JPH0641423B2 - 細胞毒性薬剤組成物及び細胞毒性薬剤キット - Google Patents
細胞毒性薬剤組成物及び細胞毒性薬剤キットInfo
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- JPH0641423B2 JPH0641423B2 JP59175800A JP17580084A JPH0641423B2 JP H0641423 B2 JPH0641423 B2 JP H0641423B2 JP 59175800 A JP59175800 A JP 59175800A JP 17580084 A JP17580084 A JP 17580084A JP H0641423 B2 JPH0641423 B2 JP H0641423B2
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- cytotoxic
- drug composition
- conjugate
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
- A61K47/6817—Toxins
- A61K47/6819—Plant toxins
- A61K47/6825—Ribosomal inhibitory proteins, i.e. RIP-I or RIP-II, e.g. Pap, gelonin or dianthin
- A61K47/6827—Ricin A
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Description
【発明の詳細な説明】 1978年９月28日、及び1978年10月３日にフランス国にそ
れぞれ第78/27838号及び第79/24655号として出願した明
細書（それぞれ、公開公報FR-A-2 437 213及びFR-A-2 4
66 252参照）に、リシンのＡ鎖と、ガン細胞のような表
面に抗原を有する標的細胞を選択的に認識することがで
きる抗体、免疫グロブリン、又は免疫グロブリン断片の
ようなタンパク構造とを共有結合により結合することに
よって得られる結合体又は免疫毒と呼ばれる抗ガン物質
の製法を記載した。これらの結合体の主な性質は、意図
する標的細胞に対する特異的な細胞毒として働くことで
ある。
れぞれ第78/27838号及び第79/24655号として出願した明
細書（それぞれ、公開公報FR-A-2 437 213及びFR-A-2 4
66 252参照）に、リシンのＡ鎖と、ガン細胞のような表
面に抗原を有する標的細胞を選択的に認識することがで
きる抗体、免疫グロブリン、又は免疫グロブリン断片の
ようなタンパク構造とを共有結合により結合することに
よって得られる結合体又は免疫毒と呼ばれる抗ガン物質
の製法を記載した。これらの結合体の主な性質は、意図
する標的細胞に対する特異的な細胞毒として働くことで
ある。
ハプテン、分化抗原（differentiationantigen）、又は
ガン細胞に伴なわれる抗原に対する抗体を用いることに
より、標的細胞に対して顕著な特異性を示し、同細胞に
対し強力な細胞毒性を有する結合体を製造することが、
本出願人の出願であるフランス国出願第81/07596号及び
81/21836号（それぞれ、FR-A-2 504 010及びFR-A-2 516
794参照）に記載してあるように、可能になった。
ガン細胞に伴なわれる抗原に対する抗体を用いることに
より、標的細胞に対して顕著な特異性を示し、同細胞に
対し強力な細胞毒性を有する結合体を製造することが、
本出願人の出願であるフランス国出願第81/07596号及び
81/21836号（それぞれ、FR-A-2 504 010及びFR-A-2 516
794参照）に記載してあるように、可能になった。
これらの性質を有する結合体は、常に、リシンのＡ鎖
が、意図する標的細胞に担持されている抗原を選択的に
認識し得る抗体、免疫グロブリン又は免疫グロブリン断
片とジスルフィド型の共有結合によって結合された、混
合人工分子である。
が、意図する標的細胞に担持されている抗原を選択的に
認識し得る抗体、免疫グロブリン又は免疫グロブリン断
片とジスルフィド型の共有結合によって結合された、混
合人工分子である。
これらの結合体が有する、結合体を構成する抗体によっ
て認識される抗原を担持する細胞に対する顕著な選択的
細胞毒性にもかかわらず、この群の物質では、破壊する
ことを意図する異なる型の腫瘍細胞上に存する標的とし
て機能し得る種々の抗原、又は同じ抗原の異なるエピト
ープに対する多数の抗体に対応する多数の異なる結合体
を製造し、それらの化学的、生物学的、医学的濃度を分
析し、それらを含む製剤を製造しなければならないこと
が明らかである。
て認識される抗原を担持する細胞に対する顕著な選択的
細胞毒性にもかかわらず、この群の物質では、破壊する
ことを意図する異なる型の腫瘍細胞上に存する標的とし
て機能し得る種々の抗原、又は同じ抗原の異なるエピト
ープに対する多数の抗体に対応する多数の異なる結合体
を製造し、それらの化学的、生物学的、医学的濃度を分
析し、それらを含む製剤を製造しなければならないこと
が明らかである。
選択的細胞毒性結合体の分野で研究を続けていくうち
に、出願人は、この困難は、この発明の対象である物質
及び方法によって解決できることに気づいた。
に、出願人は、この困難は、この発明の対象である物質
及び方法によって解決できることに気づいた。
この発明によると、標的細胞の選択的破壊を達成するた
めに与えられた特異的細胞毒性の機構は、その理論的局
面において、以下の２つの段階を有する。
めに与えられた特異的細胞毒性の機構は、その理論的局
面において、以下の２つの段階を有する。
(a)第１段階では、破壊すべき細胞を特徴ずけるものと
して選択された標的抗原を選択的に認識することができ
る。１又はそれ以上の抗体、免疫グロブリン又は免疫グ
ロブリン断片を用いる。
して選択された標的抗原を選択的に認識することができ
る。１又はそれ以上の抗体、免疫グロブリン又は免疫グ
ロブリン断片を用いる。
全ての場合、この第１段階では、上述した抗体、免疫グ
ロブリン又は免疫グロブリン断片が、精製された又はさ
れていない天然の状態で、細胞毒性を有する物質と結合
されることなく、破壊すべき細胞に選択的に結合し得る
条件下で用いられる。それによって次の段階においてそ
れらの細胞を同定可能にする。必要ならば、細胞に結合
していない過剰の抗体、あるいは少なくともその過剰の
大部分を、洗浄や、ろ過若しくは遠心のような他の適当
な操作又は細胞単離や濃縮のような他の操作によって除
去することができる。
ロブリン又は免疫グロブリン断片が、精製された又はさ
れていない天然の状態で、細胞毒性を有する物質と結合
されることなく、破壊すべき細胞に選択的に結合し得る
条件下で用いられる。それによって次の段階においてそ
れらの細胞を同定可能にする。必要ならば、細胞に結合
していない過剰の抗体、あるいは少なくともその過剰の
大部分を、洗浄や、ろ過若しくは遠心のような他の適当
な操作又は細胞単離や濃縮のような他の操作によって除
去することができる。
(b)第２段階では、リシンのＡ鎖と、第１段階で用いた
第１の抗体、免疫グロブリン又は免疫グロブリン断片を
選択的に認識することができる第２の抗体、免疫グロブ
リン又は免疫グロブリン断片とを共有結合で結合するこ
とによって構成される結合体分子すなわち雑種分子を用
いる。この第２段階で用いる結合体は、この結合体をつ
くるのに用いられる抗体の選択的特異性が、標的細胞の
表面に存在する抗原、特に腫瘍状態の細胞に伴なわれる
抗原に対するものではなく、以下に述べる特異性に基づ
くものであることを除き、本出願人によって出願され、
本出願人に対して特許された特許に既に記載した結合体
と同じである。先の特許及び特許出願に本出願人によっ
て記載された全ての方法は、この発明によって与えられ
る機構の第２段階において結合体を製造する際に適用す
ることができる。
第１の抗体、免疫グロブリン又は免疫グロブリン断片を
選択的に認識することができる第２の抗体、免疫グロブ
リン又は免疫グロブリン断片とを共有結合で結合するこ
とによって構成される結合体分子すなわち雑種分子を用
いる。この第２段階で用いる結合体は、この結合体をつ
くるのに用いられる抗体の選択的特異性が、標的細胞の
表面に存在する抗原、特に腫瘍状態の細胞に伴なわれる
抗原に対するものではなく、以下に述べる特異性に基づ
くものであることを除き、本出願人によって出願され、
本出願人に対して特許された特許に既に記載した結合体
と同じである。先の特許及び特許出願に本出願人によっ
て記載された全ての方法は、この発明によって与えられ
る機構の第２段階において結合体を製造する際に適用す
ることができる。
以下の明細書の記載及びクレーム中での記載において、
「抗体」という語は、抗体、免疫グロブリン及び免疫グ
ロブリン断片を指すのに用いられる。
「抗体」という語は、抗体、免疫グロブリン及び免疫グ
ロブリン断片を指すのに用いられる。
特異的細胞毒性の発現を得るための用いられる、上述し
たような一般的な方法論は、理論的局面において２つの
段階を有し、これらに関与する機構の理解を容易にする
ためにこれらははっきりと区別されている。しかしなが
ら、実際には、この発明によると、この機構は以下のよ
うにして行なわれる。
たような一般的な方法論は、理論的局面において２つの
段階を有し、これらに関与する機構の理解を容易にする
ためにこれらははっきりと区別されている。しかしなが
ら、実際には、この発明によると、この機構は以下のよ
うにして行なわれる。
・上述したように、時間の経過に従って２段階で行なわ
れる ・標的細胞の存在下で、第１の抗体と細胞毒性結合体と
を１段階にて用いる ・第１の抗体と細胞毒性結合体との複合物を予め準備
し、もし必要ならば標的細胞の存在下に置く前に精製す
る。この方法の優れた点は、第１の抗体が過剰になるこ
とを避けることができ、従ってこの過剰分を排除する操
作が不要になり、また細胞毒性結合体が過剰になること
も避けられることである。
れる ・標的細胞の存在下で、第１の抗体と細胞毒性結合体と
を１段階にて用いる ・第１の抗体と細胞毒性結合体との複合物を予め準備
し、もし必要ならば標的細胞の存在下に置く前に精製す
る。この方法の優れた点は、第１の抗体が過剰になるこ
とを避けることができ、従ってこの過剰分を排除する操
作が不要になり、また細胞毒性結合体が過剰になること
も避けられることである。
後者の場合には、物質を適用する時間的順序が先に述べ
たものとは異なるけれども、明細書の以下の記載におい
ても、「第１の抗体」や「第１段階で用いられる抗体」
という表現を用い続ける。これらの特異性は標的細胞の
抗原を認識することに対応する。
たものとは異なるけれども、明細書の以下の記載におい
ても、「第１の抗体」や「第１段階で用いられる抗体」
という表現を用い続ける。これらの特異性は標的細胞の
抗原を認識することに対応する。
第２段階で用いられる細胞毒性結合体に用いられる抗体
の特異性を規定するのに選択される規範は、この発明に
よると、第１段階で用いられる抗体は常に、標的細胞の
動物種と異なる動物種の抗体であるという事実に関す
る。従って、その結果、細胞毒性結合体を構成する抗体
は、第１段階において用いられる抗体が属する動物種の
免疫グロブリンに対して特異的であるということが満た
され、その結果、細胞毒性結合体は第１段階において第
１の抗体が既に結合している細胞にのみ結合することに
なる。この種特異的規範は、細胞毒性結合体の抗体が多
クローン性の抗体である場合には十分である。これはま
た、細胞毒性結合体の抗体が、第１段階で用いられた抗
体が属する動物種の全ての免疫グロブリンを認識するこ
とができる多クローン性免疫グロブリンである場合にも
適用できる。あるいはまた、第１の抗体が属する免疫グ
ロブリンのクラス（すなわちＡ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｍ）を、
その動物種のそのクラスの免疫グロブリンのヘビーチェ
イン（例えば、アルファ、デルタ、イプシロン、ガン
マ、又はミュー鎖）に基づいて、又はその動物種の免疫
グロブリンを構成するライトチェイン（例えばカッパ又
はラムダ鎖）に基づいて選択的に認識することができ、
さらにその動物種における第１の抗体のサブクラス（イ
ソタイプ）を選択的に認識することができる単一クロー
ン免疫グロブリンを用いることもできる。
の特異性を規定するのに選択される規範は、この発明に
よると、第１段階で用いられる抗体は常に、標的細胞の
動物種と異なる動物種の抗体であるという事実に関す
る。従って、その結果、細胞毒性結合体を構成する抗体
は、第１段階において用いられる抗体が属する動物種の
免疫グロブリンに対して特異的であるということが満た
され、その結果、細胞毒性結合体は第１段階において第
１の抗体が既に結合している細胞にのみ結合することに
なる。この種特異的規範は、細胞毒性結合体の抗体が多
クローン性の抗体である場合には十分である。これはま
た、細胞毒性結合体の抗体が、第１段階で用いられた抗
体が属する動物種の全ての免疫グロブリンを認識するこ
とができる多クローン性免疫グロブリンである場合にも
適用できる。あるいはまた、第１の抗体が属する免疫グ
ロブリンのクラス（すなわちＡ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｍ）を、
その動物種のそのクラスの免疫グロブリンのヘビーチェ
イン（例えば、アルファ、デルタ、イプシロン、ガン
マ、又はミュー鎖）に基づいて、又はその動物種の免疫
グロブリンを構成するライトチェイン（例えばカッパ又
はラムダ鎖）に基づいて選択的に認識することができ、
さらにその動物種における第１の抗体のサブクラス（イ
ソタイプ）を選択的に認識することができる単一クロー
ン免疫グロブリンを用いることもできる。
従って、非限定的な例として、もし第１の抗体がガンマ
型のヘビーチェインとカッパ型ライトチェインを有す
る、クラスＧ、イソタイプ2aのマウスの免疫グロブリン
（マウスのIgG 2a）であって、ヒトを起源とする細胞に
適用される場合には、細胞毒性結合体の造成に用いられ
る抗体は、多クローン性抗体又は単一クローン抗体であ
ってマウスの免疫グロブリン全体に対して特異的なも
の、マウスの全IgG対して特異的なもの、マウス免疫グ
ロブリンのガンマ鎖に対して特異的なもの、マウス免疫
グロブリンのカッパ鎖に対して特異的なもの、又はマウ
スのIgG 2aに対して特異的なもののいずれをも用いるこ
とができる。これらは、この目的のために適当な、いず
れの種の抗体産生細胞をによっても生産することができ
る。
型のヘビーチェインとカッパ型ライトチェインを有す
る、クラスＧ、イソタイプ2aのマウスの免疫グロブリン
（マウスのIgG 2a）であって、ヒトを起源とする細胞に
適用される場合には、細胞毒性結合体の造成に用いられ
る抗体は、多クローン性抗体又は単一クローン抗体であ
ってマウスの免疫グロブリン全体に対して特異的なも
の、マウスの全IgG対して特異的なもの、マウス免疫グ
ロブリンのガンマ鎖に対して特異的なもの、マウス免疫
グロブリンのカッパ鎖に対して特異的なもの、又はマウ
スのIgG 2aに対して特異的なもののいずれをも用いるこ
とができる。これらは、この目的のために適当な、いず
れの種の抗体産生細胞をによっても生産することができ
る。
同様な議論が、用いられる第１の抗体のどのような種、
クラス、及びイソタイプに対しても適用することができ
る。
クラス、及びイソタイプに対しても適用することができ
る。
この発明によると、第１段階で用いられる抗体や第２段
階で用いられる細胞毒性結合体の造成に用いられる抗体
はともに以下のものであることができる。
階で用いられる細胞毒性結合体の造成に用いられる抗体
はともに以下のものであることができる。
・選択された標的抗原を有する免疫源を用いて常法によ
り予め免疫化された動物の血液から得られる多クローン
性抗体 ・選択された抗原で免疫化された動物の碵蔵細胞とミエ
ローマ細胞との融合によって得られた、雑種細胞、特に
ハイブリドーマによって産生される単一クローン抗体。
この融合は当業者に広く知られた方法によって行なうこ
とができる。この場合、免疫化工程は、免疫化すべき動
物に免疫源をインヴィボで投与することによって、ある
いは碵蔵細胞を免疫源と直接接触させることによって
（アール・エイ・ルーベン、エム・エイ・モーレップ、
ジー・イー・ネドウィン、Clim.Invest.,64(7)(1979)参
照）行なうことができる。さらに、所望の抗体は雑種細
胞の培養上清から、又は雑種細胞を接種された動物の血
液または腹水から得られ、これを精製、単離することが
できる。
り予め免疫化された動物の血液から得られる多クローン
性抗体 ・選択された抗原で免疫化された動物の碵蔵細胞とミエ
ローマ細胞との融合によって得られた、雑種細胞、特に
ハイブリドーマによって産生される単一クローン抗体。
この融合は当業者に広く知られた方法によって行なうこ
とができる。この場合、免疫化工程は、免疫化すべき動
物に免疫源をインヴィボで投与することによって、ある
いは碵蔵細胞を免疫源と直接接触させることによって
（アール・エイ・ルーベン、エム・エイ・モーレップ、
ジー・イー・ネドウィン、Clim.Invest.,64(7)(1979)参
照）行なうことができる。さらに、所望の抗体は雑種細
胞の培養上清から、又は雑種細胞を接種された動物の血
液または腹水から得られ、これを精製、単離することが
できる。
理論的に２つの段階を有するこのような系では、系の全
体的な選択性は、選択された標的抗原を担持する細胞の
みを同定する、第１段階で用いられる抗体によって達成
される。細胞毒的効果は第２段階で用いられる結合体に
よってもたらされる。第２段階で用いられる細胞毒性結
合体の造成に用いられる抗体の選択のための上述した規
範により、この細胞毒的効果は、第１の抗体を結合した
細胞にのみ発揮される。
体的な選択性は、選択された標的抗原を担持する細胞の
みを同定する、第１段階で用いられる抗体によって達成
される。細胞毒的効果は第２段階で用いられる結合体に
よってもたらされる。第２段階で用いられる細胞毒性結
合体の造成に用いられる抗体の選択のための上述した規
範により、この細胞毒的効果は、第１の抗体を結合した
細胞にのみ発揮される。
短く言えば、この系の一般的な操作は、細胞学者によく
知られた間接免疫蛍光法に類似している。これと異なる
点は、この発明では、第２の抗体は第１の抗体によって
同定される細胞を殺すことができる強力な細胞毒として
リシンのＡ鎖を担持しているのに対し、間接免疫蛍光法
では、第２の抗体は、第１の抗体によって同定される細
胞を示す働きをする蛍光物質のみを担持している点であ
る。
知られた間接免疫蛍光法に類似している。これと異なる
点は、この発明では、第２の抗体は第１の抗体によって
同定される細胞を殺すことができる強力な細胞毒として
リシンのＡ鎖を担持しているのに対し、間接免疫蛍光法
では、第２の抗体は、第１の抗体によって同定される細
胞を示す働きをする蛍光物質のみを担持している点であ
る。
この系の第１の利点は、現実的に無限に存在する、殺す
べき細胞の極めて広範囲にわたる膜抗原に対する、広範
囲にわたる種、クラス及びイソタイプの種々の組合せの
非修飾抗体に対し、１つ又は多くても少数の結合体を準
備しておけば十分であることである。このため、リシン
のＡ鎖と抗体とを結合することによって得られる細胞毒
性結合体の適用分野がかなり広がる。
べき細胞の極めて広範囲にわたる膜抗原に対する、広範
囲にわたる種、クラス及びイソタイプの種々の組合せの
非修飾抗体に対し、１つ又は多くても少数の結合体を準
備しておけば十分であることである。このため、リシン
のＡ鎖と抗体とを結合することによって得られる細胞毒
性結合体の適用分野がかなり広がる。
これらの２段階系の第２の利点は、１段階からなる上述
した系と全く同様な、そしてときどきこれを上回りさえ
する、選択的な細胞毒性をこの系が示すことである。こ
の行動の類似性は、所定の細胞毒的効果（例えば、標的
細胞集団の50%を殺す）を達成するのに必要な細胞毒性
結合体の濃度、及び細胞毒性の動的濃度、すなわち、標
的細胞集団の所定の割合を破壊するのに必要な時間によ
って確認されている。
した系と全く同様な、そしてときどきこれを上回りさえ
する、選択的な細胞毒性をこの系が示すことである。こ
の行動の類似性は、所定の細胞毒的効果（例えば、標的
細胞集団の50%を殺す）を達成するのに必要な細胞毒性
結合体の濃度、及び細胞毒性の動的濃度、すなわち、標
的細胞集団の所定の割合を破壊するのに必要な時間によ
って確認されている。
この２段階系の第３の利点は、この系は、上述した１段
階からなる系におけるのと全く同様な物質によって達成
可能なことである。その結果、本出願人によって既にフ
ランス国に出願された、特許出願第82/02091，82/0411
9，82/04047及び82/04547（それぞれ、FR-A-2 521 010,
FR-A-2 536 997,FR-A-2 522 968及びFR-A-2 523 445参
照）に記載既にクレームされている免疫毒の全てを、そ
の免疫毒に関して既に明らかに示された細胞毒的効果、
動的性質、細胞毒性及び特異性を保有したままこの発明
の２段階系において用いることができる。
階からなる系におけるのと全く同様な物質によって達成
可能なことである。その結果、本出願人によって既にフ
ランス国に出願された、特許出願第82/02091，82/0411
9，82/04047及び82/04547（それぞれ、FR-A-2 521 010,
FR-A-2 536 997,FR-A-2 522 968及びFR-A-2 523 445参
照）に記載既にクレームされている免疫毒の全てを、そ
の免疫毒に関して既に明らかに示された細胞毒的効果、
動的性質、細胞毒性及び特異性を保有したままこの発明
の２段階系において用いることができる。
この２段階系の第４の利点は、第２段階において１又は
少数の細胞毒性結合体のみを用い、第１段階において同
じ標的細胞上に数種類の非修飾抗体を蓄積し同時に結合
することが可能であることである。これにより、以下の
実施例で示されるように、細胞毒的効果が実質的に増加
する。この性質は腫瘍細胞が、十分に高い細胞毒的効果
を発揮し得る、細胞膜上で別個に利用できる標的抗原を
示さないときに特に貴重である。１段階系では、この困
難さは、それぞれの標的細胞にそれぞれ対応した抗体を
用いて造成した数種類の細胞毒性結合体を同時に用いる
ことによってのみ克服することができる。しかしなが
ら、そうすると、媒体中での細胞毒物質の全濃度が増加
し、非標的細胞に対する副作用が無視できない濃度に達
することが予想される。一方、２段階系では、第１段階
において、それぞれが１つの標的抗原に対応する数種類
の非修飾抗体を同時に又は順番に用いることが可能であ
り、これらの抗原のそれぞれに抗体を結合することが可
能になる。非修飾抗体の非特異的毒性は実際上全く問題
にならず、また、いずれにせよ、過剰の抗体は容易に排
除することができるので、この段階における非標的細胞
に対する危険性は無視することができる。続く第２段階
では、第１段階で何種類の抗体が用いられたかにかかわ
らず、ある濃度の単一の細胞毒性結合体を用いることが
できる。その結果、非特異的毒性の危険性は第２段階に
おいて増加しない。
少数の細胞毒性結合体のみを用い、第１段階において同
じ標的細胞上に数種類の非修飾抗体を蓄積し同時に結合
することが可能であることである。これにより、以下の
実施例で示されるように、細胞毒的効果が実質的に増加
する。この性質は腫瘍細胞が、十分に高い細胞毒的効果
を発揮し得る、細胞膜上で別個に利用できる標的抗原を
示さないときに特に貴重である。１段階系では、この困
難さは、それぞれの標的細胞にそれぞれ対応した抗体を
用いて造成した数種類の細胞毒性結合体を同時に用いる
ことによってのみ克服することができる。しかしなが
ら、そうすると、媒体中での細胞毒物質の全濃度が増加
し、非標的細胞に対する副作用が無視できない濃度に達
することが予想される。一方、２段階系では、第１段階
において、それぞれが１つの標的抗原に対応する数種類
の非修飾抗体を同時に又は順番に用いることが可能であ
り、これらの抗原のそれぞれに抗体を結合することが可
能になる。非修飾抗体の非特異的毒性は実際上全く問題
にならず、また、いずれにせよ、過剰の抗体は容易に排
除することができるので、この段階における非標的細胞
に対する危険性は無視することができる。続く第２段階
では、第１段階で何種類の抗体が用いられたかにかかわ
らず、ある濃度の単一の細胞毒性結合体を用いることが
できる。その結果、非特異的毒性の危険性は第２段階に
おいて増加しない。
さらに、標的細胞によって担持される数種の異なる抗原
を、非標的細胞に対する非特異的毒性を増加することな
く２段階系において利用できる可能性に付随するさらな
る利点は、標的細胞に対する細胞毒性の特異性を高める
ことができることである。実際、選択された抗原が厳密
には標的細胞にのみ特異的なものでなく、非標的細胞に
よっても個々に発現され得るものである場合であって
も、もし適当に選択すると、それらの多数の抗原が同時
に非標的細胞上に存する確率は極めて低く、このため、
細胞毒系の選択性を増加する強力な手段を与える。
を、非標的細胞に対する非特異的毒性を増加することな
く２段階系において利用できる可能性に付随するさらな
る利点は、標的細胞に対する細胞毒性の特異性を高める
ことができることである。実際、選択された抗原が厳密
には標的細胞にのみ特異的なものでなく、非標的細胞に
よっても個々に発現され得るものである場合であって
も、もし適当に選択すると、それらの多数の抗原が同時
に非標的細胞上に存する確率は極めて低く、このため、
細胞毒系の選択性を増加する強力な手段を与える。
最後に、実際には、２段階系が、２つの段階を時間的に
分離して行ない、また、過剰の第１の抗体を排除する工
程を有する場合には、第１の抗体が未精製の抗体である
ことができるという事実によって、さらなる利点がもた
らされる。実際、過剰の抗体を排除する操作はまた、製
剤中に存在する、不純物を構成する全ての他の物質をも
排除する。従って、例えば、分画されているか否かにか
かわらず、免疫化動物からの血清、ハイブリドーマ培養
物の上清、ハイブリドーマ細胞を接種された動物の腹水
を予め精製することなく直接用いることができる。
分離して行ない、また、過剰の第１の抗体を排除する工
程を有する場合には、第１の抗体が未精製の抗体である
ことができるという事実によって、さらなる利点がもた
らされる。実際、過剰の抗体を排除する操作はまた、製
剤中に存在する、不純物を構成する全ての他の物質をも
排除する。従って、例えば、分画されているか否かにか
かわらず、免疫化動物からの血清、ハイブリドーマ培養
物の上清、ハイブリドーマ細胞を接種された動物の腹水
を予め精製することなく直接用いることができる。
この発明の２段階細胞毒系は、選択的細胞毒性結合体す
なわち免疫毒が既に用いられ、１段階にて行なわれてい
る全ての状況下において用いることができる。さらに、
これらの２段階系は、出願人が先に記載したいずれの系
又は物質とともに、これらの状況のそれぞれにおいて、
組合せて用いることができる。このような系を用いるこ
とが特に適当である状況は以下の通りである。
なわち免疫毒が既に用いられ、１段階にて行なわれてい
る全ての状況下において用いることができる。さらに、
これらの２段階系は、出願人が先に記載したいずれの系
又は物質とともに、これらの状況のそれぞれにおいて、
組合せて用いることができる。このような系を用いるこ
とが特に適当である状況は以下の通りである。
(a)保存すべき他の細胞の存在下において特定の細胞集
団を生体外にて特異的に殺すのに有効な選択的細胞毒系
又は選択的細胞毒剤として用いるとき。実験室における
研究のための多くの用途に加え、治療分野においてもこ
のような状況に出くわす。特に、このような選択的細胞
毒系が、ガン患者、特に白血病患者の骨髄を腫瘍細胞集
団を減少又は根絶するために治療し、治療した骨髄を引
き続き再移植する場合（いわゆる骨髄自家移植プロトコ
ール）などに用いることができる。
団を生体外にて特異的に殺すのに有効な選択的細胞毒系
又は選択的細胞毒剤として用いるとき。実験室における
研究のための多くの用途に加え、治療分野においてもこ
のような状況に出くわす。特に、このような選択的細胞
毒系が、ガン患者、特に白血病患者の骨髄を腫瘍細胞集
団を減少又は根絶するために治療し、治療した骨髄を引
き続き再移植する場合（いわゆる骨髄自家移植プロトコ
ール）などに用いることができる。
同様な状況は骨髄他家移植プロトコールにおいても起き
る。この場合、選択的に殺すべき細胞は腫瘍細胞ではな
く、供与者の成熟Ｔリンパ球である。成熟Ｔリンパ球
は、供与者と受容者との組織適合性が不完全であって、
それらが除去されていない場合には、いわゆる「対宿主
移植病」を引き起こす。
る。この場合、選択的に殺すべき細胞は腫瘍細胞ではな
く、供与者の成熟Ｔリンパ球である。成熟Ｔリンパ球
は、供与者と受容者との組織適合性が不完全であって、
それらが除去されていない場合には、いわゆる「対宿主
移植病」を引き起こす。
(b)選択的細胞毒系すなわち選択的細胞毒剤は、不所望
の細胞、特に、一次腫瘍か転移腫瘍かによらず、腫瘍細
胞を排除するための治療剤として生体内で用いるのに有
用である。
の細胞、特に、一次腫瘍か転移腫瘍かによらず、腫瘍細
胞を排除するための治療剤として生体内で用いるのに有
用である。
実施例１ この実施例で用いた細胞モデルは、Ｔリンパ芽球白血病
を起源とするCEMヒトリンパ芽球の細胞ラインから成
り、このラインによって全て発現される３種類の異なる
標的抗原を用いている。標的抗原は以下のとおりであ
る。
を起源とするCEMヒトリンパ芽球の細胞ラインから成
り、このラインによって全て発現される３種類の異なる
標的抗原を用いている。標的抗原は以下のとおりであ
る。
・単一クローン抗体T 29-33によって認識される、ヒト
白血球に共通する抗原T-200（特にエイチ・バトフォラ
とアイ・タウブリッジ、Cancer,51,816-821(1983)参
照） ・単一クローン抗体T 101によって認識される、ヒトＴ
リンパ球に共通な抗原T-65（特にエス・ビー・ウォーム
スレイ、エム・エル・コリンズ及びアイ・ロイストン、
Blood,57,657-662(1981)参照） ・単一クローン抗体MAS-015b（シーララボラトリーズ社
によって市販）によって認識されるHLA系の抗原 上述した非修飾単一クローン抗体は、別々に又は一緒に
２段階の第１段階において用いられているものである。
白血球に共通する抗原T-200（特にエイチ・バトフォラ
とアイ・タウブリッジ、Cancer,51,816-821(1983)参
照） ・単一クローン抗体T 101によって認識される、ヒトＴ
リンパ球に共通な抗原T-65（特にエス・ビー・ウォーム
スレイ、エム・エル・コリンズ及びアイ・ロイストン、
Blood,57,657-662(1981)参照） ・単一クローン抗体MAS-015b（シーララボラトリーズ社
によって市販）によって認識されるHLA系の抗原 上述した非修飾単一クローン抗体は、別々に又は一緒に
２段階の第１段階において用いられているものである。
第２段階では、リシンのＡ鎖と、皮下注射及び筋肉内注
射によって純粋なマウスIgGで免疫化したヒツジから得
られた抗マウスIgG多クローン抗体を親和性クロマトグ
ラフィーによって精製したものとを、ジスルフィドブリ
ッジを用いて共有結合によって結合して得られた単一の
細胞毒性結合体を用いた。
射によって純粋なマウスIgGで免疫化したヒツジから得
られた抗マウスIgG多クローン抗体を親和性クロマトグ
ラフィーによって精製したものとを、ジスルフィドブリ
ッジを用いて共有結合によって結合して得られた単一の
細胞毒性結合体を用いた。
この細胞毒性結合体は、我々の先フランス出願第78-278
38及び追加第79-24655，並びに81-07596，81-21836に記
載したのと同様な方法によってつくった。すなわち、11
mlの精製抗マウスIgG免疫グロブリン、すなわち50mg抗
体を、t-ブタノール中に20mg/mlの（ピリジル-2ジスル
ファニル）-3プロピオン酸を含む溶液５体積と、60mg/m
lのエチル-1（ジエチルアミノ-3プロピル）-3カルボジ
イミドを含む水溶液１体積とを混合して得られる溶液0.
2mlに加えた。この混合物を30℃にて20時間インキュベ
ートし、合計で40リットルの0.125Mリン酸バッファー
（pH７）に対して４℃にて48時間連続的に透析した。遠
心すると、3.6mg/mlの修飾IgG溶液11.5mlが得られた。
修飾率は、１モルの免疫グロブリンあたり3.0個のジチ
オピリジル基が導入されたものであった。11mlのこの活
性抗体溶液を3.1mlのリシンのＡ鎖溶液（濃度8.9mg/m
l）と混合した。この混合物を26℃で20時間インキュベ
ートし、遠心し、直径2.6cm、高さ100cmのセファデック
スG100カラムでクロマトグラフィーにかけた。分子量15
万以上の分画を集め、１分子の免疫グロブリンあたり1.
5分子のリシンＡ鎖が結合された細胞毒性結合体（33m
g）を含む溶液を57ml得た。
38及び追加第79-24655，並びに81-07596，81-21836に記
載したのと同様な方法によってつくった。すなわち、11
mlの精製抗マウスIgG免疫グロブリン、すなわち50mg抗
体を、t-ブタノール中に20mg/mlの（ピリジル-2ジスル
ファニル）-3プロピオン酸を含む溶液５体積と、60mg/m
lのエチル-1（ジエチルアミノ-3プロピル）-3カルボジ
イミドを含む水溶液１体積とを混合して得られる溶液0.
2mlに加えた。この混合物を30℃にて20時間インキュベ
ートし、合計で40リットルの0.125Mリン酸バッファー
（pH７）に対して４℃にて48時間連続的に透析した。遠
心すると、3.6mg/mlの修飾IgG溶液11.5mlが得られた。
修飾率は、１モルの免疫グロブリンあたり3.0個のジチ
オピリジル基が導入されたものであった。11mlのこの活
性抗体溶液を3.1mlのリシンのＡ鎖溶液（濃度8.9mg/m
l）と混合した。この混合物を26℃で20時間インキュベ
ートし、遠心し、直径2.6cm、高さ100cmのセファデック
スG100カラムでクロマトグラフィーにかけた。分子量15
万以上の分画を集め、１分子の免疫グロブリンあたり1.
5分子のリシンＡ鎖が結合された細胞毒性結合体（33m
g）を含む溶液を57ml得た。
試験として、これらの実験において、先のフランス出願
81-21836の実施例１に記載されたものと同一である抗T
65特異性を有する細胞毒性結合体と、抗T 65結合体を製
造するのと同じ条件下において、抗体T29-33を用いて造
成した抗T 200特異性を有する細胞毒性結合体とを用い
た。
81-21836の実施例１に記載されたものと同一である抗T
65特異性を有する細胞毒性結合体と、抗T 65結合体を製
造するのと同じ条件下において、抗体T29-33を用いて造
成した抗T 200特異性を有する細胞毒性結合体とを用い
た。
Ａ２段階系の細胞毒的効果及び特異性 10%の仔ウシ胎児血清を含むRPMI 1640媒体（培養培地）
中に、５ｘ105細胞/mlの濃度で保持された６つの同じCE
M細胞バッチに以下のものを加えた。
中に、５ｘ105細胞/mlの濃度で保持された６つの同じCE
M細胞バッチに以下のものを加えた。
バッチ１ なし バッチ２ 終濃度30μｇ/mlの抗体T29-33（抗T200） バッチ３ 終濃度30μｇ/mlの抗体T101（抗T65） バッチ４ 終濃度30μｇ/mlの抗体MAS-015b （抗-HLA） バッチ５ なし バッチ６ なし それぞれを４℃にて２時間インキュベートした。培地を
用いて40℃にて３回洗った後、６つのバッチを終濃度10
mMの塩化アンモニウム（ポテンシエーターとして）の存
在下に置いた。抗マウスIgG細胞毒性結合体を最初の４
つのバッチに、リシンＡ鎖の終濃度が５ｘ10-8Ｍになる
ように加えた。
用いて40℃にて３回洗った後、６つのバッチを終濃度10
mMの塩化アンモニウム（ポテンシエーターとして）の存
在下に置いた。抗マウスIgG細胞毒性結合体を最初の４
つのバッチに、リシンＡ鎖の終濃度が５ｘ10-8Ｍになる
ように加えた。
同様に、バッチ５及び６に、抗T65細胞毒性結合体と抗T
200細胞毒性結合体とをそれぞれ、シリンＡ鎖の終濃度
が同じく５ｘ10-8Ｍになるように加えた。
200細胞毒性結合体とをそれぞれ、シリンＡ鎖の終濃度
が同じく５ｘ10-8Ｍになるように加えた。
この段階から、６つの細胞バッチを同じ37℃の条件下で
インキュベートした。細胞を細胞毒性結合体と接触させ
てから０ないし30時間の異なる時間間隔において、それ
ぞれの細胞バッチの１部を取って、その細胞毒性測定試
験に付した。この試験は、細胞が14Ｃ−ロイシンを取り
込む能力に基づいて測定することからなっており、その
方法はJ.of Biol.Chem.249,3557-3562(1974)に記載され
ている。取り込まれた放射能の測定は、ろ過によって分
離された全細胞について行なった。取り込まれた放射能
は、いずれの細胞毒剤も存在しないことを除き同じ条件
下で培養されている対照細胞における値の百分率に換算
した。得られた結果は、細胞毒性結合体と細胞とをイン
キュベートした時間の関数として、図に示すように、片
対数座標に示されている。図にはバッチ１、３、５につ
いての結果が表わされている。
インキュベートした。細胞を細胞毒性結合体と接触させ
てから０ないし30時間の異なる時間間隔において、それ
ぞれの細胞バッチの１部を取って、その細胞毒性測定試
験に付した。この試験は、細胞が14Ｃ−ロイシンを取り
込む能力に基づいて測定することからなっており、その
方法はJ.of Biol.Chem.249,3557-3562(1974)に記載され
ている。取り込まれた放射能の測定は、ろ過によって分
離された全細胞について行なった。取り込まれた放射能
は、いずれの細胞毒剤も存在しないことを除き同じ条件
下で培養されている対照細胞における値の百分率に換算
した。得られた結果は、細胞毒性結合体と細胞とをイン
キュベートした時間の関数として、図に示すように、片
対数座標に示されている。図にはバッチ１、３、５につ
いての結果が表わされている。
この図では、37℃におけるインキュベーション時間（時
間）がＸ軸に、細胞タンパク産生の百分率が対数目盛の
Ｙ軸にプロットされている。曲線Ａ、Ｂ、Ｃはそれぞれ
次のバッチに対応している。
間）がＸ軸に、細胞タンパク産生の百分率が対数目盛の
Ｙ軸にプロットされている。曲線Ａ、Ｂ、Ｃはそれぞれ
次のバッチに対応している。
曲線Ａ バッチ１、抗マウスIgG結合体のみ 曲線Ｂ バッチ３、抗T 65抗体＋抗IgG結合体のみ 曲線Ｃ バッチ５、抗T 65結合体のみ これらの結果に基づき、残留するトレーサーの取り込み
速度が対照細胞の最初の値の1/10になるのに要するイン
キュベーション時間を計算することができる。この時間
を記号T10として時間で表わしたものを第１表に示し
た。なお、これらのT10値は、取り込みの阻害が検出で
きない、最初の潜伏期間を補正したものである。
速度が対照細胞の最初の値の1/10になるのに要するイン
キュベーション時間を計算することができる。この時間
を記号T10として時間で表わしたものを第１表に示し
た。なお、これらのT10値は、取り込みの阻害が検出で
きない、最初の潜伏期間を補正したものである。
これらの結果から次の結論を導き出すことができる。
・第１段階で３つのうちのどの抗体を用いた場合でも
（バッチ２、３、４）、２段階系は非常に高い細胞毒性
を示している。なぜなら、どの場合でも３０時間後に
は、トレーサーの取り込み速度がもはや検出できなくな
るからである。
（バッチ２、３、４）、２段階系は非常に高い細胞毒性
を示している。なぜなら、どの場合でも３０時間後に
は、トレーサーの取り込み速度がもはや検出できなくな
るからである。
・この細胞毒効果は、第１段階で用いられる抗体に厳密
に依存している。なぜなら、これが存在しないと（バッ
チ１）、標的細胞を見出せなかった同じ抗マウス免疫グ
ロブリン細胞毒性結合体は、細胞毒性をもたらさないか
らである。
に依存している。なぜなら、これが存在しないと（バッ
チ１）、標的細胞を見出せなかった同じ抗マウス免疫グ
ロブリン細胞毒性結合体は、細胞毒性をもたらさないか
らである。
・得られた細胞毒性は、細胞毒性結合体のみを用いた場
合に得られる細胞毒性と比べられる場合にはいつでも、
第１段階で用いたのと同じ抗体を第２段階でも用いると
いう２段階系によっても、比較的類似した動的効果が観
察され、また、同じオーダーの細胞毒効果が観察され
る。もっとも、１つの場合（抗体T 65，バッチ３とバッ
チ５との比較）では、２段階系の方が細胞毒性結合体の
みを用いた場合よりもわずかに効果が小さいが、抗原T2
00（バッチ２とバッチ６との比較）の場合には２段階系
の方が細胞毒性結合体のみを用いる場合よりも効果的で
ある。
合に得られる細胞毒性と比べられる場合にはいつでも、
第１段階で用いたのと同じ抗体を第２段階でも用いると
いう２段階系によっても、比較的類似した動的効果が観
察され、また、同じオーダーの細胞毒効果が観察され
る。もっとも、１つの場合（抗体T 65，バッチ３とバッ
チ５との比較）では、２段階系の方が細胞毒性結合体の
みを用いた場合よりもわずかに効果が小さいが、抗原T2
00（バッチ２とバッチ６との比較）の場合には２段階系
の方が細胞毒性結合体のみを用いる場合よりも効果的で
ある。
Ｂ第１段階において数種類の抗体を用いることの価値 上述のセクションＡで述べたのと全く同じ条件下で、CE
M細胞の８つのバッチを用いた。第１表と同様な第２表
には、８つのバッチに対して適用された処理がまとめら
れている。２段階系の第１段階において、上述した３種
類の抗体が別々に又は２つづつ組合わされて（計３通り
の組合せが可能）、又は３つを全て一緒に用いた。全て
の場合、それぞれの抗体は単独であれ組合わされてであ
れ、終濃度30μｇ/mlの濃度で用い、細胞毒性結合体
は、第１工程において採用された抗体の数にはかかわり
なく、リシンＡ鎖で表して５ｘ10-8Ｍの濃度で用いた。
M細胞の８つのバッチを用いた。第１表と同様な第２表
には、８つのバッチに対して適用された処理がまとめら
れている。２段階系の第１段階において、上述した３種
類の抗体が別々に又は２つづつ組合わされて（計３通り
の組合せが可能）、又は３つを全て一緒に用いた。全て
の場合、それぞれの抗体は単独であれ組合わされてであ
れ、終濃度30μｇ/mlの濃度で用い、細胞毒性結合体
は、第１工程において採用された抗体の数にはかかわり
なく、リシンＡ鎖で表して５ｘ10-8Ｍの濃度で用いた。
T10（時間）で表わされた細胞毒性の結果は第２表に示
されており、これから次の結論を導き出すことができ
る。
されており、これから次の結論を導き出すことができ
る。
・上述の実験の繰り返しにあたるバッチ１，２，３，４
では第１表に示したのと完全に一致する結果が得られ
た。
では第１表に示したのと完全に一致する結果が得られ
た。
・第１段階で用いられる非修飾抗体がペアに組合わされ
て用いられた場合には、それぞれについて以下の細胞毒
性が観察された。
て用いられた場合には、それぞれについて以下の細胞毒
性が観察された。
・・バッチ５対バッチ２及び３： 6.5時間対15及び10時間 ・・バッチ６対バッチ３及び４： 6.0時間対10及び6.7時間 ・・バッチ７対バッチ２及び４ 5.3時間対15及び6.7時間 ・非修飾抗体を全て一緒に用いた場合には、最大の細胞
毒効果（T10＝５時間）が得られた。
毒効果（T10＝５時間）が得られた。
・これらの結果は、２又は３以上の膜抗原が同時に用い
られた場合には、用いる細胞毒性結合体の濃度を増加す
ることなく細胞毒性の動的効果を加速することができる
ことを明確に示している。この結果は、最短期間内に、
可能な限り低濃度の細胞毒性結合体を用いて、最高の細
胞毒効果をもたらすことが明らかに目指される全ての治
療用途にとって極めて重要である。
られた場合には、用いる細胞毒性結合体の濃度を増加す
ることなく細胞毒性の動的効果を加速することができる
ことを明確に示している。この結果は、最短期間内に、
可能な限り低濃度の細胞毒性結合体を用いて、最高の細
胞毒効果をもたらすことが明らかに目指される全ての治
療用途にとって極めて重要である。
上述した実施例の結果が明確に示しているように、この
発明の物質及び方法は、治療に用いられるとき、単独で
用いられた場合には有意の活性を示さないが、それぞれ
の活性成分を組み合わせて用いると治療的価値のある極
めて高い細胞毒活性を示す、活性成分の組み合わせを構
成している。
発明の物質及び方法は、治療に用いられるとき、単独で
用いられた場合には有意の活性を示さないが、それぞれ
の活性成分を組み合わせて用いると治療的価値のある極
めて高い細胞毒活性を示す、活性成分の組み合わせを構
成している。
必要とする治療の実際的操作に応じて、そして治療の詳
細な指示に依存して、この発明の物質は、次の２つの大
きなタイプの薬剤の形態として用いることができる。
細な指示に依存して、この発明の物質は、次の２つの大
きなタイプの薬剤の形態として用いることができる。
・第１のタイプの形態では、非修飾抗体は、個々の抗体
を別々に、または異なる抗体の混合物を含む注射液の形
態で提供される。個々のユニットボトルは好ましくは0.
5ないし20mgのそれぞれの抗体を水性の、好ましくはpH
が４ないし８に調整された等張の緩衝液中に含むもので
ある。この製剤は、直接静脈内投与することもできる
し、静脈内注射のための装置に入れることもできるし、
又は、特に骨髄試料のような、処理すべき生物試料を含
む容器に導入することもできる。
を別々に、または異なる抗体の混合物を含む注射液の形
態で提供される。個々のユニットボトルは好ましくは0.
5ないし20mgのそれぞれの抗体を水性の、好ましくはpH
が４ないし８に調整された等張の緩衝液中に含むもので
ある。この製剤は、直接静脈内投与することもできる
し、静脈内注射のための装置に入れることもできるし、
又は、特に骨髄試料のような、処理すべき生物試料を含
む容器に導入することもできる。
さらに、この形態では、細胞毒性結合体は、個々の細胞
毒性結合体を別々に、又は必要な細胞毒性結合体の混合
物を含む、注射液の形態で用いられる。それぞれのボト
ルは好ましくは、担体中に0.5ないし20mgの個々の細胞
毒性結合体を含み、上述したのと同様に製剤されてい
る。
毒性結合体を別々に、又は必要な細胞毒性結合体の混合
物を含む、注射液の形態で用いられる。それぞれのボト
ルは好ましくは、担体中に0.5ないし20mgの個々の細胞
毒性結合体を含み、上述したのと同様に製剤されてい
る。
この第１のタイプの形態は、治療者が、用いる非修飾抗
体及び細胞毒性結合体を、意図する用途のための理想的
な時間的順序で完全に自由に用いることができるので、
操作の柔軟性が最も大きなものである。
体及び細胞毒性結合体を、意図する用途のための理想的
な時間的順序で完全に自由に用いることができるので、
操作の柔軟性が最も大きなものである。
第２のタイプの形態では、用いられる物質は、非修飾抗
体と細胞毒性結合体とを予め複合させた可溶性の複合物
を含む注射液である。この形態では、複合物の形成を確
保する構成物は、好ましくは0.1ないし10のモル比で存
在し、個々の特定の場合に、製剤が完全に透明であるよ
うに選択される。このようにして形成された可溶性の複
合物は、そのままで、すなわち、複合に関与しなかった
過剰の構成物が存在するままで用いることもできるし、
例えばゲル上でのろ過によって、予め精製し、この過剰
分の全て又は一部を除去してから用いることもできる。
全ての場合、これらの物質は、担体中に好ましくは有用
物質を0.5ないし20mg含み、上記したのと同様な製剤の
形態で提供される。
体と細胞毒性結合体とを予め複合させた可溶性の複合物
を含む注射液である。この形態では、複合物の形成を確
保する構成物は、好ましくは0.1ないし10のモル比で存
在し、個々の特定の場合に、製剤が完全に透明であるよ
うに選択される。このようにして形成された可溶性の複
合物は、そのままで、すなわち、複合に関与しなかった
過剰の構成物が存在するままで用いることもできるし、
例えばゲル上でのろ過によって、予め精製し、この過剰
分の全て又は一部を除去してから用いることもできる。
全ての場合、これらの物質は、担体中に好ましくは有用
物質を0.5ないし20mg含み、上記したのと同様な製剤の
形態で提供される。
図は、培養時間とトレーサー取り込み量との関係を示す
グラフである。
グラフである。
Claims (14)
- 【請求項１】少なくとも１種の抗原を担持する標的細胞
を選択的に殺滅するための細胞毒性薬剤組成物であっ
て、 前記標的細胞の表面の前記少なくとも１種の抗原と選択
的に結合し、前記標的細胞とは異なる動物種からなるも
のである少なくとも１種の第１の抗体と、 リシンのＡ鎖と、前記第１の抗体が属する動物種の免疫
グロブリンに対して特異性を有する第２の抗体とを共有
結合により結合してなる少なくとも１種の細胞毒性結合
体と から得られる複合体を細胞毒性的に有効量で含有するこ
と特徴とする細胞毒性薬剤組成物。 - 【請求項２】注射用溶液の形態にある特許請求の範囲第
１項記載の細胞毒性薬剤組成物。 - 【請求項３】第１の抗体が、抗腫瘍細胞性抗体である特
許請求の範囲第１項記載の細胞毒性薬剤組成物。 - 【請求項４】第１の抗体が、抗−Ｔ６５、抗−Ｔ２０
０、抗−ＨＬＡまたはこれらの混合物であり、かつ、細
胞毒性結合体が、リシンのＡ鎖と抗マウス免疫グロブリ
ンＧ抗体とを共有結合により結合してなる特許請求の範
囲第１項記載の細胞毒性薬剤組成物。 - 【請求項５】少なくとも１種の抗原を担持する標的細胞
を選択的に殺滅するための細胞毒性薬剤組成物であっ
て、 前記標的細胞の表面の前記少なくとも１種の抗原と選択
的に結合し、前記標的細胞とは異なる動物種からなるも
のである少なくとも１種の第１の抗体と、 細胞毒性的に有効量の、リシンのＡ鎖と前記第１の抗体
が属する動物種の免疫グロブリンに対して特異性を有す
る第２の抗体とを共有結合により結合してなる少なくと
も１種の細胞毒性結合体と、 薬学的に許容可能な担体と を含有すること特徴とする細胞毒性薬剤組成物。 - 【請求項６】注射用溶液の形態にある特許請求の範囲第
５項記載の細胞毒性薬剤組成物。 - 【請求項７】第１の抗体が、抗腫瘍細胞性抗体である特
許請求の範囲第５項記載の細胞毒性薬剤組成物。 - 【請求項８】第１の抗体が、抗−Ｔ６５、抗−Ｔ２０
０、抗−ＨＬＡまたはこれらの混合物であり、かつ、細
胞毒性結合体が、リシンのＡ鎖と抗マウス免疫グロブリ
ンＧ抗体とを共有結合により結合してなる特許請求の範
囲第５項記載の細胞毒性薬剤組成物。 - 【請求項９】第１の抗体および細胞毒性結合体を、０．
１ないし１０のモル比で含有する特許請求の範囲第５項
記載の細胞毒性薬剤組成物。 - 【請求項１０】少なくとも１種の抗原を担持する標的細
胞を選択的に殺滅するための細胞毒性薬剤キットであっ
て、 前記標的細胞の表面の前記少なくとも１種の抗原と選択
的に結合し、前記標的細胞とは異なる動物種からなるも
のである少なくとも１種の第１の抗体を含有し、かつ、
別個に包装された第１の薬剤組成物と、 細胞毒性的に有効量の、リシンのＡ鎖と前記第１の抗体
が属する動物種の免疫グロブリンに対して特異性を有す
る第２の抗体とを共有結合により結合してなる少なくと
も１種の細胞毒性結合体を含有し、かつ、別個に包装さ
れた第２の薬剤組成物 からなることを特徴とする細胞毒性薬剤キット。 - 【請求項１１】第１の抗体が、抗腫瘍細胞性抗体である
特許請求の範囲第１０項記載の細胞毒性薬剤組成物。 - 【請求項１２】第１の抗体が、抗−Ｔ６５、抗−Ｔ２０
０、抗−ＨＬＡまたはこれらの混合物であり、かつ、細
胞毒性結合体が、リシンのＡ鎖と抗マウス免疫グロブリ
ンＧ抗体とを共有結合により結合してなる特許請求の範
囲第１０項記載の細胞毒性薬剤組成物。 - 【請求項１３】第１の薬剤組成物および第２の薬剤組成
物が、夫々、注射用溶液の形態にある特許請求の範囲第
１０項記載の細胞毒性薬剤キット。 - 【請求項１４】第１の薬剤組成物および第２の薬剤組成
物が、夫々、０．５ないし２０mgの第１の抗体および細
胞毒性結合体を含有する特許請求の範囲第１０項記載の
細胞毒性薬剤キット。
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| FR8313604 | 1983-08-23 | ||
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