以て各分析イオンを分析する静電気イオンクロマトグ
ラフィーによる分析体の分離・分析方法において、 上記固定相としては、支持担体と、該支持担体の表面上
に、直接に又は間接に、陽及び陰の両荷電部を有する化
合物が被覆されて形成される両荷電層と、を備える両荷
電具備固定相を用いたことを特徴とする静電気イオンク
ロマトグラフィーによる分析体の分離・分析方法。 - 【請求項２】 上記両荷電具備固定相において、上記支
持担体は多孔性シリカゲルからなり、また該支持担体の
表面にはアルキルシランを反応させて得られる疎水性層
が形成され、更に該疎水性層の表面には上記両荷電層が
吸着形成されている請求項１記載の静電気イオンクロマ
トグラフィーによる分析体の分離・分析方法。 - 【請求項３】 上記陽及び陰の両荷電部を有する化合物
は、アンモニウム塩部若しくはアミド部、及びスルホン
酸イオン部若しくはカルボン酸イオン部を備える化合物
である請求項１又は２記載の静電気イオンクロマトグラ
フィーによる分析体の分離・分析方法。 - 【請求項４】 上記陽及び陰の両荷電部を有する化合物
は、３−〔３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモ
ニオ〕−１−プロパンスルホネート、３−〔３−コール
アミドプロピル）ジメチルアンモニオ〕−２−ヒドロキ
シ−１−プロパンスルホネート、タウロデオキシコール
酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム及びＨ29Ｃ14
Ｎ+ （ＣＨ3 ）2 （ＣＨ2 ）3 ＳＯ3 - のうちの少なく
とも一種である請求項１又は２記載の静電気イオンクロ
マトグラフィーによる分析体の分離・分析方法。 - 【請求項５】 上記陽及び陰の両荷電部を有する化合物
としては、３−〔３−コールアミドプロピル）ジメチル
アンモニオ〕−１−プロパンスルホネート、３−〔３−
コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ〕−２−ヒ
ドロキシ−１−プロパンスルホネート及びＨ29Ｃ14Ｎ+
（ＣＨ3 ）2 （ＣＨ2 ）3 ＳＯ3 - の少なくとも一種
と、タウロデオキシコール酸ナトリウム及びタウロコー
ル酸ナトリウムの少なくとも一種の混合物を用いる請求
項１又は２記載の静電気イオンクロマトグラフィーによ
る分析体の分離・分析方法。 - 【請求項６】 上記分析イオンは、陽イオン及び陰イオ
ンの混合からなる請求項１〜５記載の静電気イオンクロ
マトグラフィーによる分析体の分離・分析方法。 - 【請求項７】 上記溶離液は水である請求項１〜６記載
の静電気イオンクロマトグラフィーによる分析体の分離
・分析方法。 - 【請求項８】 分離された上記分析イオンを検出するの
は紫外線検出器、電気伝導度検出器又は電気化学的検出
器である請求項１〜７記載の静電気イオンクロマトグラ
フィーによる分析体の分離・分析方法。 - 【請求項９】 分離された上記分析イオンを検出するの
は紫外線検出器であり、上記分析イオンは、紫外線を吸
収しないイオンを含み、上記溶離液は紫外線吸収性物質
を含む溶液である請求項１〜７記載の静電気イオンクロ
マトグラフィーによる分析体の分離・分析方法。 - 【請求項１０】 支持担体と、該支持担体の表面上に、
直接に又は間接に、陽及び陰の両荷電部を有する化合物
が被覆されて形成される両荷電層と、を備えることを特
徴とするイオンクロマトグラフィー用両荷電具備固定
相。 - 【請求項１１】上記支持担体は多孔性シリカゲルからな
り、また該支持担体の表面にはアルキルシランを反応さ
せて得られる疎水性層が形成され、更に該疎水性層の表
面には上記両荷電層が吸着形成されている請求項１０記
載のイオンクロマトグラフィー用両荷電具備固定相。 - 【請求項１２】上記陽及び陰の両荷電部を有する化合物
は、アンモニウム塩部若しくはアミド部、及びスルホン
酸イオン部若しくはカルボン酸イオン部を備える化合物
である請求項１０又１１記載のイオンクロマトグラフィ
ー用両荷電具備固定相。 - 【請求項１３】上記陽及び陰の両荷電部を有する化合物
は、３−〔３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモ
ニオ〕−１−プロパンスルホネート、３−〔３−コール
アミドプロピル）ジメチルアンモニオ〕−２−ヒドロキ
シ−１−プロパンスルホネート、タウロデオキシコール
酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム及びＨ29Ｃ14
Ｎ+ （ＣＨ3 ）2 （ＣＨ2 ）3 ＳＯ3 - のうちの少なく
とも一種であるである請求項１０又は１１記載のイオン
クロマトグラフィー用両荷電具備固定相。 - 【請求項１４】 上記陽及び陰の両荷電部を有する化合
物としては、３−〔３−コールアミドプロピル）ジメチ
ルアンモニオ〕−１−プロパンスルホネート及び３−
〔３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ〕−
２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート及びＨ29Ｃ
14Ｎ+ （ＣＨ3 ）2 （ＣＨ2 ）3 ＳＯ3 - の少なくとも
一種と、タウロデオキシコール酸ナトリウム及びタウロ
コール酸ナトリウムの少なくとも一種の混合物を用いる
請求項１０又は１１記載の静電気イオンクロマトグラフ
ィーによる分析体の分離・分析方法。 - 【請求項１５】 分離カラム内に充填された固定相の一
端側に、分析体を含む試料液を注入し、その後、溶離液
を展開させて各分析体の保持時間の相違を以て各分析体
を分析する多機能液体クロマトグラフィーによる分析体
の分離・分析方法において、 上記分析体としては、鏡像異性体、無機イオン、有機イ
オン及び非イオン系有機化合物のうちの１種又は２種以
上を用い、 上記固定相としては、支持担体と、該支持担体の表面上
に、直接に又は間接に、陽及び陰の両荷電部を有する化
合物が被覆されて形成される両荷電層と、を備える両荷
電具備固定相を用いたことを特徴とする多機能液体クロ
マトグラフィーによる分析体の分離・分析方法。 - 【請求項１６】 ３−〔３−コールアミドプロピル）ジ
メチルアンモニオ〕−１−プロパンスルホネート、３−
〔３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ〕−
２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート、タウロデ
オキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム
及びＨ29Ｃ14Ｎ+ （ＣＨ3 ）2 （ＣＨ 2 ）3 ＳＯ3 - の
うちの少なくとも一種である請求項１５記載の多機能液
体クロマトグラフィー。 - 【請求項１７】 上記両荷電具備固定相において、上記
支持担体は多孔性シリカゲルからなり、また該支持担体
の表面にはアルキルシランを反応させて得られる疎水性
層が形成され、更に該疎水性層の表面には上記両荷電層
が吸着形成されている請求項１５又は１６記載の多機能
液体クロマトグラフィーによる分析体の分離・分析方
法。 - 【請求項１８】 分離カラム内に充填された固定相の一
端側に、分析体を含む試料液を注入し、その後、溶離液
を展開させて各分析体の保持時間の相違を以て各分析体
を分析する多機能液体クロマトグラフィーによる分析体
の分離・分析方法において、 上記分析体としては、鏡像異性体、無機イオン、有機イ
オン及び非イオン系有機化合物のうちの１種又は２種以
上を用い、 上記固定相としては、支持担体と、該支持担体の表面上
に、直接に又は間接に、３−〔３−コールアミドプロピ
ル）ジメチルアンモニオ〕−１−プロパンスルホネー
ト、３−〔３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモ
ニオ〕−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート及
びＨ29Ｃ14Ｎ+ （ＣＨ3 ）2 （ＣＨ2 ）3ＳＯ3 - の少
なくとも一種と、タウロデオキシコール酸ナトリウム及
びタウロコール酸ナトリウムの少なくとも一種からなる
混合物が被覆されて形成される両荷電層と、を備える両
荷電具備固定相を用いたことを特徴とする多機能液体ク
ロマトグラフィーによる分析体の分離・分析方法。 - 【請求項１９】 上記両荷電具備固定相において、上記
支持担体は多孔性シリカゲルからなり、また該支持担体
の表面にはアルキルシランを反応させて得られる疎水性
層が形成され、更に該疎水性層の表面には上記両荷電層
が吸着形成されている請求項１８記載の多機能液体クロ
マトグラフィーによる分析体の分離・分析方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10362593A JP3351572B2 (ja) | 1992-10-05 | 1993-04-05 | イオンクロマトグラフィーによる分析体の分離・分析方法、イオンクロマトグラフィー用両荷電具備固定相及び多機能液体クロマトグラフィーによる分析体の分離・分析方法 |
| US08/661,892 US5589069A (en) | 1992-10-05 | 1996-06-12 | Method for separating and analyzing ions by electrostatic ion chromatography and a zwitterionic stationary phase for ion chromatography and method for separating and analyzing analytes by multifunctional liquid chromatography |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29073992 | 1992-10-05 | ||
| JP4-290739 | 1992-10-05 | ||
| JP10362593A JP3351572B2 (ja) | 1992-10-05 | 1993-04-05 | イオンクロマトグラフィーによる分析体の分離・分析方法、イオンクロマトグラフィー用両荷電具備固定相及び多機能液体クロマトグラフィーによる分析体の分離・分析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06229994A true JPH06229994A (ja) | 1994-08-19 |
| JP3351572B2 JP3351572B2 (ja) | 2002-11-25 |
Family
ID=26444248
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10362593A Expired - Lifetime JP3351572B2 (ja) | 1992-10-05 | 1993-04-05 | イオンクロマトグラフィーによる分析体の分離・分析方法、イオンクロマトグラフィー用両荷電具備固定相及び多機能液体クロマトグラフィーによる分析体の分離・分析方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
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| US (1) | US5589069A (ja) |
| JP (1) | JP3351572B2 (ja) |
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