JPH06305901A - 室温下保存用灌流液およびこれを用いた保存方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 パーフルオロカーボン化合物０．１〜１０(w
/v)%、グルコース１〜２０mmol/L、インシュリン１０〜
２００Ｕ/L、アロプリノール０．１〜５mmol/L、ＰＥＧ
化ＳＯＤ１〜１０mg/L、アデノシン１〜１０mmol/L、デ
キサメタゾン１〜２０mg/L、ヒドロキシエチル澱粉１〜
５(w/v)%、ナトリウムイオン１４０〜１４５mEq/L 、カ
リウムイオン２〜６mEq/L および塩化物イオン９０〜９
５mEq/L を加え、そのｐＨを７〜８、浸透圧を３００〜
３４０mOsm/Lに調製して、灌流液２とする。 【効果】 灌流液２を酸素化した後、灌流圧６０〜１０
０mmHgにて移植臓器１０等を灌流することによって、代
謝を維持するために充分な酸素を供給できるため、室温
下で長時間にわたり移植臓器１０等を保存・灌流するこ
とができる。したがって、低温下保存による移植臓器１
０等への障害がない。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、移植臓器等を室温下に
て保存するのに有用な灌流液、およびこの灌流液を用い
て移植臓器等を室温下にて保存する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年において臓器移植に際しての臓器の
保存技術の進展はめざましく、保存技術の進歩は、例え
ば腎臓移植の普及をますます促進している。臨床的に採
用されている臓器保存法には、低温単純浸漬法〔Lance
t, 2, 1219-1222 (1969) 〕および低温灌流法〔Lancet,
2, 536 (1967) 〕がある。これらの方法は、通常０〜
１０℃の低温下での保存により移植臓器の代謝を抑制さ
せて、長時間の保存を可能とする。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかし、低温下保存時
に移植臓器の代謝を一旦抑制させるため、移植時に保存
臓器の（代謝）機能が再現できるかどうか問題があり、
その評価方法も確立されていない。また、低温下保存に
よる移植臓器への障害も検討を要するとされている。

【０００４】そこで、移植臓器の代謝を行わせつつ保存
する方法として、室温下での保存・灌流方法が検討され
ている。例えば、第２８回日本人工臓器学会大会予稿
集，No.192, p120（1990年９月）に記載されている方法
では、酸素および基質の供給が適正になされれば長時間
の保存が可能となるものと期待される。

【０００５】また、パーフルオロカーボンを用いた室温
下での腎臓あるいは肝臓の保存方法は既に各種報告され
ている（特開昭５５−５１０１６号公報、Proceedings
of the Xth international congress for nutrition :
Synposium on perfluorochemical artificial blood, K
yoto 1975, 187-201、Nihon Gekagakukai Zasshi (J.Ja
p. Surg. Soc.), 74(5), 397 [1973]等）。

【０００６】そこで本発明の目的は、従来のものよりも
さらに優れた臓器保存作用を有し、室温下で代謝を維持
しながら移植臓器等を保存することができる灌流液、お
よび室温下での臓器等の保存方法を提供することであ
る。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記目的を
達成すべく研究を重ねた結果、パーフルオロカーボン化
合物を基本要素とし、下記の特定組成（細胞外液の組成
を有する）からなる灌流液が優れた臓器保存作用を有す
ること、およびこの灌流液を用いて室温下で臓器を保存
する方法を見出して本発明を完成した。

【０００８】即ち本発明は、パーフルオロカーボン（Ｐ
ＦＣ）化合物０．１〜１０(w/v)%、グルコース１〜２０
mmol/L、インシュリン１０〜２００Ｕ/L、アロプリノー
ル０．１〜５mmol/L、ＰＥＧ化ＳＯＤ１〜１０mg/L、ア
デノシン１〜１０mmol/L、デキサメタゾン１〜２０mg/
L、ヒドロキシエチル澱粉（ＨＥＳ）１〜５(w/v)%、ナ
トリウムイオン１４０〜１４５mEq/L 、カリウムイオン
２〜６mEq/L および塩化物イオン９０〜９５mEq/L の組
成からなる灌流液であって、そのｐＨが７〜８、浸透圧
が３００〜３４０mOsm/Lである室温下保存用灌流液に関
する。

【０００９】また、当該室温下保存用灌流液を酸素化
し、灌流圧６０〜１００mmHgで灌流することを特徴とす
る臓器の室温下保存方法に関する。

【００１０】本発明で用いられるパーフルオロカーボン
化合物は、化学的に不活性で、酸素溶解性に優れ、室温
で液状のものであれば特に限定されない。かかるパーフ
ルオロカーボン化合物の好適な例としては、炭素数９〜
１２のパーフルオロ炭化水素、炭素数９〜１２のパーフ
ルオロ第三級アミン等が挙げられる。

【００１１】パーフルオロカーボン化合物の具体例とし
ては、例えばパーフルオロシクロアルカン、パーフルオ
ロアルキルシクロアルカン、パーフルオロシクロヘキサ
ン、パーフルオロデカリン、パーフルオロアルキルデカ
リン、パーフルオロアルキルテトラハイドロピラン、パ
ーフルオロアルキルテトラハイドロフラン、パーフルオ
ロアルカン、パーフルオロターシャリーアルキルアミ
ン、パーフルオロ−Ｎ，Ｎ−ジアルキルシクロヘキシル
アミン、パーフルオロアルキルピペリジン、パーフルオ
ロアルキルモルホリン、パーフルオロアダマンタン、パ
ーフルオロアルキルアダマンタン等（特開昭５０−６９
２１９号公報参照）が挙げられる。また、パーフルオロ
−Ｎ−メチルパーヒドロキノリン、パーフルオロ−Ｎ−
メチルデカハイドロイソキノリン、パーフルオロ−４−
メチルオクタハイドロキノリジン、パーフルオロ−３−
メチルオクタハイドロキノリジン、パーフルオロ−２−
メチルオクタハイドロキノリジン、パーフルオロ−１−
メチルオクタハイドロキノリジン、パーフルオロ−９ａ
−メチルオクタハイドロキノリジン、パーフルオロ−４
−エチルオクタハイドロキノリジン等も好ましいパーフ
ルオロカーボン化合物として例示される。

【００１２】パーフルオロカーボン化合物の濃度は、当
該灌流液中０．１〜１０(w/v)%であり、より好適には１
〜５(w/v)%である。

【００１３】本発明にて使用されるパーフルオロカーボ
ン化合物の酸素溶解性は、一般に液温３６℃において４
０〜６０(v/v)%、好ましくは４５〜５５(v/v)%である。

【００１４】当該パーフルオロカーボン化合物は、灌流
液の酸素運搬を目的として用いられ、酸素を高濃度に含
有する状態で臓器保存用に供される。従って、パーフル
オロカーボン化合物は予め高濃度に酸素を溶解させてお
くか、より好ましくは使用時に酸素を溶解させながら使
用に供される。

【００１５】本発明において、パーフルオロカーボン化
合物は乳剤の形態で使用され、好適にはパーフルオロカ
ーボン化合物が水中に分散した水中油型乳剤である。

【００１６】乳化剤としては高分子系非イオン性界面活
性剤、リン脂質等が用いられる。高分子非イオン系界面
活性剤としては分子量2,000 〜20,000のものが好適であ
り、例えばポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン
コポリマー、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリ
オキシエチレンヒマシ油誘導体等が挙げられる。また、
リン脂質としては卵黄リン脂質、大豆リン脂質等が挙げ
られる。乳化剤は、当該灌流液中１〜５(w/v)%となるよ
うに添加される。

【００１７】さらに所望により、炭素数８〜２２（好ま
しくは炭素数１４〜２０）の脂肪酸、またはこれらの生
理的に受け入れられる塩〔例：アルカリ金属塩（ナトリ
ウム塩、カリウム塩等）、モノグリセライド等〕等を乳
化補助剤として加えることができる。具体的には、例え
ばカプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン
酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、パルミト
レイン酸、オレイン酸、リノール酸、アラキドン酸、あ
るいはそれらのナトリウムまたはカリウム塩、もしくは
それらのモノグリセライド等が挙げられる。乳化補助剤
は、当該灌流液中０．００１〜０．１(w/v)%となるよう
に添加される。

【００１８】さらにグリセロールの如き等張化剤の使用
は結果として不要である。

【００１９】乳剤の調製は従来公知の方法で行えばよ
く、例えば特開昭５２−９６７２２号公報、特開昭５８
−２２５０１３号公報等に記載の方法等が例示される。

【００２０】当該乳剤は各成分を任意の順序に混合して
粗乳化し、適当な乳化機（例えば、マントンゴーリン型
乳化機）によって粒子径が０．３μｍ以下となるように
均質化することによって調製される。

【００２１】本発明の室温下保存用灌流液において、パ
ーフルオロカーボン（乳剤）以外の組成としては、グル
コース１〜２０mmol/L、インシュリン１０〜２００Ｕ/
L、アロプリノール０．１〜５mmol/L、ＰＥＧ化ＳＯＤ
１〜１０mg/L、アデノシン１〜１０mmol/L、デキサメタ
ゾン１〜２０mg/L、ヒドロキシエチル澱粉１〜５(w/v)
%、ナトリウムイオン１４０〜１４５mEq/L 、カリウム
イオン２〜６mEq/L および塩化物イオン９０〜９５mEq/
L である。特に好ましくは、グルコース５〜１５mmol/
L、インシュリン２０〜１００Ｕ/L、アロプリノール
０．５〜３mmol/L、ＰＥＧ化ＳＯＤ３〜７mg/L、アデノ
シン３〜７mmol/L、デキサメタゾン５〜１０mg/L、ヒド
ロキシエチル澱粉２〜４(w/v)%、ナトリウムイオン１４
０〜１４５mEq/L、カリウムイオン約４mEq/L および塩
化物イオン約９３mEq/L である。

【００２２】当該灌流液において、グルコースは組織の
エネルギー源として用いられ、同時に浸透圧を維持する
ためにも使用される。また、これに対応したインシュリ
ンも加える。

【００２３】アロプリノールとＰＥＧ化ＳＯＤは活性酸
素捕捉剤として用いられる。ここでＰＥＧ化ＳＯＤと
は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）をスーパーオキ
サイドジスムターゼ（ＳＯＤ）に化学結合させたもので
ある（特開昭62−115280号公報参照）。

【００２４】デキサメタゾンは膜安定化剤として用いら
れる。

【００２５】ヒドロキシエチル澱粉は分子量１万〜３５
万程度、好ましくは２０万〜３０万程度のものが例示さ
れる。また、置換度としては０．４〜０．７程度が例示
される。

【００２６】上記成分以外に、障害腎がconditioningさ
れる時の基質として、アミノ酸類を使用することもでき
る。さらに、緩衝液も使用することができ、具体的には
ＨＥＰＥＳ等が例示される。

【００２７】本発明の灌流液は、細胞外液により近づけ
るためにｐＨ７〜８とし、組織の浮腫を防ぐために浸透
圧３００〜３４０mOsm/Lとする。特にｐＨ約７．４、浸
透圧約３２０mOsm/Lであることが好ましい。

【００２８】本発明の灌流液の製法は特に限定されな
い。上記の成分を適宜混和することにより、本発明の灌
流液を調製することができる。

【００２９】次に、本発明の臓器の室温下保存方法は、
当該灌流液を酸素化し、灌流圧６０〜１００mmHgで灌流
することにより、移植臓器等の臓器を室温下（１０〜３
０℃、好ましくは約２４℃）で保存する方法である。

【００３０】灌流液の酸素化は公知の手法により行うこ
とができる。本発明においては、バブリング法、膜型人
工肺法等により酸素化を行うことが好ましい。

【００３１】臓器を灌流による物理的障害から保護し、
かつ十分な酸素や基質の供給を維持するためには、灌流
圧を６０〜１００mmHgにすることが必要である。灌流圧
が６０mmHg未満であると、灌流液の流量が不充分とな
り、一方、１００mmHgを越えると、保存臓器の血管障害
等を来すからである。

【００３２】この条件により、当該灌流液は、室温下に
おいて酸素分圧４５０mmHg以上で酸素を供給することが
できる。

【００３３】本発明の保存方法の対照となる臓器として
は、臓器移植における腎臓あるいは肝臓等が例示され
る。

【００３４】

【発明の効果】本発明の室温下保存用灌流液によれば、
安定した灌流圧を維持し、充分な酸素を供給できるた
め、室温下（１０〜３０℃、好ましくは約２４℃）で長
時間（１〜２０時間程度）にわたり移植臓器を保存・灌
流することができる。

【００３５】また、室温下で保存することにより、例え
ば移植臓器の代謝を抑制せずに維持することが可能にな
る。従って、保存臓器のviability を移植前に知り得る
という利点を有する。即ち、保存中の臓器のviability
を各種検査法により連続的にモニターしながら、限界ま
での長時間保存が可能となる。例えば、腎臓を保存する
場合には、利尿の程度、尿の色調、尿ｐＨや尿中ナトリ
ウム、カリウム値等の簡便かつ迅速な検査法等により、
保存腎臓のviability を判定することが可能となる。

【００３６】さらに、室温下保存法を行う目的の一つ
に、保存臓器や障害を受けた臓器のconditioning効果が
ある。本発明の灌流液を用いる臓器の室温下保存方法に
よれば、温阻血または冷却による障害を受けたヒトを含
む哺乳類動物の臓器を良好な状態にconditioningするこ
とが可能となる。

【００３７】

【実施例】本発明をさらに詳細に説明するために実施例
および実験例を挙げるが、本発明はこれらにより何ら限
定されるものではない。

【００３８】実施例１ ヒドロキシエチル澱粉およびアロプリノール（Ａ液
用）、グルコース、塩化ナトリウム、酪酸ナトリウムお
よびリン酸二水素カリウム（Ｂ液用）を各々精製水に溶
解した。Ａ液およびＢ液を混合し、アデノシンを添加、
溶解した。ＨＥＰＥＳ、硫酸マグネシウム、アミノ酸製
剤、ホスミシンの各水溶液を添加した。水酸化ナトリウ
ム溶液でｐＨを７．４に調整した。全量を合わせた後、
孔径０．２０μｍのメンブランフィルターにて加圧濾過
した。パーフルオロトリブチルアミン（商品名ＦＣ−４
３，ミドリ十字社製）、デキサメタゾン、インシュリン
およびＰＥＧ化ＳＯＤを無菌的に添加した。最終組成は
表１のようになる。

【００３９】

【表１】

【００４０】実験例１ 実施例１の灌流液を用いて、以下に示す実験を行った。 実験動物と腎摘出法 実験動物は、体重２．５〜３．５kgの家兎（日本白色種
・雌雄）を一定期間ケージ内で飼育した後に用いた。麻
酔は、耳静脈より、チアミラールナトリウム２０〜２５
mg／kgとヘパリンナトリウム１００単位／kgの静注によ
り導入し、エーテル麻酔で維持した。腹部正中切開後、
尿管に外径５Ｆｒのカテーテル（テルモ社製）を挿入固
定し、採尿ルートとした。次に、腎動脈および腎静脈を
剥離し、腎動脈に５Ｆｒのカテーテルを挿入後、腎静脈
を切断し、４℃の乳酸リンゲル液（ヘパリン５０００単
位／５００ml）で洗浄した。腎の重量を測定後、図１に
示される灌流回路に接続した。

【００４１】 灌流回路と灌流条件 ａ．灌流回路 図１において、振盪恒温槽１内には実施例１の灌流液２
の入った灌流液リザーバー３が載置され、灌流液２の温
度は一定に保持されている。灌流液リザーバー３中の灌
流液２は、ライン４を介してローラーポンプ５によって
汲み上げられ、膜型人工肺６〔HSO-03，メラシロックス
−Ｓ（登録商標）、泉工医科社製〕により灌流液２の酸
素化が行われ、圧力計７を備えたエアートラップ８に供
給される。エアートラップ８中の灌流液２は、臓器チャ
ンバー９中の灌流液２に浸漬された摘出腎１０に、腎動
脈に接続された動脈ライン１１を介して供給されてい
る。供給された灌流液２の一部は、摘出腎１０により濾
過されて、尿としてチューブ１２を介してメスシリンダ
ー１３に捕集され、残余の灌流液２は、ライン１４を介
して灌流液リザーバー３に回収される。

【００４２】ｂ．酸素化法 最初は灌流液リザーバー３内に直接酸素を吹き込むバブ
リング法により酸素化を行い、途中からはhollow fiber
型の膜型人工肺を使用する方法に変更した。バブリング
法では、多孔性のチューブを灌流液リザーバー３の灌流
液２中に浸漬し、酸素分圧が１５０mmHg以下にならぬよ
うに純酸素の流量を調節した。また、使用した膜型人工
肺６は、膜面積０．３ｍ² 、priming volume２０ml、最
大流量３００ml/minで、内径２００μｍ、膜厚１００μ
ｍのシリコンhollow fiberを３０００本束ね、ポリカー
ボネート樹脂で被覆したものである。酸素流量は１．０
Ｌ/minとした。

【００４３】ｃ．灌流圧と灌流方法 灌流保存における灌流による損傷を防ぎ、代謝を維持す
るための、必要十分な酸素や基質を供給するのに適切な
灌流圧を検討する目的で、５０mmHgと８０mmHgの群につ
いて検討した。１２時間まで灌流し、灌流液は６時間毎
に交換した。

【００４４】 実験群 実験群は温阻血時間と灌流圧により以下の６群に分け
た。 Ｉ群：灌流圧５０mmHg、温阻血０分群（ｎ＝５） II群：灌流圧８０mmHg、温阻血０分群（ｎ＝６） III 群：灌流圧８０mmHg、温阻血３０分群（ｎ＝６） 動脈血流遮断後、３０分間腹腔内に放置し、その後洗浄
を行った。 IV群：灌流圧８０mmHg、温阻血３５分群（ｎ＝８） 動脈血流遮断後、３５分間腹腔内に放置し、その後洗浄
を行った。 Ｖ群：灌流圧８０mmHg、温阻血４０分群（ｎ＝６） VI群：ＵＷ液内２４時間冷却（４℃）保存群（ｎ＝６） 他群と同様の操作で腎の剥離と、カニュレーションを施
行し、腎動脈血流遮断直後から４℃に冷却したＵＷ液内
に単純浸漬し、２４時間の保存後に灌流圧８０mmHgで、
１２時間まで室温下灌流を行った。Ｉ〜II群は、適切な
灌流圧を決定すると共に、室温下灌流保存法の可能性の
検討、およびIII 〜VI群のコントロールとして位置付け
られるものである。また、III 〜VI群は、機能判定およ
びconditioningの可能性を検討するものとして位置付け
られるものである。

【００４５】 検査項目と測定方法 １）灌流量：流量調節機能のあるローラーポンプ５（MP
-101、東京理科器機社製）の表示目盛による検量線グラ
フを作成し、流量を測定した。 ２）灌流圧：エアートラップ８に圧力計７（最小目盛５
mmHg、Aneroid Sphygmomanometer、NITIRIN 社製、０〜
500 mmHg）を設置して、連続的にモニターした。 ３）灌流液ガス分析（ｐＨ、酸素分圧、炭酸ガス分
圧）：全自動アナライザー（ABL-30、Radiomet社製）で
測定した。 ４）２時間毎の尿量：容量２０mlのメスシリンダー１３
（Pyrex 社製）を用いて測定した。 ５）尿ｐＨ、尿中電解質（ナトリウム、カリウム値）：
尿ｐＨは全自動アナライザー（ABL-30）で、電解質は日
立7150（日立社製）で測定した。 ６）灌流前後の腎の重量変化：最小目盛１ｇの台式秤量
計（ヤマト社製）を用いて測定した。 ７）腎の病理組織学的検査：灌流終了時に、ヘマトキシ
リン・エオジン（ＨＥ）染色および酵素組織化学染色で
観察した。後者は、アルカリフォスファターゼ（Ａｌ−
Ｐ）、酸フォスファターゼ（Ａｃ−Ｐ）、乳酸脱水素酵
素（ＬＤＨ）、コハク酸脱水素酵素（ＳＤＨ）、γ−グ
ルタミルトランスペプチダーゼ（γ−ＧＴＰ）について
検討した。 なお、数値は全て平均値±ＳＤで表し、有意差検定は、
unpaired t test （個体数が異なる２群間の有意差検定
法）にて行い、危険率５％以内を有意差ありとした。

【００４６】〔結果〕Ｉ群 初期灌流量は０．９１±０．０１ml/min/g腎であった。
しかし、経過中に回路内圧の上昇により、最終的には
０．３１±０．２７ml/min/g腎と約１／３に低下した。
腎の重量変化は、平均１９．２％増加した。５例中３例
は、回路内圧の上昇により、１２時間までの灌流が不可
能となった。一方、利尿は回路内圧の上昇を契機に出現
した。しかし、全例で利尿および回路内圧の調節が不良
で、実験の継続は困難であった。

【００４７】II群 初期流量は１．５８±０．１３ml/min/g腎であり、灌流
中もほぼ一定の流量を維持した。灌流液のｐＨは、ほぼ
設定値の７．４０前後を示し、利尿の程度や保存状態に
より多少の変化はあるものの、最低で７．３３△ｐＨ、
最高で７．４７△ｐＨの範囲の変動に留まった。灌流液
の酸素分圧は、４６５．８mmHgから８５０．０mmHgの間
で変動したが、４００mmHgを下回ることはなかった。全
例で灌流開始直後より透明な尿の流出を認め、全経過を
通じて一定の利尿が認められた。尿のｐＨは６時間後に
最低値の６．５５±０．１４△ｐＨを示したが、以後漸
増した。尿中ナトリウム値は、４時間後は最低の５５．
０±２２．９mEq/L で、以後漸増し、１２時間目では１
１３．７±２１．７mEq/L を示した。尿中カリウム値
は、最初の２時間で５０．５±６．４mEq/L と最高値を
示し、以後減少して、１２時間目では１９．３±９．０
mEq/L となった。摘出腎の重量は、灌流開始直後で１５
〜１９ｇであり、６例中３例は重量変化なく、２例で増
加、１例で減少した。平均重量増加率は＋８．７±１
１．１％であった。組織学的変化をＨＥ染色でみると、
糸球体の構築は良好に保たれ、尿細管上皮にも扁平化や
脱落の所見を認めなかった。また、酵素組織化学染色で
は、Ａｌ−Ｐ染色で、尿細管の胞体内に酵素反応が紫赤
色に濃染され、良好なviability を示した。これは他の
酵素染色でも同様の所見を認めた。以上の成績は、６例
全例を総括した成績である。しかし、この６例のうち１
例は他の５例と比較して尿組成の変動が大幅に異なって
いた。即ち、尿中ナトリウム値は、他の５例に比して全
経過を通じて明らかに低値であった。また、尿中カリウ
ム値も同様に高値であり、この傾向は尿ｐＨについても
同様であった。

【００４８】III 群 初期流量は１．６９±０．２０ml/min/g腎であり、灌流
中もほぼ一定の流量を維持した。終了時の流量は１．７
２±０．１ml/min/g腎となった。灌流液のｐＨは７．３
１〜７．４０△ｐＨの間で変動した。灌流液の酸素分圧
はII群と同様に４００mmHgを下回ることはなかった。ま
た、炭酸ガス分圧は、２．４〜６．１mmHgの間で変動し
た。全例で、開始後間もなく利尿を認め、II群と同様に
全経過を通じて一定の利尿を認めた。尿ｐＨは４時間目
には最低値の６．６７±０．１３△ｐＨに達し、以後漸
増した。尿中ナトリウム値は、４時間後に最低の５０．
７±１０．７mEq/L で以後漸増し、１２時間目では１２
２．０±１６．９mEq/L となった。尿中カリウム値も４
時間に最高値の５６．０±７．７mEq/L となり、以後漸
減した。摘出腎の重量は、灌流開始直後で１１〜１９ｇ
であり、１例が灌流前後も変化なく、４例が増加、１例
が減少した。平均の重量増加率は９．２±９．２％であ
った。ＨＥ染色では、糸球体・尿細管共にII群と同様、
その構築は良好に保たれていたが、尿細管胞体の扁平化
がわずかに認められた。酵素組織化学染色では、Ａｌ−
Ｐ染色で、尿細管の胞体内の染色性はII群とほぼ同じで
あった。また、他の酵素染色も同様であった。

【００４９】IV群 ８例中２例で殆ど利尿を認めず、１例で利尿を認めたも
のの、尿組織が灌流液の組成とほぼ同じであったため、
脱落例とし、５例について検討した。５例の初期流量は
１．８５±０．３９ml/min/g腎であり、全経過を通して
良好な流量が得られた。灌流液のｐＨの１２時間の変動
は７．２３〜７．４１△ｐＨと、II、III 群に比してや
や低くなる例があったが、大部分は７．３０△ｐＨ以上
で留まった。灌流液の酸素分圧は、４００mmHgを下回る
事はなかった。また、炭酸ガス分圧は２．７〜６．７mm
Hgと低値で経過した。５例は灌流後間もなく利尿を認め
たが、流出量はII群に比較して少なくIII 群とほぼ同じ
傾向が認められた。尿ｐＨは６．８８±０．１７△ｐＨ
であり、６時間まで徐々に低下し、６．６９±０．１４
△ｐＨとなったが、以後上昇に転じ、１２時間目では
６．９１±０．１６△ｐＨであった。尿中ナトリウム値
は、４時間後に最低の７６．２±１６．５mEq/L となっ
たが次第に増加し、１２時間後は１１７．０±１０．９
mEq/Lに達した。尿中カリウム値は最初の２時間で４
２．６±１２．２mEq/L と最高値を示し、以後漸減し
た。摘出腎の重量は、不変が１例、増加が３例であり、
減少したのは１例であった。平均の増加率は１３．２±
１１．３％であった。III ，IV群の成績ではいずれの値
もII群との間に有意差はなかった。ＨＥ染色では、糸球
体の構築は良好に保たれたが、III 群と同様に、尿細管
の胞体の扁平化が軽度に認められた。また、上皮の脱落
は認められなかった。酵素組織化学染色では、Ａｌ−Ｐ
染色で、染色性が劣ったが、完全に失われた訳ではなか
った。これは他の染色法でも同様の傾向であった。

【００５０】Ｖ群 ６例中３例では利尿不良で尿の各種組成は灌流液の組成
に近かったので、分析には利尿が良好な３例についての
み検討した。即ち、温阻血４０分では、半数の腎が不可
逆的な機能不全をきたした。良好例３例と不良例３例と
を、灌流量で比較すると、初期流量では良好例が１．９
２±０．４１ml/min/g腎であったのに対して、不良例で
は１．３５±０．１４ml/min/g腎と明らかに低下してお
り、終了時の流量は、前者で１．８１±０．４０ml/min
/g腎、後者で１．５１±０．３１ml/min/g腎であった。
利尿良好例３例では、灌流開始後間もなく利尿を認め、
最初の２時間では１０．４±５．６mlであり、１２時間
の総尿量は５０．０±１３．１mlに達し、むしろ他の群
より多い傾向を認めた。良好例の尿ｐＨは、６．９５±
０．２２△ｐＨであり、６時間までは徐々に低下し６．
８８±０．１５△ｐＨとなったが、以後上昇し、１２時
間目では７．０５±０．０７△ｐＨと７．００△ｐＨを
越えた。これは、II群と比べて有意（Ｐ＜０．０５）に
高値であった。尿中ナトリウム値は、３例のばらつきが
大きく、最初の２時間で８９．７±４４．４mEq/L であ
った。以後、４時間後に８６．３±３１．５mEq/L とや
や回復の微をみせたものの、次第に上昇し、１２時間後
には、灌流液のナトリウム組成に近い１３０．７±１
７．６mEq/L となった。即ち、尿細管の再吸収能の破綻
が示唆された。尿中カリウム値は、最初の２時間で３
５．７±２５．８mEq/L であり、４時間後まではほぼ一
定に経過し、以後漸減して１２時間後には１２．３±
７．６mEq/L に低下した。しかし、ナトリウム、カリウ
ムいずれの値もばらつきが大きいため、II群とは有意差
がなかった。比較的数値の良好な１例を除いての検定で
は５％の危険率で有意差を認めた。摘出腎の重量の変化
は、不変が１例、増加が２例であり、平均の増加率は
７．７±５．６％であった。良好例のＨＥ染色では、糸
球体の構築は良好に維持されており、尿細管は胞体の扁
平化をわずかに認めるものの、全体の変化は軽微であっ
た。一方、酵素組織化学染色のうちのＡｌ−Ｐ染色で
は、その染色性は極めて不良で、尿細管の胞体内に淡く
染まるのみで、細胞膜の維持機構の破綻が示された。

【００５１】VI群 ６例の初期流量は２．８８±０．８８ml/min/g腎とII〜
Ｖ群に比べて非常に多かったが（Ｐ＜０．０１）、これ
は、２４時間の浸漬保存中に腎が脱水により軽くなった
ため、計算上、流量が多くなったものである。従って、
腎１個当たりの流量は、２６〜２８ml／min であり、他
の群とほぼ同じであった。また、終了時の流量は、逆に
腎の重量が増加したために、１．２３±０．２０ml/min
/g腎と低流量になったが、腎１個当たりの流量は、初期
の１個当たりの流量と変わらなかった。灌流液のｐＨ
は、７．２８〜７．４２△ｐＨの間で変動し、他の群と
差は認められなかった。灌流液の酸素分圧は、４００mm
Hgを下回ることはなかった。また、炭酸ガス分圧も２．
６〜６．８mmHgと低い分圧で経過した。本群では、II〜
Ｖ群に比して尿量が多く、この傾向は全経過を通じて認
められた（Ｐ＜０．０５）。尿ｐＨは、７．０１±０．
１０△ｐＨで、以後経時的に上昇し、１２時間目には
７．２１±０．０３△ｐＨであった。いずれもII群に比
して有意に高値であった（Ｐ＜０．０１）。尿中ナトリ
ウム値は、最初の２時間で１１７．７±２０．２mEq/L
を示し、以後経時的に増加した。II群に比して有意（Ｐ
＜０．０１）に高値であった。尿中カリウム値は、ナト
リウム値と同様に、２時間値を最高値に経時的に低下し
た。II群に比して有意（Ｐ＜０．０１）に低値であっ
た。摘出腎の重量変化は、極めて特徴的で６例全例が大
幅に増加した。その増加率は、冷却保存前と常温灌流後
間で＋６１．６±３６．１％であり、冷却保存後の灌流
直前と灌流後間で、１５４．７±１１０．４％であっ
た。これは２４時間の冷却保存中に発現した脱水による
重量減と、灌流中に出現する輸出入血管の著明な浮腫に
よる重量の増加であった。ＨＥ染色では、糸球体は正常
であり、一部に尿細管胞体の扁平化を認めるものの、全
体としての構築は良く保たれていた。本群で特徴的なの
は、輸出入血管の著明な浮腫状変化であり、これが灌流
終了後の腎重量増加の重要な原因と考えられた。一方、
酵素組織化学染色のＡｌ−Ｐ染色では、II群に比して劣
るものの、IV群とほぼ同等の染色性が保たれていた。

【００５２】以上のＩ〜VI群の実験結果から、以下のこ
とがわかった。安定した酸素供給と基質の供給のため
に、８０mmHgの灌流圧としたところ、１２時間あるいは
それ以上の長時間保存の可能性が示された。利尿の程
度、尿の色調、尿ｐＨ、尿中ナトリウム、カリウム値の
簡便かつ迅速な検査法により、保存された腎のviabilit
y 判定が可能であった。温阻血群の結果（尿ｐＨ、尿中
ナトリウム、カリウム値の変動が４〜６時間で最も良好
な値を示した）から、本方法による障害腎のconditioni
ngが可能であることが示唆され、家兎腎の温阻血限界は
４０分前後と考えられた。

【００５３】実験例２ 実施例１の灌流液を用い、以下に示す実験を行った。実
験動物は、体重１５〜２０kgの雌ブタ（ｎ＝５）を用い
た。麻酔および灌流液の酸素化は、実験例１に準じて行
った。全麻下に開腹した後、門脈、肝動脈、肝上部およ
び肝下部下大静脈を遮断し、門脈よりチュービングして
灌流した。肝下部下大静脈にチュービングして灌流液を
回収し、閉鎖回路として肝を灌流保存しながら、５０％
肝切除施行した。計２時間灌流した後、血流を再開し
た。下大静脈血、門脈血はバイオポンプで外脛静脈に返
血した。血流再開３０分後に肝生検を行ない、組織学的
に検討した。また、実験終了直後、２４時間後、４８時
間後に採血し、肝機能、凝固・線溶系因子の変動を検討
した。その結果、全例において長期の生存が得られた。
組織学的にはＨＥ染色で肝の構築は保たれており、肝細
胞にも異常を認めず、Ａｌ−Ｐ染色でも肝細胞の機能温
存が証明された。Ｔ．Ｂｉｌ（血清総ビリルビン値）は
０．５mg／dL 以下で推移し、ＧＯＴは２４時間後に最
高値をとり（平均２６５）、ＧＰＴは観察期間中全て４
０以下であった。凝固・線溶系因子にも異常を認めなか
った。以上より、肝切除時における本灌流法の肝保護の
有用性が示された。

【図面の簡単な説明】

【図１】灌流回路の構成を示す概略図である。

【符号の説明】

２ 灌流液 １０ 摘出腎（臓器）

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 パーフルオロカーボン化合物０．１〜１
   ０(w/v)%、グルコース１〜２０mmol/L、インシュリン１
   ０〜２００Ｕ/L、アロプリノール０．１〜５mmol/L、Ｐ
   ＥＧ化ＳＯＤ１〜１０mg/L、アデノシン１〜１０mmol/
   L、デキサメタゾン１〜２０mg/L、ヒドロキシエチル澱
   粉１〜５(w/v)%、ナトリウムイオン１４０〜１４５mEq/
   L 、カリウムイオン２〜６mEq/L および塩化物イオン９
   ０〜９５mEq/L の組成からなる灌流液であって、そのｐ
   Ｈが７〜８、浸透圧が３００〜３４０mOsm/Lであること
   を特徴とする室温下保存用灌流液。
2. 【請求項２】 請求項１記載の灌流液を酸素化し、臓器
   に灌流圧６０〜１００mmHgで灌流することを特徴とする
   臓器の室温下保存方法。