JPH06233692A - γ−サイクロデキストリンの増収方法 - Google Patents

γ−サイクロデキストリンの増収方法

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JPH06233692A
JPH06233692A JP5045747A JP4574793A JPH06233692A JP H06233692 A JPH06233692 A JP H06233692A JP 5045747 A JP5045747 A JP 5045747A JP 4574793 A JP4574793 A JP 4574793A JP H06233692 A JPH06233692 A JP H06233692A
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茂治 森
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民生 間瀬
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Abstract

(57)【要約】 【目的】本発明はγ−サイクロデキストリン・グルカノ
トランスフェラーゼを使用しγ−サイクロデキストリン
のより安価な工業的製造法を提供する。 【構成】澱粉にγ−サイクロデキストリン・グルカノト
ランスフェラーゼを作用させてγ−サイクロデキストリ
ンとβ−サイクロデキストリンを生成せしめる反応液中
にエチルアルコールを添加することにより、β−サイク
ロデキストリンの生成を抑制しつつγ−サイクロデキス
トリンの生成を促進することを特徴とするγ−サイクロ
デキストリンの増収方法。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、澱粉にγ−サイクロデ
キストリン・グルカノトランスフェラーゼ（以下γ−CG
Taseという）を作用させ、γ−サイクロデキストリン
（以下γ-ＣＤという）とβ−サイクロデキストリン
（以下β−ＣＤという）を生成せしめる反応液中にエチ
ルアルコールを添加することによって、β−ＣＤの生成
を抑制しつつγ−ＣＤの生成を促進することを特徴とす
る総サイクロデキストリン（以下Ｔ−ＣＤという）の増
収を伴なわず、且つγ−ＣＤの収量を高めるところのγ
−ＣＤの増収方法に関する。
【０００２】サイクロデキストリン（以下ＣＤという）
は、６〜８個のグルコース分子がα−1,4−グルコシド
結合で環状に結合した非還元性のマルトオリゴ糖であ
り、その分子空洞内に種々の物質を取り込んで包接化合
物を形成し、取り込まれた物質の物理、化学的性質を変
化させることができ、そのため、酸化しやすい化合物や
光分解し易い化合物の安定化、揮発性化合物の不揮発
化、難溶性化合物の可溶化、臭気性物質の無臭化が可能
であり、医薬品、化粧品、農薬及び食品への広い分野で
利用されている。
【０００３】ＣＤには、グルコース分子数が６個からな
るα−ＣＤ、グルコース分子数が７個からなるβ−Ｃ
Ｄ、そしてグルコース分子数が８個からなるγ−ＣＤが
よく知られているが、このうちγ−ＣＤは、溶解度が大
きく、且つ包接能力にも優れているので、医薬品、化粧
品、農薬及び食品工業等への利用が、より有用視されて
いる。
【０００４】
【従来の技術】これまでに知られたγ−CGTaseとして
は、バチルス属の僅かな菌株に知られているに過ぎな
い。例えば、バチルス・エスピー（Bacillus sp.）AL６
のCGTase（特開昭61-274680号）、バチルス・エスピー
（Bacillus sp.）No.313のCGTase（特開昭62-25976号）
及びバチルス・フィルムス（Bacillus firmus）290-3の
CGTase〔New trend in cyclodextrins and derivatives
25頁（1991年）,サンテ（Sante）社（フランス，パ
リ）〕が挙げられるのみであり、それ故、γ−ＣＤの産
業上の利用に関してはほとんど行われていない。
【０００５】そこで、本発明者らは、先に、γ−CGTase
生産能を有する微生物を見いだし、該微生物を培養し、
培養物中にγ−CGTaseを産生せしめ、これを採取すると
共に、該酵素を使用してのγ−ＣＤの工業的製造法を提
供した（特願平4-293801号及び特願平4-293802号）。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】しかし、本発明者らが
先に見いだしたγ−CGTaseを用いてγ−ＣＤをより安価
に提供するため、基質の澱粉濃度を高めたり、酵素の作
用時間を長くするとγ−ＣＤ量が減少し、β−ＣＤ量が
増加するという新たな問題点を生じた。
【０００７】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らは、
この問題を解決するために、高濃度の澱粉にγ−CGTase
を作用させてγ−ＣＤとβ−ＣＤを生成せしめる反応液
中にエチルアルコールを添加することによってγ−ＣＤ
の生成をより促進させることを試みたところ、エチルア
ルコールの添加は、単にγ−ＣＤの生成を促進させるだ
けの効果ではなく、β−ＣＤの生成を抑制しつつγ−Ｃ
Ｄの生成を促進させる効果、即ち、Ｔ−ＣＤの増収を伴
うことなくγ−ＣＤの生成を促進せしめる効果であるこ
とを新たに見いだした。
【０００８】これまでに、α−CGTaseを用いて反応液中
にエチルアルコールを添加することによるα−ＣＤの増
収法が報告されている（特公昭60-25118号）が、しか
し、この方法は、同時に生成するβ−ＣＤやγ−ＣＤを
抑制しないところの、換言すれば、Ｔ−ＣＤの増収を伴
うところのα−ＣＤの増収法であった。
【０００９】又、γ−CGTaseを用いて反応液中にエチル
アルコールを添加することによるγ−ＣＤの増収法も報
告されている（特開昭62-25976号）が、この方法におい
ても副生するβ−ＣＤの生成抑制については何も記載さ
れていない。
【００１０】そもそも、β-ＣＤは、水に対する溶解度
が他のＣＤ（α−ＣＤ及びγ−ＣＤ）に比べて極端に低
く、結晶化し易いため、他のＣＤ中に混在するとＣＤ水
飴等の商品価値を減ずるので、その生成は、できるだけ
抑制されることが望ましい。
【００１１】従って、β−ＣＤの生成を抑制し、γ−Ｃ
Ｄの増収方法を提供する本願発明は、有益且つ新規なγ
−サイクロデキストリンの増収方法である。
【００１２】そして、本発明者らは、上記の知見をもと
に、鋭意検討の結果、Ｔ−ＣＤの増収を伴わない、即ち
β−ＣＤの生成を抑制しつつγ−ＣＤの生成を増加させ
るところのγ−ＣＤの増収方法を確立することにより、
本発明を完成したものである。
【００１３】本発明において使用されるγ−CGTaseは、
澱粉に作用し、γ−ＣＤとβ−ＣＤを生成するものであ
ればいずれをも使用できるが、好ましくは、本発明者ら
が先に土壌から分離したブレビバクテリウム・エスピー
及びバチルス・メガテリウム由来のγ−CGTaseを使用す
ることができる。
【００１４】新たに土壌から発見、分離されたブレビバ
クテリウム・エスピー菌株の菌学的性質は下記の通りで
ある。
【００１５】（１）形態 細胞の形および大きさ：細い桿菌（菌端は膨張する） 0.5〜0.7×5.0〜20μ 細胞の多形成の有無：認められる 運動性の有無：あり（周鞭毛） 胞子の有無：形成しない グラム染色性：陰性 抗酸性：陰性
【００１６】（２）各培地における生育状態 肉汁寒天平板培養：発育はやや弱い、全縁半透明の粘性
あるコロニーで表面平滑（φ２〜３mm） 肉汁寒天斜面培養：発育やや弱い、直状、生色、半透明 肉汁液体培養：培地は全体に薄く白濁し、底部に粘性の
菌泥沈殿がみられる。 リトマスミルク培養：変化しない
【００１７】（３）生理学的性質 酸素に対する態度：偏性好気性 カタラーゼ：陽性 オキシダーゼ：陰性 ＯＦテスト：発酵、酸化共になし ブドウ糖からのガスの産生：陰性 インドールの生成：陰性 硝酸塩の還元：陽性 チロシンの加水分解：陰性 澱粉の加水分解：陽性 カゼインの加水分解：陰性 ゼラチンの加水分解：陽性 ジヒドロキシアセトン：陰性 フェニルアラニンデアミナーゼ：陰性 エッグヨーク反応：陰性 0.001％リゾチーム生育：陰性 ウレアーゼ：陰性 ＴＳＩ寒天培地（斜面の酸）：赤／赤 硫化水素の生成：陰性 マッコンキー培地の生育：陰性 ＹＭＡ培地の生育：陰性 ビスマスブイヨンでの生育：陰性 ３−ケト−乳酸の生成：陰性 食塩に対する生育性：（0.5〜15％で陽性、20％で陰
性） 生育温度の範囲：16〜45℃（最適は36〜38℃） 生育ｐＨの範囲：8.0〜11.6（最適は8.5〜9.0） 糖類からの酸生成の有無： Ｌ−アラビノース − キシロース − グルコース − マンニット − サリシン − 澱粉 −
【００１８】そして、本菌をBergey's Manual of Syste
matic Bacteriology，第２巻（1986）を参照し、同定し
た結果、本菌はグラム陰性、チトクロムオキシダーゼ陰
性、周鞭毛、無胞子、糖より酸非産生等の諸性質を有す
ることから、アシネトバクター（Acinetobater）、リゾ
ビウム（Rhizobium)、アグロバクテリウム（Agrobacter
ium）、ナトロノバクテリウム（Natronobacterium）、
バチルス（Bacillus）等のいずれの属にも相当せず、コ
リネフォームタイプ（Coryneform Type)に属することか
ら、その内の一つの属であるブレビバクテリウム（Brev
ibacterium）属に属するものとした。
【００１９】そして又、上記の菌学的性質を有する本菌
株は、既知のブレビバクテリウム（Brevibacterium）属
の何れの種にも属さず、新菌種であり、本菌株をブレビ
バクテリウム・エスピー（Brevibacterium sp.）No.960
5と命名し、工業技術院微生物工業技術研究所に微工研
菌寄第13141号（FERM P-13141）として寄託した。
【００２０】又、新たに土壌から発見、分離されたバチ
ルス・メガテリウム菌株の菌学的性質は下記の通りであ
る。
【００２１】（１）形態 細胞の形および大きさ：太い桿菌（菌端は膨張する） 1.1〜1.4×4.0〜6.0μ 運動性の有無：あり（周鞭毛） 胞子の有無：あり（細胞は膨張しない） グラム染色性：陽性 抗酸性：陰性
【００２２】（２）各培地における生育状態 肉汁寒天平板培養：発育は良好、全縁不透明の光沢ある
コロニーで表面平滑（φ1.0〜1.5 mm） 肉汁寒天斜面培養：発育良好、直状、台状、白色、バタ
ー 肉汁液体培養：培地は全体に薄く白濁し、液面に微かに
菌蓋、底部に粘性の菌泥沈殿がみられる。 リトマスミルク培養：変化しない
【００２３】（３）生理学的性質 酸素に対する態度：偏性好気性 カタラーゼ：陽性 オキシダーゼ：陰性 ＯＦテスト：発酵、酸化共になし ブドウ糖からのガスの産生：陰性 インドールの生成：陰性 硝酸塩の還元：陽性（亜硝酸塩も還元） チロシンの加水分解：陽性 澱粉の加水分解：陽性 カゼインの加水分解：陰性 ゼラチンの加水分解：陽性 ジヒドロキシアセトン：陰性 フェニルアラニンデアミナーゼ：陰性 クエン酸の利用：陽性 エッグヨーク反応：陰性 0.001％リゾチーム生育：陰性 ウレアーゼ：陰性 ＴＳＩ寒天培地（斜面の酸）：黄／赤 硫化水素の生成：陰性 マッコンキー培地の生育：陰性 食塩に対する生育性：（0.5〜7.0％で陽性、10％で陰
性） 生育温度の範囲：12〜39℃（最適は31〜33℃） 生育pHの範囲：7.7〜11.6（最適は8.5） 糖類からの酸生成の有無： Ｌ−アラビノース − キシロース − グルコース ＋（ガス発生せず） マンニット ＋（ガス発生せず） サリシン ＋ 澱粉 ＋
【００２４】そして、本菌をBergey' Manual of Determ
inative Bacteriology，第８版（1974）、Bergey' Manu
al of Systematic Bacteriology，第２巻（1986）及び
『TheGenus Bacillus』U.S.Department of Agriculture
Handbook No.427 p-160 を参照し、同定したところ、
本菌はグラム陽性、周鞭毛、有胞子であることから、バ
チルス（Bacillus）属に属する菌であることがわかり、
さらに、本菌は、上記の菌学的諸性質からバチルス・メ
ガテリウム（Bacillus megaterium）、バチルス・セレ
ウス（Bacillus cereus）、バチルス・フィルムス（Bac
illus firmus）のいずれかに属することが分かるが、し
かし、バチルス・フィルムス（Bacillusfirmus）とは、
菌幅とクエン酸利用で異なり、バチルス・セレウス（Ba
cilluscereus）とは、エッグヨーク反応陰性、偏性好気
性、菌幅が大きいこと、及び食塩10％で生育しないこと
等で異なるので、本菌をバチルス・メガテリウム（Baci
llus megaterium）に属するものとし、本菌株をバチル
ス・メガテリウム（Bacillus megaterium）No.9604と命
名した。本菌株は工業技術院微生物工業技術研究所に微
工研菌寄第13142号（FERM P-13142）として寄託されて
いる。
【００２５】これらの菌株を利用して、γ−CGTaseを製
造するためには、当該微生物が良好に生育し、酵素を順
調に生産するために必要な炭素源、窒素源、無機塩、必
要な栄養源等を含有する合成培地又は天然培地中でこれ
を培養する。炭素源としては、澱粉又はその組成画分、
焙焼デキストリン、加工澱粉、澱粉誘導体、物理処理澱
粉及びα−澱粉等の炭水化物が使用できる。具体例とし
ては、可溶性澱粉、トウモロコシ澱粉、馬鈴薯澱粉、甘
藷澱粉、デキストリン、アミロペクチン、アミロース等
があげられる。
【００２６】窒素源としては、ポリペプトン、カゼイ
ン、肉エキス、酵母エキス、コーンスティープリカー或
いは大豆又は大豆粕などの抽出物等の有機窒素源物質、
硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機塩窒素
化合物、グルタミン酸等のアミノ酸類が挙げられる。
【００２７】そして無機塩類としては、リン酸１カリウ
ム、リン酸２カリウム等のリン酸塩、硫酸マグネシウム
等のマグネシウム塩、塩化カルシウム等のカルシウム
塩、炭酸ナトリウム等のナトリウム塩等が用いられる。
【００２８】培養は、振盪培養若しくは、通気攪拌培養
等の好気的条件下に於いて、培地をpH7〜11の範囲、好
ましくはpH8〜10の範囲に調製し、温度10〜40℃の範
囲、好ましくは、25〜37℃で実施するのが望ましいが、
この条件以外であっても微生物が生育し、目的とする酵
素を生成する条件であれば特に制限されない。
【００２９】このようにして培養を行うと、通常は培養
を開始して２〜７日間で培養液中にγ−CGTaseが生産さ
れる。次いで、培養液から菌体を除去し、培養ろ液を
得、限外ろ過膜で脱塩、濃縮した後、硫安塩析又は有機
溶媒沈降等により酵素を回収する。こうして得られた粗
製のγ−CGTaseは、そのままでもＣＤ生成反応に使用で
きるが、必要に応じて、更にＤＥＡＥ−セファデックス
（商品名、ファルマシア社製）による吸着溶出、セファ
デックス（商品名、ファルマシア社製）による分画等に
より精製して使用する。
【００３０】こうして得られたブレビバクテリウム・エ
スピー由来のγ−CGTaseの酵素化学的性質を以下に述べ
る。 作用及び基質特異性：澱粉、デキストリン、アミロペ
クチン、アミロース等に作用して、γ−ＣＤ及びβ−Ｃ
Ｄを生成するが、α−ＣＤを生成しない。 至適ｐＨ：８〜９ 至適温度：45℃付近 安定ｐＨ：ｐＨ６〜８ 温度安定性：40℃、30分処理で85％の残存活性を示
す。尚、本酵素は、カルシウム塩の添加により安定化さ
れ、20mMの塩化カルシウム添加により45℃の処理におい
ても、100％の残存活性を示した。
【００３１】更に、バチルス・メガテリウム由来のγ−
CGTaseの酵素化学的性質を以下に述べる。 作用及び基質特異性：澱粉、デキストリン、アミロペ
クチン、アミロース等に作用して、γ−ＣＤ及びβ−Ｃ
Ｄを生成するが、α−ＣＤを生成しない。 至適ｐＨ：10 至適温度：40〜45℃ 安定ｐＨ：８〜９ 温度安定性：40℃、30分処理で85％の残存活性を示
す。尚、10mMカルシウム塩の添加により、45℃、30分処
理でも100％の残存活性を示す。
【００３２】尚、これら酵素の活性測定法は、基質〔1.
5％可溶性澱粉、0.1Ｍ アトキンス・パンチン（Atkins
& Pantin）緩衝液（pH10.0）〕0.5mlに酵素液0.05mlを
添加し、40℃にて30分間反応した。その後、0.1Ｎ塩酸
５mlを加え反応を停止し、0.5mlを抜き取り、ヨウ素液
５mlを加え、660nmでの吸光度の減少を測定した。１単
位は、本条件下、１分間に660nmの吸光度を１％減少さ
せる酵素量とした。
【００３３】これらのγ−CGTaseを澱粉に作用させ、γ
−ＣＤを製造するには、例えば、先ず１〜30％の澱粉
（澱粉又はその組成画分、加工澱粉等を含む）を含有す
る水溶液にγ−CGTase（精製品又は粗製品）を0.5〜20
単位（乾燥澱粉１ｇ当たり）加えてpH４〜10、温度20〜
70℃にて、１〜50時間酵素反応を行う。尚、この澱粉
は、必要に応じて予め加熱し、液化処理を施して用い
る。
【００３４】こうしてγ−ＣＤを工業的に製造すること
が可能となったのであるが、より多量にγ−ＣＤを製造
するためには、基質の澱粉濃度をできるだけ高くし、且
つ反応時間を長くする必要があるが、この場合、γ−Ｃ
Ｄの量が減少し、β−ＣＤの量が増加するという問題点
を有していることが分かった。
【００３５】そこで、本発明者らは、より安価にγ−Ｃ
Ｄを製造するために、鋭意検討の結果、高濃度澱粉下又
は長時間作用下にγ−CGTaseを反応させる反応液中に、
エチルアルコールを添加することによって、β−ＣＤの
生成を抑制しつつ、γ−ＣＤの生成を促進せしめること
で、この問題を解決したのである。
【００３６】この場合のエチルアルコールの添加量は、
何れの酵素を何れの基質濃度にて使用する場合にも、基
質溶液に対して終濃度で５〜３０％を添加するのが好ま
しい。
【００３７】そして又、反応の際に添加するエチルアル
コールの添加時期としては、反応中であれば特に制限は
ないが、反応の初期、例えば、反応と同時が好ましい。
【００３８】以下に試験例及び実施例にて本発明を具体
的に説明するが、本発明はこれらによって何等限定され
るものではない。
【００３９】試験例１ ２〜１５％の可溶性澱粉〔0.01Ｍマッキルバイン（McIl
vaine）緩衝液（pH7.0）〕にブレビバクテリウム・エス
ピー由来及びバチルス・メガテリウム由来の各γ−CGTa
se酵素液５単位（乾燥澱粉１ｇ当たり）をそれぞれ添加
し、40℃にて３〜44時間反応せしめて各種ＣＤの生成率
を調べた。そして、ブレビバクテリウム・エスピー由来
のγ−CGTaseを使用した場合の各種ＣＤの生成率を表１
に、バチルス・メガテリウム由来のγ−CGTaseを使用し
た場合の各種ＣＤの生成率を表２にそれぞれ示す。尚、
各種ＣＤの生成率は基質に対する重量比で示される。
【００４０】
【表１】
【００４１】
【表２】
【００４２】表１及び表２より明かなように、何れの酵
素も、基質濃度が２％の低濃度ではγ−ＣＤを収率よく
生成するが基質濃度を高くしたり、又基質濃度が２％で
あっても反応時間を長くするとγ−ＣＤ量が減少し、β
−ＣＤ量が増加することが分かる。
【００４３】試験例２ ５〜１０％の可溶性澱粉〔0.01Ｍマッキルバイン（McIl
vaine）緩衝液（pH7.0）〕にブレビバクテリウム属由来
及びバチルス・メガテリウム由来の各γ−CGTase酵素液
５単位（乾燥澱粉１ｇ当たり）をそれぞれ添加し、40℃
にて22時間反応せしめてＣＤを生成せしめるにあたり、
基質溶液当たり５〜３０％量のエチルアルコールを添加
することにより各種ＣＤの生成促進効果を調べた。その
結果、ブレビバクテリウム・エスピー由来のγ−CGTase
を使用した場合の各種ＣＤの生成率は表３に、バチルス
・メガテリウム由来のγ−CGTaseを使用した場合の各種
ＣＤの生成率は表４にそれぞれ示される。尚各種ＣＤの
生成率は基質に対する重量比で示される。
【００４４】
【表３】
【００４５】
【表４】
【００４６】表３及び表４中のＥｔＯＨは、エチルアル
コールを示す。
【００４７】表３及び表４より明かなように、何れの酵
素の場合も、終濃度として５〜３０％のエチルアルコー
ルの添加によって、γ−ＣＤの生成が促進され、一方β
−ＣＤの生成が抑制されることが分かる。これより、エ
チルアルコールの添加によって高濃度基質においてもβ
−ＣＤの生成を抑制しつつ、γ−ＣＤを収率よく生成す
ることが可能となった。
【００４８】
【実施例】
実施例１ 可溶性澱粉 1.0％、ポリペプトン 0.5％、酵母エキス
0.25％、硫酸アンモニウム0.1％、K2HPO4 0.05％、MgSO
4・7H2O 0.025％、CaCl2 0.01％、Na2CO3 1.0％（別殺
菌）からなる培地（pH10.0）100 mlを500 ml容坂口フラ
スコに入れ、常法により殺菌後ブレビバクテリウム・エ
スピー（Brevibacterium sp.）No.9605（FERM-P 1314
1）を接種し、37℃で40時間振盪培養した。培養後、培
養菌体を遠心分離にて除去し、除菌液２Ｌを得た。この
除菌液を限外ろ過膜（モジュールＳＩＰ，旭化成社製）
にかけ、濃縮液30ml（CGTase活性は6.7単位／mlであっ
た。）を得た。ついで、２０％エタノールを含む10％可
溶性澱粉溶液〔0.01Ｍマッキルバイン（McIlvaine）緩
衝液（pH7.0）〕10mlにブレビバクテリウム由来のγ−C
GTaseを5.0単位（乾燥澱粉１ｇ当たり）加え、40℃にて
20時間反応させた。反応により得られた、γ−ＣＤ及び
β−ＣＤの生成率（基質に対する重量比で示す）は、そ
れぞれ16.5％及び3.5％であり、α−ＣＤの生成は、認
められなかった。
【００４９】実施例２ 可溶性澱粉 1.0％、ポリペプトン 0.5％、酵母エキス
0.25％、硫酸アンモニウム 0.1％、K2HPO4 0.05％、MgS
O4・7H2O 0.025％、CaCl2 0.01％、Na2CO3 1.0％（別殺
菌）からなる培地（pH10.0）100 mlを500 ml容坂口フラ
スコに入れ、常法により殺菌後バチルス・メガテリウム
（Bacillus megaterium）No.9604（FERM-P 13141）を接
種し、37℃で40時間振盪培養した。培養後、培養菌体を
遠心分離にて除去し、除菌液２Ｌを得た。この除菌液を
限外ろ過膜（モジュールＳＩＰ，旭化成社製）にかけ、
濃縮液30ml（CGTase活性は8.7単位／mlであった。）を
得た。ついで、２５％エタノールを含む５％可溶性澱粉
溶液〔0.01Ｍ H3BO3,KCl-NaOH緩衝液（pH8.0）〕10mlに
バチルス・メガテリウム由来のγ−CGTaseを5.0単位
（乾燥澱粉１ｇ当たり）加え、55℃にて20時間反応させ
た。反応により得られたγ−ＣＤ及びβ−ＣＤの生成率
（基質に対する重量比で示す）は、それぞれ16.3％及び
3.2％であり、α−ＣＤの生成は、認められなかった。
【００５０】
【発明の効果】本発明は、高濃度澱粉にγ−CGTaseを作
用させてγ−ＣＤ及びβ−ＣＤを生成せしめる反応液中
にエチルアルコールを添加して、β−ＣＤの生成を抑制
しつつγ−ＣＤの生成を促進せしめることによって、Ｔ
−ＣＤの増収を伴わずに、γ−ＣＤを安価に工業的に製
造する方法を可能にしたものである。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成６年２月３日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の詳細な説明
【補正方法】変更
【補正内容】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、澱粉にγ−サイクロデ
キストリン・グルカノトランスフェラーゼ（以下γ−CG
Taseという）を作用させ、γ−サイクロデキストリン
（以下γ-ＣＤという）とβ−サイクロデキストリン
（以下β−ＣＤという）を生成せしめる反応液中にエチ
ルアルコールを添加することによって、β−ＣＤの生成
を抑制しつつγ−ＣＤの生成を促進することを特徴とす
る総サイクロデキストリン（以下Ｔ−ＣＤという）の増
収を伴なわず、且つγ−ＣＤの収量を高めるところのγ
−ＣＤの増収方法に関する。
【０００２】サイクロデキストリン（以下ＣＤという）
は、６〜８個のグルコース分子がα−1,4−グルコシド
結合で環状に結合した非還元性のマルトオリゴ糖であ
り、その分子空洞内に種々の物質を取り込んで包接化合
物を形成し、取り込まれた物質の物理、化学的性質を変
化させることができ、そのため、酸化しやすい化合物や
光分解し易い化合物の安定化、揮発性化合物の不揮発
化、難溶性化合物の可溶化、臭気性物質の無臭化が可能
であり、医薬品、化粧品、農薬及び食品への広い分野で
利用されている。
【０００３】ＣＤには、グルコース分子数が６個からな
るα−ＣＤ、グルコース分子数が７個からなるβ−Ｃ
Ｄ、そしてグルコース分子数が８個からなるγ−ＣＤが
よく知られているが、このうちγ−ＣＤは、溶解度が大
きく、且つ包接能力にも優れているので、医薬品、化粧
品、農薬及び食品工業等への利用が、より有用視されて
いる。
【０００４】
【従来の技術】これまでに知られたγ−CGTaseとして
は、バチルス属の僅かな菌株に知られているに過ぎな
い。例えば、バチルス・エスピー（Bacillus sp.）AL６
のCGTase（特開昭61-274680号）、バチルス・エスピー
（Bacillus sp.）No.313のCGTase（特開昭62-25976号）
及びバチルス・フィルムス（Bacillus firmus）290-3の
CGTase〔New trend in cyclodextrins and derivatives
25頁（1991年）,サンテ（Sante）社（フランス，パ
リ）〕が挙げられるのみであり、それ故、γ−ＣＤの産
業上の利用に関してはほとんど行われていない。
【０００５】そこで、本発明者らは、先に、γ−CGTase
生産能を有する微生物を見いだし、該微生物を培養し、
培養物中にγ−CGTaseを産生せしめ、これを採取すると
共に、該酵素を使用してのγ−ＣＤの工業的製造法を提
供した（特願平4-293801号及び特願平4-293802号）。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】しかし、本発明者らが
先に見いだしたγ−CGTaseを用いてγ−ＣＤをより安価
に提供するため、基質の澱粉濃度を高めたり、酵素の作
用時間を長くするとγ−ＣＤ量が減少し、β−ＣＤ量が
増加するという新たな問題点を生じた。
【０００７】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らは、
この問題を解決するために、高濃度の澱粉にγ−CGTase
を作用させてγ−ＣＤとβ−ＣＤを生成せしめる反応液
中にエチルアルコールを添加することによってγ−ＣＤ
の生成をより促進させることを試みたところ、エチルア
ルコールの添加は、単にγ−ＣＤの生成を促進させるだ
けの効果ではなく、β−ＣＤの生成を抑制しつつγ−Ｃ
Ｄの生成を促進させる効果、即ち、Ｔ−ＣＤの増収を伴
うことなくγ−ＣＤの生成を促進せしめる効果であるこ
とを新たに見いだした。
【０００８】これまでに、α−CGTaseを用いて反応液中
にエチルアルコールを添加することによるα−ＣＤの増
収法が報告されている（特公昭60-25118号）が、しか
し、この方法は、同時に生成するβ−ＣＤやγ−ＣＤを
抑制しないところの、換言すれば、Ｔ−ＣＤの増収を伴
うところのα−ＣＤの増収法であった。
【０００９】又、γ−CGTaseを用いて反応液中にエチル
アルコールを添加することによるγ−ＣＤの増収法も報
告されている（特開昭62-25976号）が、この方法におい
ても副生するβ−ＣＤの生成抑制については何も記載さ
れていない。
【００１０】そもそも、β-ＣＤは、水に対する溶解度
が他のＣＤ（α−ＣＤ及びγ−ＣＤ）に比べて極端に低
く、結晶化し易いため、他のＣＤ中に混在するとＣＤ水
飴等の商品価値を減ずるので、その生成は、できるだけ
抑制されることが望ましい。
【００１１】従って、β−ＣＤの生成を抑制し、γ−Ｃ
Ｄの増収方法を提供する本願発明は、有益且つ新規なγ
−サイクロデキストリンの増収方法である。
【００１２】そして、本発明者らは、上記の知見をもと
に、鋭意検討の結果、Ｔ−ＣＤの増収を伴わない、即ち
β−ＣＤの生成を抑制しつつγ−ＣＤの生成を増加させ
るところのγ−ＣＤの増収方法を確立することにより、
本発明を完成したものである。
【００１３】本発明において使用されるγ−CGTaseは、
澱粉に作用し、γ−ＣＤとβ−ＣＤを生成するものであ
ればいずれをも使用できるが、好ましくは、本発明者ら
が先に土壌から分離したブレビバクテリウム・エスピー
及びバチルス・メガテリウム由来のγ−CGTaseを使用す
ることができる。
【００１４】新たに土壌から発見、分離されたブレビバ
クテリウム・エスピー菌株の菌学的性質は下記の通りで
ある。
【００１５】（１）形態 細胞の形および大きさ：細い桿菌（菌端は膨張する） 0.5〜0.7×5.0〜20μ 細胞の多形成の有無：認められる 運動性の有無：あり（周鞭毛） 胞子の有無：形成しない グラム染色性：陰性 抗酸性：陰性
【００１６】（２）各培地における生育状態 肉汁寒天平板培養：発育はやや弱い、全縁半透明の粘性
あるコロニーで表面平滑（φ２〜３mm） 肉汁寒天斜面培養：発育やや弱い、直状、生色、半透明 肉汁液体培養：培地は全体に薄く白濁し、底部に粘性の
菌泥沈殿がみられる。 リトマスミルク培養：変化しない
【００１７】（３）生理学的性質 酸素に対する態度：偏性好気性 カタラーゼ：陽性 オキシダーゼ：陰性 ＯＦテスト：発酵、酸化共になし ブドウ糖からのガスの産生：陰性 インドールの生成：陰性 硝酸塩の還元：陽性 チロシンの加水分解：陰性 澱粉の加水分解：陽性 カゼインの加水分解：陰性 ゼラチンの加水分解：陽性 ジヒドロキシアセトン：陰性 フェニルアラニンデアミナーゼ：陰性 エッグヨーク反応：陰性 0.001％リゾチーム生育：陰性 ウレアーゼ：陰性 ＴＳＩ寒天培地（斜面の酸）：赤／赤 硫化水素の生成：陰性 マッコンキー培地の生育：陰性 ＹＭＡ培地の生育：陰性 ビスマスブイヨンでの生育：陰性 ３−ケト−乳酸の生成：陰性 食塩に対する生育性：（0.5〜15％で陽性、20％で陰
性） 生育温度の範囲：16〜45℃（最適は36〜38℃） 生育ｐＨの範囲：8.0〜11.6（最適は8.5〜9.0） 糖類からの酸生成の有無： Ｌ−アラビノース − キシロース − グルコース − マンニット − サリシン − 澱粉 −
【００１８】そして、本菌をBergey's Manual of Syste
matic Bacteriology，第２巻（1986）を参照し、同定し
た結果、本菌はグラム陰性、チトクロムオキシダーゼ陰
性、周鞭毛、無胞子、糖より酸非産生等の諸性質を有す
ることから、アシネトバクター（Acinetobater）、リゾ
ビウム（Rhizobium)、アグロバクテリウム（Agrobacter
ium）、ナトロノバクテリウム（Natronobacterium）、
バチルス（Bacillus）等のいずれの属にも相当せず、コ
リネフォームタイプ（Coryneform Type)に属することか
ら、その内の一つの属であるブレビバクテリウム（Brev
ibacterium）属に属するものとした。
【００１９】そして又、上記の菌学的性質を有する本菌
株は、既知のブレビバクテリウム（Brevibacterium）属
の何れの種にも属さず、新菌種であり、本菌株をブレビ
バクテリウム・エスピー（Brevibacterium sp.）No.960
5と命名し、工業技術院微生物工業技術研究所に微工研
菌寄第13141号（FERM P-13141）として寄託した。
【００２０】又、新たに土壌から発見、分離されたバチ
ルス・メガテリウム菌株の菌学的性質は下記の通りであ
る。
【００２１】（１）形態 細胞の形および大きさ：太い桿菌（菌端は膨張する） 1.1〜1.4×4.0〜6.0μ 運動性の有無：あり（周鞭毛） 胞子の有無：あり（細胞は膨張しない） グラム染色性：陽性 抗酸性：陰性
【００２２】（２）各培地における生育状態 肉汁寒天平板培養：発育は良好、全縁不透明の光沢ある
コロニーで表面平滑（φ1.0〜1.5 mm） 肉汁寒天斜面培養：発育良好、直状、台状、白色、バタ
ー 肉汁液体培養：培地は全体に薄く白濁し、液面に微かに
菌蓋、底部に粘性の菌泥沈殿がみられる。 リトマスミルク培養：変化しない
【００２３】（３）生理学的性質 酸素に対する態度：偏性好気性 カタラーゼ：陽性 オキシダーゼ：陰性 ＯＦテスト：発酵、酸化共になし ブドウ糖からのガスの産生：陰性 インドールの生成：陰性 硝酸塩の還元：陽性（亜硝酸塩も還元） チロシンの加水分解：陽性 澱粉の加水分解：陽性 カゼインの加水分解：陰性 ゼラチンの加水分解：陽性 ジヒドロキシアセトン：陰性 フェニルアラニンデアミナーゼ：陰性 クエン酸の利用：陽性 エッグヨーク反応：陰性 0.001％リゾチーム生育：陰性 ウレアーゼ：陰性 ＴＳＩ寒天培地（斜面の酸）：黄／赤 硫化水素の生成：陰性 マッコンキー培地の生育：陰性 食塩に対する生育性：（0.5〜7.0％で陽性、10％で陰
性） 生育温度の範囲：12〜39℃（最適は31〜33℃） 生育pHの範囲：7.7〜11.6（最適は8.5） 糖類からの酸生成の有無： Ｌ−アラビノース − キシロース − グルコース ＋（ガス発生せず） マンニット ＋（ガス発生せず） サリシン ＋ 澱粉 ＋
【００２４】そして、本菌をBergey' Manual of Determ
inative Bacteriology，第８版（1974）、Bergey' Manu
al of Systematic Bacteriology，第２巻（1986）及び
『TheGenus Bacillus』U.S.Department of Agriculture
Handbook No.427 p-160 を参照し、同定したところ、
本菌はグラム陽性、周鞭毛、有胞子であることから、バ
チルス（Bacillus）属に属する菌であることがわかり、
さらに、本菌は、上記の菌学的諸性質からバチルス・メ
ガテリウム（Bacillus megaterium）、バチルス・セレ
ウス（Bacillus cereus）、バチルス・フィルムス（Bac
illus firmus）のいずれかに属することが分かるが、し
かし、バチルス・フィルムス（Bacillusfirmus）とは、
菌幅とクエン酸利用で異なり、バチルス・セレウス（Ba
cilluscereus）とは、エッグヨーク反応陰性、偏性好気
性、菌幅が大きいこと、及び食塩10％で生育しないこと
等で異なるので、本菌をバチルス・メガテリウム（Baci
llus megaterium）に属するものとし、本菌株をバチル
ス・メガテリウム（Bacillus megaterium）No.9604と命
名した。本菌株は工業技術院微生物工業技術研究所に微
工研菌寄第13142号（FERM P-13142）として寄託されて
いる。
【００２５】これらの菌株を利用して、γ−CGTaseを製
造するためには、当該微生物が良好に生育し、酵素を順
調に生産するために必要な炭素源、窒素源、無機塩、必
要な栄養源等を含有する合成培地又は天然培地中でこれ
を培養する。炭素源としては、澱粉又はその組成画分、
焙焼デキストリン、加工澱粉、澱粉誘導体、物理処理澱
粉及びα−澱粉等の炭水化物が使用できる。具体例とし
ては、可溶性澱粉、トウモロコシ澱粉、馬鈴薯澱粉、甘
藷澱粉、デキストリン、アミロペクチン、アミロース等
があげられる。
【００２６】窒素源としては、ポリペプトン、カゼイ
ン、肉エキス、酵母エキス、コーンスティープリカー或
いは大豆又は大豆粕などの抽出物等の有機窒素源物質、
硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機塩窒素
化合物、グルタミン酸等のアミノ酸類が挙げられる。
【００２７】そして無機塩類としては、リン酸１カリウ
ム、リン酸２カリウム等のリン酸塩、硫酸マグネシウム
等のマグネシウム塩、塩化カルシウム等のカルシウム
塩、炭酸ナトリウム等のナトリウム塩等が用いられる。
【００２８】培養は、振盪培養若しくは、通気攪拌培養
等の好気的条件下に於いて、培地をpH7〜11の範囲、好
ましくはpH8〜10の範囲に調製し、温度10〜40℃の範
囲、好ましくは、25〜37℃で実施するのが望ましいが、
この条件以外であっても微生物が生育し、目的とする酵
素を生成する条件であれば特に制限されない。
【００２９】このようにして培養を行うと、通常は培養
を開始して２〜７日間で培養液中にCGTaseが生産され
る。次いで、培養液から菌体を除去し、培養ろ液を得、
限外ろ過膜で脱塩、濃縮した後、硫安塩析又は有機溶媒
沈降等により酵素を回収する。こうして得られた粗製の
CGTaseは、そのままでもＣＤ生成反応に使用できるが、
必要に応じて、更にＤＥＡＥ−セファデックス（ファル
マシア社製）、ブチル−トヨパール（東ソー社製）によ
る吸着溶出、セファデックス（ファルマシア社製）、ト
ヨパール（東ソー社製）による分画、γ−ＣＤ−セファ
ロースによるアフィニティクロマトグラフィー等により
精製して使用する。
【００３０】こうして得られたブレビバクテリウム・エ
スピー由来のγ−CGTaseの酵素化学的性質を以下に述べ
る。 作用及び基質特異性：澱粉、デキストリン、アミロペ
クチン、アミロース等に作用して、γ−ＣＤ及びβ−Ｃ
Ｄを生成するが、α−ＣＤを生成しない。 至適ｐＨ：８〜９ 至適温度：45℃付近 安定ｐＨ：ｐＨ６〜８ 温度安定性：40℃、30分処理で85％の残存活性を示
す。尚、本酵素は、カルシウム塩の添加により安定化さ
れ、20mMの塩化カルシウム添加により45℃の処理におい
ても、100％の残存活性を示した。 各種金属塩の影響：本酵素を１mMの各種金属塩によ
り、0.1M H3BO3,KCl-NaOH緩衝液（pH8.0）中で、40℃、
10分処理し、残存活性を測定した結果は、表１に示され
る。表１より明らかなように、本酵素は、ニッケル、
銅、亜鉛、銀により阻害され、水銀及びカドミウムにて
ほぼ失活した。
【００３１】
【表１】
【００３２】各種阻害剤の影響：本酵素を１mMの各種
阻害剤により、0.1M H3BO3,KCl-NaOH緩衝液（pH8.0）中
で、40℃、10分処理し、残存活性を測定した結果は、表
２に示される。表２より明らかなように、本酵素は、使
用したいずれの阻害剤によっても殆ど阻害されない。
尚、表２中のEDTAは（ethylenediaminetetraacetic aci
d）の、SDSは（sodium dodecyl sulfate）の、PCMBは
（p-chloromercuribenzoicacid）の、MIAは（monoiodoa
cetic acid）の、NEMは（N-ethylmaleimide）のそれぞ
れの略である。
【００３３】
【表２】
【００３４】分子量：本酵素の分子量は約75,000であ
る（SDS−電気泳動法による）。 等電点：本酵素の等電点（pI）は2.8である（焦点電
気泳動法による）。
【００３５】更に、バチルス・メガテリウム由来のγ−
CGTaseの酵素化学的性質を以下に述べる。 作用及び基質特異性：澱粉、デキストリン、アミロペ
クチン、アミロース等に作用して、γ−ＣＤ及びβ−Ｃ
Ｄを生成するが、α−ＣＤを生成しない。 至適ｐＨ：10 至適温度：40〜45℃ 安定ｐＨ：８〜９ 温度安定性：40℃、30分処理で85％の残存活性を示
す。尚、10mMカルシウム塩の添加により、45℃、30分処
理でも100％の残存活性を示す。
【００３６】尚、これら酵素の活性測定法は、基質〔1.
5％可溶性澱粉、0.1Ｍ アトキンス・パンチン（Atkins
& Pantin）緩衝液（pH10.0）〕0.5mlに酵素液0.05mlを
添加し、40℃にて30分間反応した。その後、0.1Ｎ塩酸
５mlを加え反応を停止し、0.5mlを抜き取り、ヨウ素液
５mlを加え、660nmでの吸光度の減少を測定した。１単
位は、本条件下、１分間に660nmの吸光度を１％減少さ
せる酵素量とした。
【００３７】これらのγ−CGTaseを澱粉に作用させ、γ
−ＣＤを製造するには、例えば、先ず１〜30％の澱粉
（澱粉又はその組成画分、加工澱粉等を含む）を含有す
る水溶液にγ−CGTase（精製品又は粗製品）を0.5〜20
単位（乾燥澱粉１ｇ当たり）加えてpH４〜10、温度20〜
70℃にて、１〜50時間酵素反応を行う。尚、この澱粉
は、必要に応じて予め加熱し、液化処理を施して用い
る。
【００３８】こうしてγ−ＣＤを工業的に製造すること
が可能となったのであるが、より多量にγ−ＣＤを製造
するためには、基質の澱粉濃度をできるだけ高くし、且
つ反応時間を長くする必要があるが、この場合、γ−Ｃ
Ｄの量が減少し、β−ＣＤの量が増加するという問題点
を有していることが分かった。
【００３９】そこで、本発明者らは、より安価にγ−Ｃ
Ｄを製造するために、鋭意検討の結果、高濃度澱粉下又
は長時間作用下にγ−CGTaseを反応させる反応液中に、
エチルアルコールを添加することによって、β−ＣＤの
生成を抑制しつつ、γ−ＣＤの生成を促進せしめること
で、この問題を解決したのである。
【００４０】この場合のエチルアルコールの添加量は、
何れの酵素を何れの基質濃度にて使用する場合にも、基
質溶液に対して終濃度で５〜３０％を添加するのが好ま
しい。
【００４１】そして又、反応の際に添加するエチルアル
コールの添加時期としては、反応中であれば特に制限は
ないが、反応の初期、例えば、反応と同時が好ましい。
【００４２】以下に試験例及び実施例にて本発明を具体
的に説明するが、本発明はこれらによって何等限定され
るものではない。
【００４３】試験例１ ２〜１５％の可溶性澱粉〔0.01Ｍマッキルバイン（McIl
vaine）緩衝液（pH7.0）〕にブレビバクテリウム・エス
ピー由来及びバチルス・メガテリウム由来の各γ−CGTa
se酵素液５単位（乾燥澱粉１ｇ当たり）をそれぞれ添加
し、40℃にて３〜44時間反応せしめて各種ＣＤの生成率
を調べた。そして、ブレビバクテリウム・エスピー由来
のγ−CGTaseを使用した場合の各種ＣＤの生成率を表３
に、バチルス・メガテリウム由来のγ−CGTaseを使用し
た場合の各種ＣＤの生成率を表４にそれぞれ示す。尚、
各種ＣＤの生成率は基質に対する重量比で示される。
【００４４】
【表３】
【００４５】
【表４】
【００４６】表３及び表４より明かなように、何れの酵
素も、基質濃度が２％の低濃度ではγ−ＣＤを収率よく
生成するが基質濃度を高くしたり、又基質濃度が２％で
あっても反応時間を長くするとγ−ＣＤ量が減少し、β
−ＣＤ量が増加することが分かる。
【００４７】試験例２ ５〜１０％の可溶性澱粉〔0.01Ｍマッキルバイン（McIl
vaine）緩衝液（pH7.0）〕にブレビバクテリウム属由来
及びバチルス・メガテリウム由来の各γ−CGTase酵素液
５単位（乾燥澱粉１ｇ当たり）をそれぞれ添加し、40℃
にて22時間反応せしめてＣＤを生成せしめるにあたり、
基質溶液当たり５〜３０％量のエチルアルコールを添加
することにより各種ＣＤの生成促進効果を調べた。その
結果、ブレビバクテリウム・エスピー由来のγ−CGTase
を使用した場合の各種ＣＤの生成率は表５に、バチルス
・メガテリウム由来のγ−CGTaseを使用した場合の各種
ＣＤの生成率は表６にそれぞれ示される。尚各種ＣＤの
生成率は基質に対する重量比で示される。
【００４８】
【表５】
【００４９】
【表６】
【００５０】表５及び表６中のＥｔＯＨは、エチルアル
コールを示す。
【００５１】表５及び表６より明かなように、何れの酵
素の場合も、終濃度として５〜３０％のエチルアルコー
ルの添加によって、γ−ＣＤの生成が促進され、一方β
−ＣＤの生成が抑制されることが分かる。これより、エ
チルアルコールの添加によって高濃度基質においてもβ
−ＣＤの生成を抑制しつつ、γ−ＣＤを収率よく生成す
ることが可能となった。
【００５２】
【実施例】 実施例１ 可溶性澱粉 1.0％、ポリペプトン 0.5％、酵母エキス
0.25％、硫酸アンモニウム0.1％、K2HPO4 0.05％、MgSO
4・7H2O 0.025％、CaCl2 0.01％、Na2CO3 1.0％（別殺
菌）からなる培地（pH10.0）100 mlを500 ml容坂口フラ
スコに入れ、常法により殺菌後ブレビバクテリウム・エ
スピー（Brevibacterium sp.）No.9605（FERM-P 1314
1）を接種し、37℃で40時間振盪培養した。培養後、培
養菌体を遠心分離にて除去し、除菌液２Ｌを得た。この
除菌液を限外ろ過膜（モジュールＳＩＰ，旭化成社製）
にかけ、濃縮液30ml（CGTase活性は6.7単位／mlであっ
た。）を得た。ついで、２０％エタノールを含む10％可
溶性澱粉溶液〔0.01Ｍマッキルバイン（McIlvaine）緩
衝液（pH7.0）〕10mlにブレビバクテリウム由来のγ−C
GTaseを5.0単位（乾燥澱粉１ｇ当たり）加え、40℃にて
20時間反応させた。反応により得られた、γ−ＣＤ及び
β−ＣＤの生成率（基質に対する重量比で示す）は、そ
れぞれ16.5％及び3.5％であり、α−ＣＤの生成は、認
められなかった。
【００５３】実施例２ 可溶性澱粉 1.0％、ポリペプトン 0.5％、酵母エキス
0.25％、硫酸アンモニウム 0.1％、K2HPO4 0.05％、MgS
O4・7H2O 0.025％、CaCl2 0.01％、Na2CO3 1.0％（別殺
菌）からなる培地（pH10.0）100 mlを500 ml容坂口フラ
スコに入れ、常法により殺菌後バチルス・メガテリウム
（Bacillus megaterium）No.9604（FERM-P 13141）を接
種し、37℃で40時間振盪培養した。培養後、培養菌体を
遠心分離にて除去し、除菌液２Ｌを得た。この除菌液を
限外ろ過膜（モジュールＳＩＰ，旭化成社製）にかけ、
濃縮液30ml（CGTase活性は8.7単位／mlであった。）を
得た。ついで、２５％エタノールを含む５％可溶性澱粉
溶液〔0.01Ｍ H3BO3,KCl-NaOH緩衝液（pH8.0）〕10mlに
バチルス・メガテリウム由来のγ−CGTaseを5.0単位
（乾燥澱粉１ｇ当たり）加え、55℃にて20時間反応させ
た。反応により得られたγ−ＣＤ及びβ−ＣＤの生成率
（基質に対する重量比で示す）は、それぞれ16.3％及び
3.2％であり、α−ＣＤの生成は、認められなかった。
【００５４】
【発明の効果】本発明は、高濃度澱粉にγ−CGTaseを作
用させてγ−ＣＤ及びβ−ＣＤを生成せしめる反応液中
にエチルアルコールを添加して、β−ＣＤの生成を抑制
しつつγ−ＣＤの生成を促進せしめることによって、Ｔ
−ＣＤの増収を伴わずに、γ−ＣＤを安価に工業的に製
造する方法を可能にしたものである。

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】澱粉にγ−サイクロデキストリン・グルカ
    ノトランスフェラーゼを作用させてγ−サイクロデキス
    トリンとβ−サイクロデキストリンを生成せしめる反応
    液中にエチルアルコールを添加することにより、β−サ
    イクロデキストリンの生成を抑制しつつγ−サイクロデ
    キストリンの生成を促進することを特徴とするγ−サイ
    クロデキストリンの増収方法。
  2. 【請求項２】澱粉にブレビバクテリウム属又はバチルス
    ・メガテリウム由来のγ−サイクロデキストリン・グル
    カノトランスフェラーゼを作用させてγ−サイクロデキ
    ストリンとβ−サイクロデキストリンを生成せしめる反
    応液中にエチルアルコールを添加することにより、β−
    サイクロデキストリンの生成を抑制しつつγ−サイクロ
    デキストリンの生成を促進することを特徴とするγ-サ
    イクロデキストリンの増収方法。
  3. 【請求項３】澱粉にγ−サイクロデキストリン・グルカ
    ノトランスフェラーゼを作用させてγ−サイクロデキス
    トリンとβ−サイクロデキストリンを生成せしめる反応
    液中に、基質溶液に対し終濃度５〜３０％量のエチルア
    ルコールを添加することにより、β−サイクロデキスト
    リンの生成を抑制しつつγ−サイクロデキストリンの生
    成を促進することを特徴とするγ−サイクロデキストリ
    ンの増収方法。
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