JPH0635973B2 - Method for measuring calcium ion in tear fluid - Google Patents
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、涙液中のカルシウムイオンの測定方法に係
り、更に詳しくは涙液中のカルシウムイオン濃度を機器
を用いることなく、その場で簡単に測定することができ
る方法及びこの方法を実施するに好適なキットに関す
る。Description: TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for measuring calcium ion in tear fluid, more specifically, on-site measurement of the calcium ion concentration in tear fluid without using an instrument. It relates to a method that can be easily measured and a kit suitable for carrying out this method.
［従来の技術］ コンタクトレンズを装用すると、涙液中の蛋白質・脂質
・カルシウム化合物といった成分が、コンタクトレンズ
に汚れとして付着または吸着してしまい、コンタクトレ
ンズの果たすべき機能に支障をきたすとともに、眼組織
に対しても障害を及ぼす場合がある。涙液中の成分がコ
ンタクトレンズに付着すること自体は、コンタクトレン
ズが涙液に接している以上、避けられないことである
が、この涙液中の成分のうち、蛋白質や脂質といった汚
れは、従来の洗浄方法、例えば特公昭５３−４７８１０
号公報や特開昭６１−６１１２７号公報等による洗浄方
法で、比較的容易に除去することが可能である。しかし
ながら、カルシウム化合物による汚れについては、カル
シウム化合物がコンタクトレンズに固着してしまい、除
去することが困難である。[Prior Art] When a contact lens is worn, components such as proteins, lipids, and calcium compounds in tear fluid adhere to or are adsorbed on the contact lens as dirt, which impairs the function that the contact lens should perform. It may also cause damage to the organization. It is inevitable that the components in the tear fluid adhere to the contact lens as long as the contact lens is in contact with the tear fluid, but among the components in the tear fluid, stains such as proteins and lipids are A conventional cleaning method, for example, Japanese Examined Patent Publication No. 53-47810
It can be removed relatively easily by the cleaning method disclosed in Japanese Patent Laid-Open No. 61-61127. However, it is difficult to remove stains caused by the calcium compound because the calcium compound adheres to the contact lens.
そこでコンタクトレンズ装用者の涙液について、そのカ
ルシウムイオンの多少を調べることが行なわれており、
涙液中のカルシウムイオン濃度の定量は、従来、原子吸
光分析法や蛍光分析法などによって行なわれている。例
えば、原子吸光分析法による定量は、Uotila MH,SobleR
E,Savory J.が“Measurement of tear calcium level
s”（Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.11 258 -259,1972）
に報告しており、蛍光分析法による定量は、Stanley W.
Huth,MA；Paul Hirano；Irving H.Leopold,MD,Dscが“C
alcium in Tears and Contact Lens Wear”（Arch.Opht
halmol.98122-125,1980）に報告している。Therefore, it has been conducted to examine the amount of calcium ions in tears of contact lens wearers,
Quantitative determination of calcium ion concentration in tears has been conventionally performed by atomic absorption spectrometry, fluorescence analysis, or the like. For example, quantification by atomic absorption spectrometry is performed using Uotila MH, SobleR
E, Savory J. “Measurement of tear calcium level
s ”(Invest.Ophthalmol.Vis.Sci. 11 258 -259,1972)
Quantitative analysis by fluorescence analysis was performed by Stanley W.
Huth, MA ； Paul Hirano ； Irving H. Leopold, MD, Dsc is “C
alcium in Tears and Contact Lens Wear ”(Arch.Opht
halmol. 98 122-125, 1980).
また、その他のカルシウムイオン濃度の測定方法として
は、蛍光試薬Fura−２を用いた蛍光分析、ＥＤＴＡによ
る滴定、細管式等速電気泳動分析などがある。Other methods for measuring the calcium ion concentration include fluorescence analysis using the fluorescent reagent Fura-2, titration with EDTA, and capillary tube isotachophoresis analysis.
しかしながら、これらの方法は、カルシウムイオン濃度
を精度良く測定できるものの、各種の機器を用いるな
ど、煩雑な手間と、時間及び設備が必要であるという欠
点がある。However, although these methods can measure the calcium ion concentration with high accuracy, they have the drawback of requiring complicated labor, time and equipment such as using various instruments.
［発明が解決しようとする課題］ 従来の涙液中のカルシウムイオンの測定方法は、上述し
た様に、精度良く定量することはできても、各種の機器
を用いるなど手間がかかり、涙液採取後、短時間で結果
を得ることができないという欠点がある。[Problems to be Solved by the Invention] As described above, the conventional method for measuring calcium ions in tear fluid can accurately quantify, but it takes time and labor such as using various instruments, and tear fluid collection is performed. After that, there is a drawback that the result cannot be obtained in a short time.
また、測定対象が涙液ということから、サンプル量及び
サンプリング方法に非常に制限があるという点にも考慮
しなければならない。Further, it should be taken into consideration that the amount of sample and the sampling method are very limited because the measurement target is tear fluid.
従って本発明の課題は、涙液中のカルシウムイオンを、
限られたサンプル量で、短時間に簡便に測定することが
できる方法およびこの方法に好ましく用いられるキット
を提供することにある。Therefore, the object of the present invention is to remove calcium ions in tear fluid,
It is an object of the present invention to provide a method capable of simply measuring in a short time with a limited sample amount and a kit preferably used for this method.
［課題を解決するための手段］ 本発明者は、涙液分泌量を測定するためのシルマー試験
後のシルマー試験紙を有効に利用して、涙液中のカルシ
ウムイオンを調べることができれば、カルシウム化合物
のコンタクトレンズへの付着の可能性を予測し、未然に
その防止対策をとるなどの対応が可能となることに着眼
した。そして試験後の涙液を含んだシルマー試験紙の一
定量を一定量の水で抽出処理して得られた抽出液に、カ
ルシウムイオンとキレートを形成する発色試薬を加えて
抽出液を呈色させることにより、涙液中のカルシウムイ
オンを簡易に測定できることを見い出した。さらにシル
マー試験紙以外のものでも、水を吸収する性質を有する
試験紙であれば、同様に使用可能であることを見い出し
た。[Means for Solving the Problems] If the present inventor can effectively use the Schirmer test paper after the Schirmer test for measuring the amount of lacrimal secretion to examine the calcium ion in the lachrymal fluid, We focused on predicting the possibility of compounds adhering to contact lenses and taking preventive measures against them. After the test, a certain amount of Schirmer test paper containing tear fluid is extracted with a certain amount of water, and a color-forming reagent that forms a chelate with calcium ions is added to the extract to color the extract. Therefore, it was found that the calcium ion in the tear can be easily measured. Furthermore, it has been found that a test paper other than Schirmer test paper can be used as long as it has a property of absorbing water.
従って本発明は、涙液を含ませた、水吸収性試験紙の一
定量を一定量の水で抽出処理して得られた抽出液に、カ
ルシウムイオンとキレートを形成する発色試薬を加えて
前記抽出液を呈色させて、その呈色の度合により涙液中
のカルシウムイオン濃度の高低を評価することを特徴と
する涙液中のカルシウムイオンの測定方法にある。Therefore, the present invention, by adding a coloring reagent that forms a chelate with calcium ions to an extract obtained by extracting a certain amount of water-absorbent test paper containing tears with a certain amount of water, A method for measuring calcium ion in tear fluid is characterized in that the extract is colored and the level of calcium ion concentration in tear fluid is evaluated based on the degree of coloration.
以下、本発明のカルシウムイオンの測定方法を詳細に説
明する。Hereinafter, the method for measuring calcium ions of the present invention will be described in detail.
本発明の方法により、涙液中のカルシウムイオンを測定
するためには、その試験紙として、水吸収性試験紙を用
いる。水吸収性を要件としたのは、涙液に接触したとき
に涙液を吸収保持させるためである。この試験紙は上記
の水吸収性を有するとともに、涙液を含ませるために眼
組織と接触させた場合に眼組織に悪影響を与えず、無害
なものであれば、いかなるものも用いられるが、濾紙を
用いるのが好ましく、濾紙の中でも特に、涙液分泌量を
測定するためのシルマー試験に用いられるシルマー試験
紙（例えばアルコン社製シルマー涙液試験紙“Schirmer
Tear Test Strips”等）を用いると涙液分泌量の測定
と涙液中のカルシウムイオンの測定とを同時に行なうこ
とができるので特に好ましい。ここでシルマー試験と
は、幅５mm、長さ３５mmの濾紙からなるシルマー試験紙
の先端５mmを折り曲げ、これを両下眼瞼外側1/3の部分
の瞼結膜に掛け、５分間放置し、涙で濡れた長さを折り
目部分から測定し、涙液分泌量が正常（１０〜３０mm）
か涙液減少症（１０mm以下）であるかを判断するための
試験である。In order to measure calcium ion in tears by the method of the present invention, a water-absorbent test paper is used as the test paper. The requirement for water absorbency is to allow the tear fluid to be absorbed and retained when it contacts the tear fluid. This test paper has the above-mentioned water absorbency, does not adversely affect the eye tissue when brought into contact with the eye tissue to contain tear fluid, and any harmless material can be used, It is preferable to use a filter paper, and in particular, among the filter papers, a Schirmer test paper used for a Schirmer test for measuring the amount of lacrimal secretion (for example, Schirmer tear test paper "Schirmer manufactured by Alcon Co."
Tear Test Strips ”) is particularly preferable because it is possible to measure the lacrimal secretion amount and the calcium ion in the lacrimal fluid at the same time. The Schirmer test is a filter paper with a width of 5 mm and a length of 35 mm. Bend the tip of the Schirmer test paper consisting of 5 mm, hang it on the lid conjunctiva on the outer 1/3 part of both lower eyelids, leave it for 5 minutes, and measure the length wet with tears from the folds Is normal (10 to 30 mm)
It is a test to determine whether the patient has a lacrimal fluid (10 mm or less).
上述の如く、シルマー試験後のシルマー試験紙を用いれ
ば涙液分泌量の測定と同時に涙液中のカルシウムイオン
の測定を行なうことができ好適であるので、以下、本発
明の方法をシルマー試験紙を用いた例について説明す
る。As described above, since it is preferable to use the Schirmer test paper after the Schirmer test, it is possible to measure the calcium ion in the tear simultaneously with the measurement of the lacrimal secretion amount. Therefore, the method of the present invention will be described below. An example using will be described.
先ずシルマー試験により涙液分泌量を評価した後の涙液
を含んだシルマー試験紙を用意する。この涙液を含んだ
シルマー試験紙はカルシウムイオン測定のための涙液サ
ンプル量を一定にするため、その涙液を含んだ部分を一
定の大きさに切断して使用する。例えば上記の幅５mm、
長さ３５mmのシルマー試験紙の場合、涙液を含んだ部分
を長さ１０〜３０mmとなるように切断する。First, a Schirmer test paper containing tear fluid after evaluating the amount of tear production by the Schirmer test is prepared. The Schirmer test paper containing tear fluid is used by cutting the tear fluid-containing portion into a certain size in order to make the amount of tear fluid sample for calcium ion measurement constant. For example, the width is 5mm,
In the case of a Schirmer test paper having a length of 35 mm, the portion containing tear fluid is cut to have a length of 10 to 30 mm.
次に一定の大きさに切断されたシルマー試験紙を一定量
の水で抽出処理する。この抽出処理に用いられる水は、
涙液中のカルシウムイオンの測定精度を上げるために、
カルシウムイオン等のイオン成分を含まない蒸留水を用
いるのが好ましい。この抽出処理は所定量の水を入れた
抽出用容器中に前記シルマー試験紙片を投入し、撹拌す
ることにより行なわれる。容器が栓付きであれば、密栓
後、激しく振とうしても良い。この抽出処理により、涙
液中のカルシウムイオンは抽出液中に移行する。抽出の
ための水の量は、例えば幅５mm、長さ２０mmのシルマー
試験紙片の場合、０．５〜５mlが適当である。０．５ml
未満では、少量すぎてシルマー試験紙片中のカルシウム
イオンを十分に水層に移行させることができないばかり
でなく、後続の発色試薬による抽出液の呈色の判定が判
りずらく、一方、５mlを超えると、カルシウムイオンの
抽出は十分に行なうことができるが、抽出液中のカルシ
ウムイオン濃度が低くなり、後続の発色試薬による抽出
液の呈色の度合が少なく、判定しにくくなるからであ
る。抽出に用いられる水の特に好ましい量は、前記の大
きさのシルマー試験紙片の場合、１〜３mlである。Next, the Schirmer test paper cut into a certain size is extracted with a certain amount of water. The water used for this extraction process is
To improve the accuracy of calcium ion measurement in tears,
It is preferable to use distilled water that does not contain ionic components such as calcium ions. This extraction treatment is carried out by putting the Schirmer test paper strips into an extraction container containing a predetermined amount of water and stirring. If the container has a stopper, it may be vigorously shaken after sealing. By this extraction treatment, calcium ions in the tear fluid are transferred into the extract. A suitable amount of water for extraction is 0.5 to 5 ml in the case of Schirmer test strips having a width of 5 mm and a length of 20 mm, for example. 0.5 ml
If the amount is less than the above, not only is the amount too small to transfer the calcium ions in the Schirmer test strip to the aqueous layer sufficiently, but it is difficult to judge the coloring of the extract by the subsequent coloring reagent, while the amount exceeds 5 ml. With this, extraction of calcium ions can be sufficiently performed, but the concentration of calcium ions in the extract is low, the degree of coloration of the extract by the subsequent coloring reagent is small, and determination is difficult. A particularly preferred amount of water used for extraction is 1 to 3 ml for Schirmer strips of the above size.
次にこの抽出液に、カルシウムイオンとキレートを形成
する発色試薬を加えて、抽出液を呈色させ、その呈色の
度合により涙液中のカルシウムイオン濃度の高低を評価
する。用いられる発色試薬としては、カルシウムイオン
濃度によって異なった発色を示す試薬が好ましく、例え
ばｏ−クレゾールフタレインコンプレクソン、ＮＮ希釈
粉末指示薬（商品名ドータイトＮＮとして市販されてい
る１−（２−ヒドロキシ−４−スルホ−１−ナフチルア
ゾ）−２−ヒドロキシナフトエ酸を粉末状Ｋ２ＳＯ４で
１０倍に希釈した混合物）、ＥＢＴ試液（エリオクロム
ブラックＴ０．５ｇおよび塩酸ヒドロキシルアミン４．
５ｇをエタノール（９０％(V/V)）１００mlに溶解した
混合物）などが挙げられる。これらの試薬は、カルシウ
ムとキレートを作り発色するが、この時の発色が、肉眼
での判定の容易なものであることが望ましい。中でも、
キレートの形成による発色が、カルシウムイオン濃度が
増加するに従って、青から紫を経て赤に変り、肉眼でと
らえやすいＮＮ希釈粉末指示薬、ＥＢＴ試液が好まし
い。発色試薬の形態としては、一定量を添加することが
容易であり、前記抽出液に添加した時に、短時間で均一
に溶解するものであれば、特に限定されない。Next, a color-forming reagent that forms a chelate with calcium ions is added to the extract, and the extract is colored, and the level of calcium ion concentration in the lacrimal fluid is evaluated based on the degree of coloration. As the coloring reagent used, a reagent showing different colors depending on the calcium ion concentration is preferable. For example, o-cresolphthalein complexone, NN diluted powder indicator (commercially available under the trade name Dotite NN 1- (2-hydroxy- 4-sulfo-1-naphthylazo) -2-hydroxynaphthoic acid diluted 10-fold with powdered K 2 SO 4 ), EBT test solution (0.5 g of eriochrome black T and hydroxylamine hydrochloride 4.
A mixture of 5 g dissolved in 100 ml of ethanol (90% (V / V)) may be mentioned. These reagents form a chelate with calcium to form a color, and it is desirable that the color at this time be one that can be easily judged by the naked eye. Above all,
The NN diluted powder indicator and EBT test solution, which are easy to be visually recognized by the naked eye, are preferable because the color formation due to the formation of a chelate changes from blue to purple and then red as the calcium ion concentration increases. The form of the coloring reagent is not particularly limited as long as it can be easily added in a fixed amount and can be uniformly dissolved in a short time when added to the extract.
本発明の好ましい態様によれば、上で得られた抽出液に
前記発色試薬を加える前にその一部を分取し、所定倍率
に希釈して得られた希釈液にも上の抽出液の呈色に用い
たと同一の発色試薬を加えて、この希釈液も呈色させる
ことにより、前記の抽出液の呈色の度合とともに希釈液
の呈色の度合も観察することが可能になり、２つの呈色
の度合の組み合せにより、涙液中のカルシウムイオン濃
度を更に細かな濃度区分で判断することが可能となる。According to a preferred embodiment of the present invention, a part of the extract obtained above is collected before adding the coloring reagent to the extract, and the diluted solution obtained by diluting the extract at a predetermined ratio is also used. By adding the same color-developing reagent as that used for coloring and coloring this diluted solution, it is possible to observe the degree of coloring of the extract as well as the degree of coloring of the extract. It is possible to judge the calcium ion concentration in the lacrimal fluid in more detailed concentration categories by combining the two color development levels.
抽出液の一部を分取して希釈する時の希釈倍率は１．５
〜４倍が適当である。その理由は、１．５倍未満の場合
は、希釈液のカルシウムイオン濃度が抽出液のそれと大
差がなく、一方、４倍を超える場合には、希釈液のカル
シウムイオンが低くなりすぎて、いずれの場合も抽出液
の呈色の度合と希釈液の呈色の度合との組み合せによる
涙液中のカルシウムイオン濃度の判定が困難になるから
である。希釈倍率は２〜３倍であるのが特に好ましい。When aliquoting part of the extract and diluting it, the dilution factor is 1.5
~ 4 times is appropriate. The reason is that when the ratio is less than 1.5 times, the calcium ion concentration of the diluting liquid is not so different from that of the extract liquid, while when it exceeds 4 times, the calcium ion concentration of the diluting liquid becomes too low. Also in the case, it is difficult to determine the calcium ion concentration in the lacrimal fluid by the combination of the degree of coloration of the extract and the degree of coloration of the diluent. It is particularly preferable that the dilution ratio is 2-3 times.
尚、発色試薬を上記で調製した抽出液と希釈液に、一定
量ずつ添加して呈色を観察することを考えると、抽出液
と希釈液は、最終的に同体積となっているのが好まし
い。Considering that the coloring reagent is added to the extract and the diluent prepared above in fixed amounts, and the color is observed, the extract and the diluent have the same final volume. preferable.
これらの発色試薬で抽出液又は抽出液と希釈液を正確に
呈色させるためには、溶液のpHが一定でなければならな
いが、pHの調節は、抽出及び希釈用の水について行なっ
ても良く、また発色試薬調製時に行なっても良い。In order to accurately color the extract or extract and diluent with these coloring reagents, the pH of the solution must be constant, but the pH may be adjusted with water for extraction and dilution. Alternatively, it may be carried out at the time of preparation of the coloring reagent.
涙液中のカルシウムイオンを簡易に測定するための本発
明の方法を今迄説明してきたが、例えばシルマー試験紙
のような吸水性試験紙と、涙液を含ませた、水吸収性試
験紙からカルシウムイオンを抽出するための、例えば蒸
留水のような抽出用水を収容する容器と、カルシウムイ
オンとキレートを形成する発色試薬との３点をセットに
した測定用キットがあれば、本発明のカルシウムイオン
の測定方法を、特別な分析技術を必要とせずに極めて簡
便に行なうことができる。従ってこの測定用キットも本
発明に包含される。The method of the present invention for easily measuring calcium ions in tears has been described above. For example, a water-absorbent test strip such as Schirmer test strip and a water-absorbent test strip containing tear fluid. If there is a measurement kit which is a set of three containers for extracting calcium ions from water, for example, a container containing extraction water such as distilled water, and a coloring reagent that forms a chelate with calcium ions, The calcium ion measuring method can be performed very simply without requiring any special analytical technique. Therefore, this measurement kit is also included in the present invention.
なお、本発明のカルシウムイオンの測定方法を、上述の
好ましい態様である抽出液と希釈液の両者を呈色させる
方法により実施することを可能にするために、前記の測
定用キットは、抽出液の一部を希釈するための、例えば
蒸留水のような希釈用水を収容する希釈用容器を含むこ
とができる。なお、抽出用容器と希釈用容器は、上述の
如く抽出液と希釈液とを同体積にして呈色させるのが好
ましいので、同形で同容量とするのが好ましい。これら
の容器として好ましいものは、スピッツ、バイアル、試
験管などである。In order to make it possible to carry out the calcium ion measuring method of the present invention by a method of coloring both the extract and the diluent, which are the above-described preferred embodiments, the above-mentioned measurement kit is an extract. A diluting vessel containing diluting water, for example distilled water, for diluting a portion of the can be included. It is preferable that the extraction container and the dilution container have the same volume and color for the extraction liquid and the dilution liquid as described above, and therefore it is preferable that they have the same shape and the same volume. Preferred as these containers are spitzs, vials, test tubes and the like.
また手持ちのシルマー試験紙がある場合には、涙液中の
カルシウムイオン測定用キットを、前記の容器（抽出用
容器又は抽出容器と希釈用容器）と前記の発色試薬とで
構成しても良い。また通常、蒸留水が用いられる抽出用
水及び希釈用水並びにこれらを予備貯蔵するための容器
は、これらの手持ちがある場合は不要であるが、必要に
応じて本発明のカルシウムイオン測定用キットに含ませ
ても良い。さらに、発色試薬及び抽出用水や希釈用水の
所定量を採取するためのスポイトやピペット等をキット
の付属品とすることもできる。If there is a Schirmer test paper on hand, the kit for measuring calcium ions in tear fluid may be composed of the above-mentioned container (extraction container or extraction container and diluting container) and the above-mentioned coloring reagent. . Further, normally, the extraction water and the dilution water in which distilled water is used, and the container for preliminarily storing these are not necessary if they are hand-held, but if necessary, they are included in the calcium ion measurement kit of the present invention. I don't mind. Further, a dropper, a pipette or the like for collecting a predetermined amount of the coloring reagent and the extraction water or the dilution water can be included in the kit.
［実施例］ 以下、実施例により本発明を詳細に説明する。[Examples] Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples.
実施例１ (1)シルマー試薬紙 (2)スピッツ(A)（蒸留水３ml入り） (3)スピッツ(B)（蒸留水１ml入り） (4)ＥＢＴ試液（アンモニア緩衝液でpH１０に調節済） 上記４点をセットにして、涙液中のカルシウムイオン測
定用キットとした。シルマー試験後に涙液を含んだシル
マー試験紙２枚（両眼から同時に採取）のうちの１枚を
先端から２０mmの所で切断し、蒸留水３ml入りのスピッ
ツ(A)に入れ、よく撹拌して抽出処理した。次にこのス
ピッツ(A)から１mlの抽出液を分取して、蒸留水１ml入
りのスピッツ(B)に入れ、よく撹拌して希釈処理した。Example 1 (1) Schirmer reagent paper (2) Spitz (A) (containing 3 ml of distilled water) (3) Spitz (B) (containing 1 ml of distilled water) (4) EBT test solution (adjusted to pH 10 with ammonia buffer) A kit for measuring calcium ions in tears was obtained by setting the above four points as a set. After the Schirmer test, one of two pieces of Schirmer test paper containing tears (collected from both eyes at the same time) was cut at a distance of 20 mm from the tip, placed in Spitz (A) containing 3 ml of distilled water, and stirred well. Was extracted. Next, 1 ml of the extract was taken from this spitz (A), put into a spitz (B) containing 1 ml of distilled water, stirred well and diluted.
従ってこの段階においてスピッツ(A)の内容物の体積は
２ml、スピッツ(B)の内容物の体積も２mlで同量であ
り、スピッツ(B)の内容物の希釈倍率は２倍であった。Therefore, at this stage, the volume of the contents of Spitz (A) was 2 ml and the volume of the contents of Spitz (B) was 2 ml, which was the same amount, and the dilution ratio of the contents of Spitz (B) was twice.
次に各々スピッツ(A)，(B)に、ＥＢＴ試液２滴を加え、
撹拌してスピッツ(A)及び(B)について直ちに呈色を観察
した。Next, add 2 drops of EBT test solution to Spitz (A) and (B),
Immediately after stirring, color development was observed for Spitz (A) and (B).
もう一枚のシルマー試験紙は、原子吸光分析法による分
析を行ない、涙液中のカルシウムイオン濃度を定量し
た。The other Schirmer test paper was analyzed by atomic absorption spectrometry to quantify the calcium ion concentration in the tear fluid.
２０名（NO.１〜２０）の涙液について、以上の方法で
テストした結果を、表−１に示す。Table 1 shows the results of testing the tears of 20 persons (NO. 1 to 20) by the above method.
表−１より明らかなように、スピッツ(A)の抽出液及び
スピッツ(B)の希釈液を呈色させる本実施例の方法によ
れば、２つの呈色の度合の組み合せにより涙液中のカル
シウムイオン濃度の高低を４段階で判定可能であり、こ
の判定結果は、従来の原子吸光分析法による結果と極め
て高い相関性を有していた。 As is clear from Table 1, according to the method of the present example in which the extract of Spitz (A) and the diluted solution of Spitz (B) are colored, the combination of the two coloring degrees causes It is possible to judge whether the calcium ion concentration is high or low in four steps, and this judgment result has an extremely high correlation with the result by the conventional atomic absorption spectrometry.
実施例２ (1)シルマー試験紙 (2)バイアル(A)（蒸留水２ml入り、８ＮＫＯＨ１滴でpH
調節済） (3)バイアル(B)（蒸留水１ml入り、８ＮＫＯＨ１滴でpH
調節済） (4)ＮＮ希釈粉末指示薬（ドータイトＮＮ（市販品）を
粉末状Ｋ２ＳＯ４で１０倍に希釈したもの） 上記４点をセットにして、涙液中のカルシウムイオンの
測定用キットとした。シルマー試験後に涙液を含んだシ
ルマー試験紙２枚（両眼から同時に採取）のうちの１枚
を先端から２０mmの所で切断し、蒸留水２ml入りのバイ
アル(A)に入れ、よく撹拌して抽出処理した。次にこの
バイアル(A)から０．５mlの抽出液を分取して、蒸留水
１ml入りのバイアル(B)に入れ、よく撹拌して希釈処理
した。Example 2 (1) Schirmer test paper (2) Vial (A) (containing 2 ml of distilled water, pH with 1 drop of 8NKOH)
(Adjusted) (3) Vial (B) (containing 1 ml of distilled water, pH with 1 drop of 8NKOH)
(Adjusted) (4) NN diluted powder indicator (doughite NN (commercial item) diluted 10 times with powdered K 2 SO 4 ) A kit for measuring calcium ions in tears with the above 4 points set And After the Schirmer test, one of two pieces of Schirmer test paper containing tears (collected from both eyes at the same time) was cut at a point 20 mm from the tip, placed in a vial (A) containing 2 ml of distilled water, and stirred well. Was extracted. Next, 0.5 ml of the extract was taken from this vial (A), put into a vial (B) containing 1 ml of distilled water, and well stirred to dilute.
従ってこの段階においてバイアル(A)の内容物の体積
は、１．５ml、バイアル(B)の内容物の体積も１．５ml
で同量あり、バイアル(B)の内容物の希釈倍率は３倍で
あった。Therefore, at this stage, the content volume of vial (A) is 1.5 ml, and the content volume of vial (B) is 1.5 ml.
And the dilution ratio of the content of the vial (B) was 3 times.
次に各々のバイアル(A)，(B)に、ＮＮ希釈粉末指示薬約
１０mgを加え、撹拌してバイアル(A)，(B)について直ち
に呈色を観察した。Next, about 10 mg of the NN diluted powder indicator was added to each of the vials (A) and (B), and the vials (A) and (B) were immediately stirred and observed for coloration.
もう一枚のシルマー試験紙は、原子吸光分析法による分
析を行ない、涙液中のカルシウムイオン濃度を定量し
た。The other Schirmer test paper was analyzed by atomic absorption spectrometry to quantify the calcium ion concentration in the tear fluid.
２０名（NO.２１〜４０）の涙液について、以上の方法
でテストした結果は、表−２に示すように、２種類の呈
色の組み合わせによって、涙液中のカルシウムイオン濃
度を、前記実施例１と同様に４段階に判定することがで
きた。The results of testing the tears of 20 persons (NO. 21 to 40) by the above method show that, as shown in Table 2, the calcium ion concentration in the tears was measured by the combination of two types of coloration as described above. As in Example 1, the judgment could be made in four stages.
実施例３ (1)シルマー試験紙 (2)試験管(A)（蒸留水１．２ml入り） (3)試験管(B)（蒸留水０．４ml入り） (4)ＥＢＴ試液（アンモニア緩衝液でpH１０に調節済） 上記４点をセットにして、涙液中のカルシウムイオン測
定用キットとした。シルマー試験後に涙液を含んだシル
マー試験紙２枚（両眼から同時に採取）のうちの１枚を
先端から１５mmの所で切断し、蒸留水１．２ml入りの試
験管(A)に入れ、よく撹拌して抽出処理した。次にこの
試験管(A)から０．４mlの抽出液を分取して、蒸留水
０．４ml入りの試験管(B)に入れ、よく撹拌して希釈処
理した。 Example 3 (1) Schirmer test paper (2) Test tube (A) (containing 1.2 ml of distilled water) (3) Test tube (B) (containing 0.4 ml of distilled water) (4) EBT test solution (ammonia buffer solution) The pH was adjusted to 10 with the above) The above four points were set to provide a kit for measuring calcium ion in tear fluid. After the Schirmer test, one of two pieces of Schirmer test paper containing tears (collected from both eyes at the same time) was cut at a distance of 15 mm from the tip and placed in a test tube (A) containing 1.2 ml of distilled water, The mixture was stirred well and extracted. Next, 0.4 ml of the extract was taken from the test tube (A), put into a test tube (B) containing 0.4 ml of distilled water, and well stirred to dilute.
従ってこの段階において試験管(A)の内容物の体積は、
０．８ml、試験管(B)の内容物の体積も０．８mlで同量
であり、試験管(B)の内容物の希釈倍率は２倍であっ
た。Therefore, the volume of the contents of the test tube (A) at this stage is
The content of the test tube (B) was 0.8 ml, and the volume of the content of the test tube (B) was 0.8 ml, and the dilution ratio of the content of the test tube (B) was twice.
次に各々の試験管(A)，(B)に、ＥＢＴ試液１滴を加え、
撹拌して試験管(A)，(B)について直ちに呈色を観察し
た。Next, add 1 drop of EBT test solution to each test tube (A), (B),
The color was immediately observed for the test tubes (A) and (B) with stirring.
もう一枚のシルマー試験紙は、原子吸光分析法による分
析を行ない、涙液中のカルシウムイオン濃度を定量し
た。The other Schirmer test paper was analyzed by atomic absorption spectrometry to quantify the calcium ion concentration in the tear fluid.
２０名（NO.４１〜６０）の涙液について、以上の方法
でテストした結果は、表−３に示すように、２種類の呈
色の組み合せによって、涙液中のカルシウムイオン濃度
を、前記実施例１，２と同様に４段階に判定することが
できた。The results of testing the tears of 20 persons (NO. 41 to 60) by the above method show that, as shown in Table 3, the calcium ion concentration in the tears was determined by the combination of two types of coloration as described above. As in Examples 1 and 2, the judgment could be made in four stages.
［発明の効果］ 本発明の涙液中のカルシウムイオンの測定方法によれ
ば、短時間で簡便に涙液中のカルシウムイオン濃度を測
定することが可能である。 [Effect of the Invention] According to the method for measuring calcium ion in tear fluid of the present invention, it is possible to easily measure the calcium ion concentration in tear fluid in a short time.
更に、この測定結果から、コンタクトレンズ装用開始後
のカルシウム化合物の付着の可能性を予測することが可
能であり、クリーニングを頻繁に行なうなどの指導を行
なうことで、コンタクトレンズへの汚れ付着を未然に防
ぐことあるいは軽減することが可能である。Furthermore, from this measurement result, it is possible to predict the possibility that calcium compounds will adhere to the contact lens after starting to wear it, and by giving instructions such as frequent cleaning, it is possible to prevent the adhesion of dirt to the contact lens. It is possible to prevent or reduce it.
Claims (4)
を一定量の水で抽出処理して得られた抽出液に、カルシ
ウムイオンとキレートを形成する発色試薬を加えて前記
抽出液を呈色させて、その呈色の度合により涙液中のカ
ルシウムイオン濃度の高低を評価することを特徴とする
涙液中のカルシウムイオンの測定方法。1. A color-forming reagent that forms a chelate with calcium ions is added to an extract obtained by extracting a certain amount of water-absorbent test paper containing tear fluid with a certain amount of water. A method for measuring calcium ion in tear fluid, which comprises coloring the extract and evaluating the level of calcium ion concentration in tear fluid according to the degree of coloration.
一部を分取し、所定倍率に希釈して得られた希釈液にも
前記発色試薬を加えてこの希釈液も呈色させて、抽出液
の呈色の度合と希釈液の呈色の度合の組み合せにより、
涙液中のカルシウムイオン濃度の高低を評価する、請求
項１に記載の方法。2. Before adding the color-developing reagent, a part of the extract is taken out and diluted to a predetermined magnification to add the color-developing reagent to the diluted solution so that the diluted solution is also colored. Then, by the combination of the degree of coloration of the extract and the degree of coloration of the diluent,
The method according to claim 1, wherein the level of calcium ion concentration in tear fluid is evaluated.
収性試験紙からカルシウムイオンを抽出するための抽出
用水を収容する抽出用容器と、カルシウムイオンとキレ
ートを形成する発色試薬とを含むことを特徴とする、涙
液中のカルシウムイオンの測定方法を実施するためのキ
ット。3. A water-absorbent test paper, an extraction container containing tear water and containing extraction water for extracting calcium ions from the water-absorbent test paper, and a color forming a chelate with calcium ions. A kit for carrying out a method for measuring calcium ions in tear fluid, which comprises a reagent.
一部を希釈するための希釈用水を収容する希釈用容器を
更に含む、請求項３に記載のキット。4. The kit according to claim 3, further comprising a diluting container containing diluting water for diluting a part of the extract obtained by using the extracting container.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63123092A JPH0635973B2 (en) | 1988-05-20 | 1988-05-20 | Method for measuring calcium ion in tear fluid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63123092A JPH0635973B2 (en) | 1988-05-20 | 1988-05-20 | Method for measuring calcium ion in tear fluid |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01292253A JPH01292253A (en) | 1989-11-24 |
| JPH0635973B2 true JPH0635973B2 (en) | 1994-05-11 |
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ID=14852006
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63123092A Expired - Fee Related JPH0635973B2 (en) | 1988-05-20 | 1988-05-20 | Method for measuring calcium ion in tear fluid |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0635973B2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012123013A (en) * | 2002-08-06 | 2012-06-28 | Regents Of The Univ Of California | Tear film osmometry |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8306353D0 (en) * | 1983-03-08 | 1983-04-13 | Stuart J F B | Monitoring of drug levels |
-
1988
- 1988-05-20 JP JP63123092A patent/JPH0635973B2/en not_active Expired - Fee Related
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| JP2012123013A (en) * | 2002-08-06 | 2012-06-28 | Regents Of The Univ Of California | Tear film osmometry |
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|---|---|
| JPH01292253A (en) | 1989-11-24 |
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