JPH06501624A - 腸定着ラクトバシラス - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 腸定着うクトバシラス 本発明は、経口投与後、インビボ（ｉｎ　ｖｉｖｏ　）で腸粘膜にコロナイズし 、定着するようになる（ｃｏｌｏｎｉｚｅ　ａｎｄｂｅｃｏｍｅ　ｅｓｔａｂｌ ｉｓｈｅｄ　）能力を有するラクトバシラスの菌株（ｓｔｒａｉｎｓ　）を単離 する方法、該方法によって得られる菌株及びバクテリア感染の予防又は治療への 該菌株の使用、特に、該菌株の一種によって発酵されたオートミール（ｏａｔｍ ｅａｌ　）がベースの栄養分溶液を含む組成物の形態での使用に関する。

多数の人々が、乱された腸内微生物叢（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｆｌｏ ｒａ　）を有している。即ち、有益な腸内バクテリアと有害な腸内バクテリアの バランスが乱されている。例えば、ストレス、胆汁酸塩の発生、ダイエツト等を 含むいくらかの因子が、バクテリア叢（ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｆｌｏｒａ　）に 影響を及ぼす。しかしながら、最も重要なことは、現在の抗生剤治療は長期間正 常な叢を破壊することが可能で、その結果正常な発酵過程を除去することである 。発酵過程が妨げられ、有益なバクテリア数が減少すると、その結果、結腸の粘 膜は、潜在的に悪性のバクテリア数が急激に増大すると同時に、衰えそして機能 を停止する。このようなバクテリアは、旨（機能していない粘膜を貫通し、身体 の器官に感染し、身体中の膿汁の病巣（ｐｕｓ　ｆｏｃｉ）を伴ういわゆる集中 治療疾患（ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ−ｃａｒｅ−ｄｉｓｅａｓｅ）　、更には、ひょ っとすると、身体のほとんどの器官の機能破壊、器官の崩壊（ｃｏｌｌａｐｓｅ 　ｏｆ　ｏｒｇａｎｓ）に至る。腹腔内の膿瘍（ａｂｓｃｅｓｓ　）により惹起 される血液中毒（ｂ　ｆｏｏｄｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　）　、敗血症は、尚、高死 亡率の腹部手術に関連する非常に一般的な外科的合併症（ｓｕｒｇｉｃａｌｃｏ ｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ　）である。このような患者は、現在、抗生物質の投与及 び膿瘍が存在し得る範囲の外科的治療によって治療される。現在では、抗生物質 は、手術後の感染及びそれによって起こる病気の危険を減少させるために、腸の 外科手術以前に慣用的に投与されている。しかしながら、抗生物質での処置は、 高価であり、更にアレルギー、正常な腸内細菌叢（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｆｌ ｏｒａ）の破壊、病原性のより高いバクテリアの異常増殖等の各種合併症の危険 を伴う。

ラクトバシラス（１ａｃｔｏｂａｃｉ　１１　ｉ）が腸の粘膜上で好ましい効果 を有しているかもしれないという事は、再度持ち出された古（からのアイデアで ある。しかしながら、微生物が関与しているか否かに関して及び腸の生態学（ｅ ｃｏｌｏｇｙ　）に関しては多くの不明な点がある。これに関連する別の問題と しては、ラクトバシラス属の分類が完全でなく、腸の機能に好適な菌株を特定す ることが困難であるという問題がある。結局、今日一般的に受け入れられている と思われることは以下の通りである。

一うクトバシラス属のバクテリアが、関係する栄養素（ｆｏｏｄｓｔｕｆｆ　） 又は腸に関係なく、種々の方法で、病原性のバクテリアの定着を妨げる明白な能 力を有している。

−ラクトバシラスの成る菌株は、腸を保護したり活性化する点において、同種の 他の菌株に比べて、より効果的である。

一うクトバシラスによって発酵された食物が、コレステロール減少効果を有する ことを証明されたが、これはおそらく腸内でのコレステロール産生を抑止するか らであり、更にはおそらく該バクテリアがステロイドの産主にコレステロールを 使用するからでもあろう。

−大量のラクトバシラスの消費は、腸の運動性の活性を向上させるが、この効果 の原因は不明である。

−腸内にラクトバシラスが多くの割合で存在すると、癌に対抗する。これは種々 の根拠を有していると思われる。

第１に、成るラクトバシラスは、酵素ナイトライドリダクターゼ（ｎｉｔｒｉｔ ｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ）によって腸内のニトロソアミンの産生を阻害する。ニト ロソアミンは発癌性である。第２にラクトバシラスは、腸内で成る種のバクテリ アによって産生された酵素が、潜在的な発癌性物質を活性化することを妨げる。

最後に、ラクトバシラスは、癌腫瘍に対し成長を制限する効果を有するとの徴候 があり、それはおそらく免疫防御システムのマクロファージが、ラクトバシラス の存在により活性化されるためであろう。

今日量も慣用されている食糧中に使用されているラクトバシラスの決定的な弱点 は、胃及び十二指腸を通過する間に、これらの微生物の生存率（ｓｕｒｖｉｖａ ｌ）が低いことである。このことから、“アシドフィルスフィル”（ａｃｉｄｏ ｆｉｌｕｓｆｉｌ　）と呼ばれる製品、即ち、ヒトの糞便から直接単離されたラ クトバシラスアシドフイルスの菌株を用いて、ミルクを発酵させたアシドフィル スサワーミルクの開発が行なわれた。エル、アシドフィルス（Ｌ。

ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ　）は、胃腸管の上部をうまく通過する。しかしながら 、より長時間腸内で微生物叢（ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ）に対して効果を有するた めには、ラクトバシラスが腸内で定着するようにできるのが必須である。リドベ ック（Ｌｉｄｂｅｃｋ　）らによると（Ｓｃａｎｄ　Ｊ　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ 、　４．５３１−５３７頁、　１９８７）、腸の微生物叢中のラクトバシラスの 数の増加は、ラクトバシラスアシドフィルスを含む調製物の消費の後に起こり、 その消費が終わると次第に減速し、その結果、供給しない場合は９日後に、バク テリアの叢は、その元の組成物に再度もどることとなる。

ＥＰ−Ａ２−０１９９５３５は、ヒトの糞便から単離され、インビトロの試験で 粘膜細胞に付着する事ができる、ラクトバシラスアシドフィルスＡＴＣＣアクセ ツションＮｏ、５３１０３の生物学的に純粋な培養物について記載している。し かしながら、インビボでの付着については立証されていない。

ＷＯ８９１０５８４９には、ブタの胃腸管から単離され、例えば、インビトロで ブタ由来の胃腸表皮細胞への付着、酸及び胆汁に対する耐性（ｔｏｌｅｒａｎｃ ｅ　）によって選択された乳酸バクテリアが記載されている。該バクテリアは、 ミルクの発酵に使用でき、これは、特に（ｉ、　ａ、　）大腸菌性の下痢を予防 乃至治療するために子ブタに与えられる。

今日商業的に使用されているラクトバシラスの菌株は、結局、例えばミルクのよ うな現在の一次産物中で一応増殖できる能力について選択されたものである。も し成る菌株が、任意の好ましい影響を及ぼすならば、それが腸内で定着されるよ うになり、且つ、存在する微生物叢と競合することが、疑いもなく必要不可欠で ある。成るラクトバシラス菌株が、この競合に耐えるために必要な特性が何であ るかという知見は、はとんど知られていない。

本発明は、インビボでヒトの腸粘膜に定着乃至コロナイズ（ｃｏｌｏｎｉｚｅ） 　Ｌ定着（ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　）するようになる能力を有するラクトバシ ラスの菌株を単離する方法であって、ラクトバシラスがヒ１−腸粘膜から単離さ れ、適当な栄養培地中で純粋培養され（ｐｕｒｅ　ｅｕｌｔｕｒｅｄ　）　、腸 内でコロナイズし確立するようになる能力について選択されることを特徴とする 方法に関する。

腸内でコロナイズする該菌株の能力は、好ましくは、経口投与、及びそれに続く 投与完了後生なくとも１０日で腸粘膜上への出現（ｏｃｃｕｒｅｎｃｅ　）の確 認によって、試験される。

単離された菌株の相補的な選択（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙｓｅｌｅｃｔｉｏ ｎ　）は、コロナイゼーション（ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ）の試験の前後に、 各種の機能的及び技術的特性、例えば、胆汁耐性、ｐＨ耐性、要求される物質、 好ましくはオートミールの発酵能力、香味（ｆｌａｖｏｕｒ　）を産生ずる能力 、凍結乾燥に耐える能力、抗生物質耐性等の評価によって行うことができる。

胃腸管中をうまく通過するためには、選択された菌株は、ｐＨ１，０で３０分間 生存し、且つ、０．１％胆汁の存在下で生育することができるのが適切である。

本発明は、また、上記記載の単離方法によって得られる、インビボでヒト腸粘膜 にコロナイズする能力を有するラクトバシラス菌株にも関する。一つの理論によ ると、通性的にヘテロ発酵性の（ｆａｃｕｌｔａｔｉｖｅｌｙ　ｈｅｔｅｒｏｆ ｅｒｍｅｎｔａｔｉｖｅ）ラクトバシラスの菌株は、腸内での確立にとって好ま しい型を構成する。

特に、本発明は、インビボでヒト腸粘膜にコロナイズする能力を有する新規なラ クトバシラス菌株に関し、該菌株は、ドイツのブラウンシュウニイブ（Ｂｒａｕ ｎｓｃｈｗｅｉｇ）の、デーニスエム（ＤＳＭ）−ドイツチェ　サムルング　フ ォラ　ミクロオルガニスメン　ラント　ツエルクルッーレンゲーエムベーハ−（ Ｄｅｕｔｓｃｈｅ　Ｓａｍｍｌｕｎｇ　ｖｏｎＭｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ 　ｕｎｄ　Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ　ＧｍｂＨ）に、ブダペスト条約に従って 、１９９１年７月２日に寄託されており、それは、 ラクトバシラス　プランタラム　２９９　ＤＳＭ　６５９５（Ｌａｃｔｏｂａｃ ｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ラクトバシラス　力セイ　ニスエスピー８　 ラムノサス２７１ＤＳＭ　６５９４ （Ｌａｅｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｅａｓｅｉ　ｓｓｐ、　ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） である。

本発明は、また、本質的に対応するＲＥＡ−パターンを有するその変異体（ｖａ ｒｉ、ａｎｔ）にも関する。Ｒ，Ｅ　Ａ−パターンは、以下に記載した方法に従 って制限酵素で分解された、ＤＮＡのアガーゲル上での電気泳動において形成さ れるパターンである。それらのＲＥＡ−パターンによる菌株の特徴付けによって 、使用された単離物の同定が、確立され得る。これは、以前は不可能であったこ とである。ＲＥＡ−パターンが異なる密接な関係のあるラクトバシラス菌株は、 腸の上皮への付着能力について相違点を示す。

本発明は、胃腸管中の感染の予防または治療のための組成物にも関し、該組成物 は、本発明の方法に従って得られる、インビボでヒトの腸粘膜にコロナイズし定 着する（ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　）ようになる能力を有するラクトバシラスの 菌株を、慣用されている担体と組合わせて含む。

特に、本発明は菌株 ラクトバシラス　プランタラム　２９９　ＤＳＭ　６５９５ラクトバシラス　カ セイ　ニスエスピー、ラムノサス２７１ＤＳＭ　６５９４ のいずれかをまたは本質的に対応するＲＥＡ−パターンを有するその変異体を含 有する組成物に関する。

慣用されている担体としては、例えば、問題のバクテリアによって発酵された生 理学的に許容される基質及び、特にスターチやミルクをベースとする種々の種類 の食品（ｆｏｏｄｓｔｕｆｆ　）が挙げられるが、また、食塩水（ｓａＨｎｅ） や水のような不活性な固体または液体の物質も挙げられる。

適当な基質は、胃腸管で再吸収されず、ラクトバシラスで発酵されたときに短鎖 の脂肪酸（ｓｈｏｒｔ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄｓ　）を形成する液体または固体 の繊維を含むのがよい。適当なスターチ含有基質の例としては、オート麦（ｏａ ｔｓ）−、小麦（ｗｈｅａｔ　）のような穀類（ｃｅｒｅａｌｓ　）　、とうも ろこし、じゃがいものような根菜類及びグリーンバナナのような成る種のフルー ツが挙げられる。

病気及び手術に関係する患者の現代の医科学的治療は、大部分、静脈からの栄養 素の供給に基づくものであって、それによって、その後の帰結として、腸には発 酵すべき物質が供給されない。結腸（ｃｏｌｏｎ　）は、身体自身の発酵タンク として機能し、その目的は、結腸そのものの機能のためだけでなく、例えば、重 金属、過剰量のコレステロール等の有害な物質を減少させるためにも有益な栄養 素を産生することにある。結腸が機能するためには、適当なバクテリア及び基質 、特に、スターチ及び食物繊維が供給されなければならない。結腸の内容量の約 半分はバクテリアであり、大半は嫌気性のタイプである。最も重要なバクテリア は、結腸の粘膜上に存在するバクテリアである。結腸のバクテリアの中で、少数 の潜在的に有害なタイプがある。有用なバクテリアが存在する限り、有害なバク テリア叢は、抑制される。最近の研究によって、結腸の粘膜が発酵産物からその 栄養素の多くを、主に短鎖の脂肪酸の形態で得ることが判明した。正常な発酵過 程には、−日あたり約３０ｇの食物繊維の供給と、適当なバクテリアの存在が必 要である。

本発明の組成物にとって好ましい基質は、優れた栄養価（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａ ｌ　ｖａｌｕｅ　）を組成物に与えるものでもあり、オートミールを基本とした 栄養液である。穀類のオート麦は、多（の態様において発酵にとって良い基質で あることが示された：それは蛋白質、炭水化物、脂肪、食物繊維及びいわゆるβ −グルカンと呼ばれる水溶性繊維を豊富に含有する。加えて、オート麦またはオ ートミール脂肪は非常に多くの量の表面活性を有する燐脂質を有し、これは、胃 粘膜バリアー“浸食インヒビター（ｃｏｒｒｏｓｉｏｎ　１ｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ）”として機能し、粘膜の保護を行う。最後に、オート麦の蛋白質のアミノ酸組 成物は、非常にヒトの身体に必要なものに相当する。Ｗｏ　８９１０８４０５に おいて、栄養素組成物は、腸の摂食（ｅｎｔｅｒａｌ　ｆｅｅｄｉｎｇ　）に適 当である旨記載され、それは、オートミールのα−アミラーゼ、おそらくプロテ アーゼ、及びβ−グルカナーゼによる酵素的分解、熱処理、並びに自発的に腸に 付着する能力を有するラクトバシラスによる発酵の組み合わせによって得られる 。

上記特許出願に記載されている栄養素組成物は、本発明のラクトバシラス菌株を 組み合わせると、集中治療病（１ｎｔｅｎｓｉｖｅ−ｃａｒｅ−ｄｉｓｅａｓｅ ）又は器官虚脱（ｏｒｇａｎｃｏｌ　１ａｐｓｅ）の犠牲となった患者の特別な 治療、及び例えば潰瘍性の大腸炎のような各種の腸の疾患の治療に、大手術後の 通常治療に関連する患者への栄養投与のための優れた組成物である。

本発明のオートミールをベースとする栄養組成物（ｎｕｔｒｉｅｎｔ　ｃｏｍｐ ｏｓｉｔｉｏｎ）中で使用するためには、ラクトバシラス菌株は以下の条件を満 たさなければならないニーオート麦の優れた発酵； −（胃のｐＨに相当する）ｐＨ１，０において３０分間の生存； 一胆汁酸塩（ｂｉｌｅ　５ａｌｔｓ）の存在下での生存及び生育；−腸粘膜上に 着定（ｓｅｔｔｌｅ）　Ｌ残存（ｒｅｍａｉｎ）する能力。

また、発酵中のｐＨ値が、他のバクテリアの生育を止めるために、速（低下する ことも必須である。

腸内にコロナイズし又は付着（ａｄｈｅｒｅ）する能力を有するラクトバシラス の投与により、異なるバクテリア叢が腸でコロナイズすることを抑制することが でき、その結果、腹部の手術後の合併症のようなバクテリア感染に関係する敗血 症（ｓｅｐｓｉｓ）の危険を減少させることとなる。この治療は、抗生物質の形 態で今日使用されている慣用的な治療と同様に有効であるように思われる。従っ て、腸の手術を受けた患者か、抗生物質よりもむしろラクトバシラスで前処理さ れるほうが妥当であるように思われる。これは、正常な腸内細菌叢を破壊しない ので、潜在的な二次的な効果の少ない治療のより安価な形態が確立され得ること を意味する。

本発明は、また、外科手術、手術後のリハビリテーション等に関するバクテリア 感染の治療又は予防のために、抗生物質の代りに、本発明のラクトバシラス菌株 によって発酵された栄養組成物を使用する用途にも関する。

それは、特に、ラクトバシラス　プランタラム　２９９によって発酵された栄養 素溶液をベースとするオートミールに関する。

試験動物での実験では、同一種の動物の腸粘膜から単離したラクトバシラス菌株 を含む組成物で治療した動物において、統計学的に有効な生存率を示した。ラッ トでの試験では、腸内で実験的に誘発された大腸炎（ｃｏｌｉｔｉｓ、　ｃｏｌ ｉｔ）及び潰瘍の優れた予防とより迅速な治癒（ｈｅａｌｉｎｇ　）を示した。

本発明の組成物は、任意の適当な方法で投与することができ、好ましくは経口又 は直腸に、例えば浣腸の形態で投与することができる。それはまた、胃を通して 腸内に挿入された又は直接腸内に挿入されたカテーテルを通して腸投与（ａｄｍ ｉｎｉｓｔｅｒｅｄ　ｅｎｔｅｒａｌｌｙ）することができる。試験によって、 例えばオートミール粥（ｏａｔｍｅａｌ　ｇｒｕｅｌ　）又はβ−グルカンの形 態の食物繊維を供給すると効果が改善されることが示された。この治療は、１− ２週間の期間−日１回又は数回行う。

同封の図面Ｆｆｇ、１−２は、新規ラクトバシラス菌株２９９及び２７１のＲＥ Ａ−パターンを示し、Ｆｉｇ、３は、それぞれ、ラクトバシラスによって発酵さ れたオートミール粥の経口投与の前、直後及び数日後の回腸中のラクトバシラス の濃度を示す。

実施例 ヒト由来のラクトバシラス菌株の単離 ヒト腸粘膜上にコロナイズし定着するようになる能力を有する菌株を単離するた めに、ラクトバシラス菌株をヒト腸粘膜からサンプリングした。結腸からのバイ オプシーは、エンテロスコピー（ｅｎｔｅｒｏｓｃｏｐｙ　）によって行い、小 腸（空腸及び回腸）由来の腸粘膜片を、外科手術に関連して取り外した。粘膜試 料を、直ちに、特別の培地（０，９％ＮａＣｌ、０．１％ペプトン、０．１％Ｔ 　ｗ　ｅ　ｅ　ｎ　８０及び０．０２％シスチン；すべで値は％重量／容量で示 す。

）に入れ、２分間超音波浴でホモジナイズし、１分間攪拌し、次いで、ロゴサア ガー（Ｒｏｇｏｓａ　ａｇａｒ　）　（デイフコラボラトリーズ、デトロイト、 ミシガン、ＵＳＡ、％Ｄｊ、ｆｃ。

Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｄｅｔｒｏｉｔ、　Ｍｉｃｈｉｇａｎ、　ＵＳＡ ）上に置いた。プレートを３７℃で２日間（２ｄ）（ガスパックアンアエロビッ クシステム、Ｇａｓ　Ｐａｋ　Ａｎａｅｒｏｂｉｃ　Ｓｙｓｔｅｍ、Ｂ　Ｂ　Ｌ 　）嫌気的にインキュベートした。１個から３個のコロニーを、それぞれのプレ ートからランダムにピックアップし、ロゴサアガー上で５〜９回純粋培養して生 育し、−８０℃で凍結バッファー中で濃縮培養物（ｄｅｎｓｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ 　）として保存した。総数２０９個のラクトバシラス菌株を、６１種の異なった 患者（ｓｕｂｊｅｃｔｓ）から単離した。単離物の全てを、４９種の異なった炭 水化物を発酵する能力について、ＡＰ１１モンタリュー、ペルス−、フランス（ Ｍｏｎｔａｌ　１ｅｕＶｅｒｃｅｕ、　Ｆｒａｎｃｅ）から販売されているテス トキット、ＡＰＩ　５０　ＣＨによって特徴付けた。小腸と大腸との間でラクト バシラス叢の組成において、重要な相違点は見られなかった。

異なった群の代表的な菌株を、ｐＨ耐性、胆汁の存在下での生育能力及びオート ミール粥を発酵する能力について評価した。

ｐＨ耐性は、０，１ｍｌのバクテリア懸濁液（ロゴサブロス（Ｒｏｇｏｓａ　ｂ ｒｏｔｈ）中で培養し、遠心後、生理食塩水に再懸濁した１０９ＣＦＵ／ｍｌ） を２ｍｌの燐酸塩バッファー、ｐＨ１，０に加えて試験した。３０分後、ロゴサ アガープレートに接種し、もし３７℃で３日間インキュベーション後生育が観察 されたなら、試験は陽性と考える。試験した菌株の数種のみがこの試験をパスし た。

胆汁存在下での生育は、ロゴサアガープレート中それぞれ０．１％及び０．１５ ％のビーフ胆汁（ｂｅｅｆ　ｂｉｌｅ　）存在下３７℃、３日間嫌気的に培養し たラクトバシラスの単離物を生育させることによって試験した。約８０％の菌株 が、０．１％胆汁の存在下で生育したが、０．１５％胆汁中ではわずか１８％が 生育し得るに過ぎなかった。

これら試験結果に基づき、２０種の異なるラクトバシラス菌株を選択し、更に研 究した。

ヒトにおけるインビボでの腸のコロナイゼーション健常被験者にある期間毎日、 上記に従って注意深（選択された２０種の異なったラクトバシラス菌株の混合物 を含む発酵されたオートミール粥を与えた。その後、消費された菌株のうちどの 菌株が、小腸及び大腸からの粘膜上に観察できるかを調査した。

発酵されたオートミール粥を、以下に記載のプロトコールに従って作った。これ は、以下の表１に示したように、この実験では、ラクトバシラスのそれぞれ菌株 で容易に行なわれた。各調製物は、最終生成物が凍結乾燥品１ｇあたす８Ｘ１０ 　ＣＦＵの割合になるように混合した。

この研究には、３１〜５６歳の間の１２人のボランティアが参加し、各人が、水 １ｍｌあたり１ｇの凍結乾燥品をベースにした１００ｍ１の液体オートミール粥 の１０ボトルを受取った。オートミール粥の消費の開始前、被験者が１０日間毎 日朝食として１００ｍ１のオートミール粥を消費した１１日後、及び更に１０日 後（即ち、オートミール粥消費完了後１１日である）に、腸粘膜から試料を採取 した。腸の試料は、ワトソンカプセル（Ｗａｔｓｏｎ　ｃａｐｓｕｌｅ）によっ て小腸（回腸）から及びレフトスコープ（ｒｅｃｔｏｓｃｏｐｅ）によって直腸 からバイオプシーとして採取した。バイオプシーは、上述したように調製され、 生存ラクトバシラスの量を分析した。それぞれの試料から、約１０個のコロニー をロゴサアガープレートからピックアップし、それらを純粋培養後、同定される まで一８０℃で凍結保存した。

全ての単離物を、上述のようにＡＰＩ　５０　ＣＨ上で試験した。試験した菌株 のいずれにも相当する又は大部分相当すると考えられる単離物について、以下に 示す方法に従ってプラスミド分析及び制限エンドヌクレアーゼ分析によって、更 に試験した。

一般的な傾向として、腸粘膜上のラクトバシラスの量は、発酵したオートミール 粥の消費の間増加し、この増加は、投与完了後１１日間続いたのが観察された。

図３において、回腸中のラクトバシラスの対数濃度（ｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃｃ ｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　）を、試験開始前（ｔ＝０）、試験完了日（ｔ＝１ ）及び更に１０日後（ｔ＝１１）について、カラムダイアグラムで示す。小腸に おいて増加はより明確であるが、一方、大腸においては、全体としてのラクトバ シラスの量がより大きい。更に、グラム陰性嫌気性バクテリアの結腸での量が、 発酵したオートミール粥の消費後減少したのが観察できた。

以下の菌株がラクトバシラス投与完了後１０日で腸粘膜上に上位で観察された。

ラクトバシラス　プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕ ｍ）　２９９は、１１被験者中で観察された（５被験者においては小腸において のみ、５被験者においては大腸においてのみ。）。

ラクトバシラス　力セイ　ニスエスピー、ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌ ｕｓ　ｃａｓｅｉ　ｓｓｐ、　ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）　２７１は、４被験者中で 観察された（１被験者においては小腸においてのみ、他の２被験者においては大 腸においてのみ。）。

ラクトバシラス　レウテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｒｅｕｔｅｒｉ　） １０８は、４被験者中で観察された（１被験者においては小腸においてのみ、１ 被験者においては大腸においてのみ。）ラクトバシラス　ムリナス／カセイ　ニ スエスピー、トレランス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍｕｒｉｎｕｓ／ｃａ ｓｅｉ　ｓｓｐ、　ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）２９４は、２被験者中で観察された。

完了した投与後１１日に再単離した菌株は、小腸において約３×１０３〜１０５ ＣＦＵ／ｇ粘膜の濃度で、大腸において１０３〜３Ｘ１０７ＣＦＵ／ｇ粘膜の濃 度で、粘膜上で観察された。

オートミール粥の調製 発酵したオートミール粥を３段階で調製した：（ｉ）　１２９５　ｇのオートミ ール（ＭＰ−４５０、ノードーミルズ、ジャーナ（Ｎｏｒｄ−Ｍｉｌｌｓ、　Ｊ Ｍｒｎａ）　、蛋白量１４．２％、灰分量（ａｓｈ　ｃｏｎｔｅｎｔ　）　２． １％）、１２９．５ｇの酵素混合物（ノード　モルト（ＮｏｒｄＭａｌｔ）　、 ”）−ダーハム（Ｓ？５ｄｅｒｈａｍｎ）　）及び５３９０ｇの水道水（ｔａｐ 　ｗａｔｅｒ　）を混合し、ゆっくり攪拌しながら９５℃に加熱した。粥を、５ ０℃に冷やし、１％β−グルカナーゼ（重量／容量）を加え（ＧＶ−Ｌ、グリン ドステッドプロダクツ（ＧｒｉｎｄｓｔｅｄＰｒｏｄｕｃｔｓ）　Ａ　／　Ｓ　 、ブラバンド（Ｂｒｂａｎｄ）、デンマーク）、その後２時間５０℃でインキュ ベートした；（ｉｉ）　粥に新鮮なラクトバシラスを接種し、３７℃で１５−２ ０時間発酵させた。ｐＨは、３．４〜３．９であった。発酵は、異なった菌株を 用いてそれぞれ別々に行い、生成物１　ｍ　ｌあたり、コロニーフォーミングユ ニット、ＣＦＵの数は、ロゴサアガー上で６×１０６〜２×１０８であった（３ ７℃で２０時間嫌気的に）。

（ｉｉｉ）発酵した粥を、凍結乾燥した。各生成物を、すべての菌株においてＣ ＦＵ／Ｈの値が同じになるような割合に混合した。その混合物に、２０％（Ｗ／ Ｗ）の大豆粉（蛋白質５１％、灰分量５．５％、脂肪１％）を追加した。この強 化混合物は、２ｘｌＯＣＦ　Ｕ　／　ｇを含んでおり、−１８℃で保存した。発 酵していないオートミール粥を、発酵すること無（上記と同様な方法で作製した 。

オートミール粥を、上述した腸のコロナイゼーション試験で選択された２０菌株 の全てについて作製し、凍結乾燥前後での濃度及び香味（ｆｌａｖｏｕｒ　）に ついて評価した。結果を以下の表１に示した。

表１ 臨床試験のために選択されたラクトバシラス菌株菌株　＊＊＊オ 種類　ＣＦＵ　７ｇ　ＣＦＵ　／　ｇ　香味番号 １３８　アグリゲイティング　８．８　ｘｌｏ　１．７８ｘｌＯ１（”ａｇｇｒ ｅｇａｔｉｎｇ”） １３２　エル、サリバリウス　１．Ｉ　ＸＩＯ６，５ＸＩＯ３（Ｌ、５ａｌｉｖ ａｒｉｕｓ） ４７　エル、レウテリ　１．２　ｘｌｏ　３．７　ｘｌｏ　１（Ｌ、ｒｅｕｔｅ ｒｉ） １０８　エル、レウテリ　１．５　ＸＩＯ１，８８Ｘ１０　１（Ｌ、ｒｅｕｔｅ ｒｉ） ９８　エル、カセイ シュードプランタラム　１．６３ｘ１０　６．６　ｘｌＯ２（Ｌ、ｃａｓｅｉ　 ｐｓｅｕｄ。

−ｐｌａｎｔａｒｕｍ） ２９２　エル、ガフセリ　１．５８ｘｌＯ５，Ｉ　ＸＩＯ４（Ｌ、ｇａｓｓｅｒ ｉ） ２９９　エル、プランタラム　１．９２ｘｌＯ６，７１Ｘ１０　５（Ｌ、ｐｌａ ｎｔａｒｕｍ） 表１（つづき） 菌株　＊＊＊オ 種類　ＣＦＵ　７ｇ　ＣＦＵ　／　ｇ　香味番号 １３６　エル、カセイ　カセイ　３．５　ＸＩＯ１，４８Ｘ１０　２（Ｌ、ｃａ ｓｅｉ　ｃａｓｅｉ） Ａ１　エル、プランタラム　２．２７Ｘ　１０　４．１５Ｘ　１０　５（Ｌ、　 ｐｌａｎｔａｒｕｍ） ２７１　エル、カセイ　ラムノサス （Ｌ、ｃａｓｅｉ　４．３Ｘ１０　６．１０Ｘ１０　４ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ２２７　エル、ブチネリ　９．４５ｘｌＯ１，８１Ｘ１０　１（Ｌ、ｂｕｃｈｎ ｅｒｉ） １４０　エル、ガフセリ　１．２　ＸＩＯ８，５ＸＩＯ４（Ｌ、ｇａｓｓｅｒｉ ） ２９４　エル、ムリナス／カセイトレランス（Ｌ、ｍｕｒｉｎｕｓ／　１．６３ Ｘ１０　１．３　ＸＩＯ３ｃａｓｅｉ　ｔｏｌｅｒａｎｃｅ） ２８３　エル、プランタラム　７．４３Ｘ１０　７．５５Ｘ１０　４（Ｌ、ｐｌ ａｎｔａｒｕｍ） 零＊８７ ２８２　クラスター　２５　７．８　ｘｌＯ６，６５ｘ１０　２（ｃｌｕｓｔｅ ｒ　２５） 表１（つづき） 菌株　＊＊＊オ ＊本　ＣＦＵ　／ｇ　ＣＦＵ　／　ｇ　香味番号 ＊本　８７ ９６　クラスター　１９　４．９　ＸＩＯ４，３ｘｌｏ　３（ｃｌｕｓｔｅｒ　 １９） ＊本　９９ ９９　クラスター　１２　４．６　ｘｌＯ１，３９ｘ１０　４（ｃｌｕｓｔｅｒ 　１２） 本　＊本　９８ ９９　クラスター　１２　１．ＯＸＩＯ１，６ＸＩＯ２（ｃｌｕｓｔｅｒ　１２ ） ３０８　エル、アシドフィルス　５．９　ｘｌｏ　１．Ｏｘｌｏ　３（Ｌ、ａｃ ｉｄｏｐｈｉｌｕｓ） ２８０　エル、サリバＩ功ス　３．Ｏｘｌｏ　２．４３ｘ１０　３（Ｌ、５ａｌ ｉｖａｒｉｕｓ） 本　凍結乾燥後 ＊本　クラスターナンバリングは、モリン　ジー（Ｍｏ　１１ｎＧ）らによる（ 発行準備中）　（ｕｎｄｅｒ　ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ　）腸関連うクトバシラ スに関する数の分類（ｎｕｍｅｒｉｃａｌ　ｔａｘｏｎｏｍｙ）についての研究 を参照するものである。

本本本５−１の評価；こよる。

発酵によってオートミール粥に好ましい香味を与える能力を、異なった菌株によ って発酵したオートミール粥を判断する４名からなる“エキスパートパネル（ｅ ｘｐｅｒｔ　ｐａｎｅｌ）”によって判断した。香味は、５から１と下がってい く等級で評価し、５は“とてもよい”との判断を示し、１は“味気無い（ｕｎｓ ａｖｏｕｒｙ　）”との判断を示す。２０種の選択した試験菌株の評価を上記の 表１に示す。

オートミール粥の発酵 優勢な量で腸粘膜で見つけられた４種の菌株を、オートミール粥を発酵させる能 力、凍結乾燥に耐える能力及びオートミール粥における香味の改善について更に 調査した。

オートミール粥を発酵する能力は、ｐＨを４．０未満に減少させる能力及び＞１ ０　ＣＦＵ／ｇ湿重量のレベルでＣＦＵを形成する能力によって判断した。

オートミール粥中凍結乾燥に耐える能力は、別の選択基準である。この関係にお いて、ＣＦＵの濃度を、凍結乾燥後に測定した。

オートミール粥での上記試験の結果を、以下の表２に示す。

表２ 菌株２９９　２７１　２９４　１０８ 最終ｐ　Ｈ，３，６３，８３，４３，８酸価　８．０　６．５　８．１　６．５ Ｌ−ラフチー）ｇ／１００ｇ　Ｏ，１８０，４００，３２０，２５（ｌａｃｔａ ｔｅ） Ｄ−ラクテート　ｇ／１００ｇ　Ｏ，３９００，０３１０，２４０，１９総ラク テート　ｇ／１００ｇ　Ｏ，５７０，４３０，５５０，４４ｐ−ラクテート　％ 　６９　７　４３　４４アセテート　ｇ／１００ｇ　Ｏ，００８４０，０１３０ ，１３０，００２６（ａｃｅｔａｔｅ） 凍結乾１１の減少　％　６５　８６　９４　９８加えて、選択された４種の菌株 の香味を、上述した同じ評価記号を用いて、一方では市販されているヨーグルト 培養物（ストレプトコッカス　サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　 ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）及びラフトノくシラスブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂ ａｃｉｌｌｕｓ　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ））及び他方では市販されているアシド フィルスサワーミルク培養物（ラクトバシラス　アシドフィルス）との比較によ って評価した。結果を以下の表３に示す。

ヨーグルト　アシドフィルス　２９９　２７１　２９４　１０８サワーミルク これらの値を基にして、菌株２９９及び２７１が特別な重要性があると判断し、 更に以下に詳細に記載する。

ラクトバシラス菌株２９９及び２７１の記載菌株２９９及び２７１は、共に健康 なヒト腸粘膜から単離され、ドイツチェ　サムルング　フォノ　ミクロオルガニ スメン　ラント　ツエルクルツーレン　ゲーエムベーノ１−に、１９９１年７月 ２日に寄託され、寄託番号Ｄ　５Ｍ６５９５　（２９９）及びＤＳＭ６５９４　 （２７１）が付与さ菌株２９９及び２７１は、グラム陽性であり、ｐＨ５゜５で のロゴサアガー上で生育するカタラーゼ陰性かん菌（ｃａｔａｌａｓｅ　ｎｅｇ ａｔｉｖｅ　ｒｏｄｓ）である。異なった炭水化物を発酵する該菌株の能力を、 表４に示す。試験は、製造業者の説明書に基づき、ＡＰＩ　５０ＣＨによって行 った。

表４ 異なった炭水化物から酸を生成する能力菌株 ９、β−メチル−キシロシド　−　− （Ｒｈａｍｎｏｓ） １６、ズルシトール　− １７、イノシトール　＋ 表４（つづき） 菌株 ２０、α−メチル−Ｄ−マンノシド　＋　＋２１、α−メチル−Ｄ−グルコシド 　−　＋２２、Ｎ−アセチル−グルコサミン　＋　＋（Ａｒｂｕｔｉｎ） ２５、エスクリン　＋　＋ （Ｅｓｃｕｌｉｎ） ３４、メレチトース　＋　＋ 表４（つづき） 菌株 （Ａｍｉｄｏｎ） ３７、グリコーゲン　−　− （Ｇｌｙｃｏｇｅｎｅ） ３９、β−ゲンチオビオース　＋　＋ ４０、Ｄ−ツラノース　＋　＋ （Ｄ　−ｔｕｒａｎｏｓｅ） ４１、Ｄ−リキソース　＋ ４２、Ｄ−タガトース　＋ ４５、Ｄ−アラビトール　−　− ４６、Ｌ−アラビトール　−− ４７、グルコネート　＋　＋ （Ｇｌｕｃｏｎａｔｅ） 表４（つづき） 菌株 （２−Ｋｅｔｏ−ｇｌｕｃｏｎａｔｅ）表現型上は、菌株２９９はラクトバシラ ス　プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍ）　（ラ フィノース（ｒａｆｆｉｎｏｓｅ）のみがエル、プランタラムＡＴＣＣ１４９１ ７Ｔの試験パターンから逸脱した。これは、種エル、プランタラムの代表菌株（ ｔｙｐｅ　５ｔｒａｉｎ　）　、即ち、種（ｓｐｅｃｉｅｓ　）を決定する菌株 である。）として同定できる。２７１は、ラクトバシラス　力セイ　ニスニービ ーエスピー、ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃａｓｅｉ　５ｕｂｓ ｐ、　ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）　（この種の代表菌株と完全に対応する）として同 定できる。

遺伝子型（ｅｎｏｔｙｅ）の記載 上記２種の菌株を、ＥｃｏＲＩでの切断に関して、制限−エンドヌクレアーゼ分 析−ＲＥＡ−（スタール　エム、。

モリン　ジー１．パーソン　ニー０．アールネ　ニス、。

及びスタール　ニス、　、　（ＳｔＡｈｌ　Ｍ、、　Ｍｏ１ｉｎ　Ｇ、、　Ｐｅ ｒｓｓｏｎ　Ａ。

、　Ａｈｒｎ６　Ｓ、、　＆　ＳｔＡｈｌ　Ｓ）インターナショナル　ジャーナ ル　オブ　システマティック　バクテリオロジ−（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｓｙｓ ｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）　４０：　１８９−１９３．１９ ９０）により、染色体ＤＮＡの切断パターンについて試験した。概要的にはＲＥ Ａは以下のように記載し得る：（１）染色体ＤＮＡは、試験に関与した菌株から 単離される； （２）該ＤＮＡは、制限酵素によって切断される；（３）切断されたＤＮＡ断片 は、アガロースゲル電気泳動によってサイズ別に分離される。

（４）各菌株のバンドパターンは、レーザーデンシトメーター及び関連するプロ グラムによって記録、解釈される。ＲＥＡ−パターンに関して、菌株間の違いは 、主成分分析（ｐｒｉｎｃｉｐａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ａｎａｌｙｓｉｓ） によって数学的に表される。１９９０） 更に、プラスミドの内容について、実験を行った（アールネ　ニス１．モリン　 ジー９．及びスタール　ニス、。

システマティック　アンド　アプライド　マイクロバイオロジー（Ｓｙｓｔｅｍ ａｔｉｃ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）　１１：　３ ２０−３２５、１９８９に従った方法）。

菌株２９９：この菌株は、大きさがそれぞれ４ＭＤａ３９ＭＤａｌ、２０ＭＤａ ｌ及び３５ＭＤａｌの４種のプラスミドを含有する。染色体ＤＮＡの切断パター ンを図１に示す。２９９とマークされたレーンは、菌株２９９のパターンを示し 、■とマークされたレーンは、２種の異なった単離物由来の菌株２９９の遺伝子 的な変異体を示す；この変異体は、ヒトで試験した２０種の菌株の一つであり、 表１にＡ１と記載した。レーンＳは、スタンダードであり、高分子Ｍｗ　ＤＮＡ ｖ−カー（ＡＥＨ；　ＢＲＬ、ベセスダリサーチ　ラボラトリーズ（Ｂｅｔｈｅ ｓｄａ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）ライフ　チクノロシーズ 　インコーポレーティッド（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ　Ｉｎｃ、社 ））を示す。２９９の変異体は、一般的な表現型の試験によっては、２９９と分 離することができなかった。また、遺伝子的に、２９９と２９９ｖは、非常に近 い。この変異体が、ヒト腸粘膜中で定着する同じ能力を有していることも、判明 した。

菌株２７１：この菌株は、大きさがそれぞれ３ＭＤａｌ及び５ＭＤａｌの２種の プラスミドを含有する。該菌株の染色体ＤＮＡの切断パターンを、レーンＡとし て図２に示す。レーンＶは、菌株２７１の遺伝子的な変異体を示す；レーンＳは 、図１に示したのと同じスタンダードを示す。

２７１の変異体は、一般的な表現型の試験によっては、２７１と分離することが できなかった。また、遺伝子的に、２７１と２７１ｖは、非常に近い。この変異 体が、姉妹の菌株として、ヒト腸粘膜にコロナイズする同じ能力を有しているこ とも判明した。

遺伝子的に、２つの実験した菌株は本質的に異なる。それらは、それぞれの代表 菌株とも有意に異なる。

ラクトバシラス２９９の培養 ｍ−８０℃のフリーザーからの接種物（ｉｎｏｃｕｌａｔｅ　）を、５０ｍ１の ラクトバシラスキャローング培地（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｃａｒｒｙｉ ｎｇ　Ｍｅｄｉｕｍ　）　（Ｌ　ＣＭ、エフシミオウおよびハンセン（Ｅｆｔｈ ｙｍｉｏｕ　＆　Ｈａｎｓｅｎ）、Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ。

、　１１０：　２５８−２６７．１９６２　）又はロゴサに加え、−約４０時間 ３７℃でインキュベートし、−５０ｍ１を５００ｍ１のＬＣＭに接種し、−約４ ０時間３７℃でインキュベートし、−５００ｍ　ｌを５リツトルに接種し、−約 ２５−３０時間３７℃でインキュベートし、−１００００ｒｐｍで１０分間遠心 し、−生理食塩水で１度洗浄し、 一該ベレットを、約１リツトルの生理食塩水に溶解する。

この量は、約４００−５００　リットルのオートミール粥に十分であると評価さ れる。培養培地は最適化されていない。ロゴサはＬＣＭより良（作用し、それは 多分より良いバッファー機能による。２％グルコースをＬＣＭに加えた。同じ操 作を、他のラクトバシラス菌株を産生ずるのに使用することができる。

ラットでの生物学的試験 ２５０−３００ｇの体重を有するラットに、標準的な手術を施し、大腸の一部を 単離し穴を開けることによって腹腔中に膿瘍を発生させる。即ち、これにより、 腸内容物が腹腔内へ連続的に漏出し、これが２４時間以内に膿瘍、腐敗（ｓｅｐ ｓｉｓ）及び引き続（高率の死亡率を惹起する。各群３０匹からなる３グループ の動物を使用した。グループ１は、処理しない対照群、グループ２は、注射によ り抗生物質で処理し、グループ３は、胃に発酵オートミール粥の形態でラクトバ シラスを供給した。使用したそのラクトバシラス菌株は、ラット腸粘膜から単離 されたものであり、試験においてラット腸にコロナイズし確立されるようになる ことが証明されている。

試験の評価は、血中のバクテリアの量、即ち敗血症と同等のもの、及び腹腔およ び腸からの培夏物の分析により行った。結果は、グループ１の動物全てに血中に バクテリアが検出され９．高い死亡率につながった。グループ２及び３において 、３０匹の動物中３匹にバクテリアが発生するという同等の結果が得られたが、 グループ１よりも程度ははるかに低かった。

ＦＩＧ、１ ｉ”ＩＧ、２ 国際調査報告 １ｇ、ＰＰ５ｌｌｓｓｓｌ　Ａｓニー＋−Ｎ、　ＰＣＴ／ＳＥ　９２１００５２ ＢＫｌ、、Ｍｌｍ−＾−０−ｍ−ＰＣＴ／ＳＥ　９２１００５２Ｂ国際調査報告 フロントページの続き （５１）Ｉｎｔ、Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ｃ１２Ｒ１：２４５） （７２）発明者　ジエプソン　ベングトスウェーデン国　ニス−２２２４７ルン ドマータレグランデン　８ Ｉ

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．インビボでヒトの腸粘膜にコロナイズ（ｃｏｌｏｎｉｚｅ）し定着（ｅｓｔ ａｂｌｉｓｈｅｄ）するようになる能力を有するラクトバシラスの菌株を単離す る方法であって、ラクトバシラスがヒト腸粘膜から単離され、適当な栄養培地中 で純粋培養（ｐｕｒｅ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ）され、腸内でコロナイズし定着する ようになる能力について選択されることを特徴とする方法。
2. ２．コロナイズし定着するようになる該能力が、経口投与、及び投与完了後少な くとも１０日で腸粘膜上への出現の確認によって、試験されることを特徴とする 請求項１に記載の方法。
3. ３．選択が、胆汁耐性、ｐＨ耐性、オートミールの発酵能力及び香味を産生する 能力の評価によって行われることを特徴とする請求項１又は２に記載の方法。
4. ４．請求項１から３のいずれかに従って得られることを特徴とする、インビボで ヒト腸粘膜にコロナイズする能力を有するラクトバシラス菌株。
5. ５．ラクトバシラス　プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｓｐｌａｎｔａｒ ｕｍ）２９９　　　　　ＤＳ１６５９５、ラクトバシラス　カセイ　エスエスピ ー．ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃａｓｅｉ　ｓｓｐ．ｒｈａｍ ｎｏｓｕｓ）２７１ＤＳＭ６５９４、 又は本質的に対応するＲＥＡ−パターンを有するその変異体であることを特徴と する、インビボでヒト腸粘膜にコロナイズする能力を有するラクトバシラス菌株 。
6. ６．胃腸管中の感染の予防または治療のための組成物であって、請求項１から３ のいずれかに従って得られた、インビボでヒトの腸粘膜にコロナイズし定着する ようになる能力を有するラクトバシラスの菌株と、慣用されている担体とを組合 わせて含むことを特徴とする組成物。
7. ７．菌株 ラクトバシラス　プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕ ｍ）２９９　　　　　　ＤＳＨ６５９５、ラクトバシラス　カセイ　エスエスピ ー．ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃａｓｅｉ　ｓｓｐ．ｒｈａｍ ｎｏｓｕｓ）２７１ＤＳＭ６５９４、 又は本質的に対応するＲＥＡ−パターンを有するその変異体を含有することを特 徴とする、請求項６に記載の組成物。
8. ８．ラクトバシラス菌株によって発酵された栄養溶液をベースとするオートミー ルであることを特徴とする、経口、小腸（ｅｎｔｅｒａｌ）又は直腸（ｒｅｃｔ ａｌ）投与のための請求項６又は７に記載の組成物。
9. ９．外科手術に関するバクテリア感染の予防又は治療のための、抗生物質に代る 、請求項４に記載のラクトバシラス菌株によって発酵された栄養組成物の使用。
10. １０．該菌株が、 ラクトバシラス　プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕ ｍ）２９９　ＤＳＭ６５９５、ラクトバシラス　カセイ　エスエスピー．ラムノ サス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃａｓｅｉ　ｓｓｐ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ）２７１ＤＳＭ６５９４、 又は本質的に対応するＲＥＡ−パターンを有するその変異体であることを特徴と する、請求項９に記載の使用。