JPH06329549A - インターロイキン１２のｐ４０サブユニットを含んでなる医薬 - Google Patents
インターロイキン１２のｐ４０サブユニットを含んでなる医薬Info
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- JPH06329549A JPH06329549A JP6119521A JP11952194A JPH06329549A JP H06329549 A JPH06329549 A JP H06329549A JP 6119521 A JP6119521 A JP 6119521A JP 11952194 A JP11952194 A JP 11952194A JP H06329549 A JPH06329549 A JP H06329549A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 天然または組み換えの、場合によっては修飾
した、哺乳類ＩＬ−12のｐ40サブユニットを含んでなる
医薬。 【効果】 この医薬品は、特に免疫系の調節異常に関連
する疾患の治療に使用するのに好適である。
した、哺乳類ＩＬ−12のｐ40サブユニットを含んでなる
医薬。 【効果】 この医薬品は、特に免疫系の調節異常に関連
する疾患の治療に使用するのに好適である。
Description
【０００１】
【発明の背景】産業上の利用分野 本発明は、インターロイキン12のｐ40サブユニットを含
んでなる医薬品に関する。この医薬は、免疫系の調節異
常に関連した疾患の治療に特に有用である。
んでなる医薬品に関する。この医薬は、免疫系の調節異
常に関連した疾患の治療に特に有用である。
【０００２】従来の技術 免疫反応は、種々のＴ細胞集団によって維持されてい
る。免疫反応の型に応じ、１型のＴヘルパー細胞（ＴＨ
１）または２型のＴヘルパー細胞（ＴＨ２）のいずれか
によってＴ細胞の介助が優先的に提供される。今日まで
知られている限り、ＴＨ１細胞は、異なるサイトカイン
を生成する点でＴＨ２細胞とは特に異なっている。
る。免疫反応の型に応じ、１型のＴヘルパー細胞（ＴＨ
１）または２型のＴヘルパー細胞（ＴＨ２）のいずれか
によってＴ細胞の介助が優先的に提供される。今日まで
知られている限り、ＴＨ１細胞は、異なるサイトカイン
を生成する点でＴＨ２細胞とは特に異なっている。
【０００３】Dunn et al. (J. Immunol. 142:3847 ff,1
989)は、早くも１９８９年にＴＨ１クローンを補助細胞
およびＩＬ−２の存在下で培養すると、ＴＨ１クローン
がガンマ−ＩＦＮを生成することを証明した。Germann
et al. (Eur. J. Immunol.,8:1857-1862, 1991)は、Ｔ
Ｈ１細胞によるガンマ−ＩＦＮの合成には可溶性の媒介
物質が必要なことを証明した。Germann 等がＴＳＦと命
名した媒介物質は、ネズミＩＬ−12と同一であるという
ことが比較研究によって明らかにされた。最近、Mengel
et al.(Eur. J. Immunol., 22:3173-3178,1992)も同様
に、活性化したマウスＢ細胞リンパ腫ラインＡ−２０の
上清において、Ｔ細胞におけるガンマ−ＩＦＮの生成を
促進する可溶性因子について報告した。Mengelによって
Ａ−２０の上清で説明されたこの可溶性因子は、Wolf,
S.F. et al.(J. Immunol., 156:3074, 1991)によってい
わゆる「ヒトナチュラルキラー細胞促進因子」（ＮＫＳ
Ｆ：human natural killer cell stimulatory factor）
と機能的に比較され、ヒトＩＬ−12のネズミ類似体であ
ると考えられている。ＩＬ−12およびＮＫＳＦは同一で
ある可能性があるが、両方ともガンマ−ＩＦＮの合成を
促進することが知られている。ＩＬ−12（ＮＫＳＦに対
応）の機能は、天然ではガンマ−ＩＦＮの生成促進には
限られない。中でも、ＩＬ−12（ＮＫＳＦに対応）は、
ナチュラルキラー細胞（いわゆるＮＫまたはＬＧＬ細
胞）の機能およびＩｇＥの生成にも影響を及ぼし、ＩＬ
−12によって誘発される休止抹梢単核細胞の増殖を増加
させる。
989)は、早くも１９８９年にＴＨ１クローンを補助細胞
およびＩＬ−２の存在下で培養すると、ＴＨ１クローン
がガンマ−ＩＦＮを生成することを証明した。Germann
et al. (Eur. J. Immunol.,8:1857-1862, 1991)は、Ｔ
Ｈ１細胞によるガンマ−ＩＦＮの合成には可溶性の媒介
物質が必要なことを証明した。Germann 等がＴＳＦと命
名した媒介物質は、ネズミＩＬ−12と同一であるという
ことが比較研究によって明らかにされた。最近、Mengel
et al.(Eur. J. Immunol., 22:3173-3178,1992)も同様
に、活性化したマウスＢ細胞リンパ腫ラインＡ−２０の
上清において、Ｔ細胞におけるガンマ−ＩＦＮの生成を
促進する可溶性因子について報告した。Mengelによって
Ａ−２０の上清で説明されたこの可溶性因子は、Wolf,
S.F. et al.(J. Immunol., 156:3074, 1991)によってい
わゆる「ヒトナチュラルキラー細胞促進因子」（ＮＫＳ
Ｆ：human natural killer cell stimulatory factor）
と機能的に比較され、ヒトＩＬ−12のネズミ類似体であ
ると考えられている。ＩＬ−12およびＮＫＳＦは同一で
ある可能性があるが、両方ともガンマ−ＩＦＮの合成を
促進することが知られている。ＩＬ−12（ＮＫＳＦに対
応）の機能は、天然ではガンマ−ＩＦＮの生成促進には
限られない。中でも、ＩＬ−12（ＮＫＳＦに対応）は、
ナチュラルキラー細胞（いわゆるＮＫまたはＬＧＬ細
胞）の機能およびＩｇＥの生成にも影響を及ぼし、ＩＬ
−12によって誘発される休止抹梢単核細胞の増殖を増加
させる。
【０００４】ＩＬ−12は、ｐ35およびｐ40と称される２
種類の異なるサブユニットからなることも知られている
（Podlasky,F.J.et.al.(1991)Arch.Biochem. Biophys.
Vol.294, No.1,pp.230-237 ）。またネズミＩＬ−12
も、ほとんど同一の構造を有することがわかった（Scho
ehaunt D. S. et al.(1992) J. Immunol. Vol. 148,No.
11, pp3433-3440）。ＩＬ−12のｐ40−サブユニット自
体には、ＩＬ−12に特異的な生物活性は何もないが、こ
のｐ40サブユニットは、完全なＩＬ−12分子の生物活性
にとって大変重要なものであることが明らかになってい
る。ｐ40サブユニットは、ＩＬ−12レセプター細胞と直
接に相互作用すると考えられている。
種類の異なるサブユニットからなることも知られている
（Podlasky,F.J.et.al.(1991)Arch.Biochem. Biophys.
Vol.294, No.1,pp.230-237 ）。またネズミＩＬ−12
も、ほとんど同一の構造を有することがわかった（Scho
ehaunt D. S. et al.(1992) J. Immunol. Vol. 148,No.
11, pp3433-3440）。ＩＬ−12のｐ40−サブユニット自
体には、ＩＬ−12に特異的な生物活性は何もないが、こ
のｐ40サブユニットは、完全なＩＬ−12分子の生物活性
にとって大変重要なものであることが明らかになってい
る。ｐ40サブユニットは、ＩＬ−12レセプター細胞と直
接に相互作用すると考えられている。
【０００５】一連の出版物によれば、サイトカイン生成
およびサイトカイン効果の調節異常は、急性および慢性
の免疫系疾患およびその後遺症を引き起こす場合があ
る。従って、サイトカインが媒介する活性に影響を与え
ることが、治療へのアプローチの第一歩である。
およびサイトカイン効果の調節異常は、急性および慢性
の免疫系疾患およびその後遺症を引き起こす場合があ
る。従って、サイトカインが媒介する活性に影響を与え
ることが、治療へのアプローチの第一歩である。
【０００６】
【発明の概要】従って、本発明は、ＩＬ−12が媒介する
活性の調節異常に関連した病状の治療に有利に用いるこ
とのできる医薬品を利用可能にするという目的に基づい
ている。
活性の調節異常に関連した病状の治療に有利に用いるこ
とのできる医薬品を利用可能にするという目的に基づい
ている。
【０００７】意外にも、ＩＬ−12のｐ40サブユニットを
用いてＩＬ−12が媒介する活性を阻害することができる
ことが判った。このことによって、前記の調節メカニズ
ムへの干渉によって治療効果を挙げることができる。
用いてＩＬ−12が媒介する活性を阻害することができる
ことが判った。このことによって、前記の調節メカニズ
ムへの干渉によって治療効果を挙げることができる。
【０００８】従って、本発明は、天然または組換えの、
場合によっては修飾した哺乳類ＩＬ−12のｐ40サブユニ
ットを含んでなる医薬品に関する。本発明の範囲内にお
いて、修飾したｐ40サブユニットは、ｐ40の活性部分ま
たは変体であり、動物モデル（マウス）またはイン・ビ
トロで、例えば例に示した方法によって、活性を証明す
ることができる。
場合によっては修飾した哺乳類ＩＬ−12のｐ40サブユニ
ットを含んでなる医薬品に関する。本発明の範囲内にお
いて、修飾したｐ40サブユニットは、ｐ40の活性部分ま
たは変体であり、動物モデル（マウス）またはイン・ビ
トロで、例えば例に示した方法によって、活性を証明す
ることができる。
【０００９】本発明の好ましい態様は、ヒト由来のｐ40
サブユニットを含んでなる医薬品に関する。
サブユニットを含んでなる医薬品に関する。
【００１０】本発明の別の態様は、哺乳類ＩＬ−12の天
然または組み換えｐ40サブユニットであって、好ましく
はヒト由来の組織または細胞から得たものを含んでなる
診断薬に関する。
然または組み換えｐ40サブユニットであって、好ましく
はヒト由来の組織または細胞から得たものを含んでなる
診断薬に関する。
【００１１】更に本発明は、天然または組み換えの、場
合によっては修飾した哺乳類、好ましくはヒト由来のＩ
Ｌ−12のｐ40サブユニットの使用であって、ＩＬ−12が
媒介する活性の調節異常に関連した病状、例えば全身性
紅斑性狼瘡、Wegener 症候群またはリューマチ性関節炎
などの自己免疫疾患、細菌またはウィルス感染、および
ある種の固形腫瘍または白血病、の治療に用いる医薬品
の製造への使用に関する。
合によっては修飾した哺乳類、好ましくはヒト由来のＩ
Ｌ−12のｐ40サブユニットの使用であって、ＩＬ−12が
媒介する活性の調節異常に関連した病状、例えば全身性
紅斑性狼瘡、Wegener 症候群またはリューマチ性関節炎
などの自己免疫疾患、細菌またはウィルス感染、および
ある種の固形腫瘍または白血病、の治療に用いる医薬品
の製造への使用に関する。
【００１２】本発明のもう一つの態様は、天然または組
み換えの、場合によっては修飾した哺乳類ＩＬ−12ｐ40
サブユニットの使用であって、体液、例えばヒト体液中
でのＩＬ−12の検出法における使用に関する。この方法
は、ＩＬ−12活性がｐ40により特異的に阻害されること
に基づいており、例えば実施例１または２と同様に、用
いられるＩＬ−12が分析を行う試料に由来しており、ｐ
40を所定量加えるようにすることができる。
み換えの、場合によっては修飾した哺乳類ＩＬ−12ｐ40
サブユニットの使用であって、体液、例えばヒト体液中
でのＩＬ−12の検出法における使用に関する。この方法
は、ＩＬ−12活性がｐ40により特異的に阻害されること
に基づいており、例えば実施例１または２と同様に、用
いられるＩＬ−12が分析を行う試料に由来しており、ｐ
40を所定量加えるようにすることができる。
【００１３】前記の総ての方法は、天然または組み換え
のヒト由来のｐ40を利用する好ましい方法である。
のヒト由来のｐ40を利用する好ましい方法である。
【００１４】本発明のもう一つの態様は、ＩＬ−12ｐ40
サブユニットの検出に用いるＩＬ−12を含んでなる診断
薬に関する。この診断薬は、例えば実施例１および２と
同様の方法で、使用されるｐ40阻害剤活性が分析される
試料に由来し、ＩＬ−12を所定量加えるようにして用い
ることができる。
サブユニットの検出に用いるＩＬ−12を含んでなる診断
薬に関する。この診断薬は、例えば実施例１および２と
同様の方法で、使用されるｐ40阻害剤活性が分析される
試料に由来し、ＩＬ−12を所定量加えるようにして用い
ることができる。
【００１５】
【発明の具体的説明】更に、本発明を実施例および特許
請求の範囲によって説明する。
請求の範囲によって説明する。
【００１６】ＩＬ−12およびｐ40の単離 組み換えネズミＩＬ−12およびｍＩＬ−12のｐ40サブユ
ニットを単離するため、ｍＲＮＡを標準的手法（Sambro
ok, J., Fritsch, E., Maniatis, T., (1989)Molecular
Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor
Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.) を用い
てマウス脾臓細胞から単離した後、二本鎖ｃＤＮＡに転
換した。Schoenhaut et al.(Schoenhaut, D., Chua, A.
O., Wolitzky, A.G., Quinn, P.M.,Dwyer, C.M.,McComa
s, W., Familletti, P.C., Gately, M.K., Gubler, U.
(1992). J. Immunol. 148, 3433）によって報告された
プライマーを用いて、およびこの出版物に示された実験
条件に従ってＰＣＲを行ったところ、約８００塩基対の
フラグメントが生成した。
ニットを単離するため、ｍＲＮＡを標準的手法（Sambro
ok, J., Fritsch, E., Maniatis, T., (1989)Molecular
Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor
Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.) を用い
てマウス脾臓細胞から単離した後、二本鎖ｃＤＮＡに転
換した。Schoenhaut et al.(Schoenhaut, D., Chua, A.
O., Wolitzky, A.G., Quinn, P.M.,Dwyer, C.M.,McComa
s, W., Familletti, P.C., Gately, M.K., Gubler, U.
(1992). J. Immunol. 148, 3433）によって報告された
プライマーを用いて、およびこの出版物に示された実験
条件に従ってＰＣＲを行ったところ、約８００塩基対の
フラグメントが生成した。
【００１７】このＰＣＲフラグメントを、標準的手法
（Sambrook, J., Fritsch, E., Maniatis, T., (1989)
Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Sprin
g Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.
Y.)によって配列決定した。この結果、実験的に決定し
たｃＤＮＡの配列が、ネズミｐ40サブユニットについて
公表された配列と同一であることが判った。ｐ35サブユ
ニットのＰＣＲフラグメントを単離し、同様の方法によ
って配列決定を行った。下記の生物学的活性が実際にＩ
Ｌ−12および／またはｐ40サブユニットに由来すること
を確認する目的で、ＰＣＲフラグメントを、個々にまた
は組み合わせてベクターｐＡＢｓｔｏｐにクローニング
し、標準的方法を用いてＢＨＫ−２１細胞で安定に発現
させた（Zettlmeibl G., Wirth, M., Hauser, G., Kupp
er, H.A. (1988)Behring Inst. Mitteilungen (Communi
cations) 82, 26 ）。
（Sambrook, J., Fritsch, E., Maniatis, T., (1989)
Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Sprin
g Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.
Y.)によって配列決定した。この結果、実験的に決定し
たｃＤＮＡの配列が、ネズミｐ40サブユニットについて
公表された配列と同一であることが判った。ｐ35サブユ
ニットのＰＣＲフラグメントを単離し、同様の方法によ
って配列決定を行った。下記の生物学的活性が実際にＩ
Ｌ−12および／またはｐ40サブユニットに由来すること
を確認する目的で、ＰＣＲフラグメントを、個々にまた
は組み合わせてベクターｐＡＢｓｔｏｐにクローニング
し、標準的方法を用いてＢＨＫ−２１細胞で安定に発現
させた（Zettlmeibl G., Wirth, M., Hauser, G., Kupp
er, H.A. (1988)Behring Inst. Mitteilungen (Communi
cations) 82, 26 ）。
【００１８】生物学的に活性なｍＩＬ−12および生物学
的に活性なｍＩＬ−12のｐ40サブユニットの両方を、ト
ランスフェクションしたＢＨＫ−２１細胞の培養上清か
ら単離することができた。
的に活性なｍＩＬ−12のｐ40サブユニットの両方を、ト
ランスフェクションしたＢＨＫ−２１細胞の培養上清か
ら単離することができた。
【００１９】ネズミＢ−細胞リンパ腫ラインＡ−２０(A
merican Type Culture Collection,ATCC TIB208)の上清
であってMengle et al. （上記参照）の報告した方法に
従って活性化したものを、天然ＩＬ−12の入手源として
用いた。Ａ−20上清中のMengelによって報告された可溶
性媒介物質は、ＮＫＳＦと機能的に比較され、ヒトＩＬ
−12のネズミアナログであると認められている。German
n et al.（上記参照）によって報告された方法によって
調製され、活性化された脾臓細胞調製物は、天然ＩＬ−
12の別の入手源であった。比較研究の結果、Germann et
al.によって報告されたＴＳＦはｍＩＬ−12と同一であ
ることが明らかになった。
merican Type Culture Collection,ATCC TIB208)の上清
であってMengle et al. （上記参照）の報告した方法に
従って活性化したものを、天然ＩＬ−12の入手源として
用いた。Ａ−20上清中のMengelによって報告された可溶
性媒介物質は、ＮＫＳＦと機能的に比較され、ヒトＩＬ
−12のネズミアナログであると認められている。German
n et al.（上記参照）によって報告された方法によって
調製され、活性化された脾臓細胞調製物は、天然ＩＬ−
12の別の入手源であった。比較研究の結果、Germann et
al.によって報告されたＴＳＦはｍＩＬ−12と同一であ
ることが明らかになった。
【００２０】ネズミＩＬ−12のｐ40サブユニットを分泌
するハイブリドーマ細胞を単離することができ、これを
このサブユニットの天然入手源として用いた。このハイ
ブリドーマ細胞を調製するため、１〜１０×１０６のネ
ズミＴ細胞を同系の単球（１×１０５／ｍｌ）および組
み換えマウスＧＭ−ＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下
で培養したものを、雌性ラット（Lewis strain, Zentra
linstitut fur Versuchstierkunde （実験動物学中央研
究所）, Hannover）に、ＣＦＡ（完全フロインドアジュ
バンド）と共に皮下注射した。それぞれの場合に、２週
間の間隔を置いて更に２回免疫化を行い、この場合には
同量の細胞を腹腔内注射した。最後の注射の３日後にこ
の動物を屠殺し、その脾臓細胞をネズミミエローマ細胞
系ＳＰ２／ＦＯ細胞と、Koehler およびMilsteinの既知
の標準的方法（Nature 256, p. 495ff; 1975）によって
融合させた。成長しているハイブリドーマ細胞を標準的
方法によって選択した。実施例１に示した実験と同様に
行った研究では、単離したハイブリドーマの中の１個の
上清が、ガンマ−インターフェロンの放出を阻害できる
ことを証明した。Kobayashi et al.（Kobayashi,M.; Fr
itz, L.,Ryan,M., Hewick,R.M., Clar, S.C., Chan,
S., Loudon,R., Sherman, F., Perussia, B.,Trinchier
i, G.(1989) J. Exp. Med. 170, 827）によって公表さ
れた方法に従って、分泌されたタンパク質を、このハイ
ブリドーマ細胞の培養上清から精製した。逆相ＨＰＬＣ
処理による精製後、単離されたタンパク質画分をＳＤＳ
−ＰＡＧＥによって分画したところ、主要なタンパク質
バンドが、約４０〜４５ｋＤの領域に見つかった。配列
を比較したところ、この単離されたタンパク質はネズミ
ＩＬ−12のｐ40サブユニットと同一であることが確認さ
れた。
するハイブリドーマ細胞を単離することができ、これを
このサブユニットの天然入手源として用いた。このハイ
ブリドーマ細胞を調製するため、１〜１０×１０６のネ
ズミＴ細胞を同系の単球（１×１０５／ｍｌ）および組
み換えマウスＧＭ−ＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下
で培養したものを、雌性ラット（Lewis strain, Zentra
linstitut fur Versuchstierkunde （実験動物学中央研
究所）, Hannover）に、ＣＦＡ（完全フロインドアジュ
バンド）と共に皮下注射した。それぞれの場合に、２週
間の間隔を置いて更に２回免疫化を行い、この場合には
同量の細胞を腹腔内注射した。最後の注射の３日後にこ
の動物を屠殺し、その脾臓細胞をネズミミエローマ細胞
系ＳＰ２／ＦＯ細胞と、Koehler およびMilsteinの既知
の標準的方法（Nature 256, p. 495ff; 1975）によって
融合させた。成長しているハイブリドーマ細胞を標準的
方法によって選択した。実施例１に示した実験と同様に
行った研究では、単離したハイブリドーマの中の１個の
上清が、ガンマ−インターフェロンの放出を阻害できる
ことを証明した。Kobayashi et al.（Kobayashi,M.; Fr
itz, L.,Ryan,M., Hewick,R.M., Clar, S.C., Chan,
S., Loudon,R., Sherman, F., Perussia, B.,Trinchier
i, G.(1989) J. Exp. Med. 170, 827）によって公表さ
れた方法に従って、分泌されたタンパク質を、このハイ
ブリドーマ細胞の培養上清から精製した。逆相ＨＰＬＣ
処理による精製後、単離されたタンパク質画分をＳＤＳ
−ＰＡＧＥによって分画したところ、主要なタンパク質
バンドが、約４０〜４５ｋＤの領域に見つかった。配列
を比較したところ、この単離されたタンパク質はネズミ
ＩＬ−12のｐ40サブユニットと同一であることが確認さ
れた。
【００２１】最後に本医薬品を、それ自体は当業者には
既知の方法によって製造する。このＩＬ−12ｐ40サブユ
ニット（＝活性化合物）を、有効濃度で、そのまままた
は好適な薬学的添加剤若しくは補助物質並びに生理学上
許容可能な溶媒と組み合わせて用いる。
既知の方法によって製造する。このＩＬ−12ｐ40サブユ
ニット（＝活性化合物）を、有効濃度で、そのまままた
は好適な薬学的添加剤若しくは補助物質並びに生理学上
許容可能な溶媒と組み合わせて用いる。
【００２２】
【実施例】実施例１ ＩＬ−12によって誘発されるガンマ−ＩＦＮ
放出のｐ40／ＩＬ−12による阻害 ガンマ−ＩＦＮの放出を誘導するため、ＢＡＬＢ／ｃネ
ズミの脾臓細胞５×１０６個を、組み換えまたは天然の
所定濃度のｍＩＬ−12およびＩＬ−２の存在下または非
存在下で、４８時間培養した。４８時間培養した後に、
上清を脾臓細胞から採取し、細胞を含まなくなるまで遠
心分離した。上清中のガンマ−ＩＦＮを市販のＥＬＩＳ
Ａ系（e.g.IntertestTM-gamma, Mouse IFN-gamma ELISA
kit, Genzyme ）によって測定した。この活性化脾臓細
胞の培養上清由来のガンマ−ＩＦＮは、組み換えネズミ
ガンマ−ＩＦＮ（Genzyme)との比較によって定量した。
典型的な実験を図に示す。データから明らかなように、
ＩＬ−12によるネズミ脾臓細胞の培養は、用量依存的な
様式で、＞５ｎｇ／ｍｌのガンマ−インターフェロンの
放出を導く。しかしながら、この脾臓細胞を培養開始時
に組み換えネズミｐ40／ＩＬ−12またはｍＩＬ−12の天
然ｐ40サブユニットを含むハイブリドーマ上清と共に予
備インキュベートし、その後ｍＩＬ−12によって刺激す
ると、ガンマ−ＩＮＦのＩＬ−12依存性の合成は少なく
とも５０％まで抑制された。本実施例では、組み換えｐ
40／ＩＬ−12およびｍＩＬ−12の天然ｐ40サブユニット
を含むハイブリドーマ上清の両方が、ＩＬ−12によって
誘導されるガンマ−ＩＮＦの合成を阻害できることを証
明している。
放出のｐ40／ＩＬ−12による阻害 ガンマ−ＩＦＮの放出を誘導するため、ＢＡＬＢ／ｃネ
ズミの脾臓細胞５×１０６個を、組み換えまたは天然の
所定濃度のｍＩＬ−12およびＩＬ−２の存在下または非
存在下で、４８時間培養した。４８時間培養した後に、
上清を脾臓細胞から採取し、細胞を含まなくなるまで遠
心分離した。上清中のガンマ−ＩＦＮを市販のＥＬＩＳ
Ａ系（e.g.IntertestTM-gamma, Mouse IFN-gamma ELISA
kit, Genzyme ）によって測定した。この活性化脾臓細
胞の培養上清由来のガンマ−ＩＦＮは、組み換えネズミ
ガンマ−ＩＦＮ（Genzyme)との比較によって定量した。
典型的な実験を図に示す。データから明らかなように、
ＩＬ−12によるネズミ脾臓細胞の培養は、用量依存的な
様式で、＞５ｎｇ／ｍｌのガンマ−インターフェロンの
放出を導く。しかしながら、この脾臓細胞を培養開始時
に組み換えネズミｐ40／ＩＬ−12またはｍＩＬ−12の天
然ｐ40サブユニットを含むハイブリドーマ上清と共に予
備インキュベートし、その後ｍＩＬ−12によって刺激す
ると、ガンマ−ＩＮＦのＩＬ−12依存性の合成は少なく
とも５０％まで抑制された。本実施例では、組み換えｐ
40／ＩＬ−12およびｍＩＬ−12の天然ｐ40サブユニット
を含むハイブリドーマ上清の両方が、ＩＬ−12によって
誘導されるガンマ−ＩＮＦの合成を阻害できることを証
明している。
【００２３】実施例２ ＩＬ−12によって誘導されるＮ
Ｋ細胞の活性のｐ40／ＩＬ−12による阻害 Ｃ５７ＢＬ６マウスの脾臓細胞を、血清を含まないIsco
ve培地にて、細胞濃度５−１０×１０６細胞／ｍｌ、２
４ウェルのCostarプレートで３７℃で１８時間培養し
た。この脾臓細胞を、様々な濃度の組み換えまたは天然
ネズミＩＬ−12と共に培養した。１８時間後に細胞を採
取し、生存細胞の数をトリパンブルー染色法によって測
定し、細胞溶解活性を５時間の51Ｃｒ放出試験で測定し
た。ＹＡＣ−１細胞(ATCC TIB160) を標的細胞として用
いた。標的細胞を51Ｃｒで標識し、51Ｃｒ放出試験を標
準の方法（Schoenhaut, D.S. et al.(1992). J. Immuno
l. Vol. 148,pp.3433-3440）によって行った。エフェク
ター細胞と標的細胞の比は、典型的には１００：１、５
０：１、２５：１および１２．５：１であった。特異的
細胞溶解の％は、（実験群の溶菌％−自発的溶菌％）：
（最大溶菌％−自発的溶菌％）×１００として計算し
た。ＩＬ−12と共に予備インキュベートしたＣ５７ＢＬ
／６脾臓細胞によって、特異的な細胞溶解を出発コント
ロールと比較して少なくとも５倍に増加することができ
た（比率５０：１）。しかしながら、同じ培養条件下
で、この脾臓細胞を場合によって組み換えまたは天然の
マウスｐ40／ＩＬ−12と共に予備インキュベートする
と、このＩＬ−12依存性の細胞溶解は、少なくとも５０
％までに抑制された。
Ｋ細胞の活性のｐ40／ＩＬ−12による阻害 Ｃ５７ＢＬ６マウスの脾臓細胞を、血清を含まないIsco
ve培地にて、細胞濃度５−１０×１０６細胞／ｍｌ、２
４ウェルのCostarプレートで３７℃で１８時間培養し
た。この脾臓細胞を、様々な濃度の組み換えまたは天然
ネズミＩＬ−12と共に培養した。１８時間後に細胞を採
取し、生存細胞の数をトリパンブルー染色法によって測
定し、細胞溶解活性を５時間の51Ｃｒ放出試験で測定し
た。ＹＡＣ−１細胞(ATCC TIB160) を標的細胞として用
いた。標的細胞を51Ｃｒで標識し、51Ｃｒ放出試験を標
準の方法（Schoenhaut, D.S. et al.(1992). J. Immuno
l. Vol. 148,pp.3433-3440）によって行った。エフェク
ター細胞と標的細胞の比は、典型的には１００：１、５
０：１、２５：１および１２．５：１であった。特異的
細胞溶解の％は、（実験群の溶菌％−自発的溶菌％）：
（最大溶菌％−自発的溶菌％）×１００として計算し
た。ＩＬ−12と共に予備インキュベートしたＣ５７ＢＬ
／６脾臓細胞によって、特異的な細胞溶解を出発コント
ロールと比較して少なくとも５倍に増加することができ
た（比率５０：１）。しかしながら、同じ培養条件下
で、この脾臓細胞を場合によって組み換えまたは天然の
マウスｐ40／ＩＬ−12と共に予備インキュベートする
と、このＩＬ−12依存性の細胞溶解は、少なくとも５０
％までに抑制された。
【図１】γ−インターフェロンの生産のｍｌＬ−１２に
よる刺激。
よる刺激。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 クラウス‐データー、ラングナー ドイツ連邦共和国マールブルク、リンデン ウェーク、14
Claims (10)
- 【請求項１】天然または組み換えの、場合によっては修
飾した、哺乳類ＩＬ−12のｐ40サブユニットを含んでな
る医薬。 - 【請求項２】ヒト由来のｐ40を含んでなる、請求項１に
記載の医薬。 - 【請求項３】天然または組み換えの、場合によっては修
飾した、哺乳類ＩＬ−12のｐ40サブユニットを含んでな
る診断薬。 - 【請求項４】ヒト由来のｐ40を含んでなる請求項３に記
載の診断薬。 - 【請求項５】天然または組み換えの、場合によっては修
飾した哺乳類ＩＬ−12のｐ40サブユニットの使用であっ
て、ＩＬ−12によって媒介される活性の調節異常に関連
した病状の治療に用いられる医薬の製造のための使用。 - 【請求項６】ヒト由来のｐ40を用いる、請求項５に記載
の方法。 - 【請求項７】天然または組み換えの、場合によっては修
飾した、哺乳類ＩＬ−12のｐ40サブユニットの、ヒト体
液中のＩＬ−12を検出をする方法における使用。 - 【請求項８】ヒト由来のｐ40を用いる、請求項７に記載
の方法。 - 【請求項９】体液中のＩＬ−12ｐ40サブユニットを検出
する方法。 - 【請求項１０】活性化合物を生理学上許容可能な溶媒お
よび適当な場合には他の添加剤または補助物質と共に非
経口投与に好適な形態にする、請求項１に記載の医薬の
製造法。
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|---|---|---|---|
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| DE4315127.2 | 1993-05-07 |
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|---|---|
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| DE (2) | DE4315127A1 (ja) |
| DK (1) | DK0625354T3 (ja) |
| ES (1) | ES2153394T3 (ja) |
| GR (1) | GR3035198T3 (ja) |
| PT (1) | PT625354E (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7138115B2 (en) * | 1994-03-14 | 2006-11-21 | Genetics Institute, Llc | Use of IL-12 and IL-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases |
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| JP2000510813A (ja) * | 1995-02-06 | 2000-08-22 | ジェネテイックス・インスティテュート・インコーポレイテッド | Ｉｌ−１２用処方 |
| US5853697A (en) * | 1995-10-25 | 1998-12-29 | The United States Of America, As Represented By The Department Of Health & Human Services | Methods of treating established colitis using antibodies against IL-12 |
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| US6165476A (en) * | 1997-07-10 | 2000-12-26 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Fusion proteins with an immunoglobulin hinge region linker |
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| US7090847B1 (en) * | 1999-09-09 | 2006-08-15 | Schering Corporation | Mammalian cytokines; related reagents and methods |
| US7115712B1 (en) * | 1999-12-02 | 2006-10-03 | Maxygen, Inc. | Cytokine polypeptides |
| US6902734B2 (en) | 2000-08-07 | 2005-06-07 | Centocor, Inc. | Anti-IL-12 antibodies and compositions thereof |
| US8206725B2 (en) * | 2003-08-26 | 2012-06-26 | The Council Of The Queensland Institute Of Medical Research | Immunogenic agent and pharmaceutical composition for use against homologous and heterologous pathogens including plasmodium SPP |
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| WO2012159100A1 (en) * | 2011-05-19 | 2012-11-22 | Rush University Medical Center | Il-12 p40 monomer, monoclonal antibody against p40 homodimer and the combination of the two for autoimmune disease treatment |
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| TW201922780A (zh) * | 2017-09-25 | 2019-06-16 | 美商健生生物科技公司 | 以抗ｉｌ１２／ｉｌ２３抗體治療狼瘡之安全且有效之方法 |
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| IL298389A (en) | 2020-05-21 | 2023-01-01 | Janssen Biotech Inc | Method of treating inflammatory bowel disease with a combination therapy of antibodies to il-23 and tnf alpha |
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| US5296353A (en) * | 1992-04-06 | 1994-03-22 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Evaluation and treatment of patients with progessive immunosuppression |
-
1993
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-
1994
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- 1994-04-12 ES ES94105595T patent/ES2153394T3/es not_active Expired - Lifetime
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- 1994-04-12 EP EP94105595A patent/EP0625354B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-04-12 PT PT94105595T patent/PT625354E/pt unknown
- 1994-04-12 DE DE59409604T patent/DE59409604D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-04-29 US US08/235,321 patent/US5547852A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-05 AU AU61901/94A patent/AU676891B2/en not_active Ceased
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2001
- 2001-01-10 GR GR20010400016T patent/GR3035198T3/el unknown
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| US7138115B2 (en) * | 1994-03-14 | 2006-11-21 | Genetics Institute, Llc | Use of IL-12 and IL-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases |
| US7534430B2 (en) | 1994-03-14 | 2009-05-19 | Genetics Institute, Llc | Use of IL-12 and IL-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases |
| US8012475B2 (en) | 1994-03-14 | 2011-09-06 | Genetics Institute, Llc | Use of IL-12 and IL-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases |
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