JPH06239889A

JPH06239889A - 神経栄養活性抑制物質

Info

Publication number: JPH06239889A
Application number: JP5259753A
Authority: JP
Inventors: Yoko Uchida; 洋子内田; Yasuo Ihara; 康夫井原
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1992-10-19
Filing date: 1993-10-18
Publication date: 1994-08-30

Abstract

(57)【要約】【構成】式：Thr Cys Pro Cys Pro Ser Gly Gly Ser
Cys Thr Cys Ala Asp Ser Cys Lys Cys Glu で示される
アミノ酸配列を含む神経栄養活性抑制作用を有する非天
然型ポリペプチド。【効果】本発明の神経栄養活性抑制作用を有する非天
然型ポリペプチドは、アルツハイマー病の治療に有効で
ある。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、神経栄養活性抑制作用
を有するポリペプチドに関する。

【０００２】

【従来の技術】高齢化社会の中で、老人性痴呆は大きな
関心を集め、その予防と治療には多くの努力が払われて
きた。特に、アルツハイマー（Alzheimer ）病と言われ
る老人性痴呆は、初老期（５０〜６０才）に起こること
が多く、その原因の究明と治療法の確立が急がれてい
る。現在までに得られた知見によれば、アルツハイマー
病は、老人斑、神経原線維変性などの病理学的特徴と、
進行性痴呆という臨床的特徴を有する器質性疾患であ
り、ニューロンの代謝の亢進や異常な再生が関与してい
ると考えられている。特開平４−１８１００号公報、ヨ
ーロッパ特許出願公開第４５８, ６７３号公報およびＰ
ＣＴＷＯ９２／１０５６８号公報において、アルツハイ
マー病患者の脳中成分を研究する過程で見出された、正
常人の脳中には存在するがアルツハイマー病患者の脳に
は存在しなくなる新規な蛋白質であって、神経栄養活性
抑制作用がある天然型の蛋白質（ＧＩＦ）を取り出すこ
と、およびＧＩＦを遺伝子工学的手法によって製造する
方法がそれぞれ示されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】該ＧＩＦの活性中心部
位について詳しく知ることができれば、ＧＩＦの作用に
つき、さらに精査できるので、医薬としての利用の可能
性が拡大することとなる。また、該活性中心部位のポリ
ペプチドを含むポリペプチドを医薬として用いることが
できれば、該ポリペプチドの製造、製剤化等の面で有利
である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＧＩＦの
作用機作を探索する目的で、ＧＩＦをフラグメントと
し、その活性を検討していたところ、ＧＩＦの第５位〜
第２３位のアミノ酸配列を含むポリペプチドが優れたＧ
ＩＦ活性を有することを見い出し、これに基づいてさら
に研究した結果、本発明を完成した。

【０００５】本発明は、式（Ｉ）： Thr Cys Pro Cys Pro Ser Gly Gly Ser Cys Thr Cys Al
a Asp Ser Cys Lys CysGlu （配列番号１）で示されるアミノ酸配列を含む神経栄養
活性抑制作用を有する非天然型ポリペプチド（以下、本
発明のポリペプチドと称することもある）である。

【０００６】本発明のポリペプチドは、式（Ｉ）で示さ
れるアミノ酸配列を含む非天然型ポリペプチドであり、
従って上記天然型のＧＩＦは除外される。本発明のポリ
ペプチドとしては、式（Ｉ）で示されるアミノ酸配列を
有するものが挙げられ、また、神経栄養活性抑制作用を
有する限り、式（Ｉ）で示されるアミノ酸配列のＮ末端
および／またはＣ末端に１ないし数個のアミノ酸が連結
したものであってもよい。さらに、本発明のポリペプチ
ドは、少なくとも１つのジスルフィド結合を有していて
もよい。連結するアミノ酸の数は、例えば、１〜１０
個、好ましくは１〜５個、さらに好ましくは１〜３個で
ある。該連結するアミノ酸の具体例としては、例えば、
Ｎ末端に連結するアミノ酸として、メチオニン、チロシ
ン、セリン、スレオニンの１またはそれ以上が連結した
ものが挙げられ、Ｃ末端に連結するアミノ酸として、チ
ロシン、セリン、スレオニンの１またはそれ以上が連結
したものが挙げられる。

【０００７】本発明のポリペプチドは、例えば、特開平
４−１８１００号公報、ＥＰ−４５８, ６７３号公報、
ＰＣＴＷＯ９２／１０５６８号公報に記載の方法で得ら
れた神経栄養活性抑制物質（ＧＩＦ）を、ペプチド鎖の
切断反応に付すことにより製造することができる。例え
ば、該切断は該ＧＩＦを酵素を用いる切断反応に付すこ
とにより実施できる。

【０００８】該酵素としては、プロテアーゼが挙げら
れ、エキソおよびエンドペプチダーゼのいずれであって
もよい。該プロテアーゼの例としては、例えば、セリン
プロテアーゼ（例：トリプシン、キモトリプシン、トロ
ンビン、プラスミン、エラスターゼ、Ｖ８など）；チオ
ールプロテアーゼ（例：システインプロテアーゼ、パパ
イン、フィシン、ブロメライン、カテプシンＢなど）；
酸性プロテアーゼ（例：アスパラギン酸プロテアーゼ、
ペプシン、カテプシンＤ、レニン、キモシンなど）；金
属プロテアーゼ（例：カルボキシプロテアーゼ、コラゲ
ナーゼ、サーモリシンなど）などが挙げられる。なかで
も、エンドペプチダーゼ（例：トリプシン、Ｖ８、金属
プロテアーゼなど）が好ましく使用できる。

【０００９】該酵素反応は、ＧＩＦの精製品または部分
精製品を酵素と反応させることにより行なわれる。該反
応は緩衝液を用いて実施するのが好ましく、該緩衝液と
しては、例えば無機酸（リン酸など）または有機酸（酢
酸など）と無機塩基（水酸化ナトリウム、水酸化カリウ
ム、アンモニアなど）との塩からなるもので、該酵素反
応を阻害しないものであればいずれでもよい。該酵素反
応におけるpHとしては、約２〜１０の間、望ましくは約
６〜９の間が、酵素およびポリペプチドの安定性の面で
より好ましい。反応時間は、約１〜１００時間の間、と
りわけ約１８〜２４時間が望ましい。反応温度は、約４
〜７０℃、とりわけ約２０〜３７℃の間が好ましい。反
応に用いるペプチダーゼの量は、基質であるＧＩＦに対
して約１/ １０００〜１量（モル比）であればよいが、
約１/ ３００〜１/ ２０量（モル比）程度が、収率、反
応時間、経済性の面から好ましい。該酵素反応において
は、アミノペプチダーゼをアガロース、デキストラン、
セルロース、ポリアクリルアミド、あるいはこれらの誘
導体またはこれらの共重合体に固定化して、反応に用い
ることもできる。

【００１０】また、アミノペプチダーゼを作用させてMe
t-Asp-Pro におけるメチオニンを特異的に切断してもよ
い。該方法は、ヨーロッパ特許出願公開第２０４, ５２
７号公報に記載の方法に従って行なわれる。

【００１１】また、本発明のポリペプチドは、合成法に
より製造することもできる。本発明のポリペプチドを化
学的に合成するには、ペプチド自動合成装置によって行
なうことができる。基本的な合成過程等は、R. B. Merr
ifield〔アドバンシズ・イン・エンザイモロジー（Adva
nces in Enzymology）32, 221-296(1969) 〕の方法に順
じて行なうことができる。この方法は、カルボキシル末
端のアミノ酸を樹脂担体に共有結合させておき、α−ア
ミノ基の保護基の除去、保護アミノ酸の縮合を順次繰り
返して、アミノ末端に向けてペプチド鎖を延長させ、目
的のアミノ酸配列を有する保護ペプチド樹脂を得ること
をその原理としている。各アミノ酸の縮合やα−アミノ
基の保護基の除去などは、ほぼ同一の条件でなされ、中
間体の精製も行なわないため、合成に際しては一般に高
度な熟練は要求されない。しかもこの方法は迅速であ
り、種々のペプチドを合成するに際し、非常に便利な方
法である。こうして得られた保護ペプチド樹脂を、例え
ば無水フッ化水素、トリフルオロメタンスルホン酸もし
くはトリフルオロ酢酸と種々の添加物の共存下に反応さ
せることにより、ペプチドの樹脂からの脱離と全保護基
の除去を一段階で行なうことができる。

【００１２】目的ペプチドを単離・精製するには、通常
知られているペプチドの精製法に従えばよい。例えば、
ゲルろ過法、イオン交換クロマトグラフィー、高速液体
クロマトグラフィー、アフイニティークロマトグラフィ
ー、疎水クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィ
ー、電気泳動等を適宜組み合せて行なうことができる。

【００１３】このようにして得られた本発明の神経栄養
活性抑制作用を有するポリペプチドは、アルツハイマー
病を治療するための医薬として有用である。また、本ポ
リペプチドの毒性は低い。本発明の神経栄養活性抑制作
用を有するポリペプチドを医薬として用いるには、その
まま粉末として、または他の薬理学的に許容されうる担
体、賦形剤、希釈剤と共に医薬組成物（例えば、注射
剤、錠剤、カプセル剤、液剤、軟膏）として、温血動物
（例えば、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、ウサ
ギ、イヌ、ネコ）に対して非経口的または経口的に安全
に投与することができる。注射剤の製剤化は、例えば生
理食塩水またはブドウ糖やその他の補助剤を含む水溶液
を用い、常法に従って行なわれる。錠剤、カプセル剤等
の医薬組成物も常法に従って調製しうる。本発明の神経
栄養活性抑制作用を有するポリペプチドを上記した医薬
として用いる場合には、例えば上記した温血動物に、投
与ルート、症状などを考慮して、１日量約１ng/kg ない
し１mg／kgの中から適当量を選んで投与する。

【００１４】本明細書において、アミノ酸、ペプチド、
保護基、活性基、その他に関し略号で表示する場合、そ
れらはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ（Commission on Biochemica
l Nomenclature）による略号あるいは当該分野における
慣用略号に基づくものであり、その例を次に挙げる。ま
た、アミノ酸などに関し光学異性体がありうる場合は、
特に明示しなければＬ体を示すものとする。Ａ， Ala ：アラニンＣ， Cys ：システインＤ， Asp ：アスパラギン酸Ｅ， Glu ：グルタミン酸Ｆ， Phe ：フェニルアラニンＧ， Gly ：グリシンＨ， His ：ヒスチジンＩ， Ile ：イソロイシンＫ， Lys ：リジンＬ， Leu ：ロイシンＭ， Met ：メチオニンＮ， Asn ：アスパラギンＰ， Pro ：プロリンＱ， Gln ：グルタミンＲ， Arg ：アルギニンＳ， Ser ：セリンＴ， Thr ：スレオニンＶ， Val ：バリンＷ， Trp ：トリプトファンＹ， Tyr ：チロシン

【００１５】

【実施例】以下に参考例および実施例を挙げて本発明を
さらに詳しく説明する。参考例１ＧＩＦの分離・精製ＧＩＦを特開平４−１８１００号公報に記載の方法で製
造した。すなわち、正常ヒト大脳皮質の灰白質２０ｇに
水６０mlを加え、ホモジナイズし、２０, ０００×ｇで
１時間遠心した後、遠心上清を５５ml得た。得られた上
清５５mlを、アミコンＹＭ−１０膜（商品名）を用いて
限外ろ過し、分子量１０キロダルトン以上の画分をＤＥ
ＡＥ−セファセルカラム（１. ６cmφ×１６cm、ファル
マシア社製）にのせ、洗浄バッファー〔５０mMＮａＣ
ｌ、５０mMＴｒｉｓ−Ｃｌ（pH７. ６) 〕２００mlで洗
浄後、５０mMから３００mMＮａＣｌの直線濃度勾配をつ
けた２０mMＴｒｉｓ−Ｃｌ（pH７. ６）バッファー３２
０mlで抽出した。上記ＤＥＡＥ−セファセルカラムによ
るクロマトグラムを図１に示す。フラクションNo. ３１
から３８までの抑制活性を有する画分を集め（４０ml)
透析後、フィコール４００を用いて濃縮した。その後、
ＴＳＫＧ２０００ＳＷ（トーソー社製）でゲルろ過
（カラムサイズ７. ５mmφ×６cm）し、フラクションN
o. ３０から３２の活性画分を集め（２. ５ml）、５mM
リン酸バッファー（pH７. ４）中で透析した。上記ＴＳ
ＫＧ２０００ＳＷを用いたゲルろ過クロマトグラフィ
ーの結果を図２に示す。液量を５５０μl まで濃縮後、
Ｃｌ８逆相ＨＰＬＣカラム（４. ６mmφ×２５cm、セン
シュー化学社製）に付した。溶出には、０％から８０％
アセトニトリルの直線勾配をつけた５mMギ酸アンモニウ
ム溶液を用いた。このＣｌ８逆相ＨＰＬＣクロマトグラ
フィーの結果を図３に示す。図３に示されるように、Ｃ
ｌ８逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーによりシャープな
ピークが実質的に１つだけ得られ、ＧＩＦが単離され
た。

【００１６】実施例１ＧＩＦのプロテアーゼによる消化参考例１で得られたＧＩＦ５０μg を常法によりピリジ
ルエチル化し、０. １M Ｔｒｉｓ−Ｃｌ( pH８. ０) 溶
液１００μl にトリプシン（シグマ社製）０．５μｇ
を加え、室温で１８時間反応させた後、反応産物をＧＦ
Ａ３０ゲルろ過カラムで分離した。ＧＦＡ３０カラムク
ロマトグラフィーによる分離パターンを図４に示した。
図４に示されるように、３つのピーク（ＴＧ１、ＴＧ２
およびＴＧ３）が得られた。これらのピークのうちＴＧ
３産物を集め、Ｖ８プロテアーゼで消化した後、反応産
物をＧＦＡ３０ゲルろ過カラムで分離した。その結果、
２つのピーク（ＶＧ１およびＶＧ２）が得られた（図
５) 。別に、参考例１で得られたＧＩＦ４００μg をダ
ルベッコ(Dulbecco)のリン酸緩衝食塩水１００μl にト
リプシン（シグマ社製）０. ５μg を加え、以下は上記
と同様の方法により処理し、上記と同一の消化物を得
た。

【００１７】実施例２アミノ酸配列の分析実施例１で得られた５種の分解産物（ＴＧ１，ＴＧ２，
ＴＧ３，ＶＧ１およびＶＧ２）を各々分取し、ガスフェ
ースタンパクシークエンサー（モデル４７７Ａ；アプラ
イドバイオシステムズ社製）にかけ、各ペプチドのアミ
ノ酸配列を決定した。その結果、各ペプチドは下記のア
ミノ酸配列を有することが分かった。ＧＩＦ：ＭＤＰＥＴＣＰＣＰＳＧＧＳＣＴＣＡＤＳ
ＣＫＣＥＧＣＫＣＴＳＣＫＫＳＣＣＳＣＣＰＡＥ
ＣＥＫＣＡＫＤＣＶＣＫＧＧＥＡＡＥＡＥＡＥＫＣＳＣＣＱ（配列番号２）ＴＧ１：ＭＤＰＥＴＣＰＣＰＳＧＧＳＣＴＣＡＤＳ
ＣＫＣＥＧＣＫＣＴＳＣＫＫＳＣＣＳＣＣＰＡＥ
ＣＥＫＣＡＫＤＣＶＣＫＧＧＥＡＡＥＡＥＡＥＫＣＳＣＣＱ（配列番号２）ＴＧ２：ＭＤＰＥＴＣＰＣＰＳＧＧＳＣＴＣＡＤＳ
ＣＫＣＥＧＣＫＣＴＳＣＫＫＳＣＣＳＣＣＰＡＥ
ＣＥＫＣＡＫＤＣＶＣＫＧＧＥＡＡＥＡＥＡＥＫＣＳＣＣＱ（配列番号２）ＴＧ３：ＭＤＰＥＴＣＰＣＰＳＧＧＳＣＴＣＡＤＳ
ＣＫＣＥＧＣＫ（配列番号３）ＶＧ１：ＭＤＰＥＴＣＰＣＰＳＧＧＳＣＴＣＡＤＳ
ＣＫＣＥＧＣＫ（配列番号３）ＶＧ２：ＴＣＰＣＰＳＧＧＳＣＴＣＡＤＳＣＫＣＥ（配列番号１）

【００１８】実施例３ＧＩＦのプロテアーゼによる消化参考例１で得られたＧＩＦ２００μg をダルベッコのリ
ン酸緩衝食塩水２００mlに溶解し、トリプシン（シグマ
社製）１３μg を加え、室温で１８時間反応させた。反
応産物をＧＦＡ３０ゲルろ過カラムで分離した。ＧＦＡ
３０カラムクロマトグラフィーによる分離パターンは図
４に示したと同じであり、３つのピーク（ＴＧ１、ＴＧ
２およびＴＧ３）が得られた。これらのピークのうちＴ
Ｇ３産物を集め、Ｖ８プロテアーゼで消化した後、反応
産物をＧＦＡ３０ゲルろ過カラムで分離した。その結
果、図５と同じ２つのピーク（ＶＧ１およびＶＧ２）が
得られた。

【００１９】実施例４アミノ酸配列の分析実施例１で得られた５種の分解産物（ＴＧ１，ＴＧ２，
ＴＧ３，ＶＧ１およびＶＧ２）を各々常法にしたがって
臭化シアンで処理し、過ギ酸で酸化させた。Ｎ末端の配
列分析をＰＳＱ−１タンパクシークエンサー（島津社
製）で行なった。アミノ酸組成は、６N 塩酸で加水分解
後、ＪＬＣ−３００アミノ酸アナライザー（ＪＥＯＬ社
製）で分析した。その結果、各ペプチドは前記配列番号
２および３と同じアミノ酸配列を有することがわかっ
た。

【００２０】実施例５神経栄養活性抑制活性の測定新生児ラットの大脳皮質より調製した細胞１. ７×１０
⁴ 個を、ゼラチン−ポリオルニチンを塗布した６mmのマ
イクロプレートに撒き、アルツハイマー病脳抽出液を１
２５μg/ml濃度に調製した水溶液１００μl を含む無血
清培地ＭＥＭＮ２（イーグル基本培地にインシュリン、
トランスフェリン、プトレシン、プロゲステロン、亜セ
レン酸ナトリウムを添加）に実施例１で得られた各ペプ
チドを加えた中で、５％炭酸ガス培養槽中、３７℃で５
日間培養した。パラホルムアルデヒドと９０％メタノー
ル／５％酢酸溶液で固定した後、マイクロチューブル結
合タンパク２（ＭＡＰ２；神経細胞により特異的に産生
されるタンパク質）抗体（アマーシャム社製）を使った
ＥＬＩＳＡでＭＡＰ２量を定量した。一方、対照実験と
して、ＧＩＦを加えずアルツハイマー病脳抽出液のみを
加えて培養した時のＭＡＰ２量を定量し、ＭＡＰ２量が
何％減少するかによって抑制活性を表わした。上記方法
を用いて、ＧＩＦペプチド（ＴＧ３およびＶＧ２）の量
と抑制率との関係を測定した。結果を図６に示す。図６
において、●はＧＩＦの、◆はＴＧ３の、×はＶＧ２の
結果をそれぞれ示す。図６に示すように、ＴＧ３および
ＶＧ２は神経栄養活性抑制活性を有することが判明し
た。

【００２１】実施例６以下の実験は、ＧＩＦをトリプシン消化して得られ、同
様の作用を有するＴＧ３（ＧＩＦ１−２６）を用いて行
った。０．１N 塩酸で処理してＴＧ３から金属類を除
き、０．０１N 塩酸で平衡化したＧＦＡ−３０カラムに
よるゲルろ過を行なってＡｐｏＴＧ３を分離した。この
ＡｐｏＴＧ３は、神経栄養活性抑制活性を有していた。
ＡｐｏＴＧ３を２％β−メルカプトエタノールを含むＰ
ＢＳに溶解し、次いでゲルろ過によってβ−メルカプト
エタノールを除いた。この産物、すなわちＡｐｏＴＧ３
＋ＭＥは、神経栄養活性抑制活性を有していなかった。
結果を図７に示す。

【００２２】この実験により、ＴＧ３、ＡｐｏＴＧ３お
よびＡｐｏＴＧ３＋ＭＥは同じアミノ配列を有するにも
かかわらず、ＴＧ３とＡｐｏＴＧ３のみが神経栄養活性
抑制活性を有することが判明した。ＡｐｏＴＧ３＋ＭＥ
は、メルカプトエタノールで処理され、そのＳ−Ｓ結合
は、いったん切断された後、自己酸化によって再結合し
ている。メルカプトエタノール処理は、ＡｐｏＴＧ３＋
ＭＥのタンパク質フォールディングパターンをＴＧ３と
は異なるパターンに変化させる。これに対して、Ａｐｏ
ＴＧ３のＳ−Ｓ結合は切断されず、このペプチドのタン
パク質フォールディングパターンは、Ｓ−金属結合があ
るＴＧ３のタンパク質フォールディングパターンと変わ
っていないと思われる。

【００２３】

【発明の効果】本発明のポリペプチドは、神経栄養活性
抑制物質としてアルツハイマー病の治療に用いることが
できる。これらの神経栄養活性抑制物質は、天然型物質
に比べて容易に、遺伝子組換え技術あるいは化学合成に
より製造することができる。また、本発明の物質の投与
はより容易である。すなわち、本発明のポリペプチド
は、水に易溶であり、製剤化し易く、生体において吸収
されやすい。特に、本発明のポリペプチドは、その分子
サイズからみて天然型物質に比べて脳関門を通過しやす
いと思われる。さらに本発明の物質の構造解析から、同
様の作用を有する化合物を合成するための原料として使
用することができる。

【００２４】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：１９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Thr Cys Pro Cys Pro Ser Gly Gly Ser Cys Thr Cys Ala Asp Ser Cys 1 5 10 15 Lys Cys Glu 19

【００２５】配列番号：２配列の長さ：６８配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Met Asp Pro Glu Thr Cys Pro Cys Pro Ser Gly Gly Ser Cys Thr Cys 1 5 10 15 Ala Asp Ser Cys Lys Cys Glu Gly Cys Lys Cys Thr Ser Cys Lys Lys 20 25 30 Ser Cys Cys Ser Cys Cys Pro Ala Glu Cys Glu Lys Cys Ala Lys Asp 35 40 45 Cys Val Cys Lys Gly Gly Glu Ala Ala Glu Ala Glu Ala Glu Lys Cys 50 55 60 Ser Cys Cys Gln 65 68

【００２６】配列番号：３配列の長さ：２６配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Met Asp Pro Glu Thr Cys Pro Cys Pro Ser Gly Gly Ser Cys Thr Cys 1 5 10 15 Ala Asp Ser Cys Lys Cys Glu Gly Cys Lys 20 25

【図面の簡単な説明】

【図１】正常ヒト大脳皮質をホモジナイズして限外ろ過
し、分子量１０キロダルトン以上の画分のＤＥＡＥ−セ
ファセルカラムにかけたクロマトグラム。

【図２】ＧＩＦの精製過程において、抑制活性を有する
フラクションをゲルろ過したクロマトグラム。

【図３】ＧＩＦをＣｌ８逆相ＨＰＬＣにかけたクロマト
グラム。

【図４】実施例１で得られた、酵素反応産物（トリプシ
ン消化物）のゲルろ過カラムクロマトグラフィーによる
分離パターン。

【図５】実施例１で得られた、酵素反応産物（Ｖ８プロ
テアーゼ消化物）のゲルろ過カラムクロマトグラフィー
によるパターン。

【図６】実施例３で得られた、ＧＩＦおよび本発明のポ
リペプチドの神経栄養活性抑制作用を示すグラフ。

【図７】実施例６で得られた、ＧＩＦおよび本発明のポ
リペプチドの神経栄養活性抑制作用を示すグラフ。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式： Thr Cys Pro Cys Pro Ser Gly Gly Ser Cys Thr Cys Al
a Asp Ser Cys Lys CysGlu で示されるアミノ酸配列を含む神経栄養活性抑制作用を
有する非天然型ポリペプチド。
【請求項２】式： Met Asp Pro Glu Thr Cys Pro Cys Pro Ser Gly Gly Ser Cys Thr Cys Ala Asp 1 5 10 15 Ser Cys Lys Cys Glu Gly Cys Lys 20 25 で示されるアミノ酸配列を含む神経栄養活性抑制作用を
有する非天然型ポリペプチド。
【請求項３】少なくとも１つのジスルフィド結合を有
する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項４】少なくとも１つのジスルフィド結合を有
する、請求項２記載のポリペプチド。