JPH0638775A - 発酵法によるポリ（３−ヒドロキシ酪酸）及びその誘導体の製造方法 - Google Patents
発酵法によるポリ（３−ヒドロキシ酪酸）及びその誘導体の製造方法Info
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- JPH0638775A JPH0638775A JP5065978A JP6597893A JPH0638775A JP H0638775 A JPH0638775 A JP H0638775A JP 5065978 A JP5065978 A JP 5065978A JP 6597893 A JP6597893 A JP 6597893A JP H0638775 A JPH0638775 A JP H0638775A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】（ａ）グリコール酸を唯一の炭素源として生育
でき、かつ（ｂ）ショ糖を炭素源、無機態窒素、無機態
リンを含有する好気的水性培地を用いた回分式培養法に
於て細菌の対数増殖期における生育速度が乾燥菌体重量
として１日当り２ｇ／ｌ以上であるという２種の性質を
有するポリ（３−ヒドロキシ酪酸）生産菌を、炭水化物
を炭素源として含む好気的水性培地で培養し、ポリ（３
ーヒドロキシ酪酸）またはその誘導体を効率よく製造す
る。 【効果】本発明の条件を満足する細菌を用いる場合、そ
の細菌の分類学上の属、種によらず短時間の好気的水性
培地でポリ（３−ヒドロキシ酪酸）及びその誘導体を容
易に製造することが出来る。
でき、かつ（ｂ）ショ糖を炭素源、無機態窒素、無機態
リンを含有する好気的水性培地を用いた回分式培養法に
於て細菌の対数増殖期における生育速度が乾燥菌体重量
として１日当り２ｇ／ｌ以上であるという２種の性質を
有するポリ（３−ヒドロキシ酪酸）生産菌を、炭水化物
を炭素源として含む好気的水性培地で培養し、ポリ（３
ーヒドロキシ酪酸）またはその誘導体を効率よく製造す
る。 【効果】本発明の条件を満足する細菌を用いる場合、そ
の細菌の分類学上の属、種によらず短時間の好気的水性
培地でポリ（３−ヒドロキシ酪酸）及びその誘導体を容
易に製造することが出来る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は細菌によるポリ（３−ヒ
ドロキシ酪酸）（以下これをＰＨＢと称す）及びその誘
導体の製造法に関する。
ドロキシ酪酸）（以下これをＰＨＢと称す）及びその誘
導体の製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＰＨＢは細菌のエネルギー蓄積物として
多くの種類の細菌が体内に生合成し蓄積することがブラ
ンドル等（１９９０年、Ａｄｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｎ
ｇ．／Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７−９３頁）及び土肥
監修の「分解性プラスチックス」（１９９０年、株式会
社シーエムシー発行）の成書に報告されている。これら
の細菌種の中ではアルカリゲネス・ユウトロファス（Ａ
ｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｅｕｔｒｏｐｈｕｓ）種、アルカ
リゲネス・レイタス（Ａｌ．ｌａｔｕｓ）種が特に有名
であり、ＰＨＢ誘導体の工業的製法の研究はほとんどこ
の属の細菌に集中している（特開昭５７−１５０３９
３、Ｄ．Ｅ．３，３４３，５７６）。
多くの種類の細菌が体内に生合成し蓄積することがブラ
ンドル等（１９９０年、Ａｄｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｎ
ｇ．／Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７−９３頁）及び土肥
監修の「分解性プラスチックス」（１９９０年、株式会
社シーエムシー発行）の成書に報告されている。これら
の細菌種の中ではアルカリゲネス・ユウトロファス（Ａ
ｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｅｕｔｒｏｐｈｕｓ）種、アルカ
リゲネス・レイタス（Ａｌ．ｌａｔｕｓ）種が特に有名
であり、ＰＨＢ誘導体の工業的製法の研究はほとんどこ
の属の細菌に集中している（特開昭５７−１５０３９
３、Ｄ．Ｅ．３，３４３，５７６）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしアルカリゲネス
属細菌においては増殖速度、ＰＨＢ誘導体の含有率の点
で更に改善が望まれている。また種の保存の容易さ、培
養条件の簡略化、コントロールの容易さ、ＰＨＢの菌体
からの取り出しの容易さ等の点でも改善が望まれてい
る。さらに遺伝子源としてもアルカリゲネス属以外でＰ
ＨＢ誘導体の高生産能を持つ細菌が求められている。一
例をあげればバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の中には
ＰＨＢ，ＰＨＢ誘導体の高生産能を持つ高増殖菌は知ら
れていないが（チェン等、１９９１年ＦＥＭＳ Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｌｅｔｔｅｒｓ８４巻、１７３−
１７６頁）、バチルス属は内性胞子形成能を有し悪環境
に対し耐性を示すという利点を持ち種の保存の面でその
利用価値は高いといった特徴を有する。この様に細菌類
は各々の属や種によって利用価値の高い特徴を有する場
合があるが、これらの特徴を充分に利用する事ができな
かった。
属細菌においては増殖速度、ＰＨＢ誘導体の含有率の点
で更に改善が望まれている。また種の保存の容易さ、培
養条件の簡略化、コントロールの容易さ、ＰＨＢの菌体
からの取り出しの容易さ等の点でも改善が望まれてい
る。さらに遺伝子源としてもアルカリゲネス属以外でＰ
ＨＢ誘導体の高生産能を持つ細菌が求められている。一
例をあげればバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の中には
ＰＨＢ，ＰＨＢ誘導体の高生産能を持つ高増殖菌は知ら
れていないが（チェン等、１９９１年ＦＥＭＳ Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｌｅｔｔｅｒｓ８４巻、１７３−
１７６頁）、バチルス属は内性胞子形成能を有し悪環境
に対し耐性を示すという利点を持ち種の保存の面でその
利用価値は高いといった特徴を有する。この様に細菌類
は各々の属や種によって利用価値の高い特徴を有する場
合があるが、これらの特徴を充分に利用する事ができな
かった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らはこの目的に
対して数多くの細菌の培養方法を検索した結果細菌の属
や種によらない一般的なポリ（３−ヒドロキシ酪酸）及
びその誘導体の効率的発酵生産法を明らかにすることが
でき、多くの細菌の有する特徴を充分利用できる様にな
った。
対して数多くの細菌の培養方法を検索した結果細菌の属
や種によらない一般的なポリ（３−ヒドロキシ酪酸）及
びその誘導体の効率的発酵生産法を明らかにすることが
でき、多くの細菌の有する特徴を充分利用できる様にな
った。
【０００５】即ち本発明は、 （１）（ａ）グリコール酸を唯一の炭素源として生育す
ることができ、かつ（ｂ）ショ糖を炭素源、無機態窒
素、無機態リンを含有する好気的水性培地を用いた回分
式培養法に於て細菌の対数増殖期における生育速度が乾
燥菌体重量として１日当り２ｇ／ｌ以上であるという２
種の性質を有するポリ（３−ヒドロキシ酪酸）生産菌を
炭水化物を炭素源として含む好気的水性培地で培養し、
ポリ（３ーヒドロキシ酪酸）またはその誘導体を効率よ
く製造する方法、及び （２）（１）に記載の細菌がバチルス属（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ）、シュウドモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）
の細菌である（１）に記載の方法を提供する。
ることができ、かつ（ｂ）ショ糖を炭素源、無機態窒
素、無機態リンを含有する好気的水性培地を用いた回分
式培養法に於て細菌の対数増殖期における生育速度が乾
燥菌体重量として１日当り２ｇ／ｌ以上であるという２
種の性質を有するポリ（３−ヒドロキシ酪酸）生産菌を
炭水化物を炭素源として含む好気的水性培地で培養し、
ポリ（３ーヒドロキシ酪酸）またはその誘導体を効率よ
く製造する方法、及び （２）（１）に記載の細菌がバチルス属（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ）、シュウドモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）
の細菌である（１）に記載の方法を提供する。
【０００６】本発明の発酵製造方法について詳細に説明
する。すべて％は重量％である。（ａ）のグリコール酸
を唯一の炭素源として生育できる細菌とはグリコール酸
を唯一の炭素源として含有する化学合成培地、少なくと
もその寒天培地においてコロニー形成等増殖能力を有す
る細菌を意味する。培地中のグリコール酸の濃度は０．
１−５．０％好ましくは１．０−２．０％とする。通常
は無機態窒素としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム等のアンモニウム塩類及び硝酸ナトリウム、アンモ
ニウムなどを用いることが好ましい。培地中の無機態窒
素の濃度は窒素原子として通常は０．０１−０．５％と
する。また通常は無機態リンを用いるのが好ましいが、
無機態リンとしてはリン酸ナトリウム塩またはカリウム
塩、アンモニウム塩が用いられ、培地中のリン源の濃度
は０．０５−０．４％程度存在していることが望まし
い。培地に含有される他の成分は次の組成が推奨される
が、特に限定されない。 Ｎａ+ ：０．０１−１．０％ Ｋ+ ：０．００１−１．０％ ＳＯ4 -- ：０．０１−２．０％ Ｍｇ++ ：０．０００１−１．０％ 寒天培地の場合は寒天１．０−２．０％を含む。 増殖を速めるためカザミノ酸またはその他天然培地成分
を０．００１−０．１％程度加えることも可能である。
微量元素としては以下の組成で用いることが望ましいが
特に限定されない。 ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ：０．００００１−０．２％ ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ：０．００００５−０．４％ ＣｏＳＯ4 ：０．００００１−０．２％ ＭｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ：０．００００１−０．２％ ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ：０．００００１−０．２％ ＮａＭｏＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ ：０．０００００１−０．０２％ ＣｕＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ：０．０００００１−０．１％
する。すべて％は重量％である。（ａ）のグリコール酸
を唯一の炭素源として生育できる細菌とはグリコール酸
を唯一の炭素源として含有する化学合成培地、少なくと
もその寒天培地においてコロニー形成等増殖能力を有す
る細菌を意味する。培地中のグリコール酸の濃度は０．
１−５．０％好ましくは１．０−２．０％とする。通常
は無機態窒素としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム等のアンモニウム塩類及び硝酸ナトリウム、アンモ
ニウムなどを用いることが好ましい。培地中の無機態窒
素の濃度は窒素原子として通常は０．０１−０．５％と
する。また通常は無機態リンを用いるのが好ましいが、
無機態リンとしてはリン酸ナトリウム塩またはカリウム
塩、アンモニウム塩が用いられ、培地中のリン源の濃度
は０．０５−０．４％程度存在していることが望まし
い。培地に含有される他の成分は次の組成が推奨される
が、特に限定されない。 Ｎａ+ ：０．０１−１．０％ Ｋ+ ：０．００１−１．０％ ＳＯ4 -- ：０．０１−２．０％ Ｍｇ++ ：０．０００１−１．０％ 寒天培地の場合は寒天１．０−２．０％を含む。 増殖を速めるためカザミノ酸またはその他天然培地成分
を０．００１−０．１％程度加えることも可能である。
微量元素としては以下の組成で用いることが望ましいが
特に限定されない。 ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ：０．００００１−０．２％ ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ：０．００００５−０．４％ ＣｏＳＯ4 ：０．００００１−０．２％ ＭｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ：０．００００１−０．２％ ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ：０．００００１−０．２％ ＮａＭｏＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ ：０．０００００１−０．０２％ ＣｕＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ：０．０００００１−０．１％
【０００７】培地ｐＨは通常は６．０−９．０好ましく
は７．０−７．５となるよう水酸化ナトリウム、水酸化
カリウム、アンモニア、塩酸、硫酸等でコントロールす
れば充分である。培養温度は２０−４０℃好ましくは２
５−３７℃とし、好気的に１ー７日培養する。以上の方
法で増殖を認めた細菌をグリコール酸を唯一の炭素源と
して生育することが出来る細菌とする。
は７．０−７．５となるよう水酸化ナトリウム、水酸化
カリウム、アンモニア、塩酸、硫酸等でコントロールす
れば充分である。培養温度は２０−４０℃好ましくは２
５−３７℃とし、好気的に１ー７日培養する。以上の方
法で増殖を認めた細菌をグリコール酸を唯一の炭素源と
して生育することが出来る細菌とする。
【０００８】上記特徴を有する細菌を、グリコール酸を
炭素源とする前記（ａ）の培地においてグリコール酸の
かわりの炭素源としてショ糖好ましくは２−５％、及び
前記したような種類及び量の無機態窒素、無機態リンを
含有する液体培地で慣用の振とう培養をはじめとする回
分式培養により上記培養条件下好気的に２−４日間培養
した時に、対数増殖期における培養物の乾燥菌体重量が
１日当り２ｇ／ｌ以上である細菌を（ｂ）の性質を有す
る細菌とする。
炭素源とする前記（ａ）の培地においてグリコール酸の
かわりの炭素源としてショ糖好ましくは２−５％、及び
前記したような種類及び量の無機態窒素、無機態リンを
含有する液体培地で慣用の振とう培養をはじめとする回
分式培養により上記培養条件下好気的に２−４日間培養
した時に、対数増殖期における培養物の乾燥菌体重量が
１日当り２ｇ／ｌ以上である細菌を（ｂ）の性質を有す
る細菌とする。
【０００９】上記の２種類の特徴を合わせて有するＰＨ
Ｂ生産菌を、炭素源として炭水化物を含む通常の好気的
水性培地で培養することによりＰＨＢまたはその誘導体
を効率よく製造することが出来る。本願発明の方法を用
いる場合、使用する細菌は分類学上どの種、属に属して
いてもよく、上記２種類の特徴を兼ね備えていれば充分
であるが、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、シュウド
モナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）に属する上記特徴
を有する細菌が好ましい。
Ｂ生産菌を、炭素源として炭水化物を含む通常の好気的
水性培地で培養することによりＰＨＢまたはその誘導体
を効率よく製造することが出来る。本願発明の方法を用
いる場合、使用する細菌は分類学上どの種、属に属して
いてもよく、上記２種類の特徴を兼ね備えていれば充分
であるが、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、シュウド
モナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）に属する上記特徴
を有する細菌が好ましい。
【００１０】ＰＨＢ及びその誘導体を発酵製造する培養
方法について以下に示す。炭素源としては糖類や多糖類
例えばショ糖、グルコース、フラクトース及びデンプン
等が用いられるが特にこれらに限定されない。培地中の
炭素源の濃度は培養開始時は１−１０％好ましくは２−
４％とし、以後継続的または断続的に炭素源を追加し、
最終的に培養液に対し１０−３０％追加することが望ま
しい。窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム等のアンモニウム塩類及び硝酸ナトリウム、アンモ
ニウム等の無機態窒素または尿素などを用いることが好
ましい。培地中の無機態窒素または尿素などの濃度は窒
素原子として培養開始時に０．０５−０．５％とし、以
後細菌の増殖に従い追加するが、最終的には窒素原子が
枯渇する状態とすることがＰＨＢおよびその誘導体の生
産に適している。特に炭素源量と窒素源量の比が大きく
なるようにすることが望ましい。無機態リンとしてはリ
ン酸ナトリウム塩またはカリウム塩、アンモニウム塩を
用いることが好ましい。培地中の無機態リンの濃度は
０．０５−０．２％程度存在していることが望ましい。
培地に含有される他の成分は次の組成が推奨されるが、
特に限定されない。 Ｎａ+ ：０．０１−１．０％ Ｋ+ ：０．００１−１．０％ ＳＯ4 -- ：０．０１−２．０％ Ｍｇ++ ：０．０００１−１．０％ 増殖を速めるためカザミノ酸またはその他天然培地成分
を０．００１−０．１％程度加えることも可能である。
微量元素としては以下の組成で用いることが望ましいが
特に限定されない。 ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ：０．００００１−０．２％ ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ：０．００００５−０．４％ ＣｏＳＯ4 ：０．００００１−０．２％ ＭｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ：０．００００１−０．２％ ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ：０．００００１−０．２％ ＮａＭｏＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ ：０．０００００１−０．０２％ ＣｕＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ：０．０００００１−０．１％ 培地ｐＨは通常は６．０−９．０好ましくは７．０−
７．５となるよう水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、
アンモニア、塩酸、硫酸等でコントロールすれば充分で
ある。培養温度は２０−４０℃好ましくは２５−３７℃
である。酸素の供給は空気により行うが、気液接触型の
培養器の場合は容量の０．５−３．０倍量／分とするこ
とが望ましい。発酵製造法としては以上の他、通常の回
分式方法であっても何等差し支えない。
方法について以下に示す。炭素源としては糖類や多糖類
例えばショ糖、グルコース、フラクトース及びデンプン
等が用いられるが特にこれらに限定されない。培地中の
炭素源の濃度は培養開始時は１−１０％好ましくは２−
４％とし、以後継続的または断続的に炭素源を追加し、
最終的に培養液に対し１０−３０％追加することが望ま
しい。窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム等のアンモニウム塩類及び硝酸ナトリウム、アンモ
ニウム等の無機態窒素または尿素などを用いることが好
ましい。培地中の無機態窒素または尿素などの濃度は窒
素原子として培養開始時に０．０５−０．５％とし、以
後細菌の増殖に従い追加するが、最終的には窒素原子が
枯渇する状態とすることがＰＨＢおよびその誘導体の生
産に適している。特に炭素源量と窒素源量の比が大きく
なるようにすることが望ましい。無機態リンとしてはリ
ン酸ナトリウム塩またはカリウム塩、アンモニウム塩を
用いることが好ましい。培地中の無機態リンの濃度は
０．０５−０．２％程度存在していることが望ましい。
培地に含有される他の成分は次の組成が推奨されるが、
特に限定されない。 Ｎａ+ ：０．０１−１．０％ Ｋ+ ：０．００１−１．０％ ＳＯ4 -- ：０．０１−２．０％ Ｍｇ++ ：０．０００１−１．０％ 増殖を速めるためカザミノ酸またはその他天然培地成分
を０．００１−０．１％程度加えることも可能である。
微量元素としては以下の組成で用いることが望ましいが
特に限定されない。 ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ：０．００００１−０．２％ ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ：０．００００５−０．４％ ＣｏＳＯ4 ：０．００００１−０．２％ ＭｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ：０．００００１−０．２％ ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ：０．００００１−０．２％ ＮａＭｏＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ ：０．０００００１−０．０２％ ＣｕＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ：０．０００００１−０．１％ 培地ｐＨは通常は６．０−９．０好ましくは７．０−
７．５となるよう水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、
アンモニア、塩酸、硫酸等でコントロールすれば充分で
ある。培養温度は２０−４０℃好ましくは２５−３７℃
である。酸素の供給は空気により行うが、気液接触型の
培養器の場合は容量の０．５−３．０倍量／分とするこ
とが望ましい。発酵製造法としては以上の他、通常の回
分式方法であっても何等差し支えない。
【００１１】ＰＨＢ誘導体の製法としては培養の途中で
炭素源として糖や多糖類以外にプロピオン酸、吉草酸、
３−ヒドロキシ吉草酸、４−ヒドロキシ酪酸等の低級脂
肪酸、γ−ブチロラクトン、γ−バレロラクトン、１，
４−ブタンジオール等の低級オキシ脂肪酸等の誘導体を
添加することにより達成される。これらの化合物は細菌
に対し阻害を持つことがあるので、これらに耐性を有す
る変異菌を用いることも可能である。この様にして得ら
れるＰＨＢ誘導体としては３−ヒドロキシ酪酸と３−ヒ
ドロキシ吉草酸の共重合体、３−ヒドロキシ酪酸と４−
ヒドロキシ酪酸の共重合体、あるいは３−ヒドロキシ酪
酸と３−ヒドロシキアルカン酸の共重合対等である。
炭素源として糖や多糖類以外にプロピオン酸、吉草酸、
３−ヒドロキシ吉草酸、４−ヒドロキシ酪酸等の低級脂
肪酸、γ−ブチロラクトン、γ−バレロラクトン、１，
４−ブタンジオール等の低級オキシ脂肪酸等の誘導体を
添加することにより達成される。これらの化合物は細菌
に対し阻害を持つことがあるので、これらに耐性を有す
る変異菌を用いることも可能である。この様にして得ら
れるＰＨＢ誘導体としては３−ヒドロキシ酪酸と３−ヒ
ドロキシ吉草酸の共重合体、３−ヒドロキシ酪酸と４−
ヒドロキシ酪酸の共重合体、あるいは３−ヒドロキシ酪
酸と３−ヒドロシキアルカン酸の共重合対等である。
【００１２】この様にして得られたＰＨＢ及びその誘導
体は培養終了後、滅菌して粉砕したり酵素や化学薬品等
を組み合わせることにより細胞壁を分解しＰＨＢおよび
その誘導体を菌体外に出し遠心分離や溶媒抽出法により
分離採取することが出来る。ここで用いる酵素としては
塩化リゾチウム、トリプシン、プロテアーゼ、化学薬品
としては、過酸化水素、次亜鉛素酸ソーダ、オゾン等が
用いられる。またポリマーの抽出用の溶媒としては塩化
メチレン、クロロホルム、ジクロロエタン、ピリジン、
ジオキサン、エチレンカーボネート、酢酸エチル、アセ
トン、メチルエチルケトン、トルエン等があげられる。
体は培養終了後、滅菌して粉砕したり酵素や化学薬品等
を組み合わせることにより細胞壁を分解しＰＨＢおよび
その誘導体を菌体外に出し遠心分離や溶媒抽出法により
分離採取することが出来る。ここで用いる酵素としては
塩化リゾチウム、トリプシン、プロテアーゼ、化学薬品
としては、過酸化水素、次亜鉛素酸ソーダ、オゾン等が
用いられる。またポリマーの抽出用の溶媒としては塩化
メチレン、クロロホルム、ジクロロエタン、ピリジン、
ジオキサン、エチレンカーボネート、酢酸エチル、アセ
トン、メチルエチルケトン、トルエン等があげられる。
【００１３】本発明の方法に用いられる細菌としては例
えば以下の３菌すなわち（１）新規バチルス属（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ）細菌ＮＫＦ２００、微工研寄託番号１２８
８３号（２）新規シュウドモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ）細菌ＮＫＦ０３１、微工研寄託番号１２９３３
号および新規バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）細菌ＮＫ
Ｆ１０９、微工研寄託番号１３４２６（ＦＥＲＭ Ｐ−
１３４２６）号が挙げられる。これらはいずれも工業技
術院微生物工業技術研究所に寄託されている。これら３
細菌の特徴を次頁以降表１に示す。
えば以下の３菌すなわち（１）新規バチルス属（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ）細菌ＮＫＦ２００、微工研寄託番号１２８
８３号（２）新規シュウドモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ）細菌ＮＫＦ０３１、微工研寄託番号１２９３３
号および新規バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）細菌ＮＫ
Ｆ１０９、微工研寄託番号１３４２６（ＦＥＲＭ Ｐ−
１３４２６）号が挙げられる。これらはいずれも工業技
術院微生物工業技術研究所に寄託されている。これら３
細菌の特徴を次頁以降表１に示す。
【００１４】
【表１】
【００１５】上述の菌学的性質をＢＥＲＧＥＹ’Ｓ Ｍ
ＡＮＵＡＬ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅ １及び２に従い公知の
菌株とその異同を検討した結果、上記３菌株は以下の通
りであった。
ＡＮＵＡＬ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅ １及び２に従い公知の
菌株とその異同を検討した結果、上記３菌株は以下の通
りであった。
【００１６】ＮＫＦ２００菌（微工研寄託番号１２８８
３号）はグラム染色陽性、好気性−通性嫌気性、内性胞
子有、カタラーゼプラスの桿菌であることからバチルス
属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に属する。また塩化ナトリウム
８％存在下で生育可能、５０℃で生育可能、プロピオン
酸利用可能な点は前記文献中のバチルス・リヘニフォル
ミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）種の記載内容
と一致する。しかし同定実験に際し対照菌として使用し
たバチルス・リヘニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆ
ｏｒｍｉｓ）種ＩＦＯ１２２００菌とは麦芽糖、乳糖、
Ｄ−ソルビット、グリセリンからの酸生産が対照菌が陽
性であるのに対しＮＫＦ２００菌は不明瞭である点から
区別される。以上の点からＮＫＦ２００菌（微工研寄託
番号１２８８３号）はバチルス・リヘニフォルミス
（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）種に近縁の種と推
定された。
３号）はグラム染色陽性、好気性−通性嫌気性、内性胞
子有、カタラーゼプラスの桿菌であることからバチルス
属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に属する。また塩化ナトリウム
８％存在下で生育可能、５０℃で生育可能、プロピオン
酸利用可能な点は前記文献中のバチルス・リヘニフォル
ミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）種の記載内容
と一致する。しかし同定実験に際し対照菌として使用し
たバチルス・リヘニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆ
ｏｒｍｉｓ）種ＩＦＯ１２２００菌とは麦芽糖、乳糖、
Ｄ−ソルビット、グリセリンからの酸生産が対照菌が陽
性であるのに対しＮＫＦ２００菌は不明瞭である点から
区別される。以上の点からＮＫＦ２００菌（微工研寄託
番号１２８８３号）はバチルス・リヘニフォルミス
（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）種に近縁の種と推
定された。
【００１７】ＮＫＦ０３１菌（微工研寄託番号１２９３
３号）はグラム染色陰性、運動性を示しべん毛として極
毛を有するカタラーゼプラスの好気的で栄養要求性のな
い桿菌であり、細胞のサイズ等表１記載の特徴から本菌
はシュウドモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）に属
し、前記文献記載項目中デンプンの加水分解が出来ない
点を除きシュウドモナス・カトレヤ（Ｐ．ｃａｔｔｌｅ
ｙａｅ）種と一致する。以上の点から本菌はシュウドモ
ナス・カトレヤ（Ｐ．ｃａｔｔｌｅｙａｅ）種と近縁の
種と推定された。
３号）はグラム染色陰性、運動性を示しべん毛として極
毛を有するカタラーゼプラスの好気的で栄養要求性のな
い桿菌であり、細胞のサイズ等表１記載の特徴から本菌
はシュウドモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）に属
し、前記文献記載項目中デンプンの加水分解が出来ない
点を除きシュウドモナス・カトレヤ（Ｐ．ｃａｔｔｌｅ
ｙａｅ）種と一致する。以上の点から本菌はシュウドモ
ナス・カトレヤ（Ｐ．ｃａｔｔｌｅｙａｅ）種と近縁の
種と推定された。
【００１８】ＮＫＦ１０９菌（微工研寄託番号 ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１３４２６号）はグラム染色陽性、好気性、内
性胞子を有し、カタラーゼ反応陽性の桿菌であることか
らバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に属する。また細胞
のサイズ、Ｖ−Ｐ反応陰性、ゼラチン液化、デンプン及
びカゼイン加水分解可能、グルコースから酸を生産する
がガスを生じない等の点は前記文献中のバチルス・メガ
テリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）種の記載と一致
する。また同定試験中の塩化ナトリウムに対する耐性、
生育最高温度等は対照菌として使用したバチルス・メガ
テリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）種ＡＴＣＣ６４
５９菌株と同じ結果を示したが、Ｄ−マンノースからの
酸生成が対照に用いたバチルス・メガテリウム（Ｍ．ｍ
ｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＡＴＣＣ６４５９菌株は陽性を示
したのに対しＮＫＦ１０９菌は陰性であった。以上の結
果、ＮＫＦ１０９菌（微工研寄託番号 ＦＥＲＭ Ｐ−
１３４２６号）はバチルス・メガテリウム（Ｂ．ｍｅｇ
ａｔｅｒｉｕｍ）種に近縁の細菌と推定された。
Ｍ Ｐ−１３４２６号）はグラム染色陽性、好気性、内
性胞子を有し、カタラーゼ反応陽性の桿菌であることか
らバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に属する。また細胞
のサイズ、Ｖ−Ｐ反応陰性、ゼラチン液化、デンプン及
びカゼイン加水分解可能、グルコースから酸を生産する
がガスを生じない等の点は前記文献中のバチルス・メガ
テリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）種の記載と一致
する。また同定試験中の塩化ナトリウムに対する耐性、
生育最高温度等は対照菌として使用したバチルス・メガ
テリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）種ＡＴＣＣ６４
５９菌株と同じ結果を示したが、Ｄ−マンノースからの
酸生成が対照に用いたバチルス・メガテリウム（Ｍ．ｍ
ｅｇａｔｅｒｉｕｍ）ＡＴＣＣ６４５９菌株は陽性を示
したのに対しＮＫＦ１０９菌は陰性であった。以上の結
果、ＮＫＦ１０９菌（微工研寄託番号 ＦＥＲＭ Ｐ−
１３４２６号）はバチルス・メガテリウム（Ｂ．ｍｅｇ
ａｔｅｒｉｕｍ）種に近縁の細菌と推定された。
【００１９】
【実施例】以下実施例により本発明を説明する。 実施例１−２ 炭素源としてグリコール酸１％のみを含む寒天平板培地
にＮＫＦ２００菌（微工研寄託番号１２８８３号）、Ｎ
ＫＦ０３１菌（微工研寄託番号１２９３３号）を植菌
し、３０℃に維持し静置培養を４日間行った。その結
果、実施した２菌の生育状況は次頁表２に示すようにコ
ロニーを形成した。従って実施した２菌はグリコール酸
を唯一の炭素源として生育することが出来る。 その他培地成分 （ＮＨ4 ）2 ＳＯ4 ２．６０ｇ Ｎａ2 ＨＰＯ4 ・１２Ｈ2 Ｏ １５．００ｇ ＮａＨ2 ＰＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ １．００ｇ ＫＣｌ ０．２６ｇ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．１３ｇ ＊微量元素溶液 ３．２５ｍｌ 蒸留水 １ｌ ＊微量元素溶液 ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ０．５０ｇ ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ １．００ｇ ＣｏＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏ ０．５０ｇ ＭｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．２０ｇ ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．５０ｇ Ｎａ2 ＭｏＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ ０．０２ｇ ＣｕＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ０．１０ｇ 蒸留水 １ｌ
にＮＫＦ２００菌（微工研寄託番号１２８８３号）、Ｎ
ＫＦ０３１菌（微工研寄託番号１２９３３号）を植菌
し、３０℃に維持し静置培養を４日間行った。その結
果、実施した２菌の生育状況は次頁表２に示すようにコ
ロニーを形成した。従って実施した２菌はグリコール酸
を唯一の炭素源として生育することが出来る。 その他培地成分 （ＮＨ4 ）2 ＳＯ4 ２．６０ｇ Ｎａ2 ＨＰＯ4 ・１２Ｈ2 Ｏ １５．００ｇ ＮａＨ2 ＰＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ １．００ｇ ＫＣｌ ０．２６ｇ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．１３ｇ ＊微量元素溶液 ３．２５ｍｌ 蒸留水 １ｌ ＊微量元素溶液 ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ０．５０ｇ ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ １．００ｇ ＣｏＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏ ０．５０ｇ ＭｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．２０ｇ ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．５０ｇ Ｎａ2 ＭｏＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ ０．０２ｇ ＣｕＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ０．１０ｇ 蒸留水 １ｌ
【００２０】
【表２】
【００２１】実施例３−４ 炭素源としてショ糖４％を含み、これ以外の成分とし
て、実施例１に示したグリコール酸及び寒天以外のその
他培地成分を同じ組成で含有する液体培地２０ｍｌを１
００ｍｌ用フラスコに仕込みＮＫＦ２００菌、ＮＫＦ０
３１菌を植菌し３０℃に維持し慣用の振とう培養を４日
間行った。培地のｐＨは定期的に水酸化ナトリウムまた
は塩酸各１０％溶液で７．０に調整した。培養後遠心分
離法により培養物を集め乾燥させ乾燥菌体重量を測定
し、メチルエステル化法により乾燥菌体重量当りのＰＨ
Ｂ含量を測定した。ＮＫＦ２００菌、ＮＫＦ０３１菌を
用いた結果を表３に示す。
て、実施例１に示したグリコール酸及び寒天以外のその
他培地成分を同じ組成で含有する液体培地２０ｍｌを１
００ｍｌ用フラスコに仕込みＮＫＦ２００菌、ＮＫＦ０
３１菌を植菌し３０℃に維持し慣用の振とう培養を４日
間行った。培地のｐＨは定期的に水酸化ナトリウムまた
は塩酸各１０％溶液で７．０に調整した。培養後遠心分
離法により培養物を集め乾燥させ乾燥菌体重量を測定
し、メチルエステル化法により乾燥菌体重量当りのＰＨ
Ｂ含量を測定した。ＮＫＦ２００菌、ＮＫＦ０３１菌を
用いた結果を表３に示す。
【００２２】
【表３】
【００２３】実施例５−６ 実施例３−４において培養４８時間後に水酸化ナトリウ
ム１０％溶液でｐＨ７．０に調整したプロピオン酸１％
を０．２μｍのフィルターにて濾過し追加し培養を更に
２日間合計４日間行った。実施例３−４と全く同様の処
理をし乾燥菌体重量、ＰＨＢ含量、ＰＨＢ誘導体含量を
測定した。その結果ＮＫＦ２００菌の場合乾燥菌体重量
は８．０ｇ／ｌ、３−ヒドロキシ酪酸単位の含量が８８
モル％、３−ヒドロキシ吉草酸単位が１２モル％よりな
る共重合ポリエステル５２重量％を含有することが判っ
た。ＮＫＦ０３１菌では乾燥菌体重量９．０ｇ／ｌ、で
各々７７モル％、２３モル％よりなるＮＫＦ２００菌と
同種の共重合ポリエステル５０重量％を含有していた。
ム１０％溶液でｐＨ７．０に調整したプロピオン酸１％
を０．２μｍのフィルターにて濾過し追加し培養を更に
２日間合計４日間行った。実施例３−４と全く同様の処
理をし乾燥菌体重量、ＰＨＢ含量、ＰＨＢ誘導体含量を
測定した。その結果ＮＫＦ２００菌の場合乾燥菌体重量
は８．０ｇ／ｌ、３−ヒドロキシ酪酸単位の含量が８８
モル％、３−ヒドロキシ吉草酸単位が１２モル％よりな
る共重合ポリエステル５２重量％を含有することが判っ
た。ＮＫＦ０３１菌では乾燥菌体重量９．０ｇ／ｌ、で
各々７７モル％、２３モル％よりなるＮＫＦ２００菌と
同種の共重合ポリエステル５０重量％を含有していた。
【００２４】実施例７ 以下の組成を持つ培地を調整した。 （ＮＨ4 ）2 ＳＯ4 ５．００ｇ Ｎａ2 ＨＰＯ4 ・１２Ｈ2 Ｏ １９．５０ｇ ＮａＨ2 ＰＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ １．００ｇ ＫＣｌ ０．２６ｇ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．１３ｇ ショ糖 ６０．００ｇ ＊微量元素溶液 ３．２５ｍｌ 蒸留水 ９５０ｍｌ ＊微量元素溶液 ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ０．５０ｇ ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ １．００ｇ ＣｏＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏ ０．５０ｇ ＭｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．２０ｇ ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．５０ｇ Ｎａ2 ＭｏＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ ０．０２ｇ ＣｕＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ０．１０ｇ 蒸留水 １ｌ 上記培地を容量３ｌのジャーファーメンターに仕込み１
１５℃にて１５分間オートクレーブにて滅菌した。ここ
にバチルス属細菌ＮＫＦ２００菌を接種し、３７℃で通
気培養を行った。通気量は１．５ｌ／分とした。４時間
後白濁が強くなった。この時より以下の組成のフィード
液を連続的に注入した。尚、２８％アンモニア水は０．
２μｍのフィルターにて濾過し、その他は１１５℃で１
５分間オートクレーブ中で滅菌したものをもちいた。 フィード液の組成 Ｎａ2 ＨＰＯ4 ・１２Ｈ2 Ｏ １０．０ｇ 微量元素溶液 ４．０ｍｌ ショ糖 １２０．０ｇ 蒸留水 ２００．０ｍｌ ２８％アンモニア水 １５．０ｍｌ
１５℃にて１５分間オートクレーブにて滅菌した。ここ
にバチルス属細菌ＮＫＦ２００菌を接種し、３７℃で通
気培養を行った。通気量は１．５ｌ／分とした。４時間
後白濁が強くなった。この時より以下の組成のフィード
液を連続的に注入した。尚、２８％アンモニア水は０．
２μｍのフィルターにて濾過し、その他は１１５℃で１
５分間オートクレーブ中で滅菌したものをもちいた。 フィード液の組成 Ｎａ2 ＨＰＯ4 ・１２Ｈ2 Ｏ １０．０ｇ 微量元素溶液 ４．０ｍｌ ショ糖 １２０．０ｇ 蒸留水 ２００．０ｍｌ ２８％アンモニア水 １５．０ｍｌ
【００２５】１０時間で注入を終了した後、更に４４重
量％ショ糖１８０ｇを５時間で注入した。その後温度を
３０℃とし、３０時間培養した。この間ｐＨは一定して
低下の方向にあり、１０％水酸化ナトリウム水溶液にて
ｐＨを６．５−７．５に保った。培養終了後乾燥菌体重
量は５２．５ｇ／ｌでありこの中に含有されるポリ（３
−ヒドロキシ酪酸）の含有量は７５％であった。
量％ショ糖１８０ｇを５時間で注入した。その後温度を
３０℃とし、３０時間培養した。この間ｐＨは一定して
低下の方向にあり、１０％水酸化ナトリウム水溶液にて
ｐＨを６．５−７．５に保った。培養終了後乾燥菌体重
量は５２．５ｇ／ｌでありこの中に含有されるポリ（３
−ヒドロキシ酪酸）の含有量は７５％であった。
【００２６】培養液を１１５℃で１５分間滅菌した後上
澄みをデカンテーションで除いた。湿菌体に１ｌの蒸留
水を加え、ここに卵白リゾチームを小スパーテル１杯加
え、ｐＨ６．５、２５℃で５時間処理し遠心分離により
菌体を集めた。湿菌体を５００ｍｌの水に再懸濁して次
亜塩素酸ソーダの１２％水溶液を２５ｍｌ加え１５時間
処理した。処理液よりポリ（３−ヒドロキシ酪酸）を遠
心分離により集めた。これを水洗、乾燥し５５．１ｇの
黄白色のポリ（３−ヒドロキシ酪酸）を得た。
澄みをデカンテーションで除いた。湿菌体に１ｌの蒸留
水を加え、ここに卵白リゾチームを小スパーテル１杯加
え、ｐＨ６．５、２５℃で５時間処理し遠心分離により
菌体を集めた。湿菌体を５００ｍｌの水に再懸濁して次
亜塩素酸ソーダの１２％水溶液を２５ｍｌ加え１５時間
処理した。処理液よりポリ（３−ヒドロキシ酪酸）を遠
心分離により集めた。これを水洗、乾燥し５５．１ｇの
黄白色のポリ（３−ヒドロキシ酪酸）を得た。
【００２７】実施例８ 実施例４においてショ糖４％を含む好気的水性培地にＮ
ＫＦ０３１菌を植菌し、培養２４時間後に更に４％ショ
糖を追加し、合計４日間の培養を行った。実施例４と全
く同様の処理をし乾燥菌体重量、ＰＨＢ含有量を測定し
た。その結果乾燥菌体重量は１６ｇ／ｌ、乾燥菌体重量
当りのＰＨＢ含有量は６５％であった。
ＫＦ０３１菌を植菌し、培養２４時間後に更に４％ショ
糖を追加し、合計４日間の培養を行った。実施例４と全
く同様の処理をし乾燥菌体重量、ＰＨＢ含有量を測定し
た。その結果乾燥菌体重量は１６ｇ／ｌ、乾燥菌体重量
当りのＰＨＢ含有量は６５％であった。
【００２８】ＮＫＦ１０９菌（微工研寄託番号 ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１３４２６号）を用いて実施例１と同様の３０
℃４日間静置培養を行った。ＮＫＦ１０９菌の生育状況
は表５に示すようにコロニーを形成した。従ってＮＫＦ
１０９菌はグリコール酸を唯一の炭素源として生育する
ことが出来る。
Ｍ Ｐ−１３４２６号）を用いて実施例１と同様の３０
℃４日間静置培養を行った。ＮＫＦ１０９菌の生育状況
は表５に示すようにコロニーを形成した。従ってＮＫＦ
１０９菌はグリコール酸を唯一の炭素源として生育する
ことが出来る。
【００２９】
【表４】
【００３０】実施例９ 実施例３と同様対数増殖期の菌体増殖量についての試験
をＮＫＦ１０９菌を用いて行った。その結果ＮＫＦ１０
９菌は培養１日後の乾燥菌体重量が３ｇ／ｌ、２日目の
乾燥菌体重量が７ｇ／ｌであり対数増殖期にあたる培養
１日目、及び２日目にはそれぞれ１日当り２ｇ／ｌ以上
の増殖を行った。以上の結果を以下表５にまとめた。
をＮＫＦ１０９菌を用いて行った。その結果ＮＫＦ１０
９菌は培養１日後の乾燥菌体重量が３ｇ／ｌ、２日目の
乾燥菌体重量が７ｇ／ｌであり対数増殖期にあたる培養
１日目、及び２日目にはそれぞれ１日当り２ｇ／ｌ以上
の増殖を行った。以上の結果を以下表５にまとめた。
【００３１】
【表５】
【００３２】実施例１０ 実施例３と同様培養２日目に水酸化ナトリウム１０％溶
液でｐＨ７．０に調整したプロピオン酸を０．５％とな
るよう追加しさらに２日間合計四日間の培養を行い乾燥
菌体重量、ＰＨＢ含量、ＰＨＢ誘導体含量を測定した。
その結果ＮＫＦ１０９菌はの場合乾燥菌体重量６．３ｇ
／ｌ、３−ヒドロキシ酪酸単位の含量が９７．９モル
％、３−ヒドロキシ吉草酸単位が２．１モル％よりなる
共重合ポリエステル２７．５重量％を含有することが判
った。
液でｐＨ７．０に調整したプロピオン酸を０．５％とな
るよう追加しさらに２日間合計四日間の培養を行い乾燥
菌体重量、ＰＨＢ含量、ＰＨＢ誘導体含量を測定した。
その結果ＮＫＦ１０９菌はの場合乾燥菌体重量６．３ｇ
／ｌ、３−ヒドロキシ酪酸単位の含量が９７．９モル
％、３−ヒドロキシ吉草酸単位が２．１モル％よりなる
共重合ポリエステル２７．５重量％を含有することが判
った。
【００３３】実施例１１ 実施例７と同様の組成の培地を作成し容量３ｌのジャー
ファーメンターに仕込み１１５℃にて１５分間オートク
レーブ殺菌した。ここにバチルス属細菌ＮＫＦ１０９菌
を接種し、３０℃で通気培養を行った。通気量は１．５
ｌ／分とした。９時間後より以下の組成のフィード液を
連続的に注入した。尚、フィード液は１１５℃で１５分
間オートクレーブ中で滅菌したものを用いた。 フィード液の組成 ショ糖 １００ｇ （ＮＨ4 ）2 ＳＯ4 １６ｇ ＊微量元素溶液 ４ｍｌ 蒸留水 ２００ｍｌ 尚、微量元素溶液組成は実施例７と同様の組成で行っ
た。
ファーメンターに仕込み１１５℃にて１５分間オートク
レーブ殺菌した。ここにバチルス属細菌ＮＫＦ１０９菌
を接種し、３０℃で通気培養を行った。通気量は１．５
ｌ／分とした。９時間後より以下の組成のフィード液を
連続的に注入した。尚、フィード液は１１５℃で１５分
間オートクレーブ中で滅菌したものを用いた。 フィード液の組成 ショ糖 １００ｇ （ＮＨ4 ）2 ＳＯ4 １６ｇ ＊微量元素溶液 ４ｍｌ 蒸留水 ２００ｍｌ 尚、微量元素溶液組成は実施例７と同様の組成で行っ
た。
【００３４】１０時間でフィード液を１４０ｍｌ注入し
た時点でフィード液に更にショ糖８０重量％液１００ｍ
ｌを加え、このフィード液を１８時間で注入した。その
後１１時間培養を継続した。この間１０％水酸化ナトリ
ウム水溶液または市販の塩酸溶液を蒸留水で１０倍希釈
した塩酸水溶液でｐＨを６．５−７．５に調整した。培
養終了後乾燥菌体重量は４８ｇ／ｌであり、乾燥菌体中
のポリ（３−ヒドロキシ酪酸）含有率は５５％であっ
た。
た時点でフィード液に更にショ糖８０重量％液１００ｍ
ｌを加え、このフィード液を１８時間で注入した。その
後１１時間培養を継続した。この間１０％水酸化ナトリ
ウム水溶液または市販の塩酸溶液を蒸留水で１０倍希釈
した塩酸水溶液でｐＨを６．５−７．５に調整した。培
養終了後乾燥菌体重量は４８ｇ／ｌであり、乾燥菌体中
のポリ（３−ヒドロキシ酪酸）含有率は５５％であっ
た。
【００３５】比較例１ ＮＫＦ２００菌と近縁と推定されるバチルス・リヘニホ
ルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉ
ｓ）種ＩＦＯ１２２００菌について実施例１と同様にグ
リコール酸資化性を、実施例３と同様にショ糖を唯一の
炭素源として含む好気的水性培地を用いて乾燥菌体重量
及び乾燥菌体重量当りのＰＨＢ含有量を測定した。その
結果バチルス・リヘニホルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆ
ｏｒｍｉｓ）種ＩＦＯ１２２００菌はグリコール酸を唯
一の炭素源とする寒天培地上でＮＫＦ２００菌と同様コ
ロニーを形成した。しかし乾燥菌体重量は４日間の培養
で４ｇ／ｌのみであり、対数増殖期においても１日当り
２ｇ／ｌを下まわった。また乾燥菌体重量当りのＰＨＢ
含有量はごくわずかであった。またチェン等は同種のバ
チルス・リヘニホルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍ
ｉｓ）種ＤＳＭ３９４菌をグルコース栄養培地で培養し
たことを報告しているがこの場合乾燥菌体重量当りのＰ
ＨＢ含有量は２１．４％にとどまっている（チェン等、
ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒ
ｓ，８４巻、１９９１年）。以上の事より本願発明の条
件を満足しない細菌はたとえ同種または近縁の菌株とい
えどもＰＨＢ及びその誘導体の工業的製造には適さない
ことが判った。
ルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉ
ｓ）種ＩＦＯ１２２００菌について実施例１と同様にグ
リコール酸資化性を、実施例３と同様にショ糖を唯一の
炭素源として含む好気的水性培地を用いて乾燥菌体重量
及び乾燥菌体重量当りのＰＨＢ含有量を測定した。その
結果バチルス・リヘニホルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆ
ｏｒｍｉｓ）種ＩＦＯ１２２００菌はグリコール酸を唯
一の炭素源とする寒天培地上でＮＫＦ２００菌と同様コ
ロニーを形成した。しかし乾燥菌体重量は４日間の培養
で４ｇ／ｌのみであり、対数増殖期においても１日当り
２ｇ／ｌを下まわった。また乾燥菌体重量当りのＰＨＢ
含有量はごくわずかであった。またチェン等は同種のバ
チルス・リヘニホルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍ
ｉｓ）種ＤＳＭ３９４菌をグルコース栄養培地で培養し
たことを報告しているがこの場合乾燥菌体重量当りのＰ
ＨＢ含有量は２１．４％にとどまっている（チェン等、
ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒ
ｓ，８４巻、１９９１年）。以上の事より本願発明の条
件を満足しない細菌はたとえ同種または近縁の菌株とい
えどもＰＨＢ及びその誘導体の工業的製造には適さない
ことが判った。
【００３６】比較例２ ＮＫＦ１０９菌に近縁と推定されるバチルス・メガテリ
ウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）種Ａ
ＴＣＣ６９菌について実施例９と同様にグリコール酸資
化性を、実施例１０と同様にショ糖を唯一の炭素源とし
て含む好気的水性培地を用いて乾燥菌体重量及び乾燥菌
体重量当りのＰＨＢ含有量を測定した。その結果バチル
ス・メガテリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）種ＡＴ
ＣＣ６９種はグリコール酸を唯一の炭素源とする寒天培
地上でＮＫＦ１０９菌と同様コロニーを形成した。しか
しショ糖を唯一の炭素源として含む好気的水性培地では
ごくわずかに増殖したにとどまり、ＰＨＢ含有量もわず
かであった。以上の事よりＮＫＦ１０９菌に近縁と推定
される菌株においてもＰＨＢ及びその誘導体の工業的製
造には適さないことが判った。
ウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）種Ａ
ＴＣＣ６９菌について実施例９と同様にグリコール酸資
化性を、実施例１０と同様にショ糖を唯一の炭素源とし
て含む好気的水性培地を用いて乾燥菌体重量及び乾燥菌
体重量当りのＰＨＢ含有量を測定した。その結果バチル
ス・メガテリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）種ＡＴ
ＣＣ６９種はグリコール酸を唯一の炭素源とする寒天培
地上でＮＫＦ１０９菌と同様コロニーを形成した。しか
しショ糖を唯一の炭素源として含む好気的水性培地では
ごくわずかに増殖したにとどまり、ＰＨＢ含有量もわず
かであった。以上の事よりＮＫＦ１０９菌に近縁と推定
される菌株においてもＰＨＢ及びその誘導体の工業的製
造には適さないことが判った。
【００３７】
【発明の効果】本発明の条件を満足する細菌を用いる場
合、その細菌の分類学上の属、種によらず短時間の好気
的水性培地でＰＨＢ及びその誘導体を容易に製造するこ
とが出来る。
合、その細菌の分類学上の属、種によらず短時間の好気
的水性培地でＰＨＢ及びその誘導体を容易に製造するこ
とが出来る。
Claims (2)
- 【請求項１】（ａ）グリコール酸を唯一の炭素源として
生育することができ、かつ（ｂ）ショ糖を炭素源、無機
態窒素、無機態リンを含有する好気的水性培地を用いた
回分式培養法に於て細菌の対数増殖期における生育速度
が乾燥菌体重量として１日当り２ｇ／ｌ以上であるとい
う２種の性質を有するポリ（３−ヒドロキシ酪酸）生産
菌を、炭水化物を炭素源として含む好気的水性培地で培
養し、ポリ（３−ヒドロキシ酪酸）またはその誘導体を
効率よく製造する方法。 - 【請求項２】請求項１に記載の細菌がバチルス属（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ）、シュウドモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ）の細菌である特許請求項１に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5065978A JPH0638775A (ja) | 1992-05-25 | 1993-03-03 | 発酵法によるポリ（３−ヒドロキシ酪酸）及びその誘導体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15614392 | 1992-05-25 | ||
| JP4-156143 | 1992-05-25 | ||
| JP5065978A JPH0638775A (ja) | 1992-05-25 | 1993-03-03 | 発酵法によるポリ（３−ヒドロキシ酪酸）及びその誘導体の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0638775A true JPH0638775A (ja) | 1994-02-15 |
Family
ID=26407141
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5065978A Pending JPH0638775A (ja) | 1992-05-25 | 1993-03-03 | 発酵法によるポリ（３−ヒドロキシ酪酸）及びその誘導体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0638775A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002510747A (ja) * | 1998-04-08 | 2002-04-09 | メタボリックス，インコーポレイテッド | バイオポリマーの分離および精製のための方法 |
| WO2013015212A1 (ja) | 2011-07-22 | 2013-01-31 | 東レ株式会社 | 有機酸の製造方法 |
-
1993
- 1993-03-03 JP JP5065978A patent/JPH0638775A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002510747A (ja) * | 1998-04-08 | 2002-04-09 | メタボリックス，インコーポレイテッド | バイオポリマーの分離および精製のための方法 |
| WO2013015212A1 (ja) | 2011-07-22 | 2013-01-31 | 東レ株式会社 | 有機酸の製造方法 |
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