JPH06504773A - 自己組み立てイオン対薬剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 み　てイオン、・ 技１日Ｆ野 本発明は、インビトロおよびインビボ環境中の、腫瘍および感染性病原体などの 標的の状態の治療に関する。より詳細には、本発明は、そのような標的のための 活性改変物質であるイオン対複合体のその場での形成に関する。

ＬｆＬ挟歪 本出願人に対して発行され、かつ本明細書中に参考として援用される米国特許第 ４．８１２．４４９号は、標的微環境中での自己組み立てを可能にするために活 性物質を成分前駆体の形態で提供する一般的な方法を開示している。上記の引用 した特許に記載されているように、「標的」とは、生物、組織、細胞、もしくは 改変されることが望ましい他の生物学的に反応性を有する物質を言う。標的は、 インビトロもしくはインビボ環境であり得る一般的な環境中に現れ、それ自体の 「微環境」を提供する。この特許は、その場での複合体の形成に使用され得る多 くの反応タイプを開示しており、その全てが、共有結合形成に関するものである 。この発行された特許に記載されているように、その場で標的と相互に作用する ように意図された複合体の自己組み立てにはぐ多くの利点がある。これらの利点 には、個々の成分によって提供される選択性、組み立てが行われるように意図さ れた微環境中でその組み立てが完了するまでの効果の遅延、反応速度定数および 各成分の選択性の向上、ならびに／または、予め形成された複合体の投与に比較 して、得られる投与量が増大することが含まれる。

本発明は、その場での複合体形成の一般的な方法の特に有用な応用、即ち、共有 結合形成と対照をなす自己組み立てイオン対の使用を提示する。そして、イオン 対は、インビボもしくはインビトロでの各成分投与後に、標的を改変することが できる。さらに、自己組み立てイオン対複合体の成分の一方もしくは両方を、標 的に対して選択的なリガンドと複合体化することによって、標的に対する選択性 を向上させることが可能である。

兄亙Δ皿示 本発明は、標的生物、細胞もしくは組織の治療、予防もしくは他の改変に有用な 方法および物質を提供する。活性物質は、イオン対複合体である。イオン対複合 体は、標的状態の環境に個別に提供された正イオンおよび負イオン成分によって その場で形成される。この方法は、特に有利である。なぜならば、正および負イ オン成分が、溶解可能な形態で提供され、標的基質に特異的に引きつけられ得る からであり、かつイオン対の形成によって、一般環境に対する個々の成分の毒性 が低下し得るからである。

したがって、一つの局面では、本発明は、標的生物、細胞もしくは組織を改変す る方法に関する。この方法は、該標的の環境に、イオン対のメンバーである正イ オン成分および負イオン成分を提供することを包含する。このイオン対は、標的 の改変に有効である。本発明はまた、別の局面では、イオン対のイオン成分を含 有する薬学的組成物に関する。

ＭΔ１車屋説所 図１は、本発明の代表的なイオン対複合体の正および負成分の構造を示す。

図２は、ローダミン−１２３カチオン、テトラクロロプラチネートアニオンおよ びこれらの混合物の毒性を示す。

図３は、デカリニウムイオン、テトラクロロブラチネートイオンおよびこれらの 混合物の治療効果を示す。

図４は、白血病細胞によるデカリニウムイオンの取り込みに対するテトラクロロ ブラチネートイオンの存在の効果を示す。

日を　る イオン対複合体の複合メンバーは、正および負成分の単純塩と比較して、水性培 地中でより堅固に結合することが多い。

この現象を利用することによって、標的状態を探して治療する場合に、これらの 成分のその場での自己組み立てが可能になる。したがって、踏圧イオン成分を、 単純塩化物、硫酸塩もしくは酢酸塩として投与することができ、そして負成分を カリウムもしくはナトリウム塩として投与することができる。

典型的な標的細胞、生物もしくは組織が存在する環境中では、より複合性の高い 各イオンが堅固に会合することによって、改変効果を得ることができるイオン対 複合体が形成される。

さらに、各成分を混合物として提供すると、個々の物質の毒性を低下させること ができる。

図１は、本発明に有用な幾つかの錯イオン成分の構造を示す。ローダミン−１２ ３イオンおよびデカリニウムイオンは正イオン成分として有用であり、テトラク ロロブラチネートは負成分として有用である。

これらの候補物質に関しては、いくらかの背景技術の情報が入手可能である。ロ ーダミン−１２３イオンおよびテトラクロロプラチネートの塩によって、ＤＮＡ 開裂が生じるが、但し、これらの個々のイオン成分ではそのようなことはないと いうことは、知られている（　ＨＢｒ５ａｎら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ　（１９ ８８）　４ｉ：２３３５−２３４１）。腫瘍細胞をこの塩で処理すると、細胞は 、各イオン成分を、それらのイオン塩を得るための正確な比で取り込むこともま た知られている（Ｔｅｉｃｈｅｒ、　Ｂ、Ａ、ら、Ｉｎｏｒ工Ｃｈｅ１　（１９ ８６）　２５：３９８０−３９８３）　ｏ　イオン対錯体が、マウス中のＬ１２ １０白血病に対して有意の活性を有するが、但し、個々の成分ではそのようなこ とはないということもまた知られている（Ｔｅｉｃｈｅｒ、Ｂ、Ａ、ら、Ｂｉｏ ｃｈｅｍ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　（１９８６）　３５：３３６５−３３６９；　 Ｗｅｌｓｓら、Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｅｔ　（１９８７）　８４： ５４４４−５４４８；　Ｍａｃｑｕｅｔら、ＪＮＣ［（１９ｇ３）　７０：８９ ９−９０５）。

イオン対の各成分を分離した形態で投与することには、幾つかの利点がある。第 一に、可溶性塩としての個々の成分に単一の各対イオンを提供することによって 、個々の成分の溶解度を調節することができる。これに対して、インビボで二つ の成分が会合すると、標的環境外であっても、以下の実施例１に例示するように 、個々の成分の毒性が低下し得る。このために、さらに多量の各成分を使用し得 る。したがって、イオン対の効果を、標的状態自体に集中させることができる。

第二に、組み立ての調節を可能にする、標的に特異的なリガンドに、一方もしく は両方の成分を結合させ得る。イオン対の、最終的に標的にホーミングする能力 は、各成分のリガンドとの結合状態を個別に調節することによって、調整され得 る。

したがって、成分のホーミング特異性は、成分を標的リガンドと結合させること によって、向上し得る。この結合には、直接結合を含む当該分野で既知の一般的 な結合法を用いるが、しかし、好ましくは、より高度に調節された結合反応を可 能にするリンカ−分子を利用する。例えば、Ｐｉｅｒｃｅ　ＣｈｅｓｉｃａｌＣ ｏｍｐａｎｙ、　Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬから市販のものなどの、市販のリンカ −を使用し得る。標的リガンドは、例えば、ＦａｂもしくはＦａｂ°フラグメン トなどの、抗体もしくはその免疫反応性フラグメント、標的細胞、生物もしくは 組織に特有のレセプターの、レセプターリガンド、または、標的の微環境中に高 濃度で存在する活性分子のための基質であり得る。標的リガンドは、正イオンも しくは負イオン成分のいずれか、またはその両方と結合され得る。両方に結合さ れる場合には、複合体化の選択性が向上する。

イオン対複合体の形成は、上記で引用した米国特許第４，８１２．４４９号に概 説された自己組み立ての一般的な方法の独特な応用によるものである。この引用 した特許は、共有結合によって形成された複合体を包含するものであった。イオ ン対形成を行うと、ざらに可撓性が得られる。これは、投与された各成分とこれ らの対イオンとのイオン結合が、所望のイオン対と比べて比較的強いということ を利用することによるものである。したがって、イオン対のその場での形成は、 イオン対メンバー相互の内因性の親和性に依存するだけではな（、負成分の親和 性、例えばその正の対イオンに対する親和性、および、正イオン成分の、その対 イオンに対する親和性にも依存する。ここで、各成分は投与された形態である。

次の実施例は、本発明を例示するためのものであって、これを限定するものでは ない。

支亀貢１ 五腹公立皇皿 種々の量のテトラクロロ白金酸カリウムおよびローダミン−１２３クロライドを 、各々３日のプロトコールで、１日目、３日目および５日目にマウスに腹膜を介 して投与し、そして最後の注射を記録した時から１５日後に、生存率を調べた。

同様のプロトコールを用いて、種々の量の、ローダミン−１２３クロライドとテ トラクロロ白金酸カリウムとの２：ｌの混合物を投与した。この実験の結果を図 ２に示す。図に見られるように、テトラクロロ白金酸カリウムおよびローダミン −１２３クロライドを少量だけ各々投与した場合には、生存率は０となった。し かし、６８μ層ｏ１／ｋｇのローダミン−１２３クロライドおよび３４μ■ｏｌ ／ｋＨのテトラクロロ白金酸カリウムを、２回に分けて注射することにより投与 した場合には、１００％の生存率が得られた。各イオンはインビトロで混合され ると沈降することは知られている（Ｔｅｉｃｈｅｒ、　Ｂ、Ａ、ら、Ｒａｄｉａ ｔｉｏ　Ｒｅｓ　（１９８７）支嵐史１ １肢皮立旦上 同様の実験で、種々の量のデカリニウムクロライド、テトラクロロ白金酸カリウ ムおよびこれらの混合物を、各々３日のプロトコールで、１日目、３日目および ５日目にマウスに注射した。マウス被験体は、Ｌ１２１０腫瘍を移植したもので あった。寿命の延長を、投与量の関数として記録した。図３は、その結果を示す 。図３に示すように、デカリニウムイオンもしくはテトラクロロプラチネートイ オン単独では、寿命の延長に有意な効果をもたらさなかった。しかし、最適投与 量の、重量比１　：　４．７５のデカリニウムクロライドとテトラクロロ白金酸 カリウムとの混合物の場合には、５０％の寿命の延長が得られれた。デカリニウ ムクロライド成分の注射１回当り３■ｇ／ｋｇと４■ｇ／ｋｇとの間が最適濃度 であった。

さらに、クロロブラチネートイオンの存在によって、Ｌ１２１０白血病細胞に取 り込まれるデカリニウムイオンの量が増加した。１０７個のＬ１２１０細胞の各 アリフートを、１ａＭのグルタミン中の１０％のウシ胎児血清を添加した５＋ｍ ｌのｌ’ｌＰＭＩ中で培養した。培養した細胞を、デカリニウムクロライドまた はテトラクロロ白金酸カリウム、もしくはその両方に、３時間、３７℃にて、７ ％の００２存在下で接触させた。これらの細胞を遠心分離および再懸濁によって ３回洗浄し、その数を血球計算法によって数えて、そして再度小球状にして、３ ｒａｌ、０．３ＭのＨＣＩおよび５０％の水性エタノール中で超音波処理した。

抽出物中のデラクイニウム（ｄｅｌａｑｕｉｎｉｕ＋ａ）イオンを、蛍光分析に よって測定した。

その結果を図４に示す。８０μＭのテトラクロロブラチネートイオンを加えるこ とによって、細胞中のデカリニウムイオン濃度が、１５μＭのデカリニウムイオ ンを提供した際の細胞１個当り１　ｆｍｏｌから、著しく増加して細胞１個当り ２　ｆ＋＊ｏｌを超えるレベルにまで達した。

（ヂｈワニラム　テトラ２００７°ラチ木−１）（デ゛′力’／ニウム・　りＯ ライｒンＦｉｇｕｒｅ　ＩＡ　Ｆｉｇｕｒｅ　ＩＢロータ゛ミン１２３．　テト ラクロロ白層１カリウＭ　、　７１’Ｆ１１ｔｋ＆７つＣ１−＊：／Ｌ４）１ｅ ｉ’ＬＬ　。

２０　４０　６０　８０　＋００　１２０　１４０　１６０マウＬ４ｔ−＋ｚｔ ｏ＆＆＆＋＝ｋＪ４ｓマう入うＬ１２ＴＯ白血Ｊ高ｌ−灯り ０．０　９．５　１９．０　２Ｂ、５ レロ１１Ｇ７７ｔり七史１（−、プ／にう）１＾ｗｍ＋＾−・−”””＠Ｐｃ１ ）１３９１つ：＝’−二フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ａ６１Ｋ　３９／３９５ 　Ｃ９２８４−４ＣＬ　９２８４−４Ｃ Ｉ

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. １．少なくとも一つの正イオンおよび少なくとも一つの負イオンを含有し、かつ イオン対結合によって結合される複合体を用いて、環境中に含有される標的生物 、細胞もしくは組織を改変する方法であって、 該環境に、該正イオン成分および該負イオン成分を提供する工程であって、該イ オン対結合が、該標的生物、細胞もしくは組織の徴環境中で生じる工程 を包含する方法。
2. ２．前記正イオン成分を水溶性塩として提供する、請求項１に記載の方法。
3. ３．前記負イオン成分が水溶性塩である、請求項１に記載の方法。
4. ４．前記正イオン成分がデカリニウムイオンである、請求項１に記載の方法。
5. ５．前記正イオン成分がローダミン−１２３イオンである、請求項１に記載の方 法。
6. ６．前記負イオン成分がテトラクロロプラチネートである、請求項１に記載の方 法。
7. ７．前記成分の少なくとも一方を、さらに、前記標的生物、細胞もしくは組織に 特異的な標的リガンドと結合させる、請求項１に記載の方法。
8. ８．前記標的リガンドが、レセプターリガンド、抗体もしくは免疫学的に反応性 を有するそのフラグメントである、請求項７に記載の方法。
9. ９．前記正および負イオン成分の両方を、さらに、前記標的生物、細胞もしくは 組織に特異的な標的リガンドと結合させる、請求項７に記載の方法。
10. １０．前記正イオン成分および負イオン成分を同時に投与する、請求項１に記載 の方法。
11. １１．環境中の標的状態の改変に有用な薬学的組成物であって、 該標的状態の微環境中でイオン対形成を行うことができる正イオン成分および負 イオン成分を含有する組成物。
12. １２．前記正イオン成分が水溶性塩として提供される、請求項１１に記載の組成 物。
13. １３．前記負イオン成分が水溶性塩である、請求項１１に記載の組成物。
14. １４．前記正イオン成分がデカリニウムイオンである、請求項１１に記載の組成 物。
15. １５．前記正イオン成分がローダミン−１２３イオンである、請求項１１に記載 の組成物。
16. １６．前記負イオン成分がテトラクロロプラチネートである、請求項１１に記載 の組成物。
17. １７．前記成分の少なくとも一方が、さらに、前記標的生物、細胞もしくは組織 に特異的な標的リガンドと結合される、請求項１１に記載の組成物。
18. １８．前記標的リガンドが、レセプターリガンド、抗体もしくは免疫学的に反応 性を有するそのフラグメントである、請求項１７に記載の組成物。
19. １９．前記正および負イオン成分の両方が、さらに、前記標的生物、細胞もしく は組織に特異的な標的リガンドと結合される、請求項１７に記載の組成物。