JPH06502080A - 共培養細胞インプラントによる活性因子のイン・ビボ放出 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 立　インブラントによる のイン、ビボ 及ｊＪど１量 この発明の技術分野は、活性因子欠乏症の治療及び、特に、神経伝達物質、神経 調節物質、ホルモン、栄養因子、共同因子及び成長因子等の活性因子での治療に よって冶し得る病気及び障害の治療に関する。これらのすべての物質は、それら が「源」細胞により分泌されて「標的Ｊ細胞又は源細胞自身に特異的な変化を生 じさせるという事実により特徴付けられる。

活性因子の不足は、非常に異なった表現型を有する病気に関係している９例えば 、神経伝達物質媒介のシナプス結合の欠損は、神経病理学的徴候を引き起こし、 関連ニューロンの最終的破虐へ導き得る。

特に、ｉＥ顯麻［（一般には、パーキンソン病として知られている）は、黒質の ドーパミン分泌細胞の破壊に次ぐ脳の線条内の神経伝達物質ドーパミンの欠乏に より特徴付けられろ、冒された患者は、猫背の姿勢、動作の硬直及び緩慢、並び に四肢の律動的身震いを示し、病気の非常に進行したステージにおいてはしばし ば痴呆を体積製した又は合成のドーパミン、その前駆物質、アナログ及び阻害剤 の直接投与は、パーキンソン病の治療における治療的価値が研究されてきた。こ れらの研究は、適用する化合物の送達、安定性、投与量及び細胞毒性の種々の問 題を明らかにした。今日まで、これらのアプローチの何れもかろうじて治療的価 値を示した程度である。脳由来成長因子も又、線条二ニーロンのイン・ビト三で の生存を維持させることが示されているので、パーキンソン病の治療における潜 在的価値を宵し得る。

糖尿病、粘液水腫、成長不全及び恐らくはアルツハイマー病等の他の多くの欠乏 病は、全面的に又は部分的に、樟的細胞に対する臨界的活性因子の欠乏又は不足 によるものと判明している。

薬剤又は他の因子を脳又は他の器官若しくは組織に制御された速度で構成的に供 給することを意図して、小型の浸透ポンプが用いられてきた。しかし、ある種の 薬剤の限られた溶解度及び安定性並びに貯蔵器の制約が、この技術の存用性を制 限してきた６例久ば、ドーパミンの制御された継続的放出が、生体分解性のマイ クロカプセル内にドーパミンを封入して移植することにより試みられた（ＭｃＲ ａｅ−Ｄｅｇｕｅｕｒｃｅ　＊　（１９ＨＩ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、　Ｌｅｔｔ、 　９２：３０３−３（１９）。しかし、生体分解性ポリマーからの薬剤の制御さ れた継続的放出は、例えば、バルク又は表面侵食を頼みとする（それらは、種々 の加水分解の結果による）。侵食は、しばしば、薬剤の分解の見込みを増加させ る加水分解に依存し、予想可能な放出速度の確立を面倒にする。ポンプ及び分解 性ポリマーに伴う他の不都合ば、限りある積載容量及びフィードバック制（２） の欠如を古生物学的に活性な因子を構成的に生産し且つ分泌することの出来る細 胞の移植も又試みられた。最近５免疫応答を誘導しないように患者自身の組織を 用いて、治療のための神経伝達物質分泌組織の移植が達成された。例えば、パー キンソン病を患った患者の副腎髄質からのカテコールアミン分泌組織が彼らの線 条に移植され、ある程度成功した。しかしながら、この手順は、高齢の患者の副 腎の腺は十分な量のドーパミン分泌細胞を含んでいないであろうから、６０歳未 満の患者にしか用いることが出来ない。この限界は、この病気が殆どしばしば高 齢者に発生するため、この手順の治療としての有用性を制限している。

細胞を脳組織に移植するための他のアプローチが試みられたが、脳は「免疫免除 されている」と考えられているにもかかわらず、同種移植片及び異種移植片の何 れでも、最終的に拒絶が起きる。この問題は、免疫抑制剤の同時投与を必要にす るが、その使用は、それら自体の合併症と有害な副作用との組を与える。

多くの研究が、マイクロカプセル（即ち、治療のための移植目的及び生物学的生 成物の大規模生産の両者のための、細胞溶液の微視的液滴を閉じ込めた小さい球 体）の利用を提案してきた。

別のアプローチは、巨視的カプセル封入（典型的には、細胞を中空繊維内に詰め １次いで、末端をシールすることを含む）であった。マイクロカプセルと対照的 に、巨視的カプセル封入は、治療用インブラントの重要な特徴である回収容易性 を与λる。

しかしながら２細胞培養のためのマイクロカプセル及び巨視的カプセルの両者に は欠点がある。イン・ビポのインブラントとしてのカプセル封入した細胞の生存 が、しばしば、未確認の理由によって損なわれる。例え細胞が生存し続けたとし ても、それらは、時として、それらの生成物を治療にを効なレベルより僅かしか 分泌しなそれ故、一般的に活性因子欠乏病の処置のための改良された治療が必要 であり、特に、過剰の外傷を生じることなく脳又は他の器官の機能障害を起こし た領域の機能を活性化し又は代行することの出来る治療装！が必要である。更に 、特に、患者の局所的領域への生物学的に活性な因子の送達を増大し及び／又は 継続する方法が必要である。

従って、愚者への生物学的に活性な因子の持続的且つ制御された送達に有用な、 一層確かな又は一層強力な、移植可能な治療装置を提供すること、特に、生物学 的に活性な因子（例＾ば、神経刺激性栄養因子又は成長因子）を愚者の組織又は 器官の局所的領域に送達し得る装置を提供することが本発明の目的である。

見旦Ｊと１至 欠乏又は器官機能障害を生じた患者の器官又は組織への少な（とも１種の生物学 的に活性な因子の構成的且つ制御された送達のための方法及び装置をここに開示 する。この活性因子は、別々の源からの異なる細胞集団に由来する少なくとも２ 種の細胞型の共同的組合せによって供給される。

本発明の方法により、第１の源から得た少なくとも１種の活性因子分泌細胞と第 １の源とは異なる第２の源から得た少なくとも１種の増大物質（ａｕｇｍｅｎｔ ａｒｙ　５ｕｂｓｔａｎｃｅ）産生細胞の共培養物（ｃｏ−ｃｕＨｕｒｅ）を選 択透過性膜内に封入する。この膜は、共培養物を自己免疫及びウィルスの襲撃か ら保護する一方、必須栄養素、細胞老廃物及び分泌された活性因子を膜を通して 局所的外部環境へ、或は共培養物中へと拡散させる。

ここで用いる場合、「欠乏した」又は「欠乏」は、活性因子産生細胞の存在によ り治療的に改変し得る器官又は組織の状態をいう。

「活性因子産生細胞」は、ここで用いる場合、神経伝達物質、神経調節物質、又 はカテコールアミン、成長因子、共同因子、栄養因子、又はホルモン等の活性因 子を産生じ且つ分泌する任意の細胞のことをいう。これらは、インシニリン、Ｖ ＩＩＩ因子、栄養因子（エリスロボエチン及び成長因子等）、生物学的Ｓ答調節 物質（リンホカイン及びサイトカイン等）、酵素、及び抗体分泌細胞からの抗体 、神経伝達物質（エンケファリン、グイノルフィン、サブスタンスＰ、及びエン ドルフィン、ＧＡＢＡ、グルタミン酸、セロトニン、ドーパミン、ノルエピネフ リン、エピネフリン、及びアセチルコリン等）、並びに、成長因子（ＮＧＦ、Ｅ ＧＦ、ＰＤＧＦ、及び多くの繊維芽細胞成長因子等）、並びに神経栄養因子（Ｂ ＤＮＦ及びＮＴ−３等）を産生ずる細胞を含む、この用語は又、活性因子の生物 学的活性を有するアナログ、アゴニスト、誘導体又は断片、並びに、正常な生物 学的因子（ある場合には、過剰なそのような生物学的因子によって病気が引き起 こされる（例えば、ハンチントン病））の阻害物質を産生し且つ分泌する任意の 細胞を含む。更に、活性因子を天然に産生じ且つ分泌する細胞並びに、遺伝子工 学的に活性因子を産生ずるようにしたものを含む。

「増大物質」は、ここで用いる場合、一般に、他の型の細胞を誘導して活性因子 を産生及び分泌させ及び／又は活性因子の産生を増大させる増大物質を産生ずる 細胞によって産生される任意の分子を含む。この用語は又。

細胞の成長、増殖及び／又は活性因子産生細胞への分化を引き起こす分子をも含 む。好ましい増大物質は、神経成長因子（ＮＧＦ）、繊維芽細胞成長因子（ＦＧ Ｆ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）等の成長因子 、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）及びニューロトロピン−３（ＮＴ−３）等の 栄養因子、サイトカイン、リンホカイン並びにホルモンを含む。この発明の他の 好ましい増大物質は、グルタメート又はニコチン等の種々の膜レセプターのエフ ェクターを含む。用語「増大物質」は又、因子だけでな（、細胞に活性因子の分 泌を誘導する能力な宵し及び／又はそのような細胞を刺激して、例えば、ＦＧＦ 、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＮＴ−３、ＢＤＮＦ及びＮＧＦの組換えにより産生される アナログを含む活性因子を産生させる増大物質のアゴニスト、アナログ、誘導体 及び断片をも含む。

用語「増大物質産生細胞Ｊは、別個の源から得た異なる細胞に活性因子の合成及 び分泌を誘導する分子を産生して局所的環境に分泌する、１つの源から得た細胞 をいう。この発明の１つの態様において、増大物質産生細胞は、ＮＧＦ産生海馬 細胞又はＰＤＧＦ産生血小板等の増大物質を正常に分泌するものである。他の態 様において、増大物質産生細胞は、遺伝子工学的に、因子を発現し且つ分泌した （ＮＦＣ分泌ｒａｔｌＮ、８−２１繊維芽細胞系統等）。

増大物質産生細胞及び活性因子産生細胞は、異なる型の細胞であり、別々の源か ら単離される。

この発明の１つの態様において、活性因子は神経伝達物質であり、増大物質は神 経伝達物質刺激因子である。

例えば、１つの好ましい態様において、神経伝達物質分泌細胞は、副腎髄質、胎 児腹側中脳組織、又は神経芽細胞等から単離された細胞であり、ドーパミンを分 泌するものである。別の態様において、カプセル封入した細胞は、ガンマアミノ 酪酸、セロトニン、アセチルコリン、ノルエピネフリン、エピネフリン、グルタ ミン酸、エンドルフィン、エンケファリン、グイノルフィン、又は正常神経機能 に必要な他の化合物等の他の神経伝達物質を産生する。この態様において、増大 物質分泌細胞は、ＮＧＦ、ＥＧＦ、ＢＤＧＦ、ＮＴ−３，ＰＤＧＦ等を分泌する ものである。

或は１本発明のカプセル封入した細胞は、生物学的に活性な活性因子又は増大物 質のアゴニスト、アナログ。

誘導体若しくは断片を分泌し得る。例えば、この発明の１つの態様は、ブロモク リプチンＣドーパミンアゴニスト）を分泌する細胞又はＬ−ドーパ（ドーパミン の前駆物質）を分泌する細胞を含む。

本発明のカプセル封入した細胞は、同種特異的であってよく即ち同種の他の適合 する組織から得た細胞であってよい。或は、これらの細胞は、異種特異的であっ てよく即ち異種の類似組織から得た細胞であってよい。しかしながら、それらの 源にかかわらず、移植される細胞は、患者の６１域又は組織において不足してい る所望の活性因子を合成して分泌する１つの源から得た細胞及び、増大物質を合 成して分泌する第２のａ（第１の源とは異なる）から得た第２の細胞からなる共 冶養物を形成すの標的領域は、しばしば多くの神経系の欠乏症又は障害の部位で あるので、患者の脳又は他のＣＮＳ領域である。他の態様において、標的領域は 、例えば、肝臓、膵臓、腎臓又は骨髄であってよい。

用語「選択的透過性のＪ及びＦ半透性のノは、ここで用いる場合、典型的にはそ れを通っての約１５０．０００ダルトンまでの分子量を有する溶質の拡散を可能 にする生体適合性膜を示す、好ましい半透性膜材料は、アクリル酸コポリマー、 ポリフッ化ビニリデン、ポリウレタン、ポリ塩化ビニル、ポリウレタンイソシア ネート、ポリアルギネート、酢酸セルロース、硝酸セルロース、ポリスルホン、 ポリビニルアルコール、ポリスチレン、ポリアミド、ポリメチルアクリレート、 ポリアクリロニトリル、ポリエチレンオキシド及び／又はそれらの誘導体若しく は混合物からなる群より選択する高分子材料を含む。

この発明の１つの面において、活性因子産生細胞及び増大物質分泌細胞のカプセ ル封入した共培養物を患者内に移植し、次いで、細胞が失効してもはや機能しな くなり或はもはや欠乏障害を矯正する必要がなくなった場合には回収する。回収 は、封入用膜に取り付けた生体適合牲の非分解性ガイドワイヤにより達成するこ とが出来本発明の他の面において、封入用膜は、取りはずし可能な栓又は蓋で覆 われた開口部を有する管型である。そのような構造は、付着させたガイドワイヤ により患者から回収した後に、Ｉいをはずした管開口部を通して、膜内の何れの 型の細胞でも他の類似の細胞と置き換えることを可能にする。

或は、この膜は、巨視的カプセル又はマイクロカプセルの形態である。これらの カプセルは、カプセルから伸びる一体化された繋ぎ紐を含み得る。この繋ぎ紐は 、好ましくは、少な（とも、治療部位から挿入部位の近くまで届くのに十分なだ け長い、この繋ぎ紐は又、挿入部位の上方に伸びる細胞カプセル自身の一部分で もある。一度ビヒクルカプセルを治療部位への通路に位置させたならば、この繋 ぎ紐を、例えば、当業者が入手可能で公知の外科用繊維、生体適合性接着剤又は 他の手段によって、この繋ぎ紐を頭蓋骨その他の骨の外面に及び挿入部位に近い 他の末端に固定することによって挿入部位に固定する。カプセルの治療部位への 設置に続いて、挿入部位を閉じ又は蓋をして無関係の物質が通路及び治療部位に 入ることを防ぐことが出来る。

この発明の他の面において、カプセル封入した共培養細胞は、イン・ビトロ、例 えば、生理学的に適合性の水性培地内で活性因子を生成するために用いることが 出来る。活性因子は、培地の少なくとも一部を取り出し、カプセル封入した細胞 によりその中に分泌された活性因子を単離することによって採集し得る。或は、 半透性膜を、活性因子を保持するように設計し１次いで、カプセル封入した細胞 を培地から分離し及びカプセルを溶解して濃縮した形態で活性因子を抽出するこ とによって活性因子を採集することが出来る。

この発明を、次ぎに、成る説明のための態様に関して説明する。しかしながら、 この発明の精神及び範囲から離れることなく１種々の改変、付加及び削除がなさ れ得ることは明白である０例えば、本発明を、例又は説明によって述べられた特 定の細胞系統又は粒子膜型若しくは材料を要求し或はそれらに限定されるものと 解してはならない。

・　の　単な饗 この発明は、添付の図面と共に読むならば、下記の説明により一屡理解すること が出来る。

図１は、本発明の１つの面による、活性因子送達のための移植可能な共培養装置 の図式説明である。

図２は、この発明の第２の面による、活性因子送達のための移植可能且つ回収可 能な共培養装置の図式説明で図３は、この発明の他の面による、活性因子送達の ための移植可能な、回収可能且つ再充填可能な共培養装置の図式説明である。

図４は、この発明の更に他の面による、活性因子送達のための移植可能な共培養 装置の図式説明である。

図５は、この発明の他の面による、ゲル球を含む移植可能な共培養装置の図式説 明である。

図６は、この発明の更に他の面による、被１ゲル球を含む移植可能な共培養装置 の図式説明である。

図７は、この発明の他の面による、巨視的カプセルを含む移植可能な共培養装置 の図式説明である。

図８は、この発明の他の面による。幾つかの細胞区画室を含む移植可能な共培養 装置の図式説明である。

図９は、この発明の他の態様による、２つの連結細胞区画室を有する分離壁カプ セルを含む移植可能な共培養装置の図式説明である。

図１０は、ウェル当り約２００の培地密度のクロム親和性細胞充填マイクロカプ セルからの、イン・ビトロで、１，４．８週間維持後の、神経伝達物質の平均の カリウム喚起による放出のグラフ表示である。

図１１は、ウェル当り約３００のクロム親和性及びＮＧＦ産生性繊維芽細胞を含 む同時播種マイクロカプセルからの、イン・ビトロで、１．４．８週間維持後の 、神経伝達物質の平均のカリウム喚起性放出のグラフ表示ｅの詳細な管８ 治療可能な活性因子欠乏症又は機能障害を患った患者の局所的標的領域への活性 因子の構成的送達のための方法、並びに、この方法の実施のための装置を発明し た。

この方法は、第１の源から得た活性因子産生細胞を供給し及び第１の源と異なる 第２の源から得た増大物質分泌細胞を供給することを含む。これらの細胞は、最 もしばしば、２種の異なる型の細胞である。これらの細胞を、次いで、患者の標 的領域に移植することの出来る選択的透過性の保護膜又は細胞培養装置内に封入 するか、或はイン・ビトロで培養する。これらの２種の異なる細胞型の共培養は 、活性因子産生細胞による活性因子の発現及び分泌において共同効果を有する。

標的領域は、応答し且つ増加したレベルの活性因子が確実な治療的機能を有する 患者の解剖学的構造の任意の部分であってよい。この領域は、器官、組織又は身 体の機能系（神経系等）の任意の部分であってよい、神経系の移植組織は、脳が 多くの神経性機能障害の源であるために、しばしば、脳内である。

これらのカプセル封入した共培養物は、同種特異的即ち移植を受ける患者と同種 の他人からの細胞であってよく、或は、異種特異的即ち異なる種のものからの細 胞であってよい、−１詳細には、それらは、正常に特定の活性因子又は増大物質 をイン・ビボで分泌する身体の器官から得ることが出来る。

例えば、有用な神経伝達物質産生細胞は、胎児腹側中脳、神経芽細胞系統又は副 腎髄質から単離されたドーパミン分泌細胞を含む、更に、副腎クロム親和性細胞 は、糖質コルチコイドを分泌する皮質細胞から分離された場合、ニニーロンの表 現型に分化し得る。！離したクロム親和性細胞からの長い神経突起の成長は、培 養を維持した場合、ＮＧＦ及び／又は他の成長因子の存在に依存している、これ らの成長因子は、海馬細胞、血小板、脳組織及び内分泌腺等の成長因子産生細胞 によって供給され得る。

更に、所望の活性因子の生物学的活性を存する加工可能な前駆物質、アナログ、 誘導体、アゴニスト又は断片を分泌する任意の細胞は有用である。そのような細 胞は、例えば、ブロモクリプチン、Ｌ−ドーパ、プレプロインシュリン等を導出 する細胞を含む。

更に、遺伝子工学によって、活性因子若しくは増大物質、又は類似の活性因子又 は増大物質活性を有するそれらのアゴニスト、前駆物質、誘導体、アナログ若し くは断片を発現するようにされた任意の細胞も又この発明の実施において有用で ある（例久ば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ等　（１９８８１５ｃｉｅｎｃｅ　２４２： １５７５−１５７８参照）。従って、そのようなアプローチにおいては、増大物 質若しくは活性因子又はそれらのアナログ若しくは前駆物質をコードする遺伝子 を天然の細胞系統から単離し或はＤＮＡ操作によって構築する。次いで、その遺 伝子をプラスミツドに取り込ませ、更に、発現用の宿主細胞にトランスフェクト することが出来る。これらの活性因子若しくは増大物質を発現する細胞は、適当 な密度に達するまでイン・ビトロで成長することが出来る。次いで、培養の一部 を用いて移植可能装置に播種する１例久ば、Ｓａａ＋ｂｒｏｏｋ等１Ｍｏｌｅｃ ｕｌａｒＣ１ｏｎｉｎｇ、　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、　Ｃｏ １ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　ＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ　（１９８９）’）照 （クローニングビヒクル及び遺伝子操作手順の更なる考察のために、参考として 本明細書中に援用する）、そのような遺伝子工学による細胞系統の例は、ドーパ ミン産生ＰＣＩ２細胞及びＮＧＦ産生ｒａｔｌＮ、８−２１繊維芽細胞を含む。

組織試料から得た細胞は、均質即ち同じ細胞型である。細胞の均質集団の単離は 、採取した組織の細胞を（例えば、細胞間接着を酵素的に消化することにより） 分離し、次いで、それらを形態及び／又は生物学的活性に基づいてソートするこ とによって達成し得る。組織堵養中の細胞の均質集団から単離した細胞は、隣接 物及び細胞残骸からきれいに分離することのみを必要とする。

源に依らずに、増大物質産生細胞及び活性因子分泌細胞を、生成した共培養物を ウィルス及び免疫系若しくは他の培養環境の成分との有害な遭遇から保護する移 植可能な選択透過性膜中に！く。そのような保護は、脳のような「免疫免除され ている」身体の領域においてさえ結局外来と見なされる同種移植片又は異種移植 片の保存に詩に重要である。従って、この膜は、ウィルス、マクロファージ、補 体、リンパ球、及び幾つかの態様においては抗体の侵入を阻止し、他方、栄養素 、ガス、代謝分解産物、その他の溶質及び神経伝達物質を通過させる。約１５０ ｋＤまでの分子量を有する分子の拡散を可能にする細孔を存する任意の生体適合 性且つ非再吸収性の材料が、本発明を実施するために有用であるが、アクリル酸 コポリマー、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリウレタン、ポリアミド、ポリ メタクリレート、ポリサルファン、ポリアクリレート、ポリフッ化ビニリデン、 ポリウレタン、イソシアネート、ポリアルギネート、酢酸セルロース、ポリスル ホン、ポリビニルアルコール、ポリアクリロニトリル、ポリエチレンオキシド及 びそれらの誘導体及び混合物が最も好適である。

この細胞培養袋！は、カプセル封入すべき２つの型の細胞を収容し、及び外科的 移植において過度の外傷を生じない任意の形状を取り得る。有用な形状は１種々 の巨視的カプセル、マイクロカプセル、マルチカプセル及び分離壁を有する多区 画カプセルを含む。

図１に示す１つの好適な移植可能共培養装！１０は、末端１２及び１４（これら を通して、活性因子分泌細胞２５及び増大物質産生細胞２７を細胞区画室１６内 に詰める）を有する管状選択的透過性膜２２である。末端１２及び１４を、次い で、キャップ１７及び１９で、或は、エポキシ膠又はポリプロピレン等の生体適 合性且つ非再吸収性材料の縫糸で永久的に閉じる。装置２０は、摸２２が内部組 織又は液体組織に直接接触するように患者の身体の領域に外科的に移植すること が出来る。

本発明の方法は、最初にカプセル封入して移植した細胞をそれらが活性因子又は 増大物質の産生を止めるが、死ぬか、或はもはや神経機能障害を矯正する必要が なくなった場合に患者から除去する追加のステップを含むことが出来る０図２に 示すように、移植した共培養装置２０の回収は、好ましくは、末端キャップＩ７ 又は１９に永久的に取り付けたガイドワイヤ１８によって達成される。このワイ ヤは、細胞培養装置を支持するのに十分な引張り強度を有する任意の非再吸収性 の生体適合性材料で作ることが出来る。

この装置の細胞性含有物は、この装置をその回収の後に再移植することが望まし い場合には、交換することが出来る。この方法の実施に有用な好適な細胞培養袋 ！３０を図３に示す、装置３０は、細胞区画室１６内の細胞２５及び２７をそれ ぞれ取り出し及び新しい細胞と交換することを可能にする取り外し可能な摩擦適 合キャップ２２及び２４で可逆的に覆われた末端１２及びＩ４を有する管状であ る。装置３０は、ガイドワイヤ１８が頭の上皮組織の直下に位置し且つ膜２２が 脳組織と直接接触するように患者の脳内へ外科的に移植することが出来る。

この発明の他の態様を図４に示す、細胞培養装置４０ば、少なくとも１種の増大 物質産生細胞２６及び少なくとも１種の活性因子分泌細胞２７を満たしたカプセ ル４２を含む。好ましい態様において、巨視的カプセル４２は、カプセルから伸 び且つカプセルと一体化された繋ぎ紐４４（又は棒）を含む、このビヒクルは、 更に、巨視的カプセル４２の周囲の、透過性、半透性又は選択透過性！１ｊ［１ ８を含む、繋ぎ紐４４は、一般に、非透過性膜材料から作り、或は、繋ぎ紐を非 透過性にする材料で被覆することか出来る。１つの態様において、非透過性の保 護バリヤー材料は、カプセルの外膜の一部を被覆することが出来る。好適な保護 バリヤー材料は、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシド、シリコーン 、ヒドロゲル及びそれらの誘導体及び混合物を含む。この半透性膜は、例えば、 中空の棒、袋、又は複数繊維状等の細胞を収容する形状を適宜に選択することが 出来る。

外膜は、ポリマー材料であってよく、界面活性剤、炎症抑制剤、血管形成因子、 及び／又は抗酸化剤を含むことが出来る。ポリマー、界面活性剤又は他の添加剤 の特定の型は、カプセル封入すべき材料及び押し出し装置の構成に依存する。好 適な炎症抑制剤は、コルチゾン、ＡＣＴＨ，デキサメタソン、コルチゾル等のコ ルチコイド、インターロイキン−１（ＩＬ−１）及びそのレセプターアンタゴニ スト、並びに、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１及びガンマ−インターフェロンに対する抗 体を含む。好適な界面活性剤は、トリトンＸ　１００　（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍ ｉｃａｌｓ）及びＰｌｕｒｏｎｉｃｓ　Ｐ６５　、　Ｐ３２及びＰｉｌｌを含む 。好適な抗酸化剤はビタミンＣ（アスコルビン酸）及びビタミンＥ活性因子又は 増大物質の供給が尽きた場合（例えば、そのような因子を分泌すべき細胞が死ぬ か又はもはや産生じなくなり、或は、特定の機能障害を矯正する必要がなくなっ たとき）には、ビヒクル４０を、取り出し及び交換することが出来る。移植した ビヒクル４０の回収は、それをその繋ぎ紐４４によって治療部位から引き出すこ とにより達成することが出来る。取り出すための１つの方法は、キャップ６２を 取り外して繋ぎ紐４４を露出させてから一対の鉗子を用いることである。キャッ プ６２は、患者の上皮組織の直下に位置させることが出来る。ビヒクル４０は、 更なる治療が必要となった場合には、新しい挿入物と置き換λることが出来る。

同様に、カプセル４２内に封入した細胞を、カプセル４２を取り出すことによっ て回収することも出来る。

ビヒクル４０の透過性部分（例えば、カプセル４２）を、標的治療部位１２又は その近くに移植するが、他方、非透過性部分（例えば、繋ぎ紐４２）は、神経活 性因子を挿入物の境界内に閉じ込める。透過性部分は、幾つかの分子の通過を排 除するが他の分子は通過させる特定の大きさの細孔を有する（即ち、特定の分子 量力ットオ）を有する）ポリマー材料を含む。この方法によれば、神経伝達物質 の挿入物から治療部位までの拡散は可能であるが、ウィルス、Ｃ１ｑ若しくはＣ ３ｂ補体コンポーネント及び種々のプロテアーゼ等のもつと大きい有害な成分の 通過は効果的に妨げられる。例えば、約２５ｋＤ〜３００ｋＤの分子量排除を有 する細孔を持つビヒクルは有用であり、約５０ｋＤ〜２００ｋＤの分子量カット オフの細孔を有するものは特に好ましい。

この発明の他の面を図５及び６に示す。図５において、ヒドロゲル又はアルギネ ートゲルの球又はマイクロカプセル５０は、それらの中に共培養物を封入する。

図６のゲルマイクロカプセル６０は、例λば、ポリリジン又は熱可塑性材料の膜 ２９で被覆されている。

或は、共培養ビヒクルは、図７に示される押出し巨視的カプセル７０又は図８に 示されるマルチ巨視的カプセル８０であってよい。この発明のこれらの面におい て、細胞２５及び２７を、水性細胞懸濁液及びポリマー溶液の共通出口からの同 時押出しにより、細胞懸濁液をカプセル封入する高分子外側被覆３１を有する球 状又は管状押出物を形成することによって、半透性のポリマー膜３１の内に封入 する。

そのようなビヒクルを製造するために、細胞懸ＦＡ液及びポリマー溶液を、細胞 懸、ｉ液を内側ボアから押出し且つポリマー溶液を外側ボアから押出すように少 な（とも２つの同心ボアを有する共通の押出し出口から押出すことが出来る。ポ リマー溶液は、凝固して外側被覆を形成する。外側被覆が形成されたとき、管状 押出物の末端を間隔を開けてシールして単一細胞区画室１６（図７）又は高分子 の繋ぎ３７で繋った多細胞区画室１６（図８）を定めることが出来る。

ズ９に示すこの発明の更に別の態様において、内部区画壁を有するビヒクル９０ は、活性因子分泌細胞２５を、増大物質産生細胞２７を封入した細胞区画室４８ と分離した細胞区画室４６内に封入する。これらの区画室は、共通の外膜壁３１ によって囲まれているが、車送性膜５２によっても互いに分離されており、この 半透性膜を通って増大物質が拡散し、活性因子産生細胞２５を刺激して活性因子 を分泌させ得る。

下記の非制限的実施例は、この発明の好ましい特徴を一層完全に説明する。これ らの実施例は、単離したクロム親和性細胞と同時播種したＮＧＦ放出型細胞との 選択的透過性ミクロ球状膜内に封入した共培養物を含む装置のカテコールアミン 、ドーパミン、ノルエピネフリン及びエピネフリンを放出する能力を説明する。

しかじな力５ら、この発明は、これらの実施例に記載された細胞型にも、記載さ れた選択的透過性膜システムの型若しくは形状にも限定されない。例えば、１つ 以上の細胞区画室を有する押出し巨視的カプセル装置並びに被覆した及び被覆し てないマイクロカプセルを含む。

細胞の調製 分離したウシ副腎のクロム親和性細胞をＰｏ１ｌａｒｄ等（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　 Ｃｈｅｍ、ｆ１９８４）　２５９：１１１４−２２）及びＳａｇｅｎ等（Ｊ、　 Ｎｅｕｒｏｃｙｔｏｌ、（１９９０）　１９：６９７−７０７）によって記載さ れたようにして単離した。細胞を６％ウシ胎児血清（ＦＣＳ　）　（Ｇｉｂｃｏ 、　Ｇｒａｎｄ　ｌ５ｌａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｏ、、　Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ　ＮＹ　）を補足したダルベツコ改変イーグル培地中に、３７℃で 、５％Ｃｏ２を含む水分飽和の周囲の空気大気中に維持した。単離手順の約１週 間後に、細胞を吸引によって採取した（上清を集めて８００Ｘｇで遠心分離した ）６ 繊維芽細胞系統ｒａｔｌ　Ｎ、８を、マウス神経成長因子（ＮＧＦ）ｃＤＮＡを 含むレトロウィルスベクターでのトランスフェクションにより遺伝子的に改変し た（　５ｈｏｒｔ等（１９９０）　Ｄｅｖｅｌ、　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、　１２： ３４−４５　）　。

ｒａｔｌ　Ｎ、８−２１と命名したクローン化系統をｌＯ％ＦＣＳを補足したＤ ＭＥＭ中に維持し、トリプシン−ＥＤＴＡ処理により組織培養フラスコから取り 出した後にウシのクロム親和性細胞との同時播種に用いた。

ｒａｔｌ　Ｎ、８−２１ＮＧＦ放出クローン化細胞系統を予めＥＬ　Ｉ　ＳＡ技 術でアッセイし及び算出されたＮＧＦ放出は１６５ｐｇ／ｌｏ’細胞／時であっ たｅ　ｒａｔＩ　Ｎ、８−２１クローン化細胞系統により放出されたＮＧＦは、 生物学的に活性であることが、培養ＰＣＩ２細胞に神経突起を伸長させる能力に よって示された。

Ｌ五±１ カプセル封入手順 ２５０μｍのＤＭＥＭ中のクロム親和性細胞を、８００μｌの２％（Ｗ／Ｖ）等 張アルギン酸ナトリウム（ＫｅｌｃｏＧｅｌ　ＨＶ、　Ｋｅｌｃｏ、　ＮＪ）中 に、２．５及び１０ｘｌＯ’／　ｍ　ｌの密度（それぞれ、低、中及び高密度と 呼ぶ）で懸濁させた。同時播種条件は、２Ｘ１０’細胞／　ｍ　１のｒａｔｌ　 Ｎ、８−２１と３Ｘ１０”細胞／ｍｌのクロム親和性細胞とからなり、８００μ ｍの２％等張アルギン酸ナトリウム中に懸濁した２５０μｍのＭａｔｒｉｇｅｌ 　（登録商標）（マサチューセッツ州、Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ、　Ｃｏ１１ａｂｏ ｒａｔｉｖｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　）中にて混合した。　ｋｌａｔｒｉｇｅｌ　 （登録商標）（ラミニン（７ｍｇ／ｍｌ）及びｒｖ型コラーゲン（０，２５ｍｇ ／ｍｌ）を含むヒドロゲル）を、繊維芽細胞のための基礎として用いた。細胞／ アルギネート懸濁液のミクロビーズをシリンジポンプ押出しにより形成し、ｐＨ ７，４の生理食塩水中の１．０％Ｃａ　Ｃ１ｚ溶液に浸漬する（５分間）ことに よりゲル化した。この細胞充填ゲルビーズを、２．５ｍＭ　ＨＥＰＥＳ　（Ｎ− ２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’　−２−エタンスルホン酸、ミズーリ州 、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ、　Ｓｉｇ＋ａａ　）でｐＨ７゜４に緩衝した２５ｍ１ の０．８５％ＮａＣ１で２回洗い、次いで、０．８５％ＮａＣ１／ＨＥＰＥＳ　 （ｐＨ８，０）にて１回洗った。０．８５％ＮａＣ１（ｐＨ７，６）中のポリ− １−リジン（分子量３６−３８゜０００、Ｓｉｇｍａ　）の０．０５％溶液を細 胞懸濁ビーズに加えて６分間混合した。０．８５％Ｎ　ａ　Ｃ１／　ＨＥ　Ｐ　 ＥＳ　（ｐＨ７，４）洗浄に次いで、０．１５％アルギン酸ナトリウム中に５分 間浸漬した。このビーズをＮａＣ１／ＨＥＰＥＳ　（ｐＨ７，４）中で洗い、ポ リ−１−リジンの追加層及びアルギネートを上述のように加え、その後、そのビ ーズを５０ｍＭ　クエン酸ナトリウムに５分間さらして捕捉したアルギネートを 再液化した。マイクロカプセル封入したクロム親和性細胞を０．８５％ＮａＣ１ ／　ＨＥ　Ｐ　Ｅ　Ｓ　（ｐ　Ｈ７、４）中で２回及び調節培地中で２回洗い、 その後、インキニベエター中に！いた。

ウェル当たり約２００の細胞充填したマイクロカプセルを２４マルチウ工ル組織 培養プレート（Ｆａｌｃｏｎ　３０４７）の各ウェル中に置いた。イン・ビトロ に維持した細胞充填マイクロカプセルについて、カテコールアミン分析を、１． ４及び８週目に、イオン対逆相高性能液体クロマトグラフィーにより行なった。

各群からの２０のマイクロカプセルの亘径を、形態分析システム（ＣＵＥ−２， ニューヨーク州、Ｌａｋｅ　５ｕｃｃｅｓｓ、　Ｏｌｙｍｐｕｓ　Ｃａｒｐ、　 ）を用いて測定した。

医」１肌ユ イン・ビトロ放出の速度論 静的条件下での基礎及びカリウム喚起したカテコールアミン（神経伝達物Ｗ）放 出プロフィルを、電気化学的検出器（ＬＣＥＣ）を有する高性能液体クロマトグ ラフィー（ＨＰＬＣ）により測定した。基礎（５，４ｍＭＫ”）及びカリウム喚 起した（５６ｍＭ　Ｋ”　）放出の両者を、０．２９ｍＭ　アスコルビン酸を加 えた４５０μｍのＨＢＳＳを１５分間インキュベートしたものを分析することに よって測定した（各々をカラム注入前に５０μｍの１．１Ｎ　ＨＣｌＯ４で前処 理した）、中密度クロム親和性細胞充填マイクロカプセル及び同時播種マイクロ カプセルは又、４及び８週間イン・ビトロで維持した後に、同じ条件下で、ＨＢ ＳＳ中で、ｌｍＭｄ−アンフェタミンサルフェートを用いて喚起した。各群の同 じウェルを培養期間中繰り返し刺激した。　Ｒａｂｂｉｔ　（ｉＩ標）　ＨＰＸ 溶媒送達システム（マサチューセッツ州、Ｗｏｂｕｒｎ、　Ｒａ１ｎｉｎ　Ｉｎ ｓｔｒｕｍｅｎｔ　Ｃｏ、　Ｉｎｃ、）　、逆相−ＨＲ−８０−カラム及びＣｏ ｕｌｏｃｈｅｒｉ多電極電気化学的検出器（マサチェーセツツ州、Ｂｅｄｆｏｒ ｄ、　ＥＳＡ）からなるＨＰＬＣシステムを、１．４ｍｌ／分で運転した。各試 料の２０μｌのアリコートをカラムに注入した。移動相は、１４．２ｇ／リット ルのモノクロロ酢酸、３７ｍｇ／リットルのＥＤＴＡ、３００ｍｇ／リットルの へブタンスルホン酸及び３％のメタノールを、ｐＨ３，０で、含んだ。

カテコールアミン及び選択した代謝産物の１度を、一連の希釈Ｉｊｌｒｊｉ運転 のピーク高を各アッセイと比較することによって測定した。用いたクロマトグラ フィーシステムのカテコールアミン検出限界は、ドーパミン（ＤＡ）、エピネフ リン（ＥＰＩ）及びノルエピネフリン（ＮＥ）それぞれについて、１５．１２及 び１　ｏｐｇであった。

各群の２つのウェルを、イン・ビトロで、ｌ、４及び８週目に、及び残りのウェ ルを１２週後に、形態学的評価のために犠牲にした。カテコールアミン放出を、 統計的目的のために平均放出／ウェル（ｎｇ／１５分）で。

又は、総カテコールアミン放出をマイクロカプセル数／ウェルで除して得られる カプセル当りの置（ｐ　ｇ／カプセル／１５分）で表した。

この平均値の平均及び標準偏差（Ｓ、Ｅ、Ｍ、）を、細胞充填したマイクロカプ セルの大きさの分布を除いて、各時点及び群について計算した。１対のスチュー デントのｔ−検定を統計分析に用いた。

カプセル封入手順の１週間後に、各ウェルが約３００のマイクロカプセルを含む ４つのウェル／群からのカリウム喚起したカテコールアミン放出プロフィルが、 中密度のクロム親和性細胞充填マイクロカプセルで観られたものと非常に類似し ていることが判明した（図１０）。

測定したＮＥ／ウェルの量は、培養期間中、中密度のクロム親和性マイクロカプ セルにおいて生じたのと類似のパターンで減少した。４週目に、中密度クロム親 和性マイクロカプセルと対照的に、ＥＰＩ排出量の急激な減少が見られた（図１ １）、８週目までに、５６ｍＭ　Ｋ”で刺激した４つのウェルの内２つじかＥＰ Ｉが検出されなかった。放出されたドーパミンの量の有意の増加が、同時播種カ プセルにおいて１〜４週で観られ、イン・ビ旦で、８週目まで高レベルを保った （図１１）、静的インキュベーション条件下で、１ｍＭ　ｄ−アンフェタミンサ ルフェートは、ＮＥ及びＤＡの排出量の有意の増加を、イン・ビトロで８週間の 維持の後に、基礎レベルに匹敵するまで減じた。

夾ＪＬｆ糺Ａ 形態学的分析 選択した回数で、マイクロカプセルを、４％バラホルムアルデヒド、０．５％グ ルタルアルデヒド溶液中で固定し、リン酸緩衝塩溶液（ＰＢＳ）中ですすぎそし て９５％エタノールまで脱水した１次いで、９５％エタノールとグリコールメタ クリレートの浸潤溶液の１：ｌ溶液（Ｈｉｓｔｏｒｅｓｉｎ、　Ｒｅｉｃｈｅｒ ｔ−Ｊｕｎｇ　ｆｏｒ　ＣａＩＩｌｂｒｉｄｇｅ　Ｉｎ５ｔｒｕ＋ａｅｎｔ）を １時間にわたって標本に加えた。純粋な浸潤溶液を１　：　１７９合物と置き換 えて少な（とも２時間維持した。それらの標本を包埋溶液で簡単にすすぎ、平型 に移してグリコールメタクリレート中に包埋した。５μｍの厚さの切片を切り（ Ｒｅｉｃｈｅｒｔ−Ｊｕｎｇ、　５ｕｐｅｒｃｕｔ　ｍ１ｃｒｏｔｏａ＋ｅ　２ ０５０）　、スライドガラスに載せてニラスルサブスタンスについてクレシルバ イオレットで染色した。イン・ビ丘！で、４及び８週後に、中密度クロム親和性 細胞充填マイクロカプセルにおける生存力の関係及びパターンをフルオレセイン ジアセテート（ＦＤＡ）及びヨウ化ブロビジウム（ＰＩ）で同時染色することに よって可視化した。各時間の約５０の細胞充填マイクロカプセルの１ｍｌの懸濁 液をＪｏｎｅｓ等（Ｊ　、　Ｈｉ　ｓ　ｔ　ｏ　ｃ　ｈ　ｅ　１１．７　。

ｆ１９８５１３３ニア７−７９）により記載されたようにして作用溶液にさらし た。１０マイクロカプセル／時間の平均を、エビフルオレセント顕微鏡（Ｚｅｉ ｓｓ　ＩＭ　３５　）を用いて、第一にＰＩ（生存不能）につき及び第二にＦＤ Ａ　（生存可能）で評価した。超微細構造観察のために、マイクロカプセルを３ ％バラホルムアルデヒド　２％グルタルアルデヒド中で一晩固定し、５０ｍＭ　 ＰＢＳ中ですすぎ、そしてＷｉｎｎ等（Ｊ、　Ｂｉｏｍｅｄ、　Ｍａｔ、　Ｒｅ ｓ、（１９８９１２３＋３ｌ−４４）により記載されたようにして処理した。超 薄切片をレイノルズのクエン酸鉛で染色してＰｈ１ｌｌｉｐｓ　４１０透過型電 子顕微鏡で分析した。

同時播種マイクロカプセルの内で、イン・ビトロで４週後に、クロム親和性細胞 から伸びた小さい神経突起が明るい顕微鏡レベルで見られた。一般に、維持した クロム親和性細胞及び繊維芽細胞系統は、互いに離れていた。繊維芽細胞の群も 又、イン・ビトロで４週間維持した後に観察した。繊維芽細胞は、カプセル空間 内のＭａｔｒｉｇｅｌ　（登録商標）の近（にあることが観察された。

超微細構造レベルにおいて、クロム親和性細胞からの神経突起の伸長が同定され 、繊維芽細胞はイン・ビトロで１２週間の維持の後にマイクロカプセル内で生存 し続けた。繊維芽細胞は、多層であり、それらの長軸に沿って整列し、且つ、そ れらの細胞質成分に基いて繊維芽細胞系統として同定された。

この発明は、その精神又は必須の特性から離れずに、他の特定の形態において具 体化することが出来る。従って、提示した具体例は、すべての点で、説明のため であり制限するものではないと考えるべきであり、この発明は、前記の説明では な（添付の請求の範囲によって示され、そして、それ故、請求の範囲と同じ意味 及び範囲に入るすべての変形はその中に包含される。

国際調査報告　、。Ｔ、ｔｌｓ　９２．。５３９゜フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ａ６１　Ｋ　３５／３０ 　７４３１−４Ｃ３５／３９　７４３１−４Ｃ Ｃ１２Ｎ　５１００　９２８１−４Ｂ ／／　Ａ　６１　Ｋ　３７１０２　８３１４−４Ｃ３７／２４　８３１４−４Ｃ （Ｃ１２Ｐ　Ｌｌｏｏ Ｃ１２Ｒ１：９１） ｌ

Claims (35)

【特許請求の範囲】
1. １．第１の源から得た少なくとも１種の活性因子分泌細胞を供給し、 第１の源とは異なる第２の源から得た少なくとも１種の増大物質分泌細胞を供給 し、 前記の活性因子分泌細胞と前記の増大物質分泌細胞を半透性膜内にカプセル封入 し（この膜は、前記の活性因子を該膜を通して拡散させる）、及び前記のカプセ ル封入した細胞を培養する工程を含む、活性因子を生産する方法。
2. ２．前記のカプセル封入の工程が更に前記の細胞を前記の半透性腹内に配置する ことを含み、前記の腹が約１５０，０００ダルトンまでの分子量を有する溶質を 拡散させる、請求項１に記載の方法。
3. ３．前記のカプセル封入工程が更に前記の細胞を、アクリル酸コポリマー、ポリ フッ化ビニリデン、ポリウレタンイソシアネート、ポリアルギネート、酢酸セル ロース硝酸セルロース、ポリスルホン、ポリビニルアルコール、ポリ塩化ビニル 。ポリスチレン、ポリウレタン、ポリアミド、ポリメチルアクリレート、ポリス ルホン類、ポリアクリレート、ポリアクリロニトリル、ポリエチレンオキシド、 並びにこれらの誘導体及び混合物からなる群より選択する材料からなる半透性膜 内に配置することを含む、請求項１に記載の方法。
4. ４．前記のカプセル封入工程が、前記の膜内に、神経伝達物質、神経調節物質、 栄養因子、成長因子、共同因子及びホルモンからなる群より選択する活性因子を 分泌する細胞を配置することを含む、請求項１に記載の方法。
5. ５．前記のカプセル封入工程が更に、前記の膜内に、ドーパミン、ノルエビネフ リン、エビネフリン、ガンマアミノ酪酸、セロトニン、グルタミン酸、エンケフ ァリンダイノルフィン及びアセチルコリンからなる群より選択する神経伝達物質 を分泌する細胞を配置することを含む、請求項４む記載の方法。
6. ６．前記のカプセル封入工程が更に、前記の膜内に、神経伝達物質分泌細胞を配 置することを含み、前記の神経伝達物質がドーパミンであり、且つ、前記の神経 伝達物質分泌細胞を、副腎髄質組織、クロム親和性細胞、胎児腹側中脳組織及び 神経芽細胞組織からなる群より選択する組織又は培養物から単離する、請求項４ む記載の方法。
7. ７．前記のカプセル封入工程が更に、前記の膜内に、活性因子産生クロム親和性 細胞を配置することを含む、請求項１に記載の方法。
8. ８．前記のカプセル封入工程が更に、前記の膜内に、それぞれ活性因子活性を有 する活性因子の前駆物質、アナログ、アゴニスト、誘導体及び断片からなる群の 内の１つを分泌する活性因子産生細胞を配置することを含む、請求項１に記載の 方法。
9. ９．前記のカプセル封入工程が更に、前記の膜内に、Ｌードーパを分泌する神経 伝達物質産生細胞を配置することを含む、請求項８に記載の方法。
10. １０．前記のカプセル封入工程が更に、前記の膜内に、ブロモクリプチンを分泌 する神経伝達物質産生細胞を配置することを含む、請求項８に記載の方法。
11. １１．前記のカプセル封入工程が、前記の膜内に、遺伝子工学的に活性因子又は 活性なそのアナログ又は断片を産生するようにした細胞を配置することを含む、 請求項１に記載の方法。
12. １２．前記のカプセル封入工程が更に、前記の膜内に、成長因子である増大物質 を配置することを含む、請求項１に記載の方法。
13. １３．前記のカプセル封入工程が更に、前記の膜内に、上皮成長因子（ＥＧＦ） 、神経成長因子（ＮＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、繊維芽細胞成長 因子（ＦＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）及びニューロトロビン−３（ ＮＴ−３）からなる群より選択する増大物質を分泌する細胞を配置することを含 む、請求項１に記載の方法。
14. １４．前記のカプセル封入工程が更に、前記の膜内に、ＮＧＦを分泌する成長因 子産生細胞を配置することを含む、請求項１３に記載の方法。
15. １５．前記のカプセル封入工程が、前記の膜内に、遺伝子工学的に増大物質を産 生するようにした細胞を配置することを含む、請求項１に記載の方法。
16. １６．前記のカプセル封入工程が更に、前記の膜内に、それぞれ増大物質の生物 学的活性を有する増大物質の前駆物質、アナログ、アゴニスト、誘導体及び断片 からなる群の内の１つを分泌する増大物質産生細胞を配置することを含む、請求 項１に記載の方法。
17. １７．前記のカプセル封入工程が更に、前記の細胞を、前記の膜内に、回収可能 な様式で、配置することを含み前記の膜が第１の末端及び第２の末端を有する管 状の形状を有し、これらの末端の少なくとも１つが前記の細胞の取り出しを可能 にする取りはずし可能な蓋要素を付けて有する、請求項１に記載の方法。
18. １８．培養の工程が更に、前記のカプセル封入した細胞を生理学的に適合性の水 性培地中で培養することを含む請求項１に記載の方法。
19. １９．更に、前記の培地から活性因子を抽出することを含む、請求項１８に記載 の方法。
20. ２０．更に、活性因子をカプセル封入した細胞内に蓄積し、次いで、カプセル封 入した細胞を培地から分離し、そして、カプセルを溶解して活性因子を抽出する ことを含む、請求項１８に記載の方法。
21. ２１．患者に活性因子を送達するために該患者に移植するための下記を含む細胞 培養装置： 移植部位において活性因子を通過させて拡散させるが細胞に有害な因子は排除す る半透性膜腹内に配置した少なくとも１種の活性因子分泌細胞（該活性因子分泌 細胞は第１の源から得る）及び 前記の腹内に配置した少なくとも１種の増大物質産生細胞（該増大物質産生細胞 は前記の第１の源とは異なる第２の源から得られ、前記の活性因子とは異なり且 つ前記の活性因子産生細胞を刺激して活性因子を分泌させる増大物質を分泌する ）。
22. ２２．前記の半透性膜が約１５０，０００ダルトンまでの分子量を有する溶質を 透過させる、請求項２１に記載の装置。
23. ２３．前記の半透性膜が、アクリル酸コポリマー、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化 ビニリデン、ポリウレタンイソシアネート、ポリアルギネート、酢酸セルロース 、硝酸セルロース、ポリスルホン、ポリスチレン、ポリウレタン、ポリビニルア ルコール、ポリアクリロニトリル、ポリアミド、ポリメチルメタクリレート、ポ リエチレンオキシド、並びにそれらの誘導体及び混合物からなる群より選択する 材料を含む、請求項２０に記載の装置。
24. ２４．前記の活性因子産生細胞又は前記の増大物質産生細胞が同種特異性である 、請求項２１に記載の装置。
25. ２５．前記の活性因子産生細胞又は前記の増大物質産生細胞が異種特異性である 、請求項２１に記載の装置。
26. ２６．前記の活性因子産生細胞又は前記の増大物質産生細胞を遺伝子工学的に前 記の活性因子又は前記の増大物質を産生するようにした、請求項２１に記載の装 置。
27. ２７．前記の活性因子産生細胞が、神経伝達物質、神経調節物質、成長因子、栄 養因子、共同因子及びホルモンからなる群より選択する活性因子を産生する細胞 である請求項２１に記載の装置。
28. ２８．前記の活性因子が、ドーパミン、ノルエビネフリン、エビネフリン、アセ チルコリン、エンケファリン、タイノルフィン、サブスタンスＰ、ガンマアミノ 酪酸、グルタミン酸、神経伝達物質活性を有するそれらのアゴニスト、前駆物質 、アナログ、誘導体及び断片からなる群より選択する神経伝達物質である、請求 項２１に記載の装置。
29. ２９．前記の神経伝達物質の前駆物質がＬ−ドーパである、請求項２８に記載の 装置。
30. ３０．前記の神経伝達物質アナログがブロモクリブチンである、請求項２８に記 載の装置。
31. ３１．前記の活性因子がドーパミンであり、前記の活性因子分泌細胞を、副腎髄 質組織、クロム親和性細胞、胎児腹側中脳組織、神経芽細胞組織及び、遺伝子工 学的にドーパミンを産生するようにした細胞からなる群より選択する組織又は培 養物から単離する、請求項２１に記載の装置。
32. ３２．前記の増大物質産生細胞が、神経成長因子（ＮＧＦ）、上皮成長因子（Ｅ ＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロピン−３（ＮＴ−３） 、繊維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、及びこれ らの組合せからなる群より選択する増大物質を産生する、請求項２１に記載の装 置。
33. ３３．更に、前記の装置を前記の患者から取り出すことが出来るように前記の半 透性膜に取り付けた、回収可能な、非再吸収性且つ生体適合性のガイドワイヤを 含む、請求項２１に記載の装置。
34. ３４．前記の半透性膜が更に、蓋要素を可逆的に取り付けて有する少なくとも１ つの末端を有する管状である、請求項２１に記載の装置。
35. ３５．前記の活性因子分泌細胞及び前記の増大物質産生細胞を、前記の半透性膜 内に、除去可能な様式で配置し前記の膜が前記の細胞を取り出すことを可能にす るために蓋要素を可逆的に取り付けて有する少なくとも１つの末端を有する管状 である、請求項２１に記載の装置。