JPH0637513B2 - ジゴキシゲニン誘導体、その製法、標識結合体の製法、核酸検出法及びジゴキシゲニン結合体 - Google Patents

ジゴキシゲニン誘導体、その製法、標識結合体の製法、核酸検出法及びジゴキシゲニン結合体

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JPH0637513B2
JPH0637513B2 JP1278799A JP27879989A JPH0637513B2 JP H0637513 B2 JPH0637513 B2 JP H0637513B2 JP 1278799 A JP1278799 A JP 1278799A JP 27879989 A JP27879989 A JP 27879989A JP H0637513 B2 JPH0637513 B2 JP H0637513B2
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Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は新規ジゴキシゲニン誘導体、その製法及びこれ
を使用した種種の方法に関する。
従来の技術 ジゴキシゲニンの基本骨格が他の分子又は巨大分子担体
に共有結合して存在するジゴキシゲニン誘導体は多数の
生物学的分析目的に使用される。特に、そのようなジゴ
キシゲニン誘導体は免疫学的テスト（イムノアツセイ）
において、臨床学的観点において重要な、強心配糖体、
特にジゴキシンの測定のために使用される（G.C.Oliver
等著、J.Clin.Invest.、第４７巻、１９６８年、第１０
３５頁；U.Barbieri及びC.Gandolfi著、Clin.Chim.Act
a、第７７巻、１９７７年、第２５７頁；A.Castro及び
N.Monji著、″Immunochemical Methods″、Ｂ部、J.L.L
angone及びH.van Vunakis、Academic Press、１９８１
年出版、第５２３頁；J.A.Hinds等、Clinical Chemistr
y、第３２巻、１９８６年、第１６頁、参照）。これら
のテストにおいてジゴキシゲニン誘導体は測定すべき強
心配糖体に対する抗体と関連して使用され、この検出は
ハプテン−抗−ハプテン−抗体−相互作用の原理を基礎
として行なわれる（K.Luebke及びB.Nieuweboer著、″Im
munologische Teste fr niedermolekulare Wirkstoff
e″、Thieme Verlag社、スツユツトガルト、１９７８年
参照）。
その際、ジゴキシゲニン誘導体としては一般に、ジゴキ
シゲニンがステロイド骨格の３位を介して他の分子に結
合しているような誘導体を使用している。
しかしながら、従来免疫学的テストに使用されたジゴキ
シゲニン誘導体は次のような欠点を１つ又は複数示す： ジゴキシゲニンステロイド骨格とエステル基を介して行
なわれた結合において、ジゴキシゲニン誘導体はエステ
ル基の加水分解鋭敏性のために塩基条件下に著しく塩基
性不安定である；このことは特に通常使用されるヘミサ
クシネート又はヘミグルタレートにあてはまる（スイス
特許第６０４１６４号明細書；米国特許第４０８２７４
７号明細書；N.Monji等著、Experientia、第３６巻、１
９８０年、第１１４１頁参照）；更に類似のことは、例
えばエステル基のかわりに使用したウレタン基において
もあてはまる（西ドイツ国特許公開第２６０７８２６号
明細書参照）。従つて、使用の際には一定の条件下に不
所望なジゴキシゲニンの分解が生じる。
ジゴキシゲニンはステロイド骨格の３位の他にも１２位
に反応性OH基を有している；従つて誘導体の製造の際に
３−及び１２−誘導体からなる混合物がしばしば生じ、
これは１部著しい製造費用においてのみ純粋な位置異性
体に分離することができ、かつ１部、例えば有利に使用
されるヘミサクシネート及びヘミグルタレートの場合、
クロマトグラフイーによつても分離することができな
い。分離しない混合物の使用は誤差の多い結果に導び
く。
誘導体において、このステロイド基本骨格は１部、非変
性ステロイド基本骨格に対する抗体によるハプテンの認
識が強く損なわれるように変性されて存在する。これは
例えば３位の酸素原子がアミノ窒素に変換されているジ
ゴキシゲニン誘導体の場合である（例えばヨーロツパ特
許第１０４５２７号明細書参照）。
発明が解決しようとする課題 本発明の課題は強心配糖体の免疫学的測定テストに好適
であり、かつこれをもちいて前記欠点を回避可能なジゴ
キシゲニン誘導体を製造することである。この課題は本
発明により解決される。
課題を解決するための手段 本発明の課題は一般式(I) 〔式中、ｎは１〜４の整数、有利には１を表わし、かつ
Ｚは-CN,-COOC2H5， を表わす］のジゴキシゲニン誘導体である。
一般式(I)の本発明によるジゴキシゲニン誘導体におい
て、ステロイド骨格と橋部との間の結合は３位のエーテ
ル結合を介して行なわれ、これによりエステル基と関連
した塩基不安定性は回避される。更に、これにより、ジ
ゴキシゲニンステロイド骨格の３位に存在する基（オキ
シ基）は保持されるので、このことにより一般に非変性
ステロイド骨格に対する抗体によるハプテンの良好な認
識が達せられる。本発明による３位のエーテル結合は式
(I)の化合物及びその誘導体及び結合体を純粋な位置異
性体として、すなわち、３位及び１２位で結合している
誘導体からの混合物の回避下に製造することをも可能と
する。
本発明による一般式(I)の化合物の製造は、ジゴキシン
（後記反応式の化合物１）からペンタアセチルジゴキシ
ン（同化合物２）へ変換した後、自体公知法で酸性鹸化
することにより得られる１２−Ｏ−アセチル−ジゴキシ
ゲニン（同化合物３）から出発することにより行なわれ
る。１２−Ｏ−アセチル−ジゴキシゲニンにおいて、３
位の遊離OH基をエーテル基 に変換する。この反応はジアゾカルボン酸エステルと、
ｎ＝１の場合例えばジアゾ酢酸エステルと、自体公知法
で３−アルコキシカルボニルアルキルエーテルの形成下
に行なうことができる（Ｚ＝COOC2H5；化合物４に相応
する）。得られたアルコキシカルボニルアルキルエステ
ルにおいて、所望の場合、エステル基を鹸化により遊離
カルボキシ基（Ｚ＝COOH；化合物５）に、又は他の官能
カルボン酸基Ｚに変換することができ、かつ所望の場合
には、このように得られた反応生成物において基Ｚを自
体公知法で他の基Ｚに変換することができる。Ｎ−ヒド
ロキシサクシンイミドとの反応によりCOOH基は例えば基
-COONR3R4（Ｒ３及びＲ４は一緒になつて１，４−ジオ
キソ−テトラメチレン基を形成する；化合物６）に変換
される；この基はアミンHNR1R2と反応させることにより
Ｚ＝CONR1R2を有する化合物(I)（化合物７： に相応する）に変換する。このようにして、又は類似の
方法で、式中のＺが前記の意味を有する式(I)の得られ
た化合物をＺが他の異なる意味を有する式Ｉの他の化合
物に自体公知法で変換することも官能である。
個個の、前記方法工程、例えばジアゾ酢酸エステルとの
反応、鹸化工程、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミドとの反
応及びアミンHNR1R2との反応はこれらの反応に常法で、
例えば次の実施例に記載されているような方法で行なう
ことができる。
ジゴキシゲニン誘導体の他の重要な使用分野は核酸及び
核酸誘導体の標識化及び検出へのその使用でもある。本
願出願人によるドイツ特許出願第ｐ３８００６４４．８
号明細書（１９８８年１月１２日）及び同第ｐ３８１３
２７８．８号明細書（１９８８年４月２０日）には、化
学結合を介して少なくとも１つのハプテンを標識として
結合して含有する補体核酸ゾンデとハイブリツド化する
ことによる核酸検出法が記載されている。ハプテンとし
てはステロイドを使用しており、このステロイドは核酸
ゾンデの水素結合に関与していない少なくとも１位置に
少なくとも４つの原子長さの橋部を介して結合してい
る；このハイブリツドゾンデを標識抗−ハプテン−抗体
を介して検出する。ステロイドとしては有利にジゴキシ
ゲニン又はジゴキシンが使用される。ハプテンを核酸ゾ
ンデに光−ハプテン(Foto-Hapten)を用いて光化学的に
組込む場合（NuCl.Acid Res.第１３巻、１９８５年、第
７４５〜７６１頁；及びM.Wilchek及びE.A.Bayer著、An
al.Biochem.第１７１巻、１９８８年、第１頁参照）、
光ハプテンとして有利に光−ジゴキシゲニン、すなわち
橋部を介して４−アジド−ベンゾイルと結合したジゴキ
シゲニンを使用する。UV−照射の際に、アジド基から窒
素が脱離し、ニトレンラジカルが生じ、これは次いで核
酸に共有結合する。光−ジゴキシゲニンとしてはジゴキ
シゲニン−３−ヘキサクシネート−〔Ｎ′−（４−アジ
ドベンゾイル）〕−８−アミノ−３，６−ジオキサオク
チルアミドを使用する。
その特性、特に塩基安定性及び非変性ステロイド骨格の
ために、本発明による一般式(I)のジゴキシゲニン誘導
体は前記核酸検出法の標識ハプテンとして著しく好適で
ある。光−ハプテン（光−ジゴキシゲニン；光化学法で
のハプテンの結合、NuCl.Acid Res.第１３巻、１９８５
年、第７４５〜７６１頁；及びM.Wilchek及びE.A.Bayer
著、Anal.Biochem.第１７１巻、１９８８年、第１頁参
照）としては例えばＮ−〔Ｎ−（４−アジドベンゾイ
ル）−８−アミノ−３，６−ジオキサオクチル〕−３−
カルバモイルメチル−ジゴキシゲニン（反応式の化合物
７）である。
本発明による一般式(I)のジゴキシゲニン誘導体を用い
て、ステロイドの３位がそこに存在する酸素で、すなわ
ち基本骨格の変性なしに、橋部分子を介して免疫原担体
材料、例えば蛋白質−又はポリペプチド−担体材料に、
又は核酸に結合することを可能とする。
一般式(I)の本発明によるジゴキシゲニン誘導体は標識
結合体（labeled conjugate）の製造にも非常に好適で
あり、これは強心配糖体、特にジゴキシンの測定のため
に通常のイムノアツセイで用いられる。好適な結合体は
例えば標準法と相応して放射性に標識することができる
か、又は蛍光基で標識することができる。標識構造単位
（labeling moiety）は有利な均一系法においては、例
えば酵素基質、補欠分子団、酵素モデユレーター又は酵
素であり、これは本発明による一般式(I)のジゴキシゲ
ニン誘導体と結合し、結合体となつている。
担体材料、核酸又は標識構造単位への結合は基-O-(CH2)
n-Zを介して行なわれ、ここで基Ｚは有利に担体材料、
Ｚと反応性の基又は結合に依存して選択される。担体と
O-(CH2)n-z-基との結合は第１又は第２アミノ基を介し
て行なわれ、これは活性カルボン酸基ｚ、例えばＮ−ヒ
ドロキシサクシンイミドエステル（Ｚ＝-COONR3R4、Ｒ
３及びＲ４は一緒になつて１，４−ジオキソテトラメチ
レン基を形成する）で変換される；この際、この反応は
このような反応に自体公知の方法で行なわれる。この基
-O-(CH2)n-Zは光化学法によつても（Nucl.Acid Res.第
１３巻、１９８５年、第７４５〜７６１頁；及びM.Wilc
hek及びE.A.Bayer著、Anal.Biochem.、第１７１巻、１
９８８年、第１頁参照）担体、例えば核酸に結合するこ
とができる；この場合、担体材料、例えば核酸ゾンデは
前記光−ジゴキシゲニン（反応式中化合物７参照）の存
在においてＵＶ域を有する可視光で照射し、この際窒素
（Ｎ２）の脱離下にニトレンラジカルが生じ、これは核
酸に共有結合する。
従つて、本発明の課題は通常のイムノアツセイで強心配
糖体、特にジゴキシンを測定するための標識結合体（la
beled conjugate）を製造するために一般式(I)のジゴキ
シゲニン誘導体を使用すること、並びに少なくとも１つ
のハプテンを標識として化学結合を介して含有する補体
核酸ゾンデとのハイブリツド化により核酸を検出するた
めの標識ハプテンとしてこれを使用することである。
本発明のもう１つの課題は本発明による一般式Ｉのジゴ
キシゲニン誘導体を使用して一般式(II) 〔式中、担体は免疫原担体材料、例えば免疫原蛋白質又
はポリペプチド−担体材料、核酸又はイムノアツセイに
使用するための標識ジゴキシゲニン結合体の標識構造単
位を表わし、ｙは平均して１〜担体中の提供可能な結合
位の数を表わし、有利に１〜２０であり、Ｙは本発明に
よる一般式(I)のジゴキシゲニン誘導体のカルボニル官
能基Ｚと担体材料の反応位との反応により生じた基、例
えばアミド基を表わす〕の新規ジゴキシゲニン結合体を
製造することである。
本発明のもう１つの課題は式中の担体が免疫原を表わす
一般式(II′)を使用して抗体形成に好適な生物の免疫化
法でもある。このようにして、担体が免疫原を表わす式
(II′)の本発明によるジゴキシゲニン結合体を用いて抗
体を製造し、次いでこれをジゴキシンの測定のために常
用のイムノアツセイ法（例えば凝集法、ラジオイムノア
ツセイ、不均質系酵素イムノアツセイ、不均質系蛍光イ
ムノアツセイ及び均質系イムノアツセイ）の１つに使用
することができる。モノクローナル抗体をも包含する抗
体の製造及び単離をこれに常用で、一般的な方法で行な
うことができる。
担体が標識ジゴキシゲニン結合体の標識構造単位を表わ
す 一般式（II″) 〔式中、担体（２）は標識ジゴキシゲニン結合体の標識
構造単位を表わし、Ｙ、ｎ及びｙは一般式（II）のもの
と同じものを表わす〕のジゴキシゲニン結合体を常用の
イムノアツセイに使用し、強心配糖体グリコシド、特に
ジゴキシンを測定することもできる。
次に実施例につき本発明を詳説するが、本発明はこれに
のみ限定されるものではない。他に記載のない限り、量
は重量に、温度は℃に関連する。室温とは２５±２℃で
ある。
実施例 次の反応式Ａは実施例中に示した本発明による一般式
(I)のジゴキシゲニン誘導体の合成及びその相互の変換
に関する概要を示す。
例１ ペンタアセチル−ジゴキシン(2)の製造 ジゴキシン７８ｇ（０．１mol）を無水酢酸１中に溶
かし、かつ酢酸ナトリウム（無水）49.2ｇ（0.6mol）を
加える。還流下に１時間攪拌する。次いで、この溶液を
水流真空中で蒸発させ、酢酸エステル１中に残分を溶
かし、場合により不溶性の成分を濾別する。この濾液を
それぞれ水0.5で３回洗浄し、Na2SO4５０ｇで乾燥さ
せ、水流真空中で蒸発させる。この粗生成物はなお無水
酢酸を含有する。
収量：粘性油状物質１１０ｇ ＤＣ：シリカゲル、酢酸エステル／クロロホルム１：
１、Ｒｆ＝0.33 例２ １２−Ｏ−アセチル−ジゴキシゲニン(3)の製造 例１により得られた蒸発残分（化合物２）をメタノール
２中に溶かし、0.1Ｎ H2SO4２と混合し、還流下に
１時間攪拌する。その後、クロロホルム1.8で１回、
６００mlで１回抽出し、合した抽出物を２回それぞれ水
１で洗浄し、Na2SO4５０ｇで乾燥させ、水流真空中で
蒸発させる。得られた油状物質（９５ｇ）を酢酸エステ
ル２５０ml中に僅かに加温しながら溶かし、室温で放置
する。短時間後に結晶が生じる。室温で約４時間、さら
に＋４℃で２時間晶出させ、次いで固体を吸引濾過し、
酢酸エステル約１００mlで短時間洗浄する。
収量：無色結晶３１ｇ ＤＣ：シリカゲル、酢酸エステル；Ｒｆ＝0.50 例３ １２−Ｏ−アセチル−ジゴキシゲニン−３−cme−エチ
ルエステル(4)の製造 例２により得られた化合物(3)28.1ｇ（６５m mol）をテ
トラヒドロフラン（THF）２５０ml中に懸濁させ、５時
間かけてTHF５０ml中のジアゾ酢酸エステル６９ml（0.6
5mol）を攪拌下に滴加する。反応開始のために、かつそ
れぞれ１時間後に、酢酸ロジウム(II)５０mgを添加す
る。その際、反応溶液がわずかに発熱するので、この溶
液を水浴（２５℃）で冷却することが望ましい。室温で
１６時間攪拌し、次いで前記の方法で更にジアゾ酢酸エ
ステル６９ml及び全体で酢酸ロジウム２５０ｇを添加す
る。更に１６時間後、この全工程の３回目を繰り返す。
更に、１日後反応させ、次いでメタノール２５０mlを加
え、かつこの溶液を真空中で蒸発させる。油状残分を３
回それぞれ石油エーテル１で浸漬し傾瀉後、クロロホ
ルム／酢酸エステル＝2/1１００ml中に溶かす。粗生成
物をシリカゲルカラム（8.5×５０cm）に入り、クロロ
ホルム／酢酸エステル＝2/1で溶離する。純粋な生成物
(4)を含有するフラクシヨンを合し、かつ溶剤を水流真
空中で除去する。
収量：粘性油状物質18.2ｇ ＤＣ：シリカゲル、酢酸エステル／石油エーテル２：
１、Ｒｆ＝0.60 例４ ジゴキシゲニン−３−カルボキシメチルエーテル（cm
e）(5)の製造 例３により得られた化合物(4)15.5ｇ（３０m mol）をメ
タノール４７０ml中に溶かし、水１００ml中のKHCO36.0
5ｇ（６０m mol）の溶液と混合する。還流下に攪拌し、
半時間ごとに反応をＤＣを用いて監視する。出発物質の
濃度が約５％になつた時（約3.5時間後）、反応を中断
する。pHを氷酢で5.0とし、メタノールを水流真空中で
蒸発させ、水で約５００mlに希釈する。粗生成物をそれ
ぞれ酢酸エステル２００mlで２回抽出し、水２００mlで
洗浄し、かつ有機溶剤をNa2SO4３０ｇで乾燥させる。濃
縮した後、残つた油状物質１１ｇを酢酸エステル／氷酢
酸＝9/1４０ml中に溶かし、室温に放置する。短時間後
に結晶が生じる。４℃で更に１時間冷却し、固体を吸引
濾過し、酢酸エステル／氷酢酸＝9/1約２０mlで後洗浄
する。エキシカーター中KOH上で乾燥させた生成物(5)３
ｇが得られる。
母液を蒸発させ、残分（約7.5ｇ）をシリカゲルカラム
（8.5×４０cm）上に担持させる。酢酸エステル／氷酢
酸＝9/1で溶離し、相応するフラクシヨンを濃縮した
後、生成物(5)2.2ｇがもう１回得られ、これは痕跡量の
１２−Ｏ−アセチル−ジゴキシゲニン−３−cmeを含有
している。
収量：無色固体物質5.2ｇ ＤＣ：シリカゲル、酢酸エステル／氷酢酸９：１、Ｒｆ
＝0.42 例５ ジゴキシゲニン−３−cme−Ｏ−サクシンイミド(6)の製
造 例４により得られたジゴキシゲニンカルボン酸(5)4.49
ｇ（１０m mol）をＮ−ヒドロキシサクシンイミド1.27
ｇ（１１m mol）と一緒に無水THF１４０ml中に溶かし、
無水THF２０ml中のＮ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボ
ジイミド2.27ｇ（１１m mol）の溶液と混合する。室温
で２０時間攪拌し、次いで生じた尿素を濾別し、かつこ
の溶液を水流真空中で濃縮する。残分を酢酸エステル１
５０ml中に溶かし、濾過し、水１００mlで洗浄する。そ
の後、有機溶剤をすぐにNa2SO4５ｇで乾燥させ、濃縮す
る。粗生成物を酢酸エステル約３０ml中に溶かし、濾過
し、攪拌下にゆつくりとジイソプロビルエーテル２００
ml中に注ぐ。析出したエステル(6)を吸引濾過し、エキ
シカーター中で五酸化燐上で乾燥させる。
収量：無色粉末5.1ｇ ＤＣ：シリカゲルＲＰ−１８、ニトロメタン／エタノー
ル９：１；Ｒｆ＝0.66 例６ 光ジゴキシゲニン(7)の製造 例５により得られた活性エステル(6)２７２mg（0.5m mo
l）をジオキサン１０ml中に溶かし、水５ml中のＮ−
（４−アジドベンゾイル）−１，８−ジアミノ−３，６
−ジオキサオクタン１６１mg（0.55mmol）の溶液と混合
する。室温で２時間攪拌し、次いでジオキサンを水流真
空中で蒸発させ、水５０mlで希釈する。この水相をそれ
ぞれ酢酸エステル５０mlで抽出し、合した有機抽出物を
Na2SO4５ｇで乾燥させ、濃縮する。残分をジイソプロピ
ルエーテル１００mlで浸漬し、吸引濾過し、エキシカー
ター中でCaCl2上で乾燥させる。
収量：無色粉末２１６mg ＤＣ：シリカゲルＲＰ−１８、ニトロメタン／エタノー
ル９：１；Ｒｆ＝0.36 次の反応式Ｂは、例えば補体の標識核酸とのハイプリツ
ド化により核酸を検出するための標識ハプテンとして使
用することのできる、例７〜９による、Dig−１１−dUT
Pの製造工程を概略的に示す。
反応式Ｂ： 例７ ジゴキシゲニン−３−カルボキシメチルエーテル−ε−
アミドカプロン酸(9) C31H47NO8 分子量：５６１．３ ２５０ml−丸底フラスコ中でジゴキシゲニン−３−カル
ボキシメチルエーテル−Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド
エステル(8)４６５mg（0.85m mol）をジメチルホルムア
ミド（DMF）１５ml中に溶かし、これにDMF２ml中の６−
アミノカプロン酸１１２mg（0.85m mol）及びトリエチ
レルアミン0.12mlの懸濁液を加える。室温で１夜マグネ
ツトにより攪拌し、この際徐徐に均質溶液が生じる。こ
の時間の後、この反応が実質的に完全に終了したことを
薄層クロラトグラフイーが示す（シリカゲル；酢酸エチ
ルエステル／石油エーテル／エタノール１：１：１、検
出：氷酢酸１０ml＋濃硫酸0.2ml＋アニスアルデヒド0.1
mlの混合物で噴霧し、青黒色のスポツトが現われるまで
１２０℃に加熱する；Ｒｆ約0.7；Ｒｆジゴキシゲニン
−OSu−エステル約0.85）。
DMFを高真空中で残りなく蒸発させ、残つた油状物質をH
2O５ml中に濃アンモニア溶液の添加下に溶かす。次い
で、クエン酸水溶液22.5ml（クエン酸１００ｇ／ｌ）を
添加することにより、“遊離”ジゴキシゲニンアミドカ
プロン酸で析出する。この樹脂状粘性物質を水と一緒に
こすり固体とし；吸引濾過し、H2Oで複数回後洗浄し、
最後にP2O5上でオイルポンプ真空で乾燥させる。
収量：３２５mg＝理論値の６８％ 例８ ジゴキシゲニン−３−カルボキシメチルエーテル−ε−
アミドカプロン酸−Ｎ−ヒドロキシサクシンイミドエス
テル(10) C35H50N2O10 分子量：658.8 １００ml丸底フラスコ中で、ジゴキシゲニン−３−カル
ボキシメチルエーテル−ε−アミドカプロン酸(9)３２
０mg（0.57m mol）を無水ジメチルホルムアミド（DMF）
２ml中に溶かし、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド（0.6m
mol）７０mg並びにジシクロヘキシルカルボジイミド
（0.63m mol）１３０mgを順次添加する。室温で１夜攪
拌し、翌日析出するジシクロヘキシル尿素から吸引濾過
して、DMFをオイルポンプ真空中で蒸発させる。残つた
油状物質を酢酸エチルエステル２ml中に取り込み、氷冷
（−２０℃）石油エーテル約１５ml中で攪拌する。析出
した、はじめになお樹脂状粘性の生成物を複数回氷冷乾
燥石油エーテルで固体になるまでこする。P2O5上で乾燥
させた後真空中で３１５mg＝理論値の８４％が得られ
る。
元素分析： 計算値：Ｃ63.8％、Ｈ7.6％、Ｎ4.2％ 実測値：Ｃ63.2％、Ｈ7.6％、Ｎ4.0％ 例９ ジゴキシゲニン−３−カルボキシメチルエーテル−ε−
アミドカプロイル−〔５−（アミドアリル）−２′−デ
スオキシ−ウリジン−５′−トリホスフエート〕−四ナ
トリウム塩(11) （Dig-11-dUTP） C43H61N4Na4O21P3 分子量：１１５４．７ ジゴキシゲニン−３−カルボキシメチルエーテル−ε−
アミドカプロン酸−Ｎ−ヒドロキシサクシンイミドエス
テル(10)２５４mg（0.37m mol）をDMF７ml中に溶かし、
H2O６ml中の５−アリルアミノ−２′−デスオキシ−ウ
リジン−５′−トリホスフエート−四リチウム塩２０mg
（0.37m mol）の溶液に加える。この混合物に0.1mol／
ｌ硼酸ナトリウム塩緩衝液、pH8.5 6.2mlを加え、室温
で１夜攪拌する（約１５時間）。
ペーパー電気泳動（0.05mol／ｌクエン酸塩緩衝液、pH
5.0、）において、この時間の後UV光中に僅かな量の未
反応アリルアミノ−dUTPの他に所望の化合物の僅かに低
く移動したスポツトが観察される（選択的方法：シリカ
ゲルを用いる薄層クロマトグラフイー（DC）、溶離剤；
イソ酪酸／濃アンモニア溶液／Ｈ２Ｏ＝６６：１：３
３、UV中での検出又はアニスアルデヒド試薬（例７参
照）で噴霧；Ｒｆ−値置：５−アリルアミノ−dUTP 0.
2；Dig-アミドカプロン酸−OSu−エステル0.7；Dig−１
１−dUTP 0.45）。
処理のためには、反応混合物をオイルポンプ真空中で濃
縮し、固体残分とし、H2O２００ml中に取り込み、イオ
ン交換体カラム（DEAE−セフアデツクスＡ２５、▲ＨＣ
Ｏ- 3▼−型、カラム寸法1.5×３０cm）上に注ぐ。その
後短時間に水で洗浄し、次いで0.4mol／ｌTEAB（重炭酸
トリエチルアンモニウム）pH８に対してそれぞれH2O
１の傾斜溶液で溶離する。純粋な生成物を含有するフ
ラクシヨンを合し、真空中で濃縮し、メタノールと共に
多数回蒸発させ、過剰のTEABを除去する（遊離トリエチ
ルアミンの臭が全くなくなるまで！）。フラスコの内容
物を数mlの水に取り込み、この溶液を短かいカチオン交
換カラムDOWEX５０WS８（１×１０cm）；Ｎａ＋−型を
介して通し、このカラムを洗浄水中にODEがなくなるま
で洗い（２４０nmにおけるUVを測定）、かつ真空中で約
２０mlまで濃縮する。凍結乾燥の後Dig−１１−dUTP−N
a4１９４mg（理論値の４５％）が白色粉末として得られ
る。
分析：H2O測定：7.9％ 元素分析（H2O含量を考慮して） 計算値：Ｃ41.2％、Ｈ5.3％、Ｎ4.4％、Ｐ7.4％。
実測値：Ｃ41.0％、Ｈ5.4％、Ｎ4.6％、Ｐ7.2％。
UV−スペクトル（燐酸塩緩衝液pH7.0）：最大：２２０n
m、２９０nm Dig−１１−dUTPは“ランダム感作（random Primed）”
−DNA−標識法（DNA−Labeling and Detection Kit Non
radioactive、注文No１０９３６５７、ベーリンガー・
マンハイム社；Feinberg、A.P.及びVogelstein、Ｂ．
著、Anal.Biochem.第１３２巻、１９８３年、第６頁）
により核酸中に導入され、この際、標識ハプテンとして
ゴキシゲニンを含有する、これに補体の核酸を検出する
ためにの核酸ゾンデが得られる。
フロントページの続き (72)発明者 ヘルベルト・フオン・デル・エルツ ドイツ連邦共和国ヴアイルハイム・イン・ デル・アウ 21 (72)発明者 ブルーノ・ツインク ドイツ連邦共和国ウフイング・アン・デ ム・シユタツフエルゼー・ゼーブリツクシ ユトラーセ ４

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】一般式（Ｉ） ［式中、ｎは１〜４の整数を表わし、かつＺは-CN,-COO
    C2H5,-CONH-(CH2CH2O)2-C を表わす］のジゴキシゲニン誘導体。
  2. 【請求項２】請求項１に記載の式Ｉのジゴキシゲニン誘
    導体を製造するための方法において、１２−Ｏ−アセチ
    ル−ジゴキシゲニンの３位の遊離ＯＨ基を自体公知法で
    ジアゾ酢酸エステルと反応させることにより式Ｉ′（式
    中、ＺはCOOC2H5を表わす）の化合物とし、所望の場合
    得られた反応生成物のCOOC2H5基を自体公知法でCOOH基
    又は他の官能カルボン酸基Ｚに変換し、かつ所望の場
    合、このようにして得られた反応生成物のＺ基を自体公
    知法で他のＺ基に変換することを特徴とするジゴキシゲ
    ニン誘導体の製法。
  3. 【請求項３】イムノアッセイにおける強心配糖体の測定
    用標識結合体を製造する方法において、請求項１記載の
    式（Ｉ）のジゴキシゲニン誘導体を使用することを特徴
    とする標識結合体の製法。
  4. 【請求項４】化学結合を介して少なくとも１つのハプテ
    ンを標識として結合して含有する補体核酸ゾンデとハイ
    ブリッド化することにより核酸を検出するために、標識
    ハプテンとして請求項１記載の式Ｉのジゴキシゲニン誘
    導体を使用することを特徴とする核酸検出法。
  5. 【請求項５】一般式II 〔式中、担体は免疫原担体材料、核酸又はイムノアッセ
    イに使用するための標識ジゴキシゲニン結合体の標識構
    造単位を表わし、ｙは平均して１〜２０の数値を表わ
    し、かつＹは を表わす〕のジゴキシゲニン結合体。
JP1278799A 1988-10-27 1989-10-27 ジゴキシゲニン誘導体、その製法、標識結合体の製法、核酸検出法及びジゴキシゲニン結合体 Expired - Lifetime JPH0637513B2 (ja)

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Families Citing this family (77)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3813278A1 (de) * 1988-01-12 1989-07-20 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zum nachweis von nukleinsaeuren
DE4222254A1 (de) * 1992-07-07 1994-01-13 Bayer Ag Fotochemische Markierung von Nukleinsäuren mit Digoxigenin-Reagenzien und ihre Verwendung in Gensondentestsystemen
US5518901A (en) * 1993-04-19 1996-05-21 Murtagh; James J. Methods for adapting nucleic acid for detection, sequencing, and cloning using exonuclease
AU3891097A (en) * 1996-07-24 1998-02-10 Michelle M. Hanna Base-protected nucleotide analogs with protected thiol groups
DE19637042A1 (de) * 1996-09-12 1998-03-19 Boehringer Mannheim Gmbh Heterocyclische Verbindungen und deren Verwendung in der Detektion von Nucleinsäuren
US6541608B1 (en) * 1999-02-23 2003-04-01 Baylor College Of Medicine T cell receptor Vβ-Dβ-Jβ sequence and methods for its detection
CA2362099C (en) 1999-02-23 2014-05-13 Baylor College Of Medicine T cell receptor v.beta.-d.beta.-j.beta. sequence and methods for its detection
US6232076B1 (en) 2000-02-04 2001-05-15 Genaissance Pharmaceuticals, Inc. Stabilizer of dye sequencing products
JP2005172694A (ja) * 2003-12-12 2005-06-30 Fuji Photo Film Co Ltd タンパク質の検出方法
US20060069043A1 (en) * 2004-09-29 2006-03-30 Somberg John C Chiral separation, characterization and biological action of optically active isomers of digoxin
JP5331476B2 (ja) 2005-06-15 2013-10-30 カリダ・ジェノミックス・インコーポレイテッド 遺伝子解析および化学解析用の単分子アレイ
CA2624896C (en) 2005-10-07 2017-11-07 Callida Genomics, Inc. Self-assembled single molecule arrays and uses thereof
SG170028A1 (en) * 2006-02-24 2011-04-29 Callida Genomics Inc High throughput genome sequencing on dna arrays
CA2643700A1 (en) * 2006-02-24 2007-11-22 Callida Genomics, Inc. High throughput genome sequencing on dna arrays
WO2008070352A2 (en) * 2006-10-27 2008-06-12 Complete Genomics, Inc. Efficient arrays of amplified polynucleotides
WO2008063378A2 (en) 2006-11-01 2008-05-29 Ventana Medical Systems, Inc. Haptens, hapten conjugates, compositions thereof and method for their preparation and use
US20090075343A1 (en) * 2006-11-09 2009-03-19 Complete Genomics, Inc. Selection of dna adaptor orientation by nicking
US7682789B2 (en) * 2007-05-04 2010-03-23 Ventana Medical Systems, Inc. Method for quantifying biomolecules conjugated to a nanoparticle
JP2010528285A (ja) 2007-05-23 2010-08-19 ベンタナ・メデイカル・システムズ・インコーポレーテツド 免疫組織化学およびｉｎｓｉｔｕハイブリダーゼーションのためのポリマー担体
WO2009149013A2 (en) 2008-06-05 2009-12-10 Ventana Medical Systems, Inc. Compositions comprising nanomaterials and method for using such compositions for histochemical processes
SG177560A1 (en) 2009-07-06 2012-03-29 Hoffmann La Roche Bi-specific digoxigenin binding antibodies
USPP22463P3 (en) * 2010-02-16 2012-01-17 Menachem Bornstein Gypsophila plant named ‘Pearl Blossom’
WO2012003476A2 (en) 2010-07-02 2012-01-05 Ventana Medical Systems, Inc. Hapten conjugates for target detection
US8865404B2 (en) 2010-11-05 2014-10-21 President And Fellows Of Harvard College Methods for sequencing nucleic acid molecules
RU2013135175A (ru) 2011-01-03 2015-02-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Фармацевтическая композиция комплекса антитела против дигоксигенина и дигоксигенина, конъюгированного с пептидом
WO2013055995A2 (en) 2011-10-14 2013-04-18 President And Fellows Of Harvard College Sequencing by structure assembly
US9914967B2 (en) 2012-06-05 2018-03-13 President And Fellows Of Harvard College Spatial sequencing of nucleic acids using DNA origami probes
JP6247287B2 (ja) 2012-07-04 2017-12-13 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 抗ビオチン抗体および使用方法
ES2604012T3 (es) 2012-07-04 2017-03-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Conjugados de antígeno-anticuerpo unidos covalentemente
EP3138578B1 (en) 2012-07-04 2022-01-12 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-theophylline antibodies and methods of use
US9476089B2 (en) 2012-10-18 2016-10-25 President And Fellows Of Harvard College Methods of making oligonucleotide probes
US9540685B2 (en) 2013-03-15 2017-01-10 President And Fellows Of Harvard College Methods of identifying homologous genes using FISH
CA2933384A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles
BR112016014945A2 (pt) 2014-01-03 2018-01-23 F. Hoffmann-La Roche Ag conjugado, formulação farmacêutica e uso
MX373856B (es) 2014-01-03 2020-03-25 Hoffmann La Roche Conjugados helicoidales-anticuerpo anti-helicoidal unidos covalentemente y usos de los mismos.
EP3183358B1 (en) 2014-08-19 2020-10-07 President and Fellows of Harvard College Rna-guided systems for probing and mapping of nucleic acids
KR102771841B1 (ko) 2015-11-06 2025-02-24 벤타나 메디컬 시스템즈, 인코포레이티드 대표 진단법
EP3562845B1 (en) 2016-12-27 2025-10-01 F. Hoffmann-La Roche AG Novel biotin-specific monoclonal antibody and use thereof
BR112019010915A2 (pt) 2016-12-27 2019-10-01 Hoffmann La Roche anticorpo monoclonal, métodos para medir um analito em uma amostra e para produzir um anticorpo, uso de um anticorpo, kit de teste de imunoensaio e imunógeno
CN110088129A (zh) * 2016-12-27 2019-08-02 豪夫迈·罗氏有限公司 新的生物素特异性单克隆抗体及其用途
US11691141B2 (en) 2017-11-13 2023-07-04 Roche Sequencing Solutions, Inc. Devices for sample analysis using epitachophoresis
EP3864403A1 (en) 2018-10-12 2021-08-18 F. Hoffmann-La Roche AG Detection methods for epitachophoresis workflow automation
JP7441243B2 (ja) 2019-05-14 2024-02-29 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 試料分析のための装置および方法
WO2021076770A1 (en) 2019-10-18 2021-04-22 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Clinical- and industrial-scale intact-tissue sequencing
US12071667B2 (en) 2020-11-04 2024-08-27 10X Genomics, Inc. Sequence analysis using meta-stable nucleic acid molecules
CN112552367B (zh) * 2020-12-11 2023-06-06 郑州安图生物工程股份有限公司 一种地高辛衍生物及其制备方法
JP2024504944A (ja) * 2021-01-15 2024-02-02 ヴェンタナ メディカル システムズ， インク． 保存安定なケージドハプテン
US12060603B2 (en) 2021-01-19 2024-08-13 10X Genomics, Inc. Methods for internally controlled in situ assays using padlock probes
US20220380838A1 (en) 2021-06-01 2022-12-01 10X Genomics, Inc. Methods and compositions for analyte detection and probe resolution
WO2022256422A1 (en) 2021-06-02 2022-12-08 10X Genomics, Inc. Sample analysis using asymmetric circularizable probes
CN117651855A (zh) 2021-07-13 2024-03-05 10X基因组学有限公司 用于制备具有可控厚度的聚合基质的方法
US12139751B2 (en) 2021-07-30 2024-11-12 10X Genomics, Inc. Circularizable probes for in situ analysis
CA3224093A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Jorge Ivan Hernandez Neuta Methods and compositions for synchronizing reactions in situ
US12391984B2 (en) 2021-08-03 2025-08-19 10X Genomics, Inc. Compositions and methods for rolling circle amplification
US12529096B2 (en) 2021-08-03 2026-01-20 10X Genomics, Inc. Stabilization and/or compaction of nucleic acid structures
US12460251B2 (en) 2021-08-03 2025-11-04 10X Genomics, Inc. Stabilization and/or compaction of nucleic acid molecules
EP4381095A1 (en) 2021-08-03 2024-06-12 10X Genomics, Inc. Nucleic acid concatemers and methods for stabilizing and/or compacting the same
US12435364B2 (en) 2021-08-16 2025-10-07 10X Genomics, Inc. Probes comprising a split barcode region and methods of use
WO2023129898A2 (en) 2021-12-27 2023-07-06 10X Genomics, Inc. Methods and compositions for rolling circle amplification
EP4733410A2 (en) 2022-01-21 2026-04-29 10X Genomics, Inc. Multiple readout signals for analyzing a sample
WO2023164570A1 (en) 2022-02-23 2023-08-31 Insitro, Inc. Pooled optical screening and transcriptional measurements of cells comprising barcoded genetic perturbations
WO2023215612A1 (en) 2022-05-06 2023-11-09 10X Genomics, Inc. Analysis of antigen and antigen receptor interactions
EP4519453A1 (en) 2022-05-06 2025-03-12 10X Genomics, Inc. Methods and compositions for in situ analysis of v(d)j sequences
WO2023245190A1 (en) 2022-06-17 2023-12-21 10X Genomics, Inc. Catalytic de-crosslinking of samples for in situ analysis
CN119677856A (zh) 2022-08-12 2025-03-21 10X基因组学有限公司 Puma1聚合酶及其用途
WO2024040060A1 (en) 2022-08-16 2024-02-22 10X Genomics, Inc. Ap50 polymerases and uses thereof
EP4602344A1 (en) 2022-10-14 2025-08-20 10X Genomics, Inc. Methods for analysis of biological samples
WO2024102736A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 10X Genomics, Inc. Immobilization methods and compositions for in situ detection
US20240158852A1 (en) 2022-11-16 2024-05-16 10X Genomics, Inc. Methods and compositions for assessing performance of in situ assays
WO2024130203A1 (en) 2022-12-16 2024-06-20 10X Genomics, Inc. Methods and compositions for assessing performance
EP4646492A1 (en) 2023-01-06 2025-11-12 10X Genomics, Inc. Methods and compositions for in situ analysis of variant sequences
US20240263220A1 (en) 2023-02-03 2024-08-08 10X Genomics, Inc. In situ analysis of variant sequences in biological samples
WO2025029831A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 10X Genomics, Inc. Methods and systems for targeted rna cleavage and target rna-primed rolling circle amplification
US20250207203A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 10X Genomics, Inc. In situ detection of copy number variations in biological samples
WO2025189030A1 (en) 2024-03-07 2025-09-12 Stellaromics, Inc. Methods and systems for volumetric imaging
WO2025264702A1 (en) 2024-06-18 2025-12-26 10X Genomics, Inc. 3d hydrogels for nucleic acid sequencing
WO2026030369A1 (en) 2024-07-31 2026-02-05 10X Genomics, Inc. Methods and compositions for in situ analyte detection

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3855208A (en) * 1971-05-24 1974-12-17 Becton Dickinson Co Derivatives of digoxigenin
US3925355A (en) * 1974-03-01 1975-12-09 Corning Glass Works Labelled digoxin derivatives for radioimmunoassay
US4064227A (en) * 1975-03-17 1977-12-20 Mallinckrodt, Inc. Radioimmunoassay method for the determination of cardiotonic glycosides
US4082747A (en) * 1975-10-01 1978-04-04 Mallinckrodt, Inc. Chemical process
JPS53119873A (en) * 1977-03-28 1978-10-19 Rohm & Haas Digoxigenin derivative
CA1119163A (en) * 1977-09-01 1982-03-02 Ravi K. Varma Digoxigenin derivatives
US4469797A (en) * 1982-09-23 1984-09-04 Miles Laboratories, Inc. Digoxigenin immunogens, antibodies, labeled conjugates, and related derivatives
US4666830A (en) * 1984-08-23 1987-05-19 Wagner Daniel B Assay employing sacs and sac lysing agent
DE3431536A1 (de) * 1984-08-28 1986-03-13 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Derivatisierte nucleinsaeure-sequenz, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung zum nachweis von nucleinsaeuren

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