JPH06261764A - 混合型ｌｔｒ含有超複合型レトロウイルス及びその使用方法 - Google Patents

混合型ｌｔｒ含有超複合型レトロウイルス及びその使用方法

Info

Publication number
JPH06261764A
JPH06261764A JP6043163A JP4316394A JPH06261764A JP H06261764 A JPH06261764 A JP H06261764A JP 6043163 A JP6043163 A JP 6043163A JP 4316394 A JP4316394 A JP 4316394A JP H06261764 A JPH06261764 A JP H06261764A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
retrovirus
protein
sequence
supercomplexed
virus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP6043163A
Other languages
English (en)
Inventor
Howard M Temin
エム． テミン ハワード
Kathleen A Boris-Lawrie
エイ． ボリス−ローリー キヤスリーン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wisconsin Alumni Research Foundation
Original Assignee
Wisconsin Alumni Research Foundation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wisconsin Alumni Research Foundation filed Critical Wisconsin Alumni Research Foundation
Publication of JPH06261764A publication Critical patent/JPH06261764A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/13011—Gammaretrovirus, e.g. murine leukeamia virus
    • C12N2740/13022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
    • C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/15043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/50—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating RNA stability, not being an intron, e.g. poly A signal

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【目的】 超複合型レトロウイルスによる疾病に対する
安全かつ有効なワクチンを開発するために、他の発病性
の複合レトロウイルスタンパク質を生産せずに、変異型
の超複合型レトロウイルスのＧａｇ，Ｐｏｌ、及びＥｎ
ｖ抗原を生産する方法を提供する。 【構成】 単純型レトロウィルス長末端反復及び特定の
超複合型レトロウィルスタンパク質をコード化するＤＮ
Ａ配列を含有し、前記ＤＮＡ配列がＭＣ型ａｔｔ，ｐｂ
ｓ、Ｅ及びｐｐｔをコード化するＤＮＡ；単純型レトロ
ウイルスの長い末端を有するＲＮＡ配列と、特定の超複
合型レトロウイルスタンパク質をコード化するＲＮＡ配
列とを含有し、前記ＲＮＡ配列がＭＣ型ａｔｔ，ｐｂ
ｓ，Ｅ及びｐｐｔをコード化するレトロウイルス；該レ
トロウイルスを生きた、哺乳動物宿主中へ導入し、宿主
中でウイルスにレトロウイルスタンパク質を生産させる
方法、及び；該レトロウイルスを宿主組織へ感染させ、
ウイルスを複製させて少なくとも一種の超複合型レトロ
ウイルスタンパク質を生産させ、抗体に超複合型レトロ
ウイルスタンパク質を生成させる抗体の生産方法。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は抗原の製造に有用な組換
え型レトロウイルスに関する。本発明はアメリカ合衆国
ナショナル・インスチチュート・オブ・ヘルス(Nationa
l Institute Of Health)（ＮＩＨ）助成金ＣＡ０７１７
５及びＣＡ２２４４３により授与された政府支援により
なされた。合衆国政府はこの発明に一定の権利を有して
いる。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】レトロ
ウイルスはＤＮＡ中間体を介して複製するＲＮＡウイル
スの一種である。図１は、単純型「Ｓ型」と超複合型
「ＭＣ型」の二種のレトロウイルスの例を示す。レトロ
ウイルスはすべてｇａｇ，ｐｏｌ，及びｅｎｖ遺伝子を
持っている。ある種のレトロウイルス（例えば脾臓壊疽
ウイルス、マウス白血病ウイルス）では、ウイルスの複
製にこれらの遺伝子のみが必要である。このようなウイ
ルスは「単純型」あるいは「Ｓ型」レトロウイルスと呼
ばれる（例えば、米国特許第４，６５０，７６４号、第
４，９８０，２８９号、第５，１２４，２６３号を参
照。これらの特許及び本明細書中で引用される他の刊行
物の開示は、本明細書中に十分に明らかとなるように引
用されている）。「超複合型」あるいは「ＭＣ型」レト
ロウイルスと呼ばれる他のレトロウイルスは、複製のた
めさらに遺伝子を必要とする。超複合型レトロウイルス
には、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトスプーマ
ーレトロウイルス、ヒトＴリンパ趨向性ウイルスＩ型
（human T-lymphotropic virus type I; ＨＴＬＶ−
Ｉ）、及びウシ白血病ウイルス（ＢＬＶ）がある。
【０００３】超複合型レトロウイルスの付加遺伝子は、
天然ウイルスの複製に必要不可欠なものと考えられる。
これに関して、複合レトロウイルス中の付加遺伝子は、
転写、スプライシング及びポリアデニル化に働くタンパ
ク質をコード化することが知られている。テミンら（H.
Temin,et al.),レトロウイルス（The Retroviridae),第
１巻、ニューヨーク、１，５（１９９２）全頁を参照。
【０００４】単純型及び超複合型レトロウイルス双方の
ゲノムは、いくつかの共通の特徴を有する。両種のＲＮ
Ａウイルスは、ＤＮＡ中間体を介して複製する。従っ
て、単純型及び超複合型レトロウイルスはいずれもＤＮ
Ａゲノム及びＲＮＡゲノムを有する。両種のレトロウイ
ルスのウイルスＤＮＡゲノムは、複数の長末端反復（Ｌ
ＴＲ）によって境界を形成している。これらのＬＴＲ
は、エンハンサー、プロモーター、通常は３’位のＲＮ
Ａプロセシング配列及び組み込み配列（att)を含んでい
る。
【０００５】単純型及び超複合型レトロウイルスは異な
る感染サイクルをもっている。テミン（レトロウイル
ス、前出、ｐｐ．１，６−７）は、これらの２種の異な
る感染サイクルについて記載している。その主たる相違
は、超複合型レトロウイルスのサイクルにおける調節タ
ンパク質の関与にある。
【０００６】自然界では、単純型レトロウイルスによっ
て引き起こされる疾病が多種の非哺乳動物宿主に認めら
れているが、霊長類あるいは有蹄類では知られていな
い。しかし、超複合型レトロウイルスによって起こる疾
病は、有蹄類及び霊長類（特に人間）において広く認め
られる。
【０００７】多くの超複合型レトロウイルスに関して、
このウイルスにより引き起こされる疾病に対する安全か
つ有効なワクチンは未だない。この理由は、ある種のよ
り複雑な調整レトロウイルスタンパク質がこの免疫反応
を妨害し、及び／又はレトロウイルスが長期の免疫反応
を与えるには余りにも急速にからだに代わる生体内で(i
n vivo for the body)変異するためであると考えられて
いる。そのため、他の発病性の複合レトロウイルスタン
パク質を生産せずに、主要スペクトラムとして変異型の
超複合型レトロウイルスのＧａｇ，Ｐｏｌ、及びＥｎｖ
抗原を生産する方法を見い出す必要がある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】一面において本発明は、
ａｔｔを除くＳ型レトロウイルス長末端反復を有し、か
つＭＣ型レトロウイルスタンパク質及びａｔｔ，ｐｂ
ｓ，Ｅ及びｐｐｔ（それぞれ組み込み配列、プライマー
結合部位、エンカプシデーション（encapsidation ）、
及びポリプリン系を示す）をコード化する、組換え型レ
トロウイルスＤＮＡ配列を提供する。
【０００９】この配列が複製能力のあるウイルスをコー
ド化し、このＤＮＡ配列によってコード化されるＭＣ型
レトロウイルスタンパク質がＥｎｖ，Ｇａｇ及びＰｏｌ
タンパク質からなる群から選ばれることが好ましい。
【００１０】他の面において、本発明は組換え型レトロ
ウイルスを提供する。本レトロウイルスは、ａｔｔを除
くＳ型レトロウイルス末端を有するＲＮＡ配列と、ＭＣ
型レトロウイルスタンパク質及びａｔｔ，ｐｂｓ，Ｅ及
びｐｐｔをコード化するＲＮＡ配列を含んでなる。同様
に、本ウイルスは複製能力を有することが好ましい。
【００１１】さらに他の面において、本発明は宿主細胞
中で抗原を生産する方法を提供する。本発明の一態様に
よれば、哺乳動物（例えば霊長類）細胞中へ上記ウイル
スを導入してウイルスの複製を可能とし、ウイルスタン
パク質を生産させる。
【００１２】またさらに他の面において、本発明は宿主
内で抗体を生産する方法を提供する。本発明の一態様に
よれば、宿主に感染させてウイルスの複製を可能とし、
少なくとも一種のＭＣ型レトロウイルスタンパク質を生
産させる。必要な場合は、抗体が次いでＭＣ型レトロウ
イルスタンパク質に対して生成する。
【００１３】従って本発明の目的は、全てではないがあ
る種のＭＣ型レトロウイルスタンパク質に対する抗原を
生産することである。
【００１４】本発明の他の目的は、ａｔｔを除く複数の
Ｓ型レトロウイルス長末端反復を有し、かつＭＣ型レト
ロウイルスタンパク質をコード化する複製能力を有する
ウイルスを生産することである。
【００１５】本発明の他の目的は、宿主内に注射した場
合に抗原反応を起こすウイルスを提供することである。
【００１６】本発明の他の特徴は、自然発生のＭＣ型レ
トロウイルスが宿主内で変異するであろう形式に類似し
た形式で変異する上記タイプのウイルスを提供すること
である。
【００１７】本発明の他の特徴、目的及び利点は、以下
の明細書、特許請求の範囲及び図面により明らかにな
る。
【００１８】
【実施例】１．総論 本発明は、生きた（live）、単純型レトロウイルスの感
染に対する霊長類及び有蹄類の防衛反応能力を主たる原
理として成立している。つまり、生きた、単純型レトロ
ウイルスは、霊長類、有蹄類においては病気を引き起こ
さない。本発明者らは、超複合型レトロウイルスが、そ
れらのＬＴＲの殆どすべてを取り除くことができ、殆ど
すべての単純型レトロウイルスＬＴＲの供与を受けら
れ、削除された一定の他の超複合型レトロウイルスタン
パク質をコードする配列を有し、そしてその新たな組換
え型ウイルスがなお複製能力を有することを見い出し
た。特に驚くべきことは、超複合型天然レトロウイルス
が、超複合型調節レトロウイルスタンパク質を複製のた
めに要求することである。
【００１９】本発明者らは、かくして代表的なＭＣ型レ
トロウイルスのＧａｇ，Ｐｏｌ及びＥｎｖタンパク質を
発現するＳ型レトロウイルスを作製した。このウイルス
は複製能力を有し、かつ元のウイルスのみならずそのウ
イルスの変異種に対しても抗原反応を誘導するのに適し
ていることが好ましい。このウイルス構造には、一定の
必要な超複合型レトロウイルスタンパク質が存在しない
ために、たとえ生きたウイルスを宿主中の抗体を生産す
るために用いても、ＭＣ型ウイルス病は引き起こされな
いものである。
【００２０】必要な場合は、生体外で数回の感染サイク
ルへそのウイルスを経過させて生きたウイルスの感染危
険性を減じ、次いでそのウイルスを不活化することがで
き、その不活化ウイルスを抗原として用いることができ
る。
【００２１】本発明者らは、最初にウシ白血病ウイルス
（ＢＬＶ）を代表的超複合型レトロウイルスとして検討
を行った（図１〜３参照）。ＢＬＶは、ｇａｇ，ｐｏｌ
及びｅｎｖ遺伝子に加えてｔａｘ及びｒｅｘ遺伝子を有
している。ｔａｘ及びｒｅｘ遺伝子の生産物はＢＬＶの
長末端反復（ＬＴＲ）中の配列に対して作用する。本発
明者らは、ＢＬＶ及び単純型レトロウイルスである脾臓
壊疽ウイルス（ＳＮＶ）からキメラレトロウイルスＤＮ
Ａベクターを作製した。本発明者らは、ＳＮＶからの単
純なレトロウイルスのシス作用制御配列を、ＢＬＶ中に
認められ、かつ調節遺伝子（ｔａｘ／ｒｅｘ）をコード
する一定の配列が削除された大部分の超複合型レトロウ
イルス制御配列へ置換した。
【００２２】以下に述べるように、本発明者らは、末端
結合配列（ａｔｔＲ及びａｔｔＬ）を除くすべてのＢＬ
ＶのＬＴＲ、すなわち各末端の約１０塩基対を、ＳＮＶ
のＬＴＲからの類似の配列と置換し、ＢＬＶのｔａｘ及
びｒｅｘ遺伝子を削除した。便宜上、かつ組み換えのリ
スクを少なくするため、ｇａｇ−ｐｏｌ及びｅｎｖ遺伝
子を別個のキメラベクターへ発現させた。しかし、これ
ら三つの遺伝子を単一のベクターへ発現させることも可
能である。ＢＬＶ遺伝子はキメラＬＴＲによって発現で
き、本発明者らの実験では、生じたキメラＢＬＶ／ＳＮ
Ｖウイルスが複製能力を有することが示された。
【００２３】類似の「単純型ＨＩＶ」は、ＨＩＶ−１の
ｇａｇ，ｐｏｌ及びｅｎｖ遺伝子（これら遺伝子のソー
スは、１９９２年１月発行、ナショナル・インスチチュ
ート・オブ・ヘルス、出版番号２−１５３６、Ｎ．Ｉ．
Ｈ．エイズ研究及び対照薬プログラムカタログ＃２７９
中にあった細胞株ＨＵＴ７８（ＨＩＶ−１SF2 ）であ
る。）を取り出し、ＨＩＶ−１のＧａｇ及びＰｏｌタン
パク質によって作用されたシス作用ＬＴＲ制御配列を、
ＳＮＶあるいは他の単純型レトロウイルスから転写され
及びポリアデニル化された配列で置換することによって
作製することができる。特に、ＢＬＶに関しては、この
構造は、ａｔｔ配列を除くすべてのＨＩＶ−１のＬＴＲ
配列へ単純型レトロウイルスＬＴＲ配列を置換すること
によって作製できる。かかる置換は、さらにＨＩＶのＴ
ＡＲ配列の削除を伴う。少なくともＨＩＶ−１タンパク
質の一種は削除すべきであるが（例えばｔａｔ）、必要
ならばより多くのＨＩＶ−１タンパク質を、複製を容易
にするため、例えばｖｐｕ，ｖｉｆ中に残すことができ
る。
【００２４】２．材料及び方法 ベクターの作製 図４〜７は作製された４レトロウイルスベクターの模式
図である。これらのベクターは、複製連鎖反応（ＰＣ
Ｒ）クローニング、オリゴヌクレオチド・クローニン
グ、及び制限断片クローニングを用いて作製されたもの
である。
【００２５】親プラスミドであるｐＫＢ４０４を作製す
るため、ＰＣＲ法を用いてＳＮＶのＬＴＲを増幅した。
ｐＪＤ２２０ＳＶＨｙは、米国特許第４，９８０，２８
９号に記載され、ＡＴＣＣ６７３９７の寄託番号で寄託
され、そこに記載されているように、鋳型ＤＮＡとして
用いた。ＰＣＲプライマーは、ｐＪＤ２１４Ｈｙ配列の
１５〜６２６に相補性であり、（ドゲルティーら（J. D
ougherty,et al.,) １６８ Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉ
ｏ．，４３８７−４３９５（１９８６）を参照）、特有
な末端ＮａｒＩ及びＥｃｏＲＩ、又はＨｉｎｄIII 及び
ＡｆｌIII 制限部位を含んでいた。ＮａｒＩ及びＥｃｏ
ＲＩプライマーの配列は、以下に配列番号１及び２（Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：１及び２）で記載されている。Ｈｉ
ｎｄIII 及びＡｆｌIII プライマーは、配列番号３及び
４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及び４）で記載されてい
る。ＰＣＲ生成物を、ｐＵＣ１９（ヤニッシュ、ペロン
ら（Yanisch-Perron et al.,３３ Gene，１０３−１１
９（１９８５））の多重クローニング部位に対向する末
端でクローニングし、ｐＫＢ４０４を作製した。
【００２６】類似の方式により、ＳＮＶのＬＴＲの代わ
りに他の単純型レトロウイルスＬＴＲを用いることがで
きる。かかる他の単純型レトロウイルス配列を得るた
め、他の単純型レトロウイルスの標品を入手し、ＰＣＲ
法を用いてＬＴＲ配列を増幅し、次いでｐＵＣ１９等の
適当なクローニングベクターへ該配列を挿入する。いず
れの場合においても、単純型のＬＴＲがプロモーター及
びエンハンサーを含んでいることが好ましいが、超複合
型ウイルスのａｔｔ配列が用いられることが好ましい。
【００２７】例えばマウス白血病ウイルスに関して、Ｌ
ＴＲの配列が、ワイスら（Weiss etal., 「ＲＮＡ腫瘍
ウイルス（ＲＮＡ Tumer Viruses）」、ｐ７６６−７８
５、補遺（第２版、１９８５）（コールド・スプリング
・ハーバー））によって報告されている。ＳＮＶに関し
て述べたように、この配列を増幅、分離し、これらのＬ
ＴＲをｐＵＣ１９等のベクター内へ混入させることがで
きる。
【００２８】ＢＬＶ配列を親ブラスミドであるｐＫＢ４
０４中へ挿入した。ＢＬＶの３’シス配列は、ＢＬＶの
３６の塩基対（ｂｐ）配列（ポリプリン系、ｐｐｔ、及
び結合配列左、ａｔｔＬ；ＢＬＶ配列８１７０〜８２０
６、サガタら（N.Sagata etal.,ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８
２：６７７−６８１，１９８５）を参照。）の中にあ
る。これらの配列、及び特有の末端ＳｐｈＩ並びにＨｉ
ｎｄIII 部位を含有した一対の相補性オリゴヌクレオチ
ドを合成した。該オリゴヌクレオチドをキナーゼ処理
し、アニーリングし、ｐＫＢ４０４のＳｐｈＩ及びＨｉ
ｎｄIII 部位へ挿入して、ｐＫＢ４０６を作製した。
【００２９】ＢＬＶの５’シス配列は、ＢＬＶの１１１
塩基対配列中にある（ＢＬＶ配列５１７〜６２６；サガ
タら（Sagata et al.), １９８５）。これらの配列をＰ
ＣＲ法により、特有のＥｃｏＲＩ及びＫｐｎＩ部位を有
するプライマーを用いて、ｐＢＬＶＳＶ2 ｎｅｏ（ダー
スら（D.Derse et al.), J. Virol.６４：４０１−４０
５（１９９０））から増幅した。本発明者らが用いたプ
ライマーの配列は、配列番号５及び６で示されている。
増幅生成物をｐＫＢ４０６のＥｃｏＲＩ及びＫｐｎＩ部
位へ挿入し、ｐＫＢ４１４を作製した。
【００３０】選択可能なベクターを作製するため、ｐＪ
Ｄ２１４Ｈｙのハイグロマイシン耐性遺伝子（米国特許
第４，９８０，２８９号に記載のｐＪＤ２２０ＳＶＨｙ
も参照）をＳｍａＩ−ＢａｍＨＩ断片として分離でき、
ｐＫＢ４１４中へ連結して、ｐＫＢ４１５（図５）を作
製できる。そのためｐＫＢ４１５は、逆転写、組み込
み、ベクターウイルスＲＮＡの詰め込み(packaging) に
必要な配列を含み、ハイグロマイシンを用いて選択でき
る。
【００３１】ＢＬＶのＧａｇ及びＰｏｌタンパク質を発
現するため、ベクターｐＫＢ４０８（図４）をデザイン
した。ｐＫＢ４０８を作製するため、ヌクレオチド５１
７−５５１間のＢＬＶ５’シス配列、及び特有な末端Ｅ
ｃｏＲＩ並びにＫｐｎＩ部位を含有するオリゴヌクレオ
チドを合成した。サガタら（前出）参照。該オリゴヌク
レオチドをキナーゼ処理し、アニーリングし、ｐＫＢ４
０６中へクローニングしてｐＫＢ４０７を作製した。ｐ
ＢＬＶＳＶ2 ｎｅｏからのｇａｇ−ｐｏｌ断片をＢｃｌ
Ｉ断片（配列５５２−５２５０）として分離し、ｐＫＢ
４０７のＢａｍＨＩ部位中へ挿入して、ｐＫＢ４０８
（図４）を作製した。
【００３２】エンベロープ・コウイルス(co-virus)・ベ
クター（ｐＫＢ４２１又は代用のｐＫＢ４２０）を作製
するため、ＢＬＶ（あるいは代用する場合は、アンホト
ロピック（amphotropic)ＭＬＶ）のｅｎｖ遺伝子をＰＣ
Ｒ法を使用して増幅し、クローニングした。例えばＢＬ
Ｖのｅｎｖ遺伝子は、特有のＫｐｎＩ及びＸｂａＩ部位
を有するプライマーを用いてｐＢＬＶＳＶ2 ｎｅｏ（ダ
ースら、前出) から増幅できる。プライマーの配列を配
列番号７及び８に示す。ＰＣＲ生成物はＫｐｎＩ及びＸ
ｂａＩで消化し、ｐＫＢ４１４へ連結して、ｐＫＢ４２
１（図６）を作製した。
【００３３】異なるｅｎｖが要求される場合は、アンホ
トロピックＭＬＶのｅｎｖ遺伝子をｐＪＤ１（ドフテリ
ーら（Doughtery et al.), J. Virol., ６３：３２０９
−３２１２（１９８９））からＸｂａＩ断片上にサブク
ローニング（subcloned ）でき、ｐＫＢ４１４のＸｂａ
Ｉ部位で連結して、ｐＫＢ４２０（図７）を作製した。
【００３４】ベクターｐＫＢ４０８、ｐＫＢ４２１及び
ｐＫＢ４１５は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コ
レクション、ロックビル、メリーランド、Ｕ．Ｓ．Ａ．
に、Ｄ１７イヌ細胞を宿主として寄託されている。ブタ
ペスト条約に基づき、１９９３年２月２日付、寄託番号
ＡＴＣＣ１１２５９。寄託微生物のサンプル入手は、米
国及び適用可能な外国特許法の要求に従い可能である。
これらの材料の寄託は、それらの使用に対してライセン
スが付与されたことを意味しない。
【００３５】要約すれば、本発明者らはキメラレトロウ
イルスベクターを作製した。本発明者らは、単純型レト
ロウイルスから得た殆どのＬＴＲを用いた。プロウイル
ス組み込みに要求されるＢＬＶのＬＴＲの末端領域は、
逆転写、及び詰め込みに必要な他のＬＴＲを有しないＢ
ＬＶシス配列（ＰＢＳ，Ｅ及びｐｐｔ）と同様に維持さ
れた（ａｔｔＲ及びａｔｔＬ）。しかしながら、少なく
とも一個の超複合型レトロウイルスタンパク質コード化
ＤＮＡ配列（及び本願の場合は調節遺伝子ｔａｘ及びｒ
ｅｘのコード化配列）が削除できる。
【００３６】３．ベクターからウイルスを生成するため
のプロトコール ウイルス複製の実験プロトコールは下記の通りである。
【００３７】
【化１】
【００３８】レトロウイルスベクターフラスミドｐＫＢ
４０８及びｐＫＢ４１５を、イヌ骨肉腫細胞Ｄ１７中へ
同時にトランスフェクションし、次いでハイグロマイシ
ン耐性（ＨｙｇR ）クローンを選抜し、ステップ１のク
ローンを選定した。Ｄ１７細胞は、ＳＮＶ及びＢＬＶ両
方の複製を許容するものである。ステップ１の細胞中の
各プラスミドの存在をＰＣＲ分析によって確認した。
【００３９】キメラベクターウイルスのステップ２の細
胞への変換を可能とするため、ｐＫＢ４１５及びｐＫＢ
４０８双方を含むステップ１のクローン中でウイルスエ
ンベロープタンパク質を発現させ、ベクターウイルスの
変換を検定した。アンホトロピックＭＬＶのｅｎｖ（ｐ
ＪＤ１；ドゲルティーら、前出））あるいはＳＮＶのｅ
ｎｖ（ｐＰＲ１０１；ドゲルティーら、前出）をコード
化する発現プラスミド及び選択可能プラスミドｐＳＶ2
ｎｅｏ（サウザーンら（P.Southern et al.),J. Mol. A
ppl. Gen.１：３２７−３４１（１９８２）に記載）を
ステップ１の細胞中へ同時にトランスフェクションし、
ネオマイシン類縁体Ｇ４１８に耐性のコロニーを選抜し
た。ＢＬＶのｅｎｖをＦＬＫ ＢＬＶ細胞から得た上清
培養液を用いて感染させてステップ１の細胞へ導入し
た。トランスフェクション又は感染を受けた細胞の培養
液上清を、ＨｙｇR を選抜したＤ１７標的細胞の感染に
用いた。ＨｙｇR ベクターウイルスの変換を、ＢＬＶｅ
ｎｖ、Ａ−ＭＬＶｅｎｖ、又はＳＮＶｅｎｖの存在によ
って検出した。この結果より、ｈｙｇR 遺伝子及びＢＬ
Ｖ遺伝子が前記キメラベクターによって発現されたこと
が示された。
【００４０】ＫＢ４１５及びＫＢ４０８プロウイルス双
方を含むクローンを得るため、ＨｙｇR ステップ２クロ
ーンをＰＣＲ分析によってスクリーニングした。これら
ステップ２クローンのうちの二つをｐＪＤ１及びｐＳＶ
2 ｎｅｏと同時にトランスフェクションし、Ｇ４１８R
細胞を選抜した。ステップ２のベクターウイルスを変換
するため、培養液上清を用いてＤ１７細胞を感染させ、
標的細胞からＨｙｇRを選抜した。ＨｙｇR ベクターウ
イルス（ＫＢ４１５）を含む６個のステップ３の細胞を
選抜した。従ってキメラウイルスは複製可能である。
【００４１】４．複製能を有するコウイルス（Co-Viruses） ｅｎｖコウイルスを導入してキメラベクターウイルスの
連続的交換を行う実験プロトコールを下記に模式的に述
べる。
【００４２】
【化２】
【００４３】ステップ１のクローンをコウイルスベクタ
ーｐＫＢ４２１又はｐＫＢ４２０及びｐＳＶ2 ｎｅｏと
同時にトランスフェクションして、Ｇ４１８耐性コロニ
ーを選抜した。ステップ１のプールの培養液上清を用い
てＤ１７標的細胞を感染させた。これらステップ２の細
胞から逆転写酵素検定及びＨｙｇR コロニーの選抜によ
ってベクターウイルスをスクリーニングした。逆転写酵
素活性をステップ２のプールから検出し、ＨｙｇR コロ
ニーを観察した。この結果より、コウイルスが複製能を
有するキメラレトロウイルスとして複製できることが示
された。
【００４４】ステップ２の細胞プールの培養液上清を用
いて、新しいＤ１７細胞を感染させた。これらステップ
３の細胞から、逆転写酵素検定、ＨｙｇR コロニーの選
抜及びＰＣＲ分析によってキメラプロウイルスをスクリ
ーニングした。この結果より、キメラベクターウイルス
がステップ３の細胞へ連続して変換されていることが示
された。
【００４５】上記実験より、キメラベクターウイルスが
複製能を有し、寄託細胞株より得ることができ、キメラ
コウイルスによって連続して変換できることが示され
た。
【００４６】５．他の超複合型レトロウイルス配列の使用 超複合型レトロウイルス配列にフランキングする（隣接
する、flanking）単純型レトロウイルスＬＴＲを含む構
造を作製するために、他の超複合型レトロウイルス配列
を本発明において使用できる。広範囲の複合レトロウイ
ルスのＤＮＡ配列（及びそれら配列の機能）が知られて
いる。マイヤース（G.Myers ）、「ヒトレトロウイルス
及びエイズ（セオレティカル・バイオロジー・アンド・
バイオフィジックス）（Human Retroviruses And AIDS
(Theoretical Biology and Biophysics)）」（１９９
０）（ＨＩＶ−１）及びセイキら（M.Seiki et al), ８
０Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．３６１８−３６２２
（１９８３）（ＨＴＬＶ−１）を参照。
【００４７】例えば、単純型レトロウイルスＳＮＶのＬ
ＴＲ配列を、ＨＩＶのａｔｔ，Ｐｂｓ，Ｅ，ｐｐｔ及び
コード化配列の内側へ結合することができる。複製能を
有する系を作製する十分なＨＩＶ配列が存在する一方、
少なくとも一個のＨＩＶタンパク質（例えばＨＩＶのＴ
ａｔ）（配列番号５８３９−６０４９及び８３８１−８
４７４）が削除されなければならないこと、及びＬＴＲ
（配列番号６１−６１１及び９１２１−９７３７）が上
記方法により削除され、次いでＢＬＶ配列の位置のｐＫ
Ｂ４０８中へ挿入されることが必要である。必要なら
ば、さらに他のＨＩＶ−１配列を削除できる（例えばｒ
ｅｖ，ｖｉｆ，ｖｐｒ，及び／又はｎｅｆ）。
【００４８】６．抗原供与体としてのキメラレトロウイルス キメラＢＬＶレトロウイルスベクターは、抗原Ｇａｇ，
Ｐｏｌ，及びＥｎｖをコード化する。これらの抗原は研
究目的に重要なものである。しかしながら、これら抗原
は、抗体反応を行うため生体中で使用することも可能で
ある。
【００４９】霊長類の（ＨＩＶ−１に対する）抗体反応
の効率は、チンパンジー及びＳＩＶ−オナガザルのモデ
ルシステムでテストすることができる。デスロシーアス
（R.Desrosiers）、ＡＩＤＳ Res.Hu.Retrovir.,８：４
１１−２１（１９９２）及びダニエルら（M.D.Daniel,e
t al.), Science ２５８：１９３８−４１（１９９
２）を参照。必要ならば、死菌ワクチン（ウイルスから
製造できる）が用いられる。
【００５０】別法として、プロモーター並びにエンハン
サー配列を変異させるか、又はピコルナウイルス内部リ
ボゾーム入口部位から発現した自殺遺伝子を加えること
により、生きた構造体を部分的に無力化（弱毒化）する
ことができる。ムールテンら（F.L.Moolten,et al.),
J. Natl. Canc. Inst.,８２：２９７−３０５（１９９
０）；ムレンら（C.A.Mullen,et al.), Proc. Natl. Ac
ad. Sci.ＵＳＡ，８９：３３−７（１９９２）；及びガ
タスら（I. R. Ghattas, et al.), Mol. Cell. Biol.,
１１：５８４８−５９（１９９１）を参照。
【００５１】抗体反応を引き起こす際に使用する生きた
キメラウイルスを調製するため（例えばポテンシャルワ
クチンとしての使用）、感染細胞（ＫＢ４０８及びＫＢ
４２１）の培養液上清を採取し、ろ過（孔径０．４μ
ｍ）して細胞を取り除き、３５，０００ｒｐｍで２時間
超遠心分離して濃縮した。該ウイルス製剤は静脈投与す
るのが好ましい（マータスら（Marthas et al.), J. Vi
rol.６４：３６９４（１９９０））。０．５〜５．０ｍ
ｌの範囲でのキメラウイルスの濃度は、抗体反応が哺乳
動物内に起こるまで、皮下又は筋肉内プロトコール下で
注射されることが予想される。
【００５２】ワクチンに使用する組換え型レトロウイル
ス又はレトロウイルスタンパク質の効果的投与量を決定
するため、レトロウイルスタンパク質の量を増加させな
がら製剤を作製することが一般的に行われる。次いで抗
体反応を起こし、及び／又は疾病抵抗力を付与するのに
十分な量の製剤が試験生物に投与されれば、プロトコー
ルを決定することができる。
【００５３】同様な投与量決定を、使用するいかなる他
の超複合型レトロウイルスについても行うことができ
る。
【００５４】以下は不活化ウイルスワクチンを開発する
ために好ましい方法である。キメラウイルス（ＫＢ４０
８，ＫＢ４２１等）に感染した細胞の上清培養液からウ
イルスを採取する。該上清培養液を、好ましくは１０，
０００ｒｐｍで遠沈して細胞を取り除き、好ましくは３
５，０００ｒｐｍで２時間超遠心分離して濃縮する。キ
メラウイルスを不活性化するため、ウイルスを０．８％
ホルマリン液中に再懸濁して、４℃で２４時間温置す
る。サルクら（Salk et al.), Ann. NY Acad. Sci.８
３：６０９（１９６０）；マークスら（Marx et al.),
J. Virol. ６０：４３１（１９８６）；及びモンテフィ
オリら（Montefiori et al.), J. Virol. ６４：５２２
３（１９９０）を参照。
【００５５】キメラウイルスが不活化されたことを確認
するため、ホルマリン処理したウイルスのアリコートを
水洗いしてホルマリンを除き、Ｄ１７標的細胞の感染に
使用する。キメラウイルスの回収は、逆転写酵素検定あ
るいはベクターレスキュー（vector rescue ）検定によ
りモニターできる。ミラー（Miller）、Hum.Gene Thera
py １：５（１９９０）を参照。ホルマリン処理ワクチ
ンの免疫効果を促進するため、ワクチンをスレオニルム
ラミルジペプチド等のアジュバントと混合できる（アリ
ソン、ビアース（Allison and Byars)，J. Immuno. Met
hods ９５：１５７（１９８６））。該製剤は筋肉内投
与するのが好ましい（モンテフィオリら、前出，J.Viro
l,６４：５２２３（１９９０））。
【００５６】十分なウイルス又はウイルスタンパク質が
用いられる場合、抗体反応は宿主が免疫化されるようで
あることが期待される。従って、ウイルス、その弱毒化
もしくは死滅化されたもの、又はそれらが発現するタン
パク質は、ＢＬＶ，ＨＩＶ−１及び他の超複合型レトロ
ウイルスに対するワクチンとして作用できる。この点に
関しては、ヒト、他の霊長類及び有蹄類のすべては、Ｓ
型レトロウイルスに対する抗体及び防御免疫反応を持っ
ている。
【００５７】さらにより重要なことは、これらＳ型レト
ロウイルスは、疾病に重要な超複合型レトロウイルスタ
ンパク質を欠いているため、元の超複合型レトロウイル
スによってもたらされる疾病等のレトロウイルス性疾病
が、組換え型レトロウイルスへ接触しても起こらないこ
とである。
【００５８】いずれにしても、ワクチン又は抗体生産誘
発物としての有用性にかかわらず、他の超複合型レトロ
ウイルスタンパク質の不存在下で、レトロウイルス複製
能を有するベクターによって大量に生産される超複合型
レトロウイルスＥｎｖ，Ｇａｇ及び／又はＰｏｌの供給
を受けることができる点に重要な価値がある。これは、
該ベクターが多重感染サイクル（及びそれにより起こり
得る突然変更）を経過する場合には、特に重要である。
本発明は、例えばモノクローナル抗体を生起するための
コーラー／ミルスタイン（Kohler/Milstein ）（又は他
の方法）において用いられる注目された抗原の生起に有
用である。これらはＥＬＩＳＡ試験の抗原としても使用
できる。上記ワクチンとしての有用性は、試験管内的(i
n vitro)だけではない。生体中(in vivo) に所定の抗原
を導入して抗体を得ることにも独立した価値がある。例
えば、得られた抗体を診断的に用いることができる。本
発明者等により、哺乳動物宿主の生体中で抗体が生起さ
れることが確認された。さらに本発明のレトロウイルス
又は抗体の生産方法は、輸送担体細胞への試験管中での
感染後、さらに生きた宿主中の細胞へ移植され、該細胞
が次いで感染を引き起こすような場合も含むものであ
る。
【００５９】本発明は前記の好ましい実施態様に限定さ
れるものではない。本発明の範囲は特許請求の範囲に基
づいて判断されなければならない。
【００６０】
【発明の効果】本発明の組換え型レトロウイルスＤＮＡ
を有する組換え型レトロウイルスによれば、宿主細胞中
で抗原を、さらに宿主内で抗体を生産することができ、
特に、哺乳動物（例えば霊長類）細胞中へ上記ウイルス
を導入してウイルスの複製を可能とし、ウイルスタンパ
ク質を生産させることができる。これにより、超複合型
レトロウイルスにより引き起こされる疾病に対する安全
かつ有効なワクチンを開発するための、他の発病性の複
合レトロウイルスタンパク質を生産せずに、主要スペク
トラムとして変異型の超複合型レトロウイルスのＧａ
ｇ、Ｐｏｌ、及びＥｎｖ抗原を生産する方法が提供され
る。
【００６１】
【配列表】
（１）一般的情報： （ｉ）出願人（発明者）：テミン，ハワード エム． ボリス−ローリー，キャスリーン エイ． （ｉｉ）発明の名称：組み替え型レトロウイルス及びそ
の使用 （ｉｉｉ） 配列の数：８ （ｉｖ）通信住所： （Ａ）受信人：クウアレス アンド ブラデイ （Ｂ）通り：イースト ウイスコンシン アベニュー
４１１ （Ｃ）市：ミルウオーキー （Ｄ）州：ウイスコンシン （Ｅ）国：アメリカ合衆国 （Ｆ）郵便番号：５３２０２ （ｖ）コンピューター判読形態： （Ａ）ミディウムタイプ：フロッピーディスク （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭ ＰＣ コンパーチブル （Ｃ）オペレーティングシステム：ＰＣ−ＤＯＳ／ＭＳ
−ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウェア：パテントイン リリース ＃１．
０，バージョン＃１．２５ （ｖｉ）現在の出願データ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日： （Ｃ）分類： （ｖｉｉｉ）弁護士／弁理士情報： （Ａ）氏名：シュワルツ，カール アール． （Ｂ）登録番号：２９，４３７ （Ｃ）参照／名簿番号：９６−２９６−９０７２−４ （ｉｘ）電気通信情報： （Ａ）電話：（４１４）２７７−５７１５
【００６２】 （２）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）：１： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３５ 塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：オリゴヌクレオチド （ｘｉ）配列
【００６３】
【化３】
【００６４】 （２）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）：２： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３６ 塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：オリゴヌクレオチド （ｘｉ）配列
【００６５】
【化４】
【００６６】 （２）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）：３： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３５ 塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：オリゴヌクレオチド （ｘｉ）配列
【００６７】
【化５】
【００６８】 （２）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）：４： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３６ 塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：オリゴヌクレオチド （ｘｉ）配列
【００６９】
【化６】
【００７０】 （２）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）：５： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３７ 塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：オリゴヌクレオチド （ｘｉ）配列
【００７１】
【化７】
【００７２】 （２）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）：６： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３６ 塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：オリゴヌクレオチド （ｘｉ）配列
【００７３】
【化８】
【００７４】 （２）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）：７： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３４ 塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：オリゴヌクレオチド （ｘｉ）配列
【００７５】
【化９】
【００７６】 （２）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）：８： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３４ 塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：オリゴヌクレオチド （ｘｉ）配列
【００７７】
【化１０】
【図面の簡単な説明】
【図１】従来技術の「単純型」ＳＮＶレトロウイルスの
模式図である。
【図２】従来技術の「超複合型」ＢＬＶレトロウイルス
の模式図である。
【図３】従来技術の「超複合型」ＨＩＶレトロウイルス
の模式図である。
【図４】ベクターｐＫＢ４０８の模式図である。
【図５】ベクターｐＫＢ４１５の模式図である。
【図６】ベクターｐＫＢ４２１の模式図である。
【図７】ベクターｐＫＢ４２０の模式図である。
【図８】図４〜７の配列の性質を説明する説明図であ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 15/04 8318−4Ｈ Ｃ１２Ｎ 5/10 7/00 9281−4Ｂ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 8214−4Ｂ //(Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 キヤスリーン エイ． ボリス−ローリー アメリカ合衆国 53562 ウイスコンシン ミドルトン ヘドン サークル 5215

Claims (8)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 組換え型レトロウィルスＤＮＡであっ
    て、単純型レトロウィルス長末端反復及び超複合型レト
    ロウィルスタンパク質をコード化するＤＮＡ配列を含有
    し、前記ＤＮＡ配列が超複合型ａｔｔ，ｐｂｓ、Ｅ及び
    ｐｐｔをコード化し、かつ前記超複合型レトロウイルス
    タンパク質がヒト免疫不全ウイルスタンパク質、ヒトス
    プーマーレトロウイルスタンパク質、ヒトＴリンパ趨向
    性ウイルスタンパク質及びウシ白血病ウイルスタンパク
    質からなる群から選択されることを特徴とするＤＮＡ。
  2. 【請求項２】 前記ＤＮＡが単純型ａｔｔをコード化し
    ない請求項１に記載のＤＮＡ。
  3. 【請求項３】 前記ＤＮＡ配列が複製能を有するレトロ
    ウイルスをコード化する請求項１に記載のＤＮＡ。
  4. 【請求項４】 前記ＤＮＡ配列によってコード化された
    前記超複合型レトロウイルスタンパク質が、Ｅｎｖ，Ｇ
    ａｇ及びＰｏｌタンパク質からなる群から選択される請
    求項１に記載のＤＮＡ。
  5. 【請求項５】 組換え型レトロウイルスであって、単純
    型レトロウイルスの長い末端を有するＲＮＡ配列と、超
    複合型レトロウイルスタンパク質をコード化するＲＮＡ
    配列とを含有し、前記ＲＮＡ配列が超複合型ａｔｔ，ｐ
    ｂｓ，Ｅ及びｐｐｔをコード化し、かつ前記レトロウイ
    ルスタンパク質がヒト免疫不全ウイルスタンパク質、ヒ
    トスプーマーレトロウイルスタンパク質、ヒトＴリンパ
    趨向性ウイルスタンパク質及びウシ白血病ウイルスタン
    パク質からなる群から選択されることを特徴とするレト
    ロウイルス。
  6. 【請求項６】 前記レトロウイルスが複製能を有する請
    求項５に記載のレトロウイルス。
  7. 【請求項７】 請求項６に記載のレトロウイルスを生き
    た、哺乳動物宿主中へ導入し、前記宿主中で前記レトロ
    ウイルスにレトロウイルスタンパク質を生産させること
    を含んでなる生きた、哺乳動物宿主内でのレトロウイル
    スタンパク質の生産方法。
  8. 【請求項８】 請求項６に記載のレトロウイルスを宿主
    組織へ感染させ、該レトロウイルスを複製させて少なく
    とも一種の超複合型レトロウイルスタンパク質を生産さ
    せ、抗体に超複合型レトロウイルスタンパク質を生成さ
    せることを含んでなる宿主内での抗体生産方法。
JP6043163A 1993-02-17 1994-02-17 混合型ｌｔｒ含有超複合型レトロウイルス及びその使用方法 Pending JPH06261764A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US2162293A 1993-02-17 1993-02-17
US08/021,622 1993-02-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH06261764A true JPH06261764A (ja) 1994-09-20

Family

ID=21805245

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP6043163A Pending JPH06261764A (ja) 1993-02-17 1994-02-17 混合型ｌｔｒ含有超複合型レトロウイルス及びその使用方法

Country Status (4)

Country Link
US (1) US5554524A (ja)
EP (1) EP0611822B1 (ja)
JP (1) JPH06261764A (ja)
DE (1) DE69430646T2 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009001480A1 (ja) 2007-06-28 2008-12-31 Sumitomo Metal Industries, Ltd. 小断面ビレットの連続鋳造方法

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5770428A (en) * 1993-02-17 1998-06-23 Wisconsin Alumni Research Foundation Chimeric retrovial expression vectors and particles containing a simple retroviral long terminal repeat, BLV or HIV coding regions and cis-acting regulatory sequences, and an RNA translational enhancer with internal ribsome entry site
FR2707091B1 (fr) 1993-06-30 1997-04-04 Cohen Haguenauer Odile Vecteur rétroviral pour le transfert et l'expression de gènes dans des cellules eucaryotes.
FR2727429B1 (fr) * 1994-11-30 1997-11-28 Haguenauer Odile Cohen Lignees d'encapsidation et vecteurs d'expression pour la transcomplementation de vecteurs retroviraux defectifs
US6013516A (en) * 1995-10-06 2000-01-11 The Salk Institute For Biological Studies Vector and method of use for nucleic acid delivery to non-dividing cells
FR2747046B1 (fr) * 1996-04-05 1998-06-19 Univ Paris Curie Nouveaux vaccins issus de plasmovirus
GB2325003B (en) 1996-10-17 2000-05-10 Oxford Biomedica Ltd Rectroviral vectors
US7198784B2 (en) * 1996-10-17 2007-04-03 Oxford Biomedica (Uk) Limited Retroviral vectors
US6207455B1 (en) * 1997-05-01 2001-03-27 Lung-Ji Chang Lentiviral vectors
ATE528405T1 (de) 1997-12-22 2011-10-15 Oxford Biomedica Ltd Auf dem virus der infektiösen pferdeanämie (eiav) basierende vektoren
US6218181B1 (en) 1998-03-18 2001-04-17 The Salk Institute For Biological Studies Retroviral packaging cell line
FR2777909B1 (fr) * 1998-04-24 2002-08-02 Pasteur Institut Utilisation de sequences d'adn de structure triplex pour le tranfert de sequences de nucleotides dans des cellules, vecteurs recombinants contenant ces sequences triplex
US6448390B1 (en) 1998-05-20 2002-09-10 The University Of Tennessee Research Corporation Stable envelope proteins for retroviral, viral and liposome vectors and use in gene drug therapy
US6492166B1 (en) 1998-07-29 2002-12-10 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Use of constitutive transport elements for host range control
GB9825524D0 (en) * 1998-11-20 1999-01-13 Oxford Biomedica Ltd Vector
EP2169073B1 (en) 1999-10-11 2013-11-13 Institut Pasteur Vector for the preparation of immunotherapeutical compositions
KR20000071901A (ko) * 1999-11-15 2000-12-05 김선영 유전자치료용 바이러스에 대한 항체 진단용 키트
US6864085B2 (en) * 1999-12-14 2005-03-08 Novartis Ag Bovine immunodeficiency virus (BIV) based vectors
EP1319713B1 (en) * 2000-09-20 2010-01-27 Takara Bio Inc. Complex
US20040121442A1 (en) * 2002-05-05 2004-06-24 Ilan Chet Fungal chitinase, polynucleotide sequences encoding same, promoters of same, and uses thereof
CN1980955A (zh) * 2004-04-29 2007-06-13 北卡罗来纳-查佩尔山大学 增强细胞粘连特性的方法和组合物

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4650764A (en) * 1983-04-12 1987-03-17 Wisconsin Alumni Research Foundation Helper cell
US4980289A (en) * 1987-04-27 1990-12-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Promoter deficient retroviral vector
US5124263A (en) * 1989-01-12 1992-06-23 Wisconsin Alumni Research Foundation Recombination resistant retroviral helper cell and products produced thereby
EP0487587A1 (en) * 1989-08-18 1992-06-03 Chiron Corporation Recombinant retroviruses delivering vector constructs to target cells
GB8923123D0 (en) * 1989-10-13 1989-11-29 Connaught Lab A vaccine for human immunodeficiency virus
WO1991019803A1 (en) * 1990-06-19 1991-12-26 Applied Biotechnology, Incorporated Self assembled, defective, nonself-propagating viral particles

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009001480A1 (ja) 2007-06-28 2008-12-31 Sumitomo Metal Industries, Ltd. 小断面ビレットの連続鋳造方法

Also Published As

Publication number Publication date
US5554524A (en) 1996-09-10
EP0611822B1 (en) 2002-05-22
DE69430646D1 (de) 2002-06-27
EP0611822A3 (en) 1996-01-10
EP0611822A2 (en) 1994-08-24
DE69430646T2 (de) 2003-01-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5770428A (en) Chimeric retrovial expression vectors and particles containing a simple retroviral long terminal repeat, BLV or HIV coding regions and cis-acting regulatory sequences, and an RNA translational enhancer with internal ribsome entry site
US5554524A (en) More complex type retroviruses having mixed type LTR, and uses thereof
US5571712A (en) Non-infectious, replication defective, immunogenic HIV retrovirus-like particles produced from a recombinant HIV genome devoid of long terminal repeats
Jin et al. Mosaic genome structure of simian immunodeficiency virus from west African green monkeys.
Cho et al. Polyvalent envelope glycoprotein vaccine elicits a broader neutralizing antibody response but is unable to provide sterilizing protection against heterologous simian/human immunodeficiency virus infection in pigtailed macaques
CA2331599C (en) Replication defective hiv vaccine
US6485965B1 (en) Replicating or semi-replicating viral constructs, preparation and uses for gene delivery
Sawai et al. Pathogenic conversion of live attenuated simian immunodeficiency virus vaccines is associated with expression of truncated Nef
EP1690868A1 (en) Modification of virus tropism and host range by viral genome shuffling
EP0942988A1 (en) Hiv envelope polypeptides and vaccine
WO1996021036A2 (en) Nucleic acid condensing agents with reduced immunogenicity
KR19990087126A (ko) 합성 사람 면역결핍 바이러스 유전자
US7122180B2 (en) DNA vectors containing mutated HIV proviruses
US5866137A (en) Self-assembled, non-infectious, non-replicating; immunogenic retrovirus-like particles comprising modified HIV genomes devoid of long terminal repeats and chimeric envelope glycoproteins
JP4418101B2 (ja) 遺伝子ワクチンのための弱毒化ｖｉｆＤＮＡ免疫化カセット
US6585979B1 (en) HIV envelope polypeptides and immunogenic composition
JPS63501265A (ja) ヒトｔ‐細胞リンパ球ウイルスタイプ３の非細胞変性クローン
Gorelick et al. Protection of Macaca nemestrina from disease following pathogenic simian immunodeficiency virus (SIV) challenge: utilization of SIV nucleocapsid mutant DNA vaccines with and without an SIV protein boost
CN103946385B (zh) 作为对抗hiv-1的疫苗的嵌合非整合型慢病毒基因组
Mooij et al. Evidence for viral virulence as a predominant factor limiting human immunodeficiency virus vaccine efficacy
US6287572B1 (en) Anti-HIV peptides and proteins
Tung et al. Replication-defective HIV as a vaccine candidate
Vogt et al. Heterologous HIV-2 challenge of rhesus monkeys immunized with recombinant vaccinia viruses and purified recombinant HIV-2 proteins
EP1059356A1 (en) Replicating or semi-replicating retroviral constructs, preparation and uses for gene delivery
Akahata et al. DNA vaccination of macaques by a full-genome simian/human immunodeficiency virus type 1 plasmid chimera that produces non-infectious virus particles