JPH0646857A - プラスミド、ファ−ジミドｄｎａの調製方法、及びその試薬キット - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 遺伝子工学におけるＤＮＡ組換え実験のベク
ターとして利用されるプラスミドを、容易な操作で高収
率，高純度に、しかも安全性高く得ることができる新規
な方法を提供する。 【構成】 プラスミドを有する宿主細菌を懸濁した緩衝
液を凍結，融解した後、菌体膜分解酵素を添加し、次い
で加熱により菌体膜分解酵素を不活化した後固液分離し
て、上清中に前記閉環状二本鎖ＤＮＡを回収する第１の
工程と、この上清に陽イオン界面活性剤を加え、生じた
沈殿物を固液分離して回収する第２の工程と、この第２
工程で回収した沈殿物を塩化ナトリウム溶液に溶解させ
た後、エチルアルコールで再沈殿させ、生じた沈殿物を
固液分離して回収する第３の工程を順次に行う。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、プラスミド、ファージ
ミドＤＮＡの調製に係わる。プラスミドＤＮＡは、大腸
菌や枯草菌などの菌体内に存在するデオキシリボ核酸
（ＤＮＡ）により構成されている自己複製が可能な核外
遺伝因子であり、遺伝子工学においてＤＮＡ組換え実験
のベクターとして利用されている。

【０００２】

【従来の技術】従来、プラスミドＤＮＡの大量調製は以
下の方法により、行われている。すなわち、閉環状二本
鎖プラスミドを保持している宿主を、界面活性剤を含ま
ない緩衝液に懸濁し、リゾチーム（菌体膜分解酵素）処
理後、塩化ナトリウム溶液とＳＤＳ（陰イオン界面活性
剤）を加え、溶菌する。さらにクロロホルム抽出（最小
２回）により水層に残存するフェノールを除去する。水
層中の核酸（染色体ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミドＤＮ
Ａ）はエチルアルコールで沈殿させた後、ＴＥ緩衝液に
溶解し、含臭素エチジウム塩化セシウム密度勾配遠心分
離を２回行う。閉環状二本鎖プラスミドＤＮＡを注射器
で採取し、イソプロピルアルコールで、共存する塩化エ
チジウムを抽出し、透析によりＤＮＡを沈殿させ、風乾
後、ＴＥ緩衝液に溶解する。また最近、塩化セシウム密
度勾配遠心分離に代わり、樹脂やフィルターを用いる方
法が開発されているが、ミニプレップ調製には使用でき
るが、大量調製には適していない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、前記し
た従来のプラスミドＤＮＡの大量調製には以下のような
欠点がある。

【０００４】１．フェノールとクロロホルムにより除蛋
白 フェノールとクロロホルムは危険物、劇物であるため、
その取り扱い及び廃棄に十分な注意を要する。また抽出
を繰り返し行うため閉環状二本鎖プラスミドやファージ
ミドＤＮＡにニックが生じ易く、減損も多くなり収量が
低下する。クロロホルム抽出が不十分な場合、残存フェ
ノールによる酵素類の失活が起こり、目的とするＤＮＡ
のサブクローニングや解析（制限酵素地図の作成、塩基
配列の同定など）を行うことができない。

【０００５】２．リゾチーム，アルカリ，ＳＤＳによる
溶菌 開環状二本鎖プラスミドＤＮＡの大量調製の場合、菌体
膜分解酵素（リゾチーム）とＳＤＳ（陰イオン界面活性
剤）の併用による溶菌が最も一般的に行われている。こ
の方法は比較的温和であるが、溶菌効率が悪い。アルカ
リ溶菌法ではリゾチーム処理後、ＮａＯＨとＳＤＳを加
え、菌体膜を完全に破壊するため、溶菌効率は良いが染
色体ＤＮＡとＲＮＡの混入が多い。ＮａＯＨの添加によ
りＲＮＡの一部分は破壊されるが、閉環状二本鎖プラス
ミドＤＮＡにも損傷を与えるため収量低下の原因とな
る。

【０００６】３．塩化セシウム密度勾配遠心分離による
染色体ＤＮＡとＲＮＡの除去 純粋な閉環状二本鎖プラスミドＤＮＡを得るため、混入
染色体ＤＮＡやＲＮＡ、閉環状や直鎖状になったプラス
ミドＤＮＡを除去する必要がある。一般には、含臭素エ
チジウム塩化セシウム密度勾配遠心分離法が用いられて
いる。通常、超遠心（３００００ｒｐｍ以上）で長時間
（水平ロータでは３０〜３６時間、垂直ロータでは１２
〜１５時間）の遠心分離が行われる。臭化エチジウムは
分離された閉環状二本鎖プラスミドＤＮＡの所在を知る
ために添加されているが、発癌物質であるため、その取
り扱い及び廃棄に十分な注意を要する。

【０００７】最近、フィルターやカラムによる除去法が
開発され、製品も市販されているが、吸着能力や分離能
力に限界があるため、閉環状二本鎖プラスミドＤＮＡの
回収率が低く、染色体ＤＮＡとＲＮＡが残留することも
ある。いずれの場合もミニプレップ調製には用いられる
が、大量調製には使用されていない。

【０００８】以上列挙したように、従来の方法では染色
体ＤＮＡとＲＮＡの混入が多く、閉環状二本鎖プラスミ
ドＤＮＡのニッキングが起り易い。また、操作手順が煩
雑で、作業時間が長く、それに伴う閉環状二本鎖プラス
ミドＤＮＡの減損も増加する。高純度、高収率の閉環状
二本鎖プラスミドＤＮＡを得るには、ある程度の経験と
コツ（技能）が要求される。更に、危険物、劇物である
フェノール、クロロホルム、臭化エチジウムを用いてい
るため、操作中の取り扱い及び廃液には十分に注意し、
気を配る必要がある。

【０００９】本発明者は、前記従来のプラスミドＤＮＡ
の調製法における問題点を解消し、制限酵素切断、制限
酵素切断後の再結合や外来ＤＮＡ断片との結合、形質転
換、塩基配列の決定などに用いられる高純度の閉環状二
本鎖プラスミドやファージミドＤＮＡを調製可能な方法
につき鋭意検討を重ねて、本発明を提供するものであ
る。

【００１０】すなわち本発明の一つの目的は、フェノー
ル、クロロホルム、臭化エチジウム等の危険物，劇物を
使用する必要がなく、したがって作業者にとって安全
で、また生物に有害な廃液や廃棄物を生ぜず、廃棄物処
理のための設備等の負担軽減、周囲環境の汚染を防止で
きる新規なプラスミド、ファージミドＤＮＡの調製方法
を提供することにある。本発明の別の目的の一つは、操
作方法は簡単で、初心者でも容易に操作でき、閉環状二
本鎖プラスミドやファージミドＤＮＡを高収率で、再現
性よく得ることができる新規な方法を提供することにあ
る。また本発明の更に別の一つ目的は、本発明の方法を
実施する際に、これに使用する種々の緩衝液や、試薬類
を、各々必要十分量のみ各別々の容器に入れ、一組まと
めた試薬キットを提供することにある。

【００１１】

【課題を解決するための手段及び作用】前記の目的を実
現する本発明方法の特徴の一つは、閉環状二本鎖ＤＮＡ
を保持する大腸菌、枯草菌などの宿主細菌を懸濁した緩
衝液を凍結，融解した後、この液に菌体膜分解酵素を添
加し、次いで煮沸して菌体膜分解酵素を不活化した後、
一般的には遠心分離法により固液分離し、分離した上清
中に前記閉環状二本鎖ＤＮＡを回収する第１の工程、こ
の上清に陽イオン界面活性剤を加え、生じた沈殿物を固
液分離して回収する第２の工程、この第２工程で回収し
た沈殿物を塩化ナトリウム等のアルカリ金属塩溶液に溶
解させた後、エチルアルコール等の低級アルコールで再
沈殿させ、生じた沈殿物を固液分離して回収する第３の
工程、の第１〜第３の工程により閉環状二本鎖プラスミ
ドあるいはファージミドＤＮＡを調製することにある。

【００１２】前記第１の工程の操作は、凍結，融解の操
作と、菌体膜分解酵素の添加操作とを行うことにより、
菌体膜を部分的に効率よく破壊することができてプラス
ミドＤＮＡ等の収量は、上記操作を単独に行う場合に比
べて向上するため、大量調製に適しているが、少量調製
の場合にはこれらの操作のいずれかを行うようにしても
よい。この場合、前者の凍結，融解法は、後者に比べて
混入する宿主の染色体ＤＮＡ量が少ないという利点があ
る。

【００１３】前記の方法では更に、第２の工程と第１の
工程に間において、閉環状二本鎖ＤＮＡを回収した上清
にＲＮＡ分解酵素を添加して、この上清中に混入したＲ
ＮＡを消化除去する中間工程を行うこともできる。

【００１４】また本発明の特徴の一つは、閉環状二本鎖
プラスミドあるいはファージミドＤＮＡを調製する際に
必要な試薬等を、その必要量を各別々の容器に入れて予
め準備した試薬キットを提供することにある。

【００１５】以下本発明をその更に詳細に説明する。閉
環状二本鎖プラスミドあるいはファージミドＤＮＡを保
持している宿主（大腸菌または枯草菌）を培養し、集菌
後、菌体を第一試薬で懸濁し、凍結させる。菌体はこの
状態で長期保存が可能であるので、必要に応じて菌体を
融解させプラスミドあるいはファージミドＤＮＡの調製
をすることができる。第一試薬は、特に限定されない
が、界面活性剤（例えば、トリトン Ｘ−１００）、Ｄ
ＮＡ分解酵素の活性を抑制するキレート剤（例えば、Ｅ
ＤＴＡ）、浸透圧の違いによる急激な溶菌を防ぐための
ショ糖（シュクロース）又はクリセリン、緩衝剤（ｐＨ
６．６〜８．５の範囲に緩衝能を有する例えば、トリス
−塩酸）を含み、凍結，融解の操作等と共に、菌体膜を
部分的に破壊する。なお界面活性剤は０．１％以上、キ
レート剤は１０ｍＭ以上とすることが良い。

【００１６】この菌体膜の部分的破壊を増長させるため
の第二試薬（リゾチーム）を作用させ、加熱によりＤＮ
Ａ分解酵素を不活性化させ、溶菌を行う。加熱は、９５
〜１００℃で、３０〜４０秒程度行えばよいが、大量調
製の場合には９０〜１２０秒程度行うことが好ましい。
この溶菌法によれば、菌体膜を部分的にしか破壊しない
ため、プラスミドやファージミドのような比較的小さな
分子は菌体外に溶出されるが、染色体ＤＮＡのような大
きな分子は溶出されず、菌体内に留まる。菌体外に溶出
されたプラスミドを、一般的には遠心分離（以下同様）
によって、破壊された菌体と分離して上清中に回収す
る。以上が本発明の第１の工程をなす。

【００１７】次いで、得られた上清に必要に応じて第三
試薬（ＲＮＡ分解酵素）を加え、混入ＲＮＡを消化除去
する中間工程を行う。

【００１８】次いで、陽イオン界面活性剤を第四試薬
（例えばＣＴＡＢ；臭化セチルトリメチルアンモニウ
ム）としてを添加し、目的物である核酸を沈殿させる。
ＣＴＡＢは低塩濃度の条件下では、選択的に核酸あるい
は酸性多糖類を沈殿させる性質がある。この性質を利用
することによって危険物・劇物であるフェノールとクロ
ロホルムを用いることなく蛋白質を除去し、効率よく目
的の閉環状二本鎖プラスミドまたはファージミドＤＮＡ
を沈殿させることができ、この沈殿を遠心分離法により
回収する。陽イオン界面活性剤をとしては、他に臭化テ
トラドデシルトリメチルアンモニウム、臭化ドデシルト
リメチルアンモニウム、臭化セチルピリジニウム、塩化
セチルトリメチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウ
ム、塩化ドデシルピリジニウム等を用いることもでき
る。以上が本発明方法の第２の工程である。

【００１９】遠心分離後に得られたＣＴＡＢ沈殿物をい
ったん第五試薬（例えば塩化ナトリウム溶液）に溶解
し、低級アルコールにより再沈殿させて、前記のＣＴＡ
Ｂを除去する。再沈殿物は遠心分離法により回収する。
第五試薬としては塩化ナトリウムの他、酢酸ナトリウ
ム，酢酸アンモニウム，酢酸カリウム，塩化カリウム，
塩化リチウムなどを用いることもでき、また低級アルコ
ールとしては、エチルアルコール又はイソプロピルアル
コールが好ましく用いられる。以上が本発明方法の第３
の工程である。

【００２０】遠心分離後に得られた高純度の閉環状二本
鎖プラスミドやファージミドＤＮＡは一般に、風乾した
後、第六試薬（トリス−塩酸 ＥＤＴＡ（ＴＥ緩衝
液））に溶解する。

【００２１】本発明の方法は、操作が非常に簡単で、所
要時間が短い（ミニプレップ法で約１時間、大量調製法
で約３時間）。しかも、多少のＲＮＡが混在しても次の
実験に影響を及ぼさない場合、あるいは次の実験過程に
おいてＲＮＡを除去することが可能である場合には、第
三試薬（ＲＮＡ分解酵素）による前記中間工程の処理を
省略することができ、所要時間はさらに３０〜４０分間
短縮される。また本発明方法は、危険物・劇物試薬を一
切使用していないため、安全性が高い。菌体膜の破壊は
温和で。操作手順も少ないため、プラスミドやファージ
ミドＤＮＡに与える損傷が少なく、高純度な閉環状二本
鎖ＤＮＡを得ることができる。また更に、従来の調製法
では、５００ｍｌの培養菌体液（ｐＵＣシリーズ、Ｍ１
３ｍｐシリーズ、ｐＢＲ３２２）より２００〜３００μ
ｇの閉環状二本鎖プラスミドやファージミドＤＮＡしか
得られなかったのに対して、本発明の方法によれば、２
５０ｍｌの培養菌体液より、約１ｍｇという高収率で閉
環状二本鎖プラスミドやファージミドＤＮＡを得ること
ができる。

【００２２】

【実施例】以下、本発明を実施例に基づいて更に説明す
るが、本発明がこの実施例に限定されるものではない。

【００２３】実施例１ＣＴＡＢによるプラスミド、ファージミドＤＮＡの大量
調製 １． プラスミド又はファージミドを保持している大腸
菌の単一コロニーを、５ｍｌの含アンピシリン（５０μ
ｇ／ｍｌ）ＹＴ液体培地に植菌し、３７℃で一晩振盪培
養を行い、前培養菌体溶液とした。 ２． 前記前培養菌体溶液の２．５ｍｌを、２５０ｍｌ
の含アンピシリン（５０μｇ／ｍｌ）ＹＴ液体培地に植
菌し、３７℃で８〜１４時間振盪培養を行った。 ３． 前記培養液を遠心分離（日立ＲＰＲ１０−２ ロ
ータ、１００００ｒｐｍ、４℃、５分）して菌体を得、
これを８ｍｌのＳＴＥＴ緩衝液［５０ｍｌ トリス−塩
酸（ｐＨ８．０）、５０ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ ト
リトンＸ−１００、８％ シュクロース］に懸濁した
後、冷凍凍結した（液体窒素、−８０℃フリーザ（ドラ
イアイスを使用してもよい））。 ４． 凍結した菌体溶液を室温で融解し、１００μｌの
リゾチーム（１００μｇ／ｍｌ）を加え、２０〜３０分
間室温に放置した。 ５． 前記により融解した菌体溶液を、湯せんを用いて
２分間煮沸した。 ６． 前記煮沸後の菌体溶液を遠心分離（日立ＲＰ５５
Ｔロータ、３００００ｒｐｍ、４℃、３０分）し、溶菌
した菌体を除いた。 ７． 前記６の操作により得た上澄みに、２５μｌのＲ
Ｎａｓｅ Ａ（２ｍｇ／ｍｌ）を加え、３７℃で４０分
間加温した。 ８． 更に、０．５ｍｌの１０％ＣＴＡＢを加え、素早
く混合した。 ９． 前記７の処理後の液を遠心分離（日立ＲＰＲ２０
−２ロータ、１５０００ｒｐｍ、４℃、１０分）し、沈
殿（ＤＮＡ）を集めた。 １０． この沈殿を３ｍｌの１．２Ｍ ＮａＣｌに溶解
した。 １１． 次に、７．５ｍｌの冷エタノールを加えて混合
した。 １２． 混合後、この液を−８０℃に１０分間放置し
た。 １３． その後該液を遠心分離（日立ＲＰ２０−２Ｔロ
ータ、１５０００ｒｐｍ、４℃、１０分）して、沈殿
（ＤＮＡ）を集めた。 １４． 得られた沈殿（ＤＮＡ）を、室温で風乾した。 １５． 前記１４の処理後、得られたＤＮＡを、３ｍｌ
のＴＥ緩衝液［１０ｍｌトリス−塩酸（ｐＨ８．０），
１ｍＭ ＥＤＴＡ］に溶解させた。

【００２４】以上により得られたプラスミドあるいはフ
ァージミドＤＮＡの収量と純度を下記のように測定し
た。

【００２５】プラスミドＤＮＡの収量 分光光度計を用いて２６０ｎｍ（核酸の最大吸収）にお
ける吸光度を測定し、濃度を算出した（１ＯＤ260 ＝５
０μｇ／ｍｌ）。収量はＤＮＡ溶液の濃度と液量より算
出した。

【００２６】プラスミドＤＮＡの純度 プラスミドＤＮＡの大きさ、形状（閉環状、開環状、直
鎖状）、染色体ＤＮＡとＲＮＡの混入の程度等を知るた
めに、０．８％アガロースゲルを用いて電気泳動を行っ
た。試料は１μｇ（吸光度測定の結果より算出した量）
を用いた。分子量マーカーはλ−Hind III切断断片を使
用した。電気泳動の結果、全体の少なくとも９５％がプ
ラスミドＤＮＡ（その少なくとも８０％が閉環状）であ
った。ごく微量の染色体ＤＮＡの混入が確認されたが、
ＲＮＡの混入は確認されなかった。

【００２７】形質転換 プラスミドＤＮＡの形質転換は塩化カルシウム法を用い
て行った。ＤＮＡ １μｇあたり５×１０5 〜１０6 コ
ロニーが得られた。

【００２８】切断と再結合 １μｇのプラスミドＤＮＡを制限酵素（Eco RI，Hind I
II，Bam HI，Sma I ，Pst I ）で切断し、アガロース電
気泳動または形質転換により確認した。形質転換の場
合、再結合によって４×１０4 〜１０5 コロニーが得ら
れた。

【００２９】実施例２ＣＴＡＢによるプラスミド、ファージミドＤＮＡのミニ
プレップ法 １． プラスミド（ファージミドであっても同様）を保
持する大腸菌の単一コロニーを、２〜５ｍｌの含アンピ
シリン（５０μｇ／ｍｌ）ＹＴ液体培地に植菌し、３７
℃で一晩振盪培養を行った。 ２． 前記による培養菌体溶液１．５ｍｌを、１．５ｍ
ｌの小遠心管（本例ではエペンドルフチューブを使用）
に移し、遠心分離［卓上遠心機、１４０００ｒｐｍ、４
℃、３０秒）し、得られた菌体を２００μｌのＳＴＥＴ
緩衝液（５０ｍＭトリス−塩酸（Ｐｈ８．０），５０ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ，０．１％ トリトンＸ−１００，８％
シュクロース］に懸濁し、冷凍した（液体窒素、−８０
℃フリーザ（ドライアイスを使用しても同様））。 ３． 凍結した菌体溶液を室温で融解し、１０μｌのリ
ゾチーム（１００μｇ／ｍｌ）を加え、５〜１０分間室
温に放置した。 ４． 前記により融解した菌体溶液を、湯せんを用いて
４５秒間煮沸した。 ５． 前記煮沸後の菌体溶液を遠心分離（卓上遠心機、
１４０００ｒｐｍ、４℃、１０分）した後、滅菌した爪
楊枝を用いて、溶菌した菌体を除いた。 ６． 前記５の操作により得た上澄みに５μｌ（２μｌ
でもよい）のＲＮａｓｅＡ（２ｍｇ／ｍｌ）を加え、３
７℃で３０分間加温した。 ７． 更に、０．５μｌの１０％ＣＴＡＢ（１０μｌの
５％ＣＴＡＢ）を加え、素早く混合した。 ８． 前記７の処理後の液を遠心分離（卓上遠心機、１
５０００ｒｐｍ、４℃、１０分）し、沈殿（ＤＮＡ）を
集めた。 ９． この沈殿を３００μｌの１．２Ｍ ＮａＣｌに溶
解した。 １０． 次に、７５０μｌの冷エタノールを加えて混合
した。 １１． 混合後、この液を−８０℃に５分間放置した。 １２． その後該液を遠心分離（卓上遠心機、１５００
０ｒｐｍ、４℃、１０分）して、沈殿（ＤＮＡ）を集め
た。 １３． 得られた沈殿（ＤＮＡ）を、室温で風乾した
（真空下での低速遠心による乾燥でもよい）。 １４． 前記１３の処理後、得られたＤＮＡを４０μｌ
のＴＥ緩衝液［１０ｍｌトリス−塩酸（ｐＨ８．０），
１ｍＭ ＥＤＴＡ］に溶解させた。

【００３０】

【発明の効果】本発明方法によれば、以下の効果を奏す
る。 使用する試薬類は危険物・劇薬を一切含まないので
保存がし易い。 操作方法も容易であるため、初心者でも安心して操
作でき、閉環状二本鎖プラスミドやファージミドＤＮＡ
を高収率で、再現性よく得ることができる。 特別な試薬類や機器類を必要とせず、短時間で制限
酵素切断、制限酵素切断後の再結合や外来ＤＮＡ断片と
の結合、形質転換、塩基配列の決定などに用いられる純
度の高い閉環状二本鎖プラスミドやファージミドＤＮＡ
を調製することができる。 本発明の方法は、生物に有害な廃液や廃棄物を生じ
ないので、環境を害することがない。 試薬キットを使用することにより、試薬類を各々購
入して調製する必要がなくなる。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 閉環状二本鎖ＤＮＡを保持する大腸菌、
   枯草菌などの宿主細菌を懸濁した緩衝液を凍結，融解す
   る操作、あるいは前記緩衝液に菌体膜分解酵素を添加す
   る操作の少なくともいずれかの操作を行った後、固液分
   離して上清中に前記閉環状二本鎖ＤＮＡを回収する第１
   の工程と、この上清に陽イオン界面活性剤を加え、生じ
   た沈殿物を固液分離して回収する第２の工程と、この第
   ２工程で回収した沈殿物をアルカリ金属塩溶液に溶解さ
   せた後、低級アルコールで再沈殿させ、生じた沈殿物を
   固液分離して回収する第３の工程と、を備えたことを特
   徴とするプラスミド、ファージミドＤＮＡの調製方法。
2. 【請求項２】 請求項１の第１の工程において、閉環状
   二本鎖ＤＮＡを保持する大腸菌、枯草菌などの宿主細菌
   を懸濁した緩衝液を凍結，融解する操作を行った後、該
   液に菌体膜分解酵素を添加する操作を行うことを特徴と
   するプラスミド、ファージミドＤＮＡの調製方法。
3. 【請求項３】 請求項１又は２において、第３の工程で
   用いるアルカリ金属塩が、塩化ナトリウム，酢酸ナトリ
   ウム，酢酸アンモニウム，酢酸カリウム，塩化カリウ
   ム，塩化リチウムのいずれかであることを特徴とするプ
   ラスミド、ファージミドＤＮＡの調製方法。
4. 【請求項４】 請求項１又は２において、第３の工程で
   用いる低級アルコールが、エチルアルコール又はイソプ
   ロピルアルコールであることを特徴とするプラスミド、
   ファージミドＤＮＡの調製方法。
5. 【請求項５】 請求項１乃至４のいずれかにおいて、第
   ２の工程の前に、第１の工程で得た上清にＲＮＡ分解酵
   素を添加する中間工程を行うことを特徴とするプラスミ
   ド、ファージミドＤＮＡの調製方法。
6. 【請求項６】 閉環状二本鎖プラスミドＤＮＡを保持す
   る宿主から閉環状プラスミドＤＮＡを抽出調製するため
   に、請求項１乃至５のいずれかの方法で使用する緩衝
   液、菌体膜分解酵素、陽イオン界面活性剤、アルカリ金
   属塩溶液、低級アルコール、更に必要に応じてＲＮＡ分
   解酵素の各々の必要十分量を、各別々の容器に入れ、こ
   れらの容器を一組にまとめたことを特徴とする試薬キッ
   ト。