JPH06256212A - オーレオバシジン類のリポソーム製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】抗真菌剤として有用なオーレオバシジン類を、
リポソーム製剤とし、注射用製剤等として使用する。 【構成】オーレオバシジン類及びリン脂質を必須成分と
し、リン脂質が構成するリポソームにオーレオバシジン
類を保持していることを特徴とする製剤である。例え
ば、好ましくはリン脂質の量がオーレオバシジン類１部
に対し５部から１００部であり、任意に酸性リン脂質又
は高級脂肪酸をリポソーム膜への負電荷付与剤として含
んでもよい。リポソームが水相に分散乳化している形
態、又は水相を添加することによりリポソームを再構成
する固形物の形態からなる製剤である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は抗真菌剤として有用なオ
ーレオバシジン類のリポソーム製剤に関するもので注射
用製剤などとして使用できる。

【０００２】

【従来の技術】オーレオバシジン類は既知化合物であ
り、例えばオーレオバシディウム属に属する１菌株（Ｆ
ＥＲＭ−ＢＰ１９３８）によって生産され、抗真菌剤と
しての有用性が期待されている（特開平２−１３８２９
６、同３−２２９９５、同３−４４３９８）。深在性真
菌症は癌や臓器移植、後天性免疫不全症候群など免疫の
抑制状態にある患者にとり致命的な疾患であり、近年増
加しつつある。これらの重症の患者に対し、オーレオバ
シジン類を注射により投与できる製剤が望まれる。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】オーレオバシジン類は
水に実質的に溶解しない環状のペプチドであり、水に溶
解して注射用製剤とすることが困難である。水に不溶の
薬物を注射用の製剤とする方法には非イオン性の界面活
性剤を用いてミセル可溶化する方法が一般的である。例
えば、脂溶性のビタミンを界面活性剤により水に可溶化
して注射用製剤とすることが広く行われているし、抗真
菌剤の例ではミコナゾールの界面活性剤による可溶化製
剤が注射剤として市販されている。また、水に難溶性の
環状ペプチドのサイクロスポリンＡも界面活性剤によっ
て可溶化した注射用製剤が調製され市販されている。注
射用に用いられる界面活性剤としては溶血性並びに組織
障害性の低い非イオン性界面活性剤、ポリオキシエチレ
ンヒマシ油誘導体、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油誘
導体、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類
やポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール
類が一般的に使用される。これらの活性剤のうちポリオ
キシエチレンヒマシ油誘導体並びにポリオキシエチレン
硬化ヒマシ油誘導体は患者によっては稀に注射した際に
アナフィラキシーショックを起こすことが知られてお
り、その使用は決して好ましいものではない。また、オ
ーレオバシジン類は非常にミセル可溶化しにくく、ポリ
オキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類やポリオキ
シエチレンポリオキシプロピレングリコール類では可溶
化できない。そのため安全性が高く、注射に使用できる
製剤の開発が望まれている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】水に実質的に不溶性のオ
ーレオバシジン類を注射用にも使用できる安全性の高い
製剤とするため鋭意検討した結果、オーレオバシジン類
及びリン脂質を必須成分とし、リン脂質が構成するリポ
ソームにオーレオバシジン類を保持している製剤とすれ
ば、安全性の高い製剤が得られることを見出し、本発明
を完成した。

【０００５】本発明のリポソーム製剤は、公知の方法
（例えば、ボルテクスイング法、超音波法、逆相蒸発法
等）に基づき調製することが出来る。

【０００６】本発明におけるオーレオバシジン類として
は特開平２−１３８２９６記載の新規抗生物質Ｒ１０６
（オーレオバシジンＡ：以下Ｒ１０６−Ｉと略す) 及び
それらの類縁化合物、誘導体などがあげられ、具体的に
は前記公報開示の化合物などがあげられる。

【０００７】リポソーム膜を構成するリン脂質としては
天然リン脂質、水素添加した天然リン脂質及び合成リン
脂質等の中性リン脂質があげられ、例えば卵黄リン脂
質、大豆リン脂質、それらの水素添加物、ホスファチジ
ルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィン
ゴミエリン、セレブロシド等が用いられる。また、これ
らの２種以上のリン脂質を混合して用いてもよいが、通
常ホスファチジルコリンを主成分とするリン脂質が好ま
しい。使用されるリン脂質の量はリン脂質の種類によっ
ても異なるが、オーレオバシジン類１部（重量、以下同
じ）に対し通常５部から１００部、好ましくは１０部か
ら６０部の範囲である。

【０００８】水の量はリン脂質が充分に水和する量以上
であれば制限はないが、投与時にはオーレオバシジン類
の最終濃度が０．０１〜５Ｗ／Ｖ％、好ましくは０．１
〜２Ｗ／Ｖ％、最も一般的には０．２〜１Ｗ／Ｖ％程度
になるように使用される。

【０００９】また本発明のリポソーム製剤には上記成分
以外に他の医薬品添加剤が添加されていてもよい。それ
らの添加剤としては、リポソーム膜への負電荷付与剤、
膜強化剤、ｐＨ調整剤、ｐＨ緩衝剤、浸透圧調節剤、保
存剤などがあげられる。

【００１０】リポソームの凝集等を防止するための膜へ
の負電荷付与剤として酸性リン脂質又は中級から高級脂
肪酸を添加してもよく、酸性リン脂質としては、天然酸
性リン脂質、水素添加した天然酸性リン脂質及び合成酸
性リン脂質等があげられ、例えばホスファチジン酸、ホ
スファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホ
スファチジルイノシトール等が用いられる。これらの酸
性リン脂質の添加量は中性リン脂質に対し５０Ｗ／Ｗ％
以下、好ましくは０．５〜２０Ｗ／Ｗ％程度である。

【００１１】また負電荷付与剤として中級から高級脂肪
酸もあげられ、通常炭素数８〜２４程度、好ましくは炭
素数１０から２０の飽和又は不飽和脂肪酸、より好まし
くは炭素数１４から２０の不飽和脂肪酸があげられる。
これらの脂肪酸の例としては、ミリスチン酸、パルミチ
ン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレ
ン酸、アラキドン酸等が用いられる。これらの脂肪酸の
添加量はリン脂質に対して、２０Ｗ／Ｗ％以下、好まし
くは０．５〜１０Ｗ／Ｗ％程度である。

【００１２】膜の流動性を小さくし融合等を防ぐための
膜強化剤としてコレステロール類等を使用しても構わな
いが、オーレオバシジン類の保持率を低下させるので添
加しないことが好ましい。

【００１３】ｐＨ調整剤及びｐＨ緩衝剤としては、注射
剤に通常使用される生理的に安全性の高い酸及び塩基を
使用することができる。この例として、塩酸、硫酸、リ
ン酸などの無機酸やクエン酸などの有機酸及びこれらの
アルカリ金属塩が使用される。調整するｐＨは生理的に
許容されるｐＨならば制限はないが、安全性及び乳化の
安定性を保持するためには５から９の範囲が好ましい。

【００１４】浸透圧調整剤としては、生理的に安全性の
高い塩類や糖類、糖アルコール類やアルコール類が用い
られるが、リポソーム製剤の安定性を保持するためには
ブドウ糖、マンニトールやグリセリンなどの非イオン性
物質を用いることが好ましい。これらの添加量はリポソ
ーム製剤の浸透圧を生理的に安全な程度の浸透圧に保つ
のに必要な量であり、生理食塩液の浸透圧に対する比と
して０．７以上、好ましくは０．７から２の浸透圧を得
るのに必要な浸透圧調整剤固有の濃度を得る量である。

【００１５】その他の添加剤としては、酸化防止剤や保
存剤などがあげられる。特に不飽和結合を含む脂質を含
むときの脂質の酸化防止剤としてビタミンＥ類、ブチル
ヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソールなど
の脂溶性の抗酸化剤を用いることができる。これらの抗
酸化剤の添加量は通常リン脂質に対し０．００１〜１Ｗ
／Ｗ％の範囲である。また、脂質の酸化による変化を防
ぐため、容器中の大気を窒素ガスなどの不活性ガスで置
換することも通常行われる。

【００１６】本発明のリポソーム製剤は一般的には水性
媒体中に分散乳化した形態をとるが、保存安定性を考慮
して凍結乾燥等の手段により固形物の形態としてもよ
い。本発明ではこのような固形物の形態のものも含めた
意味でリポソームという。また固形物とするための賦形
剤としては通常医薬用に使用される糖類、アミノ酸類、
高分子類等が使用できる。糖類としては、乳糖、白糖、
トレハロース等の二糖類、マンニトール等の糖アルコー
ル類が好ましい。また該固形物の形態のものから、リポ
ソーム乳濁液を再構成させる為には水相を添加すればよ
い。

【００１７】次に本発明のリポソーム製剤の製造法をよ
り詳しく説明する。まずオーレオバシジン類を脂質と均
一に混合する。このとき、エタノール等の有機溶媒を使
用してオーレオバシジン類と脂質を溶解したのち、溶媒
を留去してもよい。次いで水相を添加し脂質の相転移温
度以上で脂質を水和させた後、乳化してリポソーム製剤
を得る。また、エタノール等の注射剤に通常使用される
生理的に安全性の高い溶媒を使用する場合は溶媒を留去
することなく水相を加えリポソーム製剤を得ることが出
来る。このとき使用する溶媒量はリン脂質１部に対し５
部以下が好ましい。

【００１８】乳化工程は、乳化機を用いて乳化すること
により行うことができる。乳化機としてはホモミキサ
ー、ホモジナイザー、超音波分散乳化装置及びマントン
ゴーリン（登録商標）型ホモジナイザーやマイクロフル
イダイザー（登録商標）等の高圧乳化装置などを用いる
ことができる。

【００１９】リポソームの粒子径は注射したときの安全
性及びリポソーム製剤の安定性を保持するためには０．
０５〜１μｍであることが好ましく、平均粒子径は０．
４μｍ以下の範囲にあることが好ましい。粒子径の均一
化には逐次濾過法、ゲル濾過、遠心分離等を用いること
が可能である。得られた乳濁液はメンブランフィルター
を使用するろ過操作により無菌化及び異物の除去ができ
る。

【００２０】得られたリポソーム製剤の好ましい組成を
下記に示す。組成割合はいずれもリポソームが水相に分
散乳化している形態からなる製剤における成分の割合で
ある。凍結乾燥などにより固形物とするときにはその成
分の割合から水をのぞいた割合となる。 オーレオバシジン類 0.01 〜 5 W/W％、好ましくは
0.1 〜 2 W/W％ リン脂質 0.2 〜25 W/W％、好ましくは 2
〜15 W/W％ 高級脂肪酸 0 〜 5 W/W％、好ましくは
0.1 〜 2 W/W％ その他の添加剤 0 〜50 W/W％、好ましくは
0.01 〜40 W/W％ 水 残部

【００２１】凍結乾燥製剤の好ましい割合を示すと次の
通りである。 オーレオバシジン類 0.5 〜10 W/W％、好ましくは 1
〜 5 W/W％ リン脂質 10 〜99.5 W/W％、好ましくは 2
0 〜69 W/W％ その他の添加剤 0 〜80 W/W％、好ましくは 2
0 〜70 W/W％

【００２２】

【実施例】本発明を実施例をあげて詳しく説明するが、
本発明はこれらのみに限定されるものではない。

【００２３】実施例１ オーレオバシジンＲ１０６−Ｉ、０．３ｇ及び精製卵黄
リン脂質５ｇをエタノールに溶解し均一溶液とした後、
エタノールをエバポレーター及び真空ポンプにて留去し
た。適量の注射用水とグリセリン１ｇを加え全量を５０
ｍｌとし、５０℃の水浴上でホモジナイザー（イカ社
製）により水和・一次乳化を行った。更に超音波を３０
分照射して二次乳化を行った。得られた乳濁液をポリカ
ーボネートメンブランフィルター（孔径０．２μｍ）を
装着したエクストルーダー（リペックス社製）を用いて
滅菌、異物の除去及び粒子径の均一化を行い、滅菌した
注射用の容器に充填し、窒素ガス置換して密封した。得
られた注射剤は均一な白色の乳濁液であり、光散乱粒子
径測定装置による平均粒子径は０．１８μｍであった。
Ｒ１０６−Ｉ濃度は４．１ｍｇ／ｍｌであった。

【００２４】実施例２ オーレオバシジンＲ１０６−Ｉ、０．３ｇ、精製卵黄リ
ン脂質７．５ｇ及びオレイン酸０．２５ｇをエタノール
に溶解し均一溶液とした後、エタノールをエバポレータ
ー及び真空ポンプにて留去した。適量の注射用水とグリ
セリン１．２５ｇを加え全量を５０ｍｌとし、５０℃の
水浴上で攪拌し水和・一次乳化を行った。更にマイクロ
フルイダイザー（マイクロフルイディック社製）により
高圧で二次乳化を行った。得られた乳濁液をポリカーボ
ネートメンブランフィルター（孔径０．２μｍ）を装着
したエクストルーダー（リペックス社製）を用いて滅
菌、異物の除去及び粒子径の均一化を行い、滅菌した注
射用の容器に充填し、窒素ガス置換して密封した。得ら
れた注射剤は均一な白色の乳濁液であり、光散乱粒子径
測定装置による平均粒子径は０．１８μｍであった。Ｒ
１０６−Ｉ濃度は５．５ｍｇ／ｍｌであった。

【００２５】実施例３ オーレオバシジンＲ１０６−Ｉ、０．５ｇ、精製卵黄リ
ン脂質１３ｇ及びオレイン酸０．８６ｇをエタノールに
溶解し均一溶液とした後、エタノールをエバポレーター
及び真空ポンプにて留去した。適量の注射用水とグリセ
リン２．５ｇを加え全量を１００ｍｌとし、６５℃の水
浴上でホモジナイザー（イカ社製）により水和・一次乳
化を行った。更にマイクロフルイダイザー（マイクロフ
ルイディック社製）により高圧で二次乳化を行った。得
られた乳濁液を水酸化ナトリウムでｐＨを７．３とした
のち、ポリカーボネートメンブランフィルター（孔径
０．２μｍ）を装着したエクストルーダー（リペックス
社製）を用いて滅菌、異物の除去及び粒子径の均一化を
行い、滅菌した注射用の容器に充填し、窒素ガス置換し
て密封した。得られた注射剤は均一な白色の乳濁液であ
り、光散乱粒子径測定装置による平均粒子径は０．２４
μｍであった。Ｒ１０６−Ｉ濃度は４．４ｍｇ／ｍｌで
あった。

【００２６】実施例４ オーレオバシジンＲ１０６−Ｉ、０．２５ｇをエタノー
ル０．５ｍｌに溶解し、精製卵黄リン脂質５ｇを加え均
一に練合した。適量の注射用水とグリセリン１ｇを加え
全量を５０ｍｌとし、室温でホモジナイザー（イカ社
製）により水和・一次乳化を行った。更にマイクロフル
イダイザー（マイクロフルイディック社製）により高圧
で二次乳化を行った。得られた乳濁液をポリカーボネー
トメンブランフィルター（孔径０．２μｍ）を装着した
エクストルーダー（リペックス社製）を用いて滅菌、異
物の除去及び粒子径の均一化を行い、滅菌した注射用の
容器に充填し、窒素ガス置換して密封した。得られた注
射剤は均一な白色の乳濁液であり、Ｒ１０６−Ｉ濃度は
３．６ｍｇ／ｍｌであった。

【００２７】実施例５ オーレオバシジンＲ１０６−Ｉ、０．２５ｇをオレイン
酸０．１６ｇに溶解し、精製卵黄リン脂質５ｇを加えて
均一に練合した。適量の注射用水とグリセリン１．２５
ｇを加えて全量を５０ｍｌとし、室温でホモジナイザー
（イカ社製）により水和・一次乳化を行った。更にマイ
クロフルイダイザー（マイクロフルイディック社製）に
より高圧で二次乳化を行った。得られた乳濁液をポリカ
ーボネートメンブランフィルター（孔径０．２μｍ）を
装着したエクストルーダー（リペックス社製）を用いて
滅菌、異物の除去及び粒子径の均一化を行い、滅菌した
注射用の容器に充填し、窒素ガス置換して密封した。得
られた注射剤は均一な白色の乳濁液であり、Ｒ１０６−
Ｉ濃度は４．０ｍｇ／ｍｌであった。

【００２８】実施例６ オーレオバシジンＲ１０６−Ｉ、０．３ｇ及び精製卵黄
リン脂質７．５ｇをエタノールに溶解し均一溶液とした
後、エタノールをエバポレーター及び真空ポンプにて留
去した。適量の注射用水を加え全量を５０ｍｌとし、５
０℃の水浴上で攪拌し水和・一次乳化を行った。更にマ
イクロフルイダイザー（マイクロフルイディック社製）
により高圧で二次乳化を行った。得られた乳濁液をポリ
カーボネートメンブランフィルター（孔径０．２μｍ）
を装着したエクストルーダー（リペックス社製）を用い
て滅菌、異物の除去及び粒子径の均一化を行い、滅菌し
た注射用の容器に充填した。続いて凍結乾燥したのち窒
素ガス置換して密封して、粉末の注射用製剤とした。

【００２９】実施例７ オーレオバシジンＲ１０６−Ｉ、０．３ｇ及び精製卵黄
リン脂質７．５ｇをエタノールに溶解し均一溶液とした
後、エタノールをエバポレーター及び真空ポンプにて留
去した。乳糖１５ｇ及び適量の注射用水を加え全量を５
０ｍｌとし、５０℃の水浴上で攪拌し水和・一次乳化を
行った。更にマイクロフルイダイザー（マイクロフルイ
ディック社製）により高圧で二次乳化を行った。得られ
た乳濁液をポリカーボネートメンブランフィルター（孔
径０．２μｍ）を装着したエクストルーダー（リペック
ス社製）を用いて滅菌、異物の除去及び粒子径の均一化
を行い、滅菌した注射用の容器に充填した。続いて凍結
乾燥したのち窒素ガス置換して密封して、粉末の注射用
製剤とした。

【００３０】本発明品のｉｎ ｖｉｖｏ抗真菌効果 本発明品実施例１及び２の抗真菌効果を対照例と比較し
て示す。カンジダ菌（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎ
ｓ ＴＩＭＭ１７６８）、２×１０⁶ 個／０．２ｍｌを
マウス尾静脈より静注して感染させ、感染当日より５日
間、本発明品の実施例１及び２の製剤をオーレオバシジ
ンＲ１０６−Ｉの投与量で５、１０、２０、５０ｍｇ／
ｋｇ、陽性対照としてＨＣＯ−６０（日光ケミカルズ；
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油誘導体）を用いたＲ１
０６−Ｉの可溶化水溶液（Ｒ１０６−Ｉ ２ｍｇ／ｍ
ｌ、ＨＣＯ−６０ ４０ｍｇ／ｍｌ、エタノール２ｍｇ
／ｍｌを含む生理食塩水溶液）をＲ１０６−Ｉが２０ｍ
ｇ／ｋｇとなるよう投与した。また、実施例１及び２の
製剤よりＲ１０６−Ｉを除いたものを陰性対照として投
与した。各投与群のマウスは１０匹（実施例２の陰性対
照投与群は９匹）とし、真菌感染当日より３０日間その
生死及び体重変化を観察した。体重変化は感染及び薬剤
投与を行わない無処置群と比較した。本発明品実施例１
及び２の抗真菌効果を生存曲線によりそれぞれ図１及び
２に陽性対照及び陰性対照と比較して示した。また、実
施例１及び２それぞれの体重変化を図３及び図４に陽性
対照、陰性対照及び無処置群と比較して示した。本発明
品は実施例いずれにおいても投与量を多くするに従い、
顕著な生存期間の延長及び体重変動における回復が認め
られ、本発明品の抗真菌効果及び安全性が高いことが示
された。

【００３１】

【発明の効果】本発明におけるリポソーム製剤は優れた
抗真菌作用を有し、更にアナフィラキシー様作用の副作
用を有しないため安全性も高い。

【図面の簡単な説明】

【図１】カンジダ菌感染マウスに、実施例１の製剤及び
対照製剤を投与した場合の生存率曲線

【図２】カンジダ菌感染マウスに、実施例２の製剤及び
対照製剤を投与した場合の生存率曲線

【図３】カンジダ菌感染マウスに、実施例１の製剤及び
対照製剤を投与した場合ならびに非感染無処置の場合の
体重変化曲線

【図４】カンジダ菌感染マウスに、実施例２の製剤及び
対照製剤を投与した場合ならびに非感染無処置の場合の
体重変化曲線

【符号の説明】

図１において、１〜４は実施例１の製剤を投与した群、
Ａは陽性対照の製剤を投与した群、Ｂは陰性対照の製剤
を投与した群を示し、Ｒ１０６−Ｉの投与量として１は
５０ｍｇ／ｋｇ、２は２０ｍｇ／ｋｇ、３は１０ｍｇ／
ｋｇ、４は５ｍｇ／ｋｇ、Ａは２０ｍｇ／ｋｇ、Ｂは０
ｍｇ／ｋｇである。図２において、１〜４は実施例２の
製剤を投与した群、Ａは陽性対照の製剤を投与した群、
Ｂは陰性対照の製剤を投与した群を示し、Ｒ１０６−Ｉ
の投与量として１は５０ｍｇ／ｋｇ、２は２０ｍｇ／ｋ
ｇ、３は１０ｍｇ／ｋｇ、４は５ｍｇ／ｋｇ、Ａは２０
ｍｇ／ｋｇ、Ｂは０ｍｇ／ｋｇである。図３において、
１〜４は実施例１の製剤を投与した群、Ａは陰性対照の
製剤を投与した群、Ｂは非感染無処置群を示し、Ｒ１０
６−Ｉの投与量として１は５０ｍｇ／ｋｇ、２は２０ｍ
ｇ／ｋｇ、３は１０ｍｇ／ｋｇ、４は５ｍｇ／ｋｇ、Ａ
及びＢは０ｍｇ／ｋｇである。図４において、１〜４は
実施例２の製剤を投与した群、Ａは陰性対照の製剤を投
与した群、Ｂは非感染無処置群を示し、Ｒ１０６−Ｉの
投与量として１は５０ｍｇ／ｋｇ、２は２０ｍｇ／ｋ
ｇ、３は１０ｍｇ／ｋｇ、４は５ｍｇ／ｋｇ、Ａ及びＢ
は０ｍｇ／ｋｇである。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】オーレオバシジン類及びリン脂質を必須成
   分とし、リン脂質が構成するリポソームにオーレオバシ
   ジン類を保持していることを特徴とするリポソーム製剤
2. 【請求項２】リポソームを構成するリン脂質の量がオー
   レオバシジン類１部に対し５部から１００部である請求
   項１の製剤
3. 【請求項３】酸性リン脂質又は中級から高級脂肪酸を含
   む請求項１の製剤
4. 【請求項４】リポソームが水相に分散乳化している形態
   からなる請求項１の製剤
5. 【請求項５】水相を添加することによりリポソームを再
   構成する固形物の形態からなる請求項１の製剤