JPH0630626B2 - インド−ル産生能検査用試薬 - Google Patents
インド−ル産生能検査用試薬Info
- Publication number
- JPH0630626B2 JPH0630626B2 JP18340787A JP18340787A JPH0630626B2 JP H0630626 B2 JPH0630626 B2 JP H0630626B2 JP 18340787 A JP18340787 A JP 18340787A JP 18340787 A JP18340787 A JP 18340787A JP H0630626 B2 JPH0630626 B2 JP H0630626B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- alcohol
- reagent
- indole
- water
- benzyl alcohol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 48
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 35
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 24
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims description 22
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 30
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 claims description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 12
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 4-(dimethylamino)benzaldehyde Chemical compound CN(C)C1=CC=C(C=O)C=C1 BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 241000588771 Morganella <proteobacterium> Species 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- DGPBVJWCIDNDPN-UHFFFAOYSA-N 2-(dimethylamino)benzaldehyde Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=C1C=O DGPBVJWCIDNDPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588697 Enterobacter cloacae Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000588772 Morganella morganii Species 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 102100040653 Tryptophan 2,3-dioxygenase Human genes 0.000 description 1
- 101710136122 Tryptophan 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 229940076266 morganella morganii Drugs 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N31/00—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods
- G01N31/22—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、微生物のインドール産生能検査用試薬に関す
る。さらに詳しくは、本発明は、マイクロプレートを用
いるインドール産生能検査に適した試薬に関する。
る。さらに詳しくは、本発明は、マイクロプレートを用
いるインドール産生能検査に適した試薬に関する。
［従来の技術］ 病原菌同定のための生化学的性状検査法の１つとして、
グルコース非発酵性グラム陰性桿菌に関するインドール
産生能の検査がある。この検査は、細菌がトリプトファ
ンからインドールを産生できるかどうかを調べるための
テストである。インドールが産生したか否かはｐ−ジメ
チルアミノベンズアルデヒドを含む試薬を用いて判定
し、このような試薬としてエールリッヒ試薬とコバック
試薬がある。
グルコース非発酵性グラム陰性桿菌に関するインドール
産生能の検査がある。この検査は、細菌がトリプトファ
ンからインドールを産生できるかどうかを調べるための
テストである。インドールが産生したか否かはｐ−ジメ
チルアミノベンズアルデヒドを含む試薬を用いて判定
し、このような試薬としてエールリッヒ試薬とコバック
試薬がある。
検査は通常試験管内で行なわれるが、マイクロプレート
を用いる場合には、それらの試薬中に含まれる溶媒がマ
イクロプレート本体を溶かしたり（エールリッヒ試薬中
のエーテルまたはキシレン）、また水層と分離して上層
のウェル周辺部に発色が起ったりして（コバック試薬中
のイソアミルアルコール）検査を有効に行なうことがで
きない。
を用いる場合には、それらの試薬中に含まれる溶媒がマ
イクロプレート本体を溶かしたり（エールリッヒ試薬中
のエーテルまたはキシレン）、また水層と分離して上層
のウェル周辺部に発色が起ったりして（コバック試薬中
のイソアミルアルコール）検査を有効に行なうことがで
きない。
［発明が解決しようとする問題点］ 本発明は、上記従来のインドール産生能検査用試薬の欠
点を解決せんとするものであり、マイクロプレートに影
響を与えず、しかも液層全体に発色してその発色反応が
観察しやすいような試薬を提供することを目的とする。
点を解決せんとするものであり、マイクロプレートに影
響を与えず、しかも液層全体に発色してその発色反応が
観察しやすいような試薬を提供することを目的とする。
［問題点を解決するための手段］ 上記目的は、以下の構成からなる本発明により達成され
る。
る。
１）ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒドと濃塩酸とア
ルコール成分とを含有するインドール産生能検査用試薬
であって、該アルコール成分はベンジルアルコールと水
溶性アルコールとの混液であることを特徴とするインド
ール産生能検査用試薬。
ルコール成分とを含有するインドール産生能検査用試薬
であって、該アルコール成分はベンジルアルコールと水
溶性アルコールとの混液であることを特徴とするインド
ール産生能検査用試薬。
２）ベンジルアルコールと水溶性アルコールは、インド
ール産生能があることが検知されたときに、液層全体が
発色しうる量で混合されてなる第１項記載の試薬。
ール産生能があることが検知されたときに、液層全体が
発色しうる量で混合されてなる第１項記載の試薬。
３）該水溶性アルコールはエチルアルコールである第１
項に記載の試薬。
項に記載の試薬。
４）該水溶性アルコールはベンジルアルコール１容量部
に対し、１〜９容量部の割合で含有されてなる第１項な
いし第３項のいずれかに記載の試薬。
に対し、１〜９容量部の割合で含有されてなる第１項な
いし第３項のいずれかに記載の試薬。
インドール産生能検査は、培地中に含まれるトリプトフ
ァンから細菌が盛っているトリプトファナーゼを触媒と
してインドールが産生されることを調べるものであり、
インドールの生成を試薬により判定するものである。イ
ンドールは試薬中に含まれるアルデヒドと結合して赤紫
色の複合体となり、アルコール層に抽出される。
ァンから細菌が盛っているトリプトファナーゼを触媒と
してインドールが産生されることを調べるものであり、
インドールの生成を試薬により判定するものである。イ
ンドールは試薬中に含まれるアルデヒドと結合して赤紫
色の複合体となり、アルコール層に抽出される。
本発明者はこのアルコール層を構成するアルコールとし
て本発明の目的を達成しうるものを調べた結果、ベンジ
ルアルコールが最も優れた効果を達成しうることを見出
した。ただし、ベンジルアルコールは水に難溶性であ
り、水層に白濁を生じさせるという欠点を有するので、
ベンジルアルコールの水溶性アルコール溶液を用いるこ
とによって本発明の目的が達成される。
て本発明の目的を達成しうるものを調べた結果、ベンジ
ルアルコールが最も優れた効果を達成しうることを見出
した。ただし、ベンジルアルコールは水に難溶性であ
り、水層に白濁を生じさせるという欠点を有するので、
ベンジルアルコールの水溶性アルコール溶液を用いるこ
とによって本発明の目的が達成される。
水溶性アルコールは、培養液とベンジルアルコールとを
白濁させずに混和するために添加するものであるから、
この目的を果たすことができるものであればメタノー
ル、エタノール、ブタノール等が適宜使用される。
白濁させずに混和するために添加するものであるから、
この目的を果たすことができるものであればメタノー
ル、エタノール、ブタノール等が適宜使用される。
ベンジルアルコールの使用量は同定しようとする菌の種
類に応じて大幅に異なるので種類に応じて変更する必要
があり、例えばMorganella morganii IID 602ではｐ−
ジメチルアミノベンズアルデヒド１ｇあたり、好ましく
は1.5〜7.5ml、さらに好ましくは２〜６ml添加する。
類に応じて大幅に異なるので種類に応じて変更する必要
があり、例えばMorganella morganii IID 602ではｐ−
ジメチルアミノベンズアルデヒド１ｇあたり、好ましく
は1.5〜7.5ml、さらに好ましくは２〜６ml添加する。
また、水溶性アルコールはベンジルアルコール１容量部
あたり好ましくは１〜９容量部、更に好ましくは1.5〜
2.5容量部添加する。１〜９容量部の範囲であれば白濁
を良好に抑えることができ、かつ菌が陽性の場合、十分
な発色を得ることができる。
あたり好ましくは１〜９容量部、更に好ましくは1.5〜
2.5容量部添加する。１〜９容量部の範囲であれば白濁
を良好に抑えることができ、かつ菌が陽性の場合、十分
な発色を得ることができる。
水溶性アルコールとしてエタノールを使用した場合のベ
ンジルアルコールとエタノールの混合比は次のとおりで
ある。
ンジルアルコールとエタノールの混合比は次のとおりで
ある。
ベンジルアルコール：エタノール＝100〜50：０〜50
（％）の溶液の場合は、反応が陽性の場合、強い発色を
呈するが、白濁が強く、吸光度等機器による測定は困難
である。
（％）の溶液の場合は、反応が陽性の場合、強い発色を
呈するが、白濁が強く、吸光度等機器による測定は困難
である。
ベンジルアルコール：エタノール＝50〜10：50〜90
（％）の溶液の場合は反応性が強く、ベンジルアルコー
ルによる白濁も抑えられており、判定に適している。
（％）の溶液の場合は反応性が強く、ベンジルアルコー
ルによる白濁も抑えられており、判定に適している。
ベンジルアルコール：エタノール＝10〜０：90〜100
（％）の溶液の場合は白濁はみられないが、反応性が従
来のものより弱い。
（％）の溶液の場合は白濁はみられないが、反応性が従
来のものより弱い。
ベンジルアルコールとエタノールの最適混合比はベンジ
ルアルコール：エタノール＝40〜30：60〜70（％）であ
る。
ルアルコール：エタノール＝40〜30：60〜70（％）であ
る。
尚、本発明の試薬を用いるインドール産生能検査におい
ては、インドール産生能検査に通常用いられる培地を使
用することができる。例えばトリプティケースペプトン
ブイヨン（ＢＢＬ）やトリプトン培地（Difco）などが
ある。
ては、インドール産生能検査に通常用いられる培地を使
用することができる。例えばトリプティケースペプトン
ブイヨン（ＢＢＬ）やトリプトン培地（Difco）などが
ある。
また検査は通常の操作に従って行なわれる。
以下本発明を実施例及び比較例をあげて詳しく説明す
る。
る。
実施例１ 表１に示す組成を有する乾燥培地の入ったマイクロプレ
ートにマックファーランドNO.3.0に調整したMorganella
morganii IID 602（インドール弱陽性）及びEnterobac
ter cloacae IAM 1624（インドール陰性）50μを分注
して37℃で４時間培養した。
ートにマックファーランドNO.3.0に調整したMorganella
morganii IID 602（インドール弱陽性）及びEnterobac
ter cloacae IAM 1624（インドール陰性）50μを分注
して37℃で４時間培養した。
培養後、表２に示す組成を有する試薬50μを滴下して
発色させ、吸光度の測定を行なった。
発色させ、吸光度の測定を行なった。
表２ 試薬組成 ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド 0.5ｇ 濃塩酸 2.5ml ベンジルアルコール 2.5ml エタノール 5.0ml 比較例１ 表３に示す組成のコバック試薬を用いたこと以外は、実
施例１と同様の操作を行なった。上記結果を第１図及び
第２図に示す。
施例１と同様の操作を行なった。上記結果を第１図及び
第２図に示す。
表３ 試薬組成 ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド 0.5ｇ 濃塩酸 2.5ml イソアミルアルコール 7.5ml 第１図に示されるように、本発明の試薬を用いた検査に
おいては、580nm付近での吸光度が大きい。
おいては、580nm付近での吸光度が大きい。
［発明の効果］ 以上詳しく説明したように、本発明によればインドール
産生能検査用の新規な試薬が提供される。
産生能検査用の新規な試薬が提供される。
この試薬を用いてマイクロプレートを使用するインドー
ル産生能検査を行なうと、従来の試薬のようにマイクロ
プレートを溶かすこともなく、また水層と分離すること
もないので、発色が均一に起こる。従ってマイクロプレ
ートを使用するインドール産生能検査を可能にし、かつ
操作を容易にする。
ル産生能検査を行なうと、従来の試薬のようにマイクロ
プレートを溶かすこともなく、また水層と分離すること
もないので、発色が均一に起こる。従ってマイクロプレ
ートを使用するインドール産生能検査を可能にし、かつ
操作を容易にする。
また、本発明の試薬を用いると、従来の試薬を用いた場
合よりも発色が強いので、マイクロプレートを用いる場
合のみならず試験管を用いる検査においても有効に用い
られる。
合よりも発色が強いので、マイクロプレートを用いる場
合のみならず試験管を用いる検査においても有効に用い
られる。
第１図及び第２図は、実施例１及び比較例１においてマ
イクロプレートを使用して行なったインドール産生能検
査における発色を吸光度測定した結果を示すグラフであ
って、第１図は試料としてMorganella morganii IID 60
2を、第２図はEnterobacter cloacae IAM 1624を使用し
た検査の結果を示すものである。
イクロプレートを使用して行なったインドール産生能検
査における発色を吸光度測定した結果を示すグラフであ
って、第１図は試料としてMorganella morganii IID 60
2を、第２図はEnterobacter cloacae IAM 1624を使用し
た検査の結果を示すものである。
Claims (4)
- 【請求項１】ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒドと濃
塩酸とアルコール成分とを含有するインドール産生能検
査用試薬であって、該アルコール成分はベンジルアルコ
ールと水溶性アルコールとの混液であることを特徴とす
るインドール産生能検査用試薬。 - 【請求項２】ベンジルアルコールと水溶性アルコール
は、インドール産生能があることが検知されたときに、
液層全体が発色しうる量で混合されてなる特許請求の範
囲第１項記載の試薬。 - 【請求項３】該水溶性アルコールはエチルアルコールで
ある特許請求の範囲第１項に記載の試薬。 - 【請求項４】該水溶性アルコールはベンジルアルコール
１容量部に対し、１〜９容量部の割合で含有されてなる
特許請求の範囲第１項ないし第３項のいずれかに記載の
試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18340787A JPH0630626B2 (ja) | 1987-07-24 | 1987-07-24 | インド−ル産生能検査用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18340787A JPH0630626B2 (ja) | 1987-07-24 | 1987-07-24 | インド−ル産生能検査用試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6428559A JPS6428559A (en) | 1989-01-31 |
| JPH0630626B2 true JPH0630626B2 (ja) | 1994-04-27 |
Family
ID=16135239
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18340787A Expired - Lifetime JPH0630626B2 (ja) | 1987-07-24 | 1987-07-24 | インド−ル産生能検査用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0630626B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4424712A1 (de) * | 1994-07-13 | 1996-01-18 | Basf Ag | Verwendung von Benzaldehyden zum Markieren von Kohlenwasserstoffen |
-
1987
- 1987-07-24 JP JP18340787A patent/JPH0630626B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6428559A (en) | 1989-01-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1239049B1 (de) | Wasserstoffperoxid-Bestimmung mittels Oxidasen und Lanthanoid-Liganden-Komplexen | |
| Ramos et al. | Enhanced chemiluminescence biosensor for the determination of phenolic compounds and hydrogen peroxide | |
| Chen et al. | A homogeneous capillary fluorescence imprinted nanozyme intelligent sensing platform for high sensitivity and visual detection of triclocarban | |
| US3630847A (en) | Diagnostic agent for use in the determination of hydroperoxides and of peroxidate-active substances | |
| US5998128A (en) | Use of porphyrins in instrumental detection methods | |
| Garcia-Campana et al. | Potential of chemiluminescence and bioluminescence in organic analysis | |
| CN109856068B (zh) | 一种基于Mannich反应的甲醛检测试剂及检测方法 | |
| JP4434015B2 (ja) | 化学発光増強剤 | |
| JPH0630626B2 (ja) | インド−ル産生能検査用試薬 | |
| CN108801993A (zh) | 一种快速高选择性分析次氯酸的试剂盒 | |
| Sciutto et al. | Immunochemical micro imaging analyses for the detection of proteins in artworks | |
| CN104360051A (zh) | 一种电化学发光免疫分析的底物及其应用 | |
| CN112608983B (zh) | 一种外泌体的纸基检测方法 | |
| CN110672572B (zh) | 一种SYBR Green衍生物及其在细胞线粒体DNA荧光成像中的应用 | |
| CN108623522A (zh) | 一种快速高选择性检测次氯酸的方法 | |
| CN102495205A (zh) | 小分子有机物的量子点标记抗体多组分非竞争均相免疫分析方法 | |
| Lathika et al. | Determination of urinary oxalate using banana oxalate oxidase: comparison with immobilized enzyme | |
| CN113552101A (zh) | 一种二胺检测试剂盒 | |
| CN114895021B (zh) | 基于链置换-表面临近杂交的多抗生素可视化检测试纸条及其制备方法和应用 | |
| CN117802268B (zh) | 一种比率荧光纸基传感器及用于rna病毒检测的应用和试剂盒 | |
| CN112557365B (zh) | 一种荧光探针及其在dna检测中的应用 | |
| Tishler et al. | Simple screening test for qualitative detection of increased delta-aminolevulinic acid in urine. | |
| CN110108686A (zh) | 利用石墨烯量子点作为荧光探针检测辣根过氧化物酶浓度的方法 | |
| CN121740849A (zh) | 一种检测色氨酸的三色可视化试剂盒及其构建和检测方法 | |
| SU1397808A1 (ru) | Способ определени аргинина |