JPH06298657A - 免疫強化剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】アクチノバチルス属に属する菌の菌体、特にア
クチノバチルス スイス（ＡＴＣＣ１５５５７）または
アクチノバチルス アクチノマイセテムコミタンス（Ａ
ＴＣＣ２９５２２）の生菌体または加熱処理された死菌
体を有効成分として含有する免疫強化剤。 【効果】本発明のアクチノバチルス属に属する菌から調
製された細菌製剤は、ＭＲＳＡ感染または日和見菌感染
に対する抵抗性の増強作用、並びにザルコーマ細胞やＬ
−１２１０白血病細胞に対する抗悪性腫瘍作用等を有す
る免疫強化剤を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、アクチノバチルス属
（Actinobacillus) に属する菌、中でもアクチノバチル
ス スイス（Actinobacillus suis ）ＡＴＣＣ１５５５
７株またはアクチノバチルス アクチノマイセテムコミ
タンス（A. actinomycetemcomitans) ＡＴＣＣ２９５２
２株の菌体を有効成分として含有するＭＲＳＡ感染症、
日和見感染症および悪性腫瘍に対する免疫強化剤に係る
ものである。

【０００２】

【従来の技術】重度の熱傷、癌あるいはステロイド剤の
長期・大量投与などで惹起される免疫系諸機能の減弱あ
るいは低下の結果、宿主は易感染状態となり、重篤な日
和見感染症に陥り、死に至る症例が多いことは周知のと
ころである。一方、種々の悪性腫瘍に対する免疫・化学
療法剤に関する研究開発も盛んにおこなわれている。こ
れら成果の中には、細菌菌体またはその抽出物を用いた
免疫強化剤あるいは抗腫瘍剤がある。例えば、特公昭
４３−６６９０号公報に記載されているＡ群溶血性連鎖
球菌（ストレプトコッカス ピオゲネス）Ｓｕ株の生菌
菌体（以下、溶連菌製剤という）を用いた方法、黄色
ブドウ球菌の菌体成分を用いた特公昭５９−４６４８７
号公報の方法、緑膿菌菌体成分を用いた特公昭６１−
２３１６７号公報の方法、乳酸桿菌の１菌種であるラ
クトバチルスカゼイ菌ＹＩＴ−９０１８株の菌体（以
下、ＬＣ−９０１８製剤という）を用いた特公昭６２−
３４７２７号公報の方法、あるいは非定型抗酸菌の菌
体抽出物を用いた特公昭６２−４１２１４号公報の方法
などが、その例として挙げられる。ところで、このよう
な細菌性製剤をはじめとする、いわゆる外来性生体応答
調節物質は宿主免疫系の諸機能を非特異的に活性化する
免疫薬理学的作用を有することは、多数の報告よりすで
に明らかにされているところである。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】細菌製剤を免疫強化剤
あるいは抗腫瘍剤として用いる場合、ヒトに対して病原
性を示さない菌種が好ましく、またヒトの常在菌として
共生し、ヒトに有益な菌も望ましい菌種といえるであろ
う。この観点から、溶連菌、緑膿菌あるいは抗酸菌など
は、その製剤が生菌体の場合は勿論のこと、たとえ死菌
体であっても、元来ヒトに対して病原性を示す菌種であ
るという点で問題が残る。また菌体抽出物を有効成分と
して利用する場合には、製造上、抽出、分離、単離、精
製などの複雑な処理工程を必要とする問題点がある。他
方、常在性非病原性菌の菌体そのものを用いる場合、そ
の投与量あるいは投与期間によっては免疫担当細胞群の
豊富な臓器や造血臓器・器官などに対する２次的な副作
用の生じる可能性が考えられる（Sato K.,Infect.Immu
n.,44,445,1984)。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上述のよう
な現状と問題点を背景に、菌体そのものが免疫系諸機
能の強力な増強能を有し、臓器毒性が極めて低くヒ
トに対しては病原性がなく、しかも生菌体であること
を必要としない細菌属の探索を鋭意進めた結果、アクチ
ノバチルス属に属する菌、中でもアクチノバチルス ス
イス種の１菌株であるＡＴＣＣ１５５５７株およびアク
チノバチルス アクチノマイセテムコミタンス種の１菌
株であるＡＴＣＣ２９５２２株が、前記の条件に適合す
る菌種であることを見出し、さらに研究を進めて本発明
を完成した。

【０００５】すなわち、本発明の要旨は、（１）アクチ
ノバチルス属に属する菌の菌体を有効成分として含有す
る免疫強化剤、（２）アクチノバチルス スイス（ＡＴ
ＣＣ１５５５７）またはアクチノバチルス アクチノマ
イセテムコミタンス（ＡＴＣＣ２９５２２）の菌体を有
効成分として含有する免疫強化剤、（３）菌体が加熱処
理された死菌体である前記（１）または（２）記載の免
疫強化剤、（４）免疫強化がＭＲＳＡ感染症に対するも
のである前記（１）〜（３）いずれか記載の免疫強化
剤、（５）免疫強化が日和見感染症に対するものである
前記（１）〜（３）いずれか記載の免疫強化剤、（６）
免疫強化が悪性腫瘍に対するものである前記（１）〜
（３）いずれか記載の免疫強化剤に関する。

【０００６】本発明に用いられるアクチノバチルス属に
属する菌はグラム陰性の通性嫌気性桿菌で、分類学上は
パスツエラ科に属する(Bergey's Manual of Systematic
Bacteriology,1984) 。アクチノバチルス属に属する菌
はヒトを含む哺乳動物に寄生性があり、形状は球形が優
勢であるが、桿状や糸状を呈することもある。アクチノ
バチルス スイス菌の豚、馬や牛に対する感染症例報告
は、これまでに数編みられるものの、ヒトへの感染や病
原性に関する報告は、現在までのところ皆無である。ア
クチノバチルス属に属する菌株は、ＡＴＣＣや工業技術
院生命工学工業技術研究所等の菌株保存センターから入
手することができる。本発明に特に有利に用いられるア
クチノバチルス スイス菌およびアクチノバチルス ア
クチノマイセテムコミタンス菌もＡＴＣＣから入手する
ことができ、例えばアクチノバチルス スイスＡＴＣＣ
１５５５７株およびアクチノバチルスアクチノマイセテ
ムコミタンスＡＴＣＣ２９５２２株を例示することがで
きる。

【０００７】本発明に用いられるアクチノバチルス属に
属する菌の菌体は、生菌体でも死菌体でもよく、次のよ
うにして調製することができる。まず、ブレインハート
インフュージョン培地（仔牛脳浸出液２０％、牛心臓浸
出液２５％、ペプトン１％、グルコース０．５％、塩化
ナトリウム０．５％、リン酸水素二ナトリウム０．２５
％、ｐＨ７．４）１０００ｍｌを２．５リットル容フラ
スコに分注し、１２１℃で１５分間滅菌した後、予め前
培養しておいた種用培養液を接種する。ついで、３７℃
で１８〜２４時間静置培養した後、遠心分離により培養
液から菌体を集め、生理的食塩水で２回洗浄する。な
お、アクチノバチルス属に属する菌の培養用の培地とし
ては、ブレインハートインフュージョン培地の代わり
に、グルコース（０．５％）、リン酸塩（０．５％）、
ペプトン（０．５％）、酵母エキス（１％）を含む培地
（ｐＨ７．４）を用いることもできる。アクチノバチル
ス アクチノマイセテムコミタンス等のように培養時に
ＣＯ₂ガスの供給により菌の増殖を促進できる場合もあ
る。この場合のＣＯ₂ ガス濃度は、通常５％である。

【０００８】こうして得られた湿菌体を滅菌蒸留水に懸
濁し、そのまま凍結乾燥すると粉末状の生菌体が得られ
る。また、上記湿菌体の滅菌蒸留水懸濁液を８０℃の湯
浴中で６０分間加熱処理した後、凍結乾燥して死菌体粉
末を得ることができる。別法として、湿菌体を１２１℃
で２０分間加熱滅菌した後、８０℃の熱風で乾燥して死
菌体粉末とすることもできる。これらの菌体粉末はバイ
アル瓶やアンプルに無菌的に真空封入して冷蔵保存す
る。

【０００９】本発明に用いるアクチノバチルス スイス
ＡＴＣＣ１５５５７株およびアクチノバチルス アクチ
ノマイセテムコミタンスＡＴＣＣ２９５２２株の生菌
体、死菌体の調製も、上述したアクチノバチルス属に属
する菌一般の菌体調製法に従って行なうことができる。

【００１０】本発明の免疫強化剤は、上述のようにして
調製した菌体を有効成分として含有するものであり、後
述の実施例において詳述するように、ＭＲＳＡ感染、日
和見感染、悪性腫瘍等に対する防御機構である免疫系機
能を増強させることができる優れた作用を有している。
その一方、本発明の免疫強化剤は毒性が低く、急性毒性
値（ＬＤ₅₀）は、極めて大きいことが特長といえる。本
発明の免疫強化剤は、菌体粉末を滅菌した生理食塩水、
リンゲル液等に懸濁した液剤として、あるいは通常用い
られる適当な基剤を利用して坐剤、顆粒剤、錠剤または
軟膏剤として調製される。この場合、他の化学療法剤や
ステロイド等の免疫抑制剤を配合した製剤の調製も可能
である。

【００１１】本発明の免疫強化剤の投与方法としては、
静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、経口投与あるいは
注腸内投与のいずれを選択することもできる。免疫強化
剤の投与量は、投与方法によって異なるが、粉末菌体量
として、成人１日あたり、静脈内投与で３０〜１５０ｍ
ｇ／ｋｇ、皮下投与で５００〜２０００ｍｇ／ｋｇ、腹
腔内投与で５〜２０ｍｇ／ｋｇ、経口投与で１０００〜
４０００ｍｇ／ｋｇ、注腸内投与では５００〜２０００
ｍｇ／ｋｇ程度であり、１日１〜３回に分け、５〜１０
日間投与するのが好ましい。なお、これらの投与量は、
年令・症状などによってはこれらの範囲外となってもよ
い。

【００１２】

【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳しく説
明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限定さ
れるものではない。

【００１３】実施例１ 本発明に用いられるアクチノバチルス スイスＡＴＣＣ
１５５５７株の生菌体粉末及び死菌体粉末（以下、Ａｓ
−１５５５７製剤という）は次のようにして調製した。
培養液１０００ｍｌ中に、仔牛脳浸出液２００ｇ、牛心
臓浸出液２５０ｇ、ペプトン１０ｇ、グルコース５ｇ、
塩化ナトリウム５ｇ、リン酸水素二ナトリウム２．５ｇ
を含有するｐＨ７．４の培地（一般名：ブレインハート
インフュージョン培地）を１２１℃で１５分間滅菌した
後、予め前培養した種用菌液を適当量接種した。３７℃
で１８〜２４時間静置培養した後、培養菌液から菌体を
遠心分離し、生理的食塩水で２回洗浄した。洗浄後、滅
菌蒸留水による菌体懸濁液を作製し、そのまま（生菌体
の場合）または８０℃の湯浴中で６０分間加熱処理し
（死菌体の場合）、凍結乾燥し粉末化した。菌体はクリ
ーム様黄色を呈した。なお、０．５ｍｇ／ｍｌの菌浮遊
液の吸光度は５４０ｎｍにて測定した場合、１．５を示
した。

【００１４】実施例２ アクチノバチルス アクチノマイセテムコミタンスＡＴ
ＣＣ２９５２２株の生菌体および死菌体（以下、Ａａ−
２９５２２製剤という）の調製方法も実施例１に記載し
た方法と全く同様である。なお、菌体粉末は白色を呈し
た。一方、比較対照用の他種細菌製剤（３菌種）のう
ち、ストレプトコッカス サーモフィルスＩＦＯ３５３
５株の菌体（以下、Ｓｔ−３５３５製剤という）は実施
例１に記載の方法と同じ方法で調製し、ＬＣ−９０１８
製剤は加藤らの方法（Kato, I. et al: Gann, 72: 517,
1981 ）に準じて調製し、市販溶連菌製剤は中外製薬社
製のものを使用した。

【００１５】実施例３ 日和見菌感染に対する抵抗性の増強作用 緑膿菌感染およびカンジダ菌感染に対する抵抗性の増強
能 ｄｄＹ系雌マウス（５週令、体重２５ｇ前後）を１群１
０匹宛用い、マウス１匹あたり供試５菌種細菌製剤（Ａ
ｓ−１５５５７，Ａａ−２９５２２，ＬＣ−９０１８，
市販溶連菌，Ｓｔ−３５３５）の各々０．１ｍｇ（生理
的食塩水１ｍｌ中に０．５ｍｇの菌体を含む菌液０．２
ｍｌ：４ｍｇ／ｋｇ）または０．５ｍｇ（生理的食塩水
１ｍｌ中に２．５ｍｇの菌体を含む菌液０．２ｍｌ）を
腹腔内投与し、その３日後にマウス１匹あたり患者喀痰
より分離培養した緑膿菌ＭＮＣＣ４７０９株の１．８×
１０⁷ 生菌単位（ＣＦＵ）、または患者尿由来のカンジ
ダアルビカンス（C.albicans) ＭＮＣＣ４１０５株の
１．３×１０⁸ ＣＦＵ（Ｓｔ−３５３５製剤を除く４菌
種製剤を供試）を腹腔内感染させた。感染後１０日間に
亘り、動物の死亡数を記録し、１０日目の生残率を求め
た（生残とは、無処理のマウスと同程度に自然死するま
で生存し続けることを意味する）。一方、非投与対照群
にはマウス１匹あたり、生理的食塩水０．２ｍｌを腹腔
内投与し、同量の緑膿菌またはカンジダ アルビカンス
で攻撃した。なお、１０日目以降に生き残った動物は、
さらに１ヵ月間飼育したが、生死数の変動は感染後５日
目迄であり、１ヵ月間におけるその後の変動は皆無であ
った。各群における生残率を表１に示す。

【００１６】供試５菌種細菌製剤のうち、アクチノバチ
ルス属に属する菌の２菌種の製剤（Ａｓ−１５５５７製
剤とＡａ−２９５２２製剤）の緑膿菌感染およびカンジ
ダ菌感染に対する抵抗性の増強能は、いずれの投与量に
おいてもＬＣ−９０１８製剤や市販溶連菌製剤のそれら
よりも強く、中でもＡｓ−１５５５７製剤においては４
ｍｇ／ｋｇ（０．１ｍｇ／マウス）の投与量でも８０〜
９０％の生残率を示した。これに対し、市販溶連菌製剤
と同属に属する菌のＳｔ−３５３５製剤には、緑膿菌に
対する感染抵抗性の増強能は殆どみられなかった。

【００１７】

【表１】

【００１８】実施例４ メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）感染に対す
る抵抗性の増強能 ｄｄＹ系雌マウス（５週令）を１群１０匹宛用い、実施
例３と同様の方法でマウス１匹あたり供試細菌製剤（４
菌種）を腹腔内投与し、その３日後にマウス１匹あた
り、患者喀痰由来メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲ
ＳＡ）ＭＮＣＣ４８１０株（４．４×１０⁷ ＣＦＵ／マ
ウス）を腹腔内感染させた。感染後１０日間に亘り、動
物の死亡数を記録し、１０日目の生残率を求めた。その
結果を表２に示す（なお、供試４菌種細菌製剤とは、Ａ
ｓ−１５５５７製剤，Ａａ−２９５２２製剤，ＬＣ−９
０１８製剤および市販溶連菌製剤のことである）。Ａｓ
−１５５５７製剤およびＡａ−２９５２２製剤のＭＲＳ
Ａ菌感染に対する抵抗性の増強能は、表２に示すよう
に、ＬＣ−９０１８製剤あるいは市販溶連菌製剤のそれ
よりも強く、中でもＡｓ−１５５５７製剤の感染抵抗性
の増強能は極めてすぐれていた。

【００１９】

【表２】

【００２０】実施例５ デキサメサゾン処置免疫減弱動物における緑膿菌感染抵
抗性の増強能 ｄｄＹ系雌マウス（５週令）を１群１０匹宛用い、緑膿
菌感染５日前よりマウス１匹あたり副腎皮質ホルモン剤
であるデキサメサゾン（品名：デカドロン，日本メルク
社）０．２ｍｌ（生理的食塩水１ｍｌ中に１ｍｇ含む）
を３日間に亘り１日１回腹腔内投与した。さらに感染３
日前に供試４菌種の細菌製剤をマウス１匹あたり４ｍｇ
／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与を行い、その
投与３日後に非処置正常対照群の生残率が２０〜３０％
になるように緑膿菌ＭＮＣＣ４７０９株（６．２×１０
⁶ ＣＦＵ／マウス）を腹腔内感染させた後、１０日目の
生残率を求めた。その結果を図１に示す（なお供試４菌
種細菌製剤とは、Ａｓ−１５５５７製剤，Ａａ−２９５
２２製剤，ＬＣ−９０１８製剤および市販溶連菌製剤を
意味する）。

【００２１】デキサメサゾンで処置した細菌製剤非投与
対照群のマウスは、緑膿菌感染により全例死亡したのに
対し、４種の供試細菌製剤（２０ｍｇ／ｋｇ，０．５ｍ
ｇ／マウス）をデキサメサゾン処置マウスに投与するこ
とにより、非処置正常対照群における生残率（２０％）
よりも高い生残率を示し、中でもＡｓ−１５５５７製剤
投与群の生残率は８０％と最も高率であった。また４ｍ
ｇ／ｋｇの供試細菌製剤を投与した場合の感染抵抗性増
強能はＡｓ−１５５５７製剤（６０％）、Ａａ−２９５
２２製剤（３０％）、ＬＣ−９０１８製剤（２０％）、
市販溶連菌製剤（１０％）の順であった。

【００２２】実施例６ デキサメサゾン処置マウス腹腔マクロファージにおける
緑膿菌殺菌能の増強 実施例５で示されたデキサメサゾン処置免疫能減弱マウ
スにおける供試細菌製剤の緑膿菌感染抵抗性の増強作用
が、デキサメサゾンによって低下した免疫系機能の活性
化に起因しているか否かを調べるために、腹腔マクロフ
ァージの緑膿菌殺菌能が供試細菌製剤により増強された
か否かについて検討した。

【００２３】ｄｄＹ系雌マウス（５週令）１群あたり３
匹を用い、実施例５と同じ条件でデキサメサゾンによる
処置および供試３菌種細菌製剤４ｍｇ／ｋｇ（０．１ｍ
ｇ／マウス）の腹腔内投与を行った。その３日後にデキ
サメサゾン非処置正常群およびデキサメサゾン処置対照
群と共に緑膿菌ＭＮＣＣ４７０９株（１×１０⁵ ＣＦＵ
／マウス）を腹腔内感染させた。感染直後および３時間
後にヘパリン（４単位／ｍｌ）添加ハンクス緩衝液２．
５ｍｌで動物腹腔内を２回洗浄し、採取された腹腔洗浄
液（５ｍｌ）を遠心分離し、得られた遠心上清および遠
心沈澱細胞に０．８３％塩化アンモニウム液（５ｍｌ）
を添加した後、緑膿菌生菌単位（ＣＦＵ）を緑膿菌選択
用寒天培地を用いて各々算定し、上清中のＣＦＵと細胞
内ＣＦＵの和をもって腹腔内の感染菌の全ＣＦＵとし、
下記の式により腹腔マクロファージの緑膿菌殺菌能の増
強率（％）を求めた。 殺菌能増強率（％）＝｛〔（感染直後のＣＦＵ）−（感
染３時間後のＣＦＵ）〕／感染直後のＣＦＵ｝×１００

【００２４】その結果を図２に示す（なお、供試３菌種
細菌製剤は、Ａｓ−１５５５７製剤、ＬＣ−９０１８製
剤および市販溶連菌製剤である）。マウス腹腔マクロフ
ァージの緑膿菌殺菌能は、デキサメサゾンで処置するこ
とにより非処置正常群のそれよりも著しく減弱された。
しかし、供試いずれかの細菌製剤の投与により、減弱し
た腹腔マクロファージ殺菌能の明らかな回復と機能亢進
がみられた。中でも本発明のＡｓ−１５５５７製剤投与
群における腹腔マクロファージの機能亢進は極めて顕著
であった。このことは、マクロファージの機能亢進の結
果、サイトカインネットワークなどの免疫系が作動する
ことにより、図１で示された成績が得られたことを強く
示唆した。

【００２５】実施例７ 緑膿菌感染に対する抵抗性の増強作用における有効量 ｄｄＹ系雌マウス（５週令）を１群１０匹宛用い、マウ
ス１匹あたりＡｓ−１５５５７製剤またはＬＣ−９０１
８製剤の０．４ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋ
ｇ、８ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇまたは４０ｍｇ／ｋ
ｇを腹腔内投与し、その３日後に緑膿菌ＭＮＣＣ４７０
９株（１．８×１０⁷ ＣＦＵ／マウス）を用いて腹腔内
攻撃した後、１０日目の生残率を求めた。その結果を表
３に示す。

【００２６】

【表３】

【００２７】５％危険率（Student t-テスト法) より、
各々の細菌製剤の最小有効量を求めたところ、ＬＣ−９
０１８製剤のそれは８ｍｇ／ｋｇ（０．２ｍｇ／ｋｇ）
であった。これに対し、本発明のＡｓ−１５５５７製剤
の最小有効量は２ｍｇ／ｋｇ（０．０５ｍｇ／マウス）
であった。

【００２８】実施例８ 緑膿菌感染に対する抵抗性増強作用の持続効果 ｄｄＹ系雌マウス（５週令）を１群１０匹宛用い、緑膿
菌感染２１日前、１４日前、１０日前、７日前あるいは
３日前に、マウス１匹あたり供試細菌製剤（Ａｓ−１５
５５７製剤またはＬＣ−９０１８製剤）の２ｍｇ／ｋｇ
を腹腔内投与した後、緑膿菌ＭＮＣＣ４７０９株（１．
８×１０⁷ ＣＦＵ／マウス）で腹腔内攻撃し、１０日目
の生残率を求めた。

【００２９】その結果、供試細菌製剤を１回のみ投与し
た場合の緑膿菌感染に対する抵抗性は、日数の経過に伴
って低下（即ち生残率は低下）するものの、Ａｓ−１５
５５７製剤の投与１０日目における生残率は６０％であ
り、非投与対照群（感染後２日までに全動物死亡：生残
率０％）との間に有意差（危険率５％以下）がみられた
が、ＬＣ−９０１８製剤の生残率に有意性がみられたの
は投与３日目（生残率：７０％）のみであった。これら
の結果から、本発明のＡｓ−１５５５７製剤の２ｍｇ／
ｋｇ、１回投与における感染抵抗性増強の持続期間は少
なくとも１０日間であり、ＬＣ−９０１８製剤の３日間
に比べて、その効果が極めて長期間持続することが示さ
れた。

【００３０】実施例９ 緑膿菌感染マウスにおける感染症発症遅延作用 ｄｄＹ系雌マウス（５週令）を１群１０匹宛用い、マウ
ス１匹あたり緑膿菌ＭＮＣＣ４７０９株（１×１０⁷ Ｃ
ＦＵ／マウス）を腹腔内感染させた後、その３時間後に
供試３菌種製剤（Ａｓ−１５５５７製剤、ＬＣ−９０１
８製剤または市販溶連菌製剤）の２０ｍｇ／ｋｇを腹腔
内投与した。感染後６時間毎に各群の動物が死亡するま
でに要した時間（即ち、生存時間）を記録し、これら細
菌製剤の緑膿菌感染症発症遅延効果の有無について調べ
た（Student t-テスト法）。その結果を表４に示す。

【００３１】

【表４】

【００３２】いずれの投与群においても全動物は死亡し
たものの、Ａｓ−１５５５７製剤およびＬＣ−９０１８
製剤は有意性のある生存時間の延長、即ち延命効果を示
したが、危険率からみると、本発明のＡｓ−１５５５７
製剤の緑膿菌感染症発症遅延作用はＬＣ−９０１８製剤
のそれよりもすぐれていることが認められた。一方、市
販溶連菌製剤にはほとんど延命効果は認められなかっ
た。

【００３３】実施例１０ ザルコーマ１８０癌細胞移植実験系における抗腫瘍作用 本試験は３つの系で行なった。即ちＩＣＲ系雌マウス
（５週令、体重２５ｇ前後）を１群１０匹宛用い、担癌
３日前より、マウス１匹あたりＡｓ−１５５５７製剤８
ｍｇ／ｋｇ（０．２ｍｇ／マウス）を３日間に亘り１日
１回計３回（総投与量：２４ｍｇ／ｋｇ）、１２ｍｇ／
ｋｇ（０．３ｍｇ／マウス）のものを２日間に亘り１日
１回計２回（総投与量：２４ｍｇ／ｋｇ）または２４ｍ
ｇ／ｋｇ（０．６ｍｇ／マウス）のものを移植３日目に
１回（総投与量２４ｍｇ／ｋｇ）腹腔内投与した後、ザ
ルコーマ１８０癌細胞（１×１０⁶ コ／マウス）を腹腔
内移植した系、マウス１匹あたり１×１０⁶ コの癌細
胞を腹腔内移植した後、Ａｓ−１５５５７製剤８ｍｇ／
ｋｇを３日間に亘り１日１回計３回（総投与量：２４ｍ
ｇ／ｋｇ）、１２ｍｇ／ｋｇのものを２日間に亘り１日
１回計２回（総投与量：２４ｍｇ／ｋｇ）または２４ｍ
ｇ／ｋｇのものを移植３日目に１回（総投与量：２４ｍ
ｇ／ｋｇ）腹腔内投与した系、Ａｓ−１５５５７製剤
４ｍｇ／ｋｇ（０．１ｍｇ／マウス）を癌細胞の腹腔内
移植（１×１０⁶ コ／マウス）前後６日間に亘り１日１
回計６回（総投与量：２４ｍｇ／ｋｇ）腹腔内投与した
系、でおこない移植後８週間に亘り、腫瘍死した動物の
匹数を記録し、８週目の生残率を求めた。なお、ザルコ
ーマ１８０癌細胞移植対照群は生理的食塩水を腹腔内投
与した。その結果を表５に示す。

【００３４】

【表５】

【００３５】ザルコーマ１８０癌細胞移植前および後あ
るいは前後通じてＡｓ−１５５５７製剤を投与（総投与
量：２４ｍｇ／ｋｇ）した場合、その投与方法により動
物の生残率は異なるもののかなりの生残率を示したこと
から、本発明のＡｓ−１５５５７製剤はザルコーマ１８
０癌移植（腹腔内）に対して抗腫瘍活性を有するものと
思われる。表５に見られるように、Ａｓ−１５５５７製
剤の場合、癌細胞移植前、後あるいは前後通じての生残
率（移植前投与平均生残率：３６．７％，移植後投与平
均生残率：１６．７％，移植前および後投与生残率：５
０％）は、免疫強化剤（生体免疫応答物質）の有する作
用機序から考えて極めて信頼性の高い結果であるといえ
る。

【００３６】実施例１１ Ｌ−１２１０白血病細胞移植実験系における抗腫瘍作用 実験系は実施例１０と同様の系を用いた。即ち、ＤＢ
Ａ／２Ｃｒ系雌マウス（５週令、体重１８ｇ前後）を１
群１０匹宛を用い、担癌３日前より、マウス１匹あたり
Ａｓ−１５５５７製剤１１．１ｍｇ／ｋｇ（０．２ｍｇ
／マウス）を３日間に亘り１日１回計３回（総投与量：
３３．３ｇ／ｋｇ）あるいは３３．３ｍｇ／ｋｇ（０．
６ｍｇ／マウス）のものを移植３日目に１回（総投与
量：３３．３ｍｇ／ｋｇ）腹腔内投与した後、Ｌ−１２
１０白血病細胞（４×１０⁶ コ／マウス）を腹腔内移植
した系、マウス１匹あたり、４×１０⁶ コの癌細胞を
腹腔内移植した後、Ａｓ−１５５５７製剤１１．１ｍｇ
／ｋｇを３日間に亘り１日１回計３回（総投与量：３
３．３ｍｇ／ｋｇ）腹腔内投与した系、Ａｓ−１５５
５７製剤５．５５ｍｇ／ｋｇ（０．１ｍｇ／マウス）を
癌細胞の腹腔内移植（１×１０⁶ ／マウス）前後６日間
に亘り１日１回計６回（総投与量：３３．３ｍｇ／ｋ
ｇ）腹腔内投与した系、でおこない、移植後、動物が腫
瘍死するまでの日数を観察し、生理的食塩水のみを投与
したＬ−１２１０白血病細胞移植対照群の平均生存日数
を１とした場合のＡｓ−１５５５７製剤投与群における
相対生存値並びに平均生存日数を算定した。その結果を
表６に示す。

【００３７】

【表６】

【００３８】Ｌ−１２１０白血病細胞移植前および後あ
るいは前後通じてＡｓ−１５５５７製剤を投与（総投与
量：３３．３ｍｇ／ｋｇ）した場合、その投与方法によ
り動物の平均生存期間は異なるものの、対照群の生存時
間を１として算出した相対生存値（移植前および後ある
いは前後通じての相対生存値は各々１．３０，１．１５
あるいは１．４５である）に有意差がみられたことか
ら、免疫強化剤の作用機序とＬ−１２１０白血病細胞の
性状から考えても極めて信頼性の高い結果であり、本発
明のＡｓ−１５５５７製剤は強力な増殖能を有するＬ−
１２１０白血病細胞（腹腔内移植）に対しても、抗腫瘍
活性を有するものと思われる。

【００３９】実施例１２ Ａｓ−１５５５７製剤の毒性試験 （１）供試細菌製剤の急性毒性試験（ＬＤ₅₀） ｄｄＹ系雌マウスおよび雄マウス（５週令）を１群５匹
宛用い、供試３菌種製剤（２倍階段希釈）の急性毒性
（ＬＤ₅₀）について、Litchfield-Wilcoxon 法に従って
求めた。その結果を表７に示す。

【００４０】

【表７】

【００４１】Ａｓ−１５５５７製剤の雌マウスに対する
ＬＤ₅₀は、腹腔内および静脈内投与においてＬＣ−９０
１８製剤および市販溶連菌製剤のそれらよりも１．１〜
６．５倍高い値を示し、急性毒性は極めて低いことが明
らかとなった。またＡｓ−１５５５７製剤の腹腔内およ
び静脈内投与において雄マウスよりも雌マウスに対して
相対的に高いＬＤ₅₀値を示し、皮下あるいは経口投与で
のＬＤ₅₀値は３０００ｍｇ／ｋｇ以上であった。

【００４２】（２）本発明の細菌製剤投与マウスの肝臓
および脾臓組織における病理組織学的所見 Ａｓ−１５５５７製剤の２０ｍｇ／ｋｇをマウス尾静脈
内に投与した後、１０日目に全動物を麻酔、屠殺した。
肝臓および脾臓を摘出し、ホルマリン固定した後、パラ
フィン包埋組織切片標本を作製し、光学顕微鏡下でこれ
ら標本における病理組織学的病変について観察した。そ
の結果、肝臓組織切片像において、非投与群のそれらと
比較して極めて微弱な肝細胞壊死や顆粒球の類洞への浸
潤がみらられるものの、明らかな病変所見像は、ほとん
どみられなかった。また、脾臓組織標本の赤脾髄所見お
よび白脾髄所見においては非投与対照群と比べて異常は
みられなかった。

【００４３】（３）抗原性試験 ｄｄＹ系雌マウス（５週令）を１群３匹宛用い、マウス
１匹あたりＡｓ−１５５５７製剤、１６０ｍｇ／ｋｇ
（４ｍｇ／マウス）を腹腔内あるいは静脈内に１回のみ
投与した後、１４日目および２１日目に血清を分離採取
し、血清中の抗Ａｓ−１５５５７抗体産生の有無につい
てＡｓ−１５５５７菌体に対する凝集試験およびＡｓ−
１５５５７菌体の超音波処理破壊（２００Ｗ，３０分
間）菌上清液に対する沈降試験および免疫電気泳動法で
調べた結果、いずれの投与群由来血清においても陰性で
あり、抗体の産生は認められなかった。

【００４４】

【発明の効果】本発明のアクチノバチルス属に属する菌
から調製された細菌製剤は、ＭＲＳＡ感染または日和見
菌感染に対する抵抗性の増強作用、並びにザルコーマ細
胞やＬ−１２１０白血病細胞に対する抗悪性腫瘍作用等
を有する免疫強化剤を提供する。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、デキサメサゾン処置免疫減弱マウスの
緑膿菌感染抵抗性に対する各種細菌製剤の増強作用を示
す図である。

【図２】図２は、デキサメサゾン処置マウスの腹腔マク
ロファージの緑膿菌殺菌能に対する各種細菌製剤の増強
作用を示す図である。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 アクチノバチルス属に属する菌の菌体を
   有効成分として含有する免疫強化剤。
2. 【請求項２】 アクチノバチルス スイス（ＡＴＣＣ１
   ５５５７）またはアクチノバチルス アクチノマイセテ
   ムコミタンス（ＡＴＣＣ２９５２２）の菌体を有効成分
   として含有する免疫強化剤。
3. 【請求項３】 菌体が加熱処理された死菌体である請求
   項１または２記載の免疫強化剤。
4. 【請求項４】 免疫強化がＭＲＳＡ（メチシリン耐性黄
   色ブドウ球菌）感染症に対するものである請求項１〜３
   いずれか記載の免疫強化剤。
5. 【請求項５】 免疫強化が日和見感染症に対するもので
   ある請求項１〜３いずれか記載の免疫強化剤。
6. 【請求項６】 免疫強化が悪性腫瘍に対するものである
   請求項１〜３いずれか記載の免疫強化剤。