JPH06329533A - リポソーム製剤の製造法 - Google Patents
リポソーム製剤の製造法Info
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- JPH06329533A JPH06329533A JP5118741A JP11874193A JPH06329533A JP H06329533 A JPH06329533 A JP H06329533A JP 5118741 A JP5118741 A JP 5118741A JP 11874193 A JP11874193 A JP 11874193A JP H06329533 A JPH06329533 A JP H06329533A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】分子内に遊離または塩を形成したカルボキシル
基およびアミノ基を有する化合物の水溶液を、リン脂質
に攪拌しながら少量ずつ加えて練合後、水性溶媒で希釈
することを特徴とするリポソーム製剤の製造法。 【効果】本発明により、分子内に遊離または塩を形成し
たカルボキシル基およびアミノ基を有する化合物をリポ
ソーム内に簡便かつ高い封入率で内包することができ
る。
基およびアミノ基を有する化合物の水溶液を、リン脂質
に攪拌しながら少量ずつ加えて練合後、水性溶媒で希釈
することを特徴とするリポソーム製剤の製造法。 【効果】本発明により、分子内に遊離または塩を形成し
たカルボキシル基およびアミノ基を有する化合物をリポ
ソーム内に簡便かつ高い封入率で内包することができ
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、分子内に遊離または塩
を形成したカルボキシル基およびアミノ基を有する化合
物を、リポソーム内に簡便にかつ高い封入効率で内包す
る方法に関する。
を形成したカルボキシル基およびアミノ基を有する化合
物を、リポソーム内に簡便にかつ高い封入効率で内包す
る方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】医薬の分野において、薬物の治療効果を
高める手段の一つにリポソーム製剤がある。リポソーム
への水溶性薬物の内包方法は、これまでＢａｎｇｈａｍ
〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（J.
Mol.Biol. ）, 13, 238(1965)〕らのリポソーム調製
法、エタノール注入法〔ジャーナル・オブ・セル・バイ
オロジー（J.Cell Biol.）, 66,621(1975)〕、フレンチ
プレス法〔フェブス・レターズ（FEBS Lett.）, 99,210
(1979)〕、凍結融解法〔アーチブズ・オブ・バイオケミ
ストリー・アンド・バイオフィッジクス（Arch.Bichem.
Biophys.）, 212,186(1981) 〕、逆相蒸発法〔プロシー
ディング・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・
サイエンシズ・ユー・エス・エー（Proc.Natl.Acad.Sc
i.USA),75,4194(1978) 〕が知られている。
高める手段の一つにリポソーム製剤がある。リポソーム
への水溶性薬物の内包方法は、これまでＢａｎｇｈａｍ
〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（J.
Mol.Biol. ）, 13, 238(1965)〕らのリポソーム調製
法、エタノール注入法〔ジャーナル・オブ・セル・バイ
オロジー（J.Cell Biol.）, 66,621(1975)〕、フレンチ
プレス法〔フェブス・レターズ（FEBS Lett.）, 99,210
(1979)〕、凍結融解法〔アーチブズ・オブ・バイオケミ
ストリー・アンド・バイオフィッジクス（Arch.Bichem.
Biophys.）, 212,186(1981) 〕、逆相蒸発法〔プロシー
ディング・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・
サイエンシズ・ユー・エス・エー（Proc.Natl.Acad.Sc
i.USA),75,4194(1978) 〕が知られている。
【０００３】しかしながら、Ｂａｎｇｈａｍらの方法で
は、粒子径の分布が広く、リポソーム水相部への物質封
入率が低い等の問題があり、エタノール注入法では、物
質封入率が低く、エタノールのリポソームからの除去が
困難等の問題がある。フレンチプレス法では、フレンチ
プレスという特殊な装置を必要とし、凍結融解法では、
粒子径の分布が広く、また、糖、高いイオン強度、２価
カチオン、高濃度の電解質を使用するため保持効率が低
下する等の問題がある。逆相蒸発法では、エーテル等の
引火性の有機溶媒を使用しなければならず、操作の安全
の上で問題がある。また、Ｂａｎｇｈａｍらの方法およ
び凍結融解法では薬物の水溶液を一度に加えて練合せず
リポソームを調製している。
は、粒子径の分布が広く、リポソーム水相部への物質封
入率が低い等の問題があり、エタノール注入法では、物
質封入率が低く、エタノールのリポソームからの除去が
困難等の問題がある。フレンチプレス法では、フレンチ
プレスという特殊な装置を必要とし、凍結融解法では、
粒子径の分布が広く、また、糖、高いイオン強度、２価
カチオン、高濃度の電解質を使用するため保持効率が低
下する等の問題がある。逆相蒸発法では、エーテル等の
引火性の有機溶媒を使用しなければならず、操作の安全
の上で問題がある。また、Ｂａｎｇｈａｍらの方法およ
び凍結融解法では薬物の水溶液を一度に加えて練合せず
リポソームを調製している。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、分子
内に遊離または塩を形成したカルボキシル基およびアミ
ノ基を有する化合物をリポソーム内に含有するリポソー
ム製剤を、簡便にかつ特殊な装置を使用せずに、高い封
入率で製造する方法を提供することにある。
内に遊離または塩を形成したカルボキシル基およびアミ
ノ基を有する化合物をリポソーム内に含有するリポソー
ム製剤を、簡便にかつ特殊な装置を使用せずに、高い封
入率で製造する方法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、分子内に遊離
または塩を形成したカルボキシル基およびアミノ基を有
する化合物の水溶液を、リン脂質に攪拌しながら少量ず
つ加えて練合後、水性溶媒で希釈することを特徴とする
リポソーム製剤の製造法に関する。本発明の方法により
リポソームに内包される化合物としては、分子内に遊離
または塩を形成したカルボキシル基およびアミノ基を有
する化合物であればいずれでもよく、例えば、下記構造
式で示されるＬ−ロイコボリン、グリシルグリシン、グ
ルタチオン、分子内に遊離または塩を形成したカルボキ
シル基およびアミノ基を有するマイトマイシン（ＭＭ）
Ｃ，Ｄ誘導体等があげられる。
または塩を形成したカルボキシル基およびアミノ基を有
する化合物の水溶液を、リン脂質に攪拌しながら少量ず
つ加えて練合後、水性溶媒で希釈することを特徴とする
リポソーム製剤の製造法に関する。本発明の方法により
リポソームに内包される化合物としては、分子内に遊離
または塩を形成したカルボキシル基およびアミノ基を有
する化合物であればいずれでもよく、例えば、下記構造
式で示されるＬ−ロイコボリン、グリシルグリシン、グ
ルタチオン、分子内に遊離または塩を形成したカルボキ
シル基およびアミノ基を有するマイトマイシン（ＭＭ）
Ｃ，Ｄ誘導体等があげられる。
【０００６】
【化１】
【０００７】本発明の方法に用いるリン脂質はそのまま
用いてもよく、またクロロホルム等の溶媒に溶解後、溶
媒を留去して得られる薄膜等を用いてもよい。リン脂質
としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタ
ノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジン
酸、ホスファチジルグリセロール、リゾホスファチジル
コリン、スフィンゴミエリン、卵黄レシチン、大豆レシ
チン等の天然または合成のリン脂質、水素添加リン脂質
またはグリセロ糖脂質等が単独あるいは組み合わせて用
いられるが、ホスファチジルコリンとホスファチジン酸
の組合せが好適に用いられる。
用いてもよく、またクロロホルム等の溶媒に溶解後、溶
媒を留去して得られる薄膜等を用いてもよい。リン脂質
としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタ
ノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジン
酸、ホスファチジルグリセロール、リゾホスファチジル
コリン、スフィンゴミエリン、卵黄レシチン、大豆レシ
チン等の天然または合成のリン脂質、水素添加リン脂質
またはグリセロ糖脂質等が単独あるいは組み合わせて用
いられるが、ホスファチジルコリンとホスファチジン酸
の組合せが好適に用いられる。
【０００８】本発明の方法において、分子内に遊離また
は塩を形成したカルボキシル基およびアミノ基を有する
化合物を、少量ずつリン脂質に攪拌しながら加えて練合
する方法としては、例えば、リン脂質を入れたナス型フ
ラスコにガラスビーズを入れ、化合物の水溶液をリン脂
質１ｇ当たり０．０１〜２ｍｌずつ５〜１０回に分けて
添加または滴下して攪拌しながら練合する方法、リン脂
質を入れた乳鉢等に化合物の水溶液をリン脂質１ｇ当た
り０．０１〜２ｍｌずつ５〜１０回に分けて添加または
滴下して、乳棒等で攪拌しながら練合する方法等があげ
られる。
は塩を形成したカルボキシル基およびアミノ基を有する
化合物を、少量ずつリン脂質に攪拌しながら加えて練合
する方法としては、例えば、リン脂質を入れたナス型フ
ラスコにガラスビーズを入れ、化合物の水溶液をリン脂
質１ｇ当たり０．０１〜２ｍｌずつ５〜１０回に分けて
添加または滴下して攪拌しながら練合する方法、リン脂
質を入れた乳鉢等に化合物の水溶液をリン脂質１ｇ当た
り０．０１〜２ｍｌずつ５〜１０回に分けて添加または
滴下して、乳棒等で攪拌しながら練合する方法等があげ
られる。
【０００９】リン脂質に加える化合物の水溶液の濃度
は、用いる化合物の水に対する溶解度により変化するた
め化合物が析出しない濃度であればとくに制限はない
が、濃度が高いほど高い封入率が得られる。用いられる
化合物の水溶液の量は、リン脂質１ｇ当たり０．１〜１
０ｍｌ、好ましくは０．５〜２ｍｌである。また、必要
に応じて、リン脂質と共に、膜安定化剤としてコレステ
ロール等のステロール類、抗酸化剤としてトコフェロー
ル等、荷電物質としてステアリルアミン、ジセチルホス
フェート、ガングリオシド等を用いてもよい。
は、用いる化合物の水に対する溶解度により変化するた
め化合物が析出しない濃度であればとくに制限はない
が、濃度が高いほど高い封入率が得られる。用いられる
化合物の水溶液の量は、リン脂質１ｇ当たり０．１〜１
０ｍｌ、好ましくは０．５〜２ｍｌである。また、必要
に応じて、リン脂質と共に、膜安定化剤としてコレステ
ロール等のステロール類、抗酸化剤としてトコフェロー
ル等、荷電物質としてステアリルアミン、ジセチルホス
フェート、ガングリオシド等を用いてもよい。
【００１０】封入する化合物の水溶液を少量ずつリン脂
質に攪拌しながら加えて練合後、水性溶媒を加えてリポ
ソームを形成させる。加える水性溶媒としては、例え
ば、蒸留水、食塩水、グルコース水溶液またはリン酸緩
衝液、トリス−塩酸緩衝液等の緩衝液等がリン脂質１ｇ
当たり１０〜１０００ｍｌ、好ましくは２０〜５００ｍ
ｌ用いられる。
質に攪拌しながら加えて練合後、水性溶媒を加えてリポ
ソームを形成させる。加える水性溶媒としては、例え
ば、蒸留水、食塩水、グルコース水溶液またはリン酸緩
衝液、トリス−塩酸緩衝液等の緩衝液等がリン脂質１ｇ
当たり１０〜１０００ｍｌ、好ましくは２０〜５００ｍ
ｌ用いられる。
【００１１】また、リン酸、酢酸、クエン酸等の緩衝液
を構成する物質、塩化ナトリウム、グルコース、グリセ
リン等の等張化剤、アスコルビン酸、グルタチオン等の
抗酸化剤、クロルブタノール、パラベン等の防腐剤等
を、封入する化合物とともに、または、水性溶媒ととも
に用いることによってリポソームの主に水層にこれらの
添加物を共存させることができる。
を構成する物質、塩化ナトリウム、グルコース、グリセ
リン等の等張化剤、アスコルビン酸、グルタチオン等の
抗酸化剤、クロルブタノール、パラベン等の防腐剤等
を、封入する化合物とともに、または、水性溶媒ととも
に用いることによってリポソームの主に水層にこれらの
添加物を共存させることができる。
【００１２】本発明の方法においてリポソーム内に内包
されなかった化合物は、遠心分離、各種クロマトグラフ
ィー等の手段で除去することができる。また、孔径100n
m のポリカーボネート膜を用いてエクストルーダ〔ライ
ペックス・バイオメンブランス(Lipex Biomembranes)
社製〕によりサイジングを行なうことによってリポソー
ムの粒径を整えることができる。
されなかった化合物は、遠心分離、各種クロマトグラフ
ィー等の手段で除去することができる。また、孔径100n
m のポリカーボネート膜を用いてエクストルーダ〔ライ
ペックス・バイオメンブランス(Lipex Biomembranes)
社製〕によりサイジングを行なうことによってリポソー
ムの粒径を整えることができる。
【００１３】本発明の方法により得られるリポソーム製
剤はそのままでも使用できるが、使用目的、保存目的等
によりマンニトール、ラクトース、グリシン等の賦形剤
を加え凍結乾燥することもできる。本発明の方法により
得られるリポソーム製剤は注射剤として用いるのが一般
的であるが、経口剤、点鼻剤、点眼剤、経皮剤、坐剤、
吸入剤等として加工して使用することもできる。
剤はそのままでも使用できるが、使用目的、保存目的等
によりマンニトール、ラクトース、グリシン等の賦形剤
を加え凍結乾燥することもできる。本発明の方法により
得られるリポソーム製剤は注射剤として用いるのが一般
的であるが、経口剤、点鼻剤、点眼剤、経皮剤、坐剤、
吸入剤等として加工して使用することもできる。
【００１４】以下に本発明の実施例、参考例および試験
例を示す。なお、以下の実施例および参考例において、
マイトマイシン誘導体である化合物Ａおよび化合物１〜
８の構造は以下の通りである。
例を示す。なお、以下の実施例および参考例において、
マイトマイシン誘導体である化合物Ａおよび化合物１〜
８の構造は以下の通りである。
【００１５】
【化２】
【００１６】
実施例１ 大豆ホスファチジルコリン４５ｍｇ、ホスファチジン酸
５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約６ｇをナス型フラ
スコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪拌して脂
質を溶解した後、ロータリーエバポレーターでクロロホ
ルムを留去した。得られた脂質薄膜にグルタチオン水溶
液（２００ｍｇ／ｍｌ）５０μｌを１０μｌずつ５回に
分けて加え、よく攪拌練合した。次いで、蒸留水を０．
４５ｍｌ加え、攪拌してリポソームを形成した。
５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約６ｇをナス型フラ
スコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪拌して脂
質を溶解した後、ロータリーエバポレーターでクロロホ
ルムを留去した。得られた脂質薄膜にグルタチオン水溶
液（２００ｍｇ／ｍｌ）５０μｌを１０μｌずつ５回に
分けて加え、よく攪拌練合した。次いで、蒸留水を０．
４５ｍｌ加え、攪拌してリポソームを形成した。
【００１７】実施例２ 大豆ホスファチジルコリン４５ｍｇ、ホスファチジン酸
５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約６ｇをナス型フラ
スコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪拌して脂
質を溶解した後、ロータリーエバポレーターでクロロホ
ルムを留去した。得られた脂質薄膜にグリシルグリシン
水溶液（８６ｍｇ／ｍｌ）５０μｌを１０μｌずつ５回
に分けて加え、よく攪拌練合した。次いで、２．２％食
塩水を０．４５ｍｌ加え、攪拌してリポソームを形成し
た。
５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約６ｇをナス型フラ
スコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪拌して脂
質を溶解した後、ロータリーエバポレーターでクロロホ
ルムを留去した。得られた脂質薄膜にグリシルグリシン
水溶液（８６ｍｇ／ｍｌ）５０μｌを１０μｌずつ５回
に分けて加え、よく攪拌練合した。次いで、２．２％食
塩水を０．４５ｍｌ加え、攪拌してリポソームを形成し
た。
【００１８】実施例３ 大豆ホスファチジルコリン４５ｍｇ、ホスファチジン酸
５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約６ｇをナス型フラ
スコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪拌して脂
質を溶解した後、ロータリーエバポレーターでクロロホ
ルムを留去した。得られた脂質薄膜に化合物Ａ〔ケミカ
ル・アンド・ファーマシューティカル・ブレチン（Che
m. Pharm. Bull.）,37,1128（1989）〕（１００ｍｇ／
ｍｌ）を含む水溶液５０μｌを１０μｌずつ５回に分け
て加え、よく攪拌練合した。次いで、０．５％食塩水を
０．４５ｍｌ加え、攪拌してリポソームを形成した。
５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約６ｇをナス型フラ
スコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪拌して脂
質を溶解した後、ロータリーエバポレーターでクロロホ
ルムを留去した。得られた脂質薄膜に化合物Ａ〔ケミカ
ル・アンド・ファーマシューティカル・ブレチン（Che
m. Pharm. Bull.）,37,1128（1989）〕（１００ｍｇ／
ｍｌ）を含む水溶液５０μｌを１０μｌずつ５回に分け
て加え、よく攪拌練合した。次いで、０．５％食塩水を
０．４５ｍｌ加え、攪拌してリポソームを形成した。
【００１９】実施例４ 大豆ホスファチジルコリン２７０ｍｇ、ホスファチジン
酸３０ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約６ｇをナス型
フラスコに入れた。クロロホルム５ｍｌを加え、攪拌し
て脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターでクロ
ロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に化合物Ａ（４
０ｍｇ／ｍｌ）を含む０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７．０）０．５ｍｌを０．１ｍｌずつ５回に分けて加
え、よく攪拌練合した。次いで、リン酸緩衝液９．５ｍ
ｌを加え、攪拌してリポソームを形成した。
酸３０ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約６ｇをナス型
フラスコに入れた。クロロホルム５ｍｌを加え、攪拌し
て脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターでクロ
ロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に化合物Ａ（４
０ｍｇ／ｍｌ）を含む０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７．０）０．５ｍｌを０．１ｍｌずつ５回に分けて加
え、よく攪拌練合した。次いで、リン酸緩衝液９．５ｍ
ｌを加え、攪拌してリポソームを形成した。
【００２０】実施例５ 大豆ホスファチジルコリン４５ｍｇ、ホスファチジン酸
５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約６ｇをナス型フラ
スコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪拌して脂
質を溶解した後、ロータリーエバポレーターでクロロホ
ルムを留去した。得られた脂質薄膜に化合物１（特開昭
６０−２５５７８９）（１００ｍｇ／ｍｌ）を含む０．
０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）５０μｌを１０μｌ
ずつ５回に分けて加え、よく攪拌練合した。次いで、
０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．４５ｍｌを
加え、攪拌してリポソームを形成した。
５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約６ｇをナス型フラ
スコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪拌して脂
質を溶解した後、ロータリーエバポレーターでクロロホ
ルムを留去した。得られた脂質薄膜に化合物１（特開昭
６０−２５５７８９）（１００ｍｇ／ｍｌ）を含む０．
０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）５０μｌを１０μｌ
ずつ５回に分けて加え、よく攪拌練合した。次いで、
０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．４５ｍｌを
加え、攪拌してリポソームを形成した。
【００２１】実施例６ 大豆ホスファチジルコリン２２．５ｍｇ、ホスファチジ
ン酸２．５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約３ｇをナ
ス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪
拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターで
クロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に化合物２
（特開昭６０−２５５７８９）（３５ｍｇ／ｍｌ）を含
む０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２５μｌを５
μｌずつ５回に分けて加え、よく攪拌練合した。次い
で、０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．２２５
ｍｌを加え、攪拌してリポソームを形成した。
ン酸２．５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約３ｇをナ
ス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪
拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターで
クロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に化合物２
（特開昭６０−２５５７８９）（３５ｍｇ／ｍｌ）を含
む０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２５μｌを５
μｌずつ５回に分けて加え、よく攪拌練合した。次い
で、０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．２２５
ｍｌを加え、攪拌してリポソームを形成した。
【００２２】実施例７ 大豆ホスファチジルコリン２２．５ｍｇ、ホスファチジ
ン酸２．５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約３ｇをナ
ス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪
拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターで
クロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に化合物３
（特開昭６０−２５５７８９）（１００ｍｇ／ｍｌ）を
含む０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２５μｌを
５μｌずつ５回に分けて加え、よく攪拌練合した。次い
で、０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．２２５
ｍｌを加え、攪拌してリポソームを形成した。
ン酸２．５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約３ｇをナ
ス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪
拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターで
クロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に化合物３
（特開昭６０−２５５７８９）（１００ｍｇ／ｍｌ）を
含む０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２５μｌを
５μｌずつ５回に分けて加え、よく攪拌練合した。次い
で、０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．２２５
ｍｌを加え、攪拌してリポソームを形成した。
【００２３】実施例８ 大豆ホスファチジルコリン２２．５ｍｇ、ホスファチジ
ン酸２．５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約３ｇをナ
ス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪
拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターで
クロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に化合物４
（ＷＯ８８／０１６２２）（１２ｍｇ／ｍｌ）を含む
０．０５Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２５μｌを５
μｌずつ５回に分けて加え、よく攪拌練合した。次い
で、０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．２２５
ｍｌを加え、攪拌してリポソームを形成した。
ン酸２．５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約３ｇをナ
ス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪
拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターで
クロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に化合物４
（ＷＯ８８／０１６２２）（１２ｍｇ／ｍｌ）を含む
０．０５Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２５μｌを５
μｌずつ５回に分けて加え、よく攪拌練合した。次い
で、０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．２２５
ｍｌを加え、攪拌してリポソームを形成した。
【００２４】実施例９ 大豆ホスファチジルコリン２２．５ｍｇ、ホスファチジ
ン酸２．５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約３ｇをナ
ス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪
拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターで
クロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に化合物５
（ＷＯ８８／０１６２２）（３０ｍｇ／ｍｌ）を含む
０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７）２５μｌを５μｌず
つ５回に分けて加え、よく攪拌練合した。次いで、０．
０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．２２５ｍｌを加
え、攪拌してリポソームを形成した。
ン酸２．５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約３ｇをナ
ス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪
拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターで
クロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に化合物５
（ＷＯ８８／０１６２２）（３０ｍｇ／ｍｌ）を含む
０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７）２５μｌを５μｌず
つ５回に分けて加え、よく攪拌練合した。次いで、０．
０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．２２５ｍｌを加
え、攪拌してリポソームを形成した。
【００２５】実施例１０ 大豆ホスファチジルコリン９００ｍｇ、ホスファチジン
酸１５０ｍｇ、コレステロール２５０ｍｇ、直径７ｍｍ
のガラスビーズ約２５ｇをナス型フラスコに入れた。ク
ロロホルム２ｍｌを加え、攪拌して脂質を溶解した後、
ロータリーエバポレーターでクロロホルムを留去した。
得られた脂質薄膜に化合物Ａ（１００ｍｇ／ｍｌ）を含
む０．０１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍｌ
を２００μｌずつ５回に分けて加え、よく攪拌練合し
た。次いで、４．９ｇの乳糖を含む０．０１Ｍトリス−
塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）４９ｍｌを加え、攪拌してリ
ポソームを形成した。
酸１５０ｍｇ、コレステロール２５０ｍｇ、直径７ｍｍ
のガラスビーズ約２５ｇをナス型フラスコに入れた。ク
ロロホルム２ｍｌを加え、攪拌して脂質を溶解した後、
ロータリーエバポレーターでクロロホルムを留去した。
得られた脂質薄膜に化合物Ａ（１００ｍｇ／ｍｌ）を含
む０．０１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）１ｍｌ
を２００μｌずつ５回に分けて加え、よく攪拌練合し
た。次いで、４．９ｇの乳糖を含む０．０１Ｍトリス−
塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）４９ｍｌを加え、攪拌してリ
ポソームを形成した。
【００２６】実施例１１ 大豆ホスファチジルコリン４５ｍｇ、ホスファチジン酸
５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約６ｇをナス型フラ
スコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪拌して脂
質を溶解した後、ロータリーエバポレーターでクロロホ
ルムを留去した。得られた脂質薄膜にＬ−ロイコボリン
水溶液（１００ｍｇ／ｍｌ）５０μｌを１０μｌずつ５
回に分けて加え、よく攪拌練合した。次いで、蒸留水
０．４５ｍｌを加え、攪拌してリポソームを形成した。
５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約６ｇをナス型フラ
スコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪拌して脂
質を溶解した後、ロータリーエバポレーターでクロロホ
ルムを留去した。得られた脂質薄膜にＬ−ロイコボリン
水溶液（１００ｍｇ／ｍｌ）５０μｌを１０μｌずつ５
回に分けて加え、よく攪拌練合した。次いで、蒸留水
０．４５ｍｌを加え、攪拌してリポソームを形成した。
【００２７】実施例１２ 実施例１１で得られたリポソームから陽イオン交換樹脂
（ダウエックス５０Ｗ−Ｘａ、５０−１００メッシュ）
４０ｇを用いて遊離の化合物Ａを除去した。得られたリ
ポソーム懸濁液を２ｍｌずつガラスバイアルに分注し、
凍結乾燥を行ないリポソーム製剤を得た。
（ダウエックス５０Ｗ−Ｘａ、５０−１００メッシュ）
４０ｇを用いて遊離の化合物Ａを除去した。得られたリ
ポソーム懸濁液を２ｍｌずつガラスバイアルに分注し、
凍結乾燥を行ないリポソーム製剤を得た。
【００２８】比較例１ 大豆ホスファチジルコリン４５ｍｇ、ホスファチジン酸
５ｍｇをナス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌ
を加え、攪拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポ
レーターでクロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜
にグルタチオン（２０ｍｇ／ｍｌ）０．５ｍｌを一度に
加え、脂質と薬物を練合せずにリポソームを形成した。
５ｍｇをナス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌ
を加え、攪拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポ
レーターでクロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜
にグルタチオン（２０ｍｇ／ｍｌ）０．５ｍｌを一度に
加え、脂質と薬物を練合せずにリポソームを形成した。
【００２９】比較例２ 大豆ホスファチジルコリン２７０ｍｇ、ホスファチジン
酸３０ｍｇをナス型フラスコに入れた。クロロホルム５
ｍｌを加え、攪拌して脂質を溶解した後、ロータリーエ
バポレーターでクロロホルムを留去した。得られた脂質
薄膜に化合物Ａ（２ｍｇ／ｍｌ）を含む０．０１Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）１０ｍｌを一度に加え、脂質と
薬物を練合せずにリポソームを形成した。
酸３０ｍｇをナス型フラスコに入れた。クロロホルム５
ｍｌを加え、攪拌して脂質を溶解した後、ロータリーエ
バポレーターでクロロホルムを留去した。得られた脂質
薄膜に化合物Ａ（２ｍｇ／ｍｌ）を含む０．０１Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）１０ｍｌを一度に加え、脂質と
薬物を練合せずにリポソームを形成した。
【００３０】比較例３ 大豆ホスファチジルコリン２２．５ｍｇ、ホスファチジ
ン酸２．５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約３ｇをナ
ス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪
拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターで
クロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に分子内に
カルボキシル基を有しない化合物６（ＷＯ８８／０１６
２２）（１５ｍｇ／ｍｌ）を含む０．０５Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）２５μｌを５μｌずつ５回に分けて加
え、よく攪拌練合した。次いで、０．０５Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）を０．２２５ｍｌ加え、攪拌してリポ
ソームを形成した。
ン酸２．５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約３ｇをナ
ス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪
拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターで
クロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に分子内に
カルボキシル基を有しない化合物６（ＷＯ８８／０１６
２２）（１５ｍｇ／ｍｌ）を含む０．０５Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）２５μｌを５μｌずつ５回に分けて加
え、よく攪拌練合した。次いで、０．０５Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）を０．２２５ｍｌ加え、攪拌してリポ
ソームを形成した。
【００３１】比較例４ 大豆ホスファチジルコリン２２．５ｍｇ、ホスファチジ
ン酸２．５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約３ｇをナ
ス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪
拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターで
クロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に分子内に
カルボキシル基を有しない化合物７（ＷＯ８８／０１６
２２）（１００ｍｇ／ｍｌ）を含む０．０５Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）２５μｌを５μｌずつ５回に分けて
加え、よく攪拌練合した。次いで、０．０５Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）を０．２２５ｍｌ加え、攪拌してリ
ポソームを形成した。
ン酸２．５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約３ｇをナ
ス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪
拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターで
クロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に分子内に
カルボキシル基を有しない化合物７（ＷＯ８８／０１６
２２）（１００ｍｇ／ｍｌ）を含む０．０５Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）２５μｌを５μｌずつ５回に分けて
加え、よく攪拌練合した。次いで、０．０５Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）を０．２２５ｍｌ加え、攪拌してリ
ポソームを形成した。
【００３２】比較例５ 大豆ホスファチジルコリン２２．５ｍｇ、ホスファチジ
ン酸２．５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約３ｇをナ
ス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪
拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターで
クロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に分子内に
カルボキシル基を有しない化合物８（ＷＯ８８／０１６
２２）（５０ｍｇ／ｍｌ）を含む０．０５Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）２５μｌを５μｌずつ５回に分けて加
え、よく攪拌練合した。次いで、０．０５Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）を０．２２５ｍｌ加え、攪拌してリポ
ソームを形成した。
ン酸２．５ｍｇ、直径７ｍｍのガラスビーズ約３ｇをナ
ス型フラスコに入れた。クロロホルム２ｍｌを加え、攪
拌して脂質を溶解した後、ロータリーエバポレーターで
クロロホルムを留去した。得られた脂質薄膜に分子内に
カルボキシル基を有しない化合物８（ＷＯ８８／０１６
２２）（５０ｍｇ／ｍｌ）を含む０．０５Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）２５μｌを５μｌずつ５回に分けて加
え、よく攪拌練合した。次いで、０．０５Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）を０．２２５ｍｌ加え、攪拌してリポ
ソームを形成した。
【００３３】試験例 実施例および比較例の化合物のリポソーム中への内包率
を次のように求めた。実施例１〜１１および比較例１〜
５で得られたリポソームをセファロースＣＬ−６Ｂを用
いるゲル濾過（１．５×１５ｃｍ）により遊離化合物と
リポソームを分離した。リポソーム画分に５％トリトン
Ｘ−１００を添加しリポソームを破壊後、高速液体クロ
マトグラフィー〔ＨＰＬＣ；YMC pack AM-312 ODS, 6×
150mm，移動相 0.05M リン酸緩衝液(pH7.0):アセトニ
トリル: メタノール(75:17:8)，流速 1.2ml/分，検出
波長 254nm〕によりリポソームに内包された化合物量お
よび遊離の化合物量を定量し、下式により内包率を求め
た。その結果を第１表に示す。
を次のように求めた。実施例１〜１１および比較例１〜
５で得られたリポソームをセファロースＣＬ−６Ｂを用
いるゲル濾過（１．５×１５ｃｍ）により遊離化合物と
リポソームを分離した。リポソーム画分に５％トリトン
Ｘ−１００を添加しリポソームを破壊後、高速液体クロ
マトグラフィー〔ＨＰＬＣ；YMC pack AM-312 ODS, 6×
150mm，移動相 0.05M リン酸緩衝液(pH7.0):アセトニ
トリル: メタノール(75:17:8)，流速 1.2ml/分，検出
波長 254nm〕によりリポソームに内包された化合物量お
よび遊離の化合物量を定量し、下式により内包率を求め
た。その結果を第１表に示す。
【００３４】
【数１】
【００３５】
【表１】
【００３６】第１表に示したように、本発明の方法によ
り得られたリポソーム製剤は、脂質と薬物を練合しなか
った製剤（比較例１および２）よりも高い内包率を示し
た。また、封入する薬物が分子内に遊離または塩を形成
したカルボキシル基およびアミノ基を有しない化合物で
ある場合は、分子内に遊離または塩を形成したカルボキ
シル基およびアミノ基を有する化合物である場合と比較
して高い内包率を示さなかった。
り得られたリポソーム製剤は、脂質と薬物を練合しなか
った製剤（比較例１および２）よりも高い内包率を示し
た。また、封入する薬物が分子内に遊離または塩を形成
したカルボキシル基およびアミノ基を有しない化合物で
ある場合は、分子内に遊離または塩を形成したカルボキ
シル基およびアミノ基を有する化合物である場合と比較
して高い内包率を示さなかった。
【００３７】
【発明の効果】本発明により、分子内に遊離または塩を
形成したカルボキシル基およびアミノ基を有する化合物
をリポソーム内に簡便かつ高い封入率で内包する方法が
提供される。
形成したカルボキシル基およびアミノ基を有する化合物
をリポソーム内に簡便かつ高い封入率で内包する方法が
提供される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 河野 一通 静岡県駿東郡長泉町下土狩1504−２ (72)発明者 河西 政次 神奈川県藤沢市鵠沼松ケ岡３−12−15
Claims (2)
- 【請求項１】 分子内に遊離または塩を形成したカルボ
キシル基およびアミノ基を有する化合物の水溶液を、リ
ン脂質に攪拌しながら少量ずつ加えて練合後、水性溶媒
で希釈することを特徴とするリポソーム製剤の製造法。 - 【請求項２】 分子内に遊離または塩を形成したカルボ
キシル基およびアミノ基を有する化合物が、Ｌ−ロイコ
ボリン、グリシルグリシン、グルタチオン、分子内に遊
離または塩を形成したカルボキシル基およびアミノ基を
有するマイトマイシン誘導体から選ばれる請求項１記載
のリポソーム製剤の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5118741A JPH06329533A (ja) | 1993-05-20 | 1993-05-20 | リポソーム製剤の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5118741A JPH06329533A (ja) | 1993-05-20 | 1993-05-20 | リポソーム製剤の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06329533A true JPH06329533A (ja) | 1994-11-29 |
Family
ID=14743921
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5118741A Withdrawn JPH06329533A (ja) | 1993-05-20 | 1993-05-20 | リポソーム製剤の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06329533A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001524990A (ja) * | 1998-07-01 | 2001-12-04 | ネオファーム、インコーポレイティッド | リポソームに封入されたタキサンの投与方法 |
| WO2002034252A1 (en) * | 2000-10-26 | 2002-05-02 | Senju Pharmaceutical Co., Ltd. | Drug composition comprising dipeptydyl aldehyde derivative |
| US7314637B1 (en) | 1999-06-29 | 2008-01-01 | Neopharm, Inc. | Method of administering liposomal encapsulated taxane |
| WO2012105485A1 (ja) | 2011-01-31 | 2012-08-09 | マルホ株式会社 | 高分子逆ミセルを含む皮膚用組成物およびその製造方法 |
| US8298573B2 (en) | 2003-02-03 | 2012-10-30 | Jia-Ai Zhang | Stable sterile filterable liposomal encapsulated taxane and other antineoplastic drugs |
-
1993
- 1993-05-20 JP JP5118741A patent/JPH06329533A/ja not_active Withdrawn
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001524990A (ja) * | 1998-07-01 | 2001-12-04 | ネオファーム、インコーポレイティッド | リポソームに封入されたタキサンの投与方法 |
| JP2004059590A (ja) * | 1998-07-01 | 2004-02-26 | Neopharm Inc | リポソームに封入されたタキサンの投与方法 |
| US7314637B1 (en) | 1999-06-29 | 2008-01-01 | Neopharm, Inc. | Method of administering liposomal encapsulated taxane |
| WO2002034252A1 (en) * | 2000-10-26 | 2002-05-02 | Senju Pharmaceutical Co., Ltd. | Drug composition comprising dipeptydyl aldehyde derivative |
| US7572833B2 (en) | 2000-10-26 | 2009-08-11 | Senju Pharmaceutical Co., Ltd. | Drug composition comprising dipeptidyl aldehyde derivative |
| US8298573B2 (en) | 2003-02-03 | 2012-10-30 | Jia-Ai Zhang | Stable sterile filterable liposomal encapsulated taxane and other antineoplastic drugs |
| WO2012105485A1 (ja) | 2011-01-31 | 2012-08-09 | マルホ株式会社 | 高分子逆ミセルを含む皮膚用組成物およびその製造方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20000801 |