JPH06502399A - 悪性腫瘍の治療又は予防のための医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 悪性腫瘍の治療又は予防のための医薬組成物本発明は悪性腫瘍、より好適にはカ ルチノーマ、最も好適には乳癌の治療処置又は予防を目的とする医薬組成物に関 する。

多くの腫瘍細胞は、対応する正常細胞とは質的に、或いは量的に異なった抗原を その表面に発現する。腫瘍の細胞のみ発現された場合、これらの抗原は特異的な ものである。

正常な細胞上と腫瘍の細胞上との両方にこれら抗原が存在するときには、これら 抗原は腫瘍に関連があると言われている。この場合、抗原は腫瘍細胞中に大量に 又は異なった形態で存在する。

現在までヒトにおいて特徴付けられてきた、腫瘍抗原の大多数は、腫瘍と関連付 けられたヒトの抗原である（以下においては関連抗原と呼ぶ）。これらのうち最 も主要なものを以下に示す。

一胎児の組織に存在し、対応する大人の組織には存在しないか又は痕跡状態で存 在する、ガン胎児性抗原のような胎児腫瘍性抗原；その発現は腫瘍の発達中に異 常な様子で再び誘導される。

一特定の細胞型のある種の成熟段階においてのみ通常発現される分化抗原；この 様な抗原を発現させる腫瘍細胞は、その分化の過程でブロックされた細胞にその 起源を有するものと考えられる。

一確認され始めているオンコジーンの生成物従って、腫瘍と関連する抗原の特異 性は、質的と言うよりむしろ量的である。何故ならば、この抗原は、正常な個体 において、局所的に若しくは不連続的に（胎胚期（ｆｅｔｏ−ｅｍｂｒｙｏｎｉ ｃ　ｐｅｒｉｏｄ　）　）或いは痕跡状態で存在していて、腫瘍形成期間中にの み、過剰発現（１０倍から１０００倍のファクターでの発現）するかも知れない からである。この抗原が正常に発現される場合には、“自分自身”の一部として の免疫システムにより認識されるのに対し、その過剰な又は異常な発現は、体液 性の若しくは細胞性の免疫応答を誘発し得る。

一般的に、免疫応答には、２つの主要な形式が存在する＝１つは、Ｂリンパ球に よる抗体の生産により特徴付けられた体液性応答であり、他の１つは、エフェク ター細胞、即ち基本的にはマクロファージ及び細胞障害性Ｔリンパ球ならびに免 疫応答を制御する細胞、即ちヘルパー及びサプレッサー１９２８球が関与する細 胞−介在性免疫応答（ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏ ｎｓｅ　）である。

細胞−介在性免疫応答は、ヘルパーＴリンパ球及びエフェクター細胞の協力を必 要とする。この協力は、とりわけ活性化されたヘルパーＴリンパ球により分泌さ れたインターロイキン２及び様々な他のリンフ才力インの結果として起こる。イ ンターロイキン２は、次いで細胞障害性１９２８球の活動を誘導し、リンフ才力 インはマクロファージの食作用応答を引き起こす。付随して、同様にサプレッサ ーＴ　ＩＪンパ球を使用した細胞−介在性免疫応答を抑制する機序が存在する。

癌にかかった患者が、体液性及び細胞−介在性免疫応答を示すということは現在 、良く知られている。このこと眠特に、何人かの患者の血清が抗腫瘍抗原抗体を 含有してｔ）たこと、及び彼等の血清がインビトロで癌細胞の成長を抑制するこ とができたことにより、明らかにされて（する。それにもかかわらず、自発的な 腫瘍の退行は極めてまれであるから、インビトロで観察された免疫応答はインビ ボでＧヨ効果がないように思われる。同様に、同種移植片は常をこ拒絶されるの にもかかわらず、腫瘍移植片は免疫動物（こお（１てさえも、それほどしばしば 拒絶されることはな０゜免疫応答は腫瘍に対抗して発達するかもしれな０が、患 者にとって真の利益になるかどうかは疑わしくＸｏあらゆることが腫瘍が体内免 疫監視機構を潜り抜けることを示しているようである。この現象を説明するため に、種々のモデルが提案されている。全体的且つ詳細な検討につ０て【よ、１９ ９０年発行のサイエンティフィック・アメリカン、メディシン、６章、■　腫瘍 免疫学、１９９０　（ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＡｍｅｒｉｃａｎ、Ｍｅｄｅｃｉｎ ｅ、Ｃｈａｐｔｅｒ　６　ＶＩＩＩ　Ｔｕｍｏｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、　１ ９９０）を参照されたい。原則として、腫瘍抗原は、個体に対してよりはむしろ 腫瘍に対して有利になるように、免疫応答を修正したり、矛先を変えたりするに 際して、無視できない役割を果たしていると考えられる。

腫瘍に対する免疫応答の複雑さや、この分野での現在の知識の不十分さを考慮し て、抗癌ワクチンの使用は全く目途がたっていない。動物を使用する研究によれ ば、生きている或いは、死んだ癌細胞を使用する免疫は、その後に行われる腫瘍 移植片（ｔｕｍｏｒ　ｇｒａｆｔ　）の拒絶を生ずることが明らかとなった。非 細胞生成物を用いる免疫の試みは、一般的に、それ以上にうまくいっていない。

従って、今日までのところ、癌と関連する抗原を使用してこの癌に対するワクチ ンを製造する可能性は種々議論されており、決着がついていない。この治療法に 対する主な理論的反論は、免疫応答は腫瘍を予防し、或いはこれを治療するため 十分有効であるとは考えられないこと、また、ワクチンが保護効果を発揮するか 否か、即ち、腫瘍を予防し或いはその進行を遅らることができるか否かは甚だ疑 問であるという事実による。

それにもかかわらず、特に乳癌と関連する腫瘍抗原【よ、ワクチンとしての若し くは治療用の形態で、免疫応答を誘起することができ、この免疫応答は、それ以 後の腫瘍による攻撃或いは腫瘍の進行に対する防御となり得ること力く見出され た。問題の抗原は、より具体的にはハイブリドーマＡＴＣＣＮｏ、ＨＢ　８６３ ０より得たモノクローナル抗体Ｈ２３により認識されたものである。このノーイ ブ１ノドーマは、特許出願　ＥＰＡ　１７４，５３４のため寄託され、実験的研 究のため第三者に入手可能である。さら１こ抗体Ｈ２３は、イスラエル　テルア ビブ　ノくゼルスト１ノート　５、ペタハ　テイクバ、私書箱１４２４のテヴア 　ファーマシューテイカル　インダストリーズ　１ノミテツド（Ｔｅｖａ　Ｐｈ ａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ　Ｌｔｄ、５　Ｂａ５ｅｌ　 ５ｔｒｅｅｔ。

Ｐｅｔａｈ　Ｔｉｑｖａ、　Ｐ、　０．　Ｂｏｘ　１４２４．　Ｔｅ１−Ａｖｉ ｖ、　ｌ５ｒａｅｌ）で入手できる。

抗体Ｈ２３は、乳ガン細胞株Ｔ４７Ｄのインビトロの培養上清中に存在する粒子 状物質に対して生成された。その後、抗体Ｈ２３は、乳ガンバイオプシーの大多 数、ならびに乳癌患者の血清及びその他の生理的液と著しく反応することが示さ れた。これとは対照的に、健康な個体におしＸでは、抗体Ｈ２３は、抗原を検知 しないか、或いは痕跡としてのみ検知する。

従って、抗体Ｈ２３によって認識された腫瘍抗原は、乳癌の症例の約９０％の癌 性の乳組織の上皮細胞により異常な状態で発現される一方、健康な個体では発現 はゼロでないにしろ非常に低い。乳房の上皮組織以外の腫瘍性上皮組織において も、腫瘍抗原が有意量で検知されている。

成る１人の患者においては、抗体Ｈ２３により認識される腫瘍抗原は、２つの状 態で存在する。即ち、経膜型（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ　ｆｏｒｍ）と分泌 型（ｓｅｃｒｅｔｅｄ　ｆｏｒｍ）であり、これらのアミノ酸配列はそれぞれ配 列同定図（ＳＩ（ｓｅｑｕｅｎｃｅ　１ｄｅｎｔｉｆｉｅｒ）　）番号１及び番 号２により示される。経膜型及び分泌型は、ともに高い多形性を示す。実際に抗 原の両形態の配列は、それぞれのＳＩにおいて線で囲まれ、且つ数度にわたりに 縦方向（ｔａｎｄｅｍ）に繰り返され得毬２０個のアミノ酸のサブユニットを含 有する。このサブユニットの配列は、式（１）　Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−３ｅｒ−Ｔｈ ｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｘ−Ａｌａ−Ｂｉｓ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−３ｅｒ− ＾１ａ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｘ　（式中、ＸはＰｒｏ又はＡ ｌａであり、ＹはＴｈｒ又はＡｓｎである）で表される。個体間において、この 縦列（ｔａｎｄｅｍ）の繰り返しの数は、はぼ２０から８０まで変化でき、特に 多形性を特徴付ける。最後に１つの繰り返しと他の繰り返しの間で、アミノ酸の 最小数（しばしば１，２又は３のアミノ酸）が変更される。

さらに、上述の２０のアミノ酸からなるサブユニットは、抗体Ｈ２３と反応して いる腫瘍抗原に対して特異的であることが明らかにされた。なぜならば、このサ ブユニットは、この抗体より認識されるエピトープを含んでいるからである。

従って、本発明は、治療剤として（ｉ）抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチ ドまたは（ｉｉ）抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドをコードするＤＮＡ フラグメントをゲノムに挿入したウィルスと、医薬の観点から許容できる希釈剤 または賦形剤との混合物を含む悪性腫瘍の治療処置または予防を目的とする医薬 組成物を提供するものである。

より一般的な観点からは、本発明の主題は、悪性腫瘍を治療または予防するため の治療剤としての、抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドである。

同様に、本発明の主題はまたニ ー　抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチド（ｉ）または、悪性腫瘍を治療ま たは予防するために抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドをコードするＤＮ Ａフラグメントをゲノムに挿入したウィルス（ｉｉ）の使用；−抗体Ｈ２３によ り認識されるポリペプチド（ｉ）または抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチ ドをコードするＤＮＡフラグメントをゲノムに挿入したウィルス（ｉｉ）の治療 的に有効な量を、その様な治療が必要な被験者（ｓｕｂｊｅｃｔ　）に投与する 行為を含む、悪性腫瘍を治療または予防する方法 である（治療的に有効な量とは、効果的な治療を実行するのに十分な量を意味す るものと理解される）。

抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチド（ｐｏｙｐｅｐｔｉｄｅ）は、特に配 列（Ｉ　）　：　Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｘ−Ａｌ ａ−Ｈｉ　ｓ−Ｇ　１ｙ−Ｖａ　１−Ｔｈｒ−８ｅｒ−Ａ　１　ａ−Ｐｒｏ−Ａ ｓｐ−Ｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｘ　（式中、ＸはＰｒｏ又はＡｌａであり、ＹはＴ ｈｒ又はＡｓｎである）を含むポリペプチドであっても良い。該配列（Ｉ）は、 抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドの完全な配列であることもあるし、抗 体Ｈ２３により認識されるポリペプチドの単一のまたは繰り返しフラグメントを 示すこともある。

抗体Ｈ２３により認識される好ましいポリペプチドは、その配列が、軽層型また は分泌型で抗体Ｈ２３により認識される、ヒト上皮組織の抗原（以下、この抗原 をＨ２Ｓ−ＥＴＡと命名する）の配列を含めて、その配列が少なくとも８０％、 好ましくは少なくとも９０％、特に好ましくは９５〜１００％のホモロジーの程 度を示す、抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドである。

ＳＩ番号１に示されるように、Ｈ２Ｓ−ＥＴＡの軽層型は、１位のスレオニン残 基から始まり、４１４＋（２０Ｘｎ）位のロイシン残基で終わるアミノ酸配列を 有する一方、ＳＩ番号２に示されるように、Ｈ２Ｓ−ＥＴＡの分泌型は、１位の スレオニン残基から始まり、２４６＋　（２０ｘｎ）位のプロリン残基で終わる アミノ酸配列を有する。極めて一般的には、ｎは１〜８０の数であり；好ましく は１〜４０の数であり；特に好ましくは、ｎは２．３または４の数である。

より詳しくは、Ｈ２Ｓ−ＥＴＡの軽層および分泌型は、Ｎ−末端領域の１０６個 のアミノ酸（以下、Ｎ−末端領域という）および繰り返されるサブユニットのセ ットに相当する中間領域は共通性を有するニ一方、そのＣ末端は、相当に異なっ ている。アミノ酸の１０７＋　（２０Ｘｎ）位かその配列が、ＳＩ番号１および ２に記載されるものの一方と同一でない、抗体Ｈ２３により認識される好ましい ポリペプチドは、Ｎ−またはＣ−末端領域において、ランダムに分布された少な くとのＩｍのアミノ酸の突然変異（点突然変異）により特徴付けられる。全突然 変異の数は、当然に、上記のホモロジーの程度の基準を満足しなければならない 。１点突然変異１とは、ＳＩ番号１または２に記載されるＮ−またはＣ−末端領 域のアミノ酸の欠失または置換、およびＳＩ番号１または２に記載されるＮ−ま たはＣ−末端領域の範囲内のアミノ酸の付加を意味するものと理解される。

一般的に言うと、抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドは、化学合成などの 通常の方法により製造することもでき、アミノ酸配列が多数の残基を含むときに は組換えＤＮＡ技術により製造することもできる。より詳しくは、製造法は、抗 体Ｈ２３により認識されるポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメントで形質 転換された宿主微生物を培養する工程、および培養物から該ポリペプチドを収穫 する工程を有する。宿主微生物は、特に限定されるものではないが、問題となっ ているＤＮＡフラグメントが、宿主生物のゲノムに組み込まれているか、または 好適な発現ベクターに挿入されている限り、すなわち、宿主生物中で複製可能で ある限り、例えば細菌、酵母、または哺乳動物細胞などの形質転換できる任意の 微生物であって良い。当然に、抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドをコー ドするＤＮＡフラグメントは、好適な転写及び翻訳シグナルを有する領域の制御 下に置かれる。発現ベクター及び制御領域は、当業者に良く知られている。

最近の１０年間に、種々の病原性生物に対し免疫応答を誘導する目的の試薬とし て組換えウィルスを使用することが提案されてきた。本発明における使用に際し 、鳥のポックスウィルス、カナリアポックスウィルス（ｃａｎａｒｙｐｏｘ　ｖ ｉｒｕｓ　）またはワクシニアウィルスが非常に好ましい。ワクシニアウィルス は、天然痘ウィルス（ｓｍａｌｌｐｏｘ　ｖｉｒｕｓ）と交差免疫反応を示し、 結果として１９世紀から抗−天然痘ワクチンとして使用されてきた。１９８０年 代の初期において、天然痘は地球表面から絶滅すると考えられており、世界保健 機構は天然痘に対する予防接種を停止するのが好ましいと判断した。従って、ワ クシニアウィルスは、天然痘以外の病原性生物のベクターに特異的な抗原決定基 をコードする異種遺伝子を発現するようにそのゲノムが修飾されたワクシニアウ ィルスを含むワクチンとして今や利用することができる。

本発明の医薬組成物の治療剤はまた、抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチド をコードするＤＮＡフラグメントをゲノム中に挿入したウィルスであっても良い 。

この型の医薬組成物は、安価に製造することができ、種々の環境条件下で大きな 安定性を示す利点がある。特に、貯蔵条件に制限は課されない。

異種蛋白質を発現するためのブロックを発現させ得るワクシニアウィルスを得る ための一般的な条件は、欧州特許ＥＰ８３，２８６に記載されており、その内容 は参考資料（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）として本明細書中に取り込まれる。これらの 条件は、ベクターが発現ブロックを挿入し得る非必須ゲノム領域を少なくとも１ 種有する限り、ベクターとして許容される他のウィルスにも適用可能である。

抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメントをゲ ノム中に挿入したワクシニアウィルスは、既述のように哺乳類細胞の培養物中で 該ポリペプチドを製造するための特別な発現ベクターとして使用することもでき る。

抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチド、または該ポリペプチドをコードする ＤＮＡフラグメントをゲノム中に挿入したウィルスは、生体内で以下の試験にお いて抗腫瘍活性を示す：４〜５週齢のＣａＨ系マウスまたはフィッシャー（Ｆｉ ｓｈｅｒ）系ラットを、２回の処置の間に１０日間の間隔をおきながら、抗体Ｈ ２３により認識されるポリペプチドをｌＯ〜５００μｇ１または該ポリペプチド をコードするＤＮＡフラグメントをゲノム中に挿入したウィルスを１０７〜１０ ８　ｐｆｕ（プラーク形成単位（ｐｌａｑｕｅ　ｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔｓ）　 ）で２度処理する。ペプチドが使用されたとき、該処理は好ましくは皮下注射に よりなされる。尾の乱刺法（ｓｃａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）が、ウィルスの場合 には好ましい。最初の処置の１５日後に、約１０　−１０７個の、インビトロで 培養され、トリプシンで処理され、ＰＢＳ　（リン酸緩衝生理食塩水）バッファ ー中で洗浄され再懸濁された、Ｈ２３−ＥＴＡを発現する同系腫瘍細胞が、約１ ００μｌの容量で皮下注射される。平行して、未処理の動物が同様にして同じ腫 瘍攻撃に供される。細胞の注射の約２０日後に、皮下注射した腫瘍の大きさは、 未処理の動物よりもポリペプチドまたはウィルスで処理された動物の方がより小 さい。

抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチド、または該ポリペプチドをコードする ＤＮＡフラグメントがゲノム中に挿入されたウィルスは、結果として、癌性の状 態、より詳しくは、例えば哺乳類の腫瘍のようにカルチノーマ型の腫瘍（上皮細 胞により発達した腫瘍）を治療または予防するのに有用である。

これらの適用（１ｎｄｉｃａｔｉｏｎ）のための適当な用量は、例えば使用され るポリペプチドまたはウィルス、処理される個体、投与経路、ワクチンとして使 用するのか治療に使用するのか、処理される腫瘍状態の性質及び進行度（５ｅｖ ｅｒｉｔｙ）などにより変化する。しかしながら、一般には、適応症（１ｎｄｉ ｃａｔｉｏｎ）は、哺乳類、例えばヒトにおける満足できるワクチンの結果は、 該ポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメントがゲノム中に挿入されたウィル スを、単回投与または約１〜３週間の間隔をおいてもう１度またはもう２度の繰 り返し投与で、約１０ｐｆｕ／ｋｇ〜約１０８ｐｆｕ／ｋｇ　（の哺乳類の体重 ）の条件で使用したときに得られる。

本発明の医薬組成物は、任意の通常の経路で投与され、特に、例えば注射可能な 溶液または懸濁液の形態で皮下経路で投与される。ワクチンとしては、本発明の 組成物は、すでに知られているワクチンで実施されている通常の態様に従い投与 され、例えば単回投与または所定の間隔をおいてもう１度またはもう数度の繰り 返し投与で行われる。本発明の組成物がキャンサーの治療処置に使用されるとき 、有効な治療に十分な期間繰り返し投与され得る。そのような組成物は、腫瘍内 に注射されるのが良いかもしれない。

本発明による医薬組成物は、公知の方法により調製され得る。治療剤がワクシニ アウィルスの場合は、好ましくはこのウィルスは減弱した生きた状態で使用する 。現今では減弱したウィルス株が利用できる。例えば、チミジンキナーゼ欠損コ ペンハーゲン（Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ）株がある。本発明による組成物を使用す るのに必要な組換え型のウィルスを得るためには、その様な株の使用で十分であ る。最終的に、組換え型ウィルスは、当業者に周知の適当な化学的処理により減 弱され得る。

図１を参照して、以下に本発明の詳細な説明する。

図１は、分泌型Ｈ２３−ＥＴＡ　（→１）又は軽層型Ｈ２３−ＥＴＡ　（→２） をコードするゲノムＤＮＡフラグメントを図式的に示す。ブロック部と間隔部は 、それぞれエクソンとイントロンを表わす。黒い部分はシグナル配列に相当し、 斜線の部分は繰り返し配列（ａ、ｂ、ｃ、ｄの４か所）を示す。ＤＮＡフラグメ ント番号１と２は、分泌型Ｈ２３−ＥＴＡをコードする完全フラグメントの構築 に使用されるのに対し、ＤＮＡフラグメント番号３から５は、軽層型Ｈ２３−Ｅ ＴＡをコードする完全フラグメントの構築に使用される。この図における制限酵 素切断部位は、８１番号１と２にも、見出される。

実施例Ｉ Ｈ２３の一部をコードする相補的なゲノムＤＮＡフラグメントを、レシュナーら の方法（Ｗｒｅｓｃｈｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、Ｅｕｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、（ １９９０）１８９：４６３）の手順に従い単離する。次いで、これらフラグメン トを、分泌型もしくは軽層型の完全なＨ２３−ＥＴＡ抗原をコードする一本のＤ ＮＡフラグメントに再構築する。

プラスミドの構築について、図１を参照して以下に記述する。

Ａ１分泌型Ｈ２３−ＥＴＡの合成を促進し得るワクシニアウィルスの調製 ＥｃｏＲＩ−ＰｖｕＸ相補的ＤＮＡフラグメント（番号１）を、レイゼら（Ｌａ ｔｈｅ　ｅｔ　ａｌｌ、Ｇｅｎ６（１９８７）　５７：１９３）に記載されたベ クターｐＰｏｌｙｎの複数挿入領域（ｍｕｌｔｉｐｌｅ　１ｎｓｅｒｔｉｏｎ　 ｒｅｇｉｏｎ）のＥｃｏＲＩとＰｖｕＩＩ部位との間に導入し、プラスミドｐＥ ＴＡ−５−を得る。４つの繰り返しユニットを含むＰｖｕｌＩゲノムＤＮＡフラ グメント（番号２）を、ｐＥＴＡ−５−の複数挿入領域のＰｖｕＩ［部位に、フ ラグメント番号工の下流に且つ適切な配向（ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ）で導入す る。繰り返しユニットａ、ｂ、ｃ及びｄにおいて、コドンＸＸＸＩ及びｘｘｘ２ は、それぞれ、ＣＣＡ（Ｐｒｏ）及びＣＣＣ（Ｐｒｏ）、ＣＣＡ及びＣＣＣ，Ｇ ＣＡ　（Ａ１　ａ）及びＧＣＣＳＣＣＡ及びＧＣＣである。同様に、繰り返しユ ニットａ、ｂ及びＣでは、コド：ｚｙｙｙはＡＣＣ（Ｔｈｒ）であり、ユニット ｄでは、コドンｙｙｙはＡＡＣ（Ａｓｎ）である。

完全な分泌型Ｈ２３−ＥＴＡをコードするＢａｍＨＩ−８ａｌＩフラグメントを 、最終的に得られたプラスミドから摘出する。次いで、このフラグメントを、ワ クシニアウィルスプロモーターＥ７．５にの下流で且つチミジンキナーゼをコー ドするワクシニアウィルス遺伝子の中の、キーニイら（Ｋｉｅｎｙ　ｅｔ　ａｌ 、、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｔｏｇｙ、（１９８６）　４ニア９０）により記載さ れたトランスファーベクターｐｔｇ１９４−ｐｏｌｙのＢａｍＨＩと５ａｌＩ部 位間に挿入される。

次いで上記パラグラフで得られたトランスファーベクターを用いて、キーニイら （Ｋｉｅｎｙ　ｅｔ　ａｌ、、Ｎａｔｕｒｅ　（１９８４）　３１２：１６３） に記載された方法に従い、分泌型Ｈ２３−ＥＴＡの発現ブロックをワクシニアウ ィルスのコペンハーゲン株のゲノムに転移（ｔｒａｎｓｆｅｒ）する。こうして 、ワクシニアウィルスＶｖ−ＥＴＡ−Ｓが得られる。

Ｂ、軽層型Ｈ２３−ＥＴＡの合成を促進し得るワクシニアウィルスの調製 ４つの繰り返しユニットを含むＰｖｕｎ−ＰｓｔＩゲノムＤＮＡフラグメント（ 番号３）を、ｐＥＴＡ−５”の複数挿入領域のＰｖｕＩＩとＰｓｔＩ部位との間 に、フラグメント番号１の下流で且つ適切な配向で導入する。繰り返しユニット ａＳｂＳｃ及びｄにおいて、コドンｘｘｘ１及びｘｘｘ２は、それぞれＣＣＡ（ Ｐｒｏ）及びＣＣＣ（Ｐｒｏ）　、ＣＣＡ及びＣＣＣ，ＧＣＡ　（Ａ１　ａ）及 びＧＣＣ。

ＣＣＡ及びＧＣＣである。同様にコドンｙｙｙは、繰り返しユニットａ、ｂ及び Ｃでは、ＡＣＣ（Ｔｈｒ）であり、繰り返しユニットｄでは、コドンｙｙｙはＡ ＡＣ（Ａｓｎ）である。

クローン化したフラグメントに対応するＥｃｏＲＩ−Ｐｓｔｒフラグメントを、 最終的に得られたプラスミドから摘出する。ＥｃｏＲＩのコヒーシブ（ｃｏｈｅ ｓｉｖｅ）末端を、フレノウ　ポリメラーゼによる処理でプラントエンド（ｂｌ ｕｎｔ　ｅｎｄ）に変換する。次いで、このフラグメントを、前記レイズら（Ｌ ａｔｈｅ　ｅｔ　ａｌ、。

）に記載のベクターｐＰｏｌｙＩ　ｌ−３ｆ　ｉ／Ｎｏｔ−１４の複数挿入領域 の予めフレノウ　ポリメラーゼで処理されたＸｈｏＩ部位とＰｓｔＩ部位との間 に導入し、プラスミドｐＥＴＡ−Ｔ−５−を得る。

Ｐｓｔｌ−ＢａｌＩ相補的ＤＮＡフラグメント（番号４）を、ｐＥＴＡ−Ｔ−５ ＝のＰｓｔＩ部位とＢａｌＩ部位との間に導入する。次いで、Ｂａ１Ｉ−Ｂａｌ Ｉ相補的ＤＮＡフラグメント（番号５）を、最終的に得られたプラスミドのＢａ ｌＩ部位に導入する。

完全な経原型Ｈ２３−ＥＴＡをコードするＢｇｌｎ−８ＳｔＩフラグメントを、 上記パラグラフで得られたプラスミドから摘出し、次いで、これを上記のキーニ イら（Ｋｉｅｎｙ　ｅｔ　ａｔ、、（１９８６））に記載されたトランスファー ベクターｐｔｇ１８６　ｐｏｌｙのＢａｍＨＩ部位と５ｓｔＩ部位との間に導入 する。そこは、ワクシニアウィルス　プロモーターＥ７．５にの下流及びチミジ ンキナーゼをコードするワクシニアウィルス遺伝子の内部である。

上記パラグラフで得られたトランスファーベクターを用いて、前記キーニイら（ Ｋｉｅｎｙ　ｅｔ　ａｌ、、（１９８４））の方法に従い、軽層型Ｈ２３−ＥＴ Ａの発現のためのブロックをワクシニアウィルスのコペンハーゲン（ＶＶ−０） 株のゲノムに転移（ｔｒａｎｓｆｅｒ）する。こうして、ワクシニアウィルスＶ Ｖ−ＥＴＡ−Ｔが得られる。

実施例　２：　ウィルスストック（ｖｉｒｕｓ　５ｔｏｃｋｓ）の調製精製した ウィルスのストックを、ＢＨＫ−２１細胞を用いて調製する。ＢＨＫ−２１細胞 を、組換えウィルスｖｖ−ＥＴＡ−８及びＶＶ−ＥＴＡ−Ｔ　（０，ｌｐ　ｆｕ ／細胞）で４８時間感染させる。その後、培養物を一２０℃で凍結し、室温で解 凍する。低張性の緩衝液中ボッター（ｐｏｔｔｅｒ）を用いて３回連続して処理 することにより細胞壁を破壊後、上清の可溶性蛋白を３６％（Ｗ／Ｖ）スクロー スのクッション（ｃｕｓｈｉｏｎ　）上に負荷し、遠心（ベックマン（Ｂｅｃｋ ｍａｎ）ＳＷ　２８．１時間、１４Ｋ）する。ウィルスを含むペレットを、１０ ｍＭ　トリス−塩酸（ｐＨ８）の溶液に入れ、直線（２０−４０％）スクロース グラジェント上に置く。遠心（ＳＷ　２８．４０分間、１４Ｋ）後、ウィルスの 蛋白光（ｏｐａｌｅｓｃｅｎｔ）のバンドを、シリンジを用いて回収し、遠心（ ＳＷ　２８．２０に、１時間）によって濃縮する。最後に、ウィルスを少量の１ ０ｍＭ　）リス−Ｈｅ１　１　（ｐＨ８）に入れ、約１０１０ｐ　ｆ　ｕ／ｍ　 ｌのウィルスストックを得る。

実施例　３：　Ｈ２３−ＥＴＡを発現する腫瘍細胞株Ａ、Ｈ２３−ＥＴＡの発現 を促進することができる真核性プラスミドの構築 Ｈ２３−ＥＴＡの分泌型をコードするＢａｍＨＩ−８ａＩＩ　ＤＮＡフラグメン トを、実施例ＩＡ　第１パラグラフで得られたプラスミドから摘出する。これを 、ゴーティア−ら（Ｇａｕｔｉｅｒ　ｅｔ　ａｌ、）、Ｎｕｃｌ、　Ａｃ１ｄ　 Ｒｅｓ、、（１９８９）　１７（２０）　：８３に記載されたプラスミドｐＨＭ Ｇの多発性の挿入域（ｍｕｌｔｉｐｌｅ　１ｎｓｅｒｔｉｏｎ　ｒｅｇｉｏｎ　 ）のＢａｍＨＩ及び５ａＩＩ部位間に再導入し、３−ヒドロキシ−３−メチルグ ルタリルコエンザイム入りダクターゼ（３−、ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｍｅｔｈｙ Ｉｇｌｕｔａｒｙｌｃｏｅｎｚｙｍｅ　Ａ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ）　（ＨＭ　Ｇ 　ＣＲ）遺伝子のプロモーターの支配下であって、５ｖ４０ポリＡのシグナル配 列の下流に置く。これによってプラスミドｐＨＭＧ−ＥＴＡ−８が得られる。

同様にして、プラスミドｐＨＭＧ−ＥＴＡ−Ｔを、同様な方法で、実施例ＩＢ、 第２パラグラフで得られたプラスミド由来のＢａｍＨＩ−ＥｃｏＲＶ　ＤＮＡフ ラグメントの挿入によって構築する。

Ｂ、　細胞株の調製 マトリシューら（Ｍａｔｒｉｃｅａｕ　ｅｔ　ａｌ、）　ＥＭＢＯＪ、　（１９ ８５）　４　：１４３５によるフィッシャーラット繊維芽細胞から得られる腫瘍 細胞株ＦＲ３Ｔ３−ｒａｓ−１の細胞及びＣ３Ｈマウス由来のマウス乳癌株ＭＭ ５ｔの細胞を、（ｉ）ｐＨＭＧ−ＥＴＡ−３及びコルベレーガラピンら（Ｃｏ　 １　ｂｅｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ　ｅｔ　ａｌ、）　、　Ｊ、　Ｍｏｌ、　Ｂｉｏ ｌ、（１９８１）　１５０　：　１に記載され、ゲネチシン（Ｇｅｎｅｔｉｃｉ ｎ　）　（Ｇ　４１８　）の耐性の遺伝子を含むプラスミドｐＡＧ６０；又は（ ｔｉ）　ｐＨＭＧ−ＥＴＡ−Ｔ及びｐＡＧ６０で同時トランスフェクション（ｃ ｏｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）する。トランスフェクションを完了するために、 ウィグラーら（Ｗｉｇｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、）　Ｃｅ１ｌ　（１９７ｇ）１４ 　：　７２５で修飾されたグラハムら（Ｇｒａｈａｍ　ｅｔ　ａｌ、、）　Ｖｉ ｒ。

１ｏｇｙ　（１９７３）　５２　：　４５６の燐酸カルシウム沈殿法を用いる。

トランスフェクトされたクローンを、５００μｌ／ｍｌのＧ４１８の存在下選択 し、培養する。Ｈ２３−ＥＴＡを発現するクローンの選択は、抗体Ｈ２３との反 応後ペルオキシダーゼでの細胞標識によって成される。純粋な状態の細胞株を限 界希釈法により得、Ｈ２３−ＥＴＡの発現をモニターする。

細胞株を以下に命名する： ＦＲ３Ｔ３−ｒａｓ−１ （ｐＡＧ６０／ｐＨＭＧ−ＥＴＡ−３）：Ｆ−８ＦＲ３Ｔ３−ｒａｓ−１ （ｐＡＧ６０／ｐＨＭＧ−ＥＴＡ−Ｔ）：Ｆ−ＴＦＲ３Ｔ３−ｒａｓ−１ （ｐＡＧ６０／ｐＨＭＧ）：Ｆ−Ｃ ＭＭ５ｔＣ３Ｈ （ｐＡＧ６０／ｐＨＭＧ−ＥＴＡ−Ｓ）：Ｍ−８ＭＭ５ｔＣ３Ｈ （ｐＡＧ６０／ｐＨＭＧ−ＥＴＡ−８）：Ｍ−７ＭＭ５ｔＣ３Ｈ （ｐＡＧ６０／ｐＨＭＧ−ＥＴＡ−８）：Ｍ−Ｃ実施例　４：　Ｈ２３−ＥＴＡ のワクチン効果の証明４から５週齢のフィッシャーｒｏｐｓ系雄及び雌ラット並 びにＣ３Ｈ系雌マウスを、以下の方法によって免疫する：ＶＶ−ＥＴＡ−３．Ｖ Ｖ−ＥＴＡ−Ｔ又はｖｖ−０の精製したウィルス調製物を、約２Ｘ１０７ｐｆｕ に相当する１０μｌ量を、尾への乱刺法によって動物に投与する。この処理を１ ０日後に繰り返す。

Ｆ−３，Ｆ−Ｔ、Ｆ−ＣＸＭ−８，Ｍ−Ｔ及びＭ−Ｃ腫瘍株を、１０％牛脂児血 清、１００単位のペニシリン及び１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを添加 した修飾したダルベツコ培地（ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）　）中で培養する。その後 培養物をトリプシンで処理し、ＰＢＳ　（リン酸緩衝生理食塩水）で洗浄、懸濁 する。

免疫第１段階の１４日後に、２ｘｌＯ４Ｆ−Ｃ細胞、４ＸＩＯＦ−３細胞、１． ５Ｘ１０５Ｆ−Ｔ細胞或いは２Ｘ１０６Ｍ−Ｃ，Ｍ−３又はＭ−Ｔ細胞を、１０ ０μｍの容量で動物の皮下に注射する。

皮下の腫瘍の出現を毎日モニターする。腫瘍の直径を２方向から測定する。実験 の完全なデータ及び結果を以下の表工に示す。

裏■ 表工に示すように、動物をＦ−３又はＦ−Ｔで感染させると、事前にワクシニア ウィルスＶＶ−ＥＴＡ−８又はＶＶ−ＥＴＡ−Ｔを使用して処理した動物群での 腫瘍の出現率は、処理していない動物群又はｖｖ−〇ワクシニアウィルスで処理 した動物群よりも低い。更に、事前にＶＶ−ＥＴＡ−８又はＶＶ−ＥＴＡ−Ｔで 処理した動物で出現した腫瘍小節（ｔｕｍｏｒ　ｎｏｄｕｌｅｓ　）の大きさは 、処理していない動物又はＶＶ−Ｏで処理した動物で観察される腫瘍小節よりも はるかに小さい。

ＶＶ−ＥＴＡ−３又はＶＶ−ＥＴＡ−Ｔを用イル免疫は、Ｈ２３−ＥＴＡの分泌 又は軽層型を発現する細胞で誘導される腫瘍の場合にのみ効果的である。ウィル スのワクチンの効果はこの様に非常に特異的である。

最後に、ＶＶ−ＥＴＡ−Ｔのワクチンの効果は、腫瘍を誘導する細胞によって発 現されるＨ２３−ＥＴＡの型に関係な（、ＶＶ−ＥＴＡ−８のそれよりも優れて いるようでフィッシャー系ラットを、実施例４に示すように腫瘍細胞で感染させ る。腫瘍が出現すると同時に（１０〜１５日後）、実施例４に示すようにウィル ス調製物を用いて治療を行う。

実験のデータ及び結果を以下の表■に示す：１互 表■に示すように、ＶＶ−ＥＴＡ−３又はＶＶ−ＥＴＡ−Ｔを用いた感染治療は 、コントロール試験に比べ、腫瘍の外観（ａｐｐｅａｒａｎｃｅ）の出現率及び 大きさに好ましく１効果を有する。更に、Ｖ　Ｖ　−Ｅ　Ｔ　Ａ　−Ｔ　Ｇｉ、 ＭＶ−ＥＴＡ−８よりもより効果的であるように見える。

配列識別番号１　（ＳＥＱＵＥＮＣＥ　ＩＤＥＮＴＩＦＩＥＲＮｏ、１）主題： Ｈ２３−ＥＴＡ抗原の軽層型 配列の型：　ＤＮＡフラグメントの配列および対応するアミノ酸配列 分子型：相補的ＤＮＡ 起源：乳ガン株Ｔ４７Ｄ 完全ＤＮＡフラグメントの特徴： ＥｃｏＲＩ−Ｂａ　ｌ　Ｉフラグメントコーディング配列：核酸５８〜核酸１３ ６２＋　（６０ｘ　ｎ）アミノ酸配列の特徴： シグナルペプチド：アミノ酸−２１〜アミノ酸−１＊ 成熟型二アミノ酸１〜アミノ酸４１４　、を意味する。

繰り返し配列二以下にボックスで示されるように、Ｘｌ及びｘ２は独立してＰｒ ｏまたはＡｌａであり、ＹはＴｈｒまたはＡｓｎである。

ＣＧＴ　ＣＡＴ　ＧＣＡ　ＡＧＣＴＣ？　Ａｃｅ　ＣＣＡ　ＧＧＴ　ＩＩＪＡ　 （ＪＡ　ＡＡＧ　ＧＡＧ　Ｍゴ　１６１１２６０’　２６５” ？ＣＡ　ＧＡ、ＣＧＴ’ＣＡＧＯＧＴＧ　ＡＧ？　ＣＡＴ　ＧＴＱ　ＣｅＡ　Ｔ ”ｎ　ＣＣＴ　ＴＴＣＴＣＴ　１０４４　＋　（６０ｘｎｌ入＾ＣＴｉＧ　？Ａ Ｇ　ＧＧＧζＡＣＧＴ（ココ　ｃｃｃｒｃｒα＾ａｃ　テｅ　１３り２　＋　（ ６０３ＣＯ）へｓｎＬ纏Ｕτ・【 配列識別番号２ 主題：Ｈ２３−ＥＴＡ抗原の溶解型 配列の型：ＤＮＡフラグメントの配列および対応するアミノ酸配列 分子型：相補的ＤＮＡ 起源：乳ガン株Ｔ４７Ｄ 完全ＤＮＡフラグメントの特徴： ＥｃｏＲＩ−ＰｖｕＩｒフラグメント コーディング配列；核酸５８〜核酸８５８　＋　（６０Ｘ旦）アミノ酸配列の特 徴： シグナルベブチド：アミノ酸−２１〜アミノ酸−１＊ 成熟型二アミノ酸１〜アミノ酸２４６　、ゝは［＋（２０Ｘｎ）コ　（ｎは１〜 ８０の数である。）繰り返し配列：以下にボックスで示されるように、Ｘｌ及び Ｘ２は独立してＰｒｏまたはＡｌａであり、ＹはＴｈｒまたはＡｓｎである。

’ｌ’ｃ（：　ＣＣＴ　ＡＣＣＣＡＧ　ＡＩＩＪ　入Ｇ？　？ＣＡ　ＧＴＧ　Ｃ ＣＣＡＧＩ：　？ｅ？　Ａ（：？　Ｗ　２０７ＧＬｙ　Ｓａｔ　Ｔｈｒ　ＡｌＪ ｋ　Ｐｒｏ　ｘ、入１ａ　！！ｉｓ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｓａｔ　入１ａ ＡＴＧ　ＣＴＣＣＣＣｕ　ＡＧＣＡＧＣＣＡ？ＣＭＪａＣＴＧＴＣＣＡＯＣ＋： Ｃ？’Ｔ？Ｇ　８９１　＋　（６０ＸｎｌＨａｔし＋ｕ　Ｐｒｏ　？・ｔ゛ ２４５・ 国際調査報告 国際調査報告 フロントページの続き （７２）発明者　ラテ　リチャード イギリス国　リーズ　エルニス８　ジ　アベニュ　１ニー （７２）発明者　アロイベニ　マラ イスラエル国　４７２７９　ラマトーハーシャロン　ハネビーム　ストリート２ ７３０

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　治療剤として、医薬の観点から許容できる希釈剤または賦形剤と混合した抗 体Ｈ２３により認識されるポリペプチドを含む悪性腫瘍の治療または予防のため の医薬組成物。 ２　抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドが、式（Ｉ）【配列があります】 （式中、Ｘ１および Ｘ２は独立してＰｒｏ又はＡｌａであり、ＹはＴｈｒ又はＡｓｎである）のｎ回 繰り返された配列（ｎは、１〜８０の数である）を含む請求項１に記載の組成物 。 ３　抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドが、ｎ回繰り返される式（Ｉ）の 配列を含み、その完全な配列が、（ｉ）１位のスレオニン残基から始まり、４１ ４＋（２０×ｎ）位のロイシン残基で終わるＳＩ番号１で示される配列、または （ｉｉ）１位のスレオニン残基から始まり、２４６＋（２０×ｎ）位のプロリン 残基で終わる、ＳＩ番号２で示される配列と少なくとも８０％のホモロジーの程 度を示し；一方のポリペプチドの式（Ｉ）の配列に関係する番号ｎと、他方のＳ Ｉ番号１または２で示される配列に関係するそれとが従属関係にあり、１〜８０ の数である請求項２に記載の組成物。 ４　抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドが、ｎ回繰り返される式（Ｉ）の 配列を含むポリペプチドであり、その完全な配列が、（ｉ）１位のスレオニン残 基から始まり、４１４＋（２０×ｎ）位のロイシン残基で終わるＳ１番号１で示 される配列、または（ｉｉ）１位のスレオニン残基から始まり、２４６＋（２０ ×ｎ）位のプロリン残基で終わる、ＳＩ番号２で示される配列と少なくとも８０ ％のホモロジーの程度を示し；一方の該ポリペプチドの式（Ｉ）の配列に関係す る番号ｎと、他方のＳＩ番号１または２で示される配列に関係するそれとが従属 関係にあり、２，３または４である請求項３に記載の組成物。 ５　抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドが、その配列として、（ｉ）１位 のスレオニン残基から始まり、４１４＋（２０×ｎ）位のロイシン残基で終わる ＳＩ番号１で示される配列、または（ｉｉ）１位のスレオニン残基から始まり、 ２４６＋（２０×ｎ）位のプロリン残基で終わる、ＳＩ番号２で示される配列を 有し；ｎが１〜８０の数である請求項３に記載の組成物。 ６　抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドが、その配列として、（ｉ）１位 のスレオニン残基から始まり、４１４＋（２０×ｎ）位のロイシン残基で終わる ＳＩ番号１で示される配列、または（ｉｉ）１位のスレオニン残基から始まり、 ２４６＋（２０×ｎ）位のプロリン残基で終わる、ＳＩ番号２で示される配列を 有し；ｎが２，３または４である請求項５に記載の組成物。 ７　治療薬として、抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドをコードするＤＮ Ａフラグメントをゲノム中に挿入したウイルスを含み、該ＤＮＡフラグメントが 、好適な転写及び翻訳シグナルの支配下に置かれる悪性腫瘍を治療または予防す るための医薬組成物。 ８　抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメント をゲノム中に挿入したウイルスを含み；該ポリペプチドがｎ回繰り返された配列 を含み、ｎが１〜８０の数であり；および、式（Ｉ）【配列があります】（式中 、Ｘ１およびＸ２は独 立してＰｒｏ又はＡｌａであり、ＹはＴｈｒ又はＡｓｎである）である請求項７ に記載の組成物。 ９　抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメント をゲノム中に挿入したウイルスを含み、ｎ回繰り返される式（Ｉ）の配列を含み 、その完全な配列が（ｉ）１位のスレオニン残基から始まり、４１４＋（２０× ｎ）位のロイシン残基で終わるＳＩ番号１で示される配列、または（ｉｉ）１位 のスレオニン残基から始まり、２４６＋（２０×ｎ）位のプロリン残基で終わる 、ＳＩ番号２で示される配列と少なくとも８０％のホモロジーの程度を示し；一 方の該ポリペプチドの式（Ｉ）の配列に関係する番号ｎと、他方のＳＩ番号１ま たは２で示される配列に関係するそれとが従属関係にあり、１〜８０の数である 請求項８に記載の組成物。 １０　抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメン トをゲノム中に挿入したウイルスを含み、ｎ回繰り返される式（Ｉ）の配列を含 み、その完全な配列が（ｉ）１位のスレオニン残基から始まり、４１４＋（２０ ×ｎ）位のロイシン残基で終わるＳＩ番号１で示される配列、または（ｉｉ）１ 位のスレオニン残基から始まり、２４６＋（２０×ｎ）位のプロリン残基で終わ る、ＳＩ番号２で示される配列と少なくとも８０％のホモロジーの程度を示し； 一方の該ポリペプチドの式（Ｉ）の配列に関係する番号ｎと、他方のＳＩ番号１ または２で示される配列に関係するそれとが従属関係にあり、２，３または４で ある請求項９に記載の組成物。 １１　抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメン トをゲノム中に挿入したウイルスを含み、その配列として、（ｉ）１位のスレオ ニン残基から始まり、４１４＋（２０×ｎ）位のロイシン残基で終わるＳＩ番号 １で示される配列、または（ｉｉ）１位のスレオニン残基から始まり、２４６＋ （２０×ｎ）位のプロリン残基で終わる、ＳＩ番号２で示される配列を有し；ｎ が１〜８０の数である請求項９に記載の組成物。 １２　抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメン トをゲノム中に挿入したウイルスを含み、その配列として、（ｉ）１位のスレオ ニン残基から始まり、４１４＋（２０×ｎ）位のロイシン残基で終わるＳＩ番号 １で示される配列、または（ｉｉ）１位のスレオニン残基から始まり、２４６＋ （２０×ｎ）位のプロリン残基で終わる、ＳＩ番号２で示される配列を有し；ｎ が２、３または４である請求項１１に記載の組成物。 １３　抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメン トをゲノム中に挿入したウイルスがポックスウイルスである請求項７〜１２のい ずれかに記載の組成物。 １４　抗体Ｈ２３により認識されるポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメン トをゲノム中に挿入したポックスウイルスがワクシニアウイルスである請求項７ 〜１２のいずれかに記載の組成物。 １５　悪性腫瘍の治療または予防するための治療剤としての抗体Ｈ２３により認 識されるポリペプチド。