JPH06501249A - 膜分離法により精製された糖脂質を製造する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 膜分離法により精製された糖脂質を製造する方法糖脂質は、脂肪酸残基および糖 残基からなる。よく知られている糖脂質の一つはトレハロース脂質（Ｓｕｚｕｋ ｉ等、１９６９、Ａｇｒｉｃ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、、　３３．１６１９〜 １６２７）である。

それは、三糖類トレハロースおよび糖のヒドロキシル基によりエステル化されて いる２個のβ−ヒドロキシα−分枝鎖状脂肪酸（コリノミコール酸からなる。ラ ムノースおよびβ−ヒドロキシ脂肪酸を含有する糖脂質が、ＥＰｏ　１５３６３ ４に記載されている。構造が決定された最初のラムノ脂質は、２分子のし一ラム ノースおよび２分子のβ−ヒドロキシデカン酸からなる（Ｅｗａｒｄｓ　ａｎｄ 　Ｂａｙａｓｈｉ。

１９６５、　Ａｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、、　１１１．４ １５〜４２１）。

これまでに知られている糖脂質は、それぞれの場合における糖部分および脂肪酸 部分によって、２５０と２０００との間の分子量を有している。これらの糖脂質 は、例えば細菌により周囲栄養培地中で分泌されそしていくつかの異なる糖脂質 の混合物として蓄積されることができる（ＥＰ　Ｏ１５３６３４；　Ａｄｖａｎ ｃｅｓ　ｉｎ　Ａｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　１９８０゜２２９〜２５９ ）。

糖脂質は、例えば乳化剤、生体界面活性剤または乳濁液に対する安定剤として使 用することができる。

糖脂質を精製する方法は、抽出、結晶化およびクロマトグラフィー法に基づいて いる（ＥＰ　０２８２９４２；　ｕｓ４　８１２２７２）。しかしながら、これ らの方法においては、多量の溶剤が蓄積される。ＭｕｌｌｉｇａｎおよびＧｉｂ ｂｓ　（Ｊ。

Ｃｈｅｗ、　Ｔｅｃｈ、Ｂｆｏｔｅｃｈｎｏｌ、、１９９０．４７．　２３〜２ ９）は、サーフアクチンおよびラムノ脂質のような生体界面活性剤を精製する限 外濾過法を記載している。しかしながら、該文献に記載されている膜の保持能力 （ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ａｂｉｌｉｔｙ）は、孔サイズが増加するにつれて減少 する。３０．０００のカット−オフサイズ（ｃｕｔ−ｏｆｆ　５ｉｚｅ）を有す る膜の場合においては、これは７７％より大なる糖脂質損失を招く。

驚くべきことには、酸性のｐＨにおいて、糖脂質は、３０、０００より大なる分 子量を有する分子に対するカット−オフサイズを有する膜によって事実上完全に 保持されるということが見出された。

その結果、本発明は精製を、酸性ｐｌＴにおいてそして３０、０００より大なる 分子量を有する分子に対するカッ１−−オフサイズを有する膜を使用して実施す ることを特徴とする精製された糖脂質を製造する方法に関するものである。

本発明を、特にその好ましい実施化において以下に詳述する。

糖脂質は、植物または細菌において見出すことができる（Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ、 　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１９７７：　５ｙｌｄａｋｔ等、２゜Ｎａｔｕ ｒｆｏｒｓｃｈｕｎｇ、　４０ｃ、　１９８５．５１〜６７）。好ましくは、醗 酵が糖脂質の製造に考慮される。この目的のために、微生物をそれ自体知られて いるやり方で培養する。培地中に分泌された糖脂質は、例えば醗酵の終りにおい て、本発明の膜分離法、好ましくは限外濾過を使用して精製される。限外濾過は 、例えばａｏ、　ｏｏｏ〜３００．０００のカット−オフサイズを有する膜を含 有するプレート、管、毛管、スパイラル膜または空洞繊維を使用する装置で実施 することができる。好ましくは、ｉｏｏ、　ｏｏｏ〜２００．０００のカット− オフサイズを有する膜が使用される。カット−オフサイズは、保持される分子の 分子量に関するものでありそして上述した値より大なる分子量を有する分子が保 持されることを意味する。ポリスルホン、ポリアミドまたは酢酸セルローズを膜 物質として使用することができる。

糖脂質は膜により保持されそして精製後にさらに処理加工することができる。

本発明による膜分離法は、酸性のｐ［Ｔ、好ましくは１〜５のｐＨ、特に好まし くは２〜４のｐＨにおいて実施される。

もし必要ならば、ｐＨの調節は、酸またはアルカリを使用して行われる。例えば 、塩酸、硫酸、酢酸、クエン酸、水酸化ナトリウムまたは炭酸ナトリウムを使用 することができる。

本発明の方法は、有利には、ラムノ脂質の精製に使用される。α−Ｌ−ラムノピ ラノシルーβ−ヒドロキシデカン酸、２−０−α−Ｌ−ラムノピラノシルーα− Ｌ−ラムノピラノシル−β−ヒドロキシデカン酸、２−０−α−Ｌ−ラムノピラ ノシルーα−Ｌ−ラムノピラノシル−β−ヒドロキシデカノイル−β−ヒドロキ シデカン酸またはα−Ｌ−ラムノピラノシルーβ−ヒドロキシデカノイル−β− ヒドロキシデカン酸の精製が、特に好ましい。

限外濾過系による糖脂質の精製は、バッチ式または連続的に実施することができ る。濾過溶液の温度は、０℃と７０℃との間、好ましくは１８℃と４０℃との間 に保持される。

膜上の液体の流れの速度は、２ｍ／Ｓと７　ｍ　／　ｓとの間、好ましくは５　 ｍ　／　ｓと５　ｍ　／　ｓとの間に保持される。

濾過装置に対する投入における液体の過剰圧力は３バールと６バールとの間にあ る。濾過距離を横切る圧力低下は、０．５バールと３．５バールとの間にある。

本発明による膜分離法は、勿論、糖脂質の精製に対して使用されるばかりでな（ 、糖脂質の濃縮に対しても使用することができる。

実施例　Ｉ Ｐｓｅｕｄｏｉｏｎａａｓ菌種Ｄｉｓ　２８７４を、ドイツ特許３４０５６６４ により、炭素源としてパラフィンＳ（テトラデカン８９％、ペンタデカン９％） を使用して、栄養溶液中で好気条件下で培養した。醗酵は、０．２ｖ／ｖ／ｍの 通気速度を使用して６．６および７．２のｐ［Ｉおよび３０℃で行った。醗酵は 、７日間で終了した。醗酵溶液は、２．５ｑ／１のし一ラムノーズ成分を有する ラムノーズ−脂質混合物を含有する。

実施例　２ 実施例１から得られた醗酵溶液を、硫酸でｐＨ３に調節しそして次にモジュール チューブ−限外濾過系（ａ＋ｏｄｕｌａｒｔｕｂｅ−ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔ ｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ）　（ＢＯｔｔｃｈｅｒ、＾ｕｓｔｒｉａ）で濃縮した。

次の操作パラメーターを維持した。

投入圧力（ｉｎｐｕｔ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ）　：　５バール排出圧力（ｏｕｔｐ ｕｔ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ）：　１．５バール温　度　＝　３５℃ 流出速度　＋　５７Ｆ！／Ｓ 濾過性能　：　２００ｆ／ｈ 濃度ファクター：３．９ 初期容量　：　１８．６鷹３ 最終容量　：　４．ｈ＋’ 濃縮後、濃縮液は、９．７５ｇ／／のＬ−ラムノース成分を有するラムノース− 脂質混合物を含有する。

実施例　３ 実施例２から得られた濃縮醗酵溶液を、ｐＨ３および一定の容量におけるダイア フィルトレージョンにより水で脱塩した。この目的に対して、モジュールチュー ブ−限外濾過系（ＢＯｔｔｃｈｅｒ、＾ｕｓｔｒｉａ）を使用した。Ｋａｌｌａ −＾１ｂｅｒｔ、　ｆｉｅｓｂａｄｅｎからの０Ｆ−ＰＳ−１００ポリスルフオ ン膜は、１００、０００のカット−オフサイズを有す。次の操作パラメーターを 維持した。

投入圧力　：　５バール 排出圧力　：１５バール 温　度　：　３５℃ 流出速度　：　５ｍ／ｓ 濾過性能　：　５９１／璽２ｈ 溶液の容量　・　４．８ｍ３ 醗酵液は脱塩前２４．５ｍＳ　Ｃａ１−’およびその後２．９＋ａＳ　ｃｍ−’ の導電率を有す。透過液は、０．１ｙ／ｌのＬ−ラムノースを含有する。

実施例　４ 比較のために、ラムノース脂質を含有する醗酵溶液を、それぞれ１０．　ＱＱＱ および１００．０００のカット−オフサイズを有する膜を通した。

操作パラメーター 流　出　二〇、３諺３／ｈ 排出圧力　：　４バール 温　度　＝　３２℃ 膜面積　：　０．４５ｍ” ｐＨ：　３ 模　型　透過液　流量ｌ／譚２ｈ ポリスルホン１０．０ＯＯＤ　透　明　０．８ポリスルホン１０．０ＯＯＤ　透 　明　５０．０両者の場合において、ラムノ脂質の保持は９９％であった。

国際調査報告

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. １．精製を、３０，０００より大なる分子量を有する分子に対するカット−オフ サイズを有する膜を使用して、酸性ｐＨで膜分離法を使用して実施することを特 徴とする精製された糖脂質を製造する方法。
2. ２．ラムノ脂質を精製することを特徴とする請求項１記載の方法。
3. ３．ａ−Ｌ−ラムノピラノシル−β−ヒドロキシデカン酸、２−Ｏ−ａ−Ｌ−ラ ムノピラノシル−ａ−Ｌ−ラムノピラノシル−β−ヒドロキシデカン酸、２−Ｏ −ａ−Ｌ−ラムノピラノシル−ａ−Ｌ−ラムノピラノシル−β−ヒドロキシデカ ノイル−β−ヒドロキシデカン酸またはａ−Ｌ−ラムノピラノシル−β−ヒドロ キシデカノイル−β−ヒドロキシデカン酸を精製することを特徴とする請求項１ 記載の方法。
4. ４．を外濾過を膜分離法として使用することを特徴とする請求項１〜３の何れか の項記載の方法。
5. ５．３０，０００〜３００，０００のカット−オフサイズを有する限外濾過膜を 使用することを特徴とする請求項１〜４の何れかの項記載の方法。
6. ６．１００，０００〜２００，０００のカット−オフサイズを有する限外濾過膜 を使用することを特徴とする請求項１〜５のれかの項記載の方法。
7. ７．方法を１〜５のｐＨで実施することを特徴とする請求項１〜６の何れかの項 記載の方法。
8. ８．方法を２〜４のｐＨで実施することを特徴とする請求項７記載の方法。
9. ９．方法を０℃〜７０℃の温度で実施することを特徴とする請求項１〜８の何れ かの項記載の方法。