JPH0634703B2 - 新規なアスペルギルス菌 - Google Patents
新規なアスペルギルス菌Info
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- JPH0634703B2 JPH0634703B2 JP60138835A JP13883585A JPH0634703B2 JP H0634703 B2 JPH0634703 B2 JP H0634703B2 JP 60138835 A JP60138835 A JP 60138835A JP 13883585 A JP13883585 A JP 13883585A JP H0634703 B2 JPH0634703 B2 JP H0634703B2
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- JP
- Japan
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- lipolytic enzyme
- cheese
- aspergillus
- lipolytic
- enzyme
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; PREPARATION THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/02—Making cheese curd
- A23C19/032—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin
- A23C19/0328—Enzymes other than milk clotting enzymes, e.g. lipase, beta-galactosidase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
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- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/06—Treating cheese curd after whey separation; Products obtained thereby
- A23C19/063—Addition of, or treatment with, enzymes or cell-free extracts of microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungi isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12Y301/01003—Triacylglycerol lipase (3.1.1.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/66—Aspergillus
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/913—Aspergillus
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は新規なアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ）菌に関するものである。
ｓ）菌に関するものである。
（従来の技術） チーズの熟成を加速し、保存用スペースを削減すること
によって費用効果性を増大させることはチーズ業界にお
いてより重要となりつつある。現在、動物の前胃腺（ｐ
ｒｅｇａｓｔｒｉｃ ｇｌａｎｄｓ）および動物の膵臓
という２つの異なった供給源に由来する脂肪分解酵素が
促進剤としてチーズカードに添加されている。第３の供
給源である微生物に由来する脂肪分解酵素は強いフレー
バーを有するチーズの商業的生産には用いられてきた
が、マイルドフレーバーを有するチーズに対しては用い
られていない。
によって費用効果性を増大させることはチーズ業界にお
いてより重要となりつつある。現在、動物の前胃腺（ｐ
ｒｅｇａｓｔｒｉｃ ｇｌａｎｄｓ）および動物の膵臓
という２つの異なった供給源に由来する脂肪分解酵素が
促進剤としてチーズカードに添加されている。第３の供
給源である微生物に由来する脂肪分解酵素は強いフレー
バーを有するチーズの商業的生産には用いられてきた
が、マイルドフレーバーを有するチーズに対しては用い
られていない。
子山羊、子牛および子羊の前胃腺に由来する脂肪分解酵
素は現在、低分子遊離脂肪酸（例えば酪酸）の特徴的な
酸敗臭が所望されるイタリアンタイプの（プロボロー
ネ、イマーノ、パルメザン）チーズにおいて熟成を加速
するために添加されている。しかしながら、これらの前
胃腺脂肪分解酵素を例えばチェダーのようなマイルドな
フレーバーを有するチーズに用いると過剰な量の低分子
脂肪酸が生成し、酸敗臭の発生を招く。動物膵臓脂肪分
解酵素を高濃度で用いるとチーズ中に過剰な量のラウリ
ン酸が生成し、石けん臭を招く。さらに、高純度に精製
しない限り、これらの脂肪分解酵素は余分な蛋白質分解
酵素を含有している可能性があり、これら蛋白質分解酵
素は小量ではチーズの軟化を助成するものの大量の場合
には苦味の強いフレーバーを産出する。
素は現在、低分子遊離脂肪酸（例えば酪酸）の特徴的な
酸敗臭が所望されるイタリアンタイプの（プロボロー
ネ、イマーノ、パルメザン）チーズにおいて熟成を加速
するために添加されている。しかしながら、これらの前
胃腺脂肪分解酵素を例えばチェダーのようなマイルドな
フレーバーを有するチーズに用いると過剰な量の低分子
脂肪酸が生成し、酸敗臭の発生を招く。動物膵臓脂肪分
解酵素を高濃度で用いるとチーズ中に過剰な量のラウリ
ン酸が生成し、石けん臭を招く。さらに、高純度に精製
しない限り、これらの脂肪分解酵素は余分な蛋白質分解
酵素を含有している可能性があり、これら蛋白質分解酵
素は小量ではチーズの軟化を助成するものの大量の場合
には苦味の強いフレーバーを産出する。
所望の熟成特性を示す脂肪分解酵素の探究においてはシ
ュードモナスフラギー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｒ
ａｇｉｉ）、螢光菌（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、
黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕ
ｒｅｕｓ）、クロストリジウムリポリティカ（Ｃｌｏｓ
ｔｒｉｄｉｕｍ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、ジオトリキ
ウムカンディダム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｉｕｍ ｃａｎｄ
ｉｄｕｍ）、ペニシリウムロックフォルティ（Ｐｅｎｉ
ｃｉｌｌｉｕｍ ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ）、黒色麹菌ク
ロカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、黄色
麹菌キカビ（Ａ．ｆｌａｖｕｓ）、米麹菌（Ａ．ｏｒｙ
ｚａｅ）、カンジダシリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ
ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）、およびリゾプスオリゴスポ
ラス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｌｉｇｏｓｐｏｒｏｕｓ）
等多くの微生物が実験室における研究に用いられてき
た。これらの微生物に由来する脂肪分解酵素の多くは未
だ市販されていない。ハーパー（Ｈａｒｐｅｒ，Ｗ．
Ｊ．）［Ｌ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ ４０ ５５
６（１９５７）］によるチーズ熟成用の様々な脂肪分解
酵素の研究においては乳脂肪含量２０％のクリームから
遊離脂肪酸を選択的に分離する能力に関する以下のデー
タが示された。
ュードモナスフラギー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｒ
ａｇｉｉ）、螢光菌（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、
黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕ
ｒｅｕｓ）、クロストリジウムリポリティカ（Ｃｌｏｓ
ｔｒｉｄｉｕｍ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、ジオトリキ
ウムカンディダム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｉｕｍ ｃａｎｄ
ｉｄｕｍ）、ペニシリウムロックフォルティ（Ｐｅｎｉ
ｃｉｌｌｉｕｍ ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ）、黒色麹菌ク
ロカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、黄色
麹菌キカビ（Ａ．ｆｌａｖｕｓ）、米麹菌（Ａ．ｏｒｙ
ｚａｅ）、カンジダシリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ
ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）、およびリゾプスオリゴスポ
ラス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｌｉｇｏｓｐｏｒｏｕｓ）
等多くの微生物が実験室における研究に用いられてき
た。これらの微生物に由来する脂肪分解酵素の多くは未
だ市販されていない。ハーパー（Ｈａｒｐｅｒ，Ｗ．
Ｊ．）［Ｌ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ ４０ ５５
６（１９５７）］によるチーズ熟成用の様々な脂肪分解
酵素の研究においては乳脂肪含量２０％のクリームから
遊離脂肪酸を選択的に分離する能力に関する以下のデー
タが示された。
特定の遊離脂肪酸とチーズのフレーバーの強さとの間の
関係についての情報は殆ど入手不可能であるが、通常、
フレーバーの強いチーズにおいて酪酸は強い酸敗性の発
現に関連し、大量のラウリン酸の存在は石けんフレーバ
ーを招くことがある。長鎖脂肪酸はフルーツ風フレーバ
ーに関連づけられてきた。一般に、異なったタイプのチ
ーズにおいては偶数番号の遊離脂肪酸の全てが存在して
いるが特定の脂肪酸の濃度が異なっていることが知られ
ている。
関係についての情報は殆ど入手不可能であるが、通常、
フレーバーの強いチーズにおいて酪酸は強い酸敗性の発
現に関連し、大量のラウリン酸の存在は石けんフレーバ
ーを招くことがある。長鎖脂肪酸はフルーツ風フレーバ
ーに関連づけられてきた。一般に、異なったタイプのチ
ーズにおいては偶数番号の遊離脂肪酸の全てが存在して
いるが特定の脂肪酸の濃度が異なっていることが知られ
ている。
（発明が解決しようとする問題点） 本発明は低濃度の添加で従来の脂肪分解酵素よりも迅速
にチーズを熟成することができ、しかも脂肪分解酵素に
由来する酸敗が全く発生しない新規な脂肪分解酵素を提
供することをその目的とするものである。
にチーズを熟成することができ、しかも脂肪分解酵素に
由来する酸敗が全く発生しない新規な脂肪分解酵素を提
供することをその目的とするものである。
（問題点を解決するための手段） 本発明はアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）菌
類の選択変異株に関するものである。この株は適当な栄
養基内において適当な通気および撹拌の下に培養すると
新規な脂肪分解酵素を産生する。本明細書中においてこ
のタイプの酵素を脂肪分解酵素と称するが、この語には
エステラーゼも含まれるものとする。
類の選択変異株に関するものである。この株は適当な栄
養基内において適当な通気および撹拌の下に培養すると
新規な脂肪分解酵素を産生する。本明細書中においてこ
のタイプの酵素を脂肪分解酵素と称するが、この語には
エステラーゼも含まれるものとする。
菌類 本発明による菌類はアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓ）の新株であると同定された。この菌類はアメリ
カンタイプカルチャーコレクション（ｔｈｅ Ａｍｅｒ
ｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔ
ｉｏｎ）に寄託された。その受託番号はＡＴＣＣ Ｎ
ｏ．２０，７１９である。
ｌｕｓ）の新株であると同定された。この菌類はアメリ
カンタイプカルチャーコレクション（ｔｈｅ Ａｍｅｒ
ｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔ
ｉｏｎ）に寄託された。その受託番号はＡＴＣＣ Ｎ
ｏ．２０，７１９である。
酵素 本発明によるアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ）微生物は公知のアスペルギルス微生物と同様の油ベ
ース培地中で培養すると新規で特に有用な脂肪分解酵素
を産生する。しかしながら、本発明によるアスペルギル
ス微生物に由来する脂肪分解酵素はトリブチリン等のＣ
４トリグリセリドよりも長鎖であるトリカプロインおよ
びトリカプリリン等のＣ６およびＣ８トリグリセリドを
より効率的に加水分解する。
ｓ）微生物は公知のアスペルギルス微生物と同様の油ベ
ース培地中で培養すると新規で特に有用な脂肪分解酵素
を産生する。しかしながら、本発明によるアスペルギル
ス微生物に由来する脂肪分解酵素はトリブチリン等のＣ
４トリグリセリドよりも長鎖であるトリカプロインおよ
びトリカプリリン等のＣ６およびＣ８トリグリセリドを
より効率的に加水分解する。
この特性を有する脂肪分解酵素はチェダーチーズ等のマ
イルドなフレーバーを有するチーズの製造における熟成
促進剤として有用と考えられる。より短鎖であるＣ４ト
リグリセリドの加水分解効率が低いことによって、マイ
ルドチーズに不要な酸敗フレーバーの発現は抑制され
る。
イルドなフレーバーを有するチーズの製造における熟成
促進剤として有用と考えられる。より短鎖であるＣ４ト
リグリセリドの加水分解効率が低いことによって、マイ
ルドチーズに不要な酸敗フレーバーの発現は抑制され
る。
適当な希釈、撹拌、ＰＨおよび塩濃度条件下で本発明に
よるアスペルギルス微生物から分離すると本発明による
脂肪分解酵素は苦味フレーバーを産生することなくチー
ズを軟化する程度の低濃度の蛋白質分解酵素しか含まな
い。
よるアスペルギルス微生物から分離すると本発明による
脂肪分解酵素は苦味フレーバーを産生することなくチー
ズを軟化する程度の低濃度の蛋白質分解酵素しか含まな
い。
（実施例および効果） 微生物の培養 アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）微生物は凍
結状態で滅菌土壌上に保存される。土壌ストックの一部
をジャガイモデキストロース寒天（ＰＤＡ）に移し、２
０〜３５℃、好ましくは３０℃で４〜５日間培養し、振
盪フラスコ（ｓｈａｋｅ ｆｌａｓｋ）および培養器
（ｆｅｒｍｅｎｔｅｒ）における増殖のための第１の接
種物として用いる。
結状態で滅菌土壌上に保存される。土壌ストックの一部
をジャガイモデキストロース寒天（ＰＤＡ）に移し、２
０〜３５℃、好ましくは３０℃で４〜５日間培養し、振
盪フラスコ（ｓｈａｋｅ ｆｌａｓｋ）および培養器
（ｆｅｒｍｅｎｔｅｒ）における増殖のための第１の接
種物として用いる。
脂肪分解酵素は６％の大豆粉、５％の単塩基リン酸アン
モニウム、０．５％の硫酸マグネシウム（結晶）、２％
の大豆油を含有するＰＨ５．１（５．０〜５．２）の滅
菌培地１００mlを入れた１リットルのエルレンマイエル
フラスコ内にＰＤＡ傾斜培地から直接接種することによ
り、振盪フラスコ内で産生することが可能である。３〜
５日間３０℃に置き、２６５ＲＰＭで撹拌した後、培養
物を濾過する。培養物成分の好ましい成分範囲は油１〜
１０％、硫酸塩＞０．１〜１％、リン酸塩１〜５％、お
よび大豆粉３〜８％である。ＭｇＳＯ4、（ＮＨ4）Ｈ2
ＰＯ4、および油の濃度で最適な脂肪分解酵素活性を得
るために重要である。最初のＰＨは５．０以上でなけれ
ばならない。
モニウム、０．５％の硫酸マグネシウム（結晶）、２％
の大豆油を含有するＰＨ５．１（５．０〜５．２）の滅
菌培地１００mlを入れた１リットルのエルレンマイエル
フラスコ内にＰＤＡ傾斜培地から直接接種することによ
り、振盪フラスコ内で産生することが可能である。３〜
５日間３０℃に置き、２６５ＲＰＭで撹拌した後、培養
物を濾過する。培養物成分の好ましい成分範囲は油１〜
１０％、硫酸塩＞０．１〜１％、リン酸塩１〜５％、お
よび大豆粉３〜８％である。ＭｇＳＯ4、（ＮＨ4）Ｈ2
ＰＯ4、および油の濃度で最適な脂肪分解酵素活性を得
るために重要である。最初のＰＨは５．０以上でなけれ
ばならない。
発酵器内における生成においてはいくらか変更が必要で
ある。培地構成部分は上述の振盪フラスコ用のものと同
様であるが、接種物の増殖期を３〜５日間に短縮するた
めに中間ステップの使用が必要である。使用する接種物
は４％の無精白小麦粉および８％のトウモロコシ浸出液
（ｃｏｒｎｓｔｅｅｐ ｗａｔｅｒ）を含有するＰＨ
５．５の栄養基５（１〜１０）容量％である。滅菌した
接種物栄養基にＰＤＡ傾斜培地を接種し、３０℃で３０
〜５０時間増殖を行なった後、これを増殖培地に移す。
増殖培地の油はトウモロコシ油もしくは大豆油とするこ
とができ、その濃度は１〜６％とすることができる。全
ての油は最初から存在していてもよく、また増殖開始後
に添加して増量してもよい。
ある。培地構成部分は上述の振盪フラスコ用のものと同
様であるが、接種物の増殖期を３〜５日間に短縮するた
めに中間ステップの使用が必要である。使用する接種物
は４％の無精白小麦粉および８％のトウモロコシ浸出液
（ｃｏｒｎｓｔｅｅｐ ｗａｔｅｒ）を含有するＰＨ
５．５の栄養基５（１〜１０）容量％である。滅菌した
接種物栄養基にＰＤＡ傾斜培地を接種し、３０℃で３０
〜５０時間増殖を行なった後、これを増殖培地に移す。
増殖培地の油はトウモロコシ油もしくは大豆油とするこ
とができ、その濃度は１〜６％とすることができる。全
ての油は最初から存在していてもよく、また増殖開始後
に添加して増量してもよい。
脂肪分解酵素の生成 菌系体の濾過によって脂肪分解酵素は効率的に分離され
る。採取時（ＰＨ４．５〜５．０）における粗培養物の
脂肪分解酵素活性は菌系体に依存する。菌系体を含まな
い培養物濾液は殆ど脂肪分解酵素活性を有しておらず
（＜５％）、またチーズのフレーバーに悪影響を及ぼし
得る可溶性細胞外成分を殆ど含有していない。
る。採取時（ＰＨ４．５〜５．０）における粗培養物の
脂肪分解酵素活性は菌系体に依存する。菌系体を含まな
い培養物濾液は殆ど脂肪分解酵素活性を有しておらず
（＜５％）、またチーズのフレーバーに悪影響を及ぼし
得る可溶性細胞外成分を殆ど含有していない。
菌系体から第２の抽出濾液内への脂肪分解酵素活性の遊
離は菌系体濃度、ＰＨ、抽出濾液の緩衝塩濃度（最適Ｐ
Ｈにおいて０．５〜３．０％のＰＯ4）、表面活性剤
（好ましくは＜１％）、および処理時間に依存する。
離は菌系体濃度、ＰＨ、抽出濾液の緩衝塩濃度（最適Ｐ
Ｈにおいて０．５〜３．０％のＰＯ4）、表面活性剤
（好ましくは＜１％）、および処理時間に依存する。
第１図はエトフォト（Ｅｔｈｏｆｏｔ）２４２／２５表
面活性剤を用いて抽出濾液に遊離させた脂肪分解酵素の
量が菌系体の濃度によっていかに変化するかを示すもの
である。このデータは全てＰＨ６．２において得たもの
である。
面活性剤を用いて抽出濾液に遊離させた脂肪分解酵素の
量が菌系体の濃度によっていかに変化するかを示すもの
である。このデータは全てＰＨ６．２において得たもの
である。
脂肪分解酵素の菌系体からの最適な回収は（菌系体から
分離された）脂肪分解酵素が長期間にわたって優れた安
定性を示すことに鑑みて通常はＰＨ６．２において達成
される。ＰＨの増加に伴って脂肪分解酵素はより不安定
になり、ＰＨが７．５を超えると活性が破壊される。例
えば、４〜５℃に４２時間置いた後の濾液はＰＨ６．
３、６．８および７．４においてそれぞれ活性保持率９
４％、８７％、および７４％を示した。最適条件下での
処理後、菌系体濾液から約８０〜９０％の脂肪分解酵素
活性を回収することができる。
分離された）脂肪分解酵素が長期間にわたって優れた安
定性を示すことに鑑みて通常はＰＨ６．２において達成
される。ＰＨの増加に伴って脂肪分解酵素はより不安定
になり、ＰＨが７．５を超えると活性が破壊される。例
えば、４〜５℃に４２時間置いた後の濾液はＰＨ６．
３、６．８および７．４においてそれぞれ活性保持率９
４％、８７％、および７４％を示した。最適条件下での
処理後、菌系体濾液から約８０〜９０％の脂肪分解酵素
活性を回収することができる。
抽出濾液中の脂肪分解酵素は直接チーズフレーバーを変
化させるために使用することも可能であり、またチーズ
に添加する前に真空中で、もしくは超遠心を用いて濃縮
することも可能である。濾液もしくは濃縮物は０〜３５
℃において真空内で乾燥するか、あるいは噴霧乾燥する
ことにより、チーズ製造において日常的に用いられる例
えば塩化ナトリウム、リン酸塩等の他成分を混合可能な
乾燥濃縮物とすることができる。濃縮および乾燥のため
の方法は当業者によって公知の従来技術である。
化させるために使用することも可能であり、またチーズ
に添加する前に真空中で、もしくは超遠心を用いて濃縮
することも可能である。濾液もしくは濃縮物は０〜３５
℃において真空内で乾燥するか、あるいは噴霧乾燥する
ことにより、チーズ製造において日常的に用いられる例
えば塩化ナトリウム、リン酸塩等の他成分を混合可能な
乾燥濃縮物とすることができる。濃縮および乾燥のため
の方法は当業者によって公知の従来技術である。
脂肪分解酵素活性の検定 脂肪分解酵素活性に対して２つの異なった検定を用い
た。第１の脂肪分解酵素前胃ユニット（ＬＦＵ）を測定
するために電位差滴定を行なった。「フードケミカルコ
ーデックス第３版」（Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃ
ｏｄｅｘ ３ｒｄ Ｅｄ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８１）に示されるように１
ＬＦＵは毎分１．５μモルの酪酸を遊離する活性に相当
する。
た。第１の脂肪分解酵素前胃ユニット（ＬＦＵ）を測定
するために電位差滴定を行なった。「フードケミカルコ
ーデックス第３版」（Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃ
ｏｄｅｘ ３ｒｄ Ｅｄ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８１）に示されるように１
ＬＦＵは毎分１．５μモルの酪酸を遊離する活性に相当
する。
滴定基質は適当な高速混合機のヘッドに嵌合する半パイ
ントのフリーザージャーに入れた９５mlの水にカゼイン
６００mgに相当する量のカゼインナトリウムを分散させ
ることによって調製した。これに５．０ｇのヒドロキシ
ル化したレシチンを混合した。最後に５．０mlのトリ−
ｎ−ブチリンが添加され、低速で６０秒混合した。この
基質は３３℃に保存し、４時間以内に使用しなければな
らない。
ントのフリーザージャーに入れた９５mlの水にカゼイン
６００mgに相当する量のカゼインナトリウムを分散させ
ることによって調製した。これに５．０ｇのヒドロキシ
ル化したレシチンを混合した。最後に５．０mlのトリ−
ｎ−ブチリンが添加され、低速で６０秒混合した。この
基質は３３℃に保存し、４時間以内に使用しなければな
らない。
試料は正確に坪量した酵素を水に懸濁もしくは溶解させ
ることによって調製した。
ることによって調製した。
測定時には滴定器を０．０５ｎ水酸化ナトリウムで充た
し、装置は製造者の指示に従ってキャリプレートした。
基質を約１５秒間マグネチックスターラーで混合した
後、その２０mlを滴定器の反応容器にピペットで注入し
た。試料１mlを添加し、１５分間平衡させた。滴定中に
滴定液が滴下された量は１分あたりのmlとして測定し、
Ｒとして記録した。酵素活性は下式により計算した。
し、装置は製造者の指示に従ってキャリプレートした。
基質を約１５秒間マグネチックスターラーで混合した
後、その２０mlを滴定器の反応容器にピペットで注入し
た。試料１mlを添加し、１５分間平衡させた。滴定中に
滴定液が滴下された量は１分あたりのmlとして測定し、
Ｒとして記録した。酵素活性は下式により計算した。
ＬＦＵ／ｇ＝Ｒ×0.025×103／（Ｗ×1.25） ここで、Ｗは分析用試料１．０ml中に含まれる酵素調製
物の重量をｇで表わしたものである。
物の重量をｇで表わしたものである。
トリカプロイン（Ｃ６）、トリカプリリン（Ｃ８）、ト
リカプリン（Ｃ１０）を加水分解する酵素の能力は単に
トリ−ｎ−ブチリンを所望の基質で置き換えるだけで測
定可能である。
リカプリン（Ｃ１０）を加水分解する酵素の能力は単に
トリ−ｎ−ブチリンを所望の基質で置き換えるだけで測
定可能である。
第２の検定はクリーム−酸滴定法である。乳脂肪分１
０．５％のハーフアンドハーフ（Ｈａｌｆ ａｎｄ Ｈ
ａｌｆ）のアリコート（２０．０ml）を２オンスのガラ
スびん内に入れ、恒温水浴中で３３℃とした。温度平衡
の達成後（約１０分後）、１．０mlの酵素溶液を添加
し、２時間インキュベートした。次いで１０mlのエタノ
ール（２Ａ処方の変性アルコールが適当）を添加して反
応を停止した後に０．０５ＮのＮａＯＨを用いてＰＨ
９．５まで滴定を行なった。滴定はガラス電極を用いて
行なうべきであり、アルコールを加えたインキュベーシ
ョン混合物はマグネチックスターラーで撹拌すべきであ
る。
０．５％のハーフアンドハーフ（Ｈａｌｆ ａｎｄ Ｈ
ａｌｆ）のアリコート（２０．０ml）を２オンスのガラ
スびん内に入れ、恒温水浴中で３３℃とした。温度平衡
の達成後（約１０分後）、１．０mlの酵素溶液を添加
し、２時間インキュベートした。次いで１０mlのエタノ
ール（２Ａ処方の変性アルコールが適当）を添加して反
応を停止した後に０．０５ＮのＮａＯＨを用いてＰＨ
９．５まで滴定を行なった。滴定はガラス電極を用いて
行なうべきであり、アルコールを加えたインキュベーシ
ョン混合物はマグネチックスターラーで撹拌すべきであ
る。
クリーム中に存在する塩類を中和するのに必要なアルカ
リの量を補正するために基質コントロール（２０mlのハ
ーフアンドハーフに１０mlの水を加えたもの）を使用し
た。
リの量を補正するために基質コントロール（２０mlのハ
ーフアンドハーフに１０mlの水を加えたもの）を使用し
た。
また、酵素中に存在する塩類を中和するのに必要なアル
カリの量を測定するために酵素コントロールを使用し
た。
カリの量を測定するために酵素コントロールを使用し
た。
乳脂肪１％の加水分解に対応する酸度の増加は０．０５
Ｎ ＮａＯＨ １．６５mlの滴定差に相当する。酸素は
以下の関係式から計算した。
Ｎ ＮａＯＨ １．６５mlの滴定差に相当する。酸素は
以下の関係式から計算した。
脂肪分解酵素活性に対するＰＨ、温度、および時間の影
響 本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解酵素によ
るトリブチリンの加水分解に対する温度およびＰＨの影
響を第２図〜第４図に示す。第２図に示すように酵素活
性の最適温度は約４２．５℃であり、第３図に示すよう
に最適ＰＨは７．０近辺である。第４図に示すように温
度上昇に伴って活性は激減し、ＰＨが増加するとこの効
果はより急激になる。また、第５ａ〜ｆ図に示すよう
に、６０℃以下の温度においてはＰＨ７．０が明らかに
最適であるにもかかわらず時間の増加によってＰＨ値
６．２以上における悪影響が強調される。
響 本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解酵素によ
るトリブチリンの加水分解に対する温度およびＰＨの影
響を第２図〜第４図に示す。第２図に示すように酵素活
性の最適温度は約４２．５℃であり、第３図に示すよう
に最適ＰＨは７．０近辺である。第４図に示すように温
度上昇に伴って活性は激減し、ＰＨが増加するとこの効
果はより急激になる。また、第５ａ〜ｆ図に示すよう
に、６０℃以下の温度においてはＰＨ７．０が明らかに
最適であるにもかかわらず時間の増加によってＰＨ値
６．２以上における悪影響が強調される。
トリグリセリド加水分解 本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解酵素を用
いて特定のトリグリセリド（トリカプリリン、トリカプ
ロイン、およびトリブチリン）を対応する遊離脂肪酸
（ＦＦＡ）（カプリル酸、カプロン酸、および酪酸）に
分解した。これらのＦＦＡの測定には従来のガスクロマ
トグラフィー技術を用いることができる。
いて特定のトリグリセリド（トリカプリリン、トリカプ
ロイン、およびトリブチリン）を対応する遊離脂肪酸
（ＦＦＡ）（カプリル酸、カプロン酸、および酪酸）に
分解した。これらのＦＦＡの測定には従来のガスクロマ
トグラフィー技術を用いることができる。
加水分解は以下の方法で測定した。１％のアラビアゴム
を含有する１００mlのリン酸緩衝液（ＰＨ６．５、０．
５Ｍ）と５ｇのトリグリセリドを混合してエマルジョン
を形成し、菌類由来の酵素２ml（１００mg）と共に３３
℃において４時間振盪した。反応を停止するために１０
mlのエタノールを添加し、この結果得られた遊離脂肪酸
をガスクロマトグラフィーによって測定した。
を含有する１００mlのリン酸緩衝液（ＰＨ６．５、０．
５Ｍ）と５ｇのトリグリセリドを混合してエマルジョン
を形成し、菌類由来の酵素２ml（１００mg）と共に３３
℃において４時間振盪した。反応を停止するために１０
mlのエタノールを添加し、この結果得られた遊離脂肪酸
をガスクロマトグラフィーによって測定した。
トリグリセリド加水分解の結果は以下の通りである。
本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解酵素はト
リブチリンよりもトリカプロインおよびトリカプリリン
をより効率的に加水分解する。このタイプの加水分解は
２つの番号（Ｃ／Ｃ４）の比を調べることによって明ら
かにすることができる。加水分解率の増加はＴＣ／ＴＢ
比によって示すことが可能である。典型的には活性率の
増大は同等のＣ８／Ｃ４産生を招くものであり、上述の
特異性は本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解
酵素独特のものである。
リブチリンよりもトリカプロインおよびトリカプリリン
をより効率的に加水分解する。このタイプの加水分解は
２つの番号（Ｃ／Ｃ４）の比を調べることによって明ら
かにすることができる。加水分解率の増加はＴＣ／ＴＢ
比によって示すことが可能である。典型的には活性率の
増大は同等のＣ８／Ｃ４産生を招くものであり、上述の
特異性は本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解
酵素独特のものである。
下表は公知文献に記載された公知の脂肪分解酵素におけ
るトリブチリン（ＴＢ）に対するトリカプリリン（Ｔ
Ｃ）の加水分解比（ＴＣ／ＴＢ）を示すものである。
るトリブチリン（ＴＢ）に対するトリカプリリン（Ｔ
Ｃ）の加水分解比（ＴＣ／ＴＢ）を示すものである。
第６図および第７図は本発明のアスペルギルス菌に由来
する脂肪分解酵素においてＴＢ加水分解よりもＴＣ加水
分解が有意に優れていること、およびＴＣ加水分解が温
度と共にいかに上昇するかを示すものである。温度４０
℃およびＰＨ７．０においてＴＣ／ＴＢ比は１．７３で
あるが、温度５０℃およびＰＨ７．０においては２．４
９よりも大である。
する脂肪分解酵素においてＴＢ加水分解よりもＴＣ加水
分解が有意に優れていること、およびＴＣ加水分解が温
度と共にいかに上昇するかを示すものである。温度４０
℃およびＰＨ７．０においてＴＣ／ＴＢ比は１．７３で
あるが、温度５０℃およびＰＨ７．０においては２．４
９よりも大である。
乳トリグリセリド加水分解 本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解酵素を用
い、乳中に天然に依存するトリグリセリドの加水分解試
験を行なった。加水分解試験においては乳脂肪分１０．
５％のクリーム１８０mlを０．３６ｇ（０．２％）およ
び０．９０ｇ（０．５％）の本発明のアスペルギルス菌
に由来する脂肪分解酵素もしくは子牛脂肪分解酵素で処
理した。試料は０〜３℃で１５日間保持した後、遊離脂
肪酸（Ｃ４〜Ｃ１２）をガスクロマトグラフィーで測定
した。また、酵素を含まないコントロールクリーム試料
についても実験を行なった。
い、乳中に天然に依存するトリグリセリドの加水分解試
験を行なった。加水分解試験においては乳脂肪分１０．
５％のクリーム１８０mlを０．３６ｇ（０．２％）およ
び０．９０ｇ（０．５％）の本発明のアスペルギルス菌
に由来する脂肪分解酵素もしくは子牛脂肪分解酵素で処
理した。試料は０〜３℃で１５日間保持した後、遊離脂
肪酸（Ｃ４〜Ｃ１２）をガスクロマトグラフィーで測定
した。また、酵素を含まないコントロールクリーム試料
についても実験を行なった。
本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解酵素のＦ
ＦＡ産生はＣ４については子牛脂肪分解酵素とほぼ同等
であるが他のＦＦＡデータの示すところによればＣ６、
Ｃ８、Ｃ１０のトリグリセリドについて産生されるＦＦ
Ａははるかに多い。例えば本発明のアスペルギルス菌に
由来する脂肪分解酵素は子牛脂肪分解酵素に対し、濃度
０．２０％において５．８倍、４．６倍、２．７倍、濃
度０．５０％において２．８倍、３．４倍、１３．４倍
のＣ６、Ｃ８、Ｃ１０をそれぞれ産生する。
ＦＡ産生はＣ４については子牛脂肪分解酵素とほぼ同等
であるが他のＦＦＡデータの示すところによればＣ６、
Ｃ８、Ｃ１０のトリグリセリドについて産生されるＦＦ
Ａははるかに多い。例えば本発明のアスペルギルス菌に
由来する脂肪分解酵素は子牛脂肪分解酵素に対し、濃度
０．２０％において５．８倍、４．６倍、２．７倍、濃
度０．５０％において２．８倍、３．４倍、１３．４倍
のＣ６、Ｃ８、Ｃ１０をそれぞれ産生する。
油中におけるトリグリセリド加水分解 また、本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解酵
素を用い、大豆油、バター油、およびヤシ油それぞれの
５％エマルジョンに対して加水分解試験を行なった。処
理した（３３℃４時間）エマルジョンのクロマトグラフ
ィーによって、トリグリセリドの全域におけるこの脂肪
分解酵素の加水分解が明らかとなった。混合物中のある
種のトリグリセリドのレベルおよび基質を充分に乳化す
る能力により、表７に示すように特定の遊離脂肪酸の割
合は変化し得る。
素を用い、大豆油、バター油、およびヤシ油それぞれの
５％エマルジョンに対して加水分解試験を行なった。処
理した（３３℃４時間）エマルジョンのクロマトグラフ
ィーによって、トリグリセリドの全域におけるこの脂肪
分解酵素の加水分解が明らかとなった。混合物中のある
種のトリグリセリドのレベルおよび基質を充分に乳化す
る能力により、表７に示すように特定の遊離脂肪酸の割
合は変化し得る。
チーズ製造 以下の手順に従い、本発明のアスペルギルス菌に由来す
る脂肪分解酵素を用いてチーズを製造した。牛乳は牧場
から入手して１４５°Ｆ（約６２．８℃）で３０分間バ
ッチ殺菌した後、３６°Ｆ（約２．２℃）で翌日まで保
存した。（コルビー（Ｃｏｌｂｙ）チーズはＨａｎｓｅ
ｎ ＣＨ ６０ＹＴＭをスターターとして製造した。）
本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解酵素およ
びＭｉｌｅｓ６００子牛脂肪分解酵素の（クリーム検定
による）当活性量を予め秤量し、塩分が２重量％となる
ように塩と混合した。２０ポンド（約９．０６ｋｇ）の
ブロックを用い、チーズの処理を８回行なった。塩を含
むが酵素を含まないコントロールブロックも製造した。
る脂肪分解酵素を用いてチーズを製造した。牛乳は牧場
から入手して１４５°Ｆ（約６２．８℃）で３０分間バ
ッチ殺菌した後、３６°Ｆ（約２．２℃）で翌日まで保
存した。（コルビー（Ｃｏｌｂｙ）チーズはＨａｎｓｅ
ｎ ＣＨ ６０ＹＴＭをスターターとして製造した。）
本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解酵素およ
びＭｉｌｅｓ６００子牛脂肪分解酵素の（クリーム検定
による）当活性量を予め秤量し、塩分が２重量％となる
ように塩と混合した。２０ポンド（約９．０６ｋｇ）の
ブロックを用い、チーズの処理を８回行なった。塩を含
むが酵素を含まないコントロールブロックも製造した。
得られたチーズは１日、２８日、７２日、１０２日、お
よび１９８日後にサンプリングした。サンプルは官能評
価し、またガスクロマトグラフィー、公知の酸度（ＡＤ
Ｖ）試験、および１２％ＴＣＡ可溶性窒素試験によって
遊離脂肪酸を分析した。
よび１９８日後にサンプリングした。サンプルは官能評
価し、またガスクロマトグラフィー、公知の酸度（ＡＤ
Ｖ）試験、および１２％ＴＣＡ可溶性窒素試験によって
遊離脂肪酸を分析した。
７２日後において、本発明のアスペルギルス菌に由来す
る脂肪分解酵素０．０４８％を含有するチーズと子牛脂
肪分解酵素０．１２８％を含有するチーズはほぼ同一の
ＡＤＶおよび総ＦＦＡを有しており、総ＦＦＡはコント
ロールのそれよりも５０〜７０％多かった。しかしなが
ら、１０２日および１９８日後には（データを示したよ
うに）使用された酵素の濃度が高くなり過ぎて過剰な量
の遊離脂肪酸が発現するため、良好なフレーバーが得ら
れなくなった。子牛脂肪分解酵素は過剰な量の酪酸を産
生し、本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解酵
素はＣ１４−Ｃ１８において過剰な量の総遊離脂肪酸を
産生した。
る脂肪分解酵素０．０４８％を含有するチーズと子牛脂
肪分解酵素０．１２８％を含有するチーズはほぼ同一の
ＡＤＶおよび総ＦＦＡを有しており、総ＦＦＡはコント
ロールのそれよりも５０〜７０％多かった。しかしなが
ら、１０２日および１９８日後には（データを示したよ
うに）使用された酵素の濃度が高くなり過ぎて過剰な量
の遊離脂肪酸が発現するため、良好なフレーバーが得ら
れなくなった。子牛脂肪分解酵素は過剰な量の酪酸を産
生し、本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解酵
素はＣ１４−Ｃ１８において過剰な量の総遊離脂肪酸を
産生した。
本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解酵素は１
０２日後においてはより低い濃度（０．０１２％および
０．０２４％）で酪酸に関連する酸敗を伴うことなく良
好な熟成フレーバーをもたらした。この時点においてコ
ントロールは弱いフレーバーを有しており、子牛脂肪分
解酵素は酵素調製物のレベルが低い場合（０．０６４％
および０．０３２％）においても酪酸に関連する典型的
な酸敗を示した。
０２日後においてはより低い濃度（０．０１２％および
０．０２４％）で酪酸に関連する酸敗を伴うことなく良
好な熟成フレーバーをもたらした。この時点においてコ
ントロールは弱いフレーバーを有しており、子牛脂肪分
解酵素は酵素調製物のレベルが低い場合（０．０６４％
および０．０３２％）においても酪酸に関連する典型的
な酸敗を示した。
第８図および第９図はコントロールチーズ、０．４８％
ＮＭ３１３脂肪分解酵素を用いて製造したチーズ、およ
び０．１２８％の子牛脂肪分解酵素を用いて製造したチ
ーズによるトリグリセリド加水分解のデータを示すもの
である。７２日および１０２日後において、子牛脂肪分
解酵素を用いて製造したチーズにおける酪酸含量がコン
トロールのそれよりも極めて高くなっていることが明確
に認められる。一方、酪酸レベルに関する限り、本発明
のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解酵素を用いて製
造したチーズはコントロールチーズと同様であった。
ＮＭ３１３脂肪分解酵素を用いて製造したチーズ、およ
び０．１２８％の子牛脂肪分解酵素を用いて製造したチ
ーズによるトリグリセリド加水分解のデータを示すもの
である。７２日および１０２日後において、子牛脂肪分
解酵素を用いて製造したチーズにおける酪酸含量がコン
トロールのそれよりも極めて高くなっていることが明確
に認められる。一方、酪酸レベルに関する限り、本発明
のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解酵素を用いて製
造したチーズはコントロールチーズと同様であった。
本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解酵素はマ
イルドチーズの熟成工程を２〜５分の１に短縮するもの
である。１０２日後において、本発明のアスペルギルス
菌に由来する脂肪分解酵素を添加したチーズはコントロ
ールチーズよりも大きなＣ１６、Ｃ１８、Ｃ１８−１、
およびＣ１８−２含量を有し、通常の熟成工程の加速
（すなわち、より迅速なフレーバー発現）が示された。
そして、本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解
酵素を用いて製造したチーズはチェダー様フレーバーを
発現し、子牛脂肪分解酵素を用いたものはイタリアンタ
イプのフレーバーを発現した。本発明によるアスペルギ
ルス菌に由来する脂肪分解酵素はチェダーおよび他のマ
イルドフレーバーを有するチーズに必要な保存期間を短
縮する上で独特なものであることが明らかである。
イルドチーズの熟成工程を２〜５分の１に短縮するもの
である。１０２日後において、本発明のアスペルギルス
菌に由来する脂肪分解酵素を添加したチーズはコントロ
ールチーズよりも大きなＣ１６、Ｃ１８、Ｃ１８−１、
およびＣ１８−２含量を有し、通常の熟成工程の加速
（すなわち、より迅速なフレーバー発現）が示された。
そして、本発明のアスペルギルス菌に由来する脂肪分解
酵素を用いて製造したチーズはチェダー様フレーバーを
発現し、子牛脂肪分解酵素を用いたものはイタリアンタ
イプのフレーバーを発現した。本発明によるアスペルギ
ルス菌に由来する脂肪分解酵素はチェダーおよび他のマ
イルドフレーバーを有するチーズに必要な保存期間を短
縮する上で独特なものであることが明らかである。
本発明を好ましい態様に特に関連して記述したが、本発
明の当業者にとって明白であるように、本発明を理解し
た後には特許請求の範囲に定められた本発明の精神およ
び範囲を逸脱することなく様々な変更および修正が可能
である。
明の当業者にとって明白であるように、本発明を理解し
た後には特許請求の範囲に定められた本発明の精神およ
び範囲を逸脱することなく様々な変更および修正が可能
である。
第１図は脂肪分解酵素分離に対する菌系体濃度の影響を
示すグラフ、 第２図はＰＨ６．２における脂肪分解酵素活性に対する
温度の影響を示すグラフ、 第３図は温度３３℃における脂肪分解酵素活性に対する
ＰＨの影響を示すグラフ、 第４図は様々なＰＨにおける脂肪分解酵素活性に対する
温度の影響を２０分間インキュベーションにおいて示す
グラフ、 第５ａ〜ｆ図は様々なＰＨおよび時間における脂肪分解
酵素活性に対する温度の影響を示すグラフ、 第６図は温度４０℃における本発明のアスペルギルス菌
に由来する脂肪分解酵素によるトリカプリリン加水分解
に対する時間の影響を示すグラフ、 第７図は温度５０℃における本発明のアスペルギルス菌
に由来する脂肪分解酵素によるトリカプリリン加水分解
に対する時間の影響を示すグラフ、 第８図は酵素を添加したチーズ中における総遊離脂肪酸
に対する特定遊離脂肪酸の加水分解百分率を示すグラ
フ、 第９図は酵素を添加したチーズ中における総遊離脂肪酸
に対する特定遊離脂肪酸の加水分解百分率を示すグラフ
である。
示すグラフ、 第２図はＰＨ６．２における脂肪分解酵素活性に対する
温度の影響を示すグラフ、 第３図は温度３３℃における脂肪分解酵素活性に対する
ＰＨの影響を示すグラフ、 第４図は様々なＰＨにおける脂肪分解酵素活性に対する
温度の影響を２０分間インキュベーションにおいて示す
グラフ、 第５ａ〜ｆ図は様々なＰＨおよび時間における脂肪分解
酵素活性に対する温度の影響を示すグラフ、 第６図は温度４０℃における本発明のアスペルギルス菌
に由来する脂肪分解酵素によるトリカプリリン加水分解
に対する時間の影響を示すグラフ、 第７図は温度５０℃における本発明のアスペルギルス菌
に由来する脂肪分解酵素によるトリカプリリン加水分解
に対する時間の影響を示すグラフ、 第８図は酵素を添加したチーズ中における総遊離脂肪酸
に対する特定遊離脂肪酸の加水分解百分率を示すグラ
フ、 第９図は酵素を添加したチーズ中における総遊離脂肪酸
に対する特定遊離脂肪酸の加水分解百分率を示すグラフ
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 9/20 Ｃ１２Ｒ 1:66）
Claims (2)
- 【請求項１】トリカプリリン／トリブチリン加水分解比
が０．７５より大である脂肪分解酵素を産生する寄託番
号20719としてＡＴＣＣに寄託されたアスペルギルス
菌。 - 【請求項２】前記加水分解比が１．５より大であること
を特徴とする特許請求の範囲第１項記載のアスペルギル
ス菌。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US623931 | 1984-06-25 | ||
| US06/623,931 US4636468A (en) | 1984-06-25 | 1984-06-25 | Lipolytic enzyme derived from a aspergillus microorganism having an accelerating effect on cheese flavor development |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6115683A JPS6115683A (ja) | 1986-01-23 |
| JPH0634703B2 true JPH0634703B2 (ja) | 1994-05-11 |
Family
ID=24499940
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60138835A Expired - Lifetime JPH0634703B2 (ja) | 1984-06-25 | 1985-06-25 | 新規なアスペルギルス菌 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4636468A (ja) |
| EP (1) | EP0167309B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0634703B2 (ja) |
| AT (1) | ATE81868T1 (ja) |
| AU (1) | AU595481B2 (ja) |
| CA (1) | CA1237687A (ja) |
| DE (1) | DE3586778T2 (ja) |
| DK (1) | DK284985A (ja) |
| GR (1) | GR851481B (ja) |
| NZ (1) | NZ212522A (ja) |
Families Citing this family (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4927644A (en) * | 1985-01-09 | 1990-05-22 | Genencor, Inc. | Preferential entrainment of enzymes in cheese curds |
| GB8525012D0 (en) * | 1985-10-10 | 1985-11-13 | Cpc International Inc | Carbohydrate refining process |
| US4717665A (en) * | 1986-05-16 | 1988-01-05 | Miles Laboratories, Inc. | Recovery of microbial lipase |
| US5320959A (en) * | 1990-08-15 | 1994-06-14 | Rhone-Poulenc Inc. | Liquid lipase from animal origin and method of preparation |
| US5445949A (en) * | 1992-05-19 | 1995-08-29 | Gist-Brocades N.V. | Large scale separation and purification of fermentation product |
| EP0574050A1 (en) * | 1992-05-19 | 1993-12-15 | Gist-Brocades N.V. | Large scale separation and purification of fermentation product |
| DE4329463A1 (de) * | 1993-09-01 | 1995-03-02 | Cognis Bio Umwelt | Mehrenzymgranulate |
| DE4422433A1 (de) * | 1994-06-28 | 1996-01-04 | Cognis Bio Umwelt | Mehrenzymgranulat |
| DE19515072A1 (de) * | 1995-04-28 | 1996-10-31 | Cognis Bio Umwelt | Cellulasehaltiges Waschmittel |
| US6936289B2 (en) | 1995-06-07 | 2005-08-30 | Danisco A/S | Method of improving the properties of a flour dough, a flour dough improving composition and improved food products |
| ES2168236T3 (es) | 1997-04-09 | 2005-04-16 | Danisco A/S | Utilizacion de lipasa para mejorar las pastas de pan y los productos de panaderia. |
| DE19725508A1 (de) | 1997-06-17 | 1998-12-24 | Clariant Gmbh | Wasch- und Reinigungsmittel |
| ATE231186T1 (de) | 1998-07-21 | 2003-02-15 | Danisco | Lebensmittel |
| US6399121B1 (en) * | 1999-03-16 | 2002-06-04 | Novozymes A/S | Process for producing cheese |
| EP1223813B1 (en) | 1999-10-28 | 2013-04-10 | DSM IP Assets B.V. | Process for producing cheese by using attenuated kluyveromyces lactis cells |
| BR0209154A (pt) | 2001-05-18 | 2004-07-20 | Danisco | Processo de preparação de uma massa com uma enzima |
| EP1438346A1 (de) | 2001-10-22 | 2004-07-21 | Henkel Kommanditgesellschaft auf Aktien | Baumwollaktive schmutzablösevermögende polymere auf urethan-basis |
| WO2004058931A1 (de) | 2002-12-20 | 2004-07-15 | Henkel Kommanditgesellschaft Auf Aktien | Bleichmittelhaltige wasch- oder reinigungsmittel |
| DE602004030000D1 (de) | 2003-01-17 | 2010-12-23 | Danisco | Verfahren zur in-situ-herstellung eines emulgators in einem nahrungsmittel |
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