JPH06289024A - 診断薬の反応終了の確認方法及びそれに用いるクロマトグラフイー用シート - Google Patents
診断薬の反応終了の確認方法及びそれに用いるクロマトグラフイー用シートInfo
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- JPH06289024A JPH06289024A JP10020693A JP10020693A JPH06289024A JP H06289024 A JPH06289024 A JP H06289024A JP 10020693 A JP10020693 A JP 10020693A JP 10020693 A JP10020693 A JP 10020693A JP H06289024 A JPH06289024 A JP H06289024A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 診断薬の反応が終了したことを容易かつ確実
に確認する方法、およびその方法を利用した診断具を提
供する。 【構成】 抗原抗体反応にラテツクスを標識抗体とした
抗原の検出法であって、該反応層上に水によって発色す
る発色剤が存させ診断薬の反応終了を確認する方法。
に確認する方法、およびその方法を利用した診断具を提
供する。 【構成】 抗原抗体反応にラテツクスを標識抗体とした
抗原の検出法であって、該反応層上に水によって発色す
る発色剤が存させ診断薬の反応終了を確認する方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、標識免疫測定法におい
て、診断薬の反応終了の確認方法及びそれに用いるクロ
マトグラフイー用シートに関する。
て、診断薬の反応終了の確認方法及びそれに用いるクロ
マトグラフイー用シートに関する。
【０００２】
【従来の技術】各種疾病の診断等に特異的蛋白質の検出
が従来から行われているが、特異的蛋白質の検出方法と
しては免疫学的抗原抗体反応を応用した標識免疫測定法
が汎用されている。
が従来から行われているが、特異的蛋白質の検出方法と
しては免疫学的抗原抗体反応を応用した標識免疫測定法
が汎用されている。
【０００３】この場合、標識として酵素やコロイド状金
属粒子が利用されている。しかしながら、酵素やコロイ
ド状金属粒子を利用した試験具は簡便であるが、陰性の
場合フイルム上の変化が起こらないため、反応が終了し
たことの確認が難しく、また、一般的な方法として判定
面と別な位置に予め抗原を付着させておく方法がある
が、この方法では抗原によっては劣化により反応が起こ
らなくなることがあり問題であった。
属粒子が利用されている。しかしながら、酵素やコロイ
ド状金属粒子を利用した試験具は簡便であるが、陰性の
場合フイルム上の変化が起こらないため、反応が終了し
たことの確認が難しく、また、一般的な方法として判定
面と別な位置に予め抗原を付着させておく方法がある
が、この方法では抗原によっては劣化により反応が起こ
らなくなることがあり問題であった。
【０００４】またコロイド状金属粒子を利用したクロマ
トグラフイー用試験具の場合は、反応の終了（展開の終
了）が判定しにくいため、このことを確認するために例
えば判定面より上部すなわち展開溶液が上昇してゆく上
端部分に抗原を付着させているが、抗原によっては劣化
により反応しなくなっているものもあり、従って展開の
終了が確認できないことがあり問題であった。
トグラフイー用試験具の場合は、反応の終了（展開の終
了）が判定しにくいため、このことを確認するために例
えば判定面より上部すなわち展開溶液が上昇してゆく上
端部分に抗原を付着させているが、抗原によっては劣化
により反応しなくなっているものもあり、従って展開の
終了が確認できないことがあり問題であった。
【０００５】如上の事情に鑑みて、診断薬の反応が終了
したことを容易かつ確実に確認する方法として、特開平
４−３５３７６４で開示されているものがある。これは
酵素やコロイド状金属粒子を利用して抗原を検出する際
に、水に濡れたときに発色する発色剤を反応層上で濡ら
して発色させることにより、反応の終了を確認するもの
である。
したことを容易かつ確実に確認する方法として、特開平
４−３５３７６４で開示されているものがある。これは
酵素やコロイド状金属粒子を利用して抗原を検出する際
に、水に濡れたときに発色する発色剤を反応層上で濡ら
して発色させることにより、反応の終了を確認するもの
である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】特開平４−３５３７６
４で開示されている方法といえども、金属コロイド付着
抗体が酸に対して不安定であるとかの理由で、抗体の有
無の判定が難しい問題があった。本発明はこの問題を解
決するものである。
４で開示されている方法といえども、金属コロイド付着
抗体が酸に対して不安定であるとかの理由で、抗体の有
無の判定が難しい問題があった。本発明はこの問題を解
決するものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、抗原抗体反応
にラテツクスを標識抗体とした抗原の検出法であって、
該反応層上に水によって発色する発色剤が存することを
特徴とする診断薬の反応終了の確認方法を要旨とする。
にラテツクスを標識抗体とした抗原の検出法であって、
該反応層上に水によって発色する発色剤が存することを
特徴とする診断薬の反応終了の確認方法を要旨とする。
【０００８】また、本発明は、抗原抗体反応による抗原
の検出法において、展開層の判定面の上部に水によって
発色する発色剤を有し、中間部にラテツクスを標識抗体
として固定化したことを特徴とするクロマトグラフイー
用シートを要旨とする。
の検出法において、展開層の判定面の上部に水によって
発色する発色剤を有し、中間部にラテツクスを標識抗体
として固定化したことを特徴とするクロマトグラフイー
用シートを要旨とする。
【０００９】本発明においてラテツクスは不純物の少な
い有機合成高分子であることが好ましい。例えばポリピ
ロール、ポリフエニレン、ポリアニリン、ポリチオフエ
ン、ポリナフタレン、ポリチオフエノール、ポリアセチ
レン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリビニルトル
エン、ポリアクリルアミド、ポリＮ−ビニルピロリドン
を挙げることができる。
い有機合成高分子であることが好ましい。例えばポリピ
ロール、ポリフエニレン、ポリアニリン、ポリチオフエ
ン、ポリナフタレン、ポリチオフエノール、ポリアセチ
レン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリビニルトル
エン、ポリアクリルアミド、ポリＮ−ビニルピロリドン
を挙げることができる。
【００１０】本発明において抗原抗体反応はシート上で
なされる。シートの例としてはフイルター形式で用いる
ニトロセルロースのフイルムやクロマトグラフイーの濾
紙などである。このようなシートに、反応層を提供すべ
く、抗原抗体反応を行う抗体が固定化され、本発明では
更に発色剤を塗布又は含浸させる。シート上の抗体と発
色剤の配置は、これらが混じり合って悪いものではない
が、これらが各々区画されている方が好ましい。
なされる。シートの例としてはフイルター形式で用いる
ニトロセルロースのフイルムやクロマトグラフイーの濾
紙などである。このようなシートに、反応層を提供すべ
く、抗原抗体反応を行う抗体が固定化され、本発明では
更に発色剤を塗布又は含浸させる。シート上の抗体と発
色剤の配置は、これらが混じり合って悪いものではない
が、これらが各々区画されている方が好ましい。
【００１１】本発明において使用される発色剤として
は、尿や血清に存する水で濡れた時に発色又は変色する
ものを用いる。クロマトグラフイー用シートに発色剤を
塗布又は含浸する場合、その位置が抗体の塗布位置より
上部なので、抗体と反応する発色剤でも構わないが、一
般に試験具の抗体と反応しないものを選択する。一般
に、診断で用いられる被検試料液が血液や尿などであ
り、通常、血液のｐＨが７．２〜７．４、尿のｐＨが
４．６〜８．０であることから、ｐＨ４．６〜８．０で
必ず発色する発色剤が好適である。
は、尿や血清に存する水で濡れた時に発色又は変色する
ものを用いる。クロマトグラフイー用シートに発色剤を
塗布又は含浸する場合、その位置が抗体の塗布位置より
上部なので、抗体と反応する発色剤でも構わないが、一
般に試験具の抗体と反応しないものを選択する。一般
に、診断で用いられる被検試料液が血液や尿などであ
り、通常、血液のｐＨが７．２〜７．４、尿のｐＨが
４．６〜８．０であることから、ｐＨ４．６〜８．０で
必ず発色する発色剤が好適である。
【００１２】このような発色剤としては、たとえばブロ
モクレゾールグリーン（ｐＨ３．８以下の酸性では黄
色、ｐＨが５．４を越えると鮮やかな青色になる）や
２、５ジニトロフエノール（ｐＨ５．８を越えると黄色
になる）、ブロモフエノールブルー（ｐＨ３．０以下で
淡黄色、ｐＨ４．６を越えると赤紫色ないし青色にな
り、ｐＨが大なるほど変色が速い）などが使用される。
モクレゾールグリーン（ｐＨ３．８以下の酸性では黄
色、ｐＨが５．４を越えると鮮やかな青色になる）や
２、５ジニトロフエノール（ｐＨ５．８を越えると黄色
になる）、ブロモフエノールブルー（ｐＨ３．０以下で
淡黄色、ｐＨ４．６を越えると赤紫色ないし青色にな
り、ｐＨが大なるほど変色が速い）などが使用される。
【００１３】本発明においてクロマトグラフイー用シー
トというのは、濾紙クロマトグラフイーや薄層クロマト
グラフイーに用いるシートのことであり、シートは濾紙
でもよく、ガラス板上に付着させる薄膜状のものでもよ
い。
トというのは、濾紙クロマトグラフイーや薄層クロマト
グラフイーに用いるシートのことであり、シートは濾紙
でもよく、ガラス板上に付着させる薄膜状のものでもよ
い。
【００１４】
【作用】被検試料液を反応層に滴下したとき、被検試料
液中に抗原がある場合には、抗原はラテツクス付着抗体
および反応層上の抗体と反応して、ラテツクス付着抗体
−抗原−抗体複合体が生成され発色するのに対して、被
検試料液中に抗原がない場合には、前記の複合体は生成
されないので発色しない。一方同時に、被検試料液中の
水が発色剤を発色させるので、陰性・陽性にかかわらず
確実にしかも容易に反応の終了が確認できる。
液中に抗原がある場合には、抗原はラテツクス付着抗体
および反応層上の抗体と反応して、ラテツクス付着抗体
−抗原−抗体複合体が生成され発色するのに対して、被
検試料液中に抗原がない場合には、前記の複合体は生成
されないので発色しない。一方同時に、被検試料液中の
水が発色剤を発色させるので、陰性・陽性にかかわらず
確実にしかも容易に反応の終了が確認できる。
【００１５】また、被検試料液にクロマトグラフイーの
展開層の原点を浸漬させると、被検試料液中に抗原があ
る場合には、被検試料液中の抗原と展開層上のラテツク
ス付着抗体が展開層上に固定された抗体の方向に移動
し、これらが反応してラテツクス付着抗体−抗原−抗体
複合体が生成され発色するのに対して、被検試料液中に
抗原がない場合には、前記の複合体は生成されないので
発色しない。一方被検試料液中の水は展開層の上部まで
移動し、あらかじめ塗布されている発色剤を濡らしてこ
れを発色させるので、陰性・陽性にかかわらず確実にし
かも容易に反応の終了が確認できる。
展開層の原点を浸漬させると、被検試料液中に抗原があ
る場合には、被検試料液中の抗原と展開層上のラテツク
ス付着抗体が展開層上に固定された抗体の方向に移動
し、これらが反応してラテツクス付着抗体−抗原−抗体
複合体が生成され発色するのに対して、被検試料液中に
抗原がない場合には、前記の複合体は生成されないので
発色しない。一方被検試料液中の水は展開層の上部まで
移動し、あらかじめ塗布されている発色剤を濡らしてこ
れを発色させるので、陰性・陽性にかかわらず確実にし
かも容易に反応の終了が確認できる。
【００１６】本発明は以上のようにして抗原抗体反応に
よる抗原の検出を行うものだが、標識抗体にラテツクス
を用いることが本発明の特徴である。
よる抗原の検出を行うものだが、標識抗体にラテツクス
を用いることが本発明の特徴である。
【００１７】本発明ではラテツクスは有機合成高分子で
あるので、酸に対して安定であり、被検試料液中のアス
コルビン酸やリン酸の影響を受けることなく、その結
果、本発明ではラテツクスと抗体間の結合の切れること
が少なく、精度の高い検出を行い得る。
あるので、酸に対して安定であり、被検試料液中のアス
コルビン酸やリン酸の影響を受けることなく、その結
果、本発明ではラテツクスと抗体間の結合の切れること
が少なく、精度の高い検出を行い得る。
【００１８】
【実施例】次に本発明を実施例で具体的に示す。 〔実施例１〕多量のアスコルビン酸を含み、抗原である
ｈＣＧの濃度を０〜１０００ＩＵ／ｌの範囲で調製した
５種の尿に、青色ラテツクス付着抗ｈＣＧ抗体を含有さ
せた被検試料液を準備した。
ｈＣＧの濃度を０〜１０００ＩＵ／ｌの範囲で調製した
５種の尿に、青色ラテツクス付着抗ｈＣＧ抗体を含有さ
せた被検試料液を準備した。
【００１９】また、濾紙の中央から片方半分に向けて、
抗ｈＣＧ抗体を塗布したものを準備した。そして反応終
了確認部として、イソプロパノールに無水塩化コバルト
を飽和させた溶液を上記濾紙の他方の箇所、すなわち、
抗体の塗布されてない片方にスプレーで十分吹き付けて
塗布し、次に乾燥し試験具を作成した。
抗ｈＣＧ抗体を塗布したものを準備した。そして反応終
了確認部として、イソプロパノールに無水塩化コバルト
を飽和させた溶液を上記濾紙の他方の箇所、すなわち、
抗体の塗布されてない片方にスプレーで十分吹き付けて
塗布し、次に乾燥し試験具を作成した。
【００２０】この試験具上に上述５種の被検試料液を滴
下した結果、表１に示すように、反応終了確認部にピン
ク色に発色したスポツトが見られ、抗原であるｈＣＧが
存在する場合は、濾紙中央の被検試料液を滴下された付
近には青色のスポツトが認められ、陽性であることが確
認できた。
下した結果、表１に示すように、反応終了確認部にピン
ク色に発色したスポツトが見られ、抗原であるｈＣＧが
存在する場合は、濾紙中央の被検試料液を滴下された付
近には青色のスポツトが認められ、陽性であることが確
認できた。
【００２１】
【表１】
【００２２】比較例として、多量のアスコルビン酸を含
み、抗原であるｈＣＧの濃度を０〜１０００ＩＵ／ｌの
範囲で調製した５種の尿に、金コロイド付着抗ｈＣＧ抗
体を含有させた被検試料液を準備した。実施例１と同様
の試験具上に金コロイド付着抗ｈＣＧ抗体を含む５種の
被検試料液を滴下した結果、表２に示すように、反応終
了確認部にピンク色に発色したスポツトが見られたが、
抗原であるｈＣＧが存在する場合、被検試料液を滴下さ
れた試験紙の中央付近には青色のスポツトが認められ、
陽性であることが確認できることもあったが、スポツト
が認められないで陰性を示すこともあった。
み、抗原であるｈＣＧの濃度を０〜１０００ＩＵ／ｌの
範囲で調製した５種の尿に、金コロイド付着抗ｈＣＧ抗
体を含有させた被検試料液を準備した。実施例１と同様
の試験具上に金コロイド付着抗ｈＣＧ抗体を含む５種の
被検試料液を滴下した結果、表２に示すように、反応終
了確認部にピンク色に発色したスポツトが見られたが、
抗原であるｈＣＧが存在する場合、被検試料液を滴下さ
れた試験紙の中央付近には青色のスポツトが認められ、
陽性であることが確認できることもあったが、スポツト
が認められないで陰性を示すこともあった。
【００２３】
【表２】
【００２４】〔実施例２〕多量のアスコルビン酸を含
み、抗原であるｈＣＧの濃度を０〜１０００ＩＵ／ｌの
範囲で調製した５種の尿を被検試料液とした。
み、抗原であるｈＣＧの濃度を０〜１０００ＩＵ／ｌの
範囲で調製した５種の尿を被検試料液とした。
【００２５】クロマトグラフイー用濾紙の下部に青色ラ
テツクス付着抗ｈＣＧ抗体とこの濾紙の中央にｈＣＧ抗
体を塗布したものを準備した。
テツクス付着抗ｈＣＧ抗体とこの濾紙の中央にｈＣＧ抗
体を塗布したものを準備した。
【００２６】吸湿剤としての塩化カルシウム５０ｇと塩
基性染料のクリスタルバイオレツト０．１ｇをメタノー
ル１００ｃｃに溶解し、この溶液を上記濾紙の上部に塗
布して乾燥し、試験具を作成した。
基性染料のクリスタルバイオレツト０．１ｇをメタノー
ル１００ｃｃに溶解し、この溶液を上記濾紙の上部に塗
布して乾燥し、試験具を作成した。
【００２７】この試験具の下端部を上述の５種の被検試
料液に浸したところ、表３に示すように、上部の反応終
了確認部には緑色の着色がみられ、抗原であるｈＣＧが
存在すると、試験紙の中央部に鮮やかな青色を発色し、
はっきりと陽性であることが確認できた。
料液に浸したところ、表３に示すように、上部の反応終
了確認部には緑色の着色がみられ、抗原であるｈＣＧが
存在すると、試験紙の中央部に鮮やかな青色を発色し、
はっきりと陽性であることが確認できた。
【００２８】
【表３】
【００２９】比較例として、クロマトグラフイー用濾紙
の下部に金コロイド付着抗体とこの濾紙の中央にｈＣＧ
抗体を塗布したものを準備した。実施例２と同要領で、
この試験具の下端部を上述５種の被検試料液に浸したと
ころ、表４に示すように、上部の反応終了確認部には緑
色の着色がみられ、抗原であるｈＣＧが存在する場合、
試験紙の中央部にはごく薄い赤紫色の着色がみられた
が、陽性と陰性の判定の区別は難しかった。
の下部に金コロイド付着抗体とこの濾紙の中央にｈＣＧ
抗体を塗布したものを準備した。実施例２と同要領で、
この試験具の下端部を上述５種の被検試料液に浸したと
ころ、表４に示すように、上部の反応終了確認部には緑
色の着色がみられ、抗原であるｈＣＧが存在する場合、
試験紙の中央部にはごく薄い赤紫色の着色がみられた
が、陽性と陰性の判定の区別は難しかった。
【００３０】
【表４】
【００３１】
【発明の効果】以上説明してきたことから明らかなよう
に、本発明の方法を採用することにより、短時間でかつ
容易に診断薬の反応の終了を確認することができるの
で、検査時間が短縮できる。また被検試料液の反応層へ
の到着、不到着を発色の有無で確認できるので、陽性と
陰性の判断が容易になる。
に、本発明の方法を採用することにより、短時間でかつ
容易に診断薬の反応の終了を確認することができるの
で、検査時間が短縮できる。また被検試料液の反応層へ
の到着、不到着を発色の有無で確認できるので、陽性と
陰性の判断が容易になる。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年５月２１日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正内容】
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項２
【補正方法】変更
【補正内容】
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、抗原抗体反応
にラテツクスを標識物として利用した抗原の検出法であ
って、該反応層上に水によって発色する発色剤が存する
ことを特徴とする診断薬の反応終了の確認方法を要旨と
する。
にラテツクスを標識物として利用した抗原の検出法であ
って、該反応層上に水によって発色する発色剤が存する
ことを特徴とする診断薬の反応終了の確認方法を要旨と
する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００８】また、本発明は、抗原抗体反応による抗原
の検出法において、展開層の判定面の上部に水によって
発色する発色剤を有し、中間部に標識物としてラテツク
スが利用されている標識抗体を固定化したことを特徴と
するクロマトグラフイー用シートを要旨とする。
の検出法において、展開層の判定面の上部に水によって
発色する発色剤を有し、中間部に標識物としてラテツク
スが利用されている標識抗体を固定化したことを特徴と
するクロマトグラフイー用シートを要旨とする。
Claims (2)
- 【請求項１】 抗原抗体反応にラテツクスを標識抗体と
した抗原の検出法であって、該反応層上に水によって発
色する発色剤が存することを特徴とする診断薬の反応終
了の確認方法。 - 【請求項２】 抗原抗体反応による抗原の検出法におい
て、展開層の判定面の上部に水によって発色する発色剤
を有し、中間部にラテツクスを標識抗体として固定化し
たことを特徴とするクロマトグラフイー用シート。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10020693A JPH06289024A (ja) | 1993-04-02 | 1993-04-02 | 診断薬の反応終了の確認方法及びそれに用いるクロマトグラフイー用シート |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10020693A JPH06289024A (ja) | 1993-04-02 | 1993-04-02 | 診断薬の反応終了の確認方法及びそれに用いるクロマトグラフイー用シート |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06289024A true JPH06289024A (ja) | 1994-10-18 |
Family
ID=14267837
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10020693A Pending JPH06289024A (ja) | 1993-04-02 | 1993-04-02 | 診断薬の反応終了の確認方法及びそれに用いるクロマトグラフイー用シート |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06289024A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002037108A1 (en) * | 2000-10-27 | 2002-05-10 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Reagent and method for detecting substance |
| WO2003085402A1 (en) * | 2002-04-05 | 2003-10-16 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Test piece for chromatography and process for producing the same |
| KR100983609B1 (ko) * | 2008-01-28 | 2010-09-27 | 세종대학교산학협력단 | 독소 검출용 발색형 나노바이오센서를 이용한 식품 독소검출방법 |
-
1993
- 1993-04-02 JP JP10020693A patent/JPH06289024A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002037108A1 (en) * | 2000-10-27 | 2002-05-10 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Reagent and method for detecting substance |
| JP2002202310A (ja) * | 2000-10-27 | 2002-07-19 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | 物質の検出試薬及び検出方法 |
| US7090984B2 (en) | 2000-10-27 | 2006-08-15 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Device and method for detecting substance |
| WO2003085402A1 (en) * | 2002-04-05 | 2003-10-16 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Test piece for chromatography and process for producing the same |
| KR100983609B1 (ko) * | 2008-01-28 | 2010-09-27 | 세종대학교산학협력단 | 독소 검출용 발색형 나노바이오센서를 이용한 식품 독소검출방법 |
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