JPH06500922A - 昆虫細胞の培養用培地 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １１　該血清アルブミンがつ／血清アルブミンであり、該アルブミン加水分解物 がラクトアルブミン加水分解物である請求の範囲第１０項記載の培地。

１２、（ａ）合成基礎培地； （ｂ）１リツトル当たり約５グラムの酵母加水分解物：および（Ｃ）１リツトル 当たり約１グラムリアルブミンよりなる無血清昆虫細胞培養培地。

１３、該アルブミンがウシ血清アルブミンである請求の範囲第１２項記載の培地 。

１４、（ａ）合成基礎培地； （ｂ）１リツトル当たり約５グラムの酵母加水分解物；および（ｃ）１リツトル 当たり約１グラムのデキストランよりなる無血清昆虫細胞培養培地。

１５、該デキストランがほぼ５ｏｏｏｏｏの分子量を有するデキストランである 請求の範囲第１４項記載の培地。

明細書 昆虫細胞の培養用培地 発明の分野 本発明は細胞培養のための培地の分野に関する。さらに詳しくは、本発明は昆虫 細胞の培養用培地の分野に関する。

発明の背景 塩類、糖類、アミノ酸類、およびビタミン類の基礎栄養混合物以外に、試験管内 細胞は、増殖のためには、はっきりとされていない生物学的流動体またはエキス の補足も必要とすることが判明している。利用可能性および貯蔵容易性のために 、最も通常に使用される補足物は血清である。

しかしながら、細胞培養培地での血清の使用にはいくつかの不利がある。血清は 比較的高価である。血清ははっきりとした成分ではないので、異なるロットの血 清は、存在する化合物の濃度が変動する可能性があり、かくして予期しない培養 増殖の結果となる。また、血清はウィルスまたはマイコプラズマで汚染され得る 。血清中の蛋白は培養培地からの細胞産物の精製を複雑化する。

含血清培地の不利を解消しようとする努力において、研究者は、血清の代わりに 、はっきりとした、ないしはよ（特徴付けられた成分で置き換えることにより、 無血清培地を提供しようと試みてきた。不幸にも、血清の複雑性と、異なるタイ プの細胞の異なる増殖要件は、かかる培地の提供を困難なものとしてきた。昆虫 細胞培養のための無血清培地に関する総括ついては、ミツハシ□Ｈｔｓｕｈａｓ ｈｉ）　（１９８２）　ｒ無血清培地における昆虫細胞系の連続的培養（Ｃｏｎ ｔｉｎｏｕｓ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ　ｏｆ　Ｉｎ５ｅｃｔ　Ｃｅ１ｌ　Ｌｉｎｅｓ 　ｉｎ　Ｍｅｄｉａ　Ｆｒｅｅ　ｏｆ　５ｅｒａ）i　、アブ ルン・エンド・ズール（Ａｐｐｌｎ、　Ｅｎｔ、　Ｚｏｏｌ、）１ユニ５７５− ５８１；およびグツドウィン（Ｇｏｏｄｖｉｎ）、ライフサイエンスにおける技 術、組織培養および細胞培養の確立および維持（Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ｉｎ　 ｔｈｅ　Ｌｉｆｅ　５ｃｉｅｎｃｅ、　Ｓｅｔｔｉｎｇ　Ｕｐ　ａｎｄｌｌａｉ ｎｔｅｎａｎｃｅ　ｏｆ　Ｔｉ５ｓｕｅ　ａｎｄ　Ｃｅ１ｌ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ ）中の［無血清培地における昆虫細胞の増殖（Ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　１ｎｓｅｃ ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｓｅｒｕｍ−ｆｒｅｅ　ｍｅｄｉａ）　Ｊ　、ｘルセビ ア・サイエンティフィック・パブリッンヤーで・アイルランド・リミテッド（Ｅ ｌｓｅｖｉｅｒ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ＰｕＭｉｓｈｅｒｓ　Ｉｒｅｌａｎｄ 、　Ｌｔｄ、　）、（１９８５）頁Ｃ１０９／１−Ｃ１０９／２８を参照された し。レイザー（Ｌａｚｅｒ）ら（１９８７）［ディベロップ・バイオ／１ｚ−７ ，タンダート（Ｄｅｖｅｌｏｐ、　Ｂｉｏｌ、　５ｔａｎｄａｒｄ、　）　６６ 　：　３１５−３２３（アブストラクト）］は、ウシ血清アルブミンを含有する エデス・エジビティ（＾ｅｄｅｓ　ａｅｇｙｐｔｉ）細胞の培養用の無血清培地 を報告している。

果実ハエであるトロスフイア・メラノガスタ−（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ　ｍｅｌ ａｎｏｇａｓｔｅｒ）は長年広範な遺伝解析の対象とされ、ドロソフィラ細胞の 培養用に種々の培地が開発されている。インロウ（Ｉｎｌｏｗ）ら（１９８９） ［ジャーナル・オブ・ティシュ−・カルチャー・メソッズ（Ｊ、　Ｔｉ５ｓｕｅ 　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｍｅｔｈｏｄｓ＞１２　＋１３−１６］は、酵母加水分解物 および脂質エマルジョンを含有するドロソフィア細胞の培養用の無血清培地を開 示している。含血清培地については、ンールズ（Ｓｈｉｅｌｄｓ）ら（１９７５ ）［ジャーナル・オブ・エンブリオロジー・アンド・エクスペリメンタルー％ル ７オ０ジー（Ｊ、Ｅｍｂｒｙｏｌ、Ｅｘｐ、Ｍｏｒｐ、）　３３　：１５９−１ ７５；レンゲウェル（Ｌｅｎｇｙｅｌ）ら、メソッズ・イン・セル・バイオロジ ー（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、　）、１０巻、１９５−２０ ８頁（１９７５）、「浮遊培養■における昆虫細胞での方法、ドロソフィア・メ ラノガスタ−（１！ｅｔｈｏｄｓ　ｗｉｔｈＩｎｓｅｃｔ　Ｃｅ１ｌｓ　ｉｎ　 ５ｕｓｐｅｎｓｉｏｎ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　１Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ　ｍｅｌａｎ ｏｇａｓｔｅｒ）Ｊ　；@’ｉ−ル ズおよびサンプ（Ｓｈｉｅｌｄｓ　ａｎｄ　Ｓａｎｇ）　（１９７７）、ドロソ フィア・インフォメーション・サービス（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ　Ｉｎｆｏｒｍ ａｔｉｏｎ　５ｅｒｖｉｃｅ）、５２巻、１６１頁：クロスおよびサンプ（Ｃｒ ｏｓｓ　ａｎｄ　Ｓａｎｇ）　（１９７８）　、ジャーナル・オブ・エンブリオ ロジー・アンド・エクスペリメンタル・モルフォロジー（Ｊ、　Ｅｍｂｒｙｏｌ 、　Ｅｘｐ。

Ｍｏｒｐｈ、）４５　：１６１−１７２　；サンプ（Ｓａｎｇ）　（１９８１） 　、アドパーンシズ・イン・セル・カルチャー　（Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｃ ｅ１ｌ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ）中の「ドロソフィア細胞および細胞系（Ｄｒｏｓｏｐ ｈｉｌａ　Ｃｅ１ｌｓ　ａｎｄ　Ｃｅ１ｌ　Ｌｉｎｅｓ）Ｊ、１巻、１２５−１ ８２頁；およびウェブおよびミャケ（Ｕｅｄａ　ａｎｄ　ＭｉｙａｋｅＸ　１９ ８７　）、イン・ビトロ・セリュラー・アンド・ディベロップメンタル・バイオ ロジー（Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　Ｃｅ１ｉｕｌａｒ＆　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ 　Ｂｉｏｌｏｇｙ）２３　：　７０７　７１１を参照されたし。

デキストランまたはβ−シクロデキストリンを含有する無血清培地の少しの報告 があるが、該報告された培地は哺乳動物細胞の培養についてのものである。ビエ トルズコフスキイ（Ｐｉｅｔｒｚｋｏｗｓｋｉ）ら（１９８８）［フォリア・ヒ ストケミ力・工・シトビオロジ力（Ｆｏｌｉａ　Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａ　ｅ ｔ　Ｃｙｔｏｂｉｏｌｏｇｉｃａ）　２６　：１２３−１３２］は、デキストラ ンを含有するニワトリ胚細胞の培養用無血清培地を報告している。ピエトルズコ フスキイおよびコロホダ（Ｐｉｅｔｒｚｋｏｗｓｋｉ　ａｎｄ　Ｋｏｒｏｈｏｄ ａ）　（１９８８）［フォリア・ヒストケミ力・工・シトビオグロジ力（Ｆｏｌ ｉａＨｉｓｔｏｃｈｅ＋１ｉｃａ　ｅｔ　Ｃｙｔｏｂｉｏｌｏｇｉｃａ）　２６ 　：１４３−１５４　］は、ニワトリ胚線維芽細胞の培養用のデキストランを含 有する無血清培地を報告している。オーモリ（Ｏｈｉｏｒｉ）　（１９８８）　 ［ジャーナル・オブ・イミュノロジカル・メソッズ（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉ ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ）　１１２　：　２２７−２３３　 ］は、培養したマウスリンパ球による第一次抗体反応を支持できる無血清培地を 報告している。この培地はβ−シクロデキストリン、インスリン、トランスフェ リン、アルブミン、低密度リポ蛋白、プトレシン（ｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ）およ びアラニンを補足した基礎培地に基づく。

昆虫（スボドブテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ　ｆｒｕｇｉｐｅｒ ｄａ））の大規模培養用の無血清培地がマイオロレラ（Ｍａｉｏｒｅｌｌａ）ら （１９８８）、バイオテクノロジー　（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）旦＋　１ ４０６−１４１０に報告されている。基礎培地に加えて、該培地は酵母エキス、 タラ肝油多不飽和脂肪酸メチルエステル、コレステロールおよびツイーン（Ｔｖ ｅｅｎ）を含有するものであった。ムルハマーおよびグーチェ（Ｍｕｒｈａ＋ｕ ＋ｅｒ　ａｎｄ　Ｇｏｏｃｈｅｅ）　（１９８ｇ）　［バイオフノロジー（Ｂｉ ｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）６　：１４１１−１４１８］は、血清を含有するスポ ドブテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ　ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）用の 培地を開示している。

本発明の目的は昆虫細胞培養用の無血清培地を提供することにある。また、本発 明の目的は、生成収率を増大させる組換え産物を生産するように形質転換した昆 虫細胞の培養用の無血清培地を提供することにある。さらに、本発明のもう１つ の目的は、ドロソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）細胞の培養用の無血清培地を 提供することにある。

発明の概要 本発明は昆虫細胞の培養用培地を提供する。本発明は添付の請求の範囲で特に指 摘し、以下の記載においてその好ましい具体例を記載する。

発明の詳細な記載 本発明の無血清培地は、昆虫細胞の培養で有用である。本発明の培地はドロソフ ィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）細胞の培養で有用であることが判明しており、広 範な昆虫細胞の培養で役に立つはずである。細胞は本発明の無血清培地にてバッ チ培養および連続培養で増殖させ得る。本発明の培地で増殖させたドロソフィラ （Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）細胞は高細胞密度に達し、含血清培地で増殖させたド ロソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）細胞と比較して組換え産物の分泌の増大を 示す。本発明の培地は、組換え蛋白の生産用の細胞を培養するのに利用される蛋 白含量が低い。培地の低蛋白含量は、蛋白産物の精製の間に蛋白産物から分離さ れるべき望まない蛋白の量を減少させる。加えて、該培地は含血清培地よりも大 いに低廉である。

本発明の培地は、昆虫細胞培養に設計した基礎培地に補足物を添加することによ って調製する。該培地は細胞培養培地を調製するのに標準的な手法で調製される 。

本発明の無血清培地で用いる好ましい基礎培地は実施例１で記載する。他の適当 な基礎培地はブレイス（ジブコ（Ｇｉｂｃｏ）　、グランド・アイランド（Ｇｒ ａｎｄＩｓｌａｎｄ）、ニューヨーク州）およびシュナイダ−（Ｓｃｈｎｅｉｄ ｅｒ）　（ジブコ（Ｇｉｂｃｏ））のものを包含する。

次いで、補足物を基礎培地に添加する。酵母加水分解物は、１リツトル当たり約 １ないし約１０グラムの量で添加する。デキストランまたはアルブミンは１リツ トル当たり約０．１ないし約５グラムの量で添加する。好ましくは、培地で用い るアルブミンはウシ血清アルブミンであるが、他の種からのアルブミンも適当で ある。好ましくは、培地で用いるデキストランはデキストランＴ−５００のごと き約５０００００の分子量を有するデキストランである。本発明の１の具体例に おいて、ラクトアルブミン加水分解物を１リツトル当たり約０．２ないし約５グ ラム、好ましくは、１リツトル当たり約５グラムの量で添加する。

培地のｐＨは好ましくは約６．３ないし約６．７の範囲とする。浸透圧は好まし くは約３２０ないし３６０ミリオスモルの範囲とする。

該基礎培地は４℃にて１年間粉末として保存できる。液状の完成した培地（補足 物を添加した基礎培地）は４℃で６力月間保存できる。

本発明の好ましい具体例を以下の実施例に記載する。

Ｍｇ５ｏ＜　７ＨｚＯ４，４０ グルタミン酸カリウム　７．８８ グルタミン酸ナトリウム　６．５３ Ｎ　ａ　Ｈ２Ｐ　Ｏ４（−塩基性）　０．７８グルコース　１０・０ オキサロ酢酸　０．２５ ビス−トリス（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）　１．０５Ｌ−アスパラギン酸　０．３０ Ｌ−スレオニン　０．５０ Ｌ−セリン　０．３５ Ｌ−アスパラギン　０．３０ Ｌ−グルタミン　０．６０ Ｌ−プロリン　０・４０ グリシン　０．５０ Ｌ−アラニン　１．５０ ＣａＣＬ　２ＨｚＯ１，００ 基礎培地の調製： 基礎培地の成分を混合し、ポルミルで粉砕して、均質な粉末に処方する。次し） で、粉末化培地を１００Ｌパケ−ｙ　ト（ｐａｃｋｅｔ）に分配し、４℃で１年 まで貯蔵する。

終容量１００Ｌには： 脱イオン化−蒸留水９０リツトルを計量して適当な混合容器に入れる。ボールミ ル粉砕した粉末化培地（前記）の１００Ｌノ＜ケラト分を添加する。培地のｐＨ をＩＯＮ　ＮａＯＨを用いて６６に！整する。培地の容量を水の添加１＝よって １０ＯＬとする。次いで、０．２ミクロンの酢酸セルロース濾紙を用０る膜濾過 によって培地を滅菌する。

カンカキ−、イリノイ州）を補足した実施例１の基礎培地を含有する。該培地は 以下の如（に調製する： １００Ｌの許容量につき １、脱イオン化−蒸留水９０リツトルを計り、適当な混合容器に入れる。

２、（実施例１からの）ボールミル粉砕培地の１つの１０ＯＬパケツト分を添加 する。

３、ＴＣラクトアルブミン加水分解物５００グラムを添加し、溶解するまで混合 する。

５、ウシ血清アルブミン１００グラムを添加し、溶解するまで混合する。

６、ＩＯＮ　ＮａＯＨを用いてｐＨを６．６に調整する。

７、水を添加して許容量を１００リツトルとし、徹底的に混合する。

８．０．２ミクロンの酢酸セルロース濾紙を用いて濾過滅菌する。

９、容量オスモル濃度をチェックし、記録する。

１０．４℃で６力月まで保存する。

アルブミン（アルモール（Ａｒｍｏｕｒ）、カンカキ−、イリノイ州）を補足し た実施例１の基礎培地含有する。該培地は以下のごとくに調製する：許容量１０ ０Ｌにつき・ １、脱イオン化−蒸留水９０リツトルを計り、適当な混合容器に入れる。

２、（実施例１からの）ボールミル粉砕培地の１０ＯＬパケツトを添加する。

３、　Ｔ　Ｃｙｅａｓｔｏｌａｔｅ５００グラムを添加し、溶解するまで混合す る。

４、ウシ血清アルブミン１００グラムを添加し、溶解するまで混合する。

５、ＩＯＮ　ＮａＯＨを用イＴ　ｐ　Ｈヲ６．６　＋＝調整ｔル。

６、水を添加して許容量を１００リツトルとし、徹底的に混合する。

７．０．２ミクロンの酢酸セルロース濾紙を用いて濾過滅菌する。

８、容量オスモル濃度をチェックし、記録する。

９．４℃で６力月まで保存する。

実施例４ 培地ＭＲ−Ｄ３は、１リツトル当たり５グラムのＴＣｙｅａｓｔｏｌａｔｅ　（ ディフコ（Ｄｆｆｃｏ）、デトロイト、ミシガン州）および１リツトル当たり１ グラムのデキストランＴ−５００（ファルマシア（Ｐｈａｒａ＋ａｃｉａ）、ビ ス力タウェイ、ニューシャーシー州）を補足した実施例１の基礎培地を含有する 。該培地は以下の如くに調製す許容量１００Ｌにつき： １２説イオン化−蒸留水９０リツトルを計り、適当な混合容器に入れる。

２゜　（実施例１からの）ボールミル粉砕培地の１つの１０ＯＬパケツト分を添 加する。

３、　Ｔ　Ｃｙｅａｓｔｏｌａｔｅ５００グラムを添加し、溶解するまで混合す る。

４、デキストランＴ−５００の１００グラムを添加し、溶解するまで混合する。

５、ＩＯＮ　ＮａＯＨを用いてｐＨを６．６に調整する。

６、水を添加して許容量を１００リツトルとし、徹底的に混合する。

７．０．２ミクロンの酢酸セルロース濾紙を用いて濾過滅菌する。

８、容量オスモル濃度をチェックし、記録する。

９．４℃で６力月まで保存する。

実施例５　Ｍ３＋５％ＦＡＢ、ＭＲ−Ｄｉ、またはＭＲ−ＤＩにおけるドロンフ ィラ（ＡＣＣＯ８６）細胞の増殖、およびこれらの培地におけるｇｐ１２０の産 生の比較 ヒト免疫不全ウィルス−１蛋白ｇｐ１２０を発現するように形質転換したドロソ フィラ細胞（細胞系ＡＣＣＯ８６）（１ミリリツトル当たり２Ｘ１０’細胞）を 、５％飴児ウシ血清（ＦＢＳ）を含むＭ３培地：ＭＲ−Ｄｌ、実施例２の培地； またはＭＲ−Ｄ２、実施例３の培地で培養した。Ｍ３培地は、１リツトル当たり １グラムの酵母分解物（ｙｅａｓｏｌａｔｅ）　（ディフコ（ｐｉｆｃｏ）、デ トロイト、ミシガン州）を添加した実施例１記載の培地である。また、各培地に は３００Ｌｇ／ｍｌの抗生物質ヒグロマインンＢ　（ＨＢ）も含有させた。細胞 は１４日間培養し、間隔をおいて細胞数およびｇｐ１２０の量を測定した。

表１に示すごとく、７日後には、Ｍ３＋５％ＦＡＢで増殖させた細胞は１．６Ｘ １０’の密度を有し、ｇｐ１２０濃度は９５６Ｌｇ／ｒｎ＋であった。

ＭＲ−Ｄｉ培地およびＭＲ−Ｄ２培地で増殖させた細胞は各々１．７Ｘ１０’お よび１．８Ｘ１０’の密度を有しており、ｇｐ１２０の濃度は各々９１６ｎｇ／ ｍｌおよび９１２Ｌｇ／ｍｌであった。しかしながら、培養１４日後には、ＭＲ −ＤＩおよびＭＲ−Ｄ２培地における細胞密度およびｇｐ１２０度生はＭ３＋５ ％ＦＡＢ培地におけるよりも有意に高かった。ＭＲ−ＤＩ培地においては、細胞 密度は３．０Ｘ１０’であり、ｇｐ１２０濃度は１，９６２Ｌｇ／ｍｌであった 。ＭＲ−Ｄ２培地においては、細胞密度は２．７Ｘ１０’であり、ｇｐ１２０の 濃度は２．７５０Ｌｇ／ｍｌであった。対照的に、Ｍ３＋５％ＦＡＢ培地で増殖 させた細胞の密度は２．ｌＸ１０’であり、ｇｐ１２０の濃度は１，２０７Ｌｇ ／ｍ１であった。

表１ Ｍ３＋５％ＦＡＢ　ＭＲ−ＤＩ　ＭＲ−Ｄ２＋２００ｆｆｇ／１１　ＨＢ　＋３ ０ｈｇ／Ｉｌｌ　ＨＢ　＋３００ｍｇ７ｍ１ＨＢ細胞＃　ＧＰ１２０　細胞＃　 ＧＰ１２０　細胞＃　ＧＰ１２０７Ｄ１．６ｅ７９５６Ｇ／ｍｌ　１．７ｅ７９ １６ＬＧ／ｍｌ　１．８ｅ７９１２ＬＧ／ｍｌ胞（細胞系ＡＣＣ０８６）の増殖 および　１２０産生の長期実験比較ヒト免疫不全ウィルス−１蛋白ｇｐ１２０を 発現するように形質転換したドロソフィラ細胞（１ミリリツトル当たり２Ｘ１０ ’細胞）（細胞系ＡＣＣ０８６）を、ＭＤ−Ｒ２、実施例３の培地；またはＭＤ −Ｒ３、実施例４の培地いずれか１２０ｍ１を含有する２５０ｍ１　ＳＰフラス コで培養した。７日間隔で細胞を継代し、４１代培養した。

２５代後、ＭＲ−Ｄ２培地には、はぼ２３Ｘ１０’細胞がありた。ＭＲ−Ｄ３培 地では、１ミリリツトル当たりほぼ１９Ｘ１０＠細胞があった。２６代後、ｇｐ １２０産生はＭＲ−Ｄ２では約５５０　ｎ　ｇ／ｍ　］で、ＭＲ−Ｄ３では７０ ０Ｌｇ／ｍｌであつた。３０代後、ＭＲ−０２ではｌミリリットル当たりほぼ２ ０×１０６細胞があり、ＭＲ−０３では１ミリリツトル当たりほぼ２１ｘｌＯ＠ 細胞があった。３３代後、ＭＲ−Ｄ２およびＭＲ−Ｄ３培地双方で１ミリリツト ル当たりほぼ２０Ｘ１０’細胞があり、ｇｐ１２０度生はＭＲ−０３では約７５ ０ｎｇ／ｍ１．ＭＲ−ＤＣでは６５０　ｎ　ｇ／ｍ　１であった。

３５代後、ＭＲ−０２培地では１ミリリツトル当たりほぼ１９Ｘ１０’細胞、Ｍ Ｒ−Ｄ３培地では１ミリリツトル当たりほぼ２１Ｘ１０’細胞があった。

ｇｐ１２０Ｉｌ生はＭＲ−Ｄ２培地では約５００ｎｇ／ｍｌ、ＭＲ−Ｄ３培地で は約５００ｎｇ／ｍｌであった。３９代後、ＭＲ−Ｄ２培地では１ミルリフドル 当−」 たりほぼ２０Ｘ１０’細胞、ＭＲ−Ｄ３培地では１ミリリツトル当たりほぼ１９ ×１０６細胞であった。ｇｐ１２０産生はＭＲ−Ｄ２培地では約３７５ｎｇ／ｍ １、ＭＲ−Ｄ３培地では約５２５　ｎ　ｇ／ｍ　］であった。４４０代後ＭＤ− Ｒ２培地では１ミリリツトル当たりほぼ２１Ｘ１０’細胞、ＭＲ−Ｄ３培地では １ミリリツトル当たりほぼ１９Ｘ１０’細胞があった。ｇｐ１２０産生はＭＲ− Ｄ２培地では約３００ｎｇ／ｍｌ、ＭＲ−Ｄ３培地では約４２５　ｎ　ｇ／ｍ　 ＋であった。

長期間では、組換えｇｐ１２０産生物の産生はわずかに減少したにも拘わらず、 これらの無血清培地で増殖させた細胞増殖は一定であった。

国１１ｖ４ｆ報告 １″″″″″Ａ００訂ｌＵｓ９１１０６８５１フロントページの続き （７２）発明者　マーネイン、アミイ・アシアメリカ合衆国ペンシルベニア州１ ９４６０、フェニックスビル、ウェストリッジ・ガーデンズ　１７３工イ番 （７２）発明者　オカ、メルヴイン・ススムアメリカ合衆国ペンシルベニア州１ ９４７５、スプリング・シティ、ロード・ナンバー１

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. １．（ａ）合成基礎培地： （ｂ）１リットル当たり約１ないし約１０グラムの酵母加水分解物；および（ｃ ）１リットル当たり約０．１ないし約５グラムのデキストランまたはアルブミン よりなる無血清昆虫細胞培養培地。
2. ２．酵母加水分解物を１リットル当たり２グラムの量で存在させる請求の範囲第 １項記載の培地。
3. ３．酵母加水分解物を１リットル当たり５グラムの量で存在させる請求の範囲第 １項記載の培地。
4. ４．デキストランを１リットル当たり１グラムの量で存在させる請求の範囲第１ 項記載の培地。
5. ５．デキストランが約５０００００の分子量を有するデキストランである請求の 範囲第４項記載の培地。
6. ６．アルブミンを１リットル当たり１グラムの量で存在させる請求の範囲第１項 記載の培地。
7. ７．該アルブミンがウシ血清アルブミンである請求の範囲第６項記載の培地。
8. ８．さらに１リットル当たり約０．２ないし約５グラムのアルブミン加水分解物 よりなる請求の範囲第１項記載の培地。
9. ９．該アルブミン加水分解物がラクトアルブミン加水分解物である請求の範囲第 ８項記載の培地。
10. １０．（ａ）合成基礎培地； （ｂ）１リットル当たり約２グラムの酵母加水分解物；（ｃ）１リットル当たり 約１グラムの血清アルブミン；および（ｄ）１リットル当たり約５グラムのアル ブミン加水分解物よりなる無血清昆虫細胞培養培地。
11. １１．該血清アルブミンがウシ血清アルブミンであり、該アルブミン加水分解物 がラクトアルブミン加水分解物である請求の範囲第１０項記載の培地。
12. １２．（ａ）合成基礎培地； （ｂ）１リットル当たり約５グラムの酵母加水分解物；および（ｃ）１リットル 当たり約１グラムのアルブミンよりなる無血清昆虫細胞培養培地。
13. １３．該アルブミンがウシ血清アルブミンである請求の範囲第１２項記載の培地 。
14. １４．（ａ）合成基礎培地： （ｂ）１リットル当たり約５グラムの酵母加水分解物；および（ｃ）１リットル 当たり約１グラムのデキストランよりなる無血清昆虫細胞培養培地。
15. １５．該デキストランがほぼ５０００００の分子量を有するデキストランである 請求の範囲第１４項記載の培地。