JPH06271473A - バターミルクを含有する抗菌性組成物およびそれを使用することを特徴とするサルモネラ菌定着阻止方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 実用的な抗サルモネラ剤を提供すること。 【構成】 バターミルクを鶏の幼雛等に与える飼料の添
加剤として使用する。 【効果】 バターミルクは優れたサルモネラ菌定着阻止
効果を示す。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、バターミルクを含有す
る抗菌剤組成物、バターミルクからなる飼料用添加剤、
バターミルクを含有する飼料およびバターミルクを使用
することを特徴とする細菌の定着阻止方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、サルモネラ菌によるヒト食中毒の
発生が問題となっており、その主要な感染源として、鶏
肉、鶏卵のサルモネラ菌汚染が指摘されている。またサ
ルモネラ菌は初生雛に対して高い感染性を示し、それに
よる損耗率も高いことから、養鶏産業に大きな損失を与
えている。

【０００３】サルモネラ菌はヒトを初めとして種々の動
物から分離され、その病原性は様々で鶏においては病型
により大きく３群に分けられている（中村政幸、畜産の
研究、第４４巻、第２号、２３３〜２３９頁（１９９０
年）「鶏肉、卵のサルモネラ汚染とその対策」）。

【０００４】第１は鶏パラチフスで、本症は後述のひな
白痢、鶏チフス以外のサルモネラ菌によって起こる疾病
の総称である。主として幼雛にみられるが、病気の経過
や損耗の程度は敗血症死に至る場合から臨床症状の比較
的軽い場合まで原因となったサルモネラの病原性によっ
て異なる。

【０００５】第２はひな白痢で、本症は、主として孵化
後まもない幼雛に発生し、しばしば白色下痢を伴って急
性敗血症死をする疾病であり、高い死亡率によって世界
の養鶏産業に甚大な被害を与えてきた。

【０００６】第３は主として成鶏に発生する鶏チフスで
わが国では発生がない。

【０００７】これらのうちヒトのサルモネラ食中毒の原
因となるサルモネラ菌はパラチフスの原因菌としてのサ
ルモネラ菌である。

【０００８】鶏のサルモネラ症には抗生物質の投与が有
効であることは知られているが、薬剤耐性菌株の出現や
体内への残留など、多くの問題が残されている。一方、
抗生物質によらないサルモネラ菌の定着阻止効果が、１
９７３年にＮｕｒｍｉとＲａｎａｌａにより報告された
（Ｎｕｒｕｍｉ Ｅ．，ａｎｄ Ｎ．Ｒａｎａｌａ，Ｎ
ａｔｕｒｅ，ｌｏｎｄ．２４１：２１０−２１１，１９
７３）。これは成鶏の盲腸内容物を幼雛に接種すること
によりサルモネラ菌の定着が阻害されるというものであ
り、盲腸内容物の接種により正常腸内細菌叢の確立が速
められたためであると考えられている。このような考え
は、競合的排除として知られ、サルモネラ菌の感染防御
に有効であることが確認されている（Ｓｏｅｒｊａｄｉ
ｅｔａｌ， Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．２５：７０６−７
１２，１９８１、およびＩｍｐｅｙ ｅｔ ａｌ，
Ｊ．Ｈｙｇ．，Ｃａｍｂ．８９，４７９−４９０，１９
８２）。しかし、上記の盲腸内容物は嫌気的に扱うこと
や、病原微生物の混在などの危険性もあり、実用的には
有効なものとなっていない。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】上述のように、鶏肉、
鶏卵等のサルモネラ菌汚染の対策方法として、抗生物質
の投与や成鶏の盲腸内容物の幼雛への接種等が提案され
てはいるものの、それぞれの方法に伴う問題点の解決が
未だなされておらず、実用化可能な安全かつ有効なサル
モネラ菌汚染防止方法は確立されていなかった。また、
最近になって、マンノース、乳糖など一部の糖によるサ
ルモネラ菌定着阻止効果が確認されたが、実用化には至
っていない（Ｏｙｏｆｏ ｅｔ ａｌ， Ａｖｉａｎ
Ｄｉｓ．３３：５３１−５３４，１９８９）。このた
め、実用的な抗サルモネラ剤開発への期待が寄せられて
いる。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明者は、このような
状況に鑑みて、実用的な抗サルモネラ剤を開発すべく鋭
意研究を行った結果、バターミルクが優れたサルモネラ
菌定着阻止効果を示すことを見いだし、この知見に基づ
いて本発明を完成した。

【００１１】すなわち、本発明は、バターミルクを有効
成分とする抗菌剤組成物、バターミルクを含有すること
を特徴とする飼料、バターミルクからなる飼料用添加
剤、およびバターミルクを使用することを特徴とする細
菌の定着阻止方法に関する。特に対象とする菌は種々の
サルモネラ菌である。

【００１２】上記知見は、フラクトオリゴ糖、乳糖およ
びバターミルクを用いて行ったサルモネラ菌定着阻止効
果の検索、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるフラクトオリゴ糖
およびバターミルクのサルモネラ菌増殖抑制効果の検索
等により見いだしたものである。

【００１３】本発明に用いられるバターミルクは牛乳か
らバターを製造する際得られる副産物である。即ち、バ
ターを製造するには、まず牛乳を連続遠心分離機にか
け、脱脂乳とクリームに分離する。この段階で乳脂肪は
約１０倍濃縮され、分離されるクリームの容量は牛乳の
約１／８〜１／９になる。この工程で生ずる副産物、脱
脂乳は主としてデザート類及びヨーグルトの原料として
利用されている。次いでクリームは激しく揺する、所謂
チャーニング工程によって中性脂肪を主成分とするバタ
ーと本発明に用いられるバターミルクに分離される。

【００１４】また、本発明で用いられるバターミルクは
上記の他に、牛乳から分離したクリームに水を加え、再
び遠心分離して脂肪球以外の牛乳成分を可能な限り除去
した所謂洗浄クリームからバターオイルを製造する際、
副生される牛乳脂肪球皮膜を主成分とするバターミルク
も用いることができる。

【００１５】これらのバターミルクは均一だが乳濁した
粘稠な水溶液となっており、乳糖、カゼインなどの本来
的な牛乳成分の他、乳脂肪を水中に分散させる働きを有
する脂肪球皮膜が牛乳と比べ１０倍に濃縮されている。

【００１６】バターミルクは液状のままでも抗菌剤とし
て使用できるが、液中に含まれる牛乳成分が腐敗しやす
いので、保存を要する場合にはこれを粉末化し、バター
ミルクパウダーとすることが望ましい。

【００１７】粉末化は噴霧乾燥によって行うことができ
る。噴霧乾燥で粉末化したバターミルクパウダーは粉乳
用のクリーム色を帯びた粉末で、通常、乳糖を４５〜５
０％含んでいる。

【００１８】

【実験例】以下に本発明の基礎となった実験例を示す。
フラクトオリゴ糖、バターミルクによるサルモネラ菌定
着阻止効果についての実験は２度行った。実験例１は供
試物質を経口投与により、実験例２は飲水投与により、
サルモネラ菌定着阻止効果を調べたものである。また、
定着阻止効果がサルモネラ菌への直接的な増殖抑制効果
であるのか否かを見るため、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける
サルモネラ菌増殖抑制効果についても調べた。

【００１９】［実験例１］材料と方法 （供試動物）白色レグホンの種卵を孵卵機で孵化して得
た初生雛を用いた。抗菌剤無添加の幼雛用飼料を用いて
通常飼育した。水および飼料は自由に与えた。

【００２０】（供試菌株）ヒト食中毒患者より分離され
たナリジクス酸耐性Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ
ｍｕｒｉｕｍ ＥＦ８５−９株を用いた。菌接種にはＴ
ｒｙｐｔｏ−ｓｏｙａ Ｂｒｏｔｈ（日水）で２４時間
培養したものを、生理食塩水で希釈し、サルモネラ菌数
を０．５ｍｌ当たり７．０×１０⁶ＣＦＵとしたものを
用いた。

【００２１】（試験区および実験スケジュール）表１に
示す通りの試験区に分け、表１に記載した実験スケジュ
ールに従って実験を行った。

【００２２】

【表１】 フラクトオリゴ糖は０．１ｇ，０．０１ｇを、乳糖、バ
ターミルクパウダーは０．１ｇをそれぞれシロップにし
て、マウス用ゾンデを用い０日齢から３日齢まで毎日経
口投与した。菌接種は３日齢に行い、１羽当たりサルモ
ネラ菌７．０×１０⁶を経口接種した。

【００２３】（サルモネラ菌数測定）サルモネラ菌の菌
数測定を図１に示した方法で行った。雛は菌接種１２時
間後と、１０日、２０日齢時に各区６〜８羽を屠殺し、
盲腸を採取した。盲腸内容物はＳｅｌｅｎｉｔｅ ｂｒ
ｏｔｈで１０倍希釈し、次いで生理食塩水で１０⁵倍ま
で段階希釈した。

【００２４】その後、各段階希釈液の０．１ｍｌをナリ
ジクス酸含有（２０μｇ／ｍｌ）ＤＨＬ寒天平板（日
水）に塗抹し、２４時間培養した。培養後、中心黒色
（硫化水素産生）、外円透明（乳糖非発酵）コロニーを
サルモネラ菌としその数を計数した。サルモネラ菌が検
出されなかった検体については、同時に培養したＳｅｌ
ｅｎｉｔｅ ｂｒｏｔｈより上記のＤＨＬ寒天平板に画
線し２４時間培養した。サルモネラ菌が検出された場合
その菌数を１０²とし、検出されなかった場合その菌数
を０とした。

【００２５】（体重測定）０、１０、２０日齢に体重を
測定し、供試物質が成長に影響を及ぼすかをみた。

【００２６】（結果）実験例１における雛の体重の変化
を図２に示す。図２から、試験区による体重の差は認め
られなかった。

【００２７】実験例１における盲腸内サルモネラ菌数の
変化を表２に示す。

【００２８】

【表２】 表２の数値は盲腸内容物１ｇあたりのサルモネラ菌数を
対数で示したものである。また、サルモネラ菌数の推移
を図３に示す。

【００２９】表２および図３によれば次のことが明らか
である。２０日齢ではすべての試験区において菌数は低
下していた。１０日齢においてはフラクトオリゴ糖投与
区で６．０１（０．１ｇ投与区）、５．２０（０．０１
ｇ投与区）、乳糖投与区で４．３３となり、接種対照区
の５．３８と同様にサルモネラ菌の増殖が見られた。し
かし、バターミルクパウダー投与区では２．３２であ
り、菌の増殖が起こらず、有意な定着阻止効果が認めら
れた（Ｐ＜０．０５）。

【００３０】［実験例２］材料と方法 （供試動物）一般の種鶏所から入手した０日齢の雛を用
いた。飼育方法は実験例１と同様に行った。

【００３１】（供試菌株）供試したサルモネラ菌は実験
例１と同様であった。接種菌数は５．５×１０⁶であっ
た。

【００３２】（試験区および実験スケジュール）表３に
示す通りの試験区に分け、表３に記載した実験スケジュ
ールに従って実験を行った。

【００３３】

【表３】 フラクトオリゴ糖は０日齢から３日齢までは０．１ｇを
シロップにして毎日経口投与した。その後は、オリゴー
ＳＩ粉末（フラクトオリゴ糖シロップ６７％，無水ケイ
サン３３％）を飼料に０．１％添加した。バターミルク
パウダーは飲水中に０．２５％，２．５％となるように
添加して０日齢から３日齢まで与えた。盲腸内容物は成
鶏の盲腸内容物１０倍希釈液を、０日齢に１羽当たり
０．５ｍｌを経口投与した。

【００３４】（サルモネラ菌数測定）雛は菌接種１２時
間後と、５日、７日、１０日齢時に各区４羽ずつ盲腸を
採取し、サルモネラ菌数を測定した。測定方法は実験例
１と同様にして行った。

【００３５】（結果）実験例２における盲腸内サルモネ
ラ菌数を表４に示す。

【００３６】

【表４】 また、サルモネラ菌数の推移を図４に示す。表４および
図４から次のことが明らかである。実験例１の場合と同
様に、フラクトオリゴ糖投与区では菌の増殖が見られた
が、バターミルクパウダー（０．２５％）投与区では菌
の増殖が起こらず、飲水中に添加しても有意な定着阻止
効果が認められた（Ｐ＜０．０１）。さらに、１０日齢
における菌数の比較を図５に示す。図５によれば、バタ
ーミルクパウダーは０．２５％、２．５％どちらの添加
濃度においてもサルモネラ菌数は１．００となり、盲腸
内容物投与区の０．５とほぼ同等のサルモネラ菌定着阻
止効果を示すことが分かる。他方、フラクトオリゴ糖投
与による有意なサルモネラ菌定着阻止効果は認められな
かった。

【００３７】［実験例３］材料と方法 実験にはＧＡＭ ｂｒｏｔｈにバターミルクパウダー、
フラクトオリゴ糖をそれぞれ２％，０．５％添加した４
種の培地を用いた。バターミルクパウダーは高圧蒸気滅
菌の前に、フラクトオリゴ糖は濾過滅菌液を高圧蒸気滅
菌後に添加した。これらにサルモネラ菌８．３×１０³
ＣＦＵを接種し３７℃で好気培養した。培養後、６、１
２、２４時間目に菌液をＤＨＬ寒天平板に塗抹し、サル
モネラ菌数を測定した。

【００３８】結果 実験例３におけるサルモネラ菌数の推移を図６に示す。
これによれば、バターミルクパウダー投与区、フラクト
オリゴ糖投与区いずれも対照区とほぼ同じ菌数の推移を
示した。すなわち、菌数は培養後１２時間で８．６２か
ら８．９１の範囲まで増殖し、その後プラトーになっ
た。バターミルクパウダー、フラクトオリゴ糖によるサ
ルモネラ菌増殖抑制効果は認められなかった。

【００３９】［実験の考察］上記実験例の結果から、フ
ラクトオリゴ糖によるサルモネラ菌定着阻止効果は認め
られず、さらに乳糖によるサルモネラ菌定着阻止効果も
認められなかった。しかし、バターミルクパウダーによ
るサルモネラ菌定着阻止効果は大きく現れた。菌接種７
日後において接種対照区との菌数を比較すると、実験例
１の経口投与では−３．０６、実験例２の飲水投与では
−４．２９もの低下が認められた。

【００４０】また実験例３で、この効果がサルモネラ菌
へ直接的に働くものか否かを確かめるために、サルモネ
ラ菌増殖抑制効果を調べた。実験例３の結果によればバ
ターミルクパウダーによるサルモネラ菌増殖抑制効果は
認められず、このことからバターミルクパウダーは腸内
細菌叢の確立に影響を及ぼした可能性が高いと考えられ
る。

【００４１】腸内細菌叢の早期確立は、競合的排除とし
てサルモネラ菌感染防御に有効であることはよく知られ
ている。また乳糖はｐＨを低下させ、腸内細菌叢の増殖
を促進させるとされている。

【００４２】バターミルクパウダーには乳糖が含まれて
いるため、この効果は乳糖によるものであると考えられ
ないこともない。しかし、今回の実験によれば、乳糖の
単独投与では効果が見られず、またＳａｌｍｏｎｅｌｌ
ａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓに対しては乳糖のみの投与
では効果を示さないという報告（Ｃｏｒｒｉｅｒ ｅｔ
ａｌ， Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．３５：３３７−３４
３，１９９１）もあるため、乳糖の効果がバターミルク
パウダー中の他の成分との相乗作用により高められたと
考えられる。

【００４３】

【発明の効果】以上説明したように、副産物であるバタ
ーミルクは高いサルモネラ菌定着阻止効果を示すことか
ら、バターミルクは鶏の幼雛等に対するサルモネラ菌定
着阻止を目的とする実用的な飼料添加剤として利用する
ことができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】各実験例で用いたサルモネラ菌測定方法を示す
フローチャートである。

【図２】実験例１における各試験区の雛の体重の変化を
表すグラフである。

【図３】実験例１における各試験区の雛の盲腸内サルモ
ネラ菌数の推移を表すグラフである。

【図４】実験例２における各試験区の雛の盲腸内サルモ
ネラ菌数の推移を表すグラフである。

【図５】実験例２における各試験区の雛の１０日齢にお
ける盲腸内サルモネラ菌数を表すグラフである。

【図６】実験例３における各試験区のｉｎ ｖｉｔｒｏ
におけるサルモネラ菌数増殖の推移を表すグラフであ
る。

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 バターミルクを有効成分とする抗菌剤組
   成物。
2. 【請求項２】 対象となる菌がサルモネラ菌である請求
   項１記載の抗菌剤組成物。
3. 【請求項３】 バターミルクを含有することを特徴とす
   る飼料。
4. 【請求項４】 飼料が鶏用である請求項３記載の飼料。
5. 【請求項５】 バターミルクからなる飼料用添加剤。
6. 【請求項６】 飼料が鶏用飼料である請求項５記載の飼
   料用添加剤。
7. 【請求項７】 バターミルクを使用することを特徴とす
   る細菌の定着阻止方法。
8. 【請求項８】 細菌がサルモネラ菌である請求項７記載
   の方法。
9. 【請求項９】 バターミルクを有効成分とするサルモネ
   ラ菌感染予防剤。