JPH06510529A - 目標とする触媒性たんぱく質により活性化されるプロドラッグ - Google Patents

目標とする触媒性たんぱく質により活性化されるプロドラッグ

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JPH06510529A
JPH06510529A JP5503832A JP50383293A JPH06510529A JP H06510529 A JPH06510529 A JP H06510529A JP 5503832 A JP5503832 A JP 5503832A JP 50383293 A JP50383293 A JP 50383293A JP H06510529 A JPH06510529 A JP H06510529A
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ティットマス，リチャード，シー．
ウィリアムズ，リチャード，オウ．
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 目標とする触媒性たんばく質により活性化されるプロトラッグ本出願は、１９９ １年１０月１０日に出願された米国出願５ｅｒｉａｌＮｏ、Ｏ７／７７３０４２ 　（これを引用してここに組み入れる）の継続出願である。本出願はまた、１９ ９１年８月５日に出願された米国出願５ｅｒｉａｌＮｏ、７４０５０１　（これ をここに引用してここに組み入れる）の継続出願である。本出願はまた、１９８ ８年５月４日に出願された米国出願５ｅｒｉａｌＮｏ、ｌ　９０２７　＋の継続 出願であり、１９８９年５月４日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ　８９１０　Ｉ　９ ５１（７）継続出願てあり、１９９１年６月１２８ｉこ出願された米国出願５ｅ ｒｉａｌＮｏ、７００２１０の継続出願であり、１９８９年５月４日に出願され たＰＣＴ／ＵＳ　８９１０　Ｉ　９５０の継続出願であり、１９９１年１１月４ Ｂｌこ出願された米国出願５ｅｒｉａｌＮｏ。
０７／７６１８６８（７）継続出願てあり、および１９９０年３月２３８１．１ 出願された米国出願５ｅｒｉａｌＮｏ、４９８２２５の継続出願である（これら の先行出願をそれぞれ引用してここに組み入れる）。
発明の分野 本発明は、酵素または触媒性抗体により活性化される細胞毒性薬物の適当なプロ トラッグを提供するための方法および化合物を提供する。
発明の背景 抗ウィルス薬、免疫抑制薬、および細胞毒性癌化学療法剤のような多くの医薬化 合物は一般に、正常な組織に対して望ましくない毒性作用を有する。骨髄に対す る損傷（従って血液細胞産生の損傷を伴う）および胃腸器官粘膜の損傷、脱毛お よびはき気を含む毒性作用は、これらの医薬化合物の安全な投与を制限し、これ により強力な効力が減少される。
多くのヌクレオシド類縁体か抗腫傷薬としての有用性を有しており、これらには フルオロウラシル、フルオロデオキシウリジン、フルオロウリジン、アラビノン ルントンン、メルカプトプリン、リボサイト、チオグアノシン、アラビノシルフ ルオロウラシル、アザウリジン、アザウリジン、フルオロウラシル、フルダラビ ンか包含される。これらの医薬は一般に、重要なヌクレオチド類の生合成を阻害 するか、または核酸中に取り込まれて、欠陥ＲＮＡまたはＤＮＡをもたらす、ヌ クレオシド類縁体に変換する。５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）は種々の固形 腫瘍、例えは結腸および直腸、頭部および頚部、肝臓、乳房およびすい臓の癌に 対して臨床活性を存する主要抗新生物薬である。５−ＦＵは低い治療指数を有す る。投与用量の１は毒性により制限され、もしもさらに高濃度か腫瘍細胞の近く に達したならは得られるであろう、その強力な効力か減少される結果をもたらす 。
５−ＦＵはその強力な細胞毒性を発揮するためには、そのヌクレオチドレヘル（ 例えはフルオロウリジン−またはフルオロデオキシウリジン−５′−ホスフェー ト）にまで代謝されねばならない。これらのヌクレオチドに相当するヌクレオシ ド（５−フルオロウリジンおよび５−フルオロ−２′−デオキシウリジン）はま た、活性な抗癌薬であり、若干のモデル系において、５−ＦＵよりも実質的にさ らに強力である。これはこれらの化合物か５−ＦＵよりもさらに容易にヌクレオ チドに変換されることによる。
ＡｒａＣ（これはまたアラヒノシルソトシンとも称される）、ｌ−β−Ｄ−アラ ヒノフラノソルントシン、サイトラヒン、ソトシンーβ−Ｄ−アラビノフラノソ トおよびβ−ントシンアラヒノントは、広く使用されている抗癌剤であるが、残 念なからいくつかの主要欠点を有する（下記参照）。現時点て、ＡｒａＣは骨髄 性およびリンパ性白血病、および非ホジキン病性リンパ腫の両方の処置に使用さ れている。単独で使用された場合に、ＡｒａＣは急性白血病の２０−４０％の鎮 静化をもたらし、またその他の化学療法剤と組み合わせると、５０％よりも高い 鎮静化をもたらす（Ｃａｌａｂｒｅｓｉ等、”Ｉｎ　Ｔｈｅ　Ｐｈａｒｍａｃｏ ｌｏｇｉｃａｌ　Ｂａ５ｉｓ　ｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”、Ｇｉｌｍａｎ 、Ａ、Ｇ、等編集、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　：　Ｍａｃｍｉｌｌｉａｎ　Ｐｕｂｌ ｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ、　（１９８５）　：　１２７２）。
ＡｒａＣの抗癌剤としての欠点の一つは、デアミナーゼによるその急速な代謝に ある。ヒトの肝臓は高レベルでデオキシシチジンデアミナーゼを含有しており、 この酵素はＡｒａＣを、不活性な代謝物であるＡｒａ−ウラシルに変換する。こ の迅速な代謝は、ヒトにおいて非経口投与後の３−９分でｔｌ／２をもたらす（ Ｂａｇｕｌｅｙ等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　Ｒｅｐｏｒｔｓ 　５５　（＋９７１）　：　２９１−２９８　）　ｏこの■ 題を考慮すると、ＤＮＡ合成を受ける細胞のみがこの医薬の効力に対して感受性 であり、従って非同期的に増殖する腫瘍細胞の全部かＳ相を通過するまで、毒性 濃度を維持しなければならない。不幸なことに、このことはＡｒａＣの最適投与 計画か５日間、毎日数時間にわたりゆっくりと静脈注入されるべきことを意味し ており、従って病院に入院していなければならない。この長期間にわたる投与は 迅速に分化する正常細胞における一般的毒性という主問題を導き、これにより伶 髄抑制、感染および出血か導かれる。この医薬の使用時に遭遇するもう一つの問 題には、低キナーゼ活性を存する細胞の選択またはデオキシＣＴＰの膨張蓄積に よるものと推定される、結果的に細胞により発現されるＡｒａＣに対する耐性が ある。
ＡｒａＣのプロドラッグ誘導体が、１）ＡｒａＣをシチジンデアミナーゼによる 急速な分解から護るために、２）ＡｒａＣの分子貯蔵体として作用し、これによ り医薬投与計画を簡単にするために、３）血清たんばく買上に移送し、細胞によ る吸収を促進するためのキャリア分子として作用するために、あるいは４）低キ ナーゼ活性を有する細胞の耐性を克服するために、合成されている。アラビノー スの５′位置か置換されているか、またはシチジン環のＮ４位置か置換されてい るＡｒａＣ誘導体は、シチジンデアミナーセ耐性であることが見出だされている 。ＡｒａＣをシチジンデアミナーゼによる分解から保護するキャリア分子として 作用することに関わり、ＡｒａＣの親油性の５′−エステル誘導体（Ｎｅｉｌ等 、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　２１　（１９７１）　４６５−４ ７５　：　Ｇ１５ｈ等、Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、　１４　（{９７１） １１５９−１１６２）およびＮ４−アシル誘導体（Ａｏｓｈｉｍａ等、Ｃａｎｃ ｅｒ　Ｒｅｓ、　３６　（１９７６）　２７２６−２７３２）か、白血病マウス においてＡｒａＣよりも高い抗腫瘍活性を存することか証明されている。
上記のプロドラッグ誘導体はいづれも、親の医薬それ自体を投与するものとして 、全身的に投与されるようにデザインされている。非腫瘍−特異性毒性を生じる 、これらのプロドラッグの副作用は、親の医薬ＡｒａＣの全身的投与の場合と同 一ではないが、非常に類似している。これらのプロドラッグはＡｒａＣの分子貯 蔵体として作用し、従ってこの医薬の有効期間を延長させる。
その他の抗新生物性ヌクレオシド類縁体のい（っかのプロドラッグもまた公知で ある。このようなプロドラッグは一般に、ヌクレオシド類縁体のアシル誘導体で ある：このアシル基は、投与後の内在エステラーゼ活性により分離される。これ らのアラビノシルシトシンのプロドラッグ（Ｎｅｉｌ等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ ｅａｒｃｈ　３０　（１９７０）　＋０４７−１０５４　：　Ｎｅ１１等、Ｊ、 　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、　＋４　（＋９７１）　１１５９−１１６２　：　Ａｏ ｓｈｉｍ％凵AＣ ａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　３６　（１９７６）　２７６２−２７３２）ま たはフルオロデオキシウリジン（Ｓｃｈｗｅｎｄｅｎｅｒ等、Ｂｉｏｃｈｅｍ、 　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｎｗｎ、１２６　（＋９８５）　６６０− ６６６）の■■ のいくつかは、親の医薬の投与後に生じるよりも長い時間にわたり活性医薬を提 供する。
しかしながら、これらのプロドラッグは薬物を腫瘍細胞に選択的に放出せず、増 強されている抗腫瘍効力に付随して増強されている毒性を有する（Ｓｃｈｗｅｎ ｄｅｎｅｒ等、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍ、　 １２６　（１９８５）　６６０−６６６）。
５ＦＵおよびＡｒａＣと同様に、その他の抗新生物性ヌクレオシド類縁体（これ らに制限されないものとして、フルオロウラシルアラビノシド、メルカブトプリ ンリホシト、アラヒノソルアデニン、またはフルオロデオキシウリジンを包含す る）あるいは投与されるそれらのプロドラッグの投与用量の量はまた、毒性によ り制限され、腫瘍細胞の近くに高ａｒｔか達成されたならば得られるであろう強 力な効力か減少される。
抗新生物性のヌクレオシド類縁体の目標を定めたプロドラッグに係わる従来の示 唆は充分のものではない。Ｂａｇｓｈａｗｅ等による特許出願ＷＯ３８１０７３ ７８ては、抗新生物性ヌクレオシドの相当するヌクレオチドを適当な−マ素によ りヌクレオシドに戻すことかてきることか提案されている；　５ｅｎｔｅｒ等に よる特許出願ＥＰ８８１１２６４６ては、腫瘍細胞表面抗原に結合させた抗体に 結合させた酵素アルカリホスファターゼにより、フルオロウリジンモノホスフェ ートが活性化されることかまた示唆されている。しかしながら、これらの提案は 、ヌクレオチドをヌクレオシドに変換する酵素（例えは５′ヌクレオチダーゼ） か血液および組織中に、高濃度で、いたる所に偏在することを考慮することを忘 れている。従って、ヌクレオチド（ヌクレオシドホスフェート）は抗新生物性の ヌクレオシド類縁体の目標を定めた放出には作用てはない。
ｂ）アルキル化剤 ナイトロジエンマスタードアルキル化剤は、抗新生物性医薬の重要な両群である 。臨床上て育用性を存する抗新生物性アルキル化剤の例には、シクロホスファミ ド、メルフアラン、クロラムバシル、またはメクロレタミンがある。これらの薬 剤は共通する構造上の特徴として、アルキル化できる窒素上にビス−（２−クロ ロエチル）基を持ち、これにより核酸、たんばく質またはその他の重要な細胞構 造体を損傷するものである。これらのアルキル化剤の細胞毒性は、核酸合成に影 響する抗代謝性薬剤の場合よりも、それらの目標の細胞サイクル状態にほとんど 依存しない。この理由から、アルキル化剤の細胞毒性は、正常組織に比較して急 速に分化する細胞（たとえば、かなりの腫瘍）に対する選択性が乏しく、しかし 他方で、それらの細胞周期に同調しない細胞集団に対してはさらに完全に有効で ある。
ナイトロシェンマスタートの目標を定めたプロトラッグをデザインしようとする 従来の試みは成功していない。ＢａｇＳｈａＷｅ等の特許出願ＷＯ３８１０７８ ３７８には、プロトラッグとして安息香酸ナイトロジエンマスタードグルタミド 化合物が開示されており、この化合物の毒性は相当する活性医薬の５−１０分の ！である。これらの著者は彼等自身、臨床用には、プロドラッグの毒性は相当す る医薬の毒性に比較して、少なくとも１００分の１でなければならないと述べて いる。
Ｋｅｒｒ等によるＣａｎｃｅｒ　１ｍｍｕｎｏ１．　Ｉｍｍｕｎｏｒｈｅｒ、　 ３１　（１９９０）　２０２−２０６には、酵素ペニソリンー■−アミダーゼ（ ＰＶＡ）により活性化される強力なプロドラッグとして、メルフアラン−Ｎ−ｐ −ヒドロキシフェノキシアセトアミド（メルフアランのアミド誘導体）か記載さ れている。このプロトラッグは実際に、その毒性か、特に培養セルラインに対し てメルフアランよりも１００倍少ない。抗体−ＰＶＡ結合体により細胞を予備処 理すると、このプロドラッグの毒性は増加しない。これはＰＶＡが、このプロド ラッグのフェノキンアセトアミド結合をあまりにもゆっくりと加水分解させて、 毒性レベルの薬物を生じさせることによる。
Ｃ）その池の抗新生物性薬物 アントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅｓ）　、ダウノルビシン（ｄ ａｕｎｏｒｕｂｊ　ｃ］ｏ）およびドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ） は抗腫傷薬として広く使用されており、多くの生化学的効果を発揮して、この医 薬の治療効果および毒性作用の両方て寄与している。これらの薬物の主要メカニ ズムはＤＮＡの間に入り込み、分化している細胞における遺伝子複製を破壊する ことにある。ドキソルビシンは、急性白血病および悪性リンパ腫に有効である。
多くの悪性腫瘍に対して非常に活性である。
シクロホスファＥ　ｌ’およびシスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）とともに、 ドキソルビシンは卵巣の癌に対して格別に活性である。ドキソルビシンは、骨肉 腫、乳房の転移腺癌、膀胱癌、神経芽細胞腫および転移甲状腺腫の処置に効果的 に使用されている。ドキソルビシンの心筋に対する毒性は、患者か摂取しつる、 この薬物の量を制限する。
従来技術において、目標設定性抗体に結合した非哺乳動物酵素を使用して、プロ ドラッグを腫瘍部位で選択的に活性化することか開示されている（例えば、Ｂａ ｇｓｈａｗｅ等による特許出願ＷＯ３８１０７８３７８に記載されているカルポ キシペプチダーセ類；　Ｋｅｒｒ等によりＣａｎｃｅｒ　Ｉｎｗｎｕｎｏｌ、　 ［ｍｍｕｎｏｒｈｅｒ、　３１　（＋９９０）２０２−２０６に記載されている ペニシリン−Ｖアミダーゼ：およびＥａｔｏｎ等により特許出願ＥＰ９０３０３ ６８１．２に記載されているβ−ラクタマーゼ）。非哺乳動物酵素は一般に、抗 原性であり、従って短期間の使用でのみ活性であるか、または多分、単次使用に おいてのみ有効である。これはこのような酵素力沖和性抗体を生成するか、また は望ましくない免疫応答を誘発させるためである。
哺乳動物の酵素、例えはアルカリホスファターゼも提案されているが（Ｓｅｎｔ ｅｒ等による特許出願ＥＰ８８１１２６４６）、プロトラッグを活性化する内在 性ヒト酵素の問題を明らかにする証明はなされていない。別種の哺乳動物からの 酵素にはまた、抗原原性という問題かｒγ在する。さらにまた、いくつかの提案 されているプロトラッグ活性化酵素、例えばノイラミニダーゼ（Ｓｅｎｔｅｒ等 による特許出願ＥＰ８８／＋　１２６４６）は、これらか投与された臓器に重大 な損傷を与えることかある。ノイラミニダーゼは糖たんばく質のオリゴ糖の末端 でサリチル酸を分離し、ガラクトース残基を露呈し、このガラクトース残基はこ のような糖たんばく質か肝臓で急速に分解されるようにする。ヒトにおける使用 に適するものであるには、抗新生物性薬物のプロトラッグの目標を定めた活性化 に係わる戦略の実用手段に関して、インビボての状況を考慮する必要がある。
ｂ、触媒性抗体 触媒性抗体か基質（または抗原）に対して化学反応を行う方法は基本的に、酵素 か化学反応をいかにして行うかを開示する理論原則と同一の理論原則によって支 配される。米国特許４８８８２８１を参照でき、これを引用してここに組み入れ る。この特許には、化学反応の抗体による触媒作用か記載されている。生起する 大部分の化学変換ては、反応剤と生成物との間に存在するエネルギー障壁を越え るために、実質的な活性化エネルギーが必要である。短期間存在する不安定な化 学物質の生成に要する活性化エネルギーの低下による酵素触媒化学反応は、遷移 状態として知られている、エネルギー障壁の頂上で見い出される（Ｐａｕｌｉｎ ｇ　Ｌ、、Ａｍ、Ｓｃｉ、３６　（＋９４８）　５１　：　Ｊｅｎｃｋｓ、Ｗ、 Ｐ、、Ａｄｖ、Ｅｎｚｙｍｏｌ、４３　（１９７５）２１９）、この遷移状態を 安定化して活性化の遊離エネルギーを減少させるには、酵素触媒において、４種 の基本メカニズムか使用される。第１に、一般的酸残基および塩基残基か触媒活 性部位内で、触媒作用に係わり最適の位置にしばしば見出される。
第２のメカニズムには、共有結合酵素−基質中間体の生成が含まれる。第３に、 モデル系は、反応に係わり適当な方向で結合する反応剤は、少なくとも７の大き さのオーダーで反応剤の「作動濃度」を増加させることができ（Ｆｅｒｓｈｔ、 　Ａ、　Ｒ。
等、Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　９０　（１９６８）　５８３３　）　、従 って化学反応のエントロピーか徐々に減少される。最後に、酵素は、基質結合に より得られるエネルギーを、当該反応か遷移状態の方向にゆがめられるように変 換することかできる。
この酵素による触媒作用を理解するために、触媒活性を存する数種の抗体が免疫 感作により誘発され、単離されていることに注目すべきである（Ｐｏｗｅｌｌ、 Ｍ、Ｊ、。
等、Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　３　（１９８９）　６９−７５ ）　ｏ酸または塩基残基に抗原結合部位を誘発させるための一つの手段は、免疫 原に相補性帯電分子を使用することからなる。この技術は正に帯電したアンモニ ウムイオンを含有するハブテンにより抗体を誘発させるのに成功する技術である ことが証明された（Ｓｈｏｋａｔ等によるＣｈｅｍ、　Ｉｎｔ、　Ｅｄ、　Ｅｎ ｇｌ、、　２７　（＋９８８）　２６９−２７１）。これらのモノクローナル抗 体の数種はβ−分離反応を触媒した。
もう一つの手段では、所望の反応の大きさ、形、および遷移状態の電荷か似てい る安定な化合物（すなわち遷移状態類縁体）に、抗体を誘発させることからなる 。米国特許４７９２４４６および米国特許４９６３３５５を参照てき、これらの 特許には動物の免疫感作および触媒性抗体の生成に遷移状態類縁体を使用するこ とか記載されている。
遷移状態構造を安定化し、ぞして（または）反応剤の「作動濃度」を増加させる ことによって、反応を促進することかできる触媒性抗体の例を以下で示す。
１、エステラーゼ類 エステル加水分解のメカニズムには、その静電特性および形状特性をホスフェー ト構造により似たものにすることかできる、帯電遷移状態か含まれる。マウスを ニトロフェニルホスホネートエステルハブテン−たんばく質結合体により免疫感 作すると、メチル−ｐ−ニトロフェニルカーボネート上に加水分解活性を有する モノクローナル抗体の単離が誘導される（Ｊａｃｏｂｓ等、Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈ ｅｍ、　Ｓｏｃ、　＋０９（＋９８７）　２１７４−２１７６）。類似の遷移状 態類縁体に対する抗体は有機マトリックスにおいてそのエステル基質を抽水分解 することかできた（Ｄｕｒｆｏｒ等、Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ。
Ｓｏｃ、　１１０　（１９８８）　８７１３−８７１４）。触媒速度の実質的増 加が、ジピコリンホスフェートエステルによる免疫感作により生じた抗体に関し て、報告されている（Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ等、Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓ ｏｃ、　１１０　（１９８８）　２２８２）。この抗体は、４−アセトアミドフ ェニルエステルを２０ｋｃａｔ／秒で加水分解させた。これは触媒作用を受けて いないエステルの分解に係わる比率の６００万倍である。Ｌ−フェニルアラニン に対応するＤ−フェニルアラニンを含有するアルキルエステルをホスボネートエ ステルに対して生しさせた　モノクローナル抗体により立体特異的に分解させる ことに係わる報告は、触媒性エステラーゼ　モノクローナル抗体を誘発させるた めに、ホスボネートエステルを使用することに信頼を加えた（Ｐｏｌｌａｃｋ等 、Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　ＩＩＩ　（１９８９）　５９６１−５ ９６２）。
ペプチダーゼまたはアミダーゼに係り、その遷移状態を偽装する遷移状態類縁体 をデザインする方法としては数種の方法か開示されている。報告の一つでは、了 り−ルホスホンアミデート遷移状態類縁体を使用して、アリールカルホキジアミ ドを開裂することかできる抗体を生成させることか開示されている（Ｊａｎｄａ 等、５ｃｉｅｎｃｅ　２４１　（１９８８）　＋１８８−１１９１）、ペプチダ ーゼを生成させるためのもう一つの方法は、ペプチドに結合した金属錯体補助因 子を利用する方法である（ｌｖｅｒｓｏｎ等、５ｃｉｅｎｃｅ　２４３　（１９ ８９）　１１８４−１１８８）、開裂部位はこの方法によっては予測することか できないか、研究を進めることによって、部位特定開裂も可能でありうる。
天然産生のたんばく質分解性抗体かヒトで発見されている（Ｐａｕｌ等、５ｃｉ ｅｎｃｅ　２４４　（１９８９）　！１５８−１！６２）。これらの抗体は準集 団の喘息の患者で初めて発見されたものである。一つの抗血清調製物は、２８ア ミノ酸ポリペプチド、血管活性腸ペプチｌ”　（Ｖ　Ｉ　Ｐ）を一つの特定の開 裂部位で開裂させた。
３、その他の触媒性抗体 モノクローナル抗体か触媒するその他の反応には下記の反応が含まれる：クライ セン（Ｃ１ａｉｓｅｎ　）転位（Ｌａｃｋｓｏｎ等、Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、 　Ｓｏｃ、　＋１０　（＋９８８）　４８４１−４８４２　：　Ｈｉｌｖｅｒｔ 等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８５　（＋９８ ８）４９５３−４９５５　：　Ｈｉ撃魔■窒■ 等、Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　＋１０　（１９８８）　５５９３− ５５９４）　、レドックス反応（Ｓｈｏｋａｔ等、Ａｎｇｅｗ、　Ｃｈｅｍ、　 Ｉｎｔ、　Ｅｄ、　Ｅｎｇｌ、　２７　（１９８９）　２６９−２７１）、チミ ジンニ量体の光化学的開裂（Ｃｏｃｈｒａｎ等、Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓ ｏｃ、　＋１０　（１９８８）　７８８８−７８９０）　、立体特異性エステル 交換転位（Ｎａｐｐｅｒ等、５ｃｉｅｎｃｅ　２３７　（１９８７）　１０４１ −１０４３）および二分子アミド合成（Ｂｅｎｋｏｖｔｃ等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａ ｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８５　（１９８８）　５３５５−５３ ５８　：　Ｊ≠獅р■ 等、５ｃｉｅｎｃ　２４１　（＋９８８）　１１８８−１１９１）。
本発明の目的 本発明の目的は、細胞毒性化学療法薬剤の新規プロドラッグを提供することにあ る。
本発明の目的は、細胞毒性化学療法薬剤を腫瘍部位に、または腫瘍部位の近くて 、局在的に生成あるいは放出させるための方法を提供することにある。
本発明の目的は、高い薬物／プロドラッグ細胞毒性比を有し、内在する哺乳動物 酵素に対して実質的に安定であり、かつまた本発明の目標を定めた触媒性たんば く質により活性化されるプロトラッグを提供することにある。
本発明の目的は、非腫瘍部位における薬物の利用または不活性化による、ｌ）正 常組織に対する毒性、および２）減少された抗腫瘍効力、の問題を克服するため に、細胞毒性化学療法薬剤を腫瘍に、または腫瘍の近くて、局在的に生成あるい は放出させるための方法を提供することにある。
本発明の目的は、活性アルカリ化剤を、腫瘍細胞に対して目標を選択的に定める 方法を提供することにある。
本発明の目的は、腫瘍特異性抗体結合およびプロドラッグ活性化を利用して、プ ロトラッグを特定の腫瘍部位で活性化することにより全身的薬物毒性を減少させ ることにある。
本発明の］］的は、哺乳動物酵素に対して安定であり、これにより　目標の腫瘍 細胞以外における薬物の活性化または分解か確実に最小にされている、プロトラ ッグを提供することにある。
本発明のこれらのおよびその他の目的かプロトラッグ化合物によって、およびま たプロドラッグから保護基を分離させることかできる抗体の生成に使用されるハ ブテンによって達成される。このプロドラッグ化合物において、保護基部分はこ の化合物の安定性を導く、すなわち本発明の化合物は投与後の活性薬物への変換 に対して耐性であり、そしてこのプロトラッグの毒性を当該薬物に比較して、少 なくとも１００分の１にまで実質的に減少させる。
本発明のハブテンは、当該ハブテンに対して特異性であることか見出だされる抗 体のたんばく質エンノニャリングによる、例えばマウスまたはその他のホストに おける免疫応答を誘発させることによって、またはランダムな、または部位特定 的な変異による、インヒドロ技術により触媒性抗体を生成させることかできる。
このようにして生成された抗体は、エステラーゼ、アミダーゼ、ヒドロラーゼま たはグリコノダーセ活性により、薬物から保護部分を分離することかできる。
本発明の好適態様において、プロトラッグ化合物は、望ましい安定性および毒性 特性に適合するしのであることを特徴とするものであり、そしてハブテンは、当 該プロトラッグ化合物と同一の式に類似する構造を存し、そして当該化合物から 薬物を触媒作用により分離させる抗体を生成させることかできるものであること を特徴とするものである。
本発明の態様の一つは。
（ａ）特定の細胞集団のエピトープに結合できる部分、および（ｂ）プロドラッ グを活性化することかできる触媒性抗体部分、からなる、特定の細胞集団を処置 するための免疫結合体、を包含する。
新規免疫結合体は本発明の新規プロトラッグまたは従来技術のプロドラッグを活 性化する触媒性抗体部分を含有する。
本明細書で使用するかぎりにおいて、部分（ｍｏｉｅｔｙ）の用語は、　完全抗 体、酵素または目標設定性たんばく質、あるいはその活性断片を意味する。
本発明はまた、 （ａ）本発明の新規プロドラッグ、および（ｂ）本発明の新規プロドラッグを活 性化できる触媒性抗体部分または酵素部分、 からなる組み合わせ治療剤を包含する。
本発明はまた、 （ａ）従来技術のプロドラッグ、および（ｂ）この従来技術のプロトラッグを活 性化できる触媒性抗体部分、からなる組み合わせ治療剤を包含する。
本発明はまた、腫瘍なとの特定の細胞集団に薬物を供給することによって、種々 の病気状態を処置する方法を包含する。本発明の触媒性抗体またはその断片が結 合されている目標設定性化合物、例えば抗体は、投与され、該当細胞集団の部位 に局限して存在させることを可能にする。その後で、このプロトラッグを投与す ると、このプロトラッグは、該当細胞集団の部位で分裂され（あるいは活性化さ れ）、薬物か供給される。従って、本発明は下記の工程からなる特定の細胞集団 の状態を処置する方法を包含する （ａ）（ｉ）特定の細胞集団のエピトープに結合することができる部分、および （ｉｉ）本発明の新規プロドラッグを活性化することができる触媒性抗体部分ま たは酵素部分、 からなる免疫結合体を投与し、 （ｂ）この免疫結合体を該当細胞集団の部位に局在させることを可能にし、次い で （Ｃ）この免疫結合体により活性化される本発明の新規プロドラ・ソゲを投与す る。
本発明はまた、下記の工程からなる特定の細胞集団の状態を処置する方法を包含 する： （ａ）（Ｄ特定の細胞集団のエピトープに結合することができる部分、および （！ｌ）従来技術のプロドラッグを活性化することができる触媒性抗体部分また は酵素部分、 からなる免疫結合体を投与し、 （ｂ）この免疫結合体を該当細胞集団の部位に局在させることを可能にし、次い て （Ｃ）この免疫複合体により活性化される従来技術のプロドラ・フグを投与する 。
本発明のもう一つのｆｒ！襟は、対象のプロドラッグを活性化できる抗体を同定 する方法にあり、この方法は下記の工程からなる方法である・（ｉ）対象プロト ラッグを活性化でき、かつまた抗生物質を不活性化できる抗体を誘発させるよう に選択されたノ＼ブテンによりホストを免疫感作し、（１１）この抗体をコート する組み換え遺伝子を単離し、（ｉｉｉ）この抗体をコー１−する遺伝子をバク テリアに挿入し、（！Ｖ）このバクテリアを抗生物質含有培養培地で培養し、（ Ｖ）生ｒｒ、シているバクテリアを選別し、（ｖｌ）この生存しているバクテリ アから抗体遺伝子を単離し、（ν１１）この抗体遺伝子を発現させて、この抗体 を同定するのに充分の量の抗体を産生させ、次いて （ｖｉｉｉ）対象プロドラッグを活性化できる抗体を選別する。
本発明のもう一つの態様は、対象のプロドラッグを活性化できる抗体を同定する 方法にあり、この方法は下記の工程からなる方法である：（ｉ）対象プロドラッ グを活性化できる抗体を誘発させるように選択されたハブテンによりホストを免 疫感作し、 （ｉｉ）この抗体をコードする組み換え遺伝子を単離し、（ｉｉｉ）この抗体を コードする遺伝子をバクテリアに挿入し、（ｉいこのバクテリアを、対象プロド ラッグと同一の化合物により誘導体化されているチミジンを含有する培養培地で 培養し、（Ｖ）生存しているバクテリアを選別し、（ｖｌ）この生存しているバ クテリアから抗体遺伝子を単離し、（ｖｉ　ｉ）この抗体遺伝子を発現させて、 この抗体を同定するのに　充分の量の抗体を産生させ、次いて （ｖｉｉｉ）対象プロドラッグを活性化できる抗体を選別する。
本発明のもう一つの態様は、基質の生成物への変換を触媒できる抗体の選別方法 にあり、この方法は下記の工程からなる方法である：（ｉ）ハブテンに対して抗 体を誘発させ、（ｉｉ）この抗体を不動化し、 （自重）この抗体に基質を加え、次いで（ｉｖ）基質の生成物への変換を触媒で きる抗体を同定する。
必要に応じて、工程（１）の後に、当該ハブテンを結合する抗体を選択する工程 を行う。
本発明のもう一つの態様は、反応を触媒できる抗体を発現する細胞を選別する方 法にあり、この方法は下記の工程からなる方法である・（ｉ）化合物に対して栄 養要求性であり、抗体遺伝子を含有する細胞を、当該化合物を先行形態て含有す る培養培地にプレート状に付加し、次いで（ｉｉ）この先行形態の化合物を活性 化でき、当該化合物を放出させることができる、生存している細胞を選別する。
本発明のもう一つの態様は、プロドラッグを活性化できる抗体を発現する細胞を 選別する方法にあり、この方法は下記の工程からなる方法である：（ｉ）抗体遺 伝子を含有するチミジン依存性のバクテリア細胞を、チミジンの先行形態である プロトラッグ含有培養培地にプレート状に付加し、次いで（１１）このプロドラ ッグを活性化でき、チミジンを生成させることかできる、生存しているバクテリ ア細胞を選別する。
本発明のもう一つの態様は、反応を触媒することができる抗体を発現する細胞を 選別する方法にあり、この方法は下記の工程からなる方法である：（１）抗体遺 伝子を含有する細胞を、トキシン含有培養培地にプレート状に付加し、次いで （１１）このトキシンを不活性化できる抗体を発現する、生存しているバクテリ ア細胞を選別する。
本発明のもう一つの態様は、二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉ　ｆ　ｉｃ）抗体の合 成方法にあり、この方法は下記の工程からなる方法である（ｉ）下記の群からな る群から選はれる配列を有する遺伝子を発現させ＝ＶＨ抗体１−３−ＶＬ抗体１ −３−ＶＬ抗体２−３−ＶＨ抗体２：ＶＨ抗体１−３−ＶＬ抗体１−５−ＶＨ抗 体２−３−ＶＬ抗体２゜ＶＬ抗体１−８−ＶＨ抗体１−３−ＶＬ抗体２−３−Ｖ Ｈ抗体２：ＶＬ抗体１−３−ＶＨ抗体１−３−ＶＨ抗体２−３−ＶＬ抗体２：こ こで、−Ｓ−はリンカ−配列である、次いで（ｉｉ）この二重特異性抗体を単離 する。
抗体１は特定の細胞のエピトープに結合できる抗体であり、そして抗体２は触媒 性抗体であるか、あるいは抗体２か特定の細胞のエピトープに結合できる抗体で あり、そして抗体ｌか触媒性抗体である。
本発明のもう一つの懸様は、二重特異性抗体の合成方法にあり、この方法は下記 の工程からなる方法である４ （ｉ）下記の配列を有する遺伝子を発現させ〜７Ｌ抗体１−３−ＶＨ抗体２、 およびまた （目）下記の配列を有する遺伝子を発現させ：ＶＨ抗体１−３−ＶＬ抗体２、 ここて、−８−はリンカ−配列である、（ｉｉｉ）工程（ｉ）の生成物と工程（ １１）の生成物とを組み合わせ、次いで（ｉｖ）二重特異性抗体を単離する。
本発明のさらにもう一つの態様は、二重特異性抗体の合成方法にあり、　この方 法は下記の工程からなる方法である：（ｉ）下記の配列を存する遺伝子を発現さ せ：ＶＬ抗体２−３−ＶＨ抗体１、 およびまた （ｉｉ）下記の配列を有する遺伝子を発現させ・ＶＨ抗体２−３−ＶＬ抗体１、 ここで、−Ｓ−はリンカ−配列である （由）工程（ｉ）の生成物と工程（■）の生成物とを組み合わせ、次いで（ｉｖ ）二重特異性抗体を単離する。
図面の簡単な説明 図１ａ（シー１−１／８７および２／８７）は線状トリメチルベンゾイル−およ びトリメトキシベンゾイル−５−フルオロウリジンプロドラッグ、化合物１ａお よびＩｂの製造を示すものである。
図１ｂ（シート３／８７．４／８７および５／８７）は例１ａのプロトラッグの ハブテン、トリメトキソヘンゾエートー５−フルオロウリジンの線状ホスホネー ト、化合物４の製造を示すものである。
図１ｃ（シート６／８７）はプロトラッグ、５”−ｏ−（２，６−シメトキシベ ンゾイル）−５−フルオロウリジン、化合物ＩＣの製造を示すものである。
図１ｄ（シー１−７／８７および８／８７）は例１ａのプロトラッグのノ１ブテ ン、トリメトキンベンゾエート−５−フルオロウリジンの線状ホスホネート、化 合物４ａの製造を示すものである。
図２ａ（シート９／８７およびＩ　Ｏ／８７）はプロドラッグ中間体、トリメト キシベンゾエート−５−フルオロウリジン、化合物１０の製造を示すものである 。
図２ｂ（ソート１１／８７およびｌ　２／８７）は例２ａのプロトラッグのノ１ ブテン、トリメトキシベンゾイル 化合物１５の製造を示すものである。
図３（シート１３／８７およびＩ　４／８７）は実験的プロドラッグ、ガラクト シルントシンβ−Ｄ−アラビノフラノシド、化合物１９の製造を示すものである 。
図４（シー）　１５／８７およびＩ　６／８７）は実験的プロドラッグ、ガラク トシル５−フルオロウリジン、化合物２４の製造を示すものである。
図５ａ（シート１７／８７および１　Ｂ／８７）は例３および４のプロドラッグ のハブテンに対する先駆化合物、化合物２５の製造を示すものである。
図５ｂ（ソートｌ　９／８７）は例３および４のプロドラッグのハブテン、化合 物３０ａおよび３０ｂの製造を示すものである。
図５ｃ（シート２０／８７）は例３および４のプロトラッグのハブテン、化合物 ３０ａおよび３０ｂの別法による製造を示すものである。
図６（シート２１／８７）は実験的プロドラッグ、脂肪族ジエチルアセタール保 護アルドホスファミド、化合物３８の製造を示すものである。
図７（シート２２／８７）は実験的プロドラッグ、脂肪族ジエチルアセタール保 護アルドホスファミドのグアニルハブテン、化合物４３の製造を示すものである 。
図８ａ（ソート２３／８７および２４／８７）は分子内エシールドリメトキシベ ンゾエートホスファミトブロドラッグの合成に係わる無水中間体、化合物４５の 製造を示すものである。
図８ｂ（シー１−２５／８７および２６／８７）はプロ］・ラッグ、分子内エノ ーノ１斗リメトキシヘンゾエートホスファミド、化合物５０の製造を示すもので ある。
図８ｄ（シート２７／８７および２８／８７）は分子内エノール］・リメトキン ヘンゾエートポスファミドハプテン、化合物５７の製造を示すものである。
図９（シート２９／８７）はＡｒａＣおよびガラクトシル−ＡｒａＣプロドラッ グを、Ｃｏ１ｏ細胞において比較するものである。
図１０（シート３０／８７）はＡｒａＣおよびガラクトツルーＡｒａＣプロトラ ッグを、Ｌｏｖｏ細胞において比較するものである。
図１１　（シー１−３１／８７）はガラク１−シルーＡｒａＣプロドラッグのＣ ＥＡ抗原陽性細胞における部位特異性活性化を示すものである。
図１２（シート３２／８７）はガラクトシル−ＡｒａＣプロドラッグのＣＥＡ抗 原陰性細胞における活性を示すものである。
図１３（シート３３／８７）は薬物およびそのプロドラッグに対す白血球細胞応 答を示すものである。
図１４（シート３４／８７）は薬物およびそのプロドラッグに対する分割好中球 の応答を示すものである。
図１５（シート３５／８７）は薬物およびそのプロドラッグに対する血小板の応 答を示すものである。
図１６（シート３６／８７）は薬物およびそのプロドラッグに対するリンパ球細 胞の応答を示すものである。
図１７（シート３７／８７）は薬物およびそのプロドラッグに対する赤血球の応 答を示すものである。
図１８（シート３８／８７）は５′−フルオロウリジンおよびガラクトシル−５ ′−フルオロウリジンプロドラッグをＣＥＡ抗原陰性Ｃｏ１ｏ細胞において比較 するものである。
図１９（シート３９７８７）は５′−フルオロウリジンプロドラッグのＣＥＡ抗 原陽性Ｌｏｌｏ細胞における部位特異的活性化を示すものである。
図２０（ソート４０／８７）は５゛−フルオロウリジンプロドラッグのＣＥＡ抗 原陰性Ｃｏ１ｏ細胞における活性を示すものである。
図２１（シート４１／８７）は５′−フルオロウリジンおよびガラクトシル−５ ゛−フルオロウリジンプロドラッグを、マウスにおいて総白血球に関して比較す るものである。
図２２（シート４２／８７）は５′−フルオロウリジンおよびガラクトシル−５ ′−フルオロウリジンプロドラッグを、マウスにおいて赤血球球に関して比較す るものである。
図２３（シート４３／８７）は５−−フルオロウリジンおよびガラクトシル−５ ′−フルオロウリジンプロドラッグを、マウスにおいて総好中球細胞に関して比 較するものである。
図２４（シー）　４４／８７）は５′−フルオロウリジンおよびガラクトシル− ５゛−フルオロウリジンプロドラッグを、マウスにおいて総リンパ細胞に関して 比較するものである。
図２５（シート４５／８７）は５゛−フルオロウリジンプロドラッグおよびガラ クトノルー５′−フルオロウリジンプロドラツグを、マウスにおいて総骨髄細胞 充実性に関して比較するものである。
図２６（シー１−４６／８７および４７／８７）は例１６および２０のプロドラ ッグの中間体、および例１８および２２のプロドラッグのハブテン、（チアゾリ ル）イミノ酢酸エステル、化合物６０の製造を示すものである。
図２７（ソート４８／８７および４９／８７）はプロドラッグ、５−フルオロウ リジン置換β−ラクタム、化合物６８の製造を示すものである。
図２８（シート５０／８７および５１／８７）は例１６のプロドラッグのハブテ ンの中間体、５−アルキニル化ウリジン、化合物７４の製造を示すものである。
図２９（シート５２／８７および５３／８７）はβ−ラクタムプロドラッグのハ ブテンの中間体、化合物７９の製造を示すものである。
図３０（シート５４／８７および５５／８７）は例１６のプロドラッグのハブテ 〉、５−フルオロウリジン置換シクロブタノール、化合物８１の製造を示すもの である。
図３１　（シート５６／８７および５７／８７）は例２０のプロドラッグの中間 体、５−フルオロウリジン５′−〇−アリールエステル、化合物８５の製造を示 すものである。
図３２（シー１−５８／８７および５９／８７）はプロドラッグ、５′−〇−ア ロイルー５−フルオロウリジンにより置換されているβ−ラクタム、化合物９０ の製造を示すものである。
図３３（シート６０／８７）は例２２のハブテンの中間体、５−アルキニル化ウ リジン５′−０−アロイルエステル、化合物９２の製造を示すものである。
図３４　（ソート６１／８７および６２／８７）は例２０のプロドラッグのハブ テン、５′−〇−アロイルーウリジンにより置換されているシクロブタノール、 化合物１００の製造を示すものである。
図３５（シー）　６３／８７）はアドリアマイシンプロドラッグ、アロイルアミ ド、化合物＋０３の製造を示すものである。
図３６（シート６４／８７）は例２３のアドリアマイシンプロドラ・ノブのノ１ ブテン、アドリアマイシンのアロイルアミドのホスフェート化合物１０４の製造 を示すものである。
図３７（シート６５／８７）は例２３のプロドラッグのノ１ブテン、アドリアマ イシンのアロイルスルホンアミド、化合物１０６の製造を示すものである。
図３８（シート６６／８７）はメルフアランアロイルアミドプロドラ・ソゲ、化 合物１０９の製造を示すものである。
図３９（シート６７／８７）は例２５のプロドラッグのノ＼ブテン、メルフアラ ンアロイルアミドのスルホンアミド、化合物１１０の製造を示すものである。
図４０（ノート６８／８７）はプロドラッグ、テトラキス（２−クロロエチル） アノ叶ホスファミドジエチルアセタール、化合物１１２の製造を示すものである 。
図４１　（シート６９／８７および７０／８７）は例３１のプロドラ・ソゲのノ ＼ブテン・テトラキス（２−クロロエチル）アルドホスファミドジエチルアセタ ールのトリメチルアンモニウム塩類縁体、化合物＋１９の製造を示すものである 。
図１２（シート？　＋／８７）は例３Ｉのプロトラッグのノ１ブテン：テトラキ ス（２−クロロエチル）アルドホスファミドジエチルアセタールのジブロビノし メチルアンモニウム塩類縁体、化合物＋２１の製造を示すものである。
図４３（シー１−７２／８７および７３／８７）はプロドラ・ノブ、分子内ヒス （２−ヒドロキシエトキシ）ヘンシェード−５−フルオロウリジン、化合物１２ ８の製造を示すものである。
図４４　（シート７４／８７および７５／８７）は例３４のプロドラ・ソゲのノ １ブ・　テン、ヒス（２−ヒドロキシエトキン）ベンゾエート−５−フルオロウ リジンの環状ホスホネート類縁体、化合物１３７の製造を示すものである。
図４５（シート７６／８７）はプロトラッグ、分子内ビス（３−ヒトロキシブロ ピルオキシ）ヘンシェード−５−フルオロウリジン、化合物１３８の製造を示す ものである。
図４６（シート７７／８７）は例３６のプロドラッグのノ１ブテン：ビス（３− ヒドロキシプロピルオキシ）ベンゾエート−５−フルオロウリジンの環状ホスホ ネート類縁体、化合物１３９の製造を示すものである。
図４７（シート７８／８７および７９／８７）はプロドラッグ：５−−（２＋４ ．６−ドリメトキシベンゾイル）−５−フルオロウリジン、化合物１４１の製造 を示すものである。
図４８ａ（ノート８０／８７および８１／８７）は例３８のプロドラッグの／Ｘ ブテン：ウリジンのピリジニウムアルコール−置換類縁体、化合物１４９の製造 を示すものである。
図４８ｂ（シート８２／８７および８３／８７）は例３８のプロドラッグのノ入 ブテン：ウリジンのピリジニウムアルコール−置換類縁体、化合物１４９の製造 を示すものである。
図４９（シート８４／８７および８５／８７）は例３８のプロトラッグのノＸブ テン・５−−０−　（２，４，６−ドリメトキシベンゾイル）−５−フルオロウ リジンの線状ホスホネート、化合物１５２の製造を示すものである。
図５０（シート８６／８７および８７／８７）は例１ａのプロトラッグのノ１ブ テン：５’−０−（２，６−シメトキシベンゾイル）−５−フルオロウリジンの 線状ホスホネ−１・、化合物１５５の製造を示すものである。
本発明、ならびにその他の目的、特徴およびその利点は、以下の詳細な説明を、 下記の例に記載の実験結果を示している添付図面を参照して読むことにより、さ らに明白に理解されるであろう。
発明の詳細な説明 本発明は種々の癌化学療法薬を、内在酵素に対して安定であるか、腫瘍選択性薬 剤、例えはレセプター結合性リガンド、腫瘍付随酵素に結合する類縁体、および 当該プロドラッグを活性細胞毒性薬物に変換するたんばく質触媒に共存結合して いるか、または別様に物理的に結合している抗体、の投与に先立つ投与によって 、腫瘍部位または腫瘍部位近くて活性化させることかできる実質的に無毒性のプ ロトラッグに変換する特別の方法を提供する。この触媒性たんばく質は、■）触 媒性抗体、２）外来（または非哺乳動物）酵素、または３）当該プロドラッグか 投与後に通る部位において低い内在活性を存する内在（または哺乳動物）酵素、 である。これらの系は、腫瘍部位（１ケ所または２ケ所以上）に局在させて、比 較的高濃度の活性薬物を生成させることを可能にする。
本発明は、高い薬物／プロドラッグ細胞毒性比を有し、内在哺乳動物酵素に対し て実質的に安定であり、かつまた本発明の目標か定められている触媒性たんばく 質により活性化されるプロドラッグを提供する。
本発明は、本発明の触媒性たんばく質により活性化されるまで、インビボで実質 的に無毒性である抗新生物性ヌクレオシド類縁体の適当なプロトラッグを製造す るための化合物および方法を提供する。
細胞毒性薬物のプロドラッグを目標を定めて活性化されるように　デザインする ためには、このプロドラッグ置換体か、２つの重要な性質、■）これらか投与後 に比較的安定であって、従って比較的無毒性である性質、および２）これらが特 異的に活性化できる性質、を薬物に付与することが重要である。さらにまた、こ のプロドラッグ置換基は、触媒性たんばく質による開裂後に臓器に対して毒性で はないものでなけれはならない。
本発明において、抗新生物性薬物のプロドラッグは、以下に示す相当する置換基 を抗新生物性薬物に結合させることによって生成される。
置換基は、親の薬物を比較的無毒性にし、かつまた内在酵素活性による分離に対 して比較的耐性であるか、本発明の触媒性たんばく質によっては分離される（活 性薬物を生成する）ように選択される。
プロトラッグに係わるおよびまたプロトラッグ用のハブテンに係わる好適置換基 は、Ｈ１炭素原子１−１０個を有するアルキル、炭素原子１−１０個を存するア ルコキシ、−環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有するアルケン、ヒドロキシ ル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキシ、アミノアルキル、チオアルキ ル、アミノ、アルキルアミノ、アルギルホスホネート、アルキルスルホネート、 アルキルカルボキシレート、アルキルアンモニウム、環状アルキル、置換環状ア ルキル、または環中て少な（とも１個のへテロ原子により置換されている環状ア ルキルである。
アルキル、アルキニル、置換アルキル、アルケニルおよびアルキニル、ヒドロキ シアルキル、ヒドロキシアルコキシ、アミノアルキル、チオアルキル、アルキル アミ人アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレー ト、アルキルアンモニウム、環状アルキル、置換環状アルキル、または環中て少 なくとも１個のへテロ原子により置換されている環状アルキルからなる、プロ１ −ラッグに係わるおよびまたプロドラッグ用の）１ブテンに係わる置換基は好ま しくは、その炭素鎖または環中に、炭素原子１−１０個を有する。
プロトラッグに係わるおよびまたプロドラッグ用のノ１ブテンに係わる置換基か 置換されている場合に、好適置換基は、−ＯＨ、アルキル、クロロ、フルオロ、 フ冶モ、ヨウト、−ＳＯ，、アリール、−３Ｈ１−（Ｃｏ）Ｈｌ−（Ｃｏ）ＯＨ 、エステル基、エーテル基、アルケニル、アルキニル、−ＣＯ−１Ｎ２“、シア ノ、エポキシド基およびヘテロ環状基である。
プロトラッグにおけるおよびまたプロドラッグ用の７％ブテンにおける好適へテ ロ原子は、リン、イオウ、窒素および酸素である。プロドラッグにおけるおよび またプロトラッグ用のハブテンにおける、ペテロ原子含有置換基は好ましくは１ 個または２個以上のへテロ原子を含有する。
プロトラッグにおけるおよびまたプロドラッグ用のハブテンにおける正に帯電し ている四級アミンの好適対応イオン（アニオン）は、ハロゲン、アセテート、メ タンスルホ不−１・、パラ−トルエンスルホネート、およびトリフル才ロメタン スルホ不−ｌへである。
触媒性たんばく質、特に触媒性抗体は、比較的低い活性化エネルギーを伴なう反 応を最も容易に触媒する。抗体により触媒作用を受ける、もしくは促進されるこ とか公知の反応には、エステル開裂、クライセン転位、レトソクス反応、立体特 異性エステル交換転位、およびアミドのペプチドへの開裂か含まれる。
触媒性抗体、およびまた酵素は、短期間存在する不安定な遷移状態を生成するに 要する活性化エネルギーを低下させることによって、化学反応を触媒する。
この＆移状態の生成を安定化または促進する触媒性抗体は、置換基−開裂反応の 遷移状態の大きさ、形状および電荷か類似しているプロトラッグの安定な類縁体 に抗体を誘発させることによって生成させる。例えば、エステル−開裂反応の遷 移状態類縁体（ハブテン類）は、正常カルボニル基を安定なホスホネ−１・基ま たはスルホネート基により置換することにより製造する。
このような遷移状態類縁体は代表的に、本発明のプロドラッグに対して触媒性活 性を有する抗体を誘発させるハブテンとして使用される。従って、これらの構造 は一般に、たんばく質担体に結合するだめのリンカ−アームを有する。すなわち 、当該プロトラッグの薬物に相当するハブテンの部分は代表的に、共有結合した リンカ−の存在の点て、かつまたたんばく質に結合できる基を末端に有する点て 相違している、元の薬物の類縁体である。本発明の若干の態様において、このリ ンカ−アームは、プロドラッグのプロドラッグ置換基（例えば、ヌクレオシド類 縁体のエステルプロ１〜ラツクの置換ベンゾエート部分）に相当するノ１ブテン の部分に結合している。
若干の遷移状態類縁体においては、このハブテン中の薬物様部分はまた、プロト ラッグ活性化反応に係わる遷移状態に類似した構造か提供されるように、変性さ れていてもよい。例えば、ヒドロキシル基を有しており、このヒドロキシル基を 介して薬物か、そのプロトラッグ部分に結合している薬物では、その結合酵素原 モ（これは通常、薬物分子の一部である）の代わりに、相当するハブテン中に− ＮＨ−１−ＣＨ，−または−３−を有する。
さらにまた、このハブテン中の薬物様部分はまた、形態に係わりその固仔の構造 を、相当するプロドラッグに対する触媒性活性を有する抗体を誘発させるのに好 ましいものに変性させることかできる。しかしながら、大部分の場合に、プロｉ ・ラッグの薬物部分に相当する遷移状態類縁体の部分は、元の薬物に類似してい る実質的構造を存する。それらの相当するプロトラッグの薬物部分の類縁体から 形成されているハブテンの例を以下で示す。
このハブテン中の好適薬物様部分は、その５位置に、−Ｃ−Ｃ−（ＣＨ２）　ｎ ＮＨＣＢｒまたは（ＣＨ２）ｎＮＨ−（式中、ｎはｌ−１０の整数であり、そし てＣＢｒはカルホヘンジルオキシである）からなる部分により置換されている、 ５−フルオロウリジンの類縁体である。
もう一つのハブテン中の好適薬物様部分は、ホスホルアミ１−　マスタードの類 縁体［Ｒ′ＯＰ　（０）（Ｒ”）Ｎ　（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ１）　２］）（式中、Ｒ ′およびＲ−は同一または異なり、そして相互に独立して、Ｈ１炭素原子ｌ−１ ０個を有するアルキル、−環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有するアルケン 、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキシ、アミノアルキル 、チオアルキル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルホスホネート、アルキルス ルホネート、アルキルカルボキンレート、アルキルアンモニウム、環状アルキル 、置換環状アルキル、または環中て少なくとも１個のへテロ原子により置換され ている環状アルキルである）である。ハブテン中の好適薬物様部分の好適態様で は、Ｒ′がアルキルアンモニウム塩てあり、モしてＲ−−が環中で２個のへテロ 原子により置換されている、置換環状アルキルである。
実質的なエステラーゼ活性は、哺乳動物組織のいたるところに存在する。この活 性は多くの種々の化合物で、比較的非特異的にエステル結合開裂させる。しかし ながら、本発明のプロドラックの中のいくつかの種類の化合物、例えばヌクレオ シド類縁体の置換芳香族エステル類は、内在性哺乳動物エステラーゼに比較的耐 性なエステル置換基である。
本発明の同様の置換芳香族エステル類およびその他のプロドラッグ置換基は、適 当な官能性基を有する種々の種類の抗新生物性薬物のプロドラッグ製造に有用で ある。このような抗新生物性薬物には、これらに制限されないものとして、ヌク レオシド類縁体およびその他の抗代謝産物、シクロホスファミド誘導体のような アルキル化剤、ドキソルビシンまたはエトポシドなとのようなインターカレーテ ィン’）’　（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｎｇ）薬剤、ビンカアルカロイドなとの ようなスピンドル（ｓｐｉｎｄｌｅ）毒物およびその他の種類の細胞毒性薬物か 含まれる。
内在哺乳動物酵素による活性化に対して比較的耐性である本発明のプロ、ドラッ グは、本発明の触媒性たんばく質、例えばプロドラッグ活性化反応の遷移状態の 類縁体に対する抗体を誘発させることによって生成される触媒性Ｆ体（またはそ の活性断片）によって活性化される。
本発明の触媒性たんばく質は、腫瘍選択性抗体、抗体断片、または結合性たんば く質または腫瘍付随たんばく質あるいは腫瘍選択性レセプターリガンドに、共有 結合させるか、あるいは別様に物理的に結合させる。この結合体は代表的には、 プロトラッグの投与前に投与し、癌細胞に、またはその近くに、局限して存在さ せる。次いて、プロトラッグを投与し、触媒性たんばく質により開裂させて、腫 瘍部位でまたはその近くで、抗新生物性薬物を生成させる。
以下に、本発明の種々のプロドラッグおよびまたこのようなプロドラッグに相当 する遷移状態類縁体に関して説明する。さらにまた、これらのプロドラッグから 保護基を分離できる抗体の生成に使用することができるハブテンに関して説明す る。
触媒性抗体−媒介加水分解反応に関する広い概念の中には、相当するプロドラッ グと共に使用して、それらを活性化するのに最適の数種のの特異的触媒性抗体− 媒介触媒反応がある。下記の種類の活性を存する触媒性抗体を製造し、そして使 用する： Ａ、エステラーゼ：薬物にエステル化されているアシル置換基を開裂させるＢ、 アミダーゼ：　アミノ基に結合しているアシル置換基を開裂させるＣ、アセター ルヒドロラーゼ：アセタール（またはオルトエステル）をアルデヒド（または酸 ）に加水分解させる り、グリコシダーゼ：グリコシド架橋を経て薬物に結合している糖置換基を開裂 させる。
これらの種類の活性を存する触媒性抗体は代表的には、プロドラッグ活性化反応 の遷移状態を真似るハブテンにより動物を免疫感作することによって誘発させる 。哺乳動物酵素活性に対して比較的安定なプロドラッグ置換基をデザインし、遷 移状態類縁体の生成に利用し、次いでこの遷移状態類縁体を、プロドラッグを活 性化できる触媒性抗体の生成に利用する。本発明のプロドラッグを活性化できる 酵素が存在する場合には、これらの酵素は触媒性抗体の代替物として、この目的 に使用することもできる。
プロドラッグそれら自体をまた、触媒性活性を有する抗体の誘発に使用すること もできる。これとは逆に、プロドラッグの遷移状態類縁体はまた、プロドラッグ として、または薬物として、育用であることもある。しかしながら、代表的には 、プロドラッグとしてデザインされたプロドラッグは、プロドラッグそれ自体と して使用し、そしてまた遷移状態類縁体として以下のようにデザインされた化合 物は、触媒性抗体誘発用のハブテンとして使用する。
哺乳動物酵素活性に対して比較的安定てあり、かつまた前述の抗体触媒反応によ り活性化されるプロドラッグ置換基としては、下記の置換基が含まれる：Ａ、エ ステラーゼ反応によるプロドラッグ活性化ベンゾエートまたはアセテート基上の 置換基からの立体障害は、内在エステラーゼ活性によるそれらの開裂を抑制する （例２７参照）。これらの例を下記に挙げる： １、置換芳香族エステル、例えば置換ベンゾエートエステル；２、エステルカル ボニルに対する分子内求核的攻撃により活性化される置換芳香族エステル： ３、ジ置換またはトリ置換アセテートエステル：および４、エステルカルボニル に対する分子内求核的攻撃により活性化されるジ置換またはトリ置換アセテート エステル。
哺乳動物酵素活性に対して安定であり、かつまた触媒性抗体により開裂されるそ の他のエステル置換基も本発明の範囲内にある。
エステル加水分解反応に係わる遷移状態類縁体は代表的には、以下でさらに詳細 に説明するように、元のカルボニル基の代わりにホスホネート基またはスルホネ ート基を有する。
Ｂ、アミダーゼ反応によるプロドラッグ活性化アミＦ類は一般に、特に以下に挙 げられているアミド類は、哺乳動物酵素活性に対して比較的安定である。
１、芳香族または置換芳香族アミド類、例えばベンゾエートまたは置換ベンゾエ ートアミド類； ２、アミドカルボニルに対する分子内求核的攻撃により活性化される芳香族また は置換芳香族アミド類： ３、ホルミルアミド類。
４、アセチルアミド類： ５、アミドカルボニルに対する分子内求核的攻撃により活性化されるアセチルア ミド類：および ６、モノラクタム加水分解。
アミド加水分解反応に係わる遷移状態類縁体は代表的に、以下でさらに詳細に説 明するように、元のカルボニル基の代わりにホスホネート基またはスルホネ−１ ・基を存する。
Ｃ，アセタール加水分解反応によるプロドラッグ活性化抗新生物性薬物のアセタ ールプロトラッグは、安定であり、かつまた比較的無毒性である（例２９参照） 。これらの例を下記に挙げる：１　シアルキルアセタール類： ２、オルトエステル類： ３、ジオールアセタール類、例えは糖置換アセタール類：および４、ジオールオ ルトエステル類。
アセタール加水分解に係わる遷移状態類縁体は代表的に、元のプロドラッグ中の アセタール基の代わりに、アミジン基またはグアニジン基を有する。
Ｄ　グリコシダーセ反応によるプロドラッグ活性化本発明のグリコリル誘導体は 、安定であり、かつまた比較的無毒性である（例２８参照）。これらの例を下記 に挙げる：１、糖のアノマー位置を介して薬物ヒドロキシル基に共有結合してい るヘキソピラノース： ２、糖のアノマー置を介して薬物ヒドロキシル基に共有結合しているヘキソフラ ノース。
グリコシダーセ反応に係わる遷移状態類縁体は代表的に、アノマーおよび糖の環 酸素原子の代わりに、アミノ基を存する。
＊＊＊＊＊＊ 本発明で使用し、誘導体化される抗新生物性薬物は、ヒドロキシル基または両級 アミノ基を含有する、従ってこれらの抗新生物性薬物は、これらの化合物に係わ る以下の記載において、ＸＱＨて表わされている。この式において、Ｑは−Ｏ− または−ＮＨ−である。化合物に係わる以下の記載に使用されるものとして、Ｘ は元の薬物のデヒドロキシ基またはデアミノ基である。遷移状態類縁体において 、薬物基Ｘに相当する部分は、Ｘ′で表す。上記したように、Ｘ′は代表的に、 薬物Ｘの類縁体であるが、Ｘ゛はまた、薬物基Ｘと同一であることもできる。
Ｘ′の好ましい特徴は、これか薬物基Ｘと構造上で充分に類似している構造を有 するべきことにあり、これによりこの遷移状態類縁体はＸＱＨのプロドラッグに 対して触媒活性を存する抗体を誘発させることができる。触媒に対する好適部位 は実際に、プロドラッグ置換基内に、または置換基と薬物との間の結合部にある から、Ｘ′の構造には自由かある。しかしながら、代表的には、Ｘ′はＸに非常 に類似しており、一般にＸ″はその遷移状態類縁体を担体たんばく質、例えばウ ソ血清アルブミン（ＢＳＡ）または動物を免疫感作して、触媒活性を存する遷移 状態類縁体に対する抗体を誘発させる、キイホールリンベットヘモシアニン（Ｋ ＬＨ）に結合させるためのリンカ−アームを有する点て相違している。
エステラーゼ触媒 エステラーゼ触媒により活性化される、本発明に係わる新規化合物には、以下に 示す式で表される化合物が包含される：Ａ、エステラーゼ反応によるプロトラッ グ活性化ｌ　置換芳香族エステル類、例えば置換ヘンシェードエステル類置換芳 香族エステルプロトラッグ 本発明は、下記式を有する置換芳香族エステル化合物Ａｌａを包含する二二の式 において、Ｘは薬物ＸＯＨの基てあり、ＸＯＨは有利には、細胞毒性薬物、例え は抗新生物性ヌクレオシド類縁体（アルドース環の３′および（または）５′位 置てカルボキシル部分に結合）、ドキソルビシンまたはエノール型のアルドホス ファミドである。
この式において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１、Ｒ４およびＲ６は同一または異なり、そし てＨであるか、または炭素原子１−１０個を存するアルキル、炭素原子１−１０ 個を有するアルコキシ、−環状芳香族基、炭素原子１−１θ個を存するアルケン 、ヒト七キシル、ヒドロキシルアルキル、アミノアルキル、チオアルキル、アミ 人アルキルアミ人アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカル ボキシレート、またはアルキルアンモニウムである、ただしＲ’−’の少なくと も１個はＨてはなく、有利には、Ｒ１またはＲ６はＩ（てはない。
この化合物は、Ａｒａ−Ｃ−２，４，６−）リメチルベンゾエ−１・、Ａｒａ− Ｃ−３，４，５−トリメトキシベンゾエートまたはＡｒａ−Ｃ−２，６−シメチ ルベンゾエートではない。しかしながら、Ａｒａ　−Ｃ−２，４，６−）リメチ ルベンゾエート、Ａｒａ−Ｃ−３，４，５−トリメトキシベンゾエートまたはＡ ｒａ−Ｃ−２，６−シメチルベンゾエートは、本発明の触媒性抗体を使用する処 置方法に有用である。
ハブテン　ｌ 下記式を有する化合物Ａｌｂは、ハブテンとして、およびまたプロトラッグとし て有用である： 式中、Ｘ゛は化合物ＡｌａのＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんばく質に 結合していてもよく、 Ｂは０、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ，てあり、ＤはＰ　（０）ＯＨ，Ｓｏ２、ＣＨＯＨ またはＳｏ（いづれかの立体配置を有する）てあり、ＤかＣＨＯＨである場合に は、ＢはＣＨ，てあり、そしてＲ１−１Ｒ２−１Ｒ’−１Ｒ４−およびＲ５−は 同一または異なり、担体たんばく質に結合していてもよく、そしてＨであるか、 または炭素原子１−１０個を４丁するアルキル、炭素原子１−１０個を存するア ルコキシ、−環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有するアルケン、ヒドロキシ ル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、チオアルキル、アミノ、アルキルア ミノ、アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレー ト、またはアルキルアンモニウムであり、ただしＲ１−Ｒ６−の少なくとも１個 はＨではない。有利には、Ｒ１−またはＲ６−はＨではない。
ハブテン　２ 本発明は、下記式を仔する置換芳香族化合物Ａ！ａ−ｂを包含する：この式にお いて、Ｘは薬物ＸＯＨの基である。ＸＯＨは有利には、細胞毒性薬物、例えは抗 新生物性ヌクレオシド類縁体（アルドース環の３″および（または）５′位置で 、Ｂに結合）、ドキソルビシンまたはエノール型のアルドホスファミドである。
ＺはＣまたはＮてあり、 Ｂは０、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ，てあり、ＤはＨＯＰ　（０）、Ｓｏ２．ＣＨＯＨ またはＳｏ（いづれかの立体配置を有する）であり、 Ｒ１、Ｒ２、Ｒｆｆ　、Ｒ１およびＲ５は同一または異なり、そしてＨであるか 、または炭素原ｒ−１−１０個を存するアルキル、炭素原子１−１０個を存する アルコキン、−環状芳香族基、炭素原子１−１０個を存するアルケン、ヒドロキ シル、ヒ１へロキノアルキル、ヒドロキソアルコキシ、ハロアルキル、アミノア ルキル、チオアルキル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルホスホネート、アル キルスルホネ−１・、アルキルカルボキシレートまたはアルキルアンモニウムで あり、ただしＲＩ　Ｒ５の少なくとも１個はＨてはない。有利には、Ｒ１または Ｒ５はＨではない。
２、エステルカルボニルに対する分子内求核的攻撃により活性化される置換芳香 族エステル類、 置換芳香族エステルプロトラッグ 本発明は、下記式を有する置換芳香族エステル化合物Ａ２ａを包含する：この式 において、Ｘは薬物ＸＯＨの基である。ＸＯＨは有利には、細胞毒性薬物、例え は抗新生物性ヌクレオソ１−類縁体（アルドース環の３′および（または）５′ 位置でカルボキシル部分に結合）、ドキソルビシンまたはエノール型のアルドホ スファミドである。
Ｒ８、Ｒ７、ＲＩおよびＲｅは同一または異なり、そしてＨであるが、または炭 素原子１−１０個を存するアルキル、炭素原子１−１０個を有するアルコキシ、 −環状芳香族基、炭素原子１−１０個を存するアルケン、ヒドロキシル、ヒドロ キシアルキル、アミノアルキル、チオアルキル、アミ人アルキルアミ人アルキル ホスホネ−１・、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレートまたはアル キルアンモニウムである。有利には、ＲＩ−１の少なくとも１個はＨではない。
Ｊは炭素原子１−９個を存する直鎖状アルキルまたはＩ−９個の原子を存し、ヘ テロ原子を含む線状アルキルであり、この基はフェニル、アルキルまたはへテロ 原子を含むアルキルにより置換されている。
ＹはＯＨ，ＮＨ２、ＮＨＲまたはＳＨてあり、Ｒはアルキル、アルケニルまたは アルキニルてあり、この基は−ＯＨ、クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、−８ Ｏ１、アリール、−３Ｈ１−（Ｃｏ）Ｈｌ−（Ｃｏ）ＯＨ、エステル基、エーテ ル基、−〇〇−、シア人工ポキシド基およびヘテロ原子からなる群がら選ばれる １個または２個以上の置換基により置換されていてもよい。
ハブテン 下記式を有する化合物Ａ２ｂはハブテンおよびまたプロトラックとして有用であ る この式において、Ｘ゛は化合物Ａ２ａのＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体た んばく質に結合していてもよく、 ＢはＯ，Ｓ％ＮＨまたはＣＨ，であり、Ｄ′はＰ　（０）　、ＣＯＨ（いづれか の立体配置を存する）であり、ただしＤ′がＣＯＨである場合には、ＢおよびＹ ′はＣＨ，てあり、Ｙ′はＯ，ＮＨ，ＮＲ，ＳまたはＣＨ，てあり、Ｒはアルキ ル、アルケニルまたはアルキニルてあり、この基は−ＯＨ，クロロ、フルオロ、 ブロモ、ヨード、−ＳＯ，、アリール、−３Ｈ１−（Ｃｏ）Ｈｌ−（Ｃｏ）ＯＨ 、エステル基、エーテル基、−ＣＯ−、シア人工ポキシド基およびヘテロ原子か らなる群から選ばれる１個または２個以上の置換基により置換されていてもよく 、Ｒ’　″、Ｒ７−１Ｒ１およびＲ１−は同一または異なり、担体たんばく質に 結合していてもよ（、モしてＨであるか、または炭素原子１−１０個を有するア ルキル、炭素原子１−１０個を有するアルコキシ、−環状芳香族基、炭素原子１ −１０個を有するアルケン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキ ル、チオアルキル、アミ人アルキルアミ人アルキルホスホネート、アノしキルス ルホネート 有利には、Ｒ”−１の少なくとも１個はＨてはない。
Ｊは炭素原子１−９個を存する直鎖状アルキルまたは１−９個の原子を存し、ヘ テロ原子を含む直鎖状アルキルであり、この基はフェニル、アルキルまたは１個 または２個以上のへテロ原子を含むアルキルにより置換されている。
３、ジ置換またはトリ置換アセテートエステル類ジ置換またはトリ置換アセテー トエステルプロドラ・ソゲ本発明は、下記の式を有するジ置換またはトリ置換芳 香族エステル化合物Ａ３ａを包含する： この式において、Ｘは薬物ＸＯＨの基である。ＸＯＨは有利には、細胞毒性薬物 、例えは抗新生物ヌクレオシド類縁体（アルドース環の３゛および（または）５ ゛位置でカルボキシル部分に結合）、ドキソルビシンまたはエノール型のアルド ホスファミドである。
この式において、Ｒ”、Ｒ”およびＲ”は同一または異なるが、これらの中で少 なくとも２個はＨてはなく、モしてＨであるか、または炭素原子２−２２個を有 するアルキル、ヘテロ原子を含むアルキル、シクロアルキルジオール、−環状芳 香族基、アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレ ート、アルキルアンモニウムまたはアルケンである。
ただしＡｒａ−Ｃ−ジエチルアセテートは除く。しかしながら、Ａｒａ−Ｃ−ジ エチルアセテートは、本発明の触媒性抗体を使用する処置方法に有用である。
ハブテン 下記式を存する化合物Ａ３ｂはハブテンおよびまたプロドラッグとして有用であ る。
この式において、Ｘ′はＡ３ｂのＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんばく 質に結合していてもよく、 ＢはＯ，　Ｓ，　ＮＨまたはＣＨ．てあり、ＤはＰ　（０）ＯＨ，Ｓｏ□、ＣＨ ＯＨまたはＳｏ（これはいずれかの立体配置を有する）であり、ただしＤかＣＨ ＯＨである場合には、ＢはＣＨ．てあり、そして ＲＩ６ーー１２　−は同一または異なり、担体たんばく質に結合していてもよく 、そしてこれらの中で少なくとも２個はＨではなく、そしてＨであるか、または 炭素原子２−２２個を有するアルキル、ヘテロ原子を含むアルキル、シクロアル キルジオール、−環状芳香族基、アルキルホスホネート、アルキルスルホネート 、アルキルカルボキンレート、アルキルアンモニウムまたはアルケンである。
４、エステルカルボニルに対する分子内求核的攻撃により活性化されるジ置換ま たはトリ置換アセテートエステル類 ジ置換またはトリ置換アセテートエステルプロドラッグ本発明は、下記の式を有 する置換芳香族エステル化合物Ａ４ａを包含する：この式において、Ｘは薬物Ｘ ＯＨの基である。ＸＯＨは有利には、細胞毒性薬物、例えは抗新生物性ヌクレオ シド類縁体、ドキソルビシンまたはエノール型のアルドホスファミドである。
この式において、Ｊは炭素原子！−９個を存する直鎖状アルキルまたはＩ−９個 の原子を有し、ヘテロ原子を含む直鎖状アルキルであり、この基はフェニル、ア ルキルまたはへテロ原子を含むアルキルにより置換されている。
ＹはＯＨ．ＮＨ２　、ＮＨＲまたはＳＨてあり、Ｒはアルキル、アルケニルまた はアルキニルてあり、この基は一ＯＨ、クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、− ＳＯ，、アリール、−ＳＨ、−　（Ｃｏ）Ｈ、−　（Ｃｏ）ＯＨ、エステル基、 エーテル基、−ＣＯ−、シア人工ポキシド基および１個または２個以上のへテロ 原子からなる群から選はれる１個または２個以上の置換基により置換されていて もよく、そして ＲＨ−１４は同一または異なるか、両方共にはＨではなく、そしてＨであるか、 または炭素原子２−２２個を存するアルキル、ヘテロ原子を含むアルキル、シク ロアルキルジオール、−環状芳香族基、アルキルホスホネート、アルキルスルホ ネート、アルキルカルボキシレート、アルキルアンモニウムまたはアルケンであ る。
ハブテン 下記式を有する化合物Ａ４ｂはハブテンおよびまたプロトラッグとして有用であ る： この式において、Ｘ′は化合物Ａ４ａの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんば く質に結合していてもよく、 Ｂは０、３、ＮＨまたはＣＨ２てあり、Ｄ′はＰ（０）またはＣＯＨ　（これは いずれかの立体配置を存する）であり、ただしＤ′がＣＯＨである場合には、Ｂ およびＹ′はＣＨ．であり、Ｙ′は０、ＮＨＳＮＲ，ＳまたはＣＨ．てあり、Ｒ はアルキル、アルケニルまたはアルキニルてあり、この基は一ＯＨ，クロロ、フ ルオロ、ブロモ、ヨード、−ＳＯ．　、アリール、−ＳＨ、−　（Ｃｏ）Ｈ、− 　（Ｃｏ）ＯＨ、エステル基、エーテル基、−〇〇−、シアノ、エポキシド基お よび１個または２個以上のへテロ原子からなる群から選はれる１個または２個以 上の置換基により置換されていてもよく、そして Ｊは炭素原子１−９個を存する直鎖状アルキルまたはＩ−９個の原子を有し、ヘ テロ原子を含むアルキルであり、この基はフェニル、アルキルまたはへテロ原子 を含むアルキルにより置換されており、そしてＲ１３−−１１　−は同一または 異なり、担体たんばく質に結合していてもよく、そ゛してこれらの中で少なくと も２個はＨではなく、そしてＨであるか、または炭素原子２−２２個を有するア ルキル、ヘテロ原子を含むアルキル、シクロアルキルジオール、−環状芳香族基 、アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレート、 アルキルアンモニウムまたはアルケンである。
アミダーゼ触媒作用 アミダーゼ様触媒作用により活性化される本発明の新規化合物には、以下に示す 式で表される化合物が包含される： Ｂ、アミダーゼ反応によるプロドラッグの活性化１、芳香族または置換芳香族ア ミド類、例えばベンゾエートまたは置換ペンゾエートアミト 芳香族または置換芳香族アミドプロトラッグ本発明は、下記式を有する芳香族ア ミドＢｌａを包含する：この式において、Ｘは薬物ＸＮＨ，の基である。有利に は、ＸＮＨ，は細胞毒性薬物、例えは１−キソルヒシンまたはメルフアランであ る。
この式において、Ｒ”、Ｒ”、Ｒ”、Ｒ”およびＲ”は同一または異なり、そし てＨであるか、または炭素原子１−１０個を存するアルキル、炭素原子１−１０ 個を存するアルコキノ、−環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有するアルケン 、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、チオアルキル、アミ人 アルキルアミノ、アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカル ボキシレートまたはアルキルアンモニウムである。
ハブテン 下記式を仔する化合物Ｂｌｂは、ハプテンおよびまたプロドラッグとして作用で ある： この式において、Ｙ′は化合物ＢｌａのＸの類縁体であり、そしてＹ′は担体た んばく質に結合していてもよく、 Ｂは０、Ｓ、ＮＨまたはＣＨｔであり、ＤはＰ　（０）ＯＨ，Ｓｏ、　、ＣＨＯ ＨまたはＳｏ（これはいずれかの立体配置を有する）であり、ただしＤがＣＨＯ Ｈである場合には、ＢはＣＨ，であり、そして Ｒ”−１Ｒ”−１Ｒ′７−１Ｒ１８′およびＲ１０′は同一または異なり、担体 たんばく質に結合していてもよく、そしてＨであるか、または炭素原子１−１０ 個を存するアルキル、炭素原子１−１０個を有するアルコキシ、−環状芳香族基 、炭素原子１−１０個を有するアルケン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、 アミノアルキル、チオアルキル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルホスホネー ト、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレートまたはアルキルアンモニ ウムである。
２、アミドカルボニルに対する分子内求核的攻撃により活性化される芳香族また は置換芳香族アミド類 芳香族または置換芳香族アミドプロドラッグ本発明は、下記の式を存する芳香族 アミド化合物Ｂ２ａを包含する：この式において、Ｘは薬物ＸＮＨ２の基である 。有利には、ＸＮＨ２は細胞毒性薬物、例えばトキソルヒシンまたはメルフアラ ンである。
この式において、Ｊは炭素原子１−９個を存する直鎖状アルキルまたは１−９個 の原子を有し、ヘテロ原子を含むアルキルであり、この基はフェニル、アルキル またはへテロ原子を含むアルキルにより置換されており、ＹはＯＨ，ＮＨ２、Ｎ ＨＲまたはＳＨであり、Ｒはアルキル、アルケニルまたはアルキニルてあり、こ の基は−ＯＨ、クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、−３Ｏ３、アリール、−３ Ｈ，−（Ｃｏ）Ｈｌ−（Ｃｏ）ＯＨ、エステル基、エーテル基、−〇〇−、ノア 人工ポキシド基およびヘテロ原子からなる群から選ばれる１個または２個以上の 置換基により置換されていてもよく、そしてＲ”、Ｒ”、Ｒ２２およびＲ”は同 一または異なり、モしてＨであるか、または炭素原子１−１０個を有するアルキ ル、炭素原子１−１０個を有するアルコキシ、−環状芳香族基、炭素原子ｌ−１ ０個を有するアルケン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、 チオアルキル、アミ人アルキルアミノ、アルキルホスホネート、アルキルスルホ ネート、アルキルカルボキシレートまたはアルキルアンモニウムである。
ハブテン 下記式を有する化合物Ｂ２ｂは、ハプテンおよびまたプロドラッグとして作用で ある。
式中、Ｙ′は化合物Ｂ２ａの薬物ＸＮＨ２の類縁体であり、そしてＹ′は担体た んばく質に結合していてもよく、 Ｂは０、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ，であり、Ｄ′はＰ　（０）またはＣＯＨ（いづれ かの立体配置を存する）であり、ただしＤ′かＣＯＨである場合には、Ｂおよび Ｙ′はＣＨ，であり、Ｙ−はＯ，ＮＨ，ＮＲ，ＳまたはＣＨ，であり、Ｒはアル キル、アルケニルまたはアルキニルであり、この基は−ＯＨ、クロロ、フルオロ 、ブロモ、ヨード、−８０３、アリール、−８Ｈ，−ＣＣＯ’）Ｈ，−（Ｃｏ） ＯＨ、エステル基、エーテル基、−ＣＯ−、ノア人工ポキシド基およびヘテロ原 子からなる群から選はれる１個または２個以上の置換基により置換されていても よく、Ｊは炭素原子１−９個を有する直鎖状アルキルまたはｌ−９個の原子を有 し、ヘテロ原子を含むアルキルであり、この基はフェニル、アルキルまたはへテ ロ原子を含むアルキルにより置換されており、そしてＲ１０−１Ｒ”−１Ｒ２２ ′およびＲ１２′は同一または異なり、担体たんばく賀に結合していてもよく、 そしてＨであるか、または炭素原子１−１０個を存するアルキル、炭素原子１− １０個を存するアルコキシ、−環状芳香族基、炭素原子１−１０個を存するアル ケン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、チオアルキル、ア ミ人アルキルアミ人アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカ ルボキシレートまたはアルキルアンモニウムである。
３、ホルミルアミド類 ホルミルアミドプロドラッグ 本発明は、下記式を存するホルミルアミド化合物Ｂ３ａを包含する。
この式において、Ｘは薬物ＸＮＨ２の基である。有利には、ＸＮＨ２は細胞毒性 薬物、例えはドキソルビシンまたはメルフアランである。
ハブテン 下記式を有する化合物Ｂ３ｂは、ノλブテンおよびまたプロトラッグとして有用 である・ この式において、Ｙ′は化合物Ｂ３ａのＸの類縁体であり、そしてＹ′は担体た んばく質に結合していてもよく、 Ｂは０、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２てあり、そしてＤ−’はＨＰ　（０）ＯＨ，Ｃト １ｚ　ＯＨ，Ｐ　（０）（ＯＨ）２　またはＳＯ＊Ｈてあり、たたしＤｌ’−か Ｃ１ｒｚＯＨである場合には、ＢはＣＨ２である。
４、アセチルアミド類 アセチルアミドプロトラッグ 本発明は、下記式をＴｒするアセチルアミド化合物Ｂ４ａを包含するこの式にお いて、Ｘは薬物ＸＮＨ２の基である。有利には、ＸＮＨ，は細胞毒性薬物、例え はトキソルヒノンまたはメルフアランである。
Ｒ２１、Ｒ２ＳおよびＲ２Ｇは同一または異なり、そしてｌ］であるか、または 炭素原子２−２２個をｆ１″するアルキル、ヘテロ原子を含むアルキル、シクロ アルキルノン９ オール、−環状芳香族基、アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、アル キルカルボキシレート、アルキルアンモニウムまたはアルケンである。
ハブテン 下記式を有する化合物Ｂ４ｂは、ハブテンおよびまたプロトラッグとして有用で ある。
この式において、Ｙ′は化合物Ｂ４ａのＸの類縁体であり、そしてＹ′は担体た んばく質に結合していてもよく、 Ｂは０．５ＳＮＨまたはＣＨ２てあり、ＤはＰ　（０）ＯＨ，Ｓｏ２、ＣＨＯＨ またはＳｏ（いずれかの立体配置を有する）であり、ただしＤかＣＨＯＨである 場合には、ＢはＣＨ２であり、そしてＲ２１”　−２１”は同一または異なり、 担体たんばく質に結合していてもよく、そしてＨであるか、または炭素原子２− ２２個を存するアルキル、ヘテロ原子を含むアルキル、シクロアルキルジオール 、−環状芳香族基、アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカ ルボキシレーｔ・、アルキルアンモニウムまたはアルケンである。
５　アミドカルボニルに対する分子内求核的攻撃により活性化されるアセチルア ミ　ト類 アセチルアミドプロドラッグ 本発明は、下記式を有するアセチルアミド化合物Ｂ５ａを包含する。
に結合していてもよく、 この式において、Ｘは薬物ＸＮＨ，の基てあり。有利には、ＸＮＨ，は細胞毒性 薬物、例えはドキソルビシンまたはメルフアランである。
Ｊは炭素原子１−９個をｎする直鎖状アルキルまたはＩ−９個の原子を存し、ヘ テロ原子を含む直鎖状アルキルであり、この基はフェニル、アルキルまたはへテ ロ原Ｆを含むアルキルにより置換されており、ＹはＯＨ，ＮＨ２、ＮＨＲまたは ＳＨてあり、Ｒはアルキル、アルケニルまたはアルキニルてあり、この基は一〇 Ｈ、クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、−８０３、アリール、−３Ｈ１−（Ｃ ｏ）Ｈｌ−（ＣＯ）ＯＨ、エステル基、エーテル基、−ＣＯ−、ンア人工ポキシ ド基およびヘテロ原子からなる群から選はれる１個または２個以上の置換基によ り置換されていてもよく、そしてＲ２７−２＠は同一または異なり、そしてＨで あるか、または炭素原子２−２２個を存するアルキル、ヘテロ原子を含むアルキ ル、シクロアルキルジオール、−環状芳香族基、アルキルホスホネート、アルキ ルスルホネート、アルキルカルボキノし−ｈ、アルキルアンモニウムまたはアル ケンである。
ハブテン 下肥式を仔する化合物Ｂ５ｂはハブテンおよびまたプロトラッグとして有用であ る 式中、Ｙ′は化合物Ｂ５ａのＸの類縁体であり、そしてＹ′は担体たんばく質Ｂ はＯ，Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２てあり、Ｄ′はＰ　（０）　、ＣＯＨ（いずれかの 立体配置を有する）であり、ただしＤがＣＯＨである場合には、ＢおよびＹ′は ＣＨ２てあり、Ｙ−は０、ＮＨ，ＮＲ，ＳまたはＣＨ２てあり、Ｒはアルキル、 アルケニルまたはアルキニルてあり、この基は一〇Ｈ，クロロ、フルオロ、ブロ モ、ヨード、−３Ｏ３、アリール、−３Ｈ１−（Ｃｏ）Ｈ，−（Ｃｏ）ＯＨ，エ ステル基、エーテル基、−ＣＯ−、シア人工ポキシド基およびヘテロ原子からな る群から選はれる１個または２個以上の置換基により置換されていてもよく、Ｊ は炭素原子１−９個を有する直鎖状アルキルまたは１−９個の原子を有し、ヘテ ロ原子を含む直鎖状アルキルであり、この基はフェニル、アルキルまたはへテロ 原子を含むアルキルにより置換されており、そしてＲ２７−−２＠は同一または 異なり、担体たんばく質に結合していてもよく、そしてＨであるか、または炭素 原子２−２２個を有するアルキル、ヘテロ原子を含むアルキル、シクロアルキル ジオール、−環状芳香族基、アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、ア ルキルカルボキシレート、アルキルアンモニウムまたはアルケンである。
６　モノラクタム加水分解 β−ラクタマーゼ抗体発現に係オ）るハブテン戦略の概略−環状β−ラクタム（ “モノハクタム′）を加水分解できる抗体を発現させるためには、免疫感作用の ハブテンのデザイン計画およびその製造か必要である。
可能なデザインのいくつかを下記に示す。
１　２　旦 そのβ−ラクタム環がシクロブタノールにより置き換えられている（β−ラクタ ムカルボニルが二級アルコールに置き換えられている）点でβ−ラクタム基質と 相違している化合物ｌを用いる計画がある。アルコール遷移状態類縁体のデザイ ンには成功しており、酵素学において、遷移状態抑止剤として周知であり（Ｂｏ ｌｉｓ、　Ｇ、等、Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、　３０　（１９８７）　１７２ ９−３７）、加水分解触媒性抗体の発現に使用されている（Ｓｈｏｋａｔ、　Ｋ 、　Ｍ、等、Ｃｈｅｍ、　Ｉｎｔ、　Ｅｄ、　Ｅｎｇｌ、　２９　（１９９０） ＋２９６−１３０３）。
化合物２を用いる計画は、そのβ−ラクタム環にメチレン基を付加して、γ−ラ クタム環を生成させることを包含する。環の大きさか相違していることから（４ １対５環）、カルボニルの結合角がそれらの各項に係わり相違している。β−ラ クタムのカルボニルに比較して、γ−ラクタムのカルボニルは環の平面からさら に突出している（さらに四面体形である）　（Ｂａｌｄｗｉｎ、　Ｊ、Ｅ、等、 Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ４２　（１９８６）　４８４７）。この相違点は、触媒 作用に関与するγ−ラクタム誘発抗体へのβ−ラクタムの基質不安定化を生しさ せる。
基質不安定化と遷移状態補償との組み合わせによる、β−ラクタマーゼ活性を有 する抗体の誘発には非環状のハブテン３か使用される。この化合物またはその類 似化合物は、容易に切断てきる結合の代わりに遷移状態様のジアルキルホスフィ ネ−１・（本明細書で示されている）を有するか、または類似のリン−ベース基 を汀するβ−ラクタムの線状類縁体である。従って、この計画では遷移状態類縁 体と基底状聾不安定化との組み合わせか存在する。
これらの計画の全部において、置換基の構造は、これらに制限されないものとし て、Ｋ　Ｌ　ＨまたはＢＳＡを包含する免疫原性担体たんばく質への薬物（Ｒ″ を占める）の共存結合（Ｒ，Ｒ”またはＲ−−を経る）および変異体の選別に使 用される抗体（ＲおよびＲ゛′）の構造に依存する。
モノラクタムプロトラッグ 本発明は、下記式を仔するモノラクタム化合物Ｂ６ａを包含する。
この式において、Ｒ”およびＲ”の少なくとも１つはＯＸであり、Ｘは薬物ＸＯ Ｈの基である。有利には、ＸＯＨは細胞毒性薬物、例えば抗新生物性ヌクレオシ ド類縁体（アノ叶−ス環の３′および（または）５′酸素の部位てβ−ラクタム に結合）、ドキソルビシンまたはエノール型のアルドホスファミドである。
ＯＸてはないＲ２１−１２は同一または異なり、そしてＨであるか、または炭素 原子１−１０個を有するアルキル、炭素原子１−１０個を有するアルケニル、− 環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ環状基またはフ ェニル基（これらの基はへテロ環状基またはフェニル基により置換されていても よい）を有するか、あるいは存していない、カルボキシアルキル、炭素原子１− １０個を有するアルコキシ、炭素原子１−１Ｏ個を有するアルキルアミ人炭素原 子１−１０個を有するアミノアルキル、炭素原子１−１０個を有し、置換基とし てヘテロ環状基またはフェニル基（これらの基はへテロ環状基またはフェニル基 により置換されていてもよい）を有するか、あるいは存していない、アシルオキ ソ、または炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ環状基またはフェニ ル基（これらの基はへテロ環状基またはフェニル基により置換されていてもよい ）を存するか、あるいは任していない、アシルアミノであり、そしてＲ”はＳｏ 、ＨまたはＳＯ４Ｈであることもてきる。
ハブテン 下記式を有する化合物Ｂ６ｂはハブテンとして、およびまたプロトう・ノブとし て有用である： この式において、Ｒ３０−およびＲ３１′の少なくとも１個は化合物　Ｂ６ａの Ｘの類縁体であり、そしてこの類縁体は担体たんばく質に結合していてもよく、 Ｄ′′はＳＯ２、ＳＯまたはＣＨＯＨ（いづれかの立体配置を有する）であり、 たたしＤ゛パＣＨＯＨである場合には、Ｚ′は　ＣＨてあり、Ｚ′は０、Ｎまた はＣＨ（いづれかの立体配置を有する）であり、ただしＺ′か０である場合には 、Ｒ２９′は存在せず、上記類縁体てはないＲｔｓ’−ｚｚ−は同一または異な り、そしてＨであるか、または炭素原子１−１０個をイｆするアルキル、炭素原 子１−１０個を有するアルケニル、−環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有し 、置換基としてヘテロ環状基またはフェニル基（これらの基はへテロ環状基また はフェニル基により置換されていてもよい）を存するか、あるいは有していない 、カルボキシアルキル、炭素原子１−１０個を存するアルコキン、炭素原子１− １０個を有するアルキルアミノ、炭素原子１−１０個を仔するアミノアルキル、 炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ環状基またはフェニル基（これ らの基はへテロ環状基またはフェニル基により置換されていてもよい）を存する か、あるいは存していない、アシルオキソ、または炭素原子１−１０個を有し、 置換基としてヘテロ環状基またはフェニル基（これらの基はへテロ環状基または フェニル基により置換されていてらよＬつを存するか、あるいは存していない、 アンルアミノであり、そしてＲ２９′はＳＯ，Ｈまたは５ｏｌ）−（であること もてき、そしてＲ２１’−１３’は担体たんばに質に結合していてもよい。
モノラクタムプロトラック 本発明は、下記式をＴｒするモノラクタム化合物Ｂ６ｃを包含するこの式におい て、Ｘは薬物ＸＯＨの基である。有利には、ＸＯＨは細胞毒性薬物、例えは抗新 生物性ヌクレオノド類縁体（アルドース環の３″および（または）５′位置でカ ルボニル部分に結合）、ドキソルビシンまたはエノール型のアルドホスファミド である。
Ｒ”、Ｒ３５、Ｒ”およびＲ”は同一または異なり、そしてＨであるか、または 炭素原子１−１０個を存するアルキル、炭素原子１−１０個を有するアルコキシ 、−環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有する　アルケン、ヒドロキシル、ヒ ドロキシアルギル、アミノアルキル、チオアルキル、アミ人アルキルアミノ、ア ルキルホスホ不−１〜、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレートまた はアルキルアンモニウムであり、 ｎは０−３の整数であり、 Ｅは任意に存在し、そして酸素、カルボニルオキシまたはオキシカルボニルであ り、 Ａは下記の基であり： この基において、Ｒｏ、Ｒ″９、Ｒ”、Ｒ１１またはＲ４２はＥに対する結合部 位であり、あるいはＥか存在していない場合には、［ＣＨ２］　ｎに対する結合 部位てあり、あるいはＥか存在しておらず、かつまたｎ＝０である場合には、フ ェニル環に対する結合部位であり、 Ｒ”、　Ｒ”、　Ｒ２Ｏ，Ｒ”マタｌ；ｉＲ”ｌｉ＋！同一または異なり、そし てＨであるか、または炭素原子ｌ−１０個を存するアルキル、炭素原子１−１０ 個を有するアルケニル、−環状芳香族基、炭素原子１−１θ個を存し、置換基と してヘテロ環状基またはフェニル基（これらの基はへテロ環状基またはフェニル 基により置換されていてもよしりを有するか、あるいは有していない、カルボキ シアルキル、炭素原子１−１０個を有するアルコキシ、炭素原子１−１０個を有 するアルキルアミノ、炭素原子１−１０個を有するアミノアルキル、炭素原子１ −１０個を有し、置換基としてヘテロ環状基またはフェニル基（これらの基はへ テロ環状基またはフェニル基により置換されていてもよい）を存するか、あるい は有していない、アシルオキソ、または炭素原子１−１０個を存し、置換基とし てヘテロ環状基またはフェニル基（これらの基はへテロ環状基またはフェニル基 により置換されていてもよい）を有するか、あるいは存していない、アシルアミ ノであり、そしてＲ”はＳｏｌ　Ｈまたは５ｏ４Ｈであることもてきる。
ハブテン 下記式を有する化合物Ｂ６ｄはハブテンとして、およびまたプロドラッグとして 有用である： 式中、Ｘ′は化合物Ｂ６ｃのＸの類縁体であり、そして担体たんばく質に結合し ていてもよく、 Ｂは０、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２てあり、Ｒ３４′、Ｒ３５′、Ｒ３６″およびＲ ３７゛は同一または異なり、そしてＨであるか、または炭素原子１−１０個を有 するアルキル、炭素原子１−１０個を存するアルコキシ、−環状芳香族基、炭素 原子１−１０個を有するアルケン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アミノ アルキル、チオアルキル、アミ人アルキルアミ人アルキルホスホネート、アルキ ルスルホネート、アルキルカルボキシレートまたはアルキルアンモニウムであり 、ただしＲ”−Ｒ””の少なくとも１個はＨではなく、 Ｒ３４′、Ｒ３５′、Ｒ３６′およびＲ２７′は場合により、担体たんばく質に 対する結合部位であり、 ｎはＯ−３の整数であり、 Ｅ′は任意に存在し、そしてＣＨ２，０、カルボニルオキシ、カルボニル、メチ レン、オキシカルボニルまたはメチレンカルボニルであり、Ａ′は下記の基であ り・ この基において、Ｄ−”−はＳＯ２，ＳｏまたはＣＨＯＨ（いづれかの立体配置 を有する）であり、ただしＤ″′かＣＨＯＨである場合には、Ｚ′はＣＨであり 、 Ｚ″はＯ，ＮまたはＣＨ（いづれかの立体配置を有する）であり、ただしＺ′か ０である場合には、Ｒ”−は存在しておらず、そしてＲ３＠′、Ｒ３１′、Ｒ４ ０−１Ｒ４ビまたはＲ４２′はＥ′に対する結合部位てあり、あるいはＥ′が存 在していない場合には、（ＣＨ２）ｎに対する結合部位であり、あるいはＥ′が 存在しておらず、かつまたｎ＝０である場合には、フェニル環に対する結合部位 であり、 Ｒ０′、Ｒ”−１Ｒ４０′、Ｒ”−およびＲ４２′は同一または異なり、そして Ｈであるか、または炭素原子１−１０個を有するアルキル、炭素原子１−１０個 を存するアルケニル、−環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有し、置換基とし てヘテロ環状基またはフェニル基（これらの基はへテロ環状基またはフェニル基 により置換されていてもよい）を有しているか、または有していないカルボキシ アルキル、炭素原子１−１０個を有するアルコキシ、炭素原子１−１０個を存す る・　アミノアルキル、炭素原子１−１０個を存するアミノアルキル、炭素原子 １−１０個を有し、置換基としてヘテロ環状基またはフェニル基（これらの基は へテロ環状基またはフェニル基により置換されていてもよい）を存しているか、 または有していないアシルオキソ、または炭素原子１−１０個を存し、置換基と してヘテロ環状基またはフェニル基（これらの基はへテロ環状基またはフェニル 基により置換されていてもよい）を有しているか、または存していないアシルア ミノであり、 そしてＲ３＠′はＳＯ，ＨまたはＳｏ、Ｈであることかてきる。
モノラクタム化合物またはトリ置換アセテートプロトラッグ本発明は、下記式を 有するモノラクタム化合物Ｂ６ｅを包含する・式中、Ｘは薬物ＸＯＨの基である 。「利には、ＸＯＨは細胞毒性薬物、例えば抗新生物性ヌクレオント類縁体（ア ルＩ’−ス環の３′および（または）５′位置でカルボニル部分に結合）、トキ ソルヒシンまたはエノール型のアルドホスファミドである。
この式において、ｎは０−４の整数であり、Ｒ１３およびＲ冑よ同一または異な るか、両方ともにＨであることはなく、そしてＨであるか、あるいは炭素原子２ −２２個を有するアルキル、ペテロ原子を含むアルギル、シクロアルキルノオー ル、−環状芳香族基、アルキルホスホネ−１・、アルキルスルホネート、アルキ ルカルボキシレート、アルキルアンモニウムまたはアルケンてあり、 Ｅは任意に存在し、酸素、カルボニルオキソまたはオキシカルボニルであり、Ａ は下記の基であり。
この基において、Ｒｏ、Ｒ１、Ｒ４°、Ｒ４１またはＲ”はＥに対する結合部位 であり、またはＥか存在していない場合には、（ＣＨ，）ｎに対する結合部位で あり、またはＥか存在しておらず、かつまたｎ＝ｏである場合には、Ｒ”または Ｒ”か結合している炭素原子に対する結合部位であり、Ｒ”、Ｒｏ、Ｒ”、Ｒ” またはＲ４２は同一または異なり、そしてＨであるか、または炭素原子１−１０ 個を有するアルキル、炭素原子１−１０個を存するアルケニル、−環状芳香族基 、炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ環状基またはフェニル基（こ れらの基はへテロ環状基またはフェニル基により置換されていてもよい）を有し ているか、または存していないカルボキシアルキル、炭素原子１−１０個を有す るアルコキシ、炭素原子１−１０個を有するアミノアルキル、炭素原子１−１０ 個ををするアミノアルキル、炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ環 状基またはフェニル基（これらの基はへテロ環状基またはフェニル基により置換 されていてもよい）を存しているか、または存していないアシルオキソ、または 炭素原子１−１０個を存し、置換基としてヘテロ環状基またはフェニル基（これ らの基はへテロ環状基またはフェニル基により置換されていてもよい）を有して いるか、または存していないアシルアミノであり、そしてＲ”はＳｏ、Ｈまたは Ｓｏ、Ｈであることもてきる。
ハブテン 下記式を有する化合物Ｂ６ｆはハブテンとして、およびまたプロドラ・ソゲとし て有用である。
この式において、Ｘ″は化合物Ｂ６ｅのＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体た んばく質に結合していてもよく、 ＢはＯ，Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２てあり、ｎは０−４の整数であり、 Ｒ４３′およびＲ４４′は同一または異なるが、両方ともにＨであることはなく 、そしてＨであるか、あるいは炭素原子２−２２個を存する　アルキル、ヘテロ 原子を含むアルキル、シクロアルキルジオール、−環状芳香族基、アルキルホス ホネート、アルキルスルホネート、アルキルカルボキンレート、アルキルアンモ ニウムまたはアルケンであり、 Ｅは任意に存在し、ＣＨ２，０、カルポニルオキシ、カルボニルメチレン、オキ ソカルボニルまたはメチレンカルボニルであり、Ａは下記の基であり。
この基において、Ｄ″′はＳＯ□、ＳＯまたはＣＨＯＨ（いづれかの立体配置を 存する）であり、ただしＤ″′かＣＨＯＨである場合には、Ｚ′はＣＨであり、 Ｚ′は０、ＮまたはＣＨ（いづれかの立体配置を存する）であり、ただしＺ′か Ｏである場合には、Ｒ３１は存在しておらず、Ｒ３１、Ｒ３″′、Ｒ４０゛、Ｒ ４１′またはＲ４２′はＥ′に対する結合部位であり、またはＥ′か存在してい ない場合には、（ＣＨ，）ｎに対する結合部位であり、またはＥ′が存在してお らず、かつまたｎ＝ｏである場合には、Ｒ４３゛またはＲ４４′が結合している 炭素原子に対する結合部位であり、Ｒ３１、Ｒ”−１Ｒ４０−１Ｒ４１−および Ｒ”″は同一または異なり、そしてＨであるか、または炭素原子１−１０個を存 するアルキル、炭素原子１−１０個を存するアルケニル、−環状芳香族基、炭素 原子１−１０個を存し、置換基としてヘテロ環状基またはフェニル基（これらの 基はへテロ環状基またはフェニル基により置換されていてもよい）を存している か、または有していないカルボキシアルキル、炭素原子１−１０個を存するアル コキシ、炭素原子１−１０個を有するアミノアルキル、炭素原子１−１０個を有 するアミノアルキル、炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ環状基ま たはフェニル基（これらの基はへテロ環状基またはフェニル基により置換されて いてもよい）を存しているか、または存していないアシルオキシ、または炭素原 子１−１Ｏ個を存し、置換基としてヘテロ環状基またはフェニル基（これらの基 はへテロ環状基またはフェニル基により置換されていてもよい）を有しているか 、または有していないアシルアミノであり、そして Ｒ３ｇはＳｏ、ＨまたはＳｏ、Ｈであることもてきる。
アセタールヒドロラーゼ触媒作用 アセタールヒドロラーゼ触媒作用により、またはオルト−エステルヒドロラーゼ 触媒作用により活性化される、本発明に係わる新規化合物には、下記式て表され る化合物か包含される。
Ｃ，アセタール加水分解反応によるプロドラッグ活性化！　ジアルキルアセター ル類 ジアルキルアセタールプロトラッグ 本発明は、下記式を有するアルキルアセタール化合物Ｃ１ａを包含する：この式 において、Ｘは薬物ＸＱＨの基である。有利には、ＸＱＨは細胞毒性薬物、例え ばヌクレオント類縁体またはホスホルアミド　マスタード［ＨＯＰ（０）（ＮＨ ＝　）Ｎ　（ＣＨ２ＣＨ２ＣＩ）−］　、メルフアランまたはトキソルビソンで ある。
Ｑは０またはＮＨてあり、そして Ｒ”およびＲ”は同一または異なり、そして非置換のアルキル、置換基としてハ ロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アルキ ルアンモニウム、アルケン、または−環状芳香族基を有するアルキルである。
この化合物は、アルドホスファミドジエチルアセタールではない。しかしなから 、アルドホスファミドジエチルアセタールは、本発明の触媒性抗体を利用する処 置方法においては有用である。
ハブテンＩ 下記式を有する化合物Ｃ１ｂは、ハブテンとして、およびまたプロドラッグとし て作用である この式において、Ｑ′は０、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２てあり、Ｘ′は化合物Ｃ１ａ のＸの類縁体であり、そしてＸ−は担体たんばく質に結合していてもよく、 Ｂ′はＮＨまたはＣＨ２てあり、Ｂ′かＮＨである場合には、Ｑ′はＣＨ２であ り、そして Ｒ４５′およびＲ４＠′は同一または異なり、そしてＨであるか、または非置換 のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート 、カルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を 有する、アルキルであり、そして担体たんばく質に結合していてもよい。
ハブテン２ 下記式を存する化合物Ｃ１ｃは、ハブテンとして、およびまたプロドラッグとし て有用である。
この式において、Ｒ””およびＲ４１′は同一または異なり、そしてＨであるか 、または非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート 、スルホネート、カルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケンまたは一 環状芳香族基を有する、アルキルであり、そして担体たんばく質に結合していて もよい。
ハブテン３ 下記式を有する化合物Ｃ１ｄは、ハブテンとして、およびまたプロドラッグとし て有用である・ この式において、Ｑ′は０、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２てあり、Ｘ′は化合物Ｃ１ａ のＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんばく質に結合していてもよく、 Ｒ４５゛およびＲ４１は同一または異なり、そしてＨであるか、または非置換の アルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、 カルボキンレート、アルキルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を有 する、アルキルであり、そして担体たんばく質に結合していてもよい。
ハブテン４ 下記式を存する化合物Ｃ１ｅは、ノ１ブテンとして、およびまたプロドラ、ソゲ として有用である： この式において、Ｒ４ｓ’およびＲ４＠′は同一または異なり、モしてＨである か、または非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネー ト、スルホネート、カルボキンレート、アルキルアンモニウム、アルケンまたは 一環状芳香族基を有する、アルキルであり、モして担体たんばく質に結合してい てもよい。
ハブテン５ 下記式を有する化合物ＣＩＦは、ノ１ブテンとして、およびまたプロドラ・ソゲ として有用である。
この式において、Ｘ′は化合物Ｃ１ａのＸの類縁体てあり、ＥおよびＥ′は同一 または異なり、そしてＮ、Ｃ１０またはＳである。
この式において、Ｒ”−はＨ、アミノカルボキシ、非置換のアルキル、置換基と してハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、 アルキルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を存する、アルキルであ り、モして担体たんばく質に結合していてもよい。
Ｒ””に結合しているＥがＮである場合には、Ｅ−Ｒ’６′架橋はアミン基によ り置換されているアミドを形成していると好ましい。
２、オルトエステル類 オルトエステルプロトラッグ 本発明は、下記式で表されるオルトエステル化合物Ｃ２ａを包含する：式中、Ｘ は薬物ＸＣ）Ｈの基である。有利には、ＸＯＨは細胞毒性薬物、たとえはヌクレ オシド類縁体またはドキソルビシンまたはエノール型のアルドホスファミドであ る。
この式において、Ｒ４７、Ｒ”およびＲｏは同一または異なり、そして非置換の アルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、 カルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を存 する、アルキルであり、そして Ｒ”はＨであることもできる。
ハブテン１ 下記式を仔する化合物Ｃ２ｂは、ハブテンとして、およびまたプロドラッグとし て有用である： この式において、Ｘ′は化合物Ｃ２ａのＸの類縁体であり、そして担体たんばく 質に結合していてもよく、 Ｑ′は０、ＣＨ２、ＳまたはＮＨてあり、そしてＲ１７′およびＲ４８′は同一 または異なり、そしてＨであるか、または非置換のアルキル、置換基としてハロ ゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アルキル アンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を有する、アルキルであり、そし て担体たんばく質に結合していてもよい。
ハブテン２ 下記式を存する化合物Ｃ２ｃは、ハブテンとして、およびまたプロドラッグとし て有用である この式において、Ｒ４７′、Ｒｔｓ−およびＲ４１−は同一または異なり、そし てＨであるか、または非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、 ホスホネート、スルホ不−ｌ・、カルボキシレート、アルキルアンモニウム、ア ルケンまたは一環状芳香族基を存する、アルキルであり、そして担体たんばく質 に結合していてもよい。
ハブテン３ 下記式を存する化合物Ｃ２ｄは、ハブテンとして、およびまたプロドラッグとし て有用である： この式において、Ｘ′は化合物Ｃ２ａのＸの類縁体であり、そして担体たんばく 質に結合していてもよく、 Ｑ′はＣＨ２であり、そして Ｒ”−およびＲ”−は同一または異なり、そしてＨであるか、または非置換のア ルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カ ルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を有す る、アルキルであり、モして担体たんばく質に結合していてもよい。
ハブテン４ 下記式を有する化合物Ｃ２ｅは、ハブテンとして、およびまたプロドラッグとし て有用である・ この式において、Ｒ４７′およびＲ１１−は同一または異なり、モしてＨである か、または非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネー ト、スルホネート、カルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケンまたは 一環状芳香族基を有する、アルキルであり、そして担体たんばく質に結合してい てもよい。
３、ジオールアセタール類、例えば糖置換アセタール類ジオールアセタールプ口 ドラッグ 本発明は、下記式Ｃ３ａを有するジオールアセタール化合物を包含する：式中、 Ｘは薬物ＸＱＨの基である。有利には、ＸＱＨは細胞毒性薬物、例えばヌクレオ シド類縁体またはホスホラミド　マスタード［ＨＯＰ　（０）（ＮＨ，）Ｎ　（ ＣＨ２ＣＨ２Ｃ１）、］　、メルフアランまたはドキソルビシンである。
この式において、Ｑは０またはＮＨであり、そしてＲ”およびＲ”は同一または 異なり、モしてＨであるか、または非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、 ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルホキル−ト、またはアルキルエ ステルまたはアルキルアミド、ヒドロキシル、アルキルアンモニウム、アミノ、 アルケン、または−環状芳香族基を存する、アルキルである。有利には、Ｒ５０ とＲＳ　ｌとはシスてあり、この分子のアセタール部分内に対称性の鏡面か存在 するように同一であり、異性体の数か最少にされている。
ハブテンＩ Ｆ記式を有する化合物Ｃ３ｂは、ハブテンとして、およびまたプロドラッグとし て有用である この式において、Ｒ５０′およびＲ５１゛は同一または異なり、そしてＨである か、または非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネー ト、スルホネ−１・、カルホキル−１・またはアルキルエステルあるいはアルキ ルアミド、ヒＩ・ロキノル、アルキルアンモニウム、アミ人アルケンまたは一環 状芳香族基を有する、アルキルであり、モして担体たんばく質に結合していても よい。
ハブテン２ 下記式を有する化合物Ｃ３ｃは、ハブテンとして、およびまたプロドラッグとし て有用である この式において、Ｑ′は０、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２てあり、Ｘ゛は化合物Ｃ３ａ のＸの類縁体であり、そしてＸ″は担体たんばく質に結合していてもよく、 Ｂ−はＮＨまたはＣＨ，てあり、ただしＢ−がＮＨである場合には、Ｑ′はＣＨ ２てあり、そして Ｒ”−およびＲ６じは同一または異なり、そしてＨであるか、または非置換のア ルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カ ルボキシレート、またはアルキルエステルあるいはアルキルアミド、ヒドロキシ ル、アミノ、アルキルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を有する、 アルキルであり、そして担体たんばく質に結合していてもよい。
ハブテン３ 下記式を存する化合物Ｃ３ｄは、ハブテンとして、およびまたプロドラッグとし て有用である・ この式において、Ｑ′は０、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ，てあり、Ｘ′は化合物Ｃ３ａ のＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんばく質に結合していてもよく、 Ｒ”’およびＲ”−は同一または異なり、そしてＨであるか、または非置換のア ルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カ ルボキシレー１・、またはアルキルエステルあるいはアルキルアミド、ヒドロキ シル、アルキルアンモニウム、アミ人アルケンまたは一環状芳香族基を有する、 アルキルであり、モして担体たんばく質に結合していてもよい。
ハブテン４ 下記式を有する化合物Ｃ３ｅは、ハブテンとして、およびまたプロドラッグとし て有用である この式において、Ｒ５０′およびＲ５１′は同一または異なり、モしてＨである か、または非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネー ト、スルボネート、カルボキシレート、またはアルキルエステルあるいはアルキ ルアミド、ヒドロキシル、アルキルアンモニウム、アミノ、アルケンまたは一環 状芳香族基を仔する、アルキルであり、そして担体たんばく質に結合していても よい。
糖アセタールプロトラッグ 本発明は、下記式を存するジオールアセタール化合物Ｃ３ｆを包含する。
この式において、Ｘは薬物ＸＱＨの基である。有利には、ＸＱＨは、細胞毒性薬 物、例えはヌクレオノ］・類縁体またはホスホラミド　マスタード［ＨＯＰ（０ ）（ＮＨ，）Ｎ　（ＣＨ，ＣＨ２Ｃｌ）２　］　、メルフアランまたはドキソル ビシンである。
この式において、Ｑは０またはＮＨであり、そしてＧはジオールＧ　（ＯＨ）２ の基てあり、Ｇ　（ＯＨ）１は糖、ソクロアルキルジオールまたはオルトフェニ ルジオールであり、そしてＧは置換基として、ハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネ ート、スルホネート、カルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケン、ま たは−環状芳香族基を有していてもよい。
上記化合物の例には、下記の化合物がある：塩基＝ウラシル、５−フルオロウラ シル、ソトソン、アデニン、グアニンＲ＝Ｈ，ＰＯ，Ｈ。
糖アセタールハブテン１ 下記式を存する化合物０３ｇはハブテンとして、またはプロドラッグとして存用 である： この式において、Ｑ′はＯ，Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、Ｘ′は化合物Ｃ３ｆ のＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんばく質に結合していてもよく、 Ｂ′はＮＨまたはＣＨｔてあり、ただしＢ′かＮＨである場合には、Ｑ′はＣＨ ２てあり、そして Ｇ′はジオールＧ　（ＯＨ）、の基てあり、Ｇ　（ＯＨ）、は糖、シクロアルキ ルジオールまたはオルトフェニルジオールであり、そしてＧ′は置換基として、 ／％ロゲン、ヘテロ原子、ホスホネ−１−、スルホネート、カルボキシレート、 アルキルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を存していてもよく、そ して担体たんばく質に結合していてもよい。
上記化合物の例には下記の化合物かある：塩基＝ウランル、５−フルオロウラシ ル、シトシン、アデニン、グアニンＲ＝Ｈ，ＰＯｓ　Ｈ２ 糖アセタールハプテン２ 下記式を存する化合物Ｃ３ｈはハブテンとして、またはプロドラッグとして作用 である： 式中、Ｇ′はジオールＧ　（ＯＨ）２の基であり、Ｇ　（ＯＨ）ｔは糖、シクロ アルキルジオールまたはオルトフェニルジオールてあ頃そしてＧ′は置換基とし て、ハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、 アルキルアンモニウム、アルケン、または−環状芳香族基ル有していてもよく、 モして担体たんばく質に結合していてもよい。
上記化合物の例には、下記の化合物がある：塩基＝ウラシル、５−フルオロウラ シル、シトシン、アデニン、グアニンＲ＝Ｈ，ＰＯｓ　Ｈ２ 糖アセタールハブテン３ 下記式を存する化合物Ｃ３ｉはハブテンとして、またはプロドラッグとして作用 である。
この式において、Ｑ′は０、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、Ｘ′は化合物Ｃ３ｆ のＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんばく質に結合していてもよく、そし て Ｇ′はジオールＧ　（ＯＨ）、の基てあり、Ｇ　（ＯＨ）、は糖、シクロアルキ ルジオールまたはオルトフェニルジオールであり、そしてＧ′は置換基として、 ハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アル キルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を存していてもよく、そして 担体たんばく質に結合していてもよい。
上記化合物の例には、下記の化合物がある：塩基＝ウラシル、５−フルオロウラ ンル、シトシン、アデニン、り゛アニＲ＝ＨＳ　ＰＯｓ　Ｒ２ 糖アセタールハプテン４ 下記式を有する化合物Ｃ３ｊはハプテンとして、またはプロドラッグとして有用 である： 式中、Ｇ′はジオールＧ　（ＯＨ）２の基であり、Ｇ　（ＯＨ）、は糖、シクロ アルキルジオールまたはオルトフェニルジオールであり、そしてＧ′は置換基と して、ハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート 、アルキルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を有していてもよく、 そして担体たんばく質に結合していてもよい。
上記化合物の例には、下記の化合物がある：・ン 塩基＝ウラシル、５−フルオロウランル、シトシン、アデニン、グアニンＲ＝Ｈ ，ＰＯ２Ｈ２ ４、フォールオルトエステル類 ノオールオルトエステルブロトラソグ 本発明は、下記式を有するジオールオ／叶エステル化合物Ｃ４ａを包含する：式 中、Ｘは薬物ＸＯＨの基である。有利には、ＸＯＨは細胞毒性薬物、例えばヌク レオシド類縁体またはドキソルビシンまたはエノール型のアルドホスファミドで ある。
Ｒ”、Ｒ”およびＲ”は同一または異なり、そしてＨであるか、または非置換の アルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、 カルボキシレートまたはアルキルエステルあるいはアルキルアミド、ヒドロキシ ル、アルキルアンモニウム、アミ人アルケンまたは一環状芳香族基を有する、ア ルキルである。
有利には、Ｒ”とＲｏとは、この分子の環状アセタール部分内に対称の鏡面が存 在するようにシスてありかつまた同一であり、そして異性体の数か最小にされて いる。
ジオールオルトエステルハプテンｌ 下記式を育する化合物Ｃ４ｂは、ハブテンとして、またはプロドラッグとして有 用である： 式中、Ｒ５２′、ＲＳ３′およびＲ５４′は同一または異なり、そしてＨｌまた は非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スル ホネート、カルボキシレート、またはアルキルエステルあるいはアルキルアミド 、ヒドロキシル、アルキルアンモニウム、アミ人アルケンまたは一環状芳香族基 を育する、アルキルであり、そして担体たんばく質に結合していてもよい。
ジオールオルトエステルハブテン２ 下記式を存する化合物Ｃ４ｃは、ハブテンとして、またはプロドラッグとして有 用である： 式中、Ｘ゛は化合物Ｃ４ａのＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんばく質に 結合していてもよく、 Ｑ′はＣＨ，またはＮＨであり、そしてＲ６ｚ′およびＲ５２′は同一または異 なり、そしてＨであるか、または非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘ テロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、またはアルキルエ ステルあるいはアルキルアミド、ヒドロキシル、アルキルアンモニウム、アミ人 アルケンまたは一環状芳香族基を有する、アルキルてあＩバそして担体たんばく 質に結合していてもよい。
ジオールオルトエステルハブテン３ 下記式を存する化合物Ｃ４ｄは、ハブテンとして、またはプロドラッグとして有 用である： 式中、Ｒ５２′、Ｒ５３゛およびＲ”−は同一または異なＩバそしてＨであるか 、または非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート 、スルホネート、カルボキシレート、またはアルキルエステルあるいはアルキル アミド、ヒドロキシル、アルキルアンモニウム、アミ人アルケンまたは一環状芳 香族基を存する、アルキルてあり、そして担体たんばく質に結合していてもよい 。
フォールオルトエステルハブテン４ 下記式を存する化合物Ｃ４ｅは、ハブテンとして、またはプロドラッグとして有 用である： 式中、Ｘ′は化合物Ｃ４ａのＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんばく質に 結合していてもよく、 Ｑ′はＣＨ，てあり、そして Ｒ６ｗ′およびＲ′２′は同一または異なり、そしてＨであるか、または非置換 のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート 、カルボキンレート、またはアルキルエステルあるいはアルキルアミド、ヒドロ キシル、アルキルアンモニウム、アミ人アルケンまたは一環状芳香族基を有する アルキルであり、そして担体たんばく質に結合していてもよい。
糖オルトエステルプロドラッグ 本発明は、下記式を有するジオールオルトエステル化合物Ｃ４ｆを包含する：式 中、Ｘは薬物ＸＯＨの基である。存利には、ＸＯＨは、細胞毒性薬物、例えはヌ クレオシド類縁体、エノール型のアルドホスファミドまたはドキソルビシンであ る。
式中、ＧはジオールＧ　（ＯＨ）２の基であり、Ｇ　（ＯＨ）２は糖、シクロア ルキルジオールまたはオルトフェニルジオールであり、そしてＧは置換基として ハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アル キルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を存していてもよく、そして Ｒ５”はＨ１非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネ ート、スルホネート、カルボキシレートまたはアルキルエステル、あるいはアル キルアミド、ヒドロキシル、アルキルアンモニウム、アミノ、アルケンまたは一 環状芳香族基ををする、アルキルである。
上記化合物の例には、下記の化合物がある。
塩基＝ウラシル、５〜フルオロウランル、シトシン、アデニン、グアニンまたは その類縁体 Ｒ＝ＨＳｐｏｔ　Ｈ。
糖オルトエステルハブテンｌ 下記式を有する化合物Ｃ４ｇは、ハブテンとして、またはプロドラッグとして有 用である。
式中、Ｘ′は化合物Ｃ４ｆのＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんばく質に 結合していてもよく、 Ｑ′はＣＨ，またはＮＨてあり、そしてＧ′はジオールＧ　（ＯＨ）２の基てあ り、Ｇ　（ＯＨ）１は糖、シクロアルキルジオールまたはオルトフェニルジオー ルであり、そしてＧ′は置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、ス ルホネート、カルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケンまたは一環状 芳香族基を有していてもよく、モして担体たんばく質に結合していてもよい。
上記化合物の例には、下記の化合物がある：塩基＝ウラシル、５−フルオロウラ シル、シトシン、アデニン、グアニンまたはその類縁体 Ｒ＝Ｈ１ＰＯ，Ｈ。
糖オルトエステルハブテン２ 下記式をＴＴする化合物Ｃ４ｈは、ハブテンとして、またはプロトラッグとして ｆ１用である。
Ｇ′はジオールＧ　（ＯＨ）、の基てあり、Ｇ　（ＯＨ）ｔは糖、シクロアルキ ルジオールまたはオルトフェニルジオールてあり、そしてＧ′は置換基としてハ ロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アルキ ルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を存していてもよく、そして担 体たんばく質に結合していてもよく、 Ｒ”はＨ１非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネー ト、スルホネート、カルボキシレートまたはアルキルエステル、あるいはアルキ ルアミド、ヒドロキシル、アルキルアンモニウム、アミノ、アルケンまたは一環 状芳香族基を存する、アルキルであり、モして担体たんばく質に結合していても よい。
上記化合物の例には、下記の化合物かある：塩基＝ウラシル、５−フルオロウラ シル、シトシン、アデニン、グアニンまたはその類縁体 Ｒ＝Ｈ，ＰＯ２Ｈ。
糖オルトエステルハブテン３ 下記式をイｆする化合物Ｃ４ｉは、ハブテンとして、またはプロドラッグとして ずＴｍである 式中、Ｘ−は化合物Ｃ４ｆのＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんばく質に 結合していてもよく、 Ｑ′はＣＨ２てあり、そして Ｇ′はジオールＧ　（ＯＨ）２の基であり、Ｇ　（ＯＨ）、は糖、シクロアルキ ルジオールまたはオルトフェニルジオールであり、そしてＧ′は置換基としてハ ロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アルキ ルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を存していてもよく、そして担 体たんばく質に結合していてもよい。
上記化合物の例には、下記の化合物かある：塩基＝ウラシル、５−フルオロウラ シル、シトシン、アデニン、グアニンまたはその類縁体 Ｒ＝Ｈ，Ｐｏｔ　Ｈ。
糖オルトエステルハブテン４ 下記式を有する化合物Ｃ４は、ハブテンとして、またはプロドラッグとして官用 である： Ｇ″はジオールＧ　（ＯＨ）　２の基であり、Ｇ　（ＯＨ）２は糖、シクロアル キルジオールまたはオルトフェニルノオールであり、そしてＧ′は置換基として ハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アル キルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を存していてもよく、そして 担体たんばく質に結合していてもよい。
上記化合物の例には、下記の化合物があるニスまたはへキソフラノースは、グル コース、グルコサミン、Ｄ−キノボピラノー塩基＝ウラシル、５−フルオロウラ シル、シトシン、アデニン、グアニンまたはその類縁体 Ｒ＝Ｈ，ＰＯ，Ｈ。
グリコシダーゼ触媒作用 本発明に係わる新規化合物は、そのアノマー位置を経てヌクレオチド類縁体の３ ゛または５′酸素に共存結合しているモノサツカリドまたはへキソフラノースを 含む、抗新生物性ヌクレオノド類縁体（またはその池の抗新生物性薬物）のプロ トラッグである。これらのプロトラッグにおいては特に、当該ヘキソピラノース 、ノＪフ／ｒ−ス、ノＪフンｒ′７ζノ、Ｌ−ノーロアノース、し−フムノこフ ノース、Ｄ−グルコピラヌロン酸、Ｄ−ガラクトピラヌロン酸、Ｄ−マノビラヌ ロン酸またはＤ−ヨードビラヌロン酸からなる群から選ばれる。
抗新生物性ヌクレオシド類縁体のグリコジルプロドラッグに係わるハブテンは、 その結合しているヌクレオント酸素がＮＲ’により置き換えられており、かつま たそのフラノースまたはピラノース環酸素がＮＲ”により置き換えられている、 モノサツカリド　ヘキソピラノースまたはヘキソフラノースのアミジン類縁体か らなる。このようなハブテンには、グルコース、グルコサミン、Ｄ−キノボピラ ノース、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｌ−ガラクトビラヌロン酸、Ｄ−マノ ピラヌロン酸またはＤ−ヨードビラヌロン酸からなる群から選ばれる糖の構造類 縁体である、モノサツカリド　ヘキソピラノースまたはへキソフラノースのアミ ジン類縁体が包含される。
これらの化合物には、下記式で表される化合物が含まれる：Ｒ２およびＲ３は、 ＨまたはＯＨであるが、一つだけかＯＨであることができ、Ｘ、Ｘ’、Ｙ、Ｙ’ 、Ｚ、Ｚ’、ＲおよびＲ１は下記の表に定義されているとおりである。
本発明のβ−グリコジル化ヌクレオシドを、ヘキソピラノースおよびヌクレオシ ドから製造する、新規カップリング反応は、過アセチル化ヘキソースと５′ヒド ロキシヌクレオシドとを、ＴＭＳ　ｌ−リフレート、ＢＦＩ　Ｅｔ、Ｏなどのよ うなルイス酸の存在の下に、溶媒アセトニトリル中で直接反応させることからな る。
この方法は以下にあげる糖にも適用でき、相当するβ−グリコジル化ヌクレオシ ドか得られる。
このカップリング反応はまた、そのアノマー位置をＳＦｈ、Ｆまたはイミデート 基に変換し、次いで５′ヒドロキシヌクレオシドと反応させて、相当するグリコ ジル化ヌクレオシドを生成させることにより活性化することによって、達成する こともできる。
Ｘ、Ｘ’　、Ｙ、Ｙ’　、Ｚ、Ｚ’　、Ｒ，Ｒ’およびＡは下記の表に定義され ているとおりである。
グリコース　ＨＯＨＨＯＨＨＯＨＣＨ２０ＨＨグリコサミン　ＨＯ）（ＨＯＨＨ ＮＨ２Ｇ１２０Ｈ）（Ｄ−キノボビラノース　Ｈ０）ＩＨＯＨＨ０ＨＧｉ、　Ｈ ガラクトース　ＯＨＨＨＯＨＨＧ（０１２０ＨＨガラクトサミン　ＯＨＨＨＯＨ ＨＮＨＩ　Ｇ１２０ＨＨＬ−フコピラノース　ＯＨＨＨＯＨＨＯＨＣＨ３Ｈしラ ムノピラノース　）１　０ＨＨ０Ｈ）１　０ＨＣＨ，）ｌヘキスロン＊： Ｄグルコビラヌロン酸　ＨＯ）１　）１　０ＨＨ０ＨＣＯＯＨＨＤガラクトビラ ヌロン酸　ＯＨＨＨＯ！（Ｈ０ＨＣＤＯＨＨそれらのアノマー位置において、ヘ キソフラノースをヌクレオシド５′位置にカップリング反応させ、フラノシル化 ヌクレオシドを生成させる反応は、前記方法により達成することかできる。
式中、Ｒ”　＝ＨおよびＲ’　＝ＯＨ１またはＲ’　＝ＯＨおよびＲ”　＝Ｈヘ キソフラノースのヌクレオシド５′位置へのカップリングは、その環の大きさに よって、アノマー混合物をもたらす。
Ｄ、グリコシダーゼ反応によるプロドラッグ活性化１、その糖のアノマー位置を 経て、薬物ヒドロキシル基に共有結合しているヘキソピラノース ２、その糖のアノマー位置を経て、薬物ヒドロキシル基に共有結合しているヘキ ソフラノース グリコシダーゼ　プロドラッグ 本発明は、下記式を有する化合物Ｄｌａを包含するニ−Ｑ−Ｘ 式中、Ｘは薬物ＸＱＨの基である。有利には、ＸＱＨは細胞毒性薬物、例えばヌ クレオシド類縁体またはホスホラミド　マスタード［Ｉ（ＯＰ　（０）（ＮＨ， ’）Ｎ　（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ１）２　］　、メルフアランまたはドキソルビシンで ある。
Ｑは０またはＮＨてあり、そして ■は任意にアルファまたはベータ配置を存する、糖のアノマ一部分を経てＱＸに 共イｆ結合しているヘキソピラノースまたはへキソフラノースである。
を利には、■はグルコース、グルコサミン、Ｄ−キノボピラノース、ガラクトー ス、ガラクトサミン、Ｌ−フコピラノース、Ｌ−ラムノピラノース、Ｄ−グルコ ピラヌロン酸、Ｄ−ガラクトピラヌロン酸、Ｄ−マノピラヌロン酸またはＤ−ヨ ードビラヌロン酸である。
アミジンハブテン類は、免疫応答を誘発させて、触媒性抗体を生成する遷移状態 類縁体として製造される。アミジンハブテンは、グリコシド結合を加水分解する ことに係わり、遷移状態を擬装する。このハブテンは、ソファ／チェ子形状を存 するので、これらのハブテンに対して発現される抗体は、広く種々のモノサツカ リドヘキソピラノース類を　開裂させることかできる。
式中、Ｒ２＝ＨおよびＲ’　＝ＯＨまたはＲ”　＝ＯＨおよびＲ’　＝Ｈこのハ ブテンの合成は、相当するラクタムと相当する５′アミノヌクレオシドとを、溶 媒として塩化メチレン中で、トリエチルオキソニウムテトラフルオロボレートの 存在の下に、カップリング反応させることにより達成することができる。
そのグリコシド結合を開裂させて、薬物を遊離させる、ガラクトースまたはその 均等な糖に係わるハブテン（アミジンＴＳ類縁体）は、下記の式を有する二Ｒ＝ ヌクレオシド、糖、またはその均等な薬物グリコシダーゼ　ハブテンｌ 下記式を有する化合物Ｄｌｂは、ハブテンとして、およびまたプロドラッグとし て作用である： 式中、Ｍ′は化合物ＤｌａのＸの類縁体であり、そして担体たんばく質に結合し ていてもよく、 Ｑ゛はＮＨであり、そして Ｍ′はｎ−ペンタンの１．　４−ジラジカルであり、この基のＣｌＯ２、Ｃ３お よびＣ５はＯＨにより置換されていてもよく、そしてＭ′は担体たんばく質に結 合していてもよい。
グリコノダーゼ　ハブテン２ 下記式を有する化合物Ｄｌｃは、ハブテンとして、およびまたプロドラッグとし てを用である： 式中、Ｍ′はｎ−ペンタンの１．４−ジラジカルであり、この基のＣｌＯ２、Ｃ ３およびＣ５はＯＨにより置換されていてもよく、そしてＭ′は担体たんばく質 に結合していてもよい。
グリコツダーゼ　ハブテン３ 下記式を有する化合物Ｄｌｄは、ハブテンとして、およびまたプロドラッグとし て有用である： 式中、Ｘ゛は化合物ＤｌａのＸの類縁体であり、そして担体たんばく質に結合し ていてもよく、 Ｑ′はＣＨ，てあり、そして Ｍ′はｎ−ペンタンの１．　４−ジラジカルであり、この基のＣＩ、Ｃ２、Ｃ３ およびＣ５はＯＨにより置換されていてもよく、そしてＭ′は担体たんばく質に 結合していてもよい。
ヌクレオシド類縁体のプロトラッグ 多くの細胞毒性ヌクレオシド類縁体は、抗腫瘍薬剤として作用性を有するが、多 （の場合に、安全性が低い。これらの薬物の抗腫瘍有効用量は、一般に骨髄また は胃腸器官粘膜なとの正常組織に対する、それらの毒性に関連する重篤な副作用 を存することがある。
５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）は、種々の固形癌、例えば結腸直腸、頭部お よび頚部、肝臓、乳房およびすい臓の癌において、臨床活性を有する主要抗新生 物性薬物である。その投与量の大きさは、毒性により制限され、さらに高い濃度 か腫瘍細胞近くて得られたならば得られるであろう強力な効力を減少させている 。
その強力な細胞毒性を発揮するには、５−ＦＵは、ヌクレオチドのレベル（例え ばフルオロウリジン−またはフルオロデオキシウリジン−５′−ホスフェート） まで代謝されなけれはならない。これらのヌクレオチド（５−フルオロウリジン および５−フルオロ−２′−デオキシウリジン）に相当するヌクレオシド類はま た、活性抗新生物薬剤であり、いくつかのモデル系において、５−ＦＵよりも実 質的にさらに強力である。これは、これらの化合物が、５−ＦＵよりもヌクレオ チドに容易に変換されることによるものと見做される。
フルオロウリジンを腫瘍細胞に局在させて供給することに係わる、本発明の方法 は全身か薬剤にさらされることを最少にして、腫瘍部位に高濃度を提供するとい う利点を存する。腫瘍細胞により直ちには取り込まれない、フルオロウリジンの 迅速な異化作用により（これにより初期に、毒性の低い５−ＦＵが生成される） 、別の腫瘍選択度か得られる。
同様に、アラビノシルウラシル（Ａｒａ−Ｃ）は、白血病およびリンパ腫の処置 に広く使用されている。Ａｒａ−Ｃは、シチジンデアミナーゼにより急速に分解 され、不活性な代州物であるアラビノシルウラシルを生成する。Δｒａ−Ｃの治 療における使用はしばしば、骨髄抑制または胃腸器官粘膜損傷を導く副作用をも たらす。Ａｒａ−Ｃの目標を定めた、リンパ腫に対する供給は、副作用が最低に されるとともに、増大された治療効果をもたらす。
同様の理由および関係が、その他の抗新生物性ヌクレオシド類縁体に関しても現 実に存在し、このような類縁体には、これらに制限されないものとして、フルオ ロウラシルアラビノシド、メルカプトプリンリボシド、５−アザ−２′−デオキ ソシチジン、アラビノシル５−アザシトシン、６−アザウリジン、アザリビン、 ６−アザシチジン、トリフルオロメチル−２゛−デオキシウリジン、チミジン、 チオグアノシン、３−デアザウリジンが包含される。
本発明において、抗新生物性薬物のプロドラッグは、相当する置換基をアルドー ス環の５゛位置に結合させることにより製造される。この位置の置換は、薬物の 毒性を減少させる。これは、その毒性を示すためには、細胞毒性ヌクレオシド類 縁体は代表的には、ホスホリル化（これによりヌクレオチド類縁体が生成される ）されていなければならないことことによる。５゛位置における置換はまた、ヌ クレオシドー分解酵素ウリジンホスホリラーゼ（この酵素はウリジンおよびその 類縁体を分解させる）に対して、およびまたシチジンデアミナーゼ（この酵素は シチジンおよびその類縁体を分解させる）に対してヌクレオシド類縁体を　安定 にする。抗新生物性ヌクレオシド類縁体のアルドース環の３′位置が置換されて いるプロドラッグはまた、抗新生物性ヌクレオシド類縁体の目標を定めた供給に 作用である。
このようなヌクレオシド類縁体プロドラッグおよびハブテンの例を以下に示す４ ５−フルオロウリジン−５−−０−２，４，６−）リメチルベンゾエートに係わ ５−フルオロウリジン−５−−０−２，４，６−）リフトキシベンゾエート５− フルオロウリジン−５−−０−２，４，６−１−リメトキシベンゾエートに係５ −フルオロウリジン−５−−０−２，４，６−）リメトキシベンゾエートに係５ −フル士ロウリジン−５−−０−２，６−シメトキシベンゾエートに係わるホ５ −フルオロウリジン−５−−０−２，６−シメトキシベンゾエートに係わるス本 発明はまた、活性アルキル化剤を局限して供給し、生成させるための新規方法お よび化合物を提供する。
成る種のシクロホスファミド代謝物に結合している、本発明のプロドラッグ置換 基（例えば、４−ヒドロキシシクロホスファミドまたはアルドホスファミド）は 、細胞毒性生成物への、それらの酵素的およｒ（化学的分解を防止する。腫瘍選 択性作用剤に共有結合した相当するたんばく質触媒は、プロドラッグの投与前に 投与する。これによって、プロドラッグの投与後に、触媒か腫瘍付近に活性アル キル化剤を生成させる。
本発明は、シクロホスファミド関連プロドラッグを利用するものである。シクロ ホスファミドは、乳房、モ宮内膜および肺の癌の処置に、およびまた白血病およ びリンパ腫の処置に作用性を有するものとして、臨床的に広く使用されているア ルキル化剤である。例えば、シクロホスファミドは、不活性であり、肝臓におい て４−ヒドロキシシクロホスファミドに変換され、次いで細胞毒性代謝物にさら に分解される。従って、シクロホスファミドを投与した後に、このシクロホスフ ァミドの活性代謝物は肝臓から放出され、次いて循環系を介して全身に分散され 、例えは局所注射によるように、腫瘍細胞の領域て濃縮させることはできない。
このシクロホスファミドの細胞毒性代謝物は不安定であるか、または非常に毒性 であり、直接に投与することもてきない。シクロホスファミド処置の副作用には 、白血病、膀胱損傷、および脱毛か含まれる。
本発明は、その−態様において、触媒性抗体により活性化される細胞毒性シクロ ホスファミド代謝物の適当なプロドラッグを提供する方法および化合物を提供す る。
その他のアルキル化剤に関連する類似のプロドラッグおよびハブテンも本発明の 範囲内にある。その他のアルキル化剤には、アルキルスルフェート類、例えばブ サルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）　、アジリジン類、例えはベンゾデパ（ｂｅｎ ｚｏｄｅｐａ）またはメツラデパ（ｍｅｔｕｒａｄｅｐａ）　、ニトロソ尿素、 例えばカルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、およびナイトクジエンマスター ド類、例えばクロラムバシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉ　Ｉ）、メルフアラン（ ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）またはメクロ レサミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）か包含される。
アルドホスファミド　プロトラッグおよびハブテンの例を下記に挙げる：エノー ル型のアルドホスファミドの２．　４．　６−）リメトキシベンゾエートエスメ ルファランプロドラッグおよびハブテンの例を下記に挙げる：メルファランー２ −ヒドロキシエチル安息香酸アミドに係わるホスホネートハブ広く種々の抗新生 物性薬物のプロドラッグが、本発明のプロドラッグ置換基に共有結合させること によって製造される。本発明のエステルまたはグリコジル置換基は、ヒドロキシ ル基を存する薬物に適しており、アミド置換基はアミノ基（とくに−級アミノ基 ）を有する薬物に適しており、アセタール置換基はアルデヒド基を有する薬物に 適している。
ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｂｊｃｉｎ）およびエビルビシン（ｅｐｉｒｕｂ ｉｃｉｎ）と同様に、ドキソルビシンおよび関連アントラサイクリン抗新生物性 薬物は、本発明の方法を用いる目標を定めた供給に適する薬物である。この種類 のダウノサミン環上のアミノ基は、本発明のアミド置換基の−っと結合するため の良好な部位であり、そしてまたダウノサミン環上の、あるいはアゲリカン部分 のヒドロキシル基は本発明のエステル置換基の結合に適している。このような置 換は、アントラサイクリン類薬物の細胞毒性を減少させ、そしてまた適当する目 標が定められた触媒性たんばく質により、その細胞毒性か腫瘍部位に保存される 。
同様に、本発明の方法を使用する目標を定めた供給に適する、その他の抗新生物 性薬物には、これらに制限されないものとして、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏ ｔｒｅｘａｔｅ）またはトリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）なと のホレートアンタゴニスト類：エトボサイド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）またはテニ ボシド（ｔｅｎｊｐｏｓｉｄｅ）なとのホトフィリン化合物、ビンクリスチン（ ｖｉロｃｒｉｓｔｉロｅ）またはビンデシン（ｖｊ口ｄｅＳ　ｉ口ｅ）なとのニ チニチ草属アルカロイド類、タキソール（ｔａｘｏｌ）などのタブリンモデイ’ ７フイアー（ｔｕｂｕｌｉｎ　ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ）、ダウノルビシン（ｄａｃ ｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）などの抗生物質、およびプレオマイシン類（ｂｌｅｏｍｙ ｃｉｎｓ）が包含される。さらにまた、正常組織に対する過度の毒性から、それ ら自体はインビボて抗新生物性薬物として有用ではない細胞毒性薬物も、本発明 の方法およびプロドラッグ置換を使用して、目標を定めた抗新生物性薬物として 使用することができる。
ドキソルビシン　プロドラッグおよびノ１ブテンの例を下記に挙げる：プロドラ ッグ活性化およびプロドラッグの目標設定に係わる触媒性たんばく質プロドラッ グ活性化触媒性たんばく質 適当なプロドラッグの開発に加えて、この治療戦略では、これらのプロドラッグ の活性化（すなわち当該プロドラッグからの薬物の分離速度を増強する）のため の適当な触媒性たんばく質を選択しなければならない。
ａ、プロドラッグ活性化酵素 相当する触媒活性を存する酵素が存在する場合には、酵素またはその断片を、本 発明の新規プロドラッグとともに使用することができる。本発明に従い使用でき る酵素およびその触媒活性体は、グリコシダーゼ、ペプチダーゼ、リパーゼ（ま たはその池のヒドロラーゼ）、オキシド−レダクターゼ、トランスフェラーゼ、 イソメラーゼ、リアーゼまたはりガーゼから選択される。
本発明の新規プロドラッグとともに使用される酵素の例を以下に示す：Ａ、エス テラーゼ：エステル化アシアシル置換基物に開裂する：カルボキシルエステラー ゼ（Ｅ、　Ｃ，３，１，１，ｌ）アリールエステラーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，１，１ ，２）トリアジルグリセロール（Ｅ、Ｃ，３，１，１，３）アセチルエステラー ゼ（Ｅ、　Ｃ，３，１，１，６）ガラクトシダーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，１，１，２ ６）セファロスポリン−〇デアセチラーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，１，１，４１）　６ −０−アセチルグルコースデアセチラーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，１，１，３３）リパ ーゼＢ、アミダーゼ、結合しているアシル置換基をアミノ基に開裂する：ペプチ ダーゼ（エンドペプチダーゼおよびエキソペプチダーゼ）β−ラクタマーゼ（ク ラスＡ、ＢおよびＣ）およびペニンリンアミダーゼアセチルオルニチンデアセチ ラーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，５，１，１６）アシルーリリジンデアシラーゼ（Ｅ、Ｃ ，３，５，１，＋７）Ｃアセチルエステラーゼ・アセタールをアルデヒドに加水 分解する：アルケニルーグリセロホスホコリンヒドロラーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，３ ，２，２＞セルラー七（Ｅ、　Ｃ，３，３，１，４）オリゴ−１，６−グルコシ ダーゼ（Ｅ、Ｃ，３，２，１，１０）シンザイム（Ｅ、Ｃ，３，２，１，１７） β−Ｄ−グルクロニダーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，２，１，３１）Ｄ、グリコシダーゼ 、エーテル架橋により薬物に結合している糖置換基を開裂する・ この例には、ベーターガラクトシダーゼ、ベーターグルコシダーゼ、イヌラーゼ 、アルファーＬ−アラビノフラノンダーゼ、アガラーゼ、およびイソメラーゼか 包含され、特別の例には下記のものか挙げられる：β−Ｄ−グルコシダーゼ（Ｅ 、　Ｃ，３，２，１，２１）α−Ｄ−ゲルコツダーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，２，１， ２０）β−Ｄ−ガラクトシダーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，２，１，２２）α−Ｄ−ガラ クトンダーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，２，１，２３）β−Ｄ−フルクトフラノソダーセ （Ｅ、Ｃ，３，２，１，２６）α、α−トレハラーゼ（Ｅ、Ｃ，３，２，１，２ ８）α−Ｌ−フコソダーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，２，１，５１）グリコノルセラミダ ーゼ（Ｅ、Ｃ，３，２，１，６２）リアーゼは、ハブテンとしても作用するプロ ドラッグとともに使用することができる。
第１の目標は、薬物にさらされる血清またはその池の身体内の器官に常態では存 在しておらず、本発明に係わるプロドラッグを活性化でき、かつまた正常に存在 する生理学的成分または巨大分子に重大なｔｉ傷を与えない、酵素活性を選択し なけれはならないことにある。本発明に係わるプロドラッグとともに使用する酵 素は、以下で触媒性抗体に係わり説明するように、選別技術を使用して選択する 本発明に使用される触媒性抗体またはその断片は、公知のものであり（前記の発 明の背景の記載の触媒性抗体に係わる記載参照）また触媒性抗体の製造に係わり 当業者に知られている技術を用いて本明細書に記載の新規ｌ＼ブテンを使用して 得られるものである（前記の本発明の新規プロドラッグおよびハプテンと題する 項の記載参照）。この点に関しては、米国特許４９６３３５５．４８８８２８１ および４７９２４４６を参照てき、これらの特許を引用してここに組み入れる。
目標設定剤（ｔａｒｇｅｔ　ｒｅａｇｅｎｔｓ）本発明の化合物を、目標を定め て、活性化する目標設定性化合物には、特定の細胞集団の部位またはその近くて 選択的に結合もしくは濃縮する作用剤、例えば腫瘍付随抗原に対して特異的に結 合する抗体もしくはその池の化合物か含まれる（その他の例には、ホルモン類、 成長因子、基質、または酵素の類縁体などが含まれる）。このような抗体の例と しては、これらに制限されないものとして、癌腫、メラノーマ、リンパ腫および 骨および軟質組織の肉腫ならびにその他の腫瘍に見出だされる抗原に対して特異 的に結合する抗体が含まれる。延長された期間にわたり細胞表面に結合してとど まるか、または非常にゆっくりと内部に取り込まれる抗体は特に有利である。こ れらの抗体はポリクローナルであり、または有利には、モノクローナルであり、 完全抗体分子または当該抗体の活性結合領域を含存する断片である。
本発明に係わる系は、処置を要する全てのホスト目標部位に薬物を供給し、この 部位に１種または２種以上の目標を設定することのできる成分、例えば当該部位 に対して実質的に特異性であり、かつまた当該免疫結合体を認識し、ここに結合 するエピトープを提供するために使用される。特別の目標部位には、例えば腫瘍 、バクテリア類、カビ類、またはウィルス類により誘発される病的状態から、あ るいは正常ホスト系の機能不全、例えば血栓形成のような心臓血管系疾患、炎症 性疾患および中枢神経系の疾患から生しるホスト領域が包含される。
目標を定めることかできる作用剤、酵素または触媒性抗体の誘発に必須である、 遺伝子クローニングおよびエンジニアリング法の使用は革命的である。これは免 疫学に起こった進歩に代表される。
ａ、腫瘍細胞に結合する抗体 有利には、腫瘍細胞に高い比率で発現される抗原に結合し、かつまた腫瘍から流 出しない抗体か本発明で使用される。これらの前提条件は、放射性物質で標識し たモノクローナル抗体を使用する腫瘍造影および処置の関連技術で使用されてい るものと同一である。
１２５Ｉ、　＋３１１．　Ｉｌｌ　ｌ　ｎ、”ｒｎＴｃ、　”＠Ｒｅ、　ＩＯＹ を包含する種々の放射性物質で標識した、多数のモノクローナル抗体が、腫瘍の 造影（こ使用されて０る。
この研究は、種々の腫瘍を放射−免疫シンチグラフイ技術により成功裏（こ可視 イしできることを証明した。目標設定に成功している腫瘍の型を下記の表に示す 。例として挙げられている抗原に対する抗体は本発明−係わるプロドラ・ソゲの 目標設定に有用である。
腫瘍の種類　ＪｊＬ　−抗原　！１カ監０塾２ｍ））。
腫瘍の種類　組織　−３！！Ｌ　克！＆帆ＨＩ７Ｅ２　胎盤アルカリホスファ ターゼ　φｍ） いくつかの場合に、抗体のサブフラグメント、例えば　Ｆ（ａｂ−）２は、腫瘍 部位で実際の抗原濃度が低いことか証明されている場合の腫瘍造影を特異的に強 化する（Ｗｏｒｌｏｃｋ、　Ａ、等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　５０　 （１９９０）　７２４６−７２５１　：　Ｇｅｒｒｅｔｓ■氏B Ｍ９等、Ｂｒ１ｔｉｓｈ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　６３　（１９ ９１）　３７−４４）。腫瘍から流出する抗原の血清濃度か顕著である患者にお いてさえも、充分の造影が可能である（ＣＥＡ。
Ｂｏｅｃｋｍａｎｎ、　Ｗ等、Ｂｒ１ｔｉｓｈ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｎ ｃｅｒ　、　６２　（１９９０）　８ｌ−８４）。
ｂ、その他の目標設定性（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）たんばく質抗体の使用に加えて 、種々の結合成分が、触媒性たんばく質（すなわち酵素または触媒性抗体）を作 用部位に結合させるために有用である。成長因子はトキシン分子の供給に使用さ れている（Ｓｉｅｇａｌｌ、等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ 、　ＵＳＡ　８５（１９８５）　９７３８−９７４２　：　Ｃｈａｕｄｈａｒｙ 等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４　（１９８V ）　４５３ ８−４５４２　；　ＫｏｎｄｏＪ、等、Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、　２６３　（ １９８８）　９４７０−９４７５）。成長因子インターロイキン６、インターロ イキン２、形質転換成長因子アルファ、およびその池を使用する類縁体融合体の 発現が、上記参考文献に記載の方法を用いて、リンキング酵素またはアブザイム （ａｂｚｙｍｅｓ）によってなされている。これらを触媒性抗体中に組み入れる には、抗体一本鎖遺伝子構築物の末端に、これらの成長因子を融合させる方法が とられる（特許出願ＷＯ８８１０ｌ　６４９）。あるいはまた、別法として、こ れらの成長因子は、このような遺伝子構築物の前部末端に融合させる方法か採用 される（当該たんばく質のアミノ末端または　遺伝子の５′末端で融合させる） 。特許出願Ｅ　ＰＡ　Ｏ１９４２７６（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ）に記載の構築物の 使用はまた、触媒性抗体活性と成長因子の結合性とを組み合わせるのに有用であ る。
ヒトＣＤ４−プソイドモナス外毒素融合体の使用は、ＨＩＶ感染細胞の殺滅に作 動であることか証明されている。このような酵素または触媒性抗体に結合したＣ Ｄ４からの結合活性を使用すると、ＡＩＤＳの処置に対するプロドラッグ治療の 使用か可能になる。ＣＤ４は、ＨＩＶＩ感染細胞で表現されるｇｐ１２０に結合 する。このような構築物の逆の構築物は、免疫抑制剤の開発に係わり、ｇｐ１２ ０（または触媒性抗体）融合を使用してなされている（Ｍｏｏｒｅ等、５ｃｉｅ ｎｃｅ、　２５０　（１９９０）　１１３９）。本発明で使用できるその他の結 合剤には、インテグリン（ｉｎｔｅｇｒｊｎ）の−族、例えばＬＡＦ−１［これ は免疫系の調節に使用することができる（Ｉｎｇｈｉｒａｍｌ等、５ｃｉｅｎｃ ｅ、　２５０（１９９０）６８２）　］および選択−族、例えばＥＬＡＭ［これ は腫瘍および免疫細胞の目標設定に使用することができる（Ｗａｌｚ等、５ｃｉ ｅｎｃｅ、　２５０　（１９９０）　１１３２）　］を使用することができる。
抗体はまた、自己免疫疾患を処置するために、ある種の血液細胞に対する本発明 のプロドラッグの目標設定に使用することもてきる。さらにまた、ホルモンを過 剰生産する細胞に目標を定めることもできる。
本発明の酵素は、公知技術により、例えばヘテロ三官能性交差結合剤５ＰＤＰ［ Ｎ−スクシンイミジル−３（２−ピリジルジチオ）プロプリオネート］またはＳ ＭＣＣ［スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１− カルボキシレート］などを使用して、本発明の目標設定性たんばく質に共存結合 させることができるし例えば、Ｔｈｏｒｐｅ、　Ｐ、　Ｅ、等、”Ｔｈｅ　Ｐｒ ｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄＣｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ 　Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ、”、　Ｉｎ＋ｕｎｏ ｌｏｇｉモ≠戟@Ｒｅｓ、。
６２　（１９８２）　１１９−５８　；　Ｌａｍｂｅｒｔ、　Ｊ、等、同書、１ ２０３８頁；　Ｒｏｗｌａｎｄ、　Ｇ、　Ｐ、等、同書、１８３−８４頁：およ びＧａｌｌｅｇｏ、　Ｊ、等、同書、７３７−３８頁参照］。
５０組み換えＤＮＡによる二重特異性抗体の産生本発明の酵素または触媒性抗体 の少なくとも官能的に活性な部分に結合している本発明の目標設定性たんばく質 の少なくとも抗原結合領域からなる融合たんばく質は、当業者に公知の組み換え ＤＮＡ技術を使用して構築することができる［例えＩｔ’Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ等 、Ｎａｔｕｒｅ、　３１２　（１９８４）　６０４−６０８参照］。これらの融 合たんばく質は実質的に、本明細書に記載の抗体−酵素結合体と同様な挙動で作 用する。
組み換えＤＮＡ技術は、哺乳動物における抗体遺伝子の発現に使用されている（ Ｏｉ、　Ｖ、　Ｔ、等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳ Ａ　８０　（１９８３）８２５−８２９　；　Ｎｅｕｂｅ窒■■秩B Ｍ、Ｓ、、即明２　（＋９８３）　＋３７３−１３７８）。生物学的活性免疫グ ロブリンたんばく質（ヒトＩｇＥ　Ｆｃフラグメント）のＥ、ｃｏｌｉからの引 き続く発現および回収は証明されており（Ｋｅｎｔｅｎ、　Ｊ、　Ｈ，等、Ｐｒ ｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８１　（＋９８４）２９ ５５−２９６０）、そして完全活性抗体の発現および回収も証明されている（Ｂ ｏｓｓ、　Ｍ、　Ａ。
等、Ｎｅｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、　＋２　（＋９８４）　３７９１− ３７９９）、この技術に引き続いて、他のグループはＥ、ｃｏｌｉにおける免疫 グロブリン結合およびエフェクター機能活性の両方の発現に係わる必須の一般性 を証明している（Ｃａｂｉｌｌｙ、　ｓ、等、Ｐｒｏｃ。
Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８１　（１９８４）　３２７３− ３２７７　；　５ｋｅｒｒａ、　Ａ、等、５ｃｉｅｎｃｅ、@２４０ （＋９８８）　１０３８−１０４０　：　Ｂｅｔｔｅｒ、　Ｍ、等、５ｃｉｅｎ ｃｅ、　２４０　（１９８８）　１０４１−１０４３）。こ黷■ の技術および能力はまた、多くのその他の遺伝子の操作に適用されている。
プロドラッグの目標設定剤の例を以下に示す。これらの大部分は、前記したよう に、遺伝子のクローン形成、操作および発現の能力に依存する。
前記に低連した遺伝子操作抗体を使用すると、その充分の同定に慣用な方法お、 よび種々のプロトラッグの効力の迅速な分析を可能にする再現できる作用剤が提 供される。これらの抗体エンジニアリング方法は、ヨーロッパ特許出願ＥＰＡＯ １９４２７６（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ）に具体的に記載されており、この特許出願 の方法では、Ｈ鎖遺伝子をＣＨｔおよびＯＨヨ　ドメインの分離により切除し、 次いで種々の遺伝子を付加する方法である。これらの基本操作の後に、必要な酵 素活性の導入が行われる。最適レベルの酵素活性を得るためには、抗体と酵素と の間の配列操作が必要であることもある。この最適化には、リンカ−配列の添加 および（または）融合部位の変更が必要であることもある。さらにまた、特定の 酵素−抗体作用剤の利点に加えて、ＩｇＥおよびＩｇＭ　Ｈ鎖の場合に、そのＣ Ｈｔ　、ＣＨｓおよびＣＨ４の分離により可能なサイズを減少させることもでき る。
二重特異性である抗体の発現は、当技術で周知である（Ｓｈａｗｌｅｒ等、［圓 ｎｏ１．１３５　（１９８５）　１５３０−１５３５　；　Ｋｕｒｏｋａｗａ、 　Ｔ等、Ｂｉｏｌ、／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　７（１９８９）１１６３|１１６ ７）。
このような二重特異性抗体の例には、腫瘍治療用の金属キレートにまた結合する 腫瘍特異性抗体があり、およびまた腫瘍細胞およびＴ細胞に結合する二重特異性 抗体がある（Ｊｏｎｓｏｎ、Ｍ、　Ｊ、等、特許出願ＥＰ３６９５６６Ａ、　１ ９９０　；およ九山ｉ　１ａｎｄ、　Ｌ。
Ｋ９等、特許出願ＧＢ２１９７３２３．１９８６）。二重特異性抗体の発現方法 は、抗体鎖の分離および組み換えに係わる化学的方法または２つのハイブリドー マの融合による、いわゆるクアドローマの発現による化学的方法からなる。これ らの方法は有効であり、混合種の発現および所望のプロドラッグの単離に必要な 精製に有効であることが証明された。
小型の結合成分の発現は、抗体エンジニアリングでゴールにかなり達している。
これにより、一本領抗体か開発され、２本の抗体鎖の有効（Ｖ）領域が、リンカ −配列を用いて１個の分子中に組み入れられる（特許出願ＷＯ３８１０１６４９ 、ＬａｄｎｅｒおよびＢｉｒｄ）。このＶ領域の組み合わせは、そのＶ領域の− っがアミノ末端を有しており、そしてもう一つのＶ領域かそのＣ０ＯＨ末端でリ ンカ−を介してそのアミノ末端に結合している、たんばく質の発現をもたらす。
この頭−尾架橋、■　領域の頭−尾架橋は、ＶＬ鎖−ＶＨ鎖およびＶＬ鎖−ＶＨ 鎖の両方の発現に関して開示されている。これらの系の用途は、別のたんばく質 の一本鎖抗体への付加とともに開発されている（Ｖｉ　ｊｉａｙ等、Ｎａｔｕｒ ｅ　３３９　（１９８９）　３９４−３９７）。
別のたんばく質の一本鎖抗体への付加に係わる、このホーマットは、これらの構 築物に影響をおよぼす所望の酵素を用いる同様の分子の製造に使用される。この 結果として、理想的には治療に適する小型分子の形態で、抗体結合活性および酵 素活性という所望の性質を存する分子か製造される。
２種の抗体活性を一本鎖またはその均等小型分子の形態で、二重特異性抗体の製 造に使用するための方法を、当業者に周知の方法を使用して以下に低連する。
この構築物は、ＶＬ鎖領領域ＶＬ）に結合しているＶＨ鎖領領域ＶＨ）からなり 、一本領抗体に係わり開示されているリンカ−を介して腫瘍細胞または抗原に係 わり特異性である（Ｖｉ　ｊａｙ、等、Ｎａｔｕｒｅ　３３９　（１９８９）　 ３９４−３９７　：特許出願ＷＯ３８１０Ｉ　６４９、ＬａｄｎｅｒおよびＢｉ ｒｄ）。これらの配列を触媒性抗体ＶＬに直接結合させ、次いでこれをリンカ− 配列を介してそのＶＨプライマーに結合させる。
このＶ領域組み合わせは、次の配列を有することができる：ＶＬ−ＶＨ−ＶＨ− ＶＬまたは　ＶＬ−ＶＨ−ＶＬ−ＶＨ＊たＩ！ＶＨ−ＶＬ−ＶＨ−ＶＬｏ　、： れう０）構築物に使用される、リンカ−配列は一本鎖抗体構築に係わり前記した ものである。この組み合わせは、従来未知の一本鎖二重特異性抗体の発現を可能 にする。
このような分子は、別の方法では遭遇する精製および確認に係わる問題を伴うこ となく、このような二重特異活性を大量に得ることを可能にする。この分子はま た、このような製剤に望ましい小さい分子量を有する。類似の構築物に基づくも う一種の構築物は、以下に示すような未知の分子である。この分子では、その腫 瘍または抗原に対して特異性のＶＨ領領域触媒性抗体のＶＬ領領域直接に結合し ている。この分子は有利には、腫瘍または抗原に対して特異性のＶＬの別種の構 築物と一緒に、あるいは別個に、発現される。これらの２種の分子の発現生成物 は一緒になって、または後続の発現混合（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｍｉｘｉｎｇ ）によって、二重特異性抗体の形成をもたらす。その他のＶ領域の組み合わせは また、類似の分子を導く。この種の分子は、低分子量を存することから、前記の 分子よりも好ましい。
１つだけのドメインに対して結合性のたんばく質を使用することはまた、酵素ま たは触媒性抗体への直接融合の形態での探索に有用である（特許出願ＷＯ９０１ ０５１４４、Ｗｉｎｔｅｒ）。
抗体の人体に対する適応 抗体およびその他の作用剤を人体に施用すると、免疫応答の減少が生じる。これ らの作用剤の抗原原性はマウス抗体に対する有意の抗体応答を備えた患者により 無効にされるという問題か、初期のマウス抗体処置において存在していた（特Ｌ ｏＢｕｇｌｉｏ、　Ａ、　Ｆ、等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃ ｉ、　ＵＳＡ　８６　（１９８９）　４２２０−４２２４j、こ の免疫応答は、抗体の恒常領域に付随するばかりでなく、また強力な抗イデイオ タイプ応答に対して生じる有用なドメイン領域にも付随する（Ｂｒｕｇｇｅｍａ ｎ口１Ｍ１等、Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１７０　（１９８９）　２１５３− ２１５７　；　Ｓｈａｗｌｅｒ、　Ｄ、　Ｌ、等、Ｉａｎｕｎｏｌ、　＋３T（ １９８５） ＋５３０−１５３５）。
治療上で有用なたんばく質の発現に係わる人体適用価値は、Ｖ−領域フレームワ ークの置き換えによる、マウス抗体の人体適用により証明されている。この人体 適用方法は、全く充分に決定されている抗原結合性ループを存する結合部位の基 本構造を使用するものである（Ｋａｂａｔ、　Ｅ、　Ａ、等、　Ｕ、　Ｓ、　Ｄ ｅｐｔ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄＨｕｍａｎ　５ｅｒｖｉｃｅｓ、　Ｕ、　 Ｓ、　Ｇｏｖｅｒｍｅｎｔ　Ｐｒｉｎｔｉｎｇ　０ｆｆｉｃｅ、　１９８７）。
元の抗体からのループを保存しながら、そのフレームワークをヒト配列により置 き換えると、その抗原結合はマウスからヒト構造体に効果的に移される（Ｒｉｅ ｃｈｍａ朋ル８等、Ｎａｔｕｒｅ３３２　（１９８８）　３２３−３２７　：　 Ｊｏｎｅｓ、　Ｐ、Ｔ、等、Ｎａｔｕｒｅ　３２１（１９８６）５２２−５２４ 　；　Ｖｅｒ■盾■凾■氏B Ｍ８等、５ｃｉｅｎｃｅ　２３９　（１９８８）　＋５３４−１５３６　；　Ｑ ｕｅｅｎ、　Ｃ，等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、@Ｓｃｉ。
ＵＳＡ　８６　（＋９８９）　１００２９−１００３３）。この人体適用技術に 係わり、ある種の仮定がなされている：Ａ）超可受部の結合に対する関与：Ｂ） フレームワーク構造の保存；およびＣ）ループはいづれも類似の方法でフレーム ワークと相互反応すること。
基本的分子モデル形成を使用すると、人体適用が成功する程度にまで最適に改良 することがてきる（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ、　Ｌ、等、Ｎａｔｕｒｅ　３３２　（ １９８８）　３２３−３２７　）。
人体適用を目的とするこれらの方法を、酵素活性に適用することができる。その 構造分析を用いると、ヒトたんばく質と同様の構造を有する酵素力現出だされる 場合に、その抗原原性を隠すために、相同の外側ループの移植力河能である。
抗原原性の問題はまた、共有結合修飾の使用により、すなわちたんばく質の表面 のポリエチレングリコール修飾により解消できる。
抗体発現ヘクター 免疫グロブリンのＰＣＲクローニングの適用に係わる最近の進歩は、ラムダ・フ ァージを用いる（Ｈｕｓｅ、　Ｗ、　Ｄ、等、５ｃｉｅｎｃｅ　２４６　（１９ ８９）　１２７５−１２８１）および線状ｆｄファージを用いる（Ｃｌａｒｋｓ ｏｎ、　Ｔ、等、Ｎａｔｕｒｅ　３５２　（１９９１）　６２４−６２８）Ｅ、 ｃｏｌｉにおける抗体発現ライブラリーの生成を可能にした。ラムダファージに 基づく系は、Ｆａｂを分泌するファージプラークの　ライブラリーを発現し、こ のＦａｂは次いで放射性物質標識したハブテンを用いるフィルター結合検定法に より選別することができる（Ｃａｔｏｎ、　Ａ、Ｊ、等、ＰＮＡＳ、　ＵＳＡ　 ８７（１９９０）６３５０−６４５４）。
所望の結合活性を存するプラークの単離には格別に有用であるけれども、抗体媒 介触媒活性を単離しようとする場合には、クローンはそれぞれ、個別に選別され なければならない。特許出願Ｗ０９２１０１０４７には、−重鎖ＦＶ抗体発現用 ファージｆｄ系が開示されており、この特許で引用されている刊行物には、ファ ージ遺伝子Ｉｌｌたんばく質に融合された抗体ＦＶを担持するファージ粒子の製 造が開示されている。この系は、抗原またはハブテンに結合する抗体を使用する ことによって、このファージ粒子上に発現される特異的抗体をコードする遺伝子 およびファージの直接選択を可能にする。この方法を使用して、組み合わせライ ブラリーから、微量抗体（ｒａｒｅ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）が単離されている （Ｍａｒｋｓ、　Ｊ、　Ｄ、等、Ｊ、　Ｍｏ１．　Ｂｉｏｌ、　２２２　（１９ ９１）　５８１−５９７）。
従来開示されているものではないが、別の方法では、抗体発現ライブラリーの製 造に係わるラムダファージを基材とする系とは異なり、プラスミドを基材とする 系か使用される。この系では、分離している　転写単位としてＶＨ遺伝子および ＶＬ遺伝子を有するというよりはむしろ、これらは短鎖ペプチドにより共有結合 されていて、Ｂｉｒｄ、Ｅ、等により５ｃｉｅｎｃｅ２４２　（１９８８）４２ ３−４２６に定義されているような一本鎖抗体が形成される。相当するＰＣＲプ ライマーを使用すると、従来開示されている一工程ＰＣＲ法（プレスで、Ｄａｖ ｉｓ。
Ｇ、　Ｔ、等、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　（１９９１）により、実質的に ランダムなＶＨとＶＬとの組み合わせからなる組み合わせ一本鎖抗体ライブラリ ーが発現される。この一本ＩＰｃＲ生成物を、Ｐｔａｃのような誘発てきるプロ モーターを含有する適当なＥ、　ｃｏｌ　ｉ発現ベクター中にクローニングする 。ｐｅ　ＴＢのような単記列を、このクローニングした一本鎖の５゛に付加して 、発現された抗体たんばく質を分泌させる（Ｂｅｒｊｅｒ、　Ｍ、等、５ｃｉｅ ｎｃｅ　２４０　（１９８Ｂ）　＋０４１−１０４３）　、　Ｅ、ｃｏｌｉが溶 解されるラムダファージ発現系とは異なり、この開示されたプラスミドを基材と する発現系は、直接選択を用いる触媒性抗体に関わるＥ、ｃｏｌｉライブラリー の直接選別を可能にする。一つの可能な選択方法に関するベーターラクタムまた はベーターラクタム誘導体の不活性化を、［触媒性抗体の選択」の項に記載する 。その他の可能な選択方法には、Ｅ、ｃｏｌｉの増殖に必須の栄養物質、ビタミ ン類または補因子の抗体触媒作用による放出が包含される。チミジンを要求する 栄養要求株を使用する、このような選択方法の一つを本明細書のヌクレオシド類 縁体プロドラッグの触媒性活性化に係わる選別の項で説明する。
望ましい結合または触媒活性により抗体を発現する、Ｅ、ｃｏｌｉクローンから のＶＨおよびＶＬドメインは、変異させて抗体機能を変更または増強することが できる。この変異誘発に目標が定められている特異性ＣＤＲアミノ酸残基（１個 または２個以上）は、抗体活性部位の分子モデル形成により同定することができ る。
変異誘発は、変異誘発性オリゴヌクレオチドを使用する、従来開示されている種 々の部位特定変異誘発法の一つによって達成される（Ｍａｎｉａｔｉｓ、Ｔ、等 、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ　：　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎ ｕａｌ、　（１９８９）　１５．５１−１５．６５．　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　：　 Ｃ盾Pｄ　Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　）。
選択的変異誘発が所望の結果を生じさせることができない場合には、活性部位の さらに過度の変更を行う。一つの有用な方法は、一連のまたは部分的に一連の、 ランダムアミノ酸により１個、２個、３個または数個のＣＤＲ５を置き換える方 法である。このランダム変異誘発方法は、ベーターラクタマーゼ酵素の活性の変 更に使用され、成功している（Ｄｕｂｅ、　Ｄ、　Ｋ、等、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ ｔｒｙ　２８　（１９８９）　５７０３−５７０７　：　０１ｉｐｈａｎｔ、　 Ａ、　Ｒ，等、ＰＮＡＳ、　ＵＳＡ　８６　（１９８９）　９０９４−９０９８ ）。この開示されている方法は、活性部位の一部をコートするＤＮＡ配列をラン ダムオリゴヌクレオチドにより置き換えることによって、酵素活性部位中にラン ダムアミノ酸を挿入することを包含する。
抗体ＣＤＲ領域のランダム変異誘発は、多くの異なる方法のいづれによっても達 成される。抗フルオレセイン　モノクローナル抗体のＣＤＲＩＶＨをランダム変 異誘発させるために使用される方法（Ｍａｂ　４−４−２０．　Ｂｅｄｚｙｋ、 　Ｗ、Ｄ、等、ＪＲＣ２６４（１９８９）　１５６５−１５６９）の−例を以下 に詳細に説明する。
１　以下に示されている順序の配列を有するオリゴヌクレオチドを自動式ＤＮＡ 合成装置で合成する。成るヌクレオチド上の数字は、Ｂｅｄｚｙｋ等（１９８９ ）により指定されたとおりに、４−４−２０内のアミノ酸位置に相当する。
ｒａｔｃＴａｒｒＧＣＣＴＣ％’ＧＧＡｒｒｃ山ｍ４４４０％。
上記配列（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：Ｉ）において、ＶＨＣＤＲＩ　（アミノ酸３ｌ −３４）がランダムヌクレオチドトリブレットにより置き換えられる。ここでＮ はＡ、Ｃ，ＧまたはＴ（等モル）であり、モしてＫはＧまたはＴ（等モル）であ る。各トリブレットの３番目の位置でＡまたはＣを除くと、Ｃｗｉｒｌａ、　Ｓ 、　Ｅ、等によりＰＮＡＳ　ＵＳＡ　８７　（＋９９０）　６３７８−６３８２ に報告されているように、基本的終結コドンの数が３分の２に減少される。
２、第二のオリゴヌクレオチドを合成する。このオリゴヌクレオチドは工程ｌか らのオリゴヌクレオチドの３゛末端で、最後の２０塩基対に対して相補性である 。
Ｔ４キナーゼによるホスホリル化の後に、オリゴヌクレオチドをアニーリングし 、次いてデオキシヌクレオチドおよびフレノウフラグメントを含有するプライマ ー・エクステンンヨン反応に加える。生成する完全な長さの二重鎖ランダムオリ ゴヌクレオチドを、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または逆相ＨＰＬＣにより 精製する。
３、工程２からの二重鎖ランダムオリゴヌクレオチドは、Ｃ１ａｃｋｓｏｎ、　 Ｔ、等によるＮＡＲ１７（＋９８９）　１０１６３−１０１７０に記載されてい る「付着脚」　（“５ｔｉｃｋｙ　ｆｏｏｔ”）変異誘発方法で、「付着脚」プ ライマーとして作用することかできる。この方法は、鋳型績に存在する野生型Ｖ ＨＣＤＲＩか、工程ｌに記載のランダムオリゴヌクレオチドにより特定されてい るランダムＣＤＲＩ配列により置き換えられる結果をもたらす。
４　付着脚変異誘発の後の、工程３からのＤＮＡをＥ、ｃｏｌｉの形質転換に使 用し、ＶＨＣＤＲＩかランダム配列により置き換えられている抗体ライブラリー を得る。
５、生成するライブラリーは、本明細書の前記部分に記載されている、相当する ハブテンとの結合試験または選別試験により選別することかできる。
ＶＨまたはＶＬの追加のＣＤＲ領域は、同様の方法によりランダム変異させるこ とができる。さらに、ＶＨまたはＶＬ鎖内の１個、２個または３個全部のＣＤＲ 領域を同時に変異させることもできる。自動式合成装置で合成できるオリゴヌク レオチドの長さにおける制限に応じて、上記工程ｌに記載のとおりにして、３つ のＣＤＲ領域のそれぞれに相当する３つの別個のランダムオリゴヌクレオチドを 製造することができる。オリゴヌクレオチドの製造中に、ＣＤＨのそれぞれの側 面に位置するフレームワーク領域内の相当する位置に、制限部位を挿入する。
上記工程２の二重鎖ＤＮＡへの変換の後に、各オリゴヌクレオチドを、適当な制 限酵素により消化し、これらのオリゴヌクレオチドを一緒にリゲートして、完全 ＶＨまたはＶＬを生成させる。この最終りゲート生成物を次いで、上記工程３の 「付着脚」プライマーとして使用する。上記方法への別のアプローチには、変異 させるＣＤＲＶＨまたはＶＬの各側のフレームワーク領域中に、制限酵素をエン ジニアリングする方法がある。上記工程ｌにおけるようなランダムオリゴヌクレ オチドの合成中に、適合する制限部位を、フレームワーク　フランキング領域に 付加する。制限部位は、野生型コード配列が、このフレームワーク領域内に最良 に保存されるように選択する。この野生型ＣＤＲ領域を次いで、適当な制限酵素 による消化によって、分離し、次いで適合する制限酵素により消化されている二 重鎖ランダムオリゴヌクレオチドにより置き換える。
線状ファージにおける変異および選択を使用する新しい結合活性の選択選択条件 下に増殖に関して選択することによる、変異抗体の選択は、開示されている（　 ｒＥ、ｃｏｌｉにおける変異触媒性抗体の選別」と題する項参照）。選択および 変異誘発に係わるこれらの方法と組み合わせて、Ｃｗｉｒｌａ、Ｓ、等により０ ＮＡＳ。
８７　（１９９０）　６３７８−６３８２およびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ、　Ｊ、 等によりＮａｔｕｒｅ、　３４８　（１９９１）　５５２−５５４に記載されて いる方法を使用すると、プロドラッグ活性化に係わる触媒性抗体の発現／改良の 助けとなる。
これらの方法は、前述の製造計画で誘発させた変異−重鎖抗体を　採取し、これ らを線状バタテリオファージｆｄの吸着たんばく質（遺伝子■）中に挿入するこ とによって、ペプチドの膨大なライブラリーの　作成および生成する変異株の結 合による選別を可能にする。クローン化されているＰＣＲおよび変異一本鎖抗体 の挿入部位は、吸着たんばく質（遺伝子■）のＮ末端から５−６アミノ酸である 。これは、抗原に対する結合に係わる抗体の提示を可能にする。この変異−重鎖 抗体遺伝子の挿入の後に、このベクター（ｆｄ−ＣＡＴＩ）は次いで、Ｅ、ｃｏ ｌ　１ＴＧＩ　（Ｋ１２　（ｌａｑ−ｐｒｏ）、５ｕｐＥ、ｔｈｉ、ｈｓｄＤ５ ／ＦｔｒａＤ３６、ｐｒｏＡ＋Ｂ＋ｌａｃ　Ｉｇ、ｌ　ａｃＺＭｌ　５）、また は類似ホストの′ａＬ７−形質転換（ｅｌｅｃｔｏｔｒａｎｓｆｏｒｍ）に使用 する。
この形質転換されたＥ、ｃｏｌｉを次いで、このベクターのテトラサイクリン耐 性を用いる選別に付す。このファージライブラリーを平板上で培養すると、この ライブラリーのサイズの増幅および推定が可能になる（１０”の範囲内のライブ ラリーサイズは抗体の９の部位でのランダム変異株の選別を可能にする）。
このライブラリーを次いで、液状培地において増幅させ、表面に浮遊している生 成されたファージを、ポリエチレングリコール沈殿を用いて濃縮し、次いで２％ 脱脂ミルク粉末含有ＰＢＳ中に溶解する。これらのファージを次いで、例えば適 当な抗原と反応させたエポキシ活性化セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）　Ｃ Ｌ　−６８（Ｓｉ−社）のような固体相−抗原１００μｍと混合し、所望の結合 活性を選別する。この選択で使用する、候補化合物には、本明細書に記載のハブ テンが含まれる。抗体誘発に使用されるこれらの抗原はまた、たんばく質担体へ の結合を経てエポキシ活性化セファロースＣＬ−６Ｂのような固体相に間接的に 結合させることもできる。担体たんばく質の選択は、免疫感作に使用されたたん ばく質は使用しないようにして、担体たんばく質に対して非特異性の抗体の単離 を防止して行う。
結合を確実にするために、吸着ファージを次いで、遠心分離により分離し、次い て一連の洗浄工程により、非特異的活性、または弱い結合活性を除去する。この 洗浄工程の種類は、選択抗原との相互反応のタイプおよび種類に係わり選択する 。すなわち、例えば高い塩洗浄を選択すると、イオン性相互反応か減少され、あ るいはエチレングリコールを使用すると、他の結合親和が好む疎水性相互反応を 減少させることができる。これらの洗浄条件に基づく選択の強化は、これらの広 い基本的洗浄条件に制限されないが、所望の反応に関連する抗原または基質の使 用に基づく特別の洗浄計画の使用を可能にする。−団のファージの溶出はまた、 洗浄に使用されるものと同一の一連の条件に基づいている。これらの方法を組み 合わせることによって、関連結合活性の広大なマトリックスを選択することがで きる。
所望の一団の結合活性を次いて増幅させ、次いでそれらの結合性および触媒性の 詳細な分析に付する。これらのタイプの選択的洗浄および溶出を用いることによ って、所望の性質を選択することができる。これは、変異および選択方法におけ る最終工程では不必要であるが、触媒活性を有する所望の構造を生成させる段階 では必要である。従って、この方法は変異結合部位を順次選択することを可能に する。
触媒活性を存しているか、または存していない、単離された潜在的候補抗体を次 いで、抗体選択または栄養要求選択を用いる触媒活性の追加の直接選択に基づく 活性選択に関して前記した発現系に導入する（Ｂ項、２部参照）。また、これら の候補分子は、このファージ系を用いる追加の変異工程および選択工程に係わり 選択することもできる。このファージライブラリー法の技術的詳細は、刊行物、 Ｃｗｉｒｌａ、　Ｓ、等、ＰＮＡＳ８７　（１９９０）　６３７８−６３８７お よびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ、　Ｊ、等、Ｎａｔｕｒｅ。
３４８　（１９９１）　５５２−５５４および特許出願Ｗ０９２１０１０４７、 に記載されている。
モノラクタム骨格のプロドラッグの触媒性活性の選択は、Ｅ、　ｃｏｌ　ｉにお ける抗体のハイブリドーマ形成または変異誘発により生成された抗体を使用して 行い、そして存在する抗体の触媒活性を改良することができる。
１、ベータ・ラクタマーゼ活性に係わるハイブリドーマを基材とする抗体の選別 モノラクタムプロドラッグの触媒性加水分解のインビトロ検出は、プラスティツ ク製９６凹部を有するプレートに不動化した（以下に記載の方法による）ハイブ リドーマ表面浮遊抗体、または腹水から精製した抗体含存溶液を用いて行うこて 選別選択した。消耗した培養液５ｍｌから上澄液を集め、そのｐＨを２ＮＮａＯ Ｈ（２０μりにより７−７．５に調整した。２７００ｒｐｍで３０分間の遠心分 離により細胞の破片を除去し、上澄液（４μｍ）を、清明なポリエチレン管に、 デカンテーションにより移した。抗マウス免疫グロブリン親和性ゲル（Ｃｈａｌ ｂｉｏｃｈｅｍ　、結合能：０．５−２ｍｇ免疫グロブリン／ゲルμｍ）を、Ｐ ＢＳ中の５０％スラリー（ゲル７０μｌを含存する１４０μＩ）として加え、次 いで生成する上澄液を、２５°Ｃで１６時間ゆっくりと混合した。９６凹部のＭ ｉｌｌｉｔｉｔｅｒ　ＧＶ濾過プレート（Ｍｉ　Ｉ　ｌ　１ｐｏｒｅ）を予め湿 らせ、次いで０．０５％ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）　−２０含有ＰＢＳ中で洗浄し た。この親和性ゲル懸濁液を２５０Ｏｒｐｍで１５分の遠心分離処理によりがき 混ぜ、この−団の上澄液を分離し、各ポリエチレン管からの残留スラリー（２５ ０μＩ）をそれぞれ、９６凹部のフィルタープレートの凹部に移した。このフィ ルタープレートからの吸引により残留上澄液を分離し、このようにして不動化さ れた抗体を次いで、ＰＢＳ／ツイーン（５Ｘ２００μＩ）、ＰＢＳ　（３Ｘ２０ ０μｌ）および２５ｍＭ　ＨＥＰＥＳ。
ｐＨ７，２（３Ｘ２００μＩ）により、４℃で洗浄した。
抗体をプロドラッグとともに適当にインキュベーションした後に、標準ＨＰＬＣ 法により未加水分解プロドラッグの分離を行う。このプロドラッグの加水分解に よって、芳香族薬物を遊離させることができ、この芳香族薬物は吸光分光測定に より容易に検出できる。生成される薬物の検出および定量はオンラインスペクト ル検出機により測定することができる。
２、ベータ・ラクタマーゼ活性に係わる、Ｅ、　ｃｏｌ　ｉにおける抗体の選別 触媒性抗体の効力はしばしば、天然酵素よりも実質的に低い。触媒性抗体の誘発 に現行の技術を使用すると、かなりは化学的または遺伝学的変更による改良なし ては、商業的用途で有効であるものとしては適していない。β−ラクタマーゼ活 性を存する触媒性抗体は特に、遺伝学的変異による改良を受け入れる。これは、 それらの触媒活性がＥ、ｃｏｌｉ発現抗体のホストコロニーをその活性に係わり 選別できる迅速で簡単な手段を提供するからである。Ｅ、ｃｏｌｉ　［特に、成 る種の過敏性株（Ｉｍａｄａ、　Ａ、等、Ｎａｔｕｒｅ　２８９　（１９８１） 　５９０−５９１　；　Ｄａｌｂａｄｉｅ−ＩＪｃＦａｒｌａｎｄ、　ＧA等、 Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ７９　（１９８２）　 ６４０９−６４１３）コがβ−ラクタマーゼ抗生物質により殺滅されることから 、β−ラクタマーセ活性を存して分泌された抗体はβ−ラクタム毒性に対する耐 性を付与する。ホストε、ｃｏｌｉの抗生物質最低抑止濃度（ＭＩＣ）か高いほ ど、変異抗体の触媒効力は大きくなる。温和な触媒性を存する抗体に係わる遺伝 子のランダム変異誘発のような方法は、大多数のＥ、ｃｏｌｉコロニーをもたら し、多数の特異な抗体が創造される。相当するβ−ラクタム抗生物質に対する耐 性を増大させると、野生型抗体の効力以上の効力を有する抗体に係わる、多数の 変異体の選別のための迅速で、有効な基礎およびシグナルが提供される。
プロドラッグ戦略、β−ラクタム環からの活性薬物の放出置換−環状β−ラクタ ム環の加水分解の結果として、不活性プロドラッグから活性薬物を生成させるこ とができる： この置換基（ＲおよびＲ−）は詳細には、β−ラクタムを、β−ラクタマーゼ酵 素−欠落Ｅ、　ｃａｌ　ｉの細胞壁を破壊して、その死滅もしくは増殖減少を生 じさせるのに有効な薬剤にするのに何か必要であるかに依存する。さらに、これ らの置換基は、免疫感作中に、担体たんばく質（ＫＬＨまたはＢＳＡ）との結合 に使用することもてきる。
触媒活性を改良するための抗体のクローニングおよび変異誘発触媒性抗体を産生 ずる抗体遺伝子をＥ、ｃｏｌｉにおいてクローニングし、次いで発現させる。β −ラクタム抗生物質に対して過敏性の株のＥ、ｃｏｌｉ　（すなわちβ−ラクタ ム抗生物質に対する天然の防御が欠落している株）を使用することが必須である 。このような株はβ−ラクタマーゼ酵素および（または）ペニシリン結合性たん ばく質欠失体として存在する（１ｍａｄａ、　Ａ、等、Ｎａｔｕｒｅ　２８９（ １９Ｂ＋）５９０−５９１：Ｄａｌｂａｄｉｅ−ＭｃＦａｒｌａｎｄ、　Ｇ、等 、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ７９（１９８２）６ ４０９−U４１３）。
このＥ、　ｃｏｌ　ｉ　コロニーは、部位特定変異またはランダム変異により変 異された抗体遺伝子をコートするプラスミドＤＮＡを含有する。これらの微生物 は改造された抗体を発現し、分泌する。かなりのコロニーか発生し、各コロニー はそれぞれ、異なるアミノ酸配列を有する抗体を分泌するので、増加した触媒活 性を存する変異株を決定する迅速で、労力を要しない方法を使用する。
Ｅ、　ｃｏｌ　ｉにおける変異触媒性抗体の選別β−ラクタマーゼ活性を有する 抗体を産生ずるＥ、ｃｏｌｉ変異株を選別するための敏感で、簡便な方法は、プ ロドラッグに類似しているβ−ラクタム抗生物質の毒性に対して耐性である、こ の変異株の改造能力を検出する方法である。この方法の好適特徴には、選別に使 用されるハブテン、プロトラッグおよび有効抗生物質の構造か全て、抗体により 認識されるのに充分に類似していることかある。ハブテンは、プロドラッグと結 合し、これを加水分解させるばかりでなくまたホスト微生物Ｅ、　ｃｏｌ　ｉへ のチャレンジに使用される抗生物質（プロドラッグ−薬物）と結合し、これを加 水分解させる抗体を誘発するものでなければならない。プロトラッグの設計にお いて考廖されるへき、もう一つの特徴は、加水分解に際して、活性薬物を放出し なけれはならないことにある。これらの要件に基づいて、本明細書のとこかに記 載されているようなプロドラッグに係わり、多くの異なる構造を使用することか できる。一つの魅力的例には、モノバクタム抗生物質、アズトレオナム（ａｚｔ ｒｅｏｎａｍ）　（Ｋｏｓｔｅｒ、　Ｗ、Ｈ，等、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ　ｏｆ　 Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈB アズトレオナムはＥ、ｃｏｌｉに対して有効な抗生物質てあり（ＭＩＣ＝０．１ ｍｇ／ｍｌ）、血液流中でヒト酵素により分解されない。修飾アズトレオナムの β−ラクタム環を加水分解して、活性薬物を放出するように、デザインし、製造 することかできる。
効果的な触媒性抗体産生性変異株の選別（Ｅ、　ｃｏｌ　ｉの過敏株の選別）は 、ホスト抗体分泌コロニーに、実際のプロドラッグではなく、むしろアズトレオ ナム抗生物質それ自体をチャレンジさせることにより達成される。この方法は、 アズトレオナム（または類似の抗生物質）それ自体がＥ、　ｃｏｌ　ｉに対して 有効な抗生物質であることからなされるが、薬物（修飾アズトレオナム）の添加 がアズトレオナムの抗生物質としての作用性にいかなる効果を有するのかは明確 ではない。薬物部分の存在は、Ｅ、ｃｏｌｉに対するアズトレオナムの抗生物質 としての作用を消去もしくは減少させることができる。薬物またはその類縁体を 含むハブテンに対して抗体か誘発され、この変異抗体はその薬物結合能力を保有 することから、大型のアズトレオナムー薬物結合体ではなく、アズトレオナムそ れ自体を用いる選別は、許容される方法である。選別は、寒天稀釈法などの標準 的方法（Ｓｉｇａｌ、　［、ｓ、等、Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳ Ａ　７９　（１９８２）　７１５７−７＋６０　；　Ｓｏｗｅｋ、　Ｊ、　Ａ、 等、Ｂｉｏｃｈｅ高奄唐狽窒■ ３０　（＋９９１）　３１７９−８８）により、またはアズトレオナム濃度勾配 を使用すること（Ｓｃｈｕｌｔｚ、　Ｓ、　Ｃ，等、Ｊ、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　２ 　（１９８７）　２９０−２９７）により行われる。
変異の特徴確認 引き続くインビトロ特徴確認のために、ミリグラム単位の抗体を発現させ、産生 ずることができるように、アズトレオナムに対して耐性であることか見出だされ たＥ、ｃｏｌｉコロニーを大量に増殖させる。この段階で、抗体を緩衝溶液中で 、精製し、特＠確認する。必須の運動学的性質には、β−ラクタムプロドラッグ を効果的に加水分解して、活性薬物を放出する能力がある。プロドラッグ（基質 ）、加水分解したアズトレオナムまたは活性化された薬物による強力な生成物抑 制性の欠落が必要であること、およびまたヒト血清中で効果的に加水分解するこ とがある。
Ｂ、ヌクレオシド類縁体プロドラッグを活性化する触媒性抗体の単離ヌクレオシ ド類縁体プロドラッグを活性化する触媒性抗体は、インビボで、２つの一般原則 のうちのどちらかに従う選択方法により、または物理化学的方法による抗体もし くはファージ発現抗体の選別（選別方法）により、単離することができる。以下 に記載する、インビボ単離方法は、全部のヌクレオシド類縁体プロトラッグに係 わる抗体の選別に採用することができる。この選別方法は、特許請求されている ２つの不活性化基の種類に基づいて、２つのタイプに分けられる。
この選別のタイプの１つは、エステラーゼ活性を検出する方法であり、もう１つ のタイプの方法はグリコシダーゼ活性を検出する方法である。選別は、マウス腹 水からの精製抗体に対して、または初期の段階で、ハイブリドーマ上澄液中に存 在する抗体に対して、適用することかできる。上記に挙げた方法に関して、ハイ ブリドーマ上澄液を触媒活性に係わり初期に選別する方法に関してとくに説明す るか、腹水からの精製モノクローナル抗体の選別および分析にも容易に適用する ことかできる。
選別は、初期段階でハイブリドーマ上澄液において、Ａ項に記載の不動化方法を 用いて、または後続の段階でマウス腹水からの精製抗体を用いて行う。
ガラクトシダーセ触媒作用活性に係わる抗体の選別溶液中に浮遊している抗体ま たは洗浄され、不動化されている抗体に、適当な分析用緩衝液中のプロドラッグ 溶液を添加する。プロドラッグ活性の無触媒性化速度に応じた時間にわたり、２ ５℃でインキュベートした後に、活性化された薬物の生成を測定する。基質溶液 を凹部から取り除き（不動化方法の場合）、生成物の生成度を測定するか、また は生成物をその場で測定する（抗体浮遊溶液の場合）。
プロドラッグ活性の検出は、プロドラッグ活性化に付随する、ガラクトースの生 成を比色または蛍光により測定する。
多くの可能なガラクトース検出方法の１つを採用する。若干の敏感で、特異的な 検出方法を以下に挙げる： ■、遊離ガラクトースの２″Ｐ−ホスフェートによる標識付けａ）ガラクトキナ ーゼ（Ｅ、　Ｃ，２，７，１，６）は、市販されており（ＳｉｇｎａＣｈｅｍｉ ｃａｌ　Ｃｏ、、Ｓｔ　Ｌｏｕｉｓ、ＵＳＡ　）　、下記の反応を触媒するニガ ラクトース＋ＡＴＰ→ガラクトース−１−ホスフェ−１−＋ＡＤＰ使用されるＡ ＴＰ　（アデノシントリホスフェート）がそのガンマ−ホスフェート位置に２１ Ｐを存する場合には、触媒性抗体により生成される遊離ガラクトースか放射活性 標識になる。標識付けされたガラクトース−１−ホスフェートを、この反応混合 物中のその池の成分から薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）により、または高速液 体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）により分離し、次いでシンチレーション計量に より定量する。
２、蛍光発光性または発色性のアルデヒド反応性試薬を用いる触媒反応検出この タイプの検出方法においては、ガラクトースは、市販（例えｌ；！’Ｍｏ　ｌｅ ｅ　ｉ　ｌ　ａｒＰｒｏｂｅｓ、　Ｉｎｃ、　、　Ｅｕｇｅｎｅ、　ＯＲ）のア ルデヒド反応性試薬と、非触媒的に反応して、着色または蛍光発光誘導体を生成 させる。このガラクトースとの反応生成物を、ＨＰＬＣによりまたはＴＬＣによ り単離し、標準的手段による吸光測定によって、または蛍光測定によって、検出 する。
強力な試薬のＩっは、ダンソルヒトラジ：／　（Ｍｏｌｅｃｉｌａｒ　Ｐｒｏｂ ｅｓ、　Ｉｎｃ、　）である。
ダンシルヒドラジンは、温和な条件の下に、アルデヒドと　反応して、蛍光発光 生成物を生成させる（Ｅｇｇｅｒｔ、　Ｆ、　Ｍ、等、Ｊ、　Ｃｈｏｍａｔｏｇ ｒ、　３３３（１９８５）１２３；Ａｖｉｇａｄ、　Ｇ、、Ｊ、Ｃｈｏｍａｔｏ ｇｒ１３９（１９７７）３４３　）、この蛍光は、反応混合物のＴＬＣまたはＨ ＰＬＣにより低濃度でも検出することかできる。その低い検出限界、大きい反応 特異性または温和な反応条件から、ダンシルヒドラジンよりもさらに有用な、そ の他の強力な試薬には、市販のその池の蛍光ヒドラジド、例えばクマリンヒドラ ジド、フルオレセインチオセミカルバジＩ”　（Ｍｏｌｅｃｉｌａｒ　Ｐｒｏｂ ｅｓ、　Ｉｎｃ、　）がある。これらの試薬を、その特定の要件に対して最良に 適合するかを知るために比較する。
３、発色性特異酵素によるガラクトースの検出ａ）ガラクトースの検出に使用で きる酵素の１つは、ガラクトースデヒドロゲナーゼ（Ｅ、　Ｃ，１，１，１，４ ８ＸＳｉｇｍＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｓｔ几ｏｕｉｓ、　ＭＯ，Ｕ ＳＡ）であり、この酵素は下記の酸化−還元反応を触媒するニガラクトース＋Ｎ ＡＤ＋　（無色）→ガラクトホー１−＋ＮＡＤＨ（着色）＋Ｈ＋このガラクトー スの酸化は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ”　）の還元によ り達成される。ＮＡＤ＋の還元形態である、ＮＡＤＨは着色するので、その外観 を３４０ｎｍで分光光度測定により追跡する。
ｂ）ガラクトース検出に有用なもう１つの酵素は、ガラクトースオキシダーゼ（ Ｅ、Ｃ，１，１，３，９）であり、この酵素はペルオキシダーゼおよびｏ−トル イジンと組み合わせて使用すると、触媒性抗体により誘発される遊離ガラクトー スの存在に応じて色を変化させる。このカップリング反応を以下に示す。この初 めの反応はガラクトースオキシダーゼにより触媒され、そして２番目の反応はペ ルオキシダーゼにより触媒される。これらの酵素は両方ともに、ＳｉｇｒｒＢＣ ｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙから入手てきる：１、ガラクトース＋０２；士 ガラクトネート＋Ｈｚ　Ｏｘ２　Ｈ２０□＋ｏ−トルイジン？±Ｈｚ　Ｏ＋　ｒ 着色生成物」生成される着色生成物は分光光度測定により測定することができる 。
エステラーゼ触媒作用活性に係わる抗体の選別不動化し、洗浄した抗体、または 溶液中の浮遊抗体に、適当な分析用緩衝液中のプロトラッグの溶液（別設の記載 がないかぎり）を添加する。適当な温度、例えば２５°Ｃにおいて、プロドラッ グ活性化の無触媒化速度に応じた時間にわたりインキュベートした後に、活性薬 物の生成を以下に記載のとおりにして測定する。
プロドラッグ生成の検出は、弱く緩衝されている溶液中における　エステル加水 分解に付随するｐＨ変化により検出できる。ｐＨの変化は、溶液中に酸−塩基指 示薬、例えばフェノールレッド（Ｂｅｎｋｏｖｉｃ、　Ｐ、　Ａ、等、　Ｂｉｏ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１８（１９７９）８３０）を含有させることによって検出 できる。この指示薬はｐＨ変化に応じて色を変える。別法として、さらに敏感な 方法として、凹部中に挿入できる微細なチップ状電極を備えたｐＨスタットまた はｐＨメーターを使用して、ｐＨ変化を測定する方法かある。ｐＨ変化の測定を 包含する選別の場合には、インキュベーション期間中、凹部を窒素またはアルゴ ン気体の下に保持して、大気中の二酸化炭素によるｐＨ変化を防止する必要かあ る。
芳香族エステル−保護プロドラッグの加水分解は、酸性芳香族基の遊離をもたら し、この酸性芳香族基はＨＰＬＣで慣用のクロマトグラフィ手段（イオン交換カ ラムまたは逆相カラム）により容易に分離することができる。さらにまた、この ＨＰＬＣから溶出する芳香族環の検出は、オンラインＵＶ吸収検出機を用いて容 易に行うことかできる。
芳香族エステルヌクレオシド類縁体の加水分解のインビトロ検出のための第３の 方法は酵素様分析を用いる方法である。この目的に使用できる、安価な市販酵素 （Ｓｉｇｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｓｔ几ｏｕｉｓ、　ＭＯ， ＵＳＡ）の１つは、チミジンホスホリラーゼ（Ｅ、　Ｃ，２，４，２，４）であ る。この酵素は、基質チミジンおよびオルトホスフェートを、生成物チミジンお よび２−デオキシ−Ｄ−リボース−１−ホスフェートに変換する。ここで選別さ れるプロドラッグに関係なく、チミジンにより不活性化されるエステルの結合体 （栄養要求バクテリア変異株を用いる生物学的選別で使用されるものと同一のタ イプの化合物）を使用することがてきる。
この酵素は、芳香族エステル保護チミジンのホスホリル化を触媒せず、触媒性抗 体により生成される遊離チミジンたけを触媒する。これらの凹部に、チミジンホ スホリラーゼ、プロトラッグのチミジン誘導体、および２２Ｐ標識したオルトホ スエートを添加する。これらの緩衝されている成分を不動化抗体とともにインキ ュベーションた後に、一定量をＴＬＣに付し、放射性物質標識を存するオルトホ スフェートと２−デオキシーＤ−リポース＝１−ホスフェートとを分離する。こ のｔｐは次いて、オートラノオグラフィによりＴＬＣプレート上で検出すること か抗体をバクテリアで発現させると、触媒活性の選別に係わり相違する多数の抗 体が提供される。しかしなから、この方法の作用性は、活性抗体を生成する、そ のコロニーの選択に有効な方法の利用に依存する。興味深い実験的方法は、触媒 性抗体産生性コロニーのみが生き残ることができる生物学的選択を使用する方法 である。この選択を実施できる手段の１つは、バクテリアにとって不足している 特定の栄養物質を供給するために、触媒性抗体を使用する手段である。生き残り は、必要な栄養物質を放出する基質を開裂する抗体に依存する。プロドラッグ開 裂性の触媒性抗体を得るためのタイプの選択を以下に示す。
プロトラッグを開裂でき、これによってヌクレオシド類縁体（例えば、フルオロ ウリジン、フルオロデオキシウリジン、フルオロウリジンアラビノシド、シトシ ンアラピノシド、アデニンアラビノシド、グアニンアラビノシド、ヒボキサンチ ンアラビノシド、６−メルカプトプリンリボシド、チオグアノシンリボシド、ネ ブラリン、５−ヨウドウリジン、５−ヨウドブオキシウリジン、５−ブロモデオ キシウリジン、５−ビニルデオキシウリジン、９−［（２−ヒドロキシ）エトキ シコメチルグアニン［アシクロビル（ａｃｙｃｌｏｖｉｒ　）　］、９−［（２ −ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル）エトキシコメチルグアニン（ＤＨＰＣ） 、アザウリジン、アザシチジン、アジドチミジン、ジデオキシアデノシン、ジデ オキシシチジン、ジデオキシイノシン、ジデオキシグアノシン、ジデオキシチミ ジン、３′−デオキシアデノシン、３′−デオキシシチジン、３′−デオキシイ ノシン、３′−デオキシグアノシン、３′−デオキシチミジン）を放出できる触 媒性抗体を製造するためには、プロドラッグ活性化性抗体を、バクテリア発現に より産生させ、チミジン欠失バクテリアにチミジンを供給できる抗体を選択する 。チミジンは、フルオロウリジンおよびその池の上記ヌクレオシド類縁体に類似 する閉鎖構造を有している。従って、プロドラッグからフルオロウリジン（また は上記その他のヌクレオシド類縁体のいづれか）を放出できる触媒性抗体は、フ ルオロウリジン（または上記その他のヌクレオシド類縁体のいづれか）の代わり にチミジンを有する均等な基質からチミジンを放出することかできる。チミジン 欠失バクテリアを、フルオロウリジンプロドラッグと同一の先駆部分により誘導 体化されている基質チミジンに適用する。この先駆部分を開裂することができる 触媒性抗体を産生ずるコロニーは、放出されたチミジンを利用することができ、 従って生き残る。これらの生存コロニーからの抗体を次いで、このプロドラッグ を開裂させて、フルオロウリジンを生成させるものとして選別する。
チミジン産生を阻止する方法は、バクテリア細胞増殖を押さえる強力な方法であ る。チミジンはＤＮＡ合成にとって必須であり、デオキシウリジンの酵素による メチル化によってのみ得られる。塩基チミジンはＲＮＡでは見出だされないこと から、ＤＮＡ合成を急速に遮断する、デオキシウリジンのチミジンへの変換を阻 止するＲＮＡの分解により、チミジン　ブールを補給できる可能性はない。従っ て、チミジン合成を阻止する手段の１つは、酵素チミジレートシンテターゼまた はジヒドロホレートレダクターゼ（ＤＨＦＲ）を阻害することにある。フルオロ デオキシウリジレートは、チミジン合成の不可逆的阻害剤であるが、この化合物 はまた、欠陥のあるＲＮＡの合成を生じさせ、これにより抗体媒介チミジン放出 が、細胞の死を防止するには充分ではないことがある。メトトレキセート（ｍｈ ｏｔｒｅｘａｒｅ＞はＤＨＦＲの高特異性阻害剤であるが、酵素による還元の生 成物であるテトラヒドロホレートはまた、プリンおよびある種のアミノ酸の生体 合成に必要である。しかしながら、プリン　ブールは、増殖メディアにヒポキサ ンチンを補給することによって維持され、従ってメトトレキセート処置バクテリ アはチミジンに対して独特の要件を有する。［もう一つのホレート類縁体である トリメトプリム（ｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ）は、メトトレキセートに比較して さらに強力なバクテリアＤＨＦＲ阻害剤であり、必要に応して使用されている（ Ｇ　ｉ　Ｉ　ｍａｎ、　Ａ、　Ｇ、等、Ｔｈｅ　Ｐｈａｒｍａｃｏ：ｏｇｉｃａ ｌ　Ｂａ５ｉｓ　ｏｆ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（＋９８５）＋２６３−１２ ６８）　］。
チミジン骨格を有するプロドラッグの開裂に係わる、もう一つの選択方法ては、 ε、ｃｏｌｉのチミジレートノンテターゼ欠落株を使用する［Ｎｅ１ｈａｒｄｔ 　ｃｋｌｉ　ａｎｄＳａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ：　Ｃｅ１ ｌｕｌａｒａｎｄ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８７）　］　ｏ y素の発 現が温度感受性である株を使用すると、これらのコロニーはいづれも、酵素の充 分な発現をイ［い、初めから増殖させることかできる。次いて温度を高めると、 酵素発現は低下し、チミジン骨格を存するプロトラッグを開裂させることができ る抗体を産生ずるコロニーのみが生き残ることかできる。
の遊離抗体を用いて行う。
触媒活性に係わる抗体の選別：溶液中の、または不動化し、洗浄した　抗体に、 適当な緩衝液中のプロドラッグの溶液を添加する。プロドラッグ活性化の無触媒 速度に応じた時間にわたり２５℃でインキュベートした後に、活性化された薬物 の生成を測定する。基質溶液を溶液から分離し、生成物の生成間を測定するか、 または生成物をその場で測定する。
プロドラッグ活性化の検出は、プロドラッグ活性化に付随する副生成物−アクロ レインを比色測定または蛍光測定することによって行う。
多くの可能なアクロレイン検出法の１つを採用する。数種の実質的に敏感で、特 異的な検出方法を以下に示す。
１、アクロレインの反応を触媒する酵素を用いるアクロレインの検出。
ａ）アクロレイン生成の検出に使用することができる酵素の１種には、アルコー ルデヒドロゲナーゼ（Ｅ、　Ｃ，１，１，１，１）がある。アルコールデヒドロ ゲナーゼは市販されており（Ｓｉｇｉａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ） 　、下記の反応を触媒する（例えば、アルデヒドはアセトアルデヒドであり、そ してアルコールはエタノールである）： アルデヒド十ＮＡＤＨ（着色）＋Ｈ＋、＝２アルコール＋ＮＡＤ＋　（無色）Ｎ ＡＤＨのＮＡＤ“への酸化は、３４０ｎｍで中心の色変化を伴九この色変化は、 酵素の活性の検出に慣用である。アクロレインはアルデヒドに近似しており、そ してまたこの酵素はその基質の正確な構造に特別に厳しくないことから、化合物 、アクロレインは、アルコールデヒドロゲナーゼによるアルデヒド基質として受 入れられる。異なる起源［例えばイーストおよびエフイン（ｅｑｕｉｎｅ）　］ から市場で入手できる種々のタイプのアルコールデヒドロゲナーゼが存在し、起 源が異なる酵素は、それらの基質特異性において幾分相違しており、１種の起源 からの酵素はアクロレインを酸化しないが、池の１種からの酵素はアクロレイン を酸化することかできる。
ｂ）　Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙから市販されている、ア ルデヒドデヒドロゲナーゼ（Ｅ、　Ｃ，１，１２，１，５）により触媒される反 応はまた、アルデヒド基質か受け入れられ、反応により色変化か生しる点て類似 している。この反応ては、アルデヒドかカルボン酸に酸化される（例えば、アセ トアルデヒドは酢酸に酸化される）： アルデヒド＋ＮＡＤ’″　（無色）＝＝酸十ＮＡＤＨ（着色）＋Ｈ＋この場合に 、基質の変形に付随して、３４０ｎｍにおける色の消失が生じる。
すなわち別の挙動というよりはむしろ、アルコールデヒドロゲナーゼと類似する ＮＡＤ＋のＮＡＤＨへの変換が生じる。
Ｃ）第３の可能な酵素結合検出方法では、アルコールオキシダーゼ（Ｅ、　Ｃ。
１、　１．　３．　１３）およびペルオキシダーゼ（Ｅ、　Ｃ，１，Ｉ　１．　 １．　７）の両方を使用する。アルコールオキシダーゼは分子状酸素を使用して 過酸化水素を発生させ、アルデヒドをカルボン酸に変換する：アルデヒド＋０２ ＃酸十Ｈ１０゜ アルコールデヒドロゲナーゼは市販されており（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｎ＋１ｃａ ｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ）、刊行物の記載に基づけば、基質としてアクロレインを受 け入れる（Ｇｕｉｂａｕｌｔ、　Ｇ、　Ｇ、。
Ｈａｎｄｂｏｏｋ　Ｏｆ　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｏｆ　Ａｎａ ｌｙｓｉｓ　（１９７６）２４４−２４８．Ｎｅｗ　Ｙｏｒ求GＭａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ）。アルコールデヒドロゲナーゼによる過酸化水素の生成は、反応 混合物に発色団ペルオキシダーゼ基質、０〜ジアニシジンとともにペルオキシダ ーゼ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅ叫ｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ）を添加することにより追 跡される。ペルオキシダーゼは下記の反応を触媒する： Ｈｚ　Ｏｘ　＋Ｏ−ジアニンジン；Ｈ！　Ｏ＋　ｒ着色生成物」この着色生成物 は、４５６ｎｍで分光光度測定により観測できる。
２、蛍光発光または発色団アルデヒド−反応性試薬を用いる触媒性の検出この種 の検出方法では、アクロレインは市販のアルデヒド−反応性試薬（例えば、Ｍｏ １ｅｃｕｌａｒ　Ｐｒｏｂｅｓ、　Ｉｎｃ、　、　Ｅｕｇｅｎｅ、　ＯＲ，ＵＳ Ａから市販されている）と、無触媒反応して、着色または蛍光発光誘導体を生成 させる。このアルコールとの反応生成物は高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ ）により、または薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）により単離され、標準手段に よって吸光によりまたは蛍光により検出される。
強力な試薬の１つは、ダンシルヒドラジン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｒｏｂｅｓ 、　Ｉｎｃ、　）である。
ダンシルヒドラジンは温和な条件の下に、アルデヒドと反応して、蛍光を有する 生成物を生成させる（Ｅｇｇｅｒｔ、　Ｆ、　Ｍ、等、Ｊ、　Ｃｈｒｏｍａｔｏ ｇｒ、　、　３３３（１９８５）１２３；Ａｖｉｇａｄ。
Ｇ、　、　Ｊ、　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ、　１３９（１９７７）３４３）、この 生成物は反応混合物のＴＬＣまたはＨＰＬＣにより低濃度で検出できる。
その低い検出限界、大きい反応特異性、またはさらに温和な反応条件により、ダ ンシルヒドラジンよりもさらに有用な別の試薬には、市販のその他の蛍光ヒドラ ジン化合物、例えばクマリンヒドラジド、フルオレセインチオセミカルバジド（ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｒｏｂｅｓ、　Ｉｎｃ、　）がある。これらの試薬は同 程度で特定の要件に良好に適合する。
により検出できる：すなわちインビトロで、プロドラッグの活性薬物への化学的 変換に付随する固存の物理学的変化を観測することによる検出、またはインビボ で、活性化された薬物の毒作用を生物学的に選別することによる検出がある。
２、選別：前記Ａ項に記載の不動化方法を使用してモノクローナルセルライン上 澄液中の抗体の選別または腹水からの精製抗体の選別を、薄層クロマトグラフィ （ＴＬＣ）または高速液体クロマトグラフィ（ＨＰ　Ｌ　Ｃ）のどちらかの標準 方法によって行なう。代表的には、この反応混合物は、２００マイクロモルのプ ロドラッグ、約１マイクロモルの抗体、１４０ｍＭの塩化ナトリウムを含有し、 そしてＩ　ＯｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液中でｐＨ７，４に緩衝されている。成分濃度 およびｐＨの変化をまた測定する。代表的な別のｐＨ値は、ＨＥＰＥＳＯ代わり にＭＥＳ中の場合に、ｐＨ５，０てあり、モしてＨＥＰＥＳの代わりにトリス（ Ｔｒｉｓ）緩衝液の場合に、ｐＨ９，０である。温度は代表的に、２５°Ｃであ るが、プロドラッグの基礎（無触媒）加水分解が高められた温度で劇的に増加し ないかぎり、高めることもできる。
そのプロドラッグの形態のドキソルビシン、およびまたその開裂された不活性先 駆部分（ｐｒｏｍｏｉｅｔｙ　）はいずれも、吸光または蛍光により検出できる 。ドキソルビシン、および多分ドキソルビシンプロドラッグは両方共に、紫外部 および可視部の光を強力に吸収する（最大吸収値（メタノール）＋２３３．２５ ２．２８８．４７９．４９６．５２９　ｎｍ）。芳香族不活性先駆部分は２６０ −２８０ｎｍおよびまた２　２０　ｎｍで紫外部光を強力に吸収する。
ＴＬＣによる抗体触媒プロドラッグ活性化の観測は、精製抗体で、または前記の 細胞培養物上澄液中の不純抗体を９６凹部プレートで用いる初期選別検出法を使 用して行う。ドキソルビシンプロドラッグ活性化に係わるＴＬＣは標準方法で行 い、薬物とプロドラッグとをＴＬＣプレート上で分離させる。ドキソルビシンプ ロドラッグを加水分解して、遊離ドキソルビシンを生成させる場合には、−級ア ミノ基か薬物に現れる。ＴＬＣマトリックスおよび溶剤系を適当に選択すること によって、活性薬物からの先駆形態物の分離が容易に達成される。ＴＬＣで分離 された薬物およびプロドラッグの検出は、紫外部光を使用してドキソルビシンの 自然の蛍光を、またはオレンジ−赤色を目でみ見て確認できる。また、プロドラ ッグ活性化が生起した場合には、遊離カルボキシル基が遊離する芳香族先駆部分 に生成され、この芳香族先駆部分か新規に生成された化合物の物性を示すので、 これかプロドラッグと１−キソルビシンとの両方からＴＬＣによる分離を可能に する。
活性薬物生成の選別はまた、標準的条件の下でのＨＰＬＣにより行うことができ る。プロドラッグ枯渇または薬物あるいは先駆部分生成を可視部および紫外部で 検出するには、オンライン吸光または蛍光検出機を使用する。プロドラッグ、薬 物および遊離先駆部分は、逆相カラムにおいて、分離を最適にする慣用の溶剤系 を用いて分離される。最適にする条件には、逆相カラムの種類、溶剤流動速度、 溶剤混合物成分、および溶出様相（均一溶出または勾配溶出）かある。
対して毒性である、細胞毒性を有する、抗体−遊離ドキソルビシンをその生物学 的作用に関して選別することは、触媒活性を有する、大量のプロドラッグ活性化 性抗体を産生ずるセルライン（バクテリアまたはハイブリドーマ）の同定を可能 にする。プロドラッグか細胞毒性ではない場合には、プロドラッグ活性化性抗体 を産生ずるセルラインのみが、当該プロドラッグにより殺滅される。このアイデ アは、β−ラクタム抗体に対する増大された耐性に係わる選別による、およびま たチミジンシンテターゼ欠失セルラインをプロドラッグ開裂によりチミジン産生 性にする触媒性抗体の能力による、セルラインの生物学的選択に関して、前記さ れているものと同様である。ドキソルビシンプロドラッグの場合には、選択がプ ロドラッグ活性化により生じる自殺行為による細胞の死に関連している点で、選 別に差異がある（これは触媒性抗体が関与する生存能の強化とは相違している） 。
従って、ドキソルビシン生成に係わる生物学的選択の場合には、触媒性抗体産生 性セルラインが選別工程中に失われないように、一定量の各セルラインを保存し ておき、この選別には使用しないようにする。実際には、抗体産生性モノクロー ナルセルライン（ハイブリトーマまたはバクテリア）の一連のコロニーを、一連 の稀釈プロドラッグにさらす。死滅に対して投与量依存様相で増加する感受性を 示すセルラインをさらに探究する。この際に、このような抗体を単離し、純粋な 状態てその特徴を確認する。別法として、同一セルラインの一連のコロニーに一 連稀釈のプロドラッグを投与する代わりに、この実験の経過時間において任意決 定される抗体触媒の最低良好運動学的速度により計算された死をもたらす濃度で 、プロドラッグを単次投与する。
Ｅ、メルフアランプロドラッグの触媒活性化に係わる抗体の選別９６凹部を存す るプレートにおける不動化技術によるハイブリドーマ上澄液で初期に（前記Ａ項 に記載）、またはマウス腹水からの後続の段階で、抗体を選別する。どちらの場 合にも、触媒性は、基質と生成物との普通のＨＰＬＣ分離方法により検出できる 。基質（プロドラッグ）および生成物（薬物および先駆部分）はいづれも、芳香 族であり、従ってＨＰＬＣ装置と連結しているＵＶ検出機を用いて、低レベルで 検出できる。初期選別の場合には、抗体とともに行われる適当なインキュベーシ ョン時間の後に、各凹部から一定量を採取し、ＨＰＬＣに導入する。腹水からの 抗体の場合も同様に、一定量の反応溶液をＨＰＬＣに導入し、基質と生成物とを 分離し、次いて検出および定量を行う。
組成物および投与 本発明はまた、医薬組成物、組み合わせ剤および癌およびその他の腫瘍の処置方 法を包含する。さらに特に、本発明は、免疫結合体く目標設定性蛋白質および触 媒性たんばく質、または目標設定性抗体および触媒性抗体（二重特異性抗体）） と相当するプロトラッグまたは腫瘍処置方法で使用されるプロドラッグとからな る組み合わせを包含する。この腫瘍処置方法では、哺乳動物ホストを、医薬とし て有効な量の、１種または２種以上の目標設定性たんばく質−触媒性たんばく質 結合物、あるいは１種または２種以上の二重特異性抗体および医薬として有効な 量の１種または２種以上のプロトラッグによって、医薬として許容される方法で 処置される。本発明に係わるこの組み合わせおよび方法は、ヒトおよび動物の処 置に作用である。
有利な態様においては、この免疫結合体を投与し、その後でプロドラッグをホス トに導入する。免疫結合体の投与時点とプロドラッグ投与時点との間の時間は、 免疫結合体中の目標設定性たんばく質か腫瘍部位に目標を定め、ここに局限され つるに充分であるようにする。この充分の時間は、使用結合体に依存して、４時 間ないし１週間である。免疫結合体の投与終了時点とプロドラッグ投与開始時点 との間の間隔は、患者の年齢および症状などの別の因子とともに、目標の部位な らびに免疫結合体およびプロドラッグの種類に依存して変わる。所望の治療効果 を得るためには、１回以上のプロドラッグ投与か必要である。従って、正確な投 与計画は通常、プロドラッグ投与前に、目標部位で免疫結合体の最高濃度が得ら れ、かつまた患者のその他の部位で最低濃度か得られるようにするために、経験 的決定か必要である。この方法で、最適の選択的治療効果を達成することができ る。
免疫結合体はいづれか適当な経路、好ましくは非経口経路、例えば注射または潅 流により投与する。これらの化合物は、これらに制限されないものとして、静脈 内投与、腹腔内投与、経口投与、リンパ部内投与、または腫瘍への直接投与を包 含する慣用の方法を用いて投与される。静脈内投与は特に有利である。
免疫結合体またはプロドラッグを合作する、本発明の組成物は種々の投与形態で あることができ、この形態には、これらに制限されないものとして、液体溶液ま たは懸濁液、錠剤、糖衣錠、粉末、生薬、ポリマー製マイクロカプセルまたはマ イクロビシクル、リポソーム、および注射用または潅流用溶液が包含される。
好適形態は、投与形式および治療用途に依存する。例えば、抗体−酵素結合体ま たは二重特異性抗体の経口投与は、好ましくないことがあり、これは例えば錠剤 の形態で経口投与された場合には、結合たんばく質が胃で分解される傾向を有す るからである。
免疫結合体またはプロドラッグの非経口投与に適する組成物は、油性または水性 媒質中の各成分の懸濁液、溶液またはエマルジョンを包含し、また懸濁剤、定着 剤（ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）および（または）分散剤などの調 剤用助剤を合作することもできる。別様には、免疫結合体またはプロドラッグは 、適当な媒質、例えば無菌の発熱性物質を合作していない水により、使用前に、 適当に再構成される粉末の形態であることもできる。所望により、免疫結合体、 抗体および（または）プロドラッグは単位投与量形態で提供される。これらの組 成物は注射用の等張塩類溶液として調製すると好ましい。
本発明の組成物の最も効果的な投与方式および投与計画は、病気の重篤度および 進行状態、患者の健康および処置に対する応答ならびに処置する医師の判断に依 存する。従って、免疫結合体およびプロドラッグの投与量は各患者に応じて決定 されるべきである。
しかしながら、本発明の免疫結合体の有効用量は、約１．　０−約１００ｍｇ／ ｍ”の範囲にある。本発明のプロドラッグの有効用量は、使用する特定のプロド ラッグおよびそこから誘導される親の薬物に依存する。免疫結合体およびプロド ラッグか投与されるべき正確な用量は、投与経路、患者の体重および症状、プロ ドラッグの種類、および免疫結合体の触媒性物性に依存する。プロドラッグは親 の薬物に比較してその毒性か低いことから、親の薬物に関して認められている量 よりも過剰の用量で使用することかできる。
これらのプロドラッグはその薬物の投与に常用されている用量で投与されるか、 好ましくは、低用量、または例えば薬物単独の場合の常用投与量のｏ、ｏｏｔ− ０．５倍付近の量で投与される。
本発明のもう一つの態様において、数種のプロドラッグおよび１種のみの抗体− 酵素結合体を使用する組み合わせ化学治療方法が提供される。この態様に従う場 合には、免疫結合体中の同一酵素または触媒性抗体の全部の基質である、多くの プロドラッグが使用される。すなわち、特定の抗体−酵素結合体または二重特異 性抗体が、多くのプロドラッグを細胞毒性に変換し、腫瘍部位における増大した 抗腫瘍活性をもたらす。
本発明のもう一つの態様は、その抗体の特異性か相違している、多くの免疫結合 体の使用を包含する。すなわちこの場合には、それぞれが対象腫瘍の相違する抗 原に対してそれぞれ特異的に結合する抗体を合作する複数の免疫結合体を使用す る。これらの免疫結合体の酵素成分は同一であっても、または異なっていてもよ い。この態様は腫瘍表面上の各種抗原の量か未知であり、そして充分の酵素を腫 瘍部位に目標を定めて確実に供給しようとする場合に有用である。腫瘍に対して 相違する抗原特異性を存する、多くの結合体を使用すると、プロドラッグまたは 一連のプロドラッグの変換に充分な酵素が腫瘍部位で得られる可能性が増加され る。さらに、この態様は、正常組織も少量ではあるが、腫瘍付随抗原の全部を有 するものと見做されることから、腫瘍に対する高度の特異性を得るために重要で ある［１．８ｅ１１ｓｔｒｏｍ、等、”Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ＾ｎｔｉｂｏｄｉ ｅｓ　Ｔｏ　Ｔｗｏ　Ｄｅｔｅｒｍｉｔ＋ａｎｔｓ　ＯｆＭｅｌａｎｏｍａ−Ａ ｎｔｉｇｅｎ　ｐ９７　Ａｃｔ　Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｌｌｙ　Ｉｎ　Ｃｏ ｍｐｌｅ＋Ｌ１ｅｎｔ−Ｄｅｐｅｎｄ■獅■ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉ　ｔｙ”、Ｊ、Ｉａａｕｎｏｌ、、＋２７（Ｎｏ、Ｉ）、 （１９８１）１５７−１６０　１　。
複数の悪性腫瘍病巣を有する、数人の患者においては、腫瘍細胞の中の一部のみ が目標の抗原を発現している、腫瘍細胞における不均一性によって、腫瘍像が相 違して見られる腫瘍の内部不均一もしくは相互不均一か存在することか知られて いる、このような腫瘍では、相違する腫瘍抗原を認識するモノクローナル抗体の 混合物（カクテル）を使用して、プロドラッグを活性化させる。この方法は、抗 原不均一か存在する場合における腫瘍部位でのさらに高い薬物濃度の達成可能性 を提供する（Ｗａｈｌ、　Ｒ，、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　５ｕｐｐ １．　、　（１９９０）９４１ｓ−９４８ｓ）。
以下の例は説明のためのものであって、本発明の方法および化合物を制限するも のではない。当業者にとって自明の臨床上で普通に遭遇する種々の条件およびパ ラメーターの別の適当な変更および適用も本発明の範囲内にある。
例 例１ａ プロトラッグ、線状トリメチルベンゾイル−、トリメトキシベンゾイル−、トリ メトキシベンゾイル−１および５″−〇−（２，６−シメトキシベンゾイル）− ５−フルオロウリジン、化合物１ａＳ　ｌｂおよびｌｃの製造る化合物番号は、 図に示されている合成における化合物にそれぞれ相当するものとする）。この例 の番号付き化合物に関しては、図１ａおよびｌｃを参照する。
５−−０−　（２，４，６−１−リメチルベンゾイル）−５−フルオロウリジン １ａおよび５″−〇−（３，４，５−４リメトキシベンゾイル）−５−フルオロ ウリジン　ｌｂの製造は、２．　４．　６４リメチルベンゾイルクロライドおよ び３、　４．　５−トリメトキシベンゾイルクロライドをそれぞれ、ピリジン中 で２゛。
３′−〇−イソプロピリデンー５−フルオロウリジン６５（この化合物は例１６ て製造されている）と反応させ、次いて５０％ギ酸を用いて６５°Ｃで酸加水分 解させることによって達成される。
５″−〇−（２，６−シメトキシベンゾイル）−５−フルオロウリジン　ｌｃの 製造は、２．６−シメトキシベンゾイルクロライドと化合物６５とを、ピリジン 中で反応させ、次いて５０％ギ酸を用いて６５°Ｃて酸加水分解させることによ って達成される。
詳細、この合成は以下のとおりにして行う・２、　４．　６−１−リメチル安息 香酸３２８ｍｇとチオニルクロライド３ｍｌとの混合物を、室温で２時間攪拌す る。揮発性成分を減圧で蒸発させ、残留物をＣＨｚＣＩｚ　Ｓｍｌ中に再溶解し 、次いて揮発性成分を減圧で再度蒸発させ、２、　４．　６−ドリメチルベンゾ イルクロライドを得た。２−．３”−０−イソプロピリデン−５−フルオロウリ ジン、例１６の化合物６５．１５１ｍｇから、無水ピリジン（ＩＯｍｌ）を３回 蒸発させた。この残留物にピリジン（１ミリ）を加え、この混合物を　水浴によ り冷却し、次いでＣＨ，ＣＩ□　４ｍｌ中の２゜４．６−１−リメチルベンゾイ ルクロライド４５６ｍｇの溶液を滴下して加えた。
この添加か終了して１時間の後に、ＭｅＯＨｌｍｌを加えた。１６時間放置した 後に、揮発性成分を減圧で蒸発させ、残留物を酢酸エチル（７５ミリ）中に溶解 し、次いて飽和ＮａＨＣＯｓ　（２ｘ５０ｍｌ）および水（２５ミリ）により洗 浄し、無水Ｍｇ５ＯＪ上で乾燥させ、減圧で濃縮し、次いでフラッシュクロマト グラフィにより精製しく５０％酢酸エチル／ヘキサン、Ｒｆ：０．６３２）、生 成物１４２ｍｇを無色固形物として得た。’　ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、’）δ Ｉ。
２７（ｓ、３）、１．４８（ｓ、３）、２．１８（ｓ、６）、２．２２（ｓ。
３）、４．３０（ｍ、Ｉ）、４．４５（ｍ、２）、４．８１（ｍ、１）、５．１ ０（ｄｄ、Ｉ）、５．７８（ｄ、Ｉ）、６．８７（ｓ、２）、８．０５（ｄ。
１）、１１．　９７　（ｄ、Ｉ） ５０％ギ酸５ｍｌ中の上記アセトニド４４０ｍｇの混合物を、６５°Ｃで２時間 加熱した。揮発性成分を減圧で蒸発させた。この残留物（４０８ｍｇ）は次の’ ＨＮＭＲを示した。
’　ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ＠　）δ２．　＋３　（ｓ、６）、２．　１９　（ ｓ、３）。
３．９２（ｍ、Ｉ）、４．０５（ｍ、２）、４．４４（ｍ、２）、５．７２（ｄ 。
］）、６．　８３　（ｓ、２）、７．　８１　（ｄ、ｌ）、Ｉ　ｌ、８２（ｂｓ 、１）。
この残留物をＣＩ８カラムで逆相ＨＰＬＣに付し、４０％ＣＨ，ＣＮ／８．０に より溶出することにより精製し、生成物、化合物＋ａ　２６０ｍｇを無色固形物 として冴だ。
５−−０−　（３，４，５−トリメトキシベンシイｌい−５−フルオロウリジン ｂ ピリジンから水分を共沸除去した後に、２−．３−−０−イソプロピリデン−５ −フルオロウリジン、例１６の化合物６５．０．６０４ｇを、乾燥ピリジン４ｍ ｌ中に溶解し、次いてＯ′Ｃに冷却した。ジクロロメタン４ｍｌ中の３．　４． 　５−トリメトキシベンゾイルクロライド０．９２ｇの溶液を０℃で１時間にわ たり滴下して加えた。さらに１時間、０°Ｃて攪拌した後に、生成する混合物の 反応を、メタノール７．５ミリの添加により静めた。この混合物をシロップ状に 蒸発させ、酢酸エチル（７５ミリ）中に再溶解し、次いて飽和炭酸水素ナトリウ ム（２×７５ｍ１）および水（５０ミリ）により洗浄した。この粗製混合物を次 いでフラッシュクロマトグラフィに付し、酢酸エチル／ヘキサンを用いて溶出し 、５−−０−（３，４，５−トリメトキシベンゾイル）−２−，３−−イソプロ ピリデン−５−フルオロウリジン０．３０ｇを得た。
Ｉ　ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ＠　）δ１．　３２　（ｓ、３）、１．　５２　（ ｓ、３）。
３．７３（ｓ、３）、３．８５（ｓ、６）、４．４０（ｍ、Ｉ）、４．５３（ｍ 。
２）、４．９４（ｍ、Ｉ）、５．０９（ｍ、Ｉ）、５．７７（ｄ、１）、７．２ ２　（ｓ、２）、８．　０１　（ｄ、１）、１１．　９０　（ｄ、１）。
５−−０−　（３，４，５−トリメトキシベンゾイル）−２”、３−−イソプロ ピリデン−５−フルオロウリジン０．３０ｇを、５０％水性ギ酸４．２ｍｌ中に 溶解し、６５゛Ｃて２時間、攪拌しながら加熱した。この混合物を減圧で濃縮し 、次いて酢酸エチルを用いるフラッシュクロマトグラフィにより精製し、５′− 〇−（３，４，５−１−リメトキシベンゾイル）−５−フルオロウリジンｌｂ　 Ｏ。
１５ｇを得た；’　ＨＮＭＲ（ＣＤ、ＣＮ）δ３．８１　（ｓ、３）、３．　８ ６（ｓ、６）、４．１５−４．２８（ｍ、３）、４．５３（ｄｄ、ｌ）、４．６ ３（ｄｄ、ｌ）、５．　７５　（ｄ、１）、７．　３０　（ｓ、２）、７．　５ ９　（ｄ、Ｉ）。
５＝−０−（２，６−シメトキシベンゾイル）−５−フルオロウリジン　ｌｃピ リジン（３ミリ）中の化合物６５　（０，４５ｇ、１．５ミリモル）の溶液に、 ０°Ｃでアルゴン雰囲気の下に、メチレンクロライド（２ミリ）中の２．６−ジ リメトキシベンゾイルクロライド（０，４ｇ、　４ミリモル）の溶液をシリンジ から滴下して添加し、生成する混合物をこの温度で４時間攪拌した。反応が完了 した後に、この反応混合物にメタノール（３ミリ）を添加し、次いで溶媒を減圧 の下に除去した。生成する物質を酢酸エチル（７５ミリ）に溶解し、次いて水（ ２０ミリ）中の飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２Ｘ２０ｍｌ）により洗浄した。
この有機相を分離し、乾燥させ、濃縮し、次いでフラッシュクロマトグラフィに 付し、結合化合物を油状物質として得た（０．６６ｇ、９５％、Ｒｆ：０．４６ 、シリカ、メチレンクロライド、メタノール、ヘキサン、８０．ｌ、１９）。
ｌ　ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、’）６８．　９８　（ｂｓ、ＩＨ）、７．５６（ ｄ、ＩＨ）、７．３２（ｍ、ＩＨ）、６．５６（ｄ、２Ｈ）、５．９２（ｍ、Ｉ Ｈ）。
４．８２（ｍ、２Ｈ）、４．７２（ｍ、ＩＨ）、４．６２（ｍ、２Ｈ）、４．４ ０（ｍ、ＩＨ）、３．８０（ｓ、６Ｈ）、１．６１（ｓ、３Ｈ）、１．４０（ｓ 。
３Ｈ）。
ギ酸（５０％、６ｍ１）中の上記化合物（０，４７ｇ、１ミリモノりの溶液を、 ６５゛Ｃで２時間アルゴン雰囲気の下に、攪拌しながら加熱した。反応か完了し た後に、溶媒を減圧の下に除去し、生成する物質を逆相ＨＰＬＣにより精製し、 化合物１ｃ　（０，２７ｇ、６５％）を得た。
’ＨＮＭＲニア、８２（ｄ、ＩＨ）、７．３８（１，ＩＨ）、６．６２（ｄ。
２Ｈ）、５．８０（ｄ、ｌＨ）、４．５２（ｄｄ、２Ｈ）、４．１６（ｍ、３Ｈ ）、３．８６　（ｓ、６Ｈ）。
例１ｂ 例１ａのプロドラッグｌｂに係わるハブテン、トリメトキシベンゾエート−５− フルオロウリジンの線状ホスホネート、化合物４、の製造この例の番号付は化合 物に関しては、図１ｂを参照する。
ウリジンをその５′位置でヨウト化して、ヨウダイト３ａを得た（Ｒｏｂｉｎｓ 、　Ｊ、　Ｍ、　２等、Ｃａｎ、Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　、　６０（＋９８２）５５ ４−５５７　）。そのヒドロキシル基を保護し、ヨウダイト３Ｃを得た。３−ブ チン−１−オールを４１程て変換して、アルキン３ｄを得た。このアルキン３ｄ とヨウダイト３ｃとを、Ｐｄ　（Ｉ　１）触媒を用いてカップリングさせ、ヌク レオシド類縁体３ｅを得た（Ｒｏｂｉｎｓ、　、１．　Ｊ、等、Ｊ、　Ｏｒｇ、 　Ｃｈｅｍ、　、　４８（１９８３）１８５４−１８６２　）。選択的に保護基 を分離して、アルコール３ｆを得た。
ジベンジル３．　４．　５−トリメトキソフェニルホスホネート２は、Ｊ、　Ｍ ｅｄ、　Ｃｈｅｍ、　。
３２（１９８９）１５８０−１５９０の方法に従い、３．　４．　５−１−リメ トキシブロモベンゼンとジベンジルホスファイトとを、テトラキス（トリフェニ ルホスフィン）パラジウム（０）、トリエチルアミンおよびｌ・ルエンの存在の 下に、高温で反応させることにより製造することかできる。ジエステル２を１当 量のＰＣｌ５と反応させると、モノクロリゾ−）２ａが得られる。この生成物は 、その−級アミノ基を介して担体たんばく質に結合することができる。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：５−ヨウドウリジン　３ａ ５−ヨウドウリジン　３ａは、Ｒｏｂｉｎｓ、Ｊ、Ｍ、等、Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｃ ｈｅａ　、　６０（１９８２）５５４−５５７の方法に従い製造した、この刊行 物を引用してここに組み入れる。
５−−０−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−５−ヨウドウリジン　３ｂＤＭＦ １ｍｌ中のチオール３　ａ　（４９０ｍｇ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルク ロロシラン（２３９ｍｇ）の混合物を水浴により冷却し、ここにイミダゾール（ ２１６ｍｇ）を添加した。この混合物を室温まで温めた。１６時間後に、この混 合物を０．１Ｍ　ＨＣＩ　（２５ｍｌ）上に注ぎ入れ、次いで酢酸エチル（３Ｘ ５０ｍｌ）により抽出し、この　水性相を水で洗浄し、無水Ｍｇ５ＯＡ上で乾燥 させ、次いて減圧の下に濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（７％ＭｅＯＨ ／ＣＨ２Ｃ１ｔ）により精製し、生成物　４６０ｍｇを無色固形物として得た： ’　ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄｉ　）δ０．　０８−０．　１２　（ｍ、６）、０． 　９０（ｓ、９）、３．　７２　（ｄｄ、ｌ）、３．　８０　（ｄｄ、１）、３ ．　９０　（ｂｓ。
２）、４．０２−３．９８（ｍ、ｌ）、５．７６（ｄ、１）、７．９３（ｓ。
１）、１１．　７４　（ｂｓ、１）。
５−一〇−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２−，３−−０−３−Ｎ−トリス （４−メチルベンゾイル）−５−ヨウドウリジン　３ｃジオール３ｂ　４５０ｍ ｇから、無水ピリジン（３Ｘ１５ｍｌ）を減圧で蒸発させた。この残留物をピリ ジン１５ｍ１に溶解し、次いでトリエチルアミン６５０μＩを、次いで４−トル オイルクロライド６１２μＩを添加した。この混合物を、５０°Ｃで５時間加熱 した。この混合物を室温まて冷却し、次いでトリエチルアミン４１０μｍを、次 いで４−トルオイルクロライド３９０μＩをさらに添加した。加熱を１６時間継 続し、次いて揮発性成分を減圧で蒸発させた。この残留物をクロロホルム（５０ ｍｌ）に溶解し、ＩＭ　ＨＣＩ　（３Ｘ５０ｍｌ）および水（２ｘ５０ｍｌ）に より洗浄し、減圧で濃縮し、次いでフラッシュクロマトグラフィ（３０％酢酸エ チル／ヘキサン）により精製し、生成物５３４ｍｇを無色固形物として得た。
’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１，）６０．　３３　（ｓ、６）、１．　０７　（ｓ、９ ）、２゜３５（ｓ、３）、２．３８（ｓ、３）、２．４１（ｓ、３）、４．０６ （ｂｓ。
２）、４．４７（ｂｓ、ｌ）、５．５８（ｄｄ、ｌ）、５．７３（ｄ、ｌ）、６ ゜５７　（ｄ、Ｉ）、７．１３　（ｄ、２）、７．　１５−７．　２５　（ｍ、 ４）、７．　７９　（ｄ、４）、７．　９０　（ｄ、２）、８．　３４　（ｓ、 ｌ）。
４−（４−トルエンスルホニルオキシ）−１−ブチン３−ブチン−１−オール（ ５，０９ｇ）と４−トルエンスルホニルクロライド（１６，９５ｇ）とのＣＴ− １２Ｃｌｔ　５０ｍ１中の混合物に、トリエチルアミン（１２，２ｍ１）を滴下 して添加した。この混合物を室温まで温めた。２１時間の後に、この混合物を酢 酸エチル（１５０ｍｌ）中に注ぎ入れ、次いでＩＭＭＣＩ　（７５ｍｌ）、飽和 ＮａＨＣＯ−（７５ｍｌ）およびブライン（７５ｍｌ）により洗浄し、この有機 Ｈ１を無水Ｍｇ５Ｏ４上で乾燥させ、次いて減圧で濃縮した。フラッシュクロマ トグラフィ（１０％酢酸エチル／ヘキサン）により精製し、生成物１６．５７ｇ を無色固形物として得た。
ＩＲ（ｎｅａｔ）３２９３，３０６７．２９６３．２９２５，２１２５，１，７ ３４．１５９９．＋４９６．１４６５，１３６０．１３０Ｂ、１２９３，１２４ ６゜１１９０．１１７６．１０９８．１０２１，９８２，９０６，８１７，７６ ９゜６６５ｃｍ−’、’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ　）δ１．　９３　（ｔ、Ｉ） 、２．　４１（ｓ、３）、２．　５２　（ｄｔ、２）、４．　０６　（ｔ、２） 、７．　３２−７．　２８（ｍ、２）、７．　７９−７．　７５　（ｍ、２）。
Ｎ−（３−ブチニル）フタルイミド ０ＭＦ２０ｍｌ中の上記トシレート（１，３４ｇ）の混合物に、カリウムフタル イミド（２，５６ｇ）を添加した。この混合物を５０°Ｃて６時間加熱した。こ の混合物を冷却し、次いて酢酸エチル（２Ｘ１００ｍｌ）とＩＭ　ＨＣＩ　（２ ５ｍｌ）とに分配し、この仔機相を無水Ｍｇ５ＯＪ上で乾燥させ、次いで減圧で 濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（１５％酢酸エチル／ヘキサン）により 精製し、生成物１．１ｇを無色固形物として得た。
ＩＲ（ＫＢｒ）３４５９，３２５３．＋７６７．１７０３，１４６９，１４２９ ゜１４０２、＋３７１．１３３７，１２４９，１２１０．１１９１．１１１６． １０８８．９９６，８６８，７５９，７２１３ｃｒｎ−’、’　ＨＮＭＲ（ＣＤ ＣＩｓ）δ１．　９６　（ｔ、１．　Ｊ＝２．　７）、２．　６２　（ｄｔ、２ ．　Ｊ＝２．　７．　７゜１）、３．　８８（ｔ、　２．　Ｊ＝７．０）、　７ ．７４−７．７１　（ｍ、　２）、　７゜８５　７　７、　８４　（ｍ、２）　 ；”ＣＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ）　１８．　３＋、３６．　４９゜７０．２３．８０ ．２３，１２３．３３，１３１．９４，１３４．０＋、１６７゜９８゜ ４−ペンジルオキシ力ルポニルアミノ−１−ブチン　３ｄ工タノール２０ｍ１中 の上記フタルイミド（１，！ｇ）の混合物に、ヒドラジンヒトレート（２６８μ ｍ）を添加し、この混合物を１．５時間加熱還流させた。
この混合物を室温まで冷却し、ガム状沈殿をＩＭ　ＨＣＩの添加により分散させ 、次いて無色固形物沈殿を生成させた。エタノールを減圧で蒸発させ、この固形 物を濾別し、次いて水により洗浄し、た。この水性相を凍結乾燥させ、無色固形 物０゜９３ｇを得ｔこ。
’　ＨＮＭＲ−（ＣＤｓ　ＯＤ）δ２．　５２　ｃｔ、ｌ、Ｊ＝２．　７）、２ ．　５９　（ｄｔ、２．　Ｊ＝２．　７．　６．　８）、３．　０８　（ｔ、２ ．　Ｊ＝６．　７）　；”ＣＮＭＲ（ＣＤ、ＯＤ）δＩＴ、９９．　３９．　５ ７．　７３．　１１．　７９．　４４゜この固形物を５０％ＭｅＯＨ／水４０ｍ １に溶解し、次いでトリエチルアミン７６６μ■を添加した。ＭｅＯ）−［１０ ｍＩ中のベンジルオキシカルボニルスクシンイミド（１，８２ｇ）の溶液を添加 した。１５時間後に、ベンジルオキシカルボニルスクシンイミドＩｇをさらに添 加し、次いでそのｐＨをトリエチルアミンの添加により９以上に維持した。さら に１．５時間の後に、そのｐＨをＩＭＨＣＩの添加により５にｖ４整した。揮発 性成分を減圧で蒸発させ、この残留物をフラノツユクロマトグラフィ（２，５９ ６Ｍｅ　ＯＨ／　Ｃ）−１ｔ　ＣＩ　ｔ　）により清製し、生成物０．８２ｇを 得た。
ＩＲ（ｎｅａｔ）３４１６．３２９９．３０６６．３０３４，２９４９．２１１ ９．１７０３．＋５２６．１４５５．＋３６７．１３３３．１２５１．１２１６ ゜１１４１．１０７３，１０２１．１００１．９１３，８２４，７７７．７５３ ゜７３９、（ｉ９８，６４５ｃｍ−’、’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ　）δ２．　 ００　（ｔ。
１、　Ｊ工２．　５）、２．　４１　（ｄｔ、２．　Ｊ＝２．　３．　６．　２ ）、３．　３７　（ｑ。
２．Ｊ＝６．３）、５．１２（ｓ、２）、７．３２−７．３８（ｍ、５）：”Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣ＋ｓ　）δ１９．７７．３９．６１．６６．７１，７０．００． １２Ｂ、０５．　１２８．３８．　１２８．４４，１３６．３３，１５６．　１ ６゜５−−０−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２−，３−−０−３−Ｎ−ト リス（４−メチルベンゾイル）−５−（４−Ｎ−カルボベンゾイルオキシアミノ ブチニル）ウリジン　３ｅニ トリエチルアミン（６０ｍｌ、脱酸素化したもの）中の、ヨウド化合物３Ｃ（１ ０ｇ、１２ミリモル）、アルキン３ｄ　（４，８ｇ、２当量）、（Ｐｈｓ　Ｐ） ｔ　ＰｄＣｌ１　（２００ｍｇ）およびＣｕｌ　（２００ｍｇ）の溶液を、−夜 にわたり５０°Ｃで加熱した。反応が完了した後に、溶媒を減圧の下に除去し、 この残留物をクロロホルムに溶解し、次いでジナトリウムエチルジアミンテトラ 酢酸（５％、２ｘ３０ｍｌ）により洗浄し、乾燥させ、濃縮し、次いで生成物を フラッシュクロマトグラフィにより精製し、化合物３ｅを油状物質として得た（ ８ｇ、７３％、　Ｒｆ、０．２６、エーテルおよびメチレンクロライド、４：９ ６）。
’ＨＮＭＲ：８．２０　（ｓ、ＩＨ）、７．９０　（ｄ、２Ｈ）、７．８０　（ ｔ。
４Ｈ）、７．３８　（ｍ、５Ｈ）、７．２２（ｔ、４Ｈ）、７．１２（ｄ、２Ｈ ）。
６．６０　（ｄ、ＩＨ）、５．７２（ｄ、ＩＨ）、５．６９（ｔ、ＩＨ）、５． ４０（ｔ、ＩＨ，ＮＨ）、５．１６（ｂｓ、２Ｈ）、４．４２（ｓ、ＩＨ）、４ ゜０６　（Ｓ、３Ｈ）、３．４１　（ｍ、２Ｈ）、２．　６２　（ｔ、２Ｈ）、 ２．　４２（ｓ、３Ｈ）、２．４０（ｓ、３Ｈ）、２．３６（ｓ、３Ｈ）、１． ０２（ｓ。
９Ｈ）、０．　６２　（ｓ、６Ｈ）。
ヒドロキシ化合物　３ｆの製造・ ＴＨＦ　（５ｍｌ）中のシリル化合物３ｅ　（０，１９ｇ、１ミリモル）の溶液 に、テトラブチルアンモニウムフルオライドの溶液（１Ｍ、１．２ｍ１）を、０ ℃でアルゴン雰囲気の下に添加し、２時間撹拌した。反応が完了した後に、溶媒 を減圧の下に除去し、この生成物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、 ヒドロキシ化合物３ｆを得た（０．６４ｇ、８０％、Ｒｆ：０．４１、酢酸エチ ル：ヘキサン、１：１）。
’ＨＮＭＲ：８．４６（ｓ、ＬＨ）、７．９２（ｍ、６Ｈ）、７．３２（ｍ。
６Ｈ）、６．４０　（ｄ、ＩＨ）、５．８２（ｍ、２Ｈ）、５．３２（ｂｓ、Ｉ Ｈ）、５．１６　（ｂｓ、２Ｈ）、４．４２（ｓ、ＩＨ）、３．９８（ＡＢ、Ｑ 。
２Ｈ）、３．４２（ｍ、２Ｈ）、３．２０（ｍ、２Ｈ）、３．２０（ｍ、２Ｈ） 。
２．６０（ｍ、２Ｈ）、２．４２（ｓ、３Ｈ）、２．４０（ｓ、３Ｈ）、２．３ Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、、２６（１９８５）５９３９−５９４２の 方法に従い、３．　４．　５１リメトキシ安息香酸から３．　４．　５−トリメ １−キシブロモベンゼンを製造する。Ｊ、　Ｍｅｄ。
Ｃｈｅｍ、、３２（１９８９）１５８０−１５９０の方法に従い、ジベンジルホ スファイトを、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、トリ エチルアミンおよびトルエンの存在の下に、３．　４．　５−）リメトキシブロ モベンゼンとともに加熱し、ジベンジル３．　４．　５−４リメトキシフエニル ホスホネート２を得る。
ジベンジル３．　４．　５−１リメトキシフエニルホスホノクロリデート　２ａ ＣＨＣＩｓ　Ｓｍｌ中のジエステル２（１ミリモル）の混合物に、五塩化リン（ １，１５ミリモル）を添加する。この混合物を、その試料の’　ＨＮＭＲが出発 物質の残留を示さなくなるまで（約４時間）、６０°Ｃで加熱する。この混合物 を室温まで冷却し、次いて揮発性成分を減圧で一夜にわたり分離する。
ホスホネートエステル　３ｇ ＣＨ２Ｃ１２４ｍｌ中のクロリゾ−１−２ａ　（Ｉミリモル）の溶液を、室温で ＣＨ２Ｃ１２４ｍｌ中のアルコール３ｆ（１ミリモル）および　ＤＭＡＰ（１゜ ５ミリモル）の溶液に添加する。出発物質の消費がＴＬＣにより看取された時点 で、溶媒を減圧の下に蒸発させる。この生成物をフラッシュクロマトグラフィに より精製する。
５−（４−アミノブチル’）−５＝−０−（３，４，５−トリメ）・キシフェニ ルホスホニル）ウリジン　４ メタノール１０ｍ１中のヌクレオシド誘導体３ｇ　（１ミリモル）および５％Ｐ ｄ−Ｃ（１０重量％）の混合物を室温て水素雰囲気の下に、水素の吸収が完了す るまで攪拌する。触媒をセライトのパッドに通して濾別し、メタノールにより洗 浄する。この濾液を水浴により冷却し、この溶液に無水アンモニウムを２０分間 吹き込む。揮発性成分を減圧の下に蒸発させ、生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製 する。
例ＩＣ＝ 例１ａのプロドラッグに係わるハブテン、トリメチルベンゾエート−５−フル十 ロウリジンの線状ホスホネート、化合物４ａ、の製造この例の数字付き化合物に 関しては、図１ｄを参照する。
中間体ホスホクロリデート２ｄは、ブロモメシチレンから出発して、４工程で製 造した。ブロモメシチレンをＴＨＦ中でｎ−ブチルリチウムにより処理し、次い でジエチルホスホクロリデートを添加して、ホスホネート化合物２ｂを得た。
この化合物２ｂを、トリメチルシリルヨウダイトにより、次いで稀ＨＣＩにより 処理し、相当するジヒドロキシ化合物２ｃを得た。この化合物２ｃを、クロロホ ルム中で５０°ＣでＰＣｌ５＋こより処理して、ホスホクロリゾ−）２ｄを得た 。このホスホクロリデート２ｄを、ＤＭＡＰの存在の下に、メチレンクロライド 中で、化合物３ｆとカップリングさせ、結合化合物３ｈを得た。この化合物３ｈ を、酢酸エチル中でＰｄ−Ｃを用いて水素添加し、脱ベンジル化化合物を得た。
この化合物を水性アンモニアにより処理し、ハブテン４ａを得た。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う。
ジエチル２．　４．　６−トリメチルフエニルホスホネート２ｂ・乾燥ＴＨＦ　 （１００ｍｌ）中の２−ブロモメシチレン（４ｇ、２０ミリモル）ノ溶液に、− ７８°Ｃでアルゴン雰囲気の下に、ｎ−ブチルリチウム（１，６Ｍ、１６ｍ１） の溶液をシリンジを用いて滴下して添加し、次いで１時間攪拌した。
１時間後に、ＴＨＦ　（１０ｍｌ）中のホスホクロライド（４，１２ｇ、１．　 ２当量）の溶液を添加し、次いて１時間攪拌した。反応が完了した後に、このｌ 見合物に塩化アンモニウム溶液（１０％、２０ｍ１）を添加し、次いて３０分間 攪拌した。この有機相を分離し、乾燥させ、濃縮し、この生成物をフラッシュク ロマトグラフィにより精製し、ホスフェ−ト２　ｂを油状物として得た（１．　 ７５ｇ、３４％、Ｒｆ：０．３４、酢酸エチル：ヘキサン、ｌ：３）。
’ＨＮＭＲニア、４２（ｍ、ｌ０Ｈ）、６．９２（ｄ、２Ｈ）、４．１６（ｍ。
４Ｈ）、２．　６２（ｓ、６Ｈ）、２．３２（ｓ、３Ｈ）、１．　３２（ｔ、　 ６Ｈ）。
ベンジル２．　４．　６−トリメチルフエニルヒドロキシホスホネート２ｃ：メ チレンクロライド（１５ｍｌ）中のジエチルホスフェート２ｂ　（１，５ｇ。
５．８ミリモル）およびトリメチルシリルヨウダイト（２，４ｇ、１２ミリモル ）の溶液を、０°Ｃで１時間攪拌した。反応の完了後に、ナトリウムチオスルフ ェートの溶液（５％、５ｍ］）を加え、次いで１５分間攪拌した。この有機相を 分離し、乾燥し、次いて濃縮し、油状化合物を得た。得られた化合物をＴＨＦ（ ５ｍｌ）に溶解し、次いで稀ＨＣＩ（５％、５ｍ１）とともに１時間攪拌した。
この有機相を分離し、乾燥し、次いで濃縮し、ヒドロキシ化合物を油状物として 得た（Ｉｇ、８５％）。
’ＨＮＭＲ：１１．００（ｂｓ、２Ｈ）、７．６２（ｄ、２Ｈ）、３．３２（ｓ 、６Ｈ）、２．９６　（ｓ、３Ｈ）。
ピリジン（１５ｍｌ）中のジヒドロキシ化合物（Ｉｇ、５ミリモル）、ベンジル アルコール（１，６ｇ、３当量）およびトリクロロアセトニトリル（４，３ｇ、 ６当量）の溶液を、７５°Ｃでアルゴン雰囲気の下に一夜にわたり加熱した。反 応の完了後に、溶媒を減圧て除去し、生成物をフラッシュクロマトグラフィによ り精製し、モノベンジル化化合物２ｃを油状物として得た（０．７２ｇ、５０％ 、Ｒｆ：０．３６、メタノール、メチレンクロライド、１：９）。
’　ＨＮＭＲ：１２．２０　（ｂｓ、ＩＨ）、７．３２　（ｍ、５Ｈ）、６．９ ２（ｄ、２Ｈ）、５．　０６　（ｄ、２Ｈ）、２．　６４　（ｓ、６８）、２． 　３２　（ｓ。
３Ｈ）。
ベンジル２．　４．　６−トリメチルフエニルホスホノクロリデート　２ｄ：ク ロロホルム（１０ｍｌ）中の、ヒドロキシ化合物２ｃ　（０，５８ｇ、２ミリモ ル）およびＰＣｌ、（０，５６ｇ、２ミリモル）の溶液を５０°Ｃで２時間加熱 した。反応の完了後に、溶媒を減圧で除去し、化合物を減圧で乾燥させた。
’ＨＮＭＲニア、４２（ｍ、５Ｈ）、６．９２（ｄ、２Ｈ）、５．４２（ｍ。
２Ｈ）、２．７２　（ｓ、６Ｈ）、２．４２　（ｓ、３Ｈ）。
メチレンクロライド（３ｍｌ）中のヒドロキシ化合物３ｆ　（３００ｍｇ、０゜ ３８ミリモル）およびＤＭＡＰ　（６１ｍｇ、０．５ミリモル）の溶液に、アル ゴン雰囲気の下に、メチレンクロライド中のホスホクロリデート２ｄ　（１５１ ｍｇ。
１．３当量）の溶液をシリンジから添加した。反応の完了後に、溶媒を減圧で除 去し、フラッシュクロマトグラフィにより精製し、３ｈを得た（１３８ｍｇ、３ ３％、Ｒｆ：０．４２、メチレンクロライド、酢酸エチル、ヘキサン、３：３・ ４）。
’ＨＮＭＲニア、８２（ｍ、４Ｈ）、７．２０（１８Ｈ）、６．４２（ｔ、２Ｈ ）、６．１８（ｔ、ＩＨ，ＮＨ）、５．７２（ｍ、ＩＨ）、５．４２（ｍ、ＩＨ ）、５．０２（ｍ、５Ｈ）、４．２４　（ｍ、３Ｈ）、３．４２（ｍ、４Ｈ）。
２、　６２−２．　４０　（Ｍｅのシングレット、１８Ｈ）。
５−（４−アミノブチル）−５−−０−（２，４，６−１−リメチルフェニルホ スホノイル）ウリジン　４ａ： 酢酸エチル（２ｍｌ）中の化合物３ｈ　（１５６ｍｇ、０．１４ミリモル）の懸 濁液を、Ｐｄ−Ｃ（１０％、＋５ｍｇ）の存在の下に、水素雰囲気中で２時間攪 拌した。反応の完了後に、触媒を濾別し、次いて溶媒を除去し、水素添加された 化合物（７ａｍｇ、５６％）を得た。
この水素添加化合物（７０ｍｇ、Ｏ，ＯＳミリモノリ、水酸化アンモニウム（５ ｍｌ）のメタノール（４ｍｌ）溶液を、封鎖管内で一夜にわたり加熱した。
反応の完了後に、溶媒を減圧で除去し、生成物を逆相ＨＰＬＣ、アセトニトリル （１）および水（９９）により精製し、純粋な化合物４ａを無色固形物を得た（ １４ｍｇ、３７％）。
’ＨＮＭＲニア、９２（ｓ、ＩＨ）、６．９２（ｄ、２Ｈ）、６．０２（ｄ。
ＩＨ）、４．３２（ｔ、ＩＨ）、４．１８（ｍ、ＩＨ）、４．０８（ｍ、ＩＨ） 。
３、　９２　（ｍ、ＩＨ）、３．　５３　（ｍ、ＩＨ）、３゜００　（ｍ、２Ｈ ）、２．　６２　（ｓ、６Ｈ）、２．　２２　（ｓ、３Ｈ）、２．　４２　（ｍ 、２Ｈ）。
例２ａ プロドラッグ、分子内トリメトキシベンゾエート−５−フルオロウリジン、化合 物ｌＯ１の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図２ａを参照する。
その製造が例８ａに記載されている、ブロモ安息香酸５をリチウム−ハロゲン交 換に付し、次いて保護されているヨウドエタノール７によりアルキル化する（図 ２ａ参照）。この生成物８を脱水し、対称無水物を生成させる。この生成物を５ −フルオロウリジンと反応させ、安定なプロドラッグ先駆化合物９を得る。
この先駆化合物の保護基は迅速に分離することができ、プロドラッグＩＯが得ら れる。
詳細・この合成は下記のとおりにして行う：２−ブロモエチルー４．４′−ジメ トキシトリフェニルメチルエーテル　６ＤＭＦ　（１００ｍ１）中の２−ブロモ エタノール（１００ミリモル）および４゜４゛−ジメトキシトリフェニルメチル クロライド（１００ミリモル）の溶液に、室温で、ＤＭＡＰ　（１００ミリモル ）を添加する。１６時間後に、この混合物を水（３００ｍｌ）中に注ぎ入れ、次 いて酢酸エチル（３ｘｌＯＯｍｌ）により抽出する。この有機相を水（１００ｍ ｌ）により洗浄し、無水Ｎａｆ　ＳＯａ上で乾燥し、次いで減圧て濃縮する。こ の混合物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色固形物とし て得る。
４．４′−ジメトキシトリフェニルメチル−２−ヨウドエチルエーテル　７アセ トンｌｏＯｍｌ中のブロマイド６（１０ミリモル）およびＮａ１（１０ミリモル ）の溶液を、光を排除して２時間加熱還流させる。生成する混合物を室温まで冷 却し、固形物を濾別し、次いでこの濾液から溶媒を減圧で除去する。生成する黄 色油状物は、さらに精製することなく使用する。
ＴＨＦ５０ｍｌ中のブロマイド５（５ミリモル）の溶液に、温度を一９５°Ｃ以 下に維持しながら、ｔｅｒｔ−ブチルリチウム（ｎ−ペンタン中の１．７Ｍ、１ ５ミリモル）を添加する。この添加の完了後に、この混合物を一７８°Ｃまて温 める。
３０分後に、ヨウダイト７を少しづつ添加し、この混合物をＯ″Ｃまで温める。
水（５０ｍｌ）を加え、次いでこの混合物のｐＨを、Ｏ，ＩＭ　ＨＣＩを用いて ３に注意して調整する。この混合物を酢酸エチル（３Ｘ１００ｍｌ）により抽出 する。この有機相を無水Ｎａ２ＳＯｓ上で乾燥し、次いで減圧で濃縮する。この 混合物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状物として 得る。
ＣＨ２ＣＩ　２１０ｍｌ中のＤＣＣ（２，５ミリモル）の溶液を、室温でＣＨｚ 　ＣＩｗ　ｌ　０ｍｌ中の酸８（５ミリモル）の溶液に加える。１時間後に、こ の混合物から固形物を濾別し、この固形物をＣＨ，ＣＬ　５ｍｌにより洗浄し、 次いで集めたを機相に、ＣＨ２Ｃｌ、１０ｍｌ中の１−ヒドロキシベンゾトリア ゾール（０，２５ミリモル）と５−フルオロウリジン（２，５ミリモノりとの混 合物を添加する。反応の完了がＴＬＣにより看取された時点で、この混合物を減 圧で濃縮する。この混合物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物 を無色固形物として得る。
５＝−０−［２−（２−ヒト冶キシエチル）　−３，４，５−トリメトキシベン ゾイル］−５−フルオロウリジン　１０ エーテル９（０，１ミリモル）を、室温で８０％水性酢酸（１０ｍｌ）に少しづ つ添加する。１５分後に、この混合物を飽和ＮａＨＣＯｓ　（ｌ　００ｍ１）中 に注ぎ入れ、次いてエーテル（３Ｘ１００ｍｌ）により抽出する。この有機相を 集め、気体発生かもはや見られなくなるまで、各１００ｍ１の５％ＮａＨＣＯ， により洗浄する。この有機相を次いて、プライン（１００ｍ＋）により洗浄し、 Ｎ　ａ　２　Ｓ　Ｏ４上で乾燥し、次いて減圧で濃縮する。この混合物をフラッ シュクロマトグラフィにより精製し、生成物を得る。
例２ｂ 例２ａのプロトラッグのハプテン、トリメトキシベンゾエート−５−フルオロウ リジンの環状ホスホネート、化合物１５、の製造この例の番号付き化合物に関し ては、図２ｂを参照する。
環状ホスホネート１３は、代表的合成計画、すなわちアリールホスホネートｌｌ の臭素化、リチェート化、ヒ１−ロキシアルキル化、および環化に従い合成され る。ホスホネートエステルを鹸化し、塩素化し、次いて２′、３−−０−イソプ ロピリデン−５−フルオロウリジン６５と反応させ、引き続いて、５０％ギ酸に より６５°Ｃて酸加水分解し、ハブテン１５を得る。
詳細：この合成は下記のとおりにして行うニジエチル３．　４．　５−）リメト キシフェニルホスホネート　ｌｌ化合物１１は、化合物２に係わる方法に従い、 ジエチルホスファイトを用いて合成する。
ジエチル２−ブロモ−３，４，５−トリメトキシフェニルホスホネー）　１２氷 水浴により冷却した酢酸１０ｍ１中のエステル１１（１０ミリモル）の溶液に、 酢酸１０ｍ１中の臭素（ｌＯミリモル）の溶液を滴下して加える。生成する混合 物の赤色が消失した後に、この混合物を飽和　ＮａＨＣＯｓ　（ｌ　００ｍ１） 中に注ぎ入れ、次いて酢酸エチル（３Ｘ１００ｍｌ）により抽出する。この有機 相を集め、気体発生が消失するまで、５％ＮａＨＣＯｓ各１００ｍ１により洗浄 する。この有機相を次いでブライン（１００ｍｌ）により洗浄し、無水Ｍｇ５Ｃ ）ａ上で乾燥し、次いで減圧で濃縮する。この混合物をフラッシュクロマトグラ フィにより精製し、生成物を淡黄色固形物として得る。
エチル２．　３−　（３，４，５１−リメトキシベン′ハブチルホストネート　 １３ＴＨＦ５０ｍｌ中のブロマイド１２（５ミリモル）の溶液に、−９５℃以下 の温度を維持しながら、ｔｅｒｔ−ブチルリチウム（ｎ−ペンタン中の１．７Ｍ 溶液、１０ミリモル）を添加する。この添加が完了した後に、この混合物を一７ ８°Ｃまで温める。３０分後に、エチレンスルホネート（５ミリモル）を少しづ つ添加し、この混合物を室温まて温める。１時間後に、ＩＭ　ＨＣＩ　（５０ｍ ｌ）を添加する。さらに１時間後に、この混合物を酢酸エチル（３Ｘ１００ｍｌ ）により抽出し、この有機相を無水Ｍｇ５ＯＡ上で乾燥し、次いて減圧で濃縮す る。この混合物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状 物として得る。
２、　３−　（３，４，５−１−リメトキシベン′ハブチルホストン酸　１４メ タノール５０ｍ１中のエステル１３（５ミリモル）の溶液を、ＴＬＣにより観測 して出発物質が消費されるまで、室温で、１ＭＮａＯＨによりｐＨ１２に維持す る。そのｐＨを次いて、ＩＭＨＣＩにより２に調整し、次いでメタノールを減圧 で蒸発させる。この水性混合物を酢酸エチル（３Ｘ１００ｍｌ）により抽出し、 この有機相を無水Ｍｇ５Ｏａ上で乾燥させ、次いで減圧で濃縮する。この混合物 をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状物として得る。
５＝−０−［２，３−（３，４，５−トリメトキシベンゾ）ブチルホストニル］ −５−フルオロウリジン　１５ 氷水浴により冷却したｃＨｚ　Ｃ１ｔ　５０ｍ１中の酸１４（５ミリモル）の溶 液に、チオニルクロライド（５ミリモル）を添加する。１時間後に、揮発性成分 を減圧で蒸発させ、この残留物をＣＨｔ　Ｃ１ｚ　１０ｍ　Ｉ中に取り、次いで 氷水浴により冷却したＣＨｔ　Ｃ１ｔ　２５ｍ１中の２−．３−−０−イソプロ ピリデン−５−フルオロウリジン６５（５ミリモル）およびトリエチルアミン（ １５ミリモル）の溶液に添加する。４時間後に、この混合物を０．１Ｍ　ＨＣＩ 　（５０ｍｌ）中に注ぎ入れ、相を分離させ、次いでこの水性相を酢酸エチル（ ２Ｘ５０ｍｌ）により抽出する。この有機相を集め、無水Ｍｇ５Ｏ４上で乾燥さ せ、次いて減圧で濃縮する。この混合物をフラッシュクロマトグラフィにより精 製し、イソプロピリデン保護中間体を得る。この中間体を６５°Ｃで２時間５０ ％水性ギ酸（ＩＯｍｌ）により処理し、次いて減圧で濃縮し、５−−０−　［２ ，３−（３゜４．５４リメトキンベン゛カブチルホストニル］−５−フルオロウ リジン　１５を生成させる。
例３ プロドラッグ、ガラクトシル　シトシン　ｂ−Ｄ−アラビノフラノシド、化合物 １９、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、ＩＡ３を参照する。
シトシン　β−Ｄ−アラビノフラノシドを先ず、ベンゾイルクロライドおよび水 酸化ナトリウムをそれぞれ用いて、過ベンゾイル化し、次いで〇−説ベンゾイル 化して、Ｎ４−ベンゾイルａｒａ−Ｃ１６を得た。引き続いて、アセトニトリル 中のトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネートの存在の下に、β−ガラ クトース　ペンタアセテートとカップリングさせて、部分的に保護されている化 合物１７を生成させた。ジクロロメタン中で無水酢酸およびＤＭＡＰによりアセ チル化して、充分に保護されている化合物１８を生成させ、５０℃でメタノール 中においてアンモニアを使用し、この生成物から保護基を完全に分離し、最終生 成物β−ｇａｌ　ａｒａ−Ｃ１９を得た。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：Ｎ４−ベンゾイルシトシンーβ−Ｄ −アラビノフラノシド　１６乾燥ピリジン５０ｍ１中のシトシンβ−Ｄ−アラビ ノフラノシド１．　２２ｇ（５，０２ミリモル）の懸濁液をＯ’Ｃに冷却した。
ベンゾイルクロライド１０ｍ１を加え、この混合物を室温で１６時間撹拌した。
この混合物を５％水性重炭酸ナトリウム溶液７５ｍ１中に注ぎ入れ、次いでＣＨ ２Ｃ１２（２Ｘ１５０ｍｌ）により抽出した。この有機相を、水（５０ｍｌ）に より洗浄し、無水Ｍｇ５ＯＪ上で乾燥し、次いて減圧で濃縮した。この混合物を ピリジン／メタノール／水（５：　３　：　２容積／容積）５０ｍｌ中に溶解し 、次いで水浴中で冷却させた。この溶液に、冷いピリジン／メタノール／水（５ ：　３　：　２容積／容積）中の２Ｍ水酸化ナトリウム５０ｍ１を添加した。こ の反応混合物をＯ″Ｃで１５分撹拌し、次いでそのｐＨを、塩化アンモニウムの 添加により７に調整した。この混合物を減圧で濃縮し、次いでメタノール２０ｍ １を加えた。この混合物を濾過し、この固形物をメタノール（３Ｘ２０ｍｌ）に よりさらに洗浄した。洗浄液および濾液の全部を集め、減圧で濃縮した。メタノ ール／ＣＨｔ　ｅｌ！　（２：　ｓ容積／容積）中に再溶解し、この混合物をメ タノール／ＣＨ！　Ｃ１２（１：　９　２　：　８容積／容積）を使用する　フ ラッシュクロマトグラフィにより精製した。夾雑物を全部除去するには、上記の フラッシュクロマトグラフィを２回行う必要があり、これによりＮ４−ベンゾイ ルシトシン−β−Ｄ−アラビノフラノシド　１６　１゜５ｇ（８６％）が得られ た。
’　ＨＮＭＲ（Ｄｔ　Ｏ＋ＤＭＳＯ−ｄａ、２：８ｖ／ｖ）ｄａ、２　（ＩＨ， ｄ。
Ｊｓ、、７Ｈｚ、Ｈ−６）、７．９５　（２Ｈ，ｄ、Ｊ　７Ｈｚ、ｏ−Ｐｈプロ トンＸ２）、７．７５−７．３５　（４Ｈ，ｍ、Ｈ−５およびｐｈプロトンＸ３ ）、６゜１　（ＩＨ，ｄ、　Ｊｒ、ｒ　４Ｈｚ、　Ｈ１’）、４．　２　３．　 ９（３Ｈ，ｍ、　Ｈ−２’　、　Ｈ−３’およびＨ−４’）、および３．　６８ 　（２Ｈ，ｄ、Ｊｒ、ｒ　４Ｈｚ。
乾燥アセトニトリル（５ｍｌ）中のガラクトースペンタアセテート（１，１７ｇ 、３ミリモル）および化合物１６（２ミリモル）の溶液に、アルゴン雰囲気の下 に、乾燥アセトニトリル（２，５ｍ１）中のトリメチルシリルトリフルオロメタ ンスルホネート（ＴＭＳｔ　ｆ、３５４ｍｇ、１．５ミリモル）の溶液をシリン ジから２分間て添加した。次いでこの反応混合物を室温で１時間撹拌した。ＴＬ Ｃ分析は２種の新規化合物の生成をともない、出発物質の消失を示した（ＴＬＣ １酢酸エチル）。次いでこの反応混合物を水性重炭酸ナトリウムにより静め、次 いて酢酸エチル（５０ｍｌ）により抽出した。この有機相を分離し、乾燥させ、 次いで濃縮し、化合物の混合物を含有する無色固形物を得た。この混合物をフラ ッシュクロマトグラフィに付し、化合物１７を得た（０．８ｇ、５９％およびＲ ｆ：０．３６、クロロホルム中ｌＯ％メタノール）。
’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣＬ　）：　９．６０　（ｂｓ、ＩＨ，ＮＨ）、８．１６　 （ｄ。
ＩＨ）、７．８６−７．４２　（ｍ、６Ｈ芳香族およびＩＨヘテロ環）、６．　 ２０（ｄ、ＩＨ）、５．　３２　（ｍ、３Ｈ，アセテートのＣＨＯ）、４．　６ ２　（ｄ、ＩＨ，Ｊ＝７．　６Ｈｚ、アノ７−）、４．　２０−３．　７８　（ ｍ、８Ｈ）、３．２０（ｂｓ、ＩＨ）　、２．６２　（ｂｓ、ＩＨ，２ＸＯＨ， Ｄｔ　Ｏと交換）、２．１８（ｓ、３Ｈ）、２．　０４　（ｓ、６Ｈ）、２．　 ０１　（ｓ、３Ｈ，アセテートの全ＣＨ，） 化合物１７を、メチレンクロライド中で無水酢酸ＤＭＡＰを使用することによっ て、過アセチル化し、化合物１８を得た（Ｒｆ：０．２８、酢酸エチル２回、８ ６％）。この生成物をフラッシュクロマトグラフィにより精製した。
’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣＬ）：８．＋８　（ｄ、ＩＨ，Ｊ＝７．５）、７．８２− ７、　４２　（ｍ、６Ｈ，芳香族、ＩＨへテロ環）、６．　４２　（ｄ、ＩＨ， Ｊ＝５゜１Ｈｚ）、５．　６２−５．　０８　（ｍ、５Ｈ，アセテートの０ＣＲ ）、４．６０（ｄ、ＩＨ，Ｊ＝７．　８Ｈｚ、アノ７−’）＋　４．　２８−３ ．　８２　（ｍ、６Ｈ，０ＣＨ）、２．１８（ｓ、３Ｈ）、２．１４（ｓ、３Ｈ ）、２．１０（ｓ、６Ｈ）。
２．０６　（ｓ、３Ｈ）、２．　００　（ｓ、３Ｈ，全部がアセテートのＣＨｓ ）。
メタノール（５ｍｌ）およびＮＨ４ＯＨ溶液（５ｍｌ）中の化合物１８（０゜５ ｇ；０．６ミリモル）の溶液を、５０°Ｃで１６時間加熱した。ＴＬＣ分析は反 応の完了を示した。溶媒を減圧により除去し、この粗製生成物を、溶剤として水 中２％メタノールを使用して、中圧逆相　Ｃ１８クロマトグラフィに付し、β− ｇａｌ−Ａｒａ−Ｃを純粋な無色固形物して得た（０．２２ｇ、９２％）。
’　ＨＮＭＲ（Ｄｔ０）ニア、８０　（ｄ、ＩＨ）、６．２２　（ｄ、ＩＨ）、 ６゜０２　（ｄ、ＩＨ）、４．　４８　（ｄ、ＩＨ，Ｊ＝８．　１Ｈｚ、アノ７ −）、４．４０　（ｔ、ＩＨ）、４．　２４　（ｍ、２Ｈ）、３．　９２（ｍ、 ２Ｈ）、３．　８０−３゜６０　（ｍ、６Ｈ）　。
例４： プロドラッグ、ガラクトシル　５−フルオロウリジン、化合物２４、の製造この 例の番号付き化合物に関しては、図４を参照する。
β−ｇａｌ　５−フルオロウリジン２４の合成は、同様の計画で行う。５−フル オロウリジンを、ＤＭＦ中のイミダゾールの存在の下に、０℃でｔ−ブチルジメ チルクロロシランにより処理して、部分的に保護されている化合物２ｏを生成さ せた。引き続いて、ＤＭＡＰおよびトリエチルアミンの存在の下に、無水酢酸と 反応させ、充分に保護されているヌクレオシド２１を生成させた。シリル保護基 の分離は０°Ｃで１）−トルエンスルホン酸を用いて達成された。生成する生成 物２２を、アセトニトリル中てトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネー トの存在の下にβ−ガラクトースペンタアセテートとカップリングさせ、充分に 保護されている化合物２３を生成させた。メタノール中で、５０℃においてアン モニアにより完全保護基分離を行い、最終生成物、β−ｇａｌ　５−フルオロウ リジン２４を得た。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：化合物２１の製造： ＤＭＦ中の５−フルオロウリジン（１，３１ｇ、５ミリモル）の冷却溶液に、イ ミダゾール（０，８１６ｇ、１２ミリモル）およびｔ−ブチルジメチルクロロシ ラン（０，９０ｇ、６ミリモル）を順次添加し、内容物を０℃において２時間撹 拌した。反応の完了後に（ＴＬＣ、クロロホルム中１０％メタノール）、内容物 を酢酸エチル（ｌｏＯｍｌ）含有分離ロートに移し、水（３回、各回２５ｍ１） により洗浄し、次いでこの有機層を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯｌ）　、次いて 濃縮し、モノシリル化生成物２０を油状化合物として得た（Ｒｆ：０．４４、ク ロロホルム９１０％メタノール）。
上記で得られた生成物２０　（１，８０ｇ、粗製、５ミリモル）をメチレンクロ ライド（２０ｍｌ）に溶解し、次いでＤＭＡＰ　（１，３４ｇ、Ｉ　ｌミリモル ）および無水酢酸（１，２２ｇ、１２ミリモル）を順次添加し、この反応混合物 を室温で１．５時間攪拌した。ＴＬＣ分析（１：１酢酸エチル　へキサン）は、 反応の完了を示した。次いで、この反応混合物を分離ロートに移し、水により洗 浄し、乾燥させ、次いて濃縮し、生成物をフラッシュクロマトグラフィにより精 製し、化合物２１を純粋な形態で得た（Ｒｆ：０．４８、Ｉ　：　ＩＥｔＯＡｃ およびヘキサン、１．９０ｇ、８３％）。
’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ）；８．０２　（ｄ、ＩＨ）、６．２６　（ｄ、ＩＨ ）。
５、　３４　（ｍ、２Ｈ，アセテートのＣＨＯ）、４．２２　（ｍ、ＩＨ）、３ ．８６（ＡＢ　ｑ、２Ｈ）、２．　０８．　２．　０４　（２ｘｓ、３Ｈ，それ ぞれアセテートのＣＨｓ）、０．　９２　（ｓ、９Ｈ，ｔ−ｂｕ　ｓｉ）、　０ ．　１２　（ｓ、　６Ｈ，シリルのＣＨ，）。
１雪ＣＨＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ）：１６９．９９，１６９．７２，１５７．０６゜ １５６．７１，１４９．６１，１４２．５１，１３９．３５，８５．４６，８４ ゜＋２．７３．２５．７＋、　９４．６３．２８．２５．７４．２０．７０．２ ０゜６８、　２０．　３７．　１８．　３７．　５．　７０゜化合物２２の製造 ・ メタノール（６ｍｌ）およびメチレンクロライド（１２ｍｌ）中の化合物２１（ １，６９ｇ、３．５ミリモル）の冷却した溶液に、触媒量のＰＴＳＡ　（１００ ｍｇ）を加え、この反応混合物を０°Ｃにおいて３０分間撹拌した。反応の完了 後に（ＴＬＣ）　、反応をトリエチルアミン（０，５ｍ１）により静め、次いで 溶媒を除去し、粗製化合物２２を　油状物として得た。この生成物をクロマトグ ラフィに付し、化合物２２を純粋な形態て得た（Ｒｆ：０．２２、Ｉ：ＩＥｔＯ Ａｃおよびヘキサン、９２０ｍｇ、７６％）。
’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣＬ　）；　８．０９　（ｄ、ＩＨ，Ｊ＝６．３Ｈｚ）、６ ．１４　（ｄ、ＩＨ）、５．　４３　（ｍ、２Ｈ，アセテートのＣＨＯ）　、４ ．　２１　（ｍ。
ＩＨ）、　３．８６（ＡＢ　ｑ、　２Ｈ）、　２．０８．２．０４（２ｘｓ、　 ３Ｈ，それぞれアセテートのＣＨＩ’）。
Ｉ３ＣＨＮＭＲ（ＣＤＣＩＩ）：１７０．３４，１７０．０８．１５７，５６゜ １４９．５５，１３９．１７，８６．６１，８３．７２，７３．２１．７１．４ ９、　６１．　６５．　２０．　６５．　２０．　３８力ツプリング化合物２３ の製造ニ ガラクトースペンタアセテートと化合物２２とのカップリング反応は、前記と同 様の方法によって行い、カップリング生成物２３を得た（Ｒｆ：０．２０、ｌ・ ＩＥｔＯＡｃ：ヘキサン、５９％）。
’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１＊　）；９．６０　（ｂｓ、ＩＨ，ＮＨ）、８．１８　 （ｄ。
ＩＨ，Ｊ−６，６Ｈｚ）、ａ、３４　（ｄ、ＩＨ）、５．　４６−５．　０８　 （ｍ、５Ｈ，アセテートの０ＣＲ）、４．６１　（ｄ、ＩＨ，Ｊ＝８．１Ｈｚ、 アノマー）。
４、　３０−３．　７２（ｍ、６Ｈ）、２．　１６．　２．　１３．　２．　１ １．　２．　０９゜２、　０５．　２．　０１　（６Ｘｓ、各３Ｈ，アセテート のＣＨ，）。
”ＣＨＮＭＲ（ＣＤＣ１１）：１７０．３７．１７０．１０，１６９．３４゜１ ５７．００．＋５６．６４，１４９．４３，１４２．５２，１３９．３７，１０ ０、　４４．　８５．　８３．　８２．　３５．　７３．　３５．　７＋、６３ ．　７０．　３５゜７０、　３４．　６８．　５７．　６８．　１１．　６６、 　７４．　６＋、１３．　２０．　３４゜２０、　０７．　２０．　２９゜ プロトラッグ、β−Ｄ−Ｇａｌフルオロウリジン２４の製造：前記と同一の方法 により、化合物２３をプロドラッグ、化合物２４に変換した（９２％） 宜　ＨＮＭＲ（Ｄ、Ｏ）　：８．　１２　（ｄ、ＩＨ）、５．　８８　（ｄ、Ｉ Ｈ）、４゜４４　（ｄ、ＩＨ，Ｊ＝７Ｈｚ、アノｖ−）　、４．　３６−３．　 ６２　（ｍ、１１Ｈ）　。
例５ａ 例３および４のプロドラッグのハブテンの先駆化合物、化合物２５、の製造この 例の番号付き化合物に関しては、図５ａを参照する。
図５ａの合成経路に従い、アミノヌクレオシド２５を５−フルオロウリジンから 製造する。化合物２２（図４）を、トリフェニルホスフィンおよび四臭化炭素に より活性化させ、次いで引き続いてナトリウムアジドにより処理し、アジド中間 体を生成させる。この中間体を１０％Ｐｄ−Ｃを用いて水素添加してアミンを生 成させ、次いでメタノール中でナトリウムメトキシドを用いて保護基を分離し、 アミノヌクレオシド２４を得る。このアミノヌクレオシドを、後続のカップリン グ反応に使用し、アミジン化合物３０ｂを得る（Ｒ＝５−フルオロウリジン）。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：５′−アミノー５−フルオロリジン ２５の製造メチレンクロライド（０，２Ｍ）中の５′−ヒドロキシ−２−、３− −ジアセトキシ−５−フルオロウリジン２２（１当量）の溶液に、トリフェニル ホスフィン（１，１当量）および四臭化炭素（１，２当量）を順次添加し、この 混合物をＯ″Ｃて撹拌する。反応の完了後に、この生成物は後続の工程のための 用意ができている。
この粗製ブロマイド化合物（１当量）をＤＭＦ　（０，２Ｍ）に溶解し、ナトリ ウムアジド（３当量）とともに６０°て加熱する。反応の完了後に、この反応混 合物を酢酸エチル含有分離ロートに移した。この溶液を水で洗浄し、その有機層 を分離し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、次いで減圧で濃縮した。この粗製生成 物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、化合物２５の先駆化合物である 、アジド誘導体を生成させた。
このアジド誘導体を酢酸エチル中に溶解し、活性炭上の１０％パラジウム（０゜ ０５当量）を添加する。この撹拌した懸濁液を、水素ガスで満たした風船を用い て、水素雰囲気の下に置く。反応の完了後に、触媒をセライトパッドに通して濾 別し、濾液を集め、濃縮し、化合物　２５の相当するアミノ先駆化合物を得る。
このアミノ先駆化合物をメタノールに溶解し、次いでナトリウムメトキシド（０ ，０５当量）を添加する。この溶液を、室温で撹拌し、反応が完了した時点て、 氷酢酸（０，０５当量）を添加し、この混合物を減圧で濃縮する。化合物２５を 、溶剤として水中のメタノールを使用する中圧逆相Ｃ］８クロマトグラフィによ り精製する。
例５ｂ： 例３および４のプロドラッグのハブテン、化合物３０ａおよび３０ｂの製造この 例の番号付き化合物に関しては、図５ｂおよび５ｃを参照する。
アミジン化合物３０ａおよび（または）３０ｂ　（Ｒ＝ａｒａＣまたは５−フル オロウリジン）の製造は、２種の異なる合成経路により達成することができる。
合成経路の１つは市販のジアセトンＤグルコースから出発しく図５ｂ、この方法 は例５ｂに記載されている）、一方他の１つはグルコースピラノースから出発す る（図５０、この方法は例５ｃに記載されている）。
ジアセトンＤグルコースから出発する方法では、第１工程がそのヒドロキシ基を ＤＭＦ中でイミダゾールの存在の下に、ｔ−ブチルジメチルクロロシランにより シリル化することを包含する。引き続いて、水性酢酸で処理すると、５，６−ジ オールが得られ、このジオールを次いでその両級ヒドロキシ基の位置でｔ−ブチ ルジメチルクロロシランによりシリル化し、次いでトリエチルアミンの存在の下 にＭｓＣｌで処理し、残りの第２のヒドロキシ基をメシレートに変換する。生成 したメシレート化合物２６を次いで、先ずアセトン中でナトリウムヨウダイトと 反応させ、次いでこのヨウダイト誘導体をＤＭＦ中でナトリウムアジドで処理す ることによりアジド化合物２７に変換する。この化合物２７を６０°Ｃで水性酢 酸により処理することにより、そのアセトニド基を加水分解させる。生成したジ オールを次いて、水性ジオキサン中で臭素を用いて、そのアノマ一部位で酸化し て、ラクトン誘導体を生成させ、次いでｔ−ブチルジメチルクロロシランにより シリル化して、ラクトン化合物２８を生成させる。化合物２８のアジド基を、炭 素上の１０％Ｐｄを用いて水素添加することによりアミノ基に変換させ、この結 果として、グルコラクタム２９ａ誘導体に転位させる。ミツノブ（Ｍｉｔｓｕｎ ｏｂｕ　）反応法を使用して第２のヒドロキシ基を転位させると、ガラクトラク タム２９ｂ誘導体が得られる。メルバイン（Ｍｅｅｒｗｅｉｎ）の試薬を用いて 活性化し、引き続いてアミノヌクレオシド２５（例５ａ）とカップリングさせ、 次いでフルオライドにより脱シリル化すると、最終アミジン化合物３０ｂ（Ｒ＝ ５−フルオロウリジン）か得られる。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：化合物２６の製造 乾燥ＤＭＦ　（５９ｍｌ）中のジアセトンＤ−グルコース（５，２ｇ、２０ミリ モル）の混合物に、イミダゾール（３，２６ｇ、４８ミリモル）、ｔ−ブチルジ メチルクロロシラン（３，６０ｇ、２４ミリモル）を順次添加し、次いでこの内 容物を室温で４時間撹拌する。反応の完了後に、この反応混合物を酢酸エチル（ ２５０ｍｌ）合作分離ロートに移し、次いで水により洗浄し、乾燥し、濃縮し、 生成物を次いでフラッシュクロマトグラフィにより精製する。
得られたシリル化化合物（６，７３ｇ、１７．９ミリモル）をＴＨＦ（５０ｍｌ ）に溶解し、次いで水性酢酸（６ｍｌ）とともに６時間撹拌する。反応の完了後 に（ＴＬＣ）　、溶媒を除去し、生成物次いでフラッシュクロマトグラフィによ り精製する。
上記で得られたジオール（５，３８ｇ、１６．１ミリモル）を乾燥ＤＭＦ　（６ ０ｍｌ）に溶解し、次いでイミダゾール（２，６２ｇ、　２．　４当量）および ｔ−ブチルジメチルクロロシラン（１，２当量）を順次添加し、次いでＯ”Ｃで ２時間撹拌する。反応の完了後に、酢酸エチル（２００ｍｌ）に溶解し、次いで 水により洗浄し、乾燥し、濃縮し、この生成物を次いでクロマトグラフィにより 精製する。
このモノシリル化ヒドロキシ化合物（５，６ｇ、１２．　５ミリモル）を、メチ レンクロライド（４０ｍｌ）に溶解し、次いで０°Ｃに冷却し、次いでトリエチ ルアミ：／（２，７ｍ１）およびＭｓＣｌ　（１，８５ｇ、１．３当量）を順次 添加し、次いて内容物を０°Ｃて３時間撹拌する。反応の完了後に、分離ロート に移し、次いで水により洗浄し、乾燥し、濃縮し、相当するメシレート化合物２ ６を生成させる。
アジｌζ２７の製造： アセトン（５０ｍｌ）中のメシレート２６　（５，２６ｇ、１０ミリモル）、ナ トリウムヨウダイト（１，９３ｇ、！３ミリモル）の混合物を４時間加熱還流さ せる。反応の完了後に、溶媒を除去し、生成物を酢酸エチル（１００ｍｌ）に溶 解し、次いで水により洗浄し、乾燥し、生成物を次いでクロマトグラフィにより 精製する。
乾燥ＤＭＦ中のヨウダイト（４，５４ｇ、８ミリモル）、ナトリウムアジド（１ ，３０ｇ、２０ミリモル）の混合物を６０°Ｃで６時間加熱する。反応の完了後 に、酢酸エチル（２００ｍｌ）により稀釈し、次いで水により洗浄し、乾燥し、 濃縮する。この生成物を次いでクロマトグラフィにより精製して、アジド２７を 純粋な化合物として得る。
ラクトン２８の製造： 得られたアジド２７　（２，８９ｇ、６ミリモル）をＴＨＦ　（３０ｍｌ）およ び水性酢酸（１０ｍｌ）中に溶解し、この内容物を６０″Ｃで６時間加熱する。
反応の完了後に、溶媒を完全に除去し、生成物を酢酸エチルに溶解し、乾燥し、 濃縮して、ジオールを得る。
水性ジオキサン（１０％、２０ｍ１）中の上記で得られたジオール（１，７７ｇ 、４ミリモル）に、臭素（１当量）ジオキサン溶液を加え、生成する混合物を室 温で２時間撹拌する。反応の完了後に、酢酸エチル（５０ｍｌ）により稀釈し、 次いで水性千オ硫酸ナトリウムにより洗浄し、乾燥し、濃縮し、ヒドロキシラク トンを得る。
上記ラクトンのヒドロキシル基を、前記と同様にｔ−ブチルジメチルシリルエー テルにより保護し、ラクトン２８を得る。
ラクタム２９ａの製造・ メタノール（１０ｍｌ）中のアジド２８　（１，１０ｇ、２ミリモル）およびＰ ｄ−Ｃ（１０％、１１０ｍｇ）の懸濁液を、水素風船を用いて４時間水素添加す る。反応の完了後に、触媒をセライトに通して濾別し、茨いて溶媒を除去し、ラ クタム２９ａを得る。
ガラクト配置を有するラクタム２９ｂの製造：上記で得られたラクタム２９ａを 以下に示すようにしてガラクトラクタム２９ｂに変換する。メチレンクロライド （８ｍｌ）中のラクタム２９ａ　（０，８６ｇ、１、　６ミリモル）および酢酸 （２ｍｌ）の溶液に、０℃でトリフェニルホスフィン（０，４１９ｇ、ｌ、６ミ リモル）およびジエチルアゾジカルボキシレート（０，２９５ｇ、１．７ミリモ ル）を順次添加し、この反応混合物を２時間攪拌する。反応の完了後に、　溶媒 を除去し、生成物をクロマトグラフィにより単離する。得られたアセテートをナ トリウムメトキシドにより加水分解して、ガラクトラクタム２９ｂを得る。
ガラクトラクタム２９ｂ（１当量）、メルバインの試薬（トリエチルオキソニウ ムテトラフルオロボレート、ジクロロメタン中の１Ｍ溶液、１．２当量）の混合 物をジクロロメタン中で室温において、１時間撹拌する。アミノヌクレオシド２ ５（１当量）を次いで加え、反応が完了した時点で、生成物をフラッシュクロマ トグラフィにより精製する。
例５ｃ・ 例３および４のプロドラッグのハブテン、化合物３０ａおよび３０ｂ、の別法に よる製造 この例の番号付き化合物に関しては、図５０を参照する。
５−フルオロウリジンを使用するガラクトース−β−５−フルオロウリジンの製 造は、市販のグルコビラノース３Ｉから出発する。触媒量のｐ−）ルエンスルホ ン酸の存在の下に、アセトン中の２．２−ジメトキシプロパンにより処理し、保 護化合物３２を得る。残りのヒドロキシ基をｔ−ブチルジメチルクロロシランに よりさらに保護すると、充分に保護されている化合物３３が得られる。ベンジル アルコールとともに加熱還流させ、ラクトンを開環させ、生成したヒドロキシ化 合物３４をＭｓＣＩによりメシル化する。引き続くアジド化合物３５への変換は ２工程で達成でき、第１工程で、そのメシレート基をアセトン中でナトリウムヨ ウダイトと反応させ、次いでそのヨウダイト基をＤＭＦ中でナトリウムアジドを 用いてアジド基により置き換える。炭素上の１０％Ｐｄを用いて水素添加するこ とにより、このアジド基をアミノ基に変換し、このアミノ基をラクタムに環化す る。このアセトニドをトリフルオロ酢酸による処理によって保護基を分離して、 ジオールを生成させ、次いで両級アルコールをｔ−ブチルジメチルクロロシラン によりさらに保護し、グリコラクタム化合物２９ａを生成させる。第２のヒドロ キシ基はミツノブの反応方法の使用を包含し、引き続いてこのアミドの活性化お よびカップリングを、それぞれメルバインの試薬およびアミノヌクレオシド２５ （例５ａ）を用いて行う。最後の保護基分離を、フルオライドを使用して行い、 アミジン化合物３０ｂ（Ｒ，＝５−フルオロウリジン）を生成させる。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う・ラクトン３２の製造： メチレンクロライド（４００ｍｌ）およびアセトン（１００ｍｌ）中のヒドロキ シ化合物３１　（８，９０ｇ、５０ミリモル）、２．２−ジメトキシプロパン（ ４当量）およびＰＴＳＡ（０，５ｇ）の混合物を、４時間撹拌する。反応の完了 後に、トリエチルアミン（３ｍｌ）の添加により反応を静め、次いで溶媒を除去 し、生成する粗製化合物をクロマトグラフィにより単離し、化合物３２を得る。
シリル化化合物３３の製造： 乾燥ＤＭＦ中の化合物３２　（８，７２ｇ、４０ミリモル）、イミダゾール（４ ゜４当量）およびｔ−ブチルジメチルクロロシラン（２，２当量）の混合物を、 ６時間撹拌する。反応の完了後に、酢酸エチル（５０ｍｌ）により稀釈し、次い で水（１００ｍｌＸ２）により洗浄し、乾燥させ、濃縮し、生成物をクロマトグ ラフィにより単離し、化合物３３を得る。
化合物３４の製造： ベンジルアルコール（１００ｍｌ）およびクロロホルム（３００ｍｌ）の混合物 中の化合物３３　（１３，３８ｇ、３（Ｉミリモル）の溶液を６０″Ｃで、反応 が完了するまで加熱する。反応の完了後に、溶媒を除去し、生成物をクロマトグ ラフィにより単離し、化合物３４を得る。メタノールを使用すると、相当するヒ ドロキシメチルエステルが得られる。
アジドエステル３５の製造： ヒドロキシ化合物３４のアジド化合物３５への変換は、ヒドロキシ化合物２６の 化合物２７への変換に使用されたものと同一の反応順序を用いて達成される。
ラクタム２９ａおよびラクタム２９ｂの製造：化合物３５を水素添加しく前記の 条件の下に行う）、次いでトリフルオロ酢酸を用いる保護基分離（前記のとおり ）およびアルコール保護基の分離を行うと、２９ａか得られる。このラクタム２ ９ａをミツトモの反応条件を用いて（前記のとおり）、ガラクトラクタム２９ｂ に変換する。
化合物２９ａのアミジン化合物３０ｂへの変換は、前記と同一の方法により行う ことができる（前記参照）。
例６ プロトラッグ、脂肪族ジエチルアセタール保護アルドホスファミド、化合物３８ 、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図６を参照する。
ビス（２−クロロエチル）アミン塩酸塩を過剰のオキシ塩化リンとともに加熱す ると、蒸留の後に、ジクロロホスファミド３６が良好な収率で、結晶固形物とし て得られる。このジクロロホスファミド３６を１モル当量の３−ヒドロキシプロ ピオンアルデヒドジエチルアセタールと反応させると、モノクロロホスファミド ３７が得られる。この生成物をアンモニアにより処理すると、３．３−ジェトキ シフロピオニルＮ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）ホスホルジアミド３８が得 られる。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル ）ホスホラミドジクロライド　３６ビス（２−クロロエチル）アミン塩酸塩（５ ｇ）およびＰｏｃｋｓ　（１３ｍｌ）の混合物を、１２時間加熱還流させる。こ の間に、この混合物は均一な溶液になる。過剰のＰＯＣｌ、を蒸留（沸点１０５ ℃）により除去し、次いでこの生成物４．９３ｇを留出させる（沸点１１０−１ １４°Ｃ１０，１ｍｍＨｇ）、アセトン／ヘキサンから再結晶させ、生成物４． ５ｇを無色固形物として得る：融点：５４．５−５６°Ｃ（文献融点：５４−５ ６°Ｃ，Ｆｒｉｅｄｍａｎ、Ｏ，Ｍ、等、Ｊ、Ａｍ。
Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、７６（１９５４）６５５−６５８：　’ＨＮＭＲ（ＣＤＣ ｌｚ　）δ３．　６２−３．　６８（ｍ、２）、３．　７＋　−３，７７（ｍ、 ６）。
３．３−ジェトキシフロピオニルＮ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）ホスホラ ミドクロライド　３７ ＣＨ，ＣＬ　Ｓｍｌ中のジクロリゾート３６　（１，７５ｇ）の溶液を、ＣＨｔ 　ＣＬ　ｌ０ｍ１中のＤＭＡＰ　（０，９１ｇ）および３．３−ジェトキシ−１ −プロパツール（１，０ｇ）の混合物に滴下して添加した。１９時間後に、沈殿 か生成される。この沈殿を濾過により分離し、揮発性成分を減圧で除去する。
この残留物をシリカゲルの短いカラムに通し、２５％酢酸エチル／ヘキサンによ り、次いて３０％酢酸エチル／ヘキサンにより溶出し、生成物０．９５ｇを得る ；Ｒｆ　：０．３８　（２５％酢酸エチル／ヘキサン”）；　’ＨＮＭＲ（ＣＤ ＣＩ、）６１．２３（ｔ、６）、２．０６（ｑ、２）、３．４０−３．６０（ｍ 。
６）、　３．６２−３．７５（ｍ、　６）、　４．２１−４．３８（ｍ、　２） 、　４．６２（ｔ、１）。
３．３−ジェトキシプロピオニルＮ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）ホスホル ジアミド　３８ ＣＨＩ　Ｃ１ｚ　１０ｍ１中のクロリデート３７　（０，９５ｇ）の溶液に無水 アンモニアを２０分間吹き込み、沈殿を生成させる。この固形物を濾過により分 離し、次いで揮発性成分を減圧で除去し、油状物０．７１ｇを得る。この粗製生 成物の一部（１００ｍｇ）をシリカゲルの短いカラムに通し、５０％酢酸エチル ／ヘキサン中の３％ＥｔｓＮにより溶出し、生成物４６ｍｇを無色油状物として 得る：Ｒｆ：０．１６（３０％酢酸エチル／ヘキサン中の３％Ｅｔｓ　Ｎ）；　 ＩＲ（ＣＤＣ１ｚ）　３６００．３１００．２９７６、２９３２．２８４９．１ ５７３．１４４６．１３７６．１３４８，１２２５．１１３２，１０５６．９８ ５，７５２゜６５７ｃｍ−Ｉ；　’ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ　）δｌ、２０　（ｔ 、６）、１．　９５（ｑ、２）、３．　３４−３．　７５　（ｍ、１２）、４． 　００−４．　１５　（ｍ、２）。
４、　６３　（ｔ、ｌ）。
アセタール３８の安定性 アセタール３８の試料を室温で、ＤｔＯ中の０．　９重量％ＮａＣ１に溶解する 。
２日の後に、’ＨＮＭＲスペクトルに、変化は見られなかった。
例７： プロドラッグのグアニルハブテン、脂肪族ジエチルアセタール保護アルドホスフ ァミド、化合部４３、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図７を参照する。
Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミノエチルホスホン酸３９は、２−アミノホスホン酸をジー ｔｅｒｔ−プチルジカルポネートと反応させることにより製造される。引き続い て、ヒス（２−クロロエチル）アミン塩酸塩と、トリエチルアミン、４−ジメチ ルアミノピリジンおよび１−　（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカ ルボジイミド塩酸塩の存在の下に、反応させると、ホスホルアミド酸４０が得ら れる。
ホスホルジアミド４１への変換は、先ずＩ−（２−メシチレンスルホニル）−３ −ニトロ−１，２，４−トリアゾールにより活性化し、次いてアンモニアと反応 させて、トリフルオロ酢酸４２を生成させることによって達成される。この酸化 合物４２をＮ、　Ｎ−ジエチル−０−メチルイソ尿素テトラフルオロボレートと 反応させ、最終的にグアニジニウム生成物４３を生成させる。
詳細：この合成は、下記のとおりにして行う：Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−２−アミノエチ ルホスホン酸　３９２−アミノエチルホスホン酸１．２５ｇおよびトリエチルア ミン４．３ｍｌを、水１０ｍ１中に溶解し、乾燥アセトニトリル１０ｍ１中のジ ーｔｅｒｔ−プチルジカーボネー）２．６２ｇの溶液を添加する。そのｐＨをト リエチルアミンの添加により９に調整する。この添加の完了後に、この混合物を ２時間撹拌し。次いで減圧で濃縮する。この残留物を０．ＯＩＭ　ＮａＨＣＯ＊ 　（１００ｍ１）中に再溶解し、次いて酢酸エチル（２ｘ５０ｍｌ）により洗浄 する。この水性相のｐＨを、０．１ＭＨＣｌの添加により１に調整し、次いで酢 酸エチル（２Ｘ１００ｍｌ）により抽出する。この有機相を無水Ｍｇ５Ｏ４上で 乾燥し、次いで減圧の下に濃縮し、Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−２−アミノエチルホスホン 酸３９を得る。
Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−Ｐ−［Ｎ−−（ｔ−Ｂｏｃ）−２−アミ ノエチル］ホスホンアミド酸　４Ｏ Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−２−アミノエチルホスホン酸３９　２．　２５ｇ、ビス（２− クロロエチル）アミン塩酸塩２．１４ｇ、トリエチルアミン４．２ｍｌおよび４ −ツメチルアミノピリジン０．１４６ｇの混合物を、ＤＭＦ／ＣＨ，Ｃ１，（１ ：ｌ容積／容ｆＪＩ）２０ｍｌ中に溶解する。１−（３−ジメチルアミノプロピ ル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩２．３ｇを添加し、この混合物を室温で １６時間撹拌する。この混合物をＩＭＮａＯＡｃ、ｐＨ５（７５ｍｌ）中に注ぎ 入れ、次いてエーテル（２ｘ７５ｍｌ）により洗浄する。この水性相のｐＨを０ ゜ＬＭ　ＨｃＩの添加により１に調整し、次いて直ちに酢酸エチル（２Ｘ１００ ｍ１）により抽出する。この有機相を水（２０ｍｌ）により洗浄し、無水Ｍｇ５ ＯＪ上で乾燥し、次いて減圧の下に濃縮する。この混合物をフラッシュクロマト グラフィにより精製し、Ｎ、　Ｎ−ヒス（２−クロロエチル）−Ｐ−［Ｎ−−（ ｔ−Ｂｏｃ）−２−アミノエチル］ホスホンアミド酸４０を得る。
Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−Ｐ−［Ｎ−−（ｔ−Ｂｏｃ）−２−アミ ノエチルホスホンジアミド　４１ Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−Ｐ−［Ｎ−−（ｔ−Ｂｏｃ）−２−アミ ノエチルホスホンアミド酸４０１．７５ｇを、乾燥ピリジン（５０ｍｌ）に溶解 し、次いで減圧で濃縮する。この処理を、追加の乾燥ピリジン（５０ｍｌ）を用 いて反復する。この残留物を、乾燥ピリジン（２５ｍｌ）に溶解し、次いで１− （２−メシチレンスルホニル）−３−二トロー１．　２．　４−トリアゾール２ ゜９６ｇを添加する。気体状アンモニアを６０分間吹き込む。この反応混合物を 減圧の下に濃縮し、酢酸エチル（１００ｍｌ）に再溶解し、次いで飽和ＮａＨＣ Ｏｓ　（２ｘ１００ｍ１）および飽和ＮａＣ１（７５ｍｌ）により洗浄する。こ の有機相を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥し、次いで減圧の下に濃縮し、次いでフラッ シュクロマトグラフィにより精製し、Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−Ｐ −［Ｎ−−（ｔ−Ｂｏｃ）−２−アミノエチルホスホンジアミド４１を生成Ｎ、 　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−Ｐ−［Ｎ−−（ｔ−Ｂｏｃ）−２−アミノエ チルホスホンジアミド４１　０．８７３ｇをジクロロメタン１０ｍ１に溶解し、 次いでトリフルオロ酢酸１０ｍ１を添加する。６０分後に、この反応混合物を減 圧の下に濃縮し、４２を得る。この残留物をトリエチルアミン１ｍｌと水２０ｍ １との混合物に再溶解する。そのｐＨをトリエチルアミンにより８．５に調整し 、次いでそのｐＨをトリエチルアミンにより７に調整しながら、Ｎ、　Ｎ−ジエ チル−〇−メチルイソ尿素テトラフルオロポレート０．８７２ｇを添加する。
１６時間後に、この反応混合物を酢酸の添加によりｐＨ７に調整し、次いで減圧 の下に濃縮する。この残留物を水５ｍｌに溶解し、次いで逆相ＯＤＳクロマトグ ラフィを用いて精製し、Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−Ｐ−［２−（２ ゜３−ジエチルグアニジル）エチル］ホスホンジアミド４３を得る。
例８ａ 分子内エノールトリメトキシベンゾエートホスファミド　プロドラッグを合成す るための、無水中間体、化合物４５、の製造この例の番号付き化合物に関しては 、図８ａを参照する。
市販のトリメトキシ安息香酸を臭素化し、この生成物５を低温リチウム−ハロゲ ン交換に付し、アリールリチウム中間体を生成させる。この反応性中間体を保護 されているヨウドエタノール７によりアルキル化し、この生成物４４を脱水させ 、対称無水物４５を生成させる。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：２−ブロモー３．　４．　５−）リ メトキシ安息香酸　５氷水浴により冷却した酢酸１００ｍ１中の３．　４．　５ −トリメトキシ安息香酸（１００ミリモル）の溶液に、酢酸１００ｍ１中の臭素 （１００ミリモル）の溶液を滴下して添加する。生成する混合物の赤色が消失し た後に、この混合物を粉砕した氷５００ｇ上に注ぎ入れる。生成する固形物を濾 別し、ＰｘＯｔ上で減圧の下に乾燥させ、次いで　Ｅｔ２０から再結晶させ、生 成物を淡黄色固形物とし５−トリメトキシ安息香酸（４４） ｔｅｒｔ−ブチルリチウム（ペンタン中の１．７Ｍ溶液、１５ミリモル）を、Ｔ ＨＦ５０ｍｌ中のブロマイド５（５ミリモル）の溶液に添加する。この間、この 混合物の温度は一９５°Ｃ以下に維持する。添加の完了後に、この混合物を一７ ８℃まで温める。３０分後に、ヨウダイト７（この化合物の合成は例２ａに記載 されている）を少しづつ加え、この混合物を０℃まで温める。水（５０ｍｌ）を 加え、次いでこの混合物のｐＨを、Ｏ，ＩＭ　ＨＣＩを用いて、３に注意して調 整する。
この混合物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状物と ５−１−リメトキシ安息香酸無水物（４５）ＣＨ２Ｃ１２１０ｍ　Ｉ中（７）Ｄ ＣＣ（５，５ミリモル）ノ溶液を室温で、ＣＨｚ　Ｃ１＊　２５ｍ１中の酸４４ 　（ＩＯミリモノりの溶液に添加する。１時間後に、生成する固形物を濾別し、 ＣＨ，ＣＩ□２５ｍ１により洗浄し、次いでこの濾液から溶剤を減圧の下で蒸発 させる。この生成物はさらに精製することなく使用する。この無水酸化合物は例 ８ｂで、アルドホスファミド　プロドラッグ、図８ｂの化合物５０の合成に使用 する。
例８ｂ プロドラッグ、分子内エノールトリメトキシベンゾエートホスファミド、化合物 ５０、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図８ｂを参照する。
前記のとおりに製造された対称酸無水物４５（例８ａ）を、β−シロキシブロパ ナルエル−トと反応させ、エノールベンゾエート４８を生成させる。このシリル 保護基を分離し、次いでこのようにして露出されたアルコールをホスホルアミド ジクロリゾートと反応させ、次いでアンモニアと反応させ、比較的安定なプロド ラッグ先駆化合物４９を生成させる。この先駆化合物４９は、必要に応じて、さ らに反応性のプロドラッグ５０に迅速に変換することかできる。
詳細、この合成は下記のとおりにして行う：３−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシ リルオキシ）−１−プロパツール（４６）ＤＭＦ５ｍｌ中に溶解した、１．　３ −プロパンジオール（１０ミリモル）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン （１１ミリモル）およびイミダゾール（２２ミリモル）の混合物を、室温で１６ 時間撹拌する。この混合物を０．１ＭＨＣｌ　（１００ｍｌ）中に注ぎ入れ、次 いてエーテル（３Ｘ１００ｍｌ）により抽出する。この有機相をブライン（１０ ０ｍｌ）により洗浄し、無水Ｍｇ５Ｏｓ上で乾燥し、次いて減圧の下に濃縮する 。この混合物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状物 として得る。
３−　（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシロキシ）プロパナル（４７）−７８°Ｃに 冷却したＣＨ２ＣＩ　ｔ　４０ｍ　Ｉ中のオキサリルクロライド（１１ミリモル ）に、ＤＭＳＯ（２４ミリモル）を添加する。１５分後に、アルコール４６（１ ０ｍｌ）を添加する。さらに１５分後に、トリエチルアミン（５０ミリモル）を 添加する。この混合物を０℃まで温め、次いでＯ，ＩＭ　ＨＣＩ　（１００ｍｌ ）中に注ぎ入れる。相を分離させ、その水性相を酢酸エチル（２Ｘ１００ｍｌ） により抽出する。この有機相を水（１００ｍｌ）により洗浄し、無水Ｍｇ５Ｏ４ 上で乾燥し、次いて減圧の下に濃縮する。この混合物をフラッシュクロマトグラ フィにより精製し、生成物を無色油状物として得る。
３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシロキシプロブ−ｌ−エニル２−　［２−（４， ４−−ジメトキシトリフェニルメトキシ）エチル］−３，４，５−トリメトキシ ベンゾエート（４８） ＮａＨ（鉱油中６０％分散液、１１ミリモル）をヘキサン（２Ｘ１０ｍｌ）によ り洗浄する。エーテル（２０ｍｌ）を添加し、次いでエーテル２０ｍ１中のアル デヒド４７（１０５１モル）の溶液を滴下して添加する。この添加完了後の１５ 分の時点で、エーテル２０ｍ１中のアルデヒド４５（２０ミリモル）の溶液を少 しづつ添加する。さらに０．５時間後に、この反応混合物を飽和ＮＨ４ＮＨ４Ｃ １（２０中に注ぎ入れ、相を分離させる。この水性相をエーテル（３Ｘ４０ｍｌ ）により抽出する。この有機相を集め、ブライン（４０ｍｌ）により抽出し、無 水Ｍｇ５ＯＪ上で乾燥し、次いて減圧の下に濃縮する。この混合物をフラッシュ クロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状物として得る。
３−　（２−ｒ２−　（４，４’−ジメトキシトリフェニルメトキシ）エチル］ −３゜４、　５−１−リメトキシベンゾイルオキシ）プロブ−２−エニルＮ、　 Ｎ−ビス（２−クロロエチル）ホスホルジアミド（４９）−２３℃に冷却したＴ ＨＦ５０ｍｌ中のシリルエーテル４８（２ミリモノりの溶液に、テトラブチルア ンモニウムフルオライド（ＴＨＦ中の１．０Ｍ溶液、２ミリモル）を添加する。
５分後に、トリエチルアミン（２ミリモル）を添加し、次いて３６（２ミリモル 、例６に記載のとおりにして合成）を添加する。さらに３時間後に、ＮＨ，を添 加する。さらに２時間後に、この反応混合物を水冷ブライン中に注ぎ入れ、次い てエーテル（４ｘｌＯＯｍｌ）により抽出する。この有機相を集め、無水Ｎ　ａ 　２　Ｓ　０４上で乾燥させ、次いで減圧の下に濃縮する。フラッシュクロマト グラフィにより精製し、生成物を無色油状物として得る。
３　（２（２−ヒドロキシエチル）−３，４，５１リメトキシベンゾイルオキシ ］プロブ−２−エニルＮ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）ホスホルジアミド８ ０９６水性酢酸（ｌｏｍｌ）に室温で、トリチルエーテル４９（０，１ミリモル ）を少しづつ添加する。１５分後に、この混合物を　飽和ＮａＨＣＯｓ　（Ｉ　 ００ｍ１）中に注ぎ入れ、次いでエーテル（３Ｘ１００ｍｌ）により抽出する。
この有機相を集め、気体発生が見られなくなるまで、５％ＮａＨＣＯｓ各１００ ｍ１により洗浄する。この有機相を次いで、ブライン（１００ｍｌ）により洗浄 し、無水Ｎａｚ　ＳＯ４上て乾燥させ、次いで減圧の下に濃縮する。この混合物 をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色固形物として得る。
例８ｃ 分子内エノールトリメトキシベンゾエートホスファミドハプテン、化合物５７、 の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図８０を参照する。
刊行物の記載に従い、保護されているアリールホスファイト５１を合成する。
その芳香族環を臭素化し、このブロマイド５２をリチウム−ハロゲン交換に付し 、このようにして生成された了り−ルリチウムを　ヒドロキシエチル化して、５ ３を得る。仕上げ処理し、次いで保護基を分離した後に、環状ホスファイト５４ を得る。このホスファイト５４を、α−ブロモアルデヒド５５とのパーコラ（Ｐ ｅｒｋｏｗ）反応に付し、エノールホスホネート５６を生成させる。保護基を分 離し、オキシ塩化リンと反応させ、次いでＮ−トリフルオロアセチルピペラジン と、次いてアンモニアと反応させ、ハブテン５７を得る。このハプテンは、その ピペラジン環を経て、担体たんばく質に結合させることかできる。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：３、　４．　５−トリメトキシブロ モベンゼンを、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、２６（１９８５）５９３９ −５９４２　（この刊行物を引用してここに組み入れる）の方法にしたがい製造 する。
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　４５（１９８９）３７８７−３８０８　（この刊行物 を引用してここに組み入れる）の方法にしたがい、エチル（ジェトキシメチル） ホスホナイトを製造し、次いでＪ。
Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、３２（１９８９）１５８０−１５９０　（この刊行物を引用 してここに組み入れる）の方法にしたかい３．　４．　５−トリメトキシブロモ ベンゼンと反応させる。
氷水浴により冷却した酢酸１０ｍ１中のエステル５１（１０ミリモル）の溶液に 、酢酸１０ｍ１中の臭素（ｌＯミリモル）の溶液を滴下して加える。生成する混 合物の赤色が消失した後に、この混合物を飽和ＮａＨＣＯ＊　（１００ｍ１）中 に注ぎ入れ、次いで酢酸エチル（３Ｘ１００ｍｌ）により抽出する。この有機相 を集め、気体発生が見られなくなるまで、５％ＮａＨＣＯ＝各１００ｍ１により 洗浄する。この有機相を次いで、ブライン（１００ｍｌ）により洗浄し、無水Ｍ ｇ５Ｏａ上で乾燥させ、次いで減圧の下に濃縮する。この混合物をフラッシュク ロマトグラフィにより精製し、生成物を淡黄色固形物として得る。
ｔｅｒｔ−ブチルリチウム（ｎ−ペンタン中の１．７Ｍ溶液、ｌＯミリモル）を 、ＴＨＦ５０ｍＩ中のプロミド５２（５ミリモル）の溶液に添加する。この間、 この混合物の温度は、−９５”Ｃ以下に維持する。この添加の完了後に、この混 合物を一７８°Ｃに温める。３０分後に、エチレンスルホネート（５ミリモル） を少しづつ加え、この混合物を室温まで温める。１時間後に、ＩＭ　ＨＣＩ　（ ５０ｍｌ）を加える。さらに１時間後に、この混合物を酢酸エチル（３Ｘ１００ ｍｌ）により抽出する。この有機相を無水Ｍｇ５ＯＪ上で乾燥させ、次いで減圧 の下に濃縮する。この混合物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成 物を無色油状物として得る。
２、　３−（３，４，５−トリメトキシベン゛カブチルホスチン酸（５４）３６ ％水性ＨＣ１２０ｍ１中の化合物５３（５ミリモル）の混合物を、１００°Ｃで ２時間加熱する。室温に冷却させた後に、この反応混合物を水２００ｍ１により 稀釈し、次いで酢酸エチル（４Ｘ１００ｍｌ）により抽出し、この有機相を無水 Ｍｇ５ＯＪ上で乾燥させ、次いて減圧の下に濃縮する。この混合物をフラッシュ クロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状物として得る。
２−ブロモ−３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシロキシプロパナル（５５）酢酸エ チル（５０ｍｌ）およびクロロホルム（５０ｍｌ）中のＣｕＢｒｔ　（１０ミリ モル）およびアルデヒド４７（１０ミリモル）の混合物を、遮光して、６時間加 熱還流させる。この混合物を室温まで冷却し、固形物を濾別し、次いで酢酸エチ ル（５０ｍｌ）により洗浄し、この有機相を集め、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、次 いで減圧の下に濃縮する。この混合物をフラッシュクロマトグラフィにより精製 し、生成物を淡黄色油状物として得る。
酸５４（１ミリモル）をヘキサメチルジシラザン（１ｍｌ）中に溶解し、次いで ３時間加熱還流させる。この混合物を室温まで冷却し、次いで揮発性成分を減圧 で蒸発させる。生成する油状物に、アルデヒド５５（１ミリモル）を添加し、こ の混合物を、ゆっ（すした窒素流の下に４時間１００℃で加熱する。冷却後に、 この混合物をフラッシュクロマトグラフィにより精製する。
−２３℃に冷却したＴＨＦ５０ｍＩ中のシリルエーテル５６（２ミリモル）の溶 液に、テトラブチルアンモニウムフルオライド（ＴＨＦ中の１．０Ｍ溶液、２ミ リモル）を添加する。５分後に、トリエチルアミン（２ミリモル）を添加し、次 いでＰＯＣｌ、（２ミリモル）を添加する。４時間後に、Ｎ−トリフルオロアセ チルピペラジン（２ミリモル）とトリエチルアミン（２ミリモル）との混合物を 少しづつ添加する。さらに３時間後に、ＮＨｓを添加する。さらに２時間後に、 この反応混合物を水冷ブライン中に注ぎ入れ、次いでエーテル（４Ｘ１００ｍｌ ）により抽出する。この有機相を集め、無水Ｎａｇ　ＳＯａ上で乾燥させ、次い て減圧の下に濃縮する。フラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無 色油状物として得る。
例９ ガラクトシル−シトシン　アラビノシトのプロドラッグ活性プロドラッグ、ガラ クトシル−シトシン　アラビノシト（ＧａｌＡｒａＣ）を例３に低連されている とおりにして製造し、バクテリア酵素、β−ガラクトシダーゼ、による活性化お よび毒性に関して、インビボおよびインビトロで試験した。
異なる濃度のプロドラッグ（ＧａｌＡｒａＣ）を、２種の異なる組織培養セルラ イン、Ｃｏｌｏ３２０ＤＭおよびＬｏｖｏ、に加えた。これらの細胞を４日間増 殖させ、次いで培養培地を分離し、この細胞をＰＢＳ中で洗浄した。これらの細 胞をギムサ（Ｇｉｅｍｓａ）染色した後に、この染色培養凹部表面に結合してい る培養物の光学濃度を６００ｎｍで測定した。この光学濃度の減少は、培養凹部 に付着している細胞の減少を示している。同一の方法を使用して、２種のセルラ インにおけるＡｒａＣそれ自体の毒性を試験した。Ｃｏｌｏ３２０ＤＭセルライ ンにおけるプロドラッグと薬物との間の毒性の比較が、図９に示されている。０ ．５の０Ｄ（６００）を得るために使用される濃度において、プロドラッグ濃度 と薬物濃度とを比較することによって、Ｇａ１ＡｒａＣはＡｒａＣそれ自体より も少なくとも８００倍少ミー毒性を存することを見出だすことができる。すなわ ち、ＡｒａＣそれ自体と同等の毒性を得るには、ＱａｌＡｒａＣを８００倍大き い濃度で使用しなければならない。同様の結果がセルラインＬｏｖｏを使用した 、図１Ｏでも見ることができる。この図には、プロドラッグがまた、薬物Ａｒａ Ｃよりも少なくとも８００倍少ミー毒性を存することが示されている。図９およ びｌＯは両方共にまた、プロドラッグを酵素β−ガラクトシダーゼにより活性化 した場合に、その毒性は、同一濃度でその純粋な薬物の毒性と同等であることを 示している。
このプロドラッグがβ−ガラクトシダーゼにより活性化されつるかに係わり試験 するために、この酵素を、Ｌｏｖｏ培養細胞の特異性表面抗原、癌胎児性抗原（ Ｃａｒｃｉｏ　Ｅｍｂｏｒｙｏｎｉｃ　Ａｎｔｉｇｅｎ　）　（ＣＥＡ）　、に 対する抗体に結合させた。ＣＣ０１ｏ３２０Ｄ細胞はこの表面抗原に欠失してお り、対照として使用した。このβ−ガラクトシダーゼ結合抗体を、培養物に加え て抗原を結合させた。プロドラッグを次いで、異なる濃度で、この培養物に加え 、次いで３日間増殖させた。対照として、酵素を含有していないＢＳＡおよびプ ロドラッグを同一濃度で培養物に加えた。図１１は、この実験の結果を示してお り、この抗体−酵素結合体がプロドラッグを活性化できることを示している。図 １１と図１２とを比較すると、プロドラッグは、結合抗体によって活性化される ばかりでなく、またＢＳＡがプロドラッグとともに添加されている培養物に比較 して、ＣＥＡ腫瘍マーカーを担持するＬｏｖｏ細胞を特異的に殺滅させることが 判る。上記の結果は、抗原局在実験において、プロドラッグが薬物よりもほぼ２ ００倍少ζ−毒性を存すること、およびまたこの細胞表面で、抗体に結合したバ クテリア酵素は、その腫瘍表面でプロドラッグを特異的に活性化させることがで きることを示している。
活性薬物の細胞毒性レベルに係わる、この表面結合結合体の能力を評価するため に、この生成物生成速度を、基質として０ＮＰＣを用いて測定した。Ｌｏｖ。
細胞に特異的に結合している結合体は、１．２Ｘ１０’生成物分子／分／細胞を 生成させることが見出だされた。我々の特定の試験ホーマットにおいて、この速 度は、１．６ｍＭ生成生成物／分に相当する。１．５ｍＭ　ＡｒａＣは細胞増殖 を５０％抑制することが報告されていることから（Ｇｉｓｈ、Ｄ、等、Ｊ、Ｍｅ ｄ、Ｃｈｅｍ、、　１４（１９７１）１１５９）　、この実験により得られた速 度は、インビトロ検定における細胞毒性の発生に関して充分であると見做される 。
ＡｒａＣおよびＧａ１ＡｒａＣの両方を、マウスにおいて毒性および活性に関し て試験した。別々の実験において、マウスにはＡｒａＣ，ＧａＩＡｒａＣ，およ びまたＧａ１ＡｒａＣおよび引き続くβ−ガラクトシダーゼを投与した（１００ ｍｇ／ｋｇの濃度）。５日間、マウスの全部において、完全血液測定を行った。
薬物をプロドラッグと比較することによって（図！３の棒グラフ参照）、このプ ロドラッグの毒性が、インビボで薬物よりも実質的に少ないことは明白である。
同様に、図１４−１７のデータ（図１３のキイポイントは図１４−１７と同一で ある）は、β−ガラクトシダーゼの存在において、プロドラッグが活性化され、 薬物それ自体と同様の毒性を生じることができることを示している。この効果は 分割（ｓｅｇｍｅｎｔｅｄ　）好中球において全く際立っており、赤血球ではそ れほどでもない。これは多分、異なる細胞集団における細胞合成の運動学が相違 していることを反映するものである。
要約して、これらのデータは、プロドラッグ、Ｇａ１ＡｒａＣ，が、インビボお よびインビトロにおいて有意に減少した毒性を育しており、かつまた酵素により 活性化させた場合に、相当する活性化したプロドラッグが放出され、インビボお よびインビトロにおいてＡｒａＣと非常に類似する毒性を生じるさせることを示 している。
例１０ ガラクトシル−５−フルオロウリジン（２４）のプロドラッグ活性同様の一連の 実験において、プロドラッグ、ガラクトシル−５−フルオロウリジン（Ｇａ１５ ＦＵ）を例４に記載のとおりにして合成し、Ｇａ１ＡｒａＣに係わり前記した記 載のとおりに試験した。このプロドラッグおよび薬物の毒性試験の結果を図１８ に示す。薬物５−フルオロウリジンと同様の毒性を生じるには、５００倍以上の プロドラッグ濃度が必要であることをか判る。Ｇａ１ＡｒａＣの場合と同様に、 プロドラッグ、ｇａ　１５ＦＵも、インビボで活性化でき、薬物それ自体と同様 の薬物レベルを得ることができる。従って、薬物にガラクトース部分を付加する ことによって、当該薬物の毒性が実質的に、かつまたプロドラッグとして優秀な 候補者にするレベルにまで減少される。
Ｇａ１ＡｒａＣプロドラツグに関して行われた場合と同一のＣＥＡ抗原腫瘍表面 特異性を存する抗体に結合させたβ−ガラクトシダーゼによる目標を定めた活性 化に係わり、ガラクトシル−５−フルオロウリジンを試験した。この抗体は、抗 原担持細胞（Ｌｏｖｏ）と反応することができ、ＣＥＡ抗原マーカーを存してい ない細胞を制御する。プロドラッグを次いて、異なる濃度で異なる培養物に添加 した。
図１９はこの実験の結果を示しており、Ｌｏｖｏ細胞表面に局限して存在する抗 体が、対照Ｃｏ１ｏ細胞の場合に比較して２０−３０倍の低濃度で、当該プロド ラッグから毒性量の５−ＦＵを放出させることを示している（図２０参照）。
すなわち、当該プロドラッグの部位特異性活性化は、有意に低い濃度で薬物の効 力を増加させる。
マウスにおいて、ｇａ１５ＦＵおよび５ＦＵの両方を試験し、比較した。このイ ンビボ試験は、インビボｇａ　ＩＡｒａＣ実験に係わり前記したとおりに行った 。
薬物およびプロトラッグを投与し、注入後の６日目に総合的骨髄細胞充実性とと もに、血液細胞数測定を行った。この実験の結果か図２１−２５に示されている 。
図２１−２５における重要な特徴は、図２１の場合と同一である。
このプロドラッグは、ｇａｌＡｒａｃ実験の結果と同様の様相で、薬物それ自体 の場合に比較して減少された毒性を示した。これは、好中球において（図２３） およびリンパ球において特に明白である。総白血球数（図２１参照）は同一の際 立った効果を示したのに対して、この６日間の実験において、赤血球は重度には 減少されない。薬物の効力とプロドラッグの低い毒性との間の総合的差異は、総 合的骨髄細胞充実性に係わる測定で最も明白に見ることができる。これらの結果 は図２５に示されている。
このプロドラッグ自体には効果が存在しないが、プロドラッグはβ−ガラクトシ ダーゼにより活性化されうることはまた明白である。従って、ガラクトシル−Ａ ｒａ−Ｃおよびガラクトシル−５−フルオロウラシルをプロドラッグとして使用 しようとする考え方は理由のあることであるばかりでなくまたこれらのデータか ら成功のチャンスとしての理由を充分に備えている。
例１５ 例１６および２０のプロドラッグの中間体および例１８および２２のプロドラッ グのハブテン、（チアシリ／ｂ）イミノ酢酸エステル、化合物６ｏの製造この例 の番号付き化合物に関しては、図２６を参照する。
ブロマイド５８のＮ−アルコキシフタルイミドを製造し、次いでＴａｋａｓｕｇ ｉ、　Ｈ。
等の方法（Ｊ、ＡｎｔｉｂｉｏＨｃｓ、３６（１９８３）　８４６−８５４）に 従いヒドラジンおよび２−ホルムアミド−４−チアゾリルグリオキシル酸により 処理し、酸５９を生成させる。
その酸カルボキシルをＮ−ヒドロキシスクシンイミドを用いて活性化させ、Ｎ− ヒドロキシスクシンイミジル（Ｚ）−２−（２−ホルムアミド−４−チアゾリル ）　−２−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−メチル）エトキシイミノ アセテート６０を生成させる。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：ｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモー２− メチルプロパノエート（５８）ＣＨｚ　Ｃ１，１００ｍ１中のトリフルオロメタ ンスルホン酸（０，１ミリモ　ル）および２−ブロモ−２−メチルプロパン酸（ １０ミリモル）の溶液に、ＴＬＣにより観測してこの出発物質か消費されるまで 、イソブチンを縮合させる。揮発性成分を減圧で蒸発させ、次いでこの残留物を 、５０％エーテル／ヘキサンを用いて、中性アルミナに通して濾過する。この濾 液を減圧で濃縮し、さらに精製することなく使用する。
化合物５９は、Ｔａｋａｓｕｇｉ、　Ｈ，等の方法（Ｊ、Ａｎｔｉｂｊｏｔｉｃ ｓ、３６（１９８３）　８４６−８５４）（この刊行物を引用してここに組み入 れる）に従い、ブロマイド５８、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、およびエチル２ −（ホルミルアミド）−４−チアゾリルグリオキシレートを使用して合成する。
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル（Ｚ）−２−（２−ホルムアミド−４−チアゾ リル）　−２−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−メチル）エトキシイ ミノアセテート（６０） ＣＨｔ　ＣＩ２　１０ｍｌ中のＤＣＣ（１１ミリモル）の溶液を、室温でＣＨ， ＣＩ□　９０ｍ１中の酸５９（１０ミリモル）およびＮ−ヒドロキシスクシンイ ミド（ＩＯミリモル）の溶液に添加する。沈殿がすぐに形成される。１時間後に 、この溶液を濾過し、この濾液を水（４０ｍｌ）により洗浄し、無水Ｍｇ５ＯＪ 上で乾燥させ、次いで減圧の下に濃縮し、生成物を無色固形物として得る。
例１６ プロドラッグ、５−フルオロウリジン置換β−ラクタム、化合物６８、の製造こ の例の番号付き化合物に関しては、図２７を参照する。
Ｅｖａｎｓ、　Ｄ、　Ａ、等の方法（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　（ １９８５）３７８３−３７８６）　（この刊行物を引用してここに組み入れる） に従い製造される、３−（Ｓ）−アミノ−４−（Ｓ）−ヒドロキシメチルアゼチ ジノン（６１）を、エステル６０によりアシル化して、アミド６２を生成させ、 次いでスヴアーン（Ｓｗｅｒｎ　）の酸化およびバイエル−ビリガー（Ｂａｅｙ ｅｒ−Ｖｉ　ＩＩ　ｉｇｅｒ）の転位に付し［Ａｆｏｎｓｏ、　Ａ、等の方法に 基づく（Ｂｅｎｔｌｅｙ、等線、“Ｒｅｃｅｎｔ　Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　ｔ ｈｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆβ−ＬａｃｔａｍＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ”、 　Ｔｈｅ　Ｒｏｙａｌ　５ｏｃｉｅｔｙ　ｏｆｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　５ｐｅｃｉ ａｌ　Ｐｕｂｌ、Ｎｏ、７０（P９８５）２９５−３ ０２、：この刊行物を引用してここに組み入れる］、エステル６４を生成させる 。
保護５−フルオロウリジン６５を製造し、次いてエステル６４と反応させ、アゼ チジノン６６を生成させる［Ａｏｋｉ等の方法に基づ＜　（ｔ（ｅｔｅｒｏｃｙ ｃｌｅｓ１５（１９８１）４０９−４１３およびＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅ ｔｔ、　（＋９７９）４３２７−４３３０　；この刊行物を引用してここに組み 入れる）］。これにより、アシルアミノ基に対して立体選択的にトランスに、ア ルコールがアゼチジノンに付加される。アゼチジノン６６を、Ｃｉｍａｒｕｓｔ ｉ、Ｃ，ＩＪ。
等の方法（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　３９（１９８３）２５７７−２５８９　； この刊行物を引用してここに組み入れる）に従い、スルホニル化し、次いで保護 基を分離して、プロドラッグ６８を生成させる。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：３−（Ｓ）−アミノ−４−（Ｓ）− ヒドロキシメチルアゼチジンオン（６１）アミン６１は、Ｅｖａｎｓ、　Ｄ、　 Ａ、等の方法（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　（１９８５）３７８３− ３７８６　；この刊行物を引用してここに組み入れる）に従い製造することがで きる。
アミン６１（１ミリモル）、活性エステル６０（１ミリモル）、およびＤＭＡＰ （１ミリモル）をＤＭＦｌｏｍｌに溶解する。ＴＬＣにより観測して、出発物質 が消費された後に、この混合物を水（５０ｍｌ）中に注ぎ入れ、次いで酢酸エチ ル（３ｘ５０ｍｌ）により抽出し、この有機相をブライン（５０ｍ　ｌ　）によ り洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、次いで溶媒を減圧で蒸発させる 。
この残留物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状物と ＣＨｔ　Ｃ１＊　Ｉ　Ｏｍ　ｌ中のオキサリルクロライド（１，１ミリモル）の 溶液を一７８℃に冷却させ、次いでＣＨｚ　Ｃ１ｔ　１ｍｌ中のＤＭＳＯ（１， １ミリモル）の溶液を滴下して添加する。１５分後に、ＣＨｆ　ＣＩ、１ｍｌ中 のアルコール６２（１ミリモル）を滴下して添加する。３０分後に、ＣＨｆ　Ｃ １ｌ　１ｍｌ中のトリエチルアミン（１，２ミリモル）の溶液を少しづつ添加し 、この混合物を室温まで温める。この混合物を水（５０ｍｌ）中に注ぎ入れ、次 いでＣＨｚＣＬ　（３ｘ５０ｍｌ）により抽出し、この有機相を水（５０ｍｌ） により洗浄し、次いて無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、次いて溶媒を減圧で蒸発さ せる。
この残留物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状物と して得る。
４−（Ｒ，Ｓ）−カルボニルオキシ−３−（Ｓ）＝　［（ｚ）−２−（２−ホル ムアミド−４−チアゾリル）　−２−（＋−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１ −メチル）エトキシイミノアセチルコアミノアゼチジノン　（６４）ＣＨ２ＣＬ 　１０ｍｌ中のアルデヒド６３（１ミリモル）の溶液に、ｍ−ＣＰＢＡ（１，５ ミリモル）を添加し、ＴＬＣにより観測して、出発物質が消費されるまで、この 混合物を室温で放置する。この混合物をＩＭ　ＮａＨＣＯｓ　（５０ｍｌ）中に 注ぎ入れ、次いで酢酸エチル（３ｘ５０ｍｌ）により抽出し、この有機相を無水 ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、次いで溶媒を減圧て蒸発させる。この残留物をフラッ シュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状物として得る。
２−．３＝−０−イソプロピリデン−５−フルオロウリジン（６５）２．２−ジ メトキシプロパン（２ｍｌ）を、ＤＭＦ５ｍｌ中のＴｓＯＨ（２０ｍｇ）および ５−フルオロウリジン（１，０５ｇ、４ミリモル）の溶液に添加する。ＴＬＣに より観測して、出発物質が消費された後に、メタノール２０ｍ１を加え、この反 応を一夜にわたり放置する。次いで溶媒を減圧の下に蒸発させる。
生成する固形物を熱いメタノールから再結晶させ、生成物８６４ｍｇを無色固形 物として得る。
’　ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄｓ　）ｄｌ、２６　（ｓ、３）、１．４５　（ｓ、３ ）。
３．５０−３．６６　（ｍ、２）、４．０４−４．１４　（ｍ、ｌ）、４．７０ −４゜７８（ｍ、Ｉ）、４．８２−４．９１　（ｍ、１）、５．８１（ｂｓ、ｌ ）、８゜１７　（ｄ、Ｉ、Ｊ＝７Ｈｚ）、Ｉ　１．８６　（ｂｓ、１）。
プロドラッグ先駆化合物（６６）の製造ＣＨｆ　Ｃｌ　ｔ　Ｉ　ｍ　Ｉ中のＢＦ ２０Ｅｔｔ　（ｏ、１ミリモル）の溶液を、ＣＨｔ　ＣＬ　Ｓｍｌ中のアルコー ル６５（１ミリモル）およびエステル６４（１ミリモル）の溶液に添加する。Ｔ ＬＣにより観測して、出発物質が消費された後に、この混合物をＯ，ＩＭ　Ｎａ ＨＣＯｓ　（５０ｍｌ）中に注ぎ入れ、次いで酢酸エチル（３ｘ５０ｍｌ）によ り抽出し、この有機相を無水Ｍｇ５Ｏ４上で乾燥させ、次いて溶媒を減圧で蒸発 させる。この残留物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色 油状物として得る。
プロドラッグ先駆化合物（６７）の製造トリメチルシリルクロロスルホネート（ ２ミリモル）をＤＭＦ　（４ｍｌ）に添加する。３０分後に、揮発性成分を減圧 て除去する。この残留物を、水浴により冷却されているＣＨ２ＣＩ、４ｍｌ中の アミド６６（１ミリモル）の混合物に添加する。３０分後に、この溶液を０．５ Ｍ　ＫＨｚ　ＰＯ２１０ｍｌ中に注ぎ入れる。この有機相を分離し、この水性相 はＣＨｔ　ＣＬ　（４ｍｌ）により抽出し、次いて蒸発乾燥させる。この固形残 留物をメタノール（４０ｍｌ）と擦り混ぜ、この有機性洗浄液を減圧で濃縮する 。この残留物はさらに精製することなく使用する。
５−フルオロウリジン置換β−ラクタムプロドラッグ（６８）の製造水浴により 冷却されているＣＨｔ　Ｃ１ｔ　Ａｍｌ中の化合物６７（１ミリモル）およびア ニソール（０，５ｍ１）の混合物に、トリフルオロ酢酸（１ｍｌ）を添加する。
この混合物を室温まで温め、１時間後に、揮発性成分を減圧で蒸発させる。この 残留物を、移動相として０．１Ｍ）リエチルアンモニウムアセテート緩衝液（ｐ Ｈ７）とアセトニトリルとの混合物を使用する逆相ＨＰＬＣにより精製する。生 成物を合作するフラクションを集め、減圧で乾燥させ、この残留物を脱イオン化 水（２×）から再乾燥させ、この残留物を次いで、ＳＰ−セファデックス（Ｓｅ ｐｈａｄｅｘ）イオン交換カラム、カリウム形、に通し、生成物を２カリウム塩 として得る。
例１７ 例１６のプロドラッグのハブテンの中間体、５−アルキニル化ウリジン、化合物 ７４、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図２８を参照する。
ウリジン３ａのヒドロキシル基を保護して、化合物７０を得る。化合物７０をそ の５−位置でヨウト化して、ヨウダイト７１を得る。引き続いて、パラジウム触 媒によりアルキニル化して、化合物７３を生成させ、次いでその５′ヒドロキシ ルの保護基を選択的に分離して、中間体７４を得る。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：ＣＨｚ　Ｃ１＊　１０ｍ１中のトリ オール３ａ（１０ミリモル、例１６に記載のとおりにして合成）、２．２−ジメ トキシプロパン（３０ミリモル）およびＴｓＯＨ（１ミリモル）の溶液を、ＴＬ Ｃにより観測して出発物質が消費されるまで、室温で撹拌する。トリエチルアミ ン（２ミリモル）を添加し、次いで揮発性成分を減圧で蒸発させる。この残留物 をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色固形物として得る。
４−メチルベンゾイルクロライド（１０ミリモル）を、ピリジン２０ｍ１中のア ルコール６９　（ＩＯミリモル）の溶液に添加する。ＴＬＣにより観測して引き 続く進行か生起しなくなった後に、揮発性成分を減圧で蒸発させる。この残留物 をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色固形物として得る。
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１−ブチン（７２）例１ｂに記載の とおりにして、ヒドラジン分解させた後に得られる、粗製アミン７１を、ジオキ サン５０ｍ１およびトリメチルアミン２ｍｌ中に溶解し、次いでジオキサンｌ０ ｍ１中のジーｔｅｒｔ−プチルジカルボネート（１０ミリモル）の溶液を添加す る。ＴＬＣにより観測して反応が完了した後に、この混合物を０゜０５Ｍ　ＨＣ Ｉ　（５０ｍｌ）と酢酸エチル（３Ｘ１００ｍｌ）とに分配させ、この有機相を 無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、次いて溶媒を減圧で蒸発させる。この残留物をフ ラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状物として得る。
５−　（４−４ｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１−ブチニル）−２”、３ −−０−イソプロピリデン−５−−０−（４−メチルベンゾイル）ウリジン（７ ３）トリエチルアミン１５０ｍ１中のヨウダイト７０（５ミリモル）の脱気溶液 に、４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１−ブチン７２（１０ミリモル ）、（Ｐｈ、Ｐ）ｔ　ＰｄＣｌ２　（ｏ、２ミリモル）およびＣｕｌ　（０，３ ミリモル）を添加する。生成する懸濁液を、出発物質か消費されるまで、５０° Ｃで加熱する。
揮発性成分を減圧で蒸発させ、この残留物をＣＨＣｌ５　（２００ｍｌ）中に取 り、次いで５％ＥＤＴＡジナトリウム（２ｘ１００ｍｌ）および水（１００ｍｌ ）により洗浄し、無水Ｍｇ５Ｏａ上で乾燥させ、次いで溶媒を減圧で蒸発させる 。この残留物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色固形物 としメタノール９０ｍ１中のエステル７３　（５ｍｌ）の溶液に、濃水酸化アン モニウム（７ｍｌ）を添加する。ＴＬＣにより観測して出発物質が消費された後 に、揮発性成分を減圧で蒸発させ、この残留物をフラッシュクロマトグラフィに より精製し、生成物を無色油状物として得る。
例１８ 例１６のプロドラッグのハブテン、シクロブタノール置換５−フルオロウリジン 、化合物８１、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図２９および３０を参照する。
アルコール７４をエチニルスルホネート７５に付加結合させ、エノールエーテル ７６を得る。アジドケテンを、エノールエーテル７６に［２＋２］付加環化させ 、シクロブタノン７７を生成させる。ケト基、アジド基、およびアルキニル基を 還元すると、アミノアルコール７９が得られる。このアミノアルコール７９をＮ −アシル化し、次いで保護基を分離し、化合物８１を得る。この化合物８１はそ の両級脂肪族アミノ基の部位で担体たんばく質に結合させることができる。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：ｔｅｒｔ−プチルエチンスルホネー ト（７５）ＴＨＦ中のエチニルマグネシウムクロライドの溶液（０，５Ｍ、１０ ミリモル）を、−７８°Ｃに冷却したＴＨＦ１００ｍｌ中のスルフリルクロライ ド（２０ミリモル）の溶液に添加する。１時間後に、ＴＨＦ５０ｍｌ中のトリエ チルアミン（６０ミリモル）およびｔｅｒｔ−ブタノール（６０ミリモル）の溶 液を滴下して添加する。この溶液を室温まで温め、揮発性成分を減圧で蒸発させ 、この残留物をエーテル（１５０ｍｌ）と０．０５Ｍ　ＨＣＩ　（５０ｍｌ）と に分配させ、この有機層をブライン（５０ｍｌ）により洗浄し、次いでＭｇＳＯ ４上で乾燥させ、次いて揮発性成分を減圧で蒸発させる。この残留物をフラッシ ュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状物として得る。
ウリジン５′−〇−エノールエーテル　７６の製造ＴＨＦ　１００ミリモル中の アルコール７４（１０ミリモル）およびアルキン７５（１１ミリモル）の溶液に 、ナトリウムメトキシド（０，０５ミリモル）を添加する。ＴＬＣにより観測し て出発物質が消費された後に、酢酸（０，１ミリモル）を添加し、次いで揮発性 成分を減圧で蒸発させる。この残留物を５％ＮａＨＣＯｓ　（４０ｍ１）と酢酸 エチル（３×１００ｍｌ）とに分配させ、この有機相をＭｇ５ＯＪ上で乾燥させ 、次いで溶媒を減圧で蒸発させる。この残留物をフラッシュクロマトグラフィに より精製し、生成物を無色油状物として得る。
シクロブタノン７７の製造 ＣＨｔ　ＣＩｘ　２０ｍ１中のアジドアセチルクロライド（１０ミリモル）の溶 液を、−７８°Ｃに冷却したＣＨｔ　Ｃ１ｔ　５０ｍ１中のエノールエーテル７ ６（５ミリモル）およびトリエチルアミン（１１ミリモル）の溶液に滴下して添 加する。
この混合物を室温まで一夜にわたりゆっくり温める。反応の引き続（進行がＴＬ Ｃにより観測されなくなった時点で、メタノール１ｍｌを添加し、揮発性成分を 減圧で蒸発させる。この残留物を、溶剤として酢酸エチルを使用し、シリカゲル の短いカラムに通す。
シクロブタノール７８の製造 水浴により冷却させたメタノール２０ミリモル中のケトン７７（２ミリモル）の 溶液に、ホウ水素化ナトリウム（１０ミリモル）を添加する。ＴＬＣにより観測 して引き続く進行がＴＬＣにより観測されない時点で、揮発性成分を減圧で蒸発 させる。この残留物を０．０５Ｍ　ＨＣＩ　（４Ｏａ上）と酢酸エチル（３×１ ００ｍ１）とに分配させ、この有機相をＭｇ５ＯＡ上で乾燥させ、次いで溶媒を 減圧で蒸発させる。この残留物を、溶剤として酢酸エチルを使用し、シリカゲル の短いカラムに通し、次いで減圧で濃縮し、さらに精製することなく使用する。
アミノアルコール７９の製造 アジド７８（５ミリモル）をメタノール（１００ｍｌ）に溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ （１０重量％）を添加し、次いで水素雰囲気の下に、出発物質が消費されるまで 、この混合物を撹拌する。セライトのパッドを用いて、触媒を濾別し、この触媒 を次いでメタノール（１００ｍｌ）により洗浄する。溶剤を減圧で蒸発させ、こ の生成物はさらに精製することなく使用する。
アミド８０の製造 アミド８０は、アミド６２に係わり使用された方法に従い、アミン７９およびエ ステル６０から合成する。
ハプテン８１の製造 化合物６８に係わる方法を使用して、化合物８０から保護基を分離し、化合物８ １を生成させる。しかしながら、化合物８１をその両級脂肪族アミノ基の部位で 担体たんば（質に対して結合させる反応には、そのトリフルオロアセテート塩を 使用することもできる。
例１９ 例２０のプロドラッグの中間体、５−フルオロウリジン５′−〇−アリールエス テル、化合物８５、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図３１を参照する。
ブロマイド５においてリチウム−ハロゲン交換を行い、次いでベンジルクロロホ ーメートと反応させ、モノエステル８２を生成させる。５−フルオロウリジン６ ５によりエステル化して、ジエステル８３を生成させ、次いで保護基の分離およ びそのベンジルエステル基の部位で活性化し、中間体８５を得る。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う＝２−カルボヘンシルオキシ−３，４ ，５−トリメトキシ安息香酸（８２）ＴＨＦ５０ｍＩ中の２−ブロモ−３，４， ５−トリメトキシ安息香酸５（５ミリモル、例１２に記載のとおりにして合成） の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルリチウム（ｎ−ペンタン中の１．７Ｍ溶液、１５ミ リモル）を添加する。この間、この混合物の温度を一９５°Ｃ以下に維持する。
この添加が完了した後に、この混合物を一７８℃まで温める。３０分後に、ベン ジルクロロホーメート（５ミリモル）を少しづつ添加し、この混合物を０°Ｃま て温める。水を（５Ｏａ上）を加え、次いでＯ，ＩＭ　ＨＣＩを用いて、この混 合物のｐＨを３に注意して調整する。この混合物を酢酸エチル（５×１００ｍｌ ）により抽出する。この有機層を無水Ｎａ、Ｓｏ、上で乾燥させ、次いで減圧で 濃縮する。この混合物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無 色油状物として得る。
ジエステル８３の製造 ＣＨ，Ｃ１ｔ　５０ｍ１中の酸８２（５ミリモル）、２−．３”−０−イソプロ ピリデン−５−フルオロウリジン６５（５ミリモル）およびＥＤＣ（６ミリモル ）の混合物を、出発物質か消費されるまで、室温で撹拌する。この溶液を水（２ ×３０ｍｌ）により洗浄し、その水性層をＣＨｚＣｌｚ　（２×５０ｍｌ）によ り洗浄し、この有機層を無水Ｍｇ５Ｏ４上で乾燥させ、次いて溶媒を減圧で蒸発 させる。この残留物を、フラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無 色油状物として得る。
モノ酸８４の製造 ジエステル８３（２ミリモル）を酢酸エチル（ｌｏＯｍｌ）に溶解し、次いで５ ％Ｐｄ−Ｃ（１０重量％）を添加し、この混合物を水素雰囲気の下に、出発物質 が消費されるまで、撹拌する。セライトのパッドを通して、触媒を濾別し、次い で触媒を酢酸エチル（１００ｍｌ）によりすすぐ。溶剤を減圧の下に蒸発させ、 生成物はさらに精製することなく使用する。
酸クロライド８５の製造 モノ酸８４（ｌミリモル）をＣＨｔＣｉｔ　（２Ｏａ上）に溶解し、次いでチオ ニルクロライド（５ミリモル）を添加する。この反応の進行は、適量のメタノー ル分解および’　Ｈ−ＮＭＲ分光光度測定により追跡する。反応が完了した時点 で、揮発性成分を減圧で蒸発させ、化合物８５を油状物として得る。
例２０ プロドラッグ、５−−０−アロイル−５−フルオロウリジンにより置換されてい るβ−ラクタム、化合物９０、の製造この例の番号付き化合物に関しては、図３ ２を参照する。
スレオニンをＮ−アノル化し、次いてヒドロキシルアミンを用いてアミＦ化する ことにより、ヒドロキサム酸８７を生成させる。さらに酸性のヒドロキサモノ酸 ヒドロキシル部位で酸クロライド８５を使用して、化合物８７を反応させると、 アミド８８か得られる（Ｍｉ　ｔｉｅｒ、　Ｍ、　Ｊ、等、　Ｔｅｔｒａｈｅｄ ｒｏｎ３９（１９８３）２５７５　）、次いてミツノブの反応（Ｍｉ　ｌ　ｌｅ ｒ、　Ｍ、　Ｊ、等、　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　、　＋０２（１ ９８０）７０２６−７O３２　） により閉環させる。引き続いて、保護基を分離すると、β−ラクタムプロドラッ グ９０か得られる。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：Ｎ−［（Ｚ）−２（２−ホルムアミ ド−４−チアゾリル）　−２−（１−ｔｅｒｔ−ブチルカルボニル−１−メチル ）エトキシイミノアセチル］スレオニン（８６）ＤＭＦ３０ｍｌ中のし一スレオ ニン（５ミリモル）、エステル６０（５ミリモル）およびＤＭＡＰ　（５ミリモ ル）の混合物を室温で撹拌する。ＴＬＣにより観察して出発物質が消費された後 に、この混合物を０．０５Ｍ　ＨＣＩ　（５Ｏａ上）中に注ぎ入れ、次いて酢酸 エチル（３×５０ｍｌ）により抽出し、この有機層をブライン（５Ｏａ上）によ り洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、次いで溶媒を減圧で蒸発させる 。この残留物を、フラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状 物として得る。
スレオニンヒドロキサム酸８７の製造 ＣＨ２Ｃ１ｔ　Ｓｍｌ中のＤＣＣ（５，５ミリモル）の溶液を、室温でＣＨｔ　 ＣＩｘ　４５ｍｌ中のヒドロキシルアミン塩酸塩（５ミリモル）、トリエチルア ミン（５ミリモル）および酸８６（５ミリモル）の溶液に添加する。沈殿が直ち に生成される。１時間後に、この溶液を濾過し、この濾液を０．０５ＭＨＣｌ　 （４Ｏａ上）により洗浄し、水性相をＣＨｔ　Ｃ１ｚ　（５Ｏａ上）により抽出 し、これらの有機相を無水Ｍｇ５Ｏａ上で乾燥させ、次いで減圧で濃縮し、生成 物を無色固形物として得る。
０−ベンゾイルヒドロキサム酸８８の製造化合物８５をＣＨ，Ｃ１ｔ　Ｓｍｌ中 に取り、水浴により冷却したＣＨｔＣｉ。
２Ｏａ上中のヒドロキサム酸８７（１ミリモル）およびＤＭＡＰ（２ミリモル） の溶液に滴下して添加する。２時間後に、この混合物を水（５Ｏａ上）中に注ぎ 入れ、次いて酢酸エチル（３×５０ｍｌ）により抽出し、この有機層をブライン （５Ｏａ上）により洗浄し、次いて無水Ｍｇ５ＯＪ上で乾燥させ、次いで溶媒を 減圧で蒸発させる。この残留物を、フラッシュクロマトグラフィにより精製し、 生成物を無色油状物として得る。
ＴＨＦ１０ｍｌ中のＥＤＴＡ（１，１ミリモル）の溶液を、室温でＴＨＦ２０ｍ ｌ中の化合物８８（１ミリモル）およびトリフェニルホスフィン（１，１ミリモ ル）の溶液に滴下して添加する。ＴＬＣにより観察して出発物質が消費された後 に、溶媒を減圧で蒸発させる。この残留物を、フラッシュクロマトグラフィによ り精製し、生成物を無色油状物として得る。
β−ラクタムプロドラッグ　９０の製造水浴により冷却したＣＨ，Ｃ１□　ｌ０ ｍ１中の化合物８９（１ミリモル）およびアニソール（１ｍｌ）の混合物に、ト リフルオロ酢酸（２ｍｌ）を添加する。
この混合物を室温まで温め、次いで１時間後に、揮発性成分を減圧で蒸発させる 。
この残留物を、移動相として、０．１Ｍトリエチルアンモニウムアセテート緩衝 液（ｐＨ７）とアセトニトリルとの混合物を使用して、逆相ＨＰＬＣにより精製 する。生成物を含有するフラクションを集め、減圧で乾燥させ、この残留物を脱 イオン化水（３×）から再乾燥させ、次いでこの残留物をＳＰ−セファデックス イオン交換カラム、カリウム形、に通し、生成物をカリウム塩として得た。
例２１ 例２２のハブテンの中間体、５−アルキニル化ウリジン５′−〇−アリールエス テル、化合物９２、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図３３を参照する。
酸８２を、アルコール７４を用いてエステル化し、ジエステル９１を生成させる 。そのベンジルエステルカルボキシル保護基を分離し、モノ酸９２を得る。
詳細コニの合成は下記のとおりにして行う：ウリジン５′−〇−アリールエステ ル９１の製造ＣＨｚ　ＣＬ　５０ｍ１中の酸８２（５ミリモノリ、アルコール７ ４（５ミリモル）およびＥＤＣ（６ミリモル）の混合物を、室温で、出発物質が 消費されるまで撹拌する。この溶液を水（２Ｘ３０ｍｌ）により洗浄し、この水 性相をＣＨ，Ｃ１２（２ｘ５０ｍｌ）により抽出し、この有機相を無水Ｍｇ５Ｏ Ａ上で乾燥させ、次いて溶媒を減圧で蒸発させる。この残留物を、フラッシュク ロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状物として得る。
ジエステル９１（５ミリモル）を酢酸エチル（１００ｍｌ）中に溶解し、５％Ｐ ｄ−Ｃ（Ｉ　０重量％）を添加し、出発物質が消費されるまでこの混合物を水素 雰囲気の下に、撹拌する。セライトのパッドを用いて、触媒を濾過し、この触媒 を酢酸エチル（１００ｍｌ）によりすすぐ。溶媒を減圧で蒸発させ、生成物はさ らに精製することなく使用する。
例２２ 例２０のプロドラッグのハブテン、５′−〇−アロイルウリジンにより置換され ているシクロブタノール、化合物１００、の製造この例の番号付き化合物に関し ては、図３４を参照する。
刊行物に記載の方法に従い製造される、シクロブテンジオン９３を、数工程の後 に、アミノシクロブタンジオール９７に変換する。選択的にＮ−および０−アシ ル化反応を行ない、保護基を分離して、シクロブタノールハブテン１００を得る 。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：３−ヒドロキシー４−メチルー３− シクロブテン−！、２−ジオン　（９３）化合物９３を、Ｂｅ１ｌｕｓ、Ｄ、等 の方法（Ｈｅｌｖ、　Ｃｈｅｍ、　Ａｃｔａ６３（１９８０）　１１３０−１１ ４０；この記載を引用してここに組み入れる）を使用して合成する。
水浴により冷却したＤＭＦ５ｍＩ中の化合物９３（５ミリモル）およびｔｅｒｔ 　−ブチルジメチルクロロシロキサン（５，５ミリモル）の溶液に、イミダゾー ル（ＩＩミリモル）を添加する。この混合物を室温まて温める。１６時間後に、 この混合物を水（５Ｏａ上）中に注ぎ入れ、次いて酢酸エチル（３Ｘ５０ｍｌ） により抽出し、この有機層をブライン（５Ｏａ上）により洗浄し、次いで無水Ｍ ｇ５Ｏａ上で乾燥させ、次いて溶媒を減圧で蒸発させる。この残留物を、フラッ シュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状物として得る。
シクロブチンジオール９５の製造 水浴により冷却したエタノール５０ｍ１中の化合物９４（５ミリモル）の溶液に 、ホウ水素化ナトリウム（２０ミリモル）を添加する。ＴＬＣにより観察して出 発物質が消費された後に、この混合物を水（１００ｍｌ）中に注ぎ入れ、次いで エーテル（４Ｘ７５ｍｌ）により抽出し、この有機層をブライン（５Ｏａ上）に より洗浄し、次いで無水Ｍｇ５Ｏａ上で乾燥させ、次いで溶媒を減圧で蒸発させ る。この残留物を、フラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油 状物として得る。
アミノシクロブタンジオール９６の製造水浴により冷却したＴＨＦ５０ｍｌ中の 化合物９５（５ミリモル）の溶液に、テトラブチルアンモニウムフルオライド（ ＴＨＦ中の１．０Ｍ溶液、６ミリモル）を添加する。３０分後に、ジベンジルア ミン（２０ミリモル）を添加する。
さらに１５分後に、シアノホウ水素化ナトリウム（３０ミリモル）を添加する。
さらに２時間後に、この混合物を水（１００ｍｌ）中に注ぎ入れ、そのｐＨをｌ Ｏに調整し、この混合物をエーテル（４Ｘ７５ｍｌ）により抽出し、この有機層 をブライン（５Ｏａ上）により洗浄し、次いで無水Ｎａｔ　ＳＯａ上で乾燥させ 、次いて溶媒を減圧で蒸発させる。この残留物を、フラッシュクロマトグラフィ により精製し、生成物を無色油状物として得る。
アミノシクロブタンジオール９７の製造メタノール２０ｍ１中の５％Ｐｄ−Ｃ（ １０重量％）およびアミン９６（５ミリモル）の混合物を、ＴＬＣにより観察し て出発物質か消費されるまで、室温で水素雰囲気の下に撹拌する。セライトのパ ッドに通して、触媒を濾別し、次いで追１１０のＭｅＯＨｌ　５０ｍ１により洗 浄する。溶媒を減圧で蒸発させ、生成する油状物はさらに精製することなく使用 する。
アミド９８の製造 ＣＨｚ　ＣＩ＊　Ｉ　５ｍＩ中のアミン９７（３ミリモル）およびチアゾールエ ステル６０（３ミリモル）の溶液に、ＤＭＡＰ　（６ミリモル）を添加する。Ｔ ＬＣにより観察して、引き続く反応の進行か生起しなくなった後に、この混合物 を水（５Ｏａ上）中に注ぎ入れ、次いて酢酸エチル（３Ｘ５０ｍｌ）により抽出 し、この有機層をブライン（５Ｏａ上）により洗浄し、次いて無水ＭｇＳＯ４上 で乾燥させ、次いて溶媒を減圧で蒸発させる。この残留物を、フラッシュクロマ トグラフィにより精製し、生成物を無色油状物として得る。
エステル９９の製造 ＣＨｗ　Ｃ１ｔ　ｌ　０ｍ１中の酸９２（１ミリモル）、アルコール９８（１ミ リモル）およびＥＤＣ（１，２ミリモル）の混合物を、出発物質が消費されるま で、室温で撹拌する。この溶液を水（２ｘ２０ｍｌ）により洗浄し、この水性相 はＣＨｗ　Ｃ１ｔ　（２Ｘ　２０ｍ　ｌ）により洗浄する。この有機層を無水Ｍ ｇ５Ｏａ上で乾燥させ、次いで溶媒を減圧で蒸発させる。この残留物を、フラッ シュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状物として得る。
シクロブタノールハブテン１００の製造水浴により冷却したＣＨｗ　Ｃ１！　１ ０ｍ１中の化合物９９（１ミリモル）およびアニソール（１ｍｌ）の混合物に、 トリフルオロ酢酸（２ｍｌ）を添加する。
この混合物を室温まで温め、次いで１時間後に、揮発性成分を減圧で蒸発させる 。
この残留物を使用して、さらに精製することなく担体たんばく質に結合させる。
アドリアマイシンおよびメルフアランのプロドラッグアドリアマイシンおよびメ ルフアランは、インターカレーションによりＤＮＡ合成を抑制することが見出だ されているアントラサイクリン坑腫瘍抗生物質である（Ｄｉ　ｍａｒｃｏ、　Ａ 、等、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、　２０（１９７１）１３２３− １３２８　）　ｏこれらの化合物はＤＮＡのホスフェート基と糖残基（ダウナサ ミン；　ｄａｕｎａｓａｍｉｎｅ　）のアミノ基との間の静電性相互反応および 発色団（ｃｈｒｏｍｏｐｈｏｒｅ）相互反応を経て塩基対とインターカレートす ることが証明されている（Ｄｉｍａｒｃｏ、　Ａ、等、・Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅ ｍｏｔｈ、　ＲＥＰ　、Ｖｏｌ、６Ｎｏ、２（１９７５）９１−１０６）。
アミノ酸、ペプチドまたはその他のカルボン酸によるアミド結合形成によりアミ ノ基を誘導体化すると（Ｃｈａｎｄｒａ、Ｐ、、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔ ｈ、　Ｒｅｐ、（１９７５）１１５−１１２　）、これらの化合物の毒性か減少 されることも証明されている（Ｌｅｖｉｎ、　Ｙ、等、Ｆｅｂｓ。
Ｌｅｔｔｅｒｓ、　１１９−１２２　）。
１例２３ アドリアマイシンプロドラッグ、アロイルアミド化合物１０３、の製造この例の 番号付き化合物に関しては、図３５を参照する。
アドリアマイシンプロトラッグの合成は、アドリアマイシン１０１および安息香 酸１０２から出発して行うことができる（図３５）。アドリアマイシン１０１を 、ｌ−エチル３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）お よびｌ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）の存在の下に、ＤＭＦ中で 、安息香酸１０２により処理する。詳細には、この合成は下記のとおりにして行 う。
アドリアマイシンプロドラッグのベンゾイルアミド化合物１０３の合成に係わる 一般方法 ＤＭＦ　（０，０１５Ｍ）中のアドリアマイシン１０１（１当量）の溶液に、安 息香酸１０２（１当量）、■−エチル３−（３−ジメチルアミノプロピル）カル ボジイミド（ＥＤＣ；１．０５当量）およびｌ−ヒドロキシベンゾトリアゾール （ＨＯＢＴ；　Ｉ当量）を順次添加し、この反応混合物をアルゴン雰囲気の下に 室温で撹拌する。反応の完了後に、この生成物１０３をクロマトグラフィにより 精製する。別に、アロイルアミド化合物を、相当するアロイルカルボン酸の置換 により、同一方法により製造することができる。
例２４ 例２３のプロドラッグのハブテン、アドリアマイシンアロイルアミドのホスフェ ート、化合物１０４、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図３６を参照する。
アドリアマイシンの遷移状態類縁体、化合物１０４、の合成は、アドリアマイシ ン１０１およびベンゼンホスホン酸１０５から出発して製造することができる。
アドリアマイシン１０１を、ＥＤＣおよびｌ−ヒドロキシベンゾトリアゾールの 存在の下に、ＤＭＦ中でベンゼンホスホン酸１０５により処理する。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：ＤＭＦ中のアドリアマイシン＋０１ （１当量）の溶液に、ベンゼンホスホン酸１０５（１当量）、ｌ−エチル３−（ ３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ；　Ｉ当量）および！− ヒドロキシベンゾトリアゾール（１当量）を順次添加し、この反応混合物を室温 で攪拌する。反応の完了後に、この生成物１０４はクロマトグラフィにより精製 することができる。
例２４ａ 例２３のプロドラッグのハブテン、アドリアマイシンのアロイルスルホンアミド 、化合物１０６、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図３７を参照する。
アロイルスルホンアミドハブテン化合物１０６は、乾燥ＤＭＦ中でトリエチルア ミンの存在の下に、アトレアマイシン１０１をベンゼンスルホニルクロライド１ ０７により処理することにより製造することができる。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：ＴＳ類縁体化合物１０６の合成 りＭＦ中のアドリアマイシン１０１（１当量）の溶液に、アルゴン雰囲気下でト リエチルアミン（１，５当量）の存在の下に０℃において、ベンゼンスルホニル クロライド１０７（１，１当量）をゆっくり添加する。この反応混合物を室温で 撹拌する。この反応の完了後に、この生成物１０６はクロマトグラフィにより精 製することかできる。
例２５ メルフアランアロイルアミド　プロドラッグ　１０９の製造この例の番号付き化 合物に関しては、図３８を参照する。
メルフアラン　プロドラッグ１０９の合成は、メルフアラン１０８およびベンゾ イルクロライドから出発して行うことができる。
化合物１０９合成の詳細は、１０６の製造に関して上記した方法と同一であり、 ベンゼンスルホニルクロライドの代わりにベンゾイルクロライドを使用する。
例２６ａ 例２５のプロドラッグのハブテススルホンアミド化合物１１０．の製造この例の 番号付き化合物に関しては、図３９を参照する。
メルフアランのハブテン、化合物１１０、の合成は、１０６の製造に関して上記 した反応条件と類似の反応条件を使用して、メルフアラン１０８およびベンゼン スルホニルクロライドから出発して達成することができる。
この化合物の合成の詳細は、１０６の合成に係わり上記されている方法と同一の 方法に従う。
例２７ ５−フルオロウリジンエステル　プロドラッグの相対毒性フルオロウリジンは各 種の組織における固形癌の処置に臨床上の作用性を存する、細胞毒性抗新生物性 ヌクレオシド類縁体である。しかしながら、フルオロウリジンは正常組織に対し て毒性であり、特に骨髄および胃腸器官内皮に対して毒性である。腫瘍細胞に目 標が定められている触媒性抗体または酵素により活性化されるフルオロウリジン のプロドラッグは、フルオロウリジンの治療指数を実質的に改良する。内在酵素 によっは活性化されず、触媒性抗体によっては容易に活性化されるプロドラッグ が好ましい。
エステルを開裂させる触媒性抗体は、直行法（ｓｔｒａｉｇｈｔ−ｆｏｒｗａｒ ｄ　ｍｅｔｈｏｄｓ　）により製造される。フルオロウリジンの５′位置に結合 しているエステル置換基は、この化合物を無毒性にし、ウリジンホスホリラーゼ による分解がら保護する。
フルオロウリジンの５″−ベンゾエートプロドラッグおよび置換５゛−ベンゾエ ートプロドラッグをマウスに投与して、このベンゾエート部分が内在酵素による 分解を修飾することができ、これによってフルオロウリジンそれ自体よりも実質 的に低い毒性を有するプロトラッグをもたらすことかできるかに関して評価した 。
万告 フルオロウリジン（ＦＵｒｄ）およびフルオロウリジンプロドラッグを、一群７ 匹の、２０ｇ１ｌｌＢａ　Ｉ　ｂ／ｃマウスに、下記の投与量で腹腔内注射によ り投与した。
Ｌ　フルオロウリジン　１０ｍｇ／ｋｇ２、フルオロウリジン　５０ｍｇ／ｋｇ ３、フルオロウリジン　１００ｍｇ／ｋｇ４．５゛ヘンゾイルフルオロウリジン （ＢＺ−ＦＵｒｄ）１３９．７ｍｇ／ｋｇ ５、　５−−（２，４，６−トリメチルベンゾイル）フルオロウリジン（ＴＭＢ −ＦＵｒｄ）１５６．９ｍｇ／ｋｇ６、　５−一（３，４，５−トリメトキシヘ ンジイル）フルオロウリジン（ＴＭＯＸ−ＦＵｒｄ）１７５．２ｍｇ／ｋｇフル オロウリジンのこれら３種の芳香族エステルの投与量は、フルオロウリジンｌ０ ｍｇ／ｋｇのモル等量である。
第７群（対照）には、注射媒質のみを投与した（０．９％塩類溶液中のｌｏ％Ｄ ＭＳＯ０，４ｍ１）。
フルオロウリジンまたはそのプロドラッグを投与して７日目に、血液試料を眼窩 後部洞から採取し、各種血液細胞測定を行い、また各マウスの大腿骨の一方から 細胞を採取し、総合的骨髄細胞充実性に関して評価し、さらにまた牌臓を採取し てその重量を測定した。体重をまた測定した。
懸 フルオロウラシル投与は、血液細胞数および骨髄細胞数に関して投与量依存性減 少をもたらした。
１００ｍｇ／ｋｇのフルオロウリジンは、体重および牌臓重量の有意の減少をも たらした。マウスのエステラーゼ活性により分解されるものと予想される、５′ −ベンゾイルフルオロウリジン（１３９ｍｇ／ｋｇ）は、試験指数の全部に反映 されているように、フルオロウリジン単独のモル等量（１００ｍｇ／ｋｇ）の場 合とほぼ同等の毒性を示した。
５’−（２，４，６−４リメチルベンゾイル）フルオロウリジン（ＴＭＢ　−Ｆ Ｕｒｄ）は、赤血球数のみが対照値よりも存意に低いか、示された毒性の徴候は 非常に僅かであった。骨髄細胞数および好中球数から見て、この化合物による骨 髄損傷は、フルオロウリジンのモル等量（ＦＵｒｄ、１００ｍｇ／ｋｇ）に比較 して少なかった。５−−　（３，４，５−１−リメトキシベンゾイル）フルオロ ウリジン（ＴＭＯＸ−ＦＵｒｄ）の毒性は、フルオロウリジンのモル等量の１／ ２（５０ｍｇ／ｋｇ）よりも僅かに低かった。
これらのデータを下記の表１および２に示す。
表　！、細胞充実性 体　重　牌臓重量　骨　髄 被験群　（ダラム）　（■）ｌＯ＠細胞／大腿骨対照　・２０．１±０．５　８ ９．９±３．４　８．２８±０．６９ＦＵｒｄ　１０ｍｇ／ｋｇ　８９．９±２ ．　Ｏｎｓ　５．８３±０．７７゜ＦＵｒｄ　５０ｍｇ／ｋｇ　６９．６±２． ４°　２．８５±０．１６＠門ｒｄ　ｌｏＯｍｇ／ｋｇ　１６．３±０．６°　 ５７．７±２．５°　０．９８±０．１９’ＢＺ−門ｒｄ　１７．５±０．６° 　６１．８±１．２°　１．２３±０．１θ。
Ｔｈ１Ｂ−ＦＵｒｄ　１９．６±０．４ｎｓ　９９．２±４．４ｎｓ　７．８８ ±０．４７ｎＳＴｈｌＯＸ−ＦＵｒｄ　２０．０±０．５ｎｓ　７３．３±３． ５°　３．４２±０．２９＠註二〇は対照値よりも有意に低いことを示し、ｐ＜ ｏ、０５；ｎｓは対照（未処置）群から差異がないことを示す。
表　２＝フルオロウリジンおよびフルオロウリジンプロドラッグの相対毒性：血 液細胞数 血小板　好中球　赤血球 被験群　（Ｋ／ｍｌ）　（Ｋ／＋ｎｌ）　（Ｋ／ｍｌ）対照　７４１＋１５　１ ．７４７±、７３７　９．０１±０．０９Ｆｌｌｒｄ　１０ｍｇ／ｋｇ　７０５ ±１４ｎｓ　６０７±、３３０ｎｓ　８．３３±０．０９゜ＦＵｒｄ　５０ｍｇ ／ｋｇ　４３３±３９”　、０２０±、０３６°　７．８１±０．１１”ＦＵｒ ｄ　１００ｍｇ／ｋｇ　１５５±２０”　、０１０±、０１９”　７．５９±０ ，５゜ＢＺ−ＦＵｒｄ　２０９±３１”　、０１１±、０３０”　７．７６±０ ．２２”Ｔｈ１Ｂ−ＦＬｌｒｄ　７０７±２３ｎｓ　１．３０　±、３３８ｎｓ 　８．６９±０．０７゜ＴＭＯＸ−ＦＵｒｄ　６２８±２７°　、０９３±、０ ３９１　７．６５±０．１１”註：°は対照値よりも存意に低いことを示し、Ｐ ＜０．０５；ｎｓは対照（未処置）群から差異がないことを示す。
例２７ａ 高投与量における、５−フルオロウリジンエステル　プロドラッグの相対毒性例 ２７に記載の試験と同様の試験において、２．　４．　６−）ジメトキシベンゾ イル５−フルオロウリジンおよび２．６−シメトキシベンゾイル５−フルオロウ リジンの毒性を、マウスにおいて高投与量レベルで試験し、最高耐容用量決定に 関して試験した。
第１部 ６群のＢａＩ　ｂＣＣママウスおいて以下に示すように、２．　４．　６−ドリ メトキシベンゾイル５−フルオロウリジンを、５−フルオロウリジンの毒性およ び対照と比較した。
ｌ）対照−塩類溶液　０．２ｍｌ、ｔ、　ｐ　動物５匹２）ＦＩＵｒｄ　１０ｍ ｇ／ｋｇ　動物５匹３）ＦＩＵｒｄ　５０ｍｇ／ｋｇ　動物５匹４）トリメトキ シベンゾイルＦＩＵｒｄ　（ＴＭＯＸＦＩＵｒｄ）１５８ｍｇ／ｋｇ　（１００ ｍｇ／ｋｇＦＩＵｒｄのモル等量）動物５匹 ５）ＴＭＯＸＦＩＵｒｄ　３１６ｍｇ／ｋｇ（２００ｍｇ／ｋｇＦＩＵｒｄのモ ル等量）　動物５匹 ６）ＴＭＯＸＦＩＵｒｄ　７９０ｍｇ／ｋｇ（５００ｍｇ／ｋｇＦＩＵｒｄのモ ル等量）　動物３匹 薬物投与後の７日目に、血液試料を眼窩後部洞から採取し、血液測定に関する差 異を評価した。
結果 下記の表３に示されているように、このプロドラッグは、薬物５００ｍｇ／ｋｇ に相当する高投与量においてのみ血液細胞数を変化させた。この投与量で示され る毒性は、ＦＩＵｒｄ薬物単独１０ｍｇ／ｋｇよりも僅かに多い投与量にほぼ相 当し、約５０：ｌの毒性比を示す。これらの高投与量で、これらのプロドラッグ は動物を死亡させず、ＦＩＵｒｄ薬物に比較して、これらのプロドラッグが非常 に実質的に減少された毒性を有することを証明している。
表　３：ＦＩＵｒｄの効果と２．　４．　６−）ジメトキシベンゾイルＦＩＵｒ ｄの効果との比較 ＷＢＣＵ７パ球　血小板　好中球　赤血球被験群　Ｋ／、ＣＺＩ　Ｋ／μｌ　Ｋ Ｊｕｌ　Ｋｊｕｌ対照　１０．３２±０．３４７３０．６十羽、７１．６３５± ０．２５９　８．３１±０．２２ＦＩＵｒｄ　ｌ０ｍｇ／ｋｇ　９．８２±０． ８９ｎｓ　６８３．８±２５．６ｎｓ　０．６５４±０．２００”　８．７９± ０．７６ＦＩＵｒｄ　５０ｍｇ／ｋｇ　１２．０３±０．７７ｎｓ　３１２．３ ±４５．３°０．０５Ｂ±０．０３３＠１１．９０±０．７６ＴｈｌＯＸ　ＦＩ Ｕｒｄ １００ｍｇ／ｋｇ　１０．２２±０．８０ｎｓ　７３０．６±５８．７ｎｓ　１ ．６７４±０．２１２ｎｓ　７．９１±０．６４ＴＮＯＸ　ＦＩＵｒｄ ２００ｍｇ／ｋｇ　９．２８±０．３２ｎｓ　８３３．８±７９．６ｎｓ　０． ９８５±０．１６７ｎｓ　７．８３±０．１５ＴＭＯＸ　ＦＩＵｒｄ ５００ｍｇ／ｋｇ　７．２３±０．２４”　７７１．７±２９．５ｎｓ　Ｏ，５ １３±０．２３１　”　６．６０±０．２０註二〇は対照値よりも存意に低いこ とを示し、Ｐ＜０．０５；ｎｓは対照（未処置）群から差異がないことを示す。
第２部 ８群のＢａ　Ｉ　ｂＣＣママウスおいて以下に示すように、高投与量で２．６− シメトキシベンゾイル５−フルオロウリジンの毒性を、５−フルオロウリジンの 毒性および対照と比較した。
ｌ）対照−塩類溶液　０．　２ｍＬ　ｔ、　ｐ　動物７匹２）ＦＩＵｒｄ　５ｍ ｇ／ｋｇ　動物６匹３）ＦＩＵｒｄ　Ｉ　Ｏｍｇ／ｋｇ　動物６匹４）ＦＩＵｒ ｄ　５０ｍｇ／ｋｇ　動物６匹５）ＦＩＵｒｄ　Ｉ　ｏｏｍｇ／ｋｇ　動物６匹 ６）２．６−ジメトキシベンゾイルＦＩＵｒｄ　（ＤＭＯＸＦＩＵｒｄ）１００ ｍｇ／ｋｇＦＩＵｒｄのモル等量　動物６匹７）ＤＭＯＸＦＩＵｒｄ　２００ｍ ｇ／ｋｇＦＩＵｒｄのモル等量動物６匹 ８）ＤＭＯＸＦＩＵｒｄ　５００ｍｇ／ｋｇＦＩＵｒｄのモル等量動物５匹 薬物投与後の７日目に、血液試料を眼窩後部洞から採取し、血液細胞数の差異を 測定した。
結果 下記の表４に示されているように、この例において使用された高投与量の２゜６ −シメチルベンゾイルフロオロウリジンは、白血球、血小板、好中球およびリン パ球により評価して、毒性の徴候を示さなかった。特にこれらの投与量において 、このプロドラッグは、非常に無毒性であって、好中球に係わるＦＩＵｒｄに対 する相対毒性は５０：１よりも大きかった。この種の血液細胞は細胞毒性化学療 法薬物に対して最も感受性である。
表４ ＦＩＵｒｄ対２，６−ジメトキシベンゾイルＦＩＵｒｄの血液細胞数に係わる効 果 ＷＢＣ血小板　好中球　リンパ球 被験群　νμｌ　ＶμｌＫ／μｌ　Ｋ／μｌ対照　７．３４±０．４６７６９． １±２６．４０．９７１±０．１４１　６．０２±０．３３ＦＩＵｒｄ　５ｍｇ ／ｋｇ　７．４３±ｏ、５ｓｎｓ　７３６．０±３７．２ｎｓ　１．４７３±０ ．３８６ｎｓ　５．５８±０．３８ＦＩＵｒｄ　１０ｍｇ／ｋｇ　８．２７±０ ．６４ｎｓ　８２０．５±３４．６ｎｓ　Ｏ，６３７±０．０８４ｎｓ　７．１ ６±０．５９ＦＩＵｒ６　５０ｍｇ／ｋｇ　４．８８±０．７０＠４８９．０± ７２．３°　０．２０８±０．１８３”　４．６２±０．５１”ＦＩＵｒｄ　１ ００ｍｇ／ｋｇ　１．８８±０．４６°　１７８．３±１４．８°　０．００７ ±０．００３°　１．８７±０．４６”ＤＭＯＸ　ＦＩＵｒｄ ｌＯ輸ｇ／ｋｇ　７．４８±０．２９　７８４．３土圧９　１．３３５±０．１ ０１　５．８６±０．３７ＤＭＯＸ　ＦＩＵｒｄ ２００ｍｇ／ｋｇ　９．９０±０．７６　８９５．０±２５．９　２．０８３± ０．２４２　７．４３±０．７６ＤＭＯＸ　ＦＩＵｒｄ ５００ｍｇ／ｋｇ　９．０２＋０．５９　９０９．６±３０．３　１．９７２± ０．１９４　６．７８＋０．６０註二〇は対照値よりも有意に低いことを示し、 Ｐ＜０．０５；ｎｓは対照（未処＠）群から差異がないことを示す。
例２８ ５−フルオロウリジンと５−−β−ガラクトシルフルオロウリジンとの相対毒性 ５′−β−ガラクトシルフルオロウリジン（Ｇａｌ−Ｆｕｒｄ）は、非補乳動物 酵素β−ガラクトシダーゼにより、または相当する触媒性抗体により活性化する ことができる、フルオロウリジンのプロドラッグである。５′位置に共有結合し た糖はフルオロウリジンの毒性の減少度合に係わる決定的論点である。抗新生物 性フッ素化ピリミジン類縁体の投与量を制限する主要毒性は、骨髄損傷にある。
Ｇａ１−Ｆｕｒｄに比較したフルオロウリジン毒性を、毒性指数として血液細胞 数および骨髄細胞数を用いて、マウスで評価した。さらに、Ｇａ１−Ｆｕｒｄを 酵素β−ガラクトシダーゼと一緒に投与して、このプロドラッグがインビボ酵素 により活性化されるか否かに関して評価した。
雌のＢａ１ｂ／Ｃ７ウス（２０ｍｇ）を−ＢＩ６匹の６群に分けた：１、対照− 塩類溶液　０．　２ｍｌ、　ｉ、　ｐ２、フルオロウリジン　ｌｏｍｇ／ｋｇ、 ｉ、ｐ３、フルオロウリジン　１００ｍｇ／ｋｇＳ　ｔ、ｐ４、Ｇａ１−Ｆｕｒ ｄ　１６０ｍｇ／ｋｇ、ｉ、ｐ（フルオロウリジン１００ｍｇ／ｋｇのモル等量 ） ５、β−ガラクトシダーゼ　５ｍｇ／ｋｇ、ｉ、ｐ６、Ｇａｌ−Ｆｕｒｄ１６０ ｍｇ／ｋｇ＋β−ガラクトシダーゼ５ｍｇ／ｋｇ。
ｉ、ｐ、β−ガラクトシダーゼの投与後に、別個の注射としてＧａ１−Ｆｕｒｄ を投与した。）フルオロウリジンまたはＧａ１−Ｆｕｒｄを投与した後の７日目 に、血液試料を眼窩後部洞から採取し、各種血液細胞測定を行い、また各マウス の大腿骨の一方から細胞を採取し、総合的骨髄細胞充実性を評価し、さらにまた 牌臓を採取し、その重量を測定した。
結果 投与後７日目に、フルオロウリジンは試験された全部の血液学的指数に関して、 存意の減少を示した。これに反して、Ｇａ１−Ｆｕｒｄ投与後７日目の日日細胞 数および総合的骨髄細胞数は、Ｂａ１ｂ／Ｃマウスの正常値の範囲内にあった。
Ｇａ１−Ｆｕｒｄとβ−ガラクトシダーゼとを組み合わせて投与した場合には（ 各投与は、別々に行い、プロドラッグと酵素とが投与前に接触しないようにした ）、血液学的毒性が生じ、比較的無毒性のプロドラッグが、インビボで酵素β− ガラクトシダーゼによって細胞毒性薬物に変換されたことを示している。これら の結果を表５および６、ならびに図２５にまとめて示す。
表５：牌臓重量および骨髄細胞充実性に係わるＧａ１−ＦｕｒｄおよびＦｕｒｄ の効果 ＦＵｒｄ　ｌ０ｍｇ／ｋｇ　１０（１，５ｎｓ　−−−−−−−−−−ＦＵｒｄ 　１００ｍｇ／ｋｇ　５３．５±２．１°　０．９６±０．２５’Ｇａ１−ＦＵ ｒｄ　１６０ｍｇ／ｋｇ　８９．９±３．４ｎｓ　９．７０±０．８１ｎＳカラ クトノグーゼ　９１．３±１．９ｎｓ　−−−−一−−−−−Ｇａｌ−ＦＵｒｄ ＋ガラクトノダーゼ　８０．２±４．３　°　４．０４±０．８４”註どは対照 値よりも存意に低いことを示し、ｐ＜ｏ、０５；ｎｓは対照（未処置）群から差 異がないことを示す。
表６：血液細胞測定に係わるＧａ１−ＦｕｒｄおよびＦｕｒｄの効果ＦＵｒｄ　 １０ｍｇ／ｋｇ　８０９±２８ｎｓ　Ｏ，７５±、１５°　７．２８±０．６７ ’ＦＵｒｄ　１ｏＯｍｇ／ｋｇ　２４２±１２°　０．０８±、０２°　３．０ ７±０．２３”Ｇａ１−ＦＵｒｄ　１６０＋ｎｇ／ｋｇ　７７０±２５ｎｓ　１ ．９０±、　２２ｎｄ　７．３９±０．４５゜Ｇａ１−ＦＵｒｄ＋ガラクトンダ ーゼ　５７２±３９’　０．７４±、０７　°　４．７８±０．２１’註二〇は 対照値よりも存意に低いことを示し、Ｐ＜０．０５；ｎｓは対照（未処置）群か ら差異がないことを示す。
例２８ａ 高投与量における、５−フルオロウリジンと５′−β−ガラクトシルフルオロウ リジンとの相対毒性 例２Ｂに記載の試験と同様の試験において、５′−β−ガラクトシルフルオロウ リジンを高投与量で試験して、このプロドラッグの限界毒性を測定した。雌のＢ ａ１ｂ／Ｃマウスを下記のとおりに分け、下記用量の薬物の単次ｉ、ｐ投与によ り処置した： １）　Ｆ　Ｉ　Ｕｒ　ｄ　Ｉ　５０ｍｇ／ｋｇ、動物５匹２）ＦＩＵｒｄ　２０ ０ｍｇ／ｋｇ、動物５匹３）　Ｆ　Ｉ　Ｕｒ　ｄ　２５０ｍｇ／ｋｇ、動物５匹 ４）ガラクトシルＦＩＵｒｄ　７５０ｍｇ／ｋｇ、動物３匹５）ガラクトシルＦ ＩＵｒｄ　１５００ｍｇ／ｋｇ、動物３匹マウスは、死亡数および毒性徴候に関 して、毎日検査した。フルオロウリジン投与後の７日目に、各群２匹の動物から 血液試料を採取した。
位黒 この試験の結果を下記の表７に示す。薬物処置後の約５８目から始まり、フルオ ロウリジンが投与されたマウスはいづれも、だるそうな挙動を示し始め、それら の体重の２０％を失った。ガラクトシルフルオロウリジンか投与されたマウスで は、いづれの時点でも毒性の徴候を示した。
好中球数はフルオロウリジンにより誘発される骨髄損傷の最も敏感な指数である 。Ｇａ１−ＦＩＵｒｄは１５００ｍｇ／ｋｇで、好中球数を、フルオロウリジン ｌ０ｍｇ／ｋｇの投与の場合よりも低く変化させた。Ｇａｌ−ＦＩＵｒｄ１５ｏ ｏｍｇ／ｋｇの投与後の好中球数は実質的に正常範囲（１−２，５に細胞／マイ クロメーター）にある。骨髄に対するＧａ１−Ｆ］Ｕｒｄ対Ｆ］Ｕｒｄのインビ ボ毒性比は１００：Ｉである。すなわち、Ｇａ１−ＦＩＵｒｄに比較して、ＦＩ Ｕｒｄは骨髄に対して１００倍よりも大きい毒性を有する。
Ｂａ１ｂ／Ｃマウスにおいて、Ｇａ１−ＦＩＵｒｄは１５００ｍｇ／ｋｇの投与 量で実質的に無毒性である。結合に抵抗する触媒性たんばく質によるフルオロウ リジンプロドラッグの目標を定めた活性化を含む治療予定計画における投与量に 比較して、この投与量ははるかに多い。
表７：血液細胞数および死亡数に係わるＦＩＵｒｄの効果および高投与量Ｇａ１ −ＦＩＵｒｄの効果の比較 Ａ、死亡数 被験群　死亡数 Ｆ　ＩＵｒ　ｄ　ｌ　５０ｍｇ／ｋｇ　２１５Ｆ　ＩＵｒ　ｄ　２００ｍｇ／ｋ ｇ　’　５１５Ｆ　ＩＵｒ　ｄ　２５．Ｏｍｇ／ｋｇ　５１５Ｇａｌ−ＦＩＵｒ ｄ　７５０ｍｇ／ｋｇ　Ｏ／３Ｇａｌ−ＦＩＵｒｄ　１５００ｍｇ／ｋｇ　Ｏ／ ３フルオロウリジンによる処置後の１００日目で、動物の死亡は見出だされなか った。薬物投与後の１０−１５日間に、動物の全部が死亡した。刊行物記載のマ ウスにおける５−フルオロウリジンのＬＤ５０は、１６０ｍｇ／ｋｇであり、従 ってこの試験でフルオロウリジンの投与量の関数として得られた死亡に係わる結 果と充分に一致している。
Ｂ、血液細胞数 ＷＢＣ好中球　血小板 被験群　νμＩＫ／μＩＶμ１ ＦＬＵｒｄ　１５０ｍｇ／ｋｇ　１．０　０．０１５　１４５．５ＦＩＵｒｄ　 −２００ｍｇ／ｋｇ　Ｏ，８０，０２１１５ＦＩＵｒｄ　２５０ｍｇ／ｋｇ　Ｏ ，７５０，０１９８Ｇａｌ−ＦＩＵｒｄ　７５０ｍｇ／ｋｇ　７．２５　１．７ ０５　８６２Ｇａｌ−ＦＩＵｒｄ　１５００ｍｇ／ｋｇ　６．６　１．３１５　 ８３５血液試ｌが各群の動物の２匹のみから採取されていることから、平均値は 統計学的には考慮されていない。
例２９ シクロホスファミドおよびアルドホスファミドジエチルアセタールの相対毒性シ クロホスファミドは、その活性細胞毒性異化代謝産物の先駆体を生成するために は、肝臓で酵素変換を受けなければならない抗新生物性アルキル化剤である。
従って、シクロホスファミドは臨床的に重要な薬物であるにもかかわらず、それ 自体で目標を定めた供給に適する候補化合物ではない。その活性細胞毒性異化代 謝産物の先駆体、例えばアルドホスファミドは不安定である。適当な触媒性たん ばく質、例えば触媒性抗体、により１回の触媒作用工程で活性化することができ るアルドホスファミドのプロドラッグとして、アルドホスファミドのジエチルア セタールが製造されている。この試験では、シクロホスファミドおよびアルドホ スファミドジエチルアセタールを、マウスに投与して、アルドホスファミドジエ チルアセタールが実際に比較的無毒性であり、従って抗体−触媒結合体による目 標を定めた活性化に適しているか否かに関して評価した。
雌のＢａ１ｂ／Ｃマウス（２０ｇ）を、下記のとおりに両群７匹の４群に分けた 。
１、対照−塩類溶液　０．２ｍｌ、ｉ、ｐ２、シクロホスファミド（ＣＹＰ）　 ３０ｍｇ／ｋｇ、ｉ、ｐ３、シクロホスファミド（ＣＹＰ）　１５０ｍｇ／ｋｇ 、ｔ、ｐ４、アルドホスファミドジエチルアセタール（ＡＬＰ−ＤＥＡ）１８０ ｍｇ／ｋｇＳ　ｔ、ｐ （シクロホスファミド１５ｏｍｇ／ｋｇのモル当量） 薬物投与後の４日目に、血液試料を眼窩後部洞から採取し、血液細胞数の差異を 評価し、また各マウスの大腿骨の一方から細胞を採取し　総合的骨髄細胞充実性 を評価した。
結果 シクロホスファミド（１５０ｍｇ／ｋｇ）の投与後の４日目に、被検血液学的指 数の全部で有意の減少が見出だされた。これに反して、アルドホスファミドジエ チルアセタールの投与後の４日目の白血球および骨髄細胞測定値はＢａ１ｂ／Ｃ マウスの正常値の範囲内にあった。アルドホスファミドジエチルアセタールは実 際に、好中球数を減少させなかったのに対して、シクロホスファミドは低投与量 （３０ｍｇ／ｋｇ）でも存意の減少をもたらした。好中球数は、シクロホスファ ミドの活性異化代謝産物により生起する造血機能損傷に係わる最も敏感な指数で あると見做されている。従って、アルドホスファミドジエチルアセタールは、シ クロホスファミドに比較して、造血細胞に対して比較的無毒性である。
表８＝細胞充実性に係わるシクロホスファミドとアルドホスファミドジエチルア セタールとの効果の比較 骨髄細胞充実性 被　験　群　（１０６細胞／大腿骨） 対　照　６．３３±０，４５ ＣＹＰ　３０　ｍｇ／ｋｇ　６．０３±０．２９ｎｓＣＹ’Ｐ　１５０■／ｋｇ 　２．０９±０．１４゜ＡＬＰ−ＤＨＡ　Ｉ８８　ｍｇ／ｋｇ　７．７９±０． ５９ｎｓ註・１は対照値よりも有意に低いことを示す、ｐ＜ｏ、０５；ｎｓは　 対照（未処置）群から差異がないことを示す。
表９＝血液細胞数に係わるシクロホスファミドとアルドホスファミドジエチルア セタールとの効果の比較 好中球　リンパ球　血小板 被験群　（Ｋ／μｌ）　（Ｋ／μｌ）　（Ｋ／μＩ）対照　１．１１±、１０　 ５．５９±０．４４　７７５±６ＣｖＰ３０　ｍｇ／ｋｇ　０．４７±、０８　 ４．１４±０．１９”　７９６±２０ｎｓＣｔ’Ｐ　１５０■／ｋｇ　０．０４ ±、０１”　１．９８±０．１２°　５９１＋１４”ＡＬＤ−ＤＥＡ　１８８　 ｍｇ／ｋｇ　１．２０±、１８ｎｓ’　５．５２±０．４０ｎｓ　７４３±１２ ｎｓ註、。は対照値よりも存意に低いことを示す、Ｐ＜０．０５；ｎｓは　対照 （未処置）群から差異がないことを示す。
例３０ メルフアラン、ベンゾイルメルフアランおよび３．　４．　５−）リメトキシベ ンゾイルメルファランの相対毒性 メルフアランはＬ−サルコリシン（Ｌ−ｓａｒｃｏｌｙｓｉｎ）としても知られ ているナイトロジェンマスタードのフタルイミド誘導体である。このアルキル化 剤はしばしば、多発性骨髄腫、乳房および卵巣の癌腫の処置に使用され、また悪 性黒色腫に対する有利な効果が報告されている。メルフアランの毒性は大部分が 血液学的毒性であり、他のアルキル化剤の毒性と類似している。
ベンゾイルおよび３．　４．　５−トリメトキシベンゾイルメルフアランは、メ ルフアランのプロドラッグとして製造され、触媒性抗体開裂によりｌ工程で活性 化され、活性薬物メルフアランが放出されるようにデザインされている。
この試験では、これらのプロドラッグの血液学的毒性を活性薬物と比較した。
これらのプロドラッグを、メルフアラン５、ＩＯおよび２０ｍｇ／ｋｇに相当す る量で投与した。雌のＢａ１ｂＣを両群６匹の１０群に分け、下記の薬物を下記 の量で投与した： ｌ）対照−塩類溶液　０．　２ｍＬ　ｉ、　ｐ２）メルフアラン　５ｍｇ／ｋｇ ３）メルフアラン　ｔｏｍｇ／ｋｇ ４）メルフアラン　２ｏｍｇ／ｋｇ ５）ベンゾイルメルフアラン（ＢＭｅｌ）（メルフアラン５ｍｇ／ｋｇのモル当 量） ６）ＢＭｅｌ　（メルフアラン１０ｍｇ／ｋｇのモル当量） ７）ＢＭｅ　Ｉ　（メルフアラン２０ｍｇ／ｋｇのモル当量） ８）　３．　４．　５−）リメトキシベンゾイルメルファラン（ＴＭＢ）（メル フアラン５ｍｇ／ｋｇのモル 当量） ９）ＴＭＢ　（メルフ７ラン１０ｍｇ／ｋｇのモル当量） １０）ＴＭＢ　（メルフアラン２ｏｍｇ／ｋｇのモル当量） 薬物投与後の４日目に、眼窩後部洞から血液試料を採取し、血液細胞数の差異を 測定した。
結果 下記の表■０に示されているように、メルフアラン投与後の４日目で、被検血液 学的指数の全部に有意の減少が見られた。これに反して、これらのプロドラッグ 投与後に、白血球数は有意に変化しないか（若干の場合に、僅かな増加）、また はプロドラッグの投与量が最大である場合に僅かな減少を示した。しかしながら 、この測定値はメルフアランの最低投与量の場合のレベルにまでは減少しなかっ た。プロドラッグをどの投与量で投与しても、どちらのプロドラッグも、好中球 数に変化は見られなかった。従って、これら２種のプロドラッグはメルフアラン に比較して、有意に減少された毒性を示す。
表１Ｏ：血液細胞測定に係わる、メルフアランとベンゾイルメルフアランおよび ３、　４．　５−トリメトキシベンゾイルメルフ７ランとの効果の比較ＷＢＣリ ンパ球　血小板　好中球 被験群　１μＩＫ／μＩＫ／μＩ　Ｖμｌ対照　７．３４±０．４６７６９．１ ±２６．４０．９７１±０．１４１　６．０２±０．３３Ｍｅｌ　５ｍｇ／ｋｇ 　２．６６±０．２１”　７７９．６±４２．６ｎｓ　０．３５４±０．０３６ ”　２．１８±０．１９＠Ｍｅｔ　１０ｍｇ／ｋｇ　１．２８±０．０９°　６ ４３．０±２８，９°　０．０７８±０．０１１”　１．１７±０．０７゜Ｍｅ ｌ　２０ｍｇ／ｋｇ　０．０６±０．０８°　５７０．０±４１．５°　０．０ ２６±０．００７”　０．５８±０．０８９Ｂ　Ｍｅｌ　５ｍｇ／ｋｇ　５．３ ４±０゜４９°　７４６．３±１７．５ｎｓ　ｏ、　９８０±０．１０５ｎｓ　 ４．０９±０．４８８Ｂ　Ｍｅｌ　１０ｍｇ／ｋｇ　５．３４±０．３１”　８ ６９．６±２０．１　１．１４１±０．１５７ｎｓ　３．９８±０．２６゜Ｂ　 Ｍｅｌ　２０■／ｋｇ　５．４９±０．３７”　８８１．９±１２．８　１．３ ５７±０．１９０ｎｓ　３．７６±０．２０゜ＴＭＢ　ｍｅｌ ５ｍｇ／ｋｇ　６．８８±０．３６ｎｓ　６８１．２±２６．２＠　１．１２６ ±０．１７８ｎＳ　５．３８±０．４６ｎｓＭＢｍｅ１ １０ｍｇ／ｋｇ　４．６７±０，２８°　７２３．２±２３．Ｏｎｓ　Ｏ，９９ ５±０．１１０ｎｓ　３．４５±０．１８゜ＭＢｍｅ１ ２０ｍｇ／ｋｇ　５．５４±０．４１”　７５５．４±２６．４ｎｓ　Ｏ，９２ ８±０．０９９ｎｓ　４．４４±０．４８゜註ダは対照値よりも有意に低いこと を示し、ｐ＜ｏ、０５；ｎｓは対照（未処置）群から差異がないことを示す。
例３１ プロドラッグ、テトラキス（２−クロロエチル）アルドホスファミドジエチルア セタール、化合物１１２、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図４０を参照する。
ホスホラミド　ジクロライド３６を、ビス（２−クロロエチル）アミンと反応さ せ、ホスホラミド　クロライドＩｌｌを生成させ、この化合物Ｉｌｌを次いで、 ３．３−ジェトキシ−■−プロパツールのりチウムアルコキシドと反応させ、プ ロドラッグ１１２を生成させる。
詳細：この合成は下記のとおりにして行うニジクロリゾ−ｈ３６　（１，０ｇ、 ３．９ミリモル）、ビス（２−クロロエチノリアミン塩酸塩（０，７５８ｇ、４ ．２ミリモル）およびトルエン（３８ｍｌ）の混合物に、室温でトリエチルアミ ン（１，１８ｍ１．８，４ミリモル）を添加した。この混合物を次いて、１６時 間　加熱還流させた。室温まで冷却後に、この混合物をｌＯ％ＫＨｚ　Ｐ　０４ 　（２Ｘ　２０　ｍ　ｌ　）により洗浄し、この水性相をエーテル（２ＸＩＯｍ ＋）により抽出し、有機相を集め、濃縮し、次いてフラッシュクロマトグラフィ により精製しく２５％酢酸エチル／ヘキサン、生成物Ｒｆ：３０％酢酸エチル／ ヘキサン中で０．２５）、油状物０．５２ｇ（３７％）へキサン中のｎ−ＢｕＬ ｉの２．５Ｍ溶液（０，８１ｍ１．２．　０ミリモル）を室温で、ＴＨＦ６ｍＩ 中の３．３−ジェトキシ−１−プロパツール（０，１９ｍ１．１．３ミリモル） の溶液に添加した。３０分後に、この混合物を０℃に冷却し、次いでクロリデー トＩ１１　（０，４７ｇ、１．３ミリモル）を添加した。
この混合物を室温まで温めた。１時間後に、１０％ＮａＨ２ＰＯ４（８ｍｌ）を 添加し、この混合物をエーテル（３＊８ｍｌ）により抽出し、この有機相を無水 Ｍｇ５Ｏ＜上で乾燥させ、次いでこの溶剤を減圧で蒸発させた。この残留物をフ ラッシュクロマトグラフィにより精製しく２５．３０．４０および５０％酢酸エ チル／ヘキサンにより抽出、生成物Ｒｆ：３０％　酢酸エチル／ヘキサン中で０ ゜２２）、生成物を１３２ｍｇを油状物として得た（２１％）；　ＩＲ（ｎｅａ ｔ）２９７５．２９３２，２８９９．２８７９，１４５５．１３７５．１３４７ ．１３０６．１２２５，１１３２．１０８８．１０５６，９８０，９２１，８９ ３゜７６０．７２３，６５８ｃｍ−’；’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１，）ｄｉ、２２ 　（ｔ。
６、Ｊ＝７．　０Ｈｚ）、２．　００　（ｑ、２．　Ｊ＝６．　１Ｈｚ）、３． 　３６−３゜７０（ｍ、２０）、４．１１（ｑ、２．Ｊ＝６．４Ｈｚ）、４．６ ３（ｔ、１゜Ｊ＝５．６Ｈｚ）；１２ＣＮＭＲ（ＣＤＣＬ　）ｄ１５．３０．３ ４．７２．３４、　８２．　４２．　３１．　４９．　６５．　４９．　７１． 　６１．　７０．　６２．　２０．　９９．８３゜ 例３２ 例３１のプロドラッグのハブテン：テトラキス（２−クロロエチル）アルドホス ファミドジエチルアセタールのトリメチルアンモニウム塩類縁体、化合物ｌ１９ 、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図４１を参照する。
リンカ一部分を先ず製造し、次いてハブテンのリンに結合させた。グリシンの窒 素部分をｐ−二トロベンジルウレタンとして保護し、化合物１１３を生成させた 。そのカルボキシ基をＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルとして活性化し、 化合物１１４を生成させた。この化合物１１４を次いで過剰のピペラジンと反応 させ、リンカ一部分、化合物１１５、を生成させた。この化合物１１５を、ジク ロリゾート３６と反応させ、モノクロリゾート１１６を生成させた。この化合物 ＋１６を２−（ジメチルアミノ）エタノールのりチウムアルコキシドと反応させ 、ホスホロジアミド１１７を得た。化合物１１７の三級アミンをＭｅｌを用いて 四級化し、化合物１１８を得た。そのグリシンが反応性が低いベンジルウレタン により保護されている化合物１１８の類縁体から保護基を分離する試みは失敗し た。
しかしながら、さらに遊離性のｐ−ニトロベンジルウレタン保護基は容易に分離 され、ハブテン１１９が生成された。
詳細、この合成は下記のとおりにして行うニジオキサン１５ｍ１中の４−二トロ ペンジルク口ロホーメート（３，１’６ｇ、１４．６ミリモル）の溶液を、溶液 のｐＨをトリエチルアミンを用いて９に維持しなから、水７ｍｌ中のグリシン（ １，０ｇ、１３．　３ミリモル）の溶液に添加した。この混合物を６５時間撹拌 した。この混合物をエーテルにより洗浄し、この水性用のｐＨを１に調整し、次 いでこの混合物を酢酸エチルにより抽出し、このＴＴ機相を無水Ｍｇ５ＯＪ上で 乾燥させ、次いでこの溶剤を減圧で蒸発させ、生成物　３．９ｇを油状物どして 得た；’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１，）ｄ４．０５（ｄ、２．　Ｊ＝６Ｈｚ）、５． 　２３　（ｓ、２）、５．　４３　（ｄ、Ｉ）、７．　５２（ｄ、２．Ｊ＝８Ｈ ｚ）、８．２２　（ｄ、２．Ｊ＝８Ｈｚ）。
化合物　＋１４の合成 ピリジン（１，２４ｍ１．１５．４ミリモル）およびＮ、Ｎ−−ジスクシンイミ ノルカーボネート（３，９３ｇ、■５．３ミリモル）を、室温で酸１１３（３゜ ９ｇ、１５．３ミリモル）およびアセトニトリル（７６ｍｌ）の混合物に添加し た。１６時ＩＩＩＩ後に、溶媒を減圧で蒸発させ、この残留物を酢酸エチルに溶 解し、次いて水により洗浄し、この有機相を無水Ｍｇ５ＯＪ上で乾燥させ、次い てこの溶剤を減圧で蒸発させ、生成物４．４１ｇを油状物として得た（８２％） 。
化合物　１１５の合成 ＣＨ２Ｃ１２４００ｍ１中の化合物＋１４　（４，４ｇ、１２ミリモル）の溶液 を、−７８°Ｃに冷却したＣＨ２Ｃ１２１０１００Ｏおよびピペラジン（５，４ ｇ。
６３ミリモル）の急速撹拌した溶液に滴下して添加した。この混合物を一夜の間 に室温まで温めた。この混合物を２００ｍ１の容積まで濃縮し、次いで５％ＨＣ Ｉにより抽出した。水性相のｐＨをＮａ２ＣＯｉを使用して９に調整し、この水 性相を酢酸エチルおよびＣＨ２ＣＩ　２により抽出した。この有機相を無水Ｎ　 ａ　ｔ　Ｓ　Ｏｔ上で乾燥させ、次いて溶剤を減圧で蒸発させ、生成物をフラッ シュクロマトグラフィにより精製しく１０％メタノール／ＣＨ２Ｃｌ２、生成物 Ｒｆ：０．Ｉ９Ｌ油状物１．５０ｇ（３７％）を得た。
’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩｚ）ｄ２．８４　（ｂｓ、４）、３．３６　（ｂｓ、２ ）。
３、　５８　（ｂｓ、２）、４．　０１　（ｂｓ、２）、５．　２０　（ｂｓ、 ２）、６．　００（ｂｓ、Ｉ）、７．４９（ｄ、２．Ｊ＝８Ｈｚ）、８．１７（ ｄ、２．Ｊ＝８Ｈｚ） アミン１１５　（’０．５５ｇ、１．７ミリモル）およびトルエン９ｍｌの混合 物に、トリエチルアミン（０，２４ｍ１，１．７ミリモル）を添加した。ジクロ リゾート３６　（０，４４ｇ、、　１．　７ミリモル）を添加し、この混合物を １４時間加熱還流させた。この間、若干暗くする。不溶性物質が生成された。こ の混合物を飽和ＮａＨｚ　ＰＯ４中に注ぎ入れ、次いて酢酸エチルおよびＣＨｔ 　Ｃｌ　ｔにより抽出した。この有機相を無水Ｎａｔ　ＳＯ４上で乾燥させ、次 いで溶剤を減圧で蒸発させ、生成物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し く９０％酢酸エチル／ヘキサン、生成物Ｒｆ：酢酸エチル中で０．６５）、油状 物０．２ｇ（２２％）を得た；’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１＊　）ｄ３．２３　３． ４０　（ｍ、４）、３゜４０−３．　６３　（ｍ、６）、３．　６３−３．　８ ４　（ｍ、６）、４．　００−４．　０７（ｍ、２）、５．２３（ｓ、２）、５ ．８７（ｓ、１）、７．５３（ｄ、２゜Ｊ＝８Ｈｚ）、８．２２　（ｄ、２．Ｊ ＝８Ｈｚ）。
化合物　１１７の合成 ヘキサン中のｎ−ＢｕＬｉの２．５Ｍ溶液（０，１５４ｍ１，０．３９ミリモル ）をＯ′Ｃで、ＴＨＦｌ、５ｍｌ中の２−（ジメチルアミノ）エタノール（３７ ｍ１．０．３７ミリモル）の溶液に添加した。この混合物を１時間、室温で撹拌 した。この溶液を再度、０°Ｃに冷却させ、次いでＴＨＦ２．５ｍｌ中のクロリ ゾ−ＨＩ３　（０，２ｇ、０．３７ミリモル）の溶液を添加した。この混合物を 室温で１．　５時間撹拌した。この混合物に次いで、トリエチルアミンをほぼ１ ００ｍ１の量で添加し、揮発性成分を減圧で蒸発させ、生成物をフラッシュクロ マトグラフィにより精製した（５％メタノール／ＣＨ２Ｃｌ、、生成物Ｒｆ：１ ０％メタノール／ＣＨ２Ｃｌ２中で０．４４）。この生成物を酢酸エチルに溶解 し、次いで５９６ＮａＨＣＯｓにより洗浄した。この　有機相を無水Ｎ　ａ　ｆ 　Ｓ　Ｏａ上で乾燥させ、次いて溶剤を減圧で蒸発させ、生成物をＯ，１ｇを油 状物として得た（４６％）；’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ２　）ｄ２．２５　（ｓ、 ６）、２．５４　（ｔ。
２、Ｊ＝５Ｈｚ）、３．　０８−３．　２３　（ｍ、４）、３．　２８−３．　 ４５　（ｍ。
６）、３．　５２−３．　６９（ｍ、６）、３．　９５−４．　０１（ｍ、２） 、４．　０１−４．１４（ｍ、２）、５．１８（ｓ、２）、５．９５（ｓ、１） 、７．４７（ｄ、２．Ｊ＝８Ｈｚ）、８．１６　（ｄ、２．Ｊ＝８Ｈｚ）。
化合物　１１８の合成 ヨウ化メチル（３０ｍｌ、０．４８ミリモル）を室温で、ＴＨＦ２ｍｌ中のアミ ン１１７（１００ｍｇ、Ｏ，Ｉ６Ｅリモル）の溶液に添加した。２４時間の間に 、黄色不溶性物質か生成された。揮発性成分を減圧で蒸発させ、黄色油状物１２ ５ｍｇを得た＋　ＩＲ（ＣＤ２０Ｄ）２９５２，２８５５．ｌ　７０９．１６５ １゜１６０７．１５２２．＋４５３．１４１２．１３７２，１３５０，１２７７ ．１２３５、Ｉ　２２０，７５３，７２５ｃｍ”：’　ＨＮＭＲ（ＣＤｓ　０Ｄ ）ｄ３゜２７（ｓ、９）、３．１９−３．６１（ｍ、１２）、３．７１　（ｄｄ 、４．Ｊ＝６、　３．　６．　３Ｈｚ）、３．　８２　（ｂｓ、２）、４．　０ ３　（ｓ、２）、４．　５０（ｂｓ、２）、５．　２３　（ｓ、２）、７．　６ ０　（ｄ、２．　Ｊ＝８．　２Ｈｚ）、８゜２１　（ｄ、２．Ｊ＝８．２Ｈｚ） 。
化合物　１１９の合成 １．１メタノールおよび水６ｍｌ中に、化合物１１８　（１２４，６ｍｇ、０゜ １７ミリモル）を溶解し、１０％Ｐｄ−Ｃ（１２ｍｇ）を添加し、この混合物を 水素雰囲気の下に、１８時間撹拌した。この混合物をセライトのバットに通して 濾過し、ｌ：１メタノールおよび水で洗浄し、次いて揮発性成分を減圧で蒸発さ せ、黄色固形物８９ｍｇ（９４％）を得た；’　ＨＮＭＲ（ＣＤ２０Ｄ）ｄ３゜ ２９　（ｓ、９）、３．　１６−３．　３０　（ｍ、４）、３．　３８−３．　 ５６　（ｍ。
６）、３．　５６−３．　６８（ｍ、４）、３．　６８−３．　７９（ｍ、４） 、３．　８２−３．　９０　（ｍ、２）、４．　５０　（ｂｓ、２）。
例３３ 例３１のプロトラッグのハブテン、テトラキス（２−クロロエチル）アルドホス ファミドジエチルアセタールのジプロピルメチルアンモニウム塩類縁体、化合物 １２１、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図４２を参照する。
２−（ジ−ｎ−プロピルアミン）エタノール、化合物＋２０、をＷ、　Ｗ、　ｌ （ａｒｕｍａｎｎの方法（Ｏｒｇａｎｉｃ　５ｙｎｊｈｅｓｅｓ、Ｃｏ１１ｅｃ ｊｉｖｅ　Ｖｏｌ、　ＩＩ；　Ｂｌａｔｔ、Ａ、）１．編、Ｊｏｎｅ　Ｗｉｌ■ 凵Y ５ｏｎｓ：Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　（１９４３）１８３−１８４　；この記載を引 用してここに組み入れる）に従い製造する。化合物１２０を化合物１１６と反応 させ、この生成物を引き続く２工程に付し、ハブテン１２１を得る。詳細：この 合成は下記のとおりにして行う：２−（ジ−ｎ−プロピルアミン）エタノール１ ２０の合成化合物＋２０を、Ｈａｒｕｍａｎｎ、　Ｗ、　Ｗ、の方法（Ｏｒｇａ ｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｅｓ、Ｃｏ１１ｅｃｔｉｖｅＶｏ１．ｌｌ　Ｂｌａｔｔ 、Ａ、Ｈ，編、Ｊｏｎｅ　Ｗｉｌｅｙ／’５ｏｎｓ：Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　（１ ９４３）　１８３−１８４　；こ■L 載を引用してここに組み入れる）に従い、ジプロピルアミンおよび２−クロロエ タノールを使用して合成する。
化合物１２１の合成 化合物１２＋を、化合物１１６および２−（ジエチルアミノ）エタノールからの 化合物１１９の合成に係わり使用された方法（例３２参照）に従い、化合物ｌ１ ６および１２０から合成する。
例３４ プロドラッグ、分子内ヒス（２−ヒドロキシエトキシ）ベンゾエート−５−フル オロウリジン、化合物１２８、の製造この例の番号付き化合物に関しては、図４ ３を参照する。
２−ブロモエタノールをそのｐ−メトキシベンジルエーテルとして保護し、化合 物１２２を得る。化合物１２３を、２，６−ジヒドロキシ安息香酸とメタノール とを縮合させることにより生成させる。化合物　１２３を、ブロマイド１２２を 使用してジアルキル化して、化合物１２４を得る。このプロドラッグの望ましく ない非触媒性ラクトン化および薬物からの夾雑物放出に対する安定性を測定する ために、化合物１２４から保護基を分離して、化合物１２５を生成させる。化合 物１２５をＤｘＯ中の９％ＮａＣ１に溶解する。室温で９６時間放置した後に、 この試料の’ＨＮＭＲに変化は見られなかった。化合物１２４を鹸化し、酸１２ ６を得る。この化合物１２６を化合物６５と縮合させ、化合物１２７を得る。
酸を用いて、化合物１２７から保護基を分離し、プロドラッグ１２８を得る。
詳細、この合成は下記のとおりにして行う・２−（４−メトキシベンジルオキシ ）ブロモエタン　１２２トリフルオロメタンスルホン酸（３０ｍｌ）を室温で、 ２−ブロモエタノール（０，５ｍｌ、６．７ミリモル）、４−メトキシベンジル トリクロロアセトイミデート（３，８ｇ、１３．　４ミリモル）およびＴＨＦｌ 　５ｍｌの混合物に添加した。１時間後に、この反応を５％ＮａＨＣＯｓの添加 により中和し、この混合物を酢酸エチルにより抽出した。この有機相を無水Ｍｇ ５Ｏａ上で乾燥させ、次いでこの残留物をフラッシュクロマトグラフィにより精 製しく０、ｌおよび２．５％酢酸エチル／ヘキサンにより溶出、生成物Ｒｆ：Ｉ Ｏ％酢酸エチル／ヘキサン中で０．４８）、油状物１．３ｇ（７９％）を得た； ’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ。
）ｄ３．４９　（ｔ、２．Ｊ＝７Ｈｚ）、３．７９　（ｔ、２．Ｊ＝７Ｈｚ）、 ３゜８２　（ｓ、３）、４．　５５　（ｓ、２）、６．　９１　（ｄ、２．　Ｊ ＝９Ｈｚ）、７゜２１　（ｄ、２．Ｊ＝９Ｈｚ）。
メチル２．６−ノヒトロキシベンゾエート　１２３ＤＤＣ（２６，３ｇ、１２７ ミリモル）を、２．６−ジヒドロキシ安息香酸（Ｉ　Ｏｇ、６４ミリモル）およ びメタノールとＣＨ，ＣＬとのｌ：１混合物２００ｍ１の混合物に添加し、この 混合物を室温で、６４時間撹拌した。次いで、不溶性物質を濾別し、生成する溶 液を減圧で濃縮し、この残留物を酢酸エチルに溶解し、再濾過し、この濾液を水 およびブラインにより洗浄し、無水Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏａ上て乾燥させ、濃縮し、次 いでこの残留物をフラッシュクロマトグラフィにより精製しく１０％酢酸エチル ／ヘキサン、生成物Ｒｆ：０．２９）、無色固形物８゜１４ｇ（７６％）を得た ：’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１３）ｄ４．０８　（ｓ、３）　。
６．４８　（ｄ、２．Ｊ＝８Ｈｚ）、７．３１　（ｄｄ、１．Ｊ＝８．８Ｈｚ） 。
メチル２．６−ヒス［２−（４−メトキシベンジルオキシ）エトキシベンゾエー ト　ｌ　２４ ジフェノール＋２３　（５０ｍｇ、０．３０ミリモル）、ブロマイド１２２（２ ９２ｍｇ、１．１９ミリモル）　、Ｋ２　Ｃｏｘ　（４１４ｍｇ、３．０ミリモ ル）およびＤＭＦ６ｍｌの混合物を、室温で６時間撹拌した。追加量のに、Ｃｏ 、を次いて添加した。さらに１７時間後に、この混合物を８０°Ｃで１時間加熱 した。冷却後に、この混合物のｐＨ＋ＩＭＨＣＩの添加により５に調整した。こ の混合物を酢酸エチルと水とに分配し、この有機層を無水Ｍｇ５ＯＡ上て乾燥さ せ、溶剤を減圧で蒸発させ、この残留物をフラッシュクロマトグラフィにより精 製しく３０％酢酸エチル／ヘキサン、生成物Ｒｆ：５０％酢酸エチル／ヘキサン 中で０゜５８）、生成物８７ｍｇを油状物として得た（５９％）；’ＨＮＭＲ（ ＣＤＣＬ）　ｄ３．　７９−３．　９０　（ｍ、４）、３．　８１　（ｓ、６） 、３．　８５　（ｓ、３）、４．　２０　（ｄｄ、４．　Ｊ−５，５Ｈｚ）、４ ．　５９　（ｓ、４）。
６．５９　（ｄ、２．Ｊ＝９Ｈｚ）、６．９３　（ｄ、４．Ｊ＝９Ｈｚ）、７． ２７（ｄｄ、１．Ｊ＝９．９Ｈｚ）、７．３１　（ｄ、４．Ｊ＝９Ｈｚ）。
メチル２．６−ビス（２−ヒドロキシエトキシ）ベンゾエート　１２５メタノー ル３ｍｌ中の化合物１２４　（８７ｍｇ、０．１８ミリモル）の溶液に、１０％ Ｐｄ−Ｃ８，７ｍｇを添加し、この混合物を水素雰囲気の下に、室温で１時間撹 拌した。触媒をセライトに通して濾別し、次いでメタノールにより洗浄した。溶 媒を減圧で蒸発させ、この残留物を調製用ＴＬＣにより精製しく生成物Ｒｆニア ０％酢酸エチル／ヘキサン中で０．５４）、生成物３１ｍｇを油状物として得た （７９％）；’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ２）ｄ３．８２　３．９２　（ｓ。
３）、４．０８−４．２０　（ｍ、４）、６．５８　（ｄ、２．Ｊ＝８Ｈｚ）、 ７゜２９　（ｄｄ、１．Ｊ＝８．８Ｈｚ）：　（０，９％ＮａＣ１ｉｎ　Ｄｔ　 ０）ｄ３゜９０　（ｄｄ、４．　Ｊ＝４．　４Ｈｚ）、３．　９７　（ｓ、３） 、４．　１７　（ｄｄ、４゜Ｊ＝４．４Ｈｚ）、６．７９　（ｄ、２．Ｊ＝８Ｈ ｚ）、７．４５　（ｄｄ、ｌ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）。
ジオールエステル１２５のラクトン化に対する安定性ジオールエステル１２５の 試料をり、Ｏ中の０．９％ＮａＣ１に溶解した。室温で９６時間放置した後に、 この試料の’ＨＮＭＲスペクトルに変化は見られなかった。
２．６−ジ［２−（４メトキシベンジルオキシ）エトキシ］安息香酸　（１２■ ＩＮ　ＮａＯＨ（２５ｍｌ）を化合物１２４　（１，２２ｇ１２．４６ミリモル ）およびジオキサン３０ｍ１の混合物に添加し、次いでこの混合物にＭｅＯＨｌ ｏｍｌを添加して、均一溶液に維持した。この混合物を油浴により１００℃で２ ４時間加熱した。この混合物を室温まで冷却し、この溶液のｐＨをｌＮＨＣｌを 使用して５に調整した。この混合物を酢酸エチル中に注ぎ入れ、水およびブライ ンにより洗浄し、この有機相を無水Ｍｇ５Ｃ＋４上で乾燥させ、次いで減圧で濃 縮した。この粗製生成物、１．Ｉｇ、はさらに精製することなく使用した；Ｒｆ 　：　０．４０　（５％Ｍｅ　ＯＨ／ＣＨｔ　ＣＩ　−）　：　’　ＨＮＭＲ（ ＣＤＣＩｚ）ｄ３．７６　３．８９　（ｍ、１０）、４．１９　（ｄｄ、４．Ｊ ＝９、　９Ｈｚ）　：　４．　５５　（ｓ、４）、６．　５９　（ｄ、２．　Ｊ ＝８Ｈｚ）、６．　８８　（ｄ、４．　Ｊ＝８Ｈｚ）、７．　２４−７．　３７ 　（ｍ、５）。
化合物　１２７の合成 化合物６５（８１ｍｇ、０．２７ミリモル）を、化合物１２６（５１６ｍｇ。
１．０７ミリモル）、ピリジン８６４ｍ１およびＣＨｔ　Ｃｌｔ　１ｍｌの混合 物に添加し、次いでＥＤＣ（２０５ｍｇ、１．０７ミリモル）およびＤＭＡＰ（ ６５ｍｇ、０．５３ミリモル）を添加した。この混合物を８０’Ｃで２４時間加 熱した。
この混合物を室温まで冷却し、次いてＭｅＯＨＩ　ＯｍＩを加えた。さらに３０ 分子＆Ｉこ、揮発性成分を減圧で蒸発させ、この残留物を酢酸エチル中に取り、 飽和Ｎ　ａ　ＨＣＯｓ　、水、飽和ＮＨ，ＣＩおよび水により洗浄し、このを機 相を無水Ｍｇ５Ｏａ上で乾燥させ、次いで減圧で濃縮した。この残留物をフラッ シュクロマトグラフィにより精製しく２０．３０．４０，５０および６０％酢酸 エチル／ヘキサンにより溶出）、生成物１５４ｍｇ（７５％）を得た；Ｒｆ：０ ．５０（ヘキサン中６０９Ｊｔ酸ｘチル）；’　ＨＮＮ１Ｒ（ＣＤＣＩｓ　）ｄ ｌ、３４　（ｓ。
３）、１．５７（ｓ、３）、、７１−３．７６（ｍ、４）、３．７９（ｓ、６） 。
４、　５０　（ｄ、２．　Ｊ＝１２．　６Ｈｚ）、４．　６６−４．　７４　（ ｍ、２）、４゜８２　（ｄｄ、Ｉ、、Ｊ−３，２，６，１Ｈｚ）　；５．　９０ −５．　９１　（ｍ、Ｉ）。
６、　５７　（ｄ、２．　Ｊ＝８．　５Ｈｚ）、６．　８６　（ｄ、４．　Ｊ＝ ８．　６Ｈｚ）。
７、　２４　（ｄ、４．　Ｊ＝８．　６Ｈｚ）、７．　２８　（ｄ、１．　Ｊ＝ ８．　５Ｈｚ）。
７、　４２　（ｄ、Ｉ、Ｊ＝６．　２Ｈｚ）、９．　１１　（ｄ、１．　Ｊ＝４ ．　２Ｈｚ）。
化合物　１２８の合成 この反応は化合物１ａの合成方法に従って行う。
例３５ 例３４のプロドラッグのハブテン、ビス（２−ヒドロキシエトキシ）ベンゾエー ト−５−フルオロウリジンの環状ホスホネート類縁体、化合物１３７、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図４４を参照する。
レゾルシノールを、ブロマイド１２２を用いてモノアルキル化して、化合物１２ ９を生成させる。フェノール１２９をホスホリル化すると、ホスフェートトリエ ステル１３０が生成される。この化合物１３ｏをＬＤＡによりオルドーリチェー ト化した後に、リン移動反応に付し、化合物１３１を得る。化合物１３１をエチ レンカーボネートまたはグリコールスルフイツトによりヒドロキシエチル化し、 得られる化合物１３２を高稀釈条件の下に、環化させて、化合物！３３を得る。
鹸化して、得られる酸１３４を活性化し、次いて化合物３ｆと反応させ、化合物 １３５を得る。この化合物１３５のトルオイル基を分離し、得られる化合物１３ ６から保護基を分離し、次いて還元し、ハブテン１３７を得る。詳細：この合成 は下記のとおりにして行う： 化合物　１２９の合成 レゾルシノール（５ミリモル）、化合物１２２（１ミリモル）　、Ｋｔ　Ｃｏ。
（５ミリモル）およびＤＭＦ２５ｍｌの混合物を室温で、ＴＬＣにより観測して 出発物質か消費されるまで、撹拌する。この混合物を０．１Ｍ　ＨＣＩにより中 和し、水で稀釈し、次いて酢酸エチルにより抽出する。この有機相を無水Ｍｇ５ ＯＪ上で乾燥させ、次いて濃縮し、この残留物をフラッシュクロマトグラフィに より精製し、生成物を無色油状物として得る。
化合物　１３０の合成 ジフェニルクロロホスフェート（１，２ミリモル）およびＣＨｔ　ＣＩ　ｔ　５ 　ｍ　ｌの混合物を、０°Ｃに冷却したピリジン５ｍｌおよび化合物１２９（１ ミリモル）の混合物に添加する。ＴＬＣにより観測して出発物質が消費された後 に、揮発性成分を減圧で蒸発させ、この残留物を酢酸エチルと０．１Ｍ　ＨＣＩ とに分配させ、この有機相を無水　Ｍｇ５Ｏ４上で乾燥させ、次いて濃縮し、こ の残留物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色油状物とし て得る。
化合物　＋３１の合成 ＴＨＦ中（７）ＬＤＡ（７）１．５Ｍ溶液（１，１ミリモル）を、−７８°ｃに 冷却したＴＨＦ　（２０ｍｌ）中の化合物１３０（１ミリモル）の溶液に滴下し て添加する。
ＴＬＣにより観測して出発物質が消費された後に、この混合物を酢酸エチルと０ ゜１〜ｌＨＣｌとに分配させ、この有機相を無水Ｍｇ５ＯＪ上で乾燥させ、次い で濃縮し、この残留物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無 色油状物として得る。
化合物　１３２の合成 化合物１３＋（１ミリモル）、エチレンカーボネートまたはグリコールスルフイ ツト（１０ミリモル）　、Ｋｔ　Ｃｏｔ　（１０ミリモル）およびＤＭＦ５０ｍ ｌ（７）混合物を、ＴＬＣにより観測して出発物質が消費されるまで、ｉｏｏ’ ｃて加熱する。この混合物を室温まで冷却し、Ｏ，ＩＭ　ＨＣＩにより中和し、 水で稀釈し、次いて酢酸エチルにより抽出する。この有機相を無水ＭｇＳＯ４上 で乾燥させ、次いて濃縮し、この残留物をフラッシュクロマトグラフィにより精 製し、生成物を無色油状物として得る。
化合物　＋３３の合成 化合物＋３２（１ミリモル）、無水１（Ｆ（１０ミリモル）、１８−クラウン− ６（１ミリモル）およびＴＨＦｌｏｏｍｌの混合物を、ＴＬＣにより観測して出 発物質か消費されるまで、加熱還流させる。次いで、溶媒を減圧で蒸発させ、こ の残留物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色曲状物とし ジオキサン５ｍｌ中の化合物＋３３（１ミリモル）の溶液に、０．２ＭＮａＯＨ （５ｍｌ）を室温で添加する。ＴＬＣにより観測して出発物質が消費されたｉ麦 に、この混合物のｐ）（を０．ＩＭ　ＨＣＩにより２に調整し、この混合物を酢 酸エチルにより抽出する。この有機相を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、 次いてフランツユクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色固形物とし化合 物＋３４（１，１ミリモル）およびチオニルクロライド１０ｍ１の混合物を、メ タノールによる反応の停止後の適量の’ＨＮＭＲによる測定により酸クロライド への変換か完了するまで、室温で撹拌する。未反応のチオニルクロライドを減圧 で蒸発させる。この残留物を　ＣＨ２Ｃｌ、５ｍｌ中に取り、次いで化合物３ｆ （１ミリモル）と０″Ｃに冷却したピリジン５ｍｌとの混合物中にゆっくり添加 する。ＴＬＣにより観測して出発物質が消費された後に、揮発性物質を減圧で蒸 発させ、この残留物を酢酸エチル中に取り、この有機相を飽和ＮａＨＣＯｓ　、 ０．１Ｍ　ＨＣＩおヨヒブラインニより洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、 次いて減圧で濃縮する。この残留物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し 、生成物を無色固形物として得る。
化合物　＋３６の合成 濃水酸化アンモニウム（１ｍｌ）を０″Ｃで、化合物１３５（１ミリモル）およ びメタノール２０ｍ１の混合物に添加する。この溶液を室温まで温める。ＴＬＣ によりｗｉ測して出発物質か消費された後に、揮発性物質を減圧で蒸発させ、こ の残留物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色固形物とし て得る。
化合物　＋３７の合成 化合物１３６（Ｉミリモル）および２０％水性メタノール（１０ｍｌ）の混合物 に、１０％Ｐｄ−Ｃ（＋　ｏ重量％）を加え、この混合物を水素雰囲気の下に、 撹拌する。反応か完了した時点て、触媒をセライトのパットに通して濾別し、２ ０９６水性メタノールにより洗浄する。揮発性物質を減圧で蒸発させ、生成物を 固形物として得る。
例３６ プロトラッグ、分子内ヒス（３−ヒドロキシプロピルオキシ）ベンゾエート−５ −フルオロウリジン、化合物１３８、の製造この例の番号付き化合物に関しては 、図４５を参照する。
プロドラッグ１２８の製造に係わり使用された反応と同一の反応を使用して、３ −ブロモ−１−プロパツールをプロドラッグ１３８に変換する。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：化合物　＋３８の合成 化合物１３８は、化合物１２８の合成方法にしたがうが、２−ブロモエタノール の代わりに、３−ブロモ−１−プロパツールを使用して、合成する。
例３７ 例３６のプロドラッグのハブテン、ビス（３−ヒドロキシプロピルオキシ）ベン ゾエート−５−フルオロウリジンの環状ホスホネート類縁体、化合物１３９、の 製造 この例の番号付き化合物に関しては、図４６を参照する。
ハブテン１３７の製造に使用された反応を同一順序で使用しく例３５参照）、３ −ブロモプロピル−４−メトキシベンジルエーテル（この化合物は例３６の中間 体として製造される）を用いて、レゾルシノールを環状ホスホネートハブテン１ ３９に変換する。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：化合物　１３９の合成 化合物１３９は、化合物１３７の合成方法に従うか、２−ブロモエタノールの代 わりに、３−ブロモ−１−プロパツールを使用して合成する。
例３８ プロドラッグ、５−−０−　（２，４，６−１−リメトキシベンゾイル）−５− フルオロウリジン、化合物１４１、の製造この例の番号付き化合物に関しては、 図４７を参照する。
２、　４．　６−１−リメトキシ安息香酸を、ＥＤＣを用いて、化合物６５と縮 合させ、エステル１４０を得る。引き続いて、そのイソプロピリデン保護基を分 離し、プロドラッグ１４１を生成させる。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：２、　４．　６−トリメトキシ安息 香酸（３００ｍｇ、１．４２ミリモル）をＣＨ２ＣＬ　２ｍｌ中に溶解し、次い でピリジン１．１５ｍ１を加えた。化合物６５（１０６ｍｇ、０．３５ミリモル ）を添加し、次いてＥＤＣ（３００ｍｇ、１．５６ミリモル）を添加した。この 混合物を２４時間撹拌し、その後にメタノール１０ｍ１を添加した。さらに３０ 分後に、揮発性成分を減圧で蒸発させ、この残留物を酢酸エチル（７５ｍｌ）中 に取り、次いで飽和Ｎ　ａ　ＨＣＯｓ　（２Ｘ　５０ｍ１）、水（１５ｍ１）　 、飽和ＮＨａ　Ｃ１（２ｘ３０ｍｌ）　、次いで水（１５ｍｌ）により洗浄した 。これら水性相の全部を、酢酸エチル（５０ｍｌ）により抽出し、この有機相を 無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、次いで濃縮する。この残留物を調製用ＴＬＣによ り精製しく１０％メタノール／ＣＨｚ　Ｃｌｔ　、Ｒｆ　：　８％メタノール／ 　ＣＨ２Ｃ］　２中で０．５０）、生成物１００ｍｇを無色固形物として得た（ ５８％）；　’ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ）ｄ　１．３８　（ｓ、３）、１゜６１（ ｓ、３）、３．８１（ｓ、６）、３．８３（ｓ、３）、４．３３（ｄｄ。
１、Ｊ＝２．４，１２．３Ｈｚ）、４．６２　（ｄｄ、ｌ、Ｊ＝ｓｍａ１１．２ ゜２Ｈｚ）、４．　７２−４．　７７　（ｍ、２）、４．　８３　（ｄｄ、１． 　Ｊ＝２．　１゜６、　１Ｈｚ）、５．　９２−５．　９３（ｍ、１）、６．　 １１　（ｓ、２）、７．　５８（ｄ、１．Ｊ＝６．３Ｈｚ）。
化合物１４０　（１００ｍｇ、０．２０ミリモル）および５０％ギ酸１．　５ｍ ｌの混合物を、６５°Ｃて２時間加熱した。この混合物を冷却し、次いで揮発性 成分を減圧て蒸発した。この残留物を調製用ＴＬＣにより精製しく１０％メタノ ール／ＣＨ２Ｃ１，、Ｒｆ　：０８５２）、生成物８４ｍｇを無色固形物として 得た（９２％）　；　（ｄｄ、１．　Ｊ＝２．　６．　１６Ｈｚ）、４．　６２ 　（ｄｄ、１．　Ｊ＝２、　２．　１６）、５．　８８　（ｄｄ、１．　Ｊ＝１ ．　６．　４．　１Ｈｚ）、６．　２１（ｓ、２）、７．　７６　（ｄ、Ｉ、Ｊ ＝６．　６Ｈｚ）。
例３９ 例３８のプロトラッグのハブテン、ウリジンのピリジニウムアルコール置換類縁 体、化合物１４９、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図４８ａおよび４８ｂを参照する。
化合物！４２、化合物６５のアルデヒド、を刊行物記載の方法にしたがい合成す る。そのアルデヒド基をウィツト（Ｗｉｔｔｉｇ）の反応に付して、化合物１４ ３を生成させる。化合物１４４を刊行物記載の方法にしたがい合成し、次いてブ ロム化し、モノブロマイド１４５を生成させる。選択的モノブロム化を達成し、 主要生成物として２，６−ジプロモー３．４−ジメトキシピリジンを得るために は、化合物１４４は過剰に使用すべきこと、およびまた反応は低温で行うべきこ とが見出だされた。化合物１４５をリチウム−ハロゲン交換反応に付し、この反 応性中間体を化合物１４３と反応させ、ピリジニウムアルコール１４６を生成さ せる。
アンモニア分解させ、得られたトリオール１４７を、そのさらに親核性のピリジ ン窒素の部位で選択的にメチル化し、四級アンモニウム塩１４８を生成させる。
最後に、還元して、ハブテン１４９を得る。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う：化合物　＋４２の合成 化合物１４２は、Ｒａｎｇａｎａｈａｎ、　Ｒ，Ｓ、　、　Ｌｏｎｅｓ、　Ｇ、 　Ｈ，、Ｍｏｆｆａｔ、　Ｊ、　Ｇ、、　Ｊ、　Ｏｒｇ、　bｈｅｌＴｌ、　、 　３９ （＋９７４）２９０−２９８　（この記載を引用してここに組み入れる）に記載 の方法に従い、化合物６５から合成する。
化合物　１４３の合成 ＣＨ２ＣＬ　Ｓｍｌ中の（トリフェニルホスホラニリデン）アセトアルデヒド（ １，１ミリモル）の溶液を、室温てＣＨ，Ｃ１ｚ　Ｓｍｌ中の化合物＋４２の溶 液に添加する。ＴＬＣにより観測して出発物質か消費されて後に、この混合物を 半分の容積にまで濃縮し、次いでフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生 成物を無色固形物として得る。
２−ブロモ−３，５−ジメトキシピリジン　１４５ＣＨ２ＣＩ　−６６ｍ　Ｉ中 の臭素（０，１７ｍ１．３．３ミリモル）の溶液を、−７８°Ｃに冷却したＣＨ ２Ｃｌ２６６ｍ１中の３，５−ジメトキシピリジン、化合物＋４４　（１，８３ ｇ、１３．２ミリモル、この化合物は、Ｊｏｈｎｓｏｎ、　’、　Ｄ、　；Ｋａ ｔｒ　ｉ　ｔｚｋｙ、　Ａ、　Ｒ，：　Ｖｉｎｅｙ、　Ｍ、　、　Ｊ、　Ｃｈｅ ｍ、　Ｓｏｃ、　（Ｂ）　（１９６７）　１２１＋−１Q１３に記載の方法に従 い 製造される。この記載を引用してここに組み入れる）の溶液に滴下して添加した 。
１時間後に、この混合物を１６時間の間に、室温までゆっくり温めた。揮発性成 分を減圧で蒸発させ、この残留物をＩＭ　ＮａＯＨによりｐＨ１０に調整されて いる水性チオ硫酸ナトリウムと酢酸エチルとに分配させ、この有機相を無水Ｎａ ｇ　ＳＯ４上で乾燥させ、次いて減圧の下に濃縮した。この黄色油状物をフラッ シュクロマトグラフィにより分離しく２０％酢酸エチル／ヘキサン）、生成物１ ．０ｇ（５０％酢酸エチル／ヘキサン中でＲｆ：０．５３）および回収出発物質 １．１ｇ（５０％酢酸エチル／ヘキサン中てＲｆ：０．２８）を得た。１ＨＮＭ Ｒ（ＣＤＣＩｓ）ｄ３．９１　（ｓ、３）、３．９３　（ｓ、３）、６．７７（ ｂｓ、ｌ）、７．７３　（ｂｓ、１）。
化合物　１４６の合成 ヘキサン中のｎ−ＢｕＬｉの２．５Ｍ溶液（０，４ｍｌ　１ミリモル）を、０° ＣでＴＨＦｌ　０ｍｌ中の化合物１４５（０，９ミリモル）の溶液に添加する。
１時間後に、この混合物を一７８°Ｃに冷却し、次いでＴＨＦｌ、５ｍｌ中の化 合物１４６　（０，９ミリモル）の溶液を少しづつ添加する。１時間後に、この 溶液を室温まで温める。ＴＬＣにより観測して出発物質が消費された後に、水を 加え、この混合物を酢酸エチルにより抽出し、この有機相を無水Ｎａｇ　ｓｏＡ 上で乾燥させ、次いて減圧で濃縮し、この残留物をフラッシュクロマトグラフィ により精製し、生成物を無色固形物として得る。
化合物　１４７の合成 濃水酸化アンモニウム（１ｍｌ）を、０°Ｃてメタノール２０ｍ１および化合物 １４６（１ミリモル）の混合物に添加する。この溶液を室温まで温める。ＴＬＣ により観測して出発物質が消費された後に、揮発性成分を減圧で蒸発させ、この 残留物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物を無色固形物として 得る。
化合物　１４８の合成 化合物＋４７（１ミリモル）、ヨウ化メチル（２ミリモル）およびＴＨＦ　１０ ｍｌの混合物を、ＴＬＣにより観測して出発物質か消費されるまで、封鎖管内に おいて６０°Ｃて加熱する。沈殿を濾別し、次いでエーテルにより洗浄し、生成 物を固形物として得る。
化合物　１４９の合成 １０％Ｐｄ−Ｃ（１０重量％）を、化合物１４８（１ミリモル）と２０％水性メ タノール（ｌｏｍｌ）との混合物に加え、この混合物を水素雰囲気の下に撹拌す る。反応か完了した時点て、触媒をセライトのバットに通すことにより濾別し、 ２０％水性メタノールにより洗浄する。揮発性成分を減圧で蒸発させ、生成物を 固形物として得る。
例４０ シクロホスファミドおよび３，３−ジェトキシプロピルＮ、　Ｎ、　Ｎ−、Ｎ− −テトラキス（２−クロロエチル）ホスホロジアミド［ＴＥＴＲＡＫＩＳ］の相 対毒性 この試験では、シクロホスファミドおよび３，３−ジェトキシプロピルＮ、　Ｎ 。
Ｎ−、Ｎ−−テトラキス（２−クロロエチル）ホスホロジアミド、ＴＥＴＲＡＫ ＩＳ、をマウスに投与し、このアルドホスファミドジエチルアセタールが実際に 、比較的無毒性であり、従って抗体−触媒結合体により目標を定めて活性化させ るのに適するかを評価した。
雌のＢａ　Ｉ　ｂ／Ｃマウス（２０ｇ）を、一群５匹の４群に分けた：１、対照 −塩類溶液　０．　２ｍＬ　ｉ、　ｐ２、シクロホスファミド（ＣＹＰ）　３０ ｍｇ／ｋｇ、ｉ、ｐ３、シクロホスファミド　１５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ、ｐ４、Ｔ ＥＴＲＡＫＩＳ　２４８ｍｇ／ｋｇ、ｉ、Ｉ）（シクロホスファミドｌ　５ｏｍ ｇ／ｋｇのモル等量）薬物投与後の５日目に、血液試料を眼窩後部洞から採取し 、血液細胞数の差異を評価した。
結果 シクロホスファミド（１５０ｍｇ／ｋｇ）投与後の５日目に、測定された血液学 的指数の全部において、有意の減少か見出たされた。これに反して、ＴＥＴＲＡ ＫＩＳ投与後の５日目の白血球および骨髄細胞数はＢａ１ｂ／Ｃマウスに係わる 正常値の範囲内にあった。ＴＥＴＲＡＫｒＳは実際に、好中球数を減少させない のに対して、シクロホスファミドは低用量（３０ｍｇ／ｋｇ）で好中球数を存意 に減少させた。好中球数はシクロホスファミドの活性異化代謝産物により誘発さ れる造血機能損傷に関して最も敏感なものと見做される。従って、ＴＥＴＲＡＫ ＩＳは、シクロホスファミドに比較して、比較的無毒性である。
表　ｌｌ：血液細胞数に係わるシクロホスファミド対ＴＥＴＲＡＫＩＳ対照　０ ．８２＋、　３２　４．２６＋０．６８　７６５ＭＩＣＹＰ３０ｍｇ／ｋｇ　Ｏ ，４比２３＠３．９６＋０．６６ｎｓ　７７６＋３７ｎｓＣＹＰ１５０ｍｇ／ｋ ｇ　Ｏ，０７＋、　０６°　２．５３＋０．２６８　８６７＋１０１０９ｎｓＴ ｅｔｒａｋｉｓ２４８／ｋｇ　Ｏ，７７５＋、　２８ｎｓ　３．４５＋０．８８ ｎｓ　１０００＋１７７ｎｓ木は対照値よりも存意に低いことを示す、Ｐ＜０． 　０５ｎｓは対照（未処理）群からの差異かないことを示す。
例４１ 治療性非ヒト抗体に対する免疫応答の化学修飾による抑制非ヒト抗体の治療効果 は、患者にとって潜在的に存置な免疫応答により制限される。血清病、アナフィ ラキシ−症状、および肝臓における毒性免疫複合物の沈積を含む種々の重篤な併 発症か生じることかある（Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ、　Ａ、、“Ｅｆｆｅｃｔ　ｏ ｆＣｏｖａｌｅｎｔｌｙ　Ａｔｔａｃｈｅｄ　Ｐｏ１ｙｅｔｈｙｌｅｎｅ　Ｇｌ ｙｃｏｌ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ　ａ獅■ Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍｅｓ”、Ｒｕｔｇｅｒｓ　Ｕｎｉｖｅｒｓ ｉｔｙ、Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ、１９７５；５ｅｈｏｎ、ＡAｌ（、、−５ ｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅｓ　ｂｙ　 Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ａｎｔｉｇｅｎ刀f。
Ｉｎｔ、Ａｒｃｈ、Ａｌｌｅｒｇｙ　Ａｐｐｌ、　Ｉｎｙｎｕｎｏｌ、、　９４ （１９９１）１１−２０　）、免疫原性を取り除くための２つの方法には、ヒト 抗体を使用する方法、および例えばネズミ類抗体からのＣＤＲがヒト抗体フレー ムワークに移植されている、遺伝子的に「ヒト化Ｊ（ｈｕｍａｎｉｚｅｄ　）さ れた動物抗体を使用する方法かある。別法として、異種たんばく質をマスクする 無免疫原性、無アレルギー性、無抗原性の分子により、抗体を化学的に修飾する こともでき、これによってホストの免疫応答を抑制することもてきる（Ａｂｕｃ ｈｏｗｓｋｉ、　Ａ、　、“Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ　Ａｔ ｔａｃｈｅｄ　Ｐｏ１ｙｅｔｈｙｌｅｎｅＧｌｙｃｏｌ　ｏｎ　ｔｈｅ　［ｓ＋ ｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍｅｓ” 、　ＲｕｔｇｅｒｓＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ、　１９７５ ；５ｅｈｏｎ、Ａ、Ｈ，、＋５ｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｂｙ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ａｎｔ ｉｇｅｎｓ−、Ｉｎｔ、Ａｒｃｈ、　Ａ　ＩＩｅｒｇＹ　Ａ垂戟jｌ。
Ｔｎｗｎｕｎｏｌ、、　９４（１９９１）１１−２０　）、ホスＩ・の免疫応答 は、例えばＤ−グルタミン酸とＤ−リジン（Ｄ−ＧＬ）ポリエチレングリコール （ＰＥＧ）　、モノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、またはポリ ビニルアルコール（ＰＶＡ）とのコポリマーに異種たんばく質を結合させること によって実質的に減少させることがてきる（Ｓｅｈｏｎ、Ａ、Ｈ，、”５ｕｐｒ ｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＩｇＥ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｗｉｔｈＴｏｌｅｒｏｇｅｎｉｃ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ　ｏｇ　Ａｌｌｅｒｇ ｅｎｓ　ａｎｄ　Ｈａｐｔｅｎｓ”、　Ｉｎ　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　Ｉ氏@ＡＩＩ ｅｒｇｙ、Ｖ ｏｌ、３２（１９８２）＋６１−２０２　）。それぞれの場合に、抗体（Ａｂ） なとのたんばく質を多分子（ｎ）結合体、すなわちＡｂ　（ＰＥＧ）ｎ、により 修飾する。免疫応答の抑制は、ｎの最適値に依存する：ｎが小さすぎるか、また は大きすぎると、この効果は実質的なものにはならない（Ｊａｃｋｓｏｎ、　Ｃ ，およびＪ、　Ｃ，Ｃｈａｒｌｔｏｎ、　Ｊ、　Ｌ、　。
Ｋｕｚｍｉｎｓｋｉ、　Ｋ、　、　Ｌａｎｇ、　Ｇ、　Ｍ、　、　５ｅｈｏｎ、 　Ａ、　Ｈ，、”５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　ｌ５ｏｌａｔｉｏ氏A　ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ　ｏｆ　Ｏｖ ａｌｂｕｍｉｎ　ｗｉｔｈ　Ｍｏｎｏｍｅｔｈｏｘｙｐｏｌ凾狽■凾撃■獅■ Ｇｌｙｃｏｌｕｓｉｎｇ　Ｃｙａｎｕｒｉｃ　Ｃｈｌｏｒｉｄｅ　ａｓ　ｔｈｅ 　Ｃｏｕｐｌｉｎｇ　Ａｇｅｎｔ”、Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈ■香A、＋６５ （＋９８７）＋１４−１２７　）。ｎの最適値は、当業者による過度の実験を行 うことなく、ｎ値か異なる抗体を製造し、次いでホスト動物の各修飾抗体の免疫 原性を測定することによって、決定することができる。
触媒性抗体または触媒／腫瘍−結合性二重特異性抗体の無抗原原性分子への結合 は、下記のとおりにして行うことかできる（Ｊａｃｋｓｏｎ、　Ｃ，およびＪ、 　Ｃ，Ｃｈａｒｌ　ｔｏｎ、　Ｊ、　Ｌ。
、Ｋｕｚｍｉｎｓｋｉ、に、、Ｌａｎｇ、Ｇ、Ｍ、、５ｅｈｏｎ、Ａ、Ｈ，、“ ５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ、ａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔ ｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ　ｏｆ　Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ　ｗｉｔｈ　 Ｍｏｎｏｍｅｔｈｏｘｙｐｏｌ凾狽■凾撃■獅■ Ｇｌｙｃｏｌ　ｕｓｉｎｇ　Ｃｙａｎｕｒｉｃ　Ｃｈｌｏｒｉｄｅ　ａｓ　ｔｈ ｅ　Ｃｏｕｐｌｉｎｇ　Ａｇｅｎｔ”、Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃ■■香A、＋６ ５（＋９８７）＋１４−１２７）。
ｎの最適値（上記参照）は当業者の実験により決定することかでき、その方法は 、この程度の結合体を得るために変化させることができる。好適には、抗体をｍ ＰＥＧに結合させる。しかしながら、その他の結合体も望ましい効果を提供する ことかできる。ｍＰＥＧはＰＥＧよりも好適であり、これはＰＥＧか２個の末端 ヒドロキシル基を有しており、これらの基か望ましくない、結合体との分子内お よび分子間交差結合に関与しうるからである（Ｓｅｈｏｎ、Ａ、Ｈ，、”５ｕｐ ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆＡｎｔｉｂｏｄｙ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅｓ　ｂｙ　Ｃｈｅ ｍｉｃａｌｌｙ　Ｍｏｄ山ｅｄ　Ａｎｔｉｇｅｎｓ”、　Ｉｎｔ、Ａｒｃｈ、Ａ ｌｌｅ窒■■ Ａｐｐｌ、　Ｉｎｗｎｕｎｏｌ、、　９４（＋９９１）ＩＩ−２０）　。ｍＰＥ Ｇ類、例えはｍＰＥＧ−（平均分子量＝６０００）またはｍＰＥＧｚ＝　（平均 分子量＝２００００）はまた、過度の実験を行わずに選択することかできる。従 って、さらにまた、この方法の規模はとの位の結合抗体か利用できるのか、また は要求されるかに応して変えることができる。
ｍＰＥＧ−結合抗体の製造は２つの主要工程からなる：１、活性中間体、２−０ −ｍＰＥＧ−４，６−ジクロロ−８−）リアジン（ｒｍＰＥＧ中間体」）を製造 する。
２、ｍＰＥＧ中間体を正確な割合で、抗体と反応させて、所望のｎ値を存する結 合体を生成させる。
シアヌル酸クロライドおよびｍＰＥＧ中間体は加水分解に対して格別に感受性で あることから、反応剤はいづれも、完全に無水でなけれはならず、がっまた大気 中水分から防護しなけれはならない。ｍＰＥＧ　（２０ｇ）を無水ベンゼン（３ ２０ｍｌ）中に８０℃で溶解する。ベンセンを約１６０ｍ１まで蒸留することに よって、ｍＰＥＧか付随しつる水分をいづれも除去する。窒素雰囲気の下に、過 剰のシアヌル酸クロライド（６，６４ｇ、無水ベンセンから再結晶させたもの） を９口え、引き続いて炭酸カリウム（４，０ｇ、無水粉末）を添加し、この混合 物を室温で１５時間撹拌する。これに引き続いて、この混合物を焼結ガラスフィ ルターに通して濾過する（窒素雰囲気中）。この濾液を無水石油エーテル（２０ ０ｍｌ）と混合し、ｍＰＥＧ中間体を沈殿させ、窒素雰囲気の下に焼結ガラスフ ィルターに通して濾過することにより、この沈殿を反応剤から分離する。この沈 殿をベンセン１５０ｍ１中に溶解し、次いで再度、石油エーテルにより沈殿させ る。
この処理を７回反復し、全ての残留シアヌル酸クロライドを除去する。このｍＰ ＥＧ中間体を次いて、ベンセン中に溶解し、−７８°Ｃて凍結乾燥させる。ベン センを高減圧の下に昇華させると、白色粉末（ｍＰＥＧ中間体）が残る。このｍ ＰＥＧ中間体は封鎖管内で（バイアル１本あたりＩｇまたはそれ以下）、−６０ °Ｃにおいて窒素雰囲気の下に、保存することができる。
ｎか異なる抗体−ｍＰＥＧ結合体（Ａｂ　（ｍＰＥＧ））を得るためには、相違 する量のｍＰＥＧをＡｂ４０ｍｇに添加し、ナトリウムテトラホレート（４ｍ１ ０１Ｎ１、ｐＨ９，２）に溶解する。この混合物を４°Ｃて３０分間撹拌し、次 いて室温で３０分間撹拌する。結合させた後に、この混合物を、２．５ｍＭ）リ ス（Ｔｒｉｓ）緩衝液、ｐＨ８，０により平衡にされている、セファデックスＧ −２５カラム（２，５Ｘ４０ｃｍ）に通す。この結合体をさらに、２．５ｍＭ） リス緩衝液、ｐｔ−ｔ　ｓ、０により予備平衡処理されているＤＥＡＥ−トリザ クリル（Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ　）カラム（５ｘ４０ｃｍ）て精製する。このたん ばく質を、この出発ｔＪｌｌＩ液中てカラムに結合させ、次いて同一トリス緩衝 液中で洗浄する。このたんばく質を５０ｍＭ　ＮａＣ１，２５ｍＭ　トリス、ｐ Ｈ８，０で終わる線状塩勾配を用いて溶離する。
例４２ 腫瘍抗原に目標を定め、かつまた腫瘍部位でプロドラッグを活性抗癌薬物に活性 化する、二重特異性抗体の製造および施用プロトラッグ、５−−０−　（２，６ −シメトキシベンゾイルー５−フルオロウリジン）、例＋ａの化合物１ｃ、を例 １ａに記載のとおりに製造し、そしてまたマウスにおいて、毒性を試験した。分 割（ｓｅｇｍｅｎｔｅｄ　）好中球数に対する効果によって測定して、このプロ ドラッグのインビボ毒性は、薬物５−フルオロウリジンに比較して、５０倍ミー く、実質的に良好であった。その遷移状態類縁体、ジメトキノベンゾイルフルオ ロウリジンのホスホネートエステル、化合物＋５５、を例４４に記載のとおりに 製造する。このホスホネート類縁体を担体たんばく質、キイホールリンペラ］・ ヘモノアニン、に結合させた後に、これをマウスの免疫感作に使用し、伝統的方 法を用いてモノクローナル抗体を産生させる。さらに、高い力価の抗血清を存す るマウスからの牌臓をポリアデニル化ＲＮＡ供給源として使用する。このＲＮＡ を、ＰＣＲ増幅計画で、マウス免疫グロブリン　ファミリイに対して相補性のオ リゴヌクレオチド　プライマーによりプライムする。このＰＣＲ生成物を、特許 出願Ｗ０９２１０１０４７（この記載を引用してここに組み入れる）に記載のと おりに、ｆｄファージベクター中にクローニングする。生成するファージライブ ラリーおよび伝統的方法て産生されたモノクローナル抗体を、Ｆｌ１行物記載の 方法を用いて、遷移状態類縁体に対する結合に係わり選別する。
潜在的触媒性を存する候補抗体を前記の「エステラーゼ触媒作用活性に係わる抗 体の選別Ｊの項に記載されているようにして、この触媒性に係わり選別する。二 重特異性の一本鎖抗体は下記の方法を使用して産生させる。対象の癌、この場合 にはＢ７２．３、に対して特異性のモノクローナル抗体、またはその他の当技術 て周知の腫瘍特異性抗体を前記方法を使用してクローニングする。この抗体を一 本鎖の形感中にクローニングし、当技術で既知のベクターでの発現により特＠確 認する。この−重鎖抗体遺伝子を次いて、前記のように単離された触媒性抗体の ための一本鎖遺伝子と組み合わせる。これら２種の一本鎖遺伝子のリンキングは 、−重鎖の組み合わせ、または抗体ドメインの連鎖に含まれることが公知の他の 配列、に係わる前述のリンカ−の形感、詳細には（ｓｅｒ−ｌｙｓ−ｓｅｒ−ｔ ｈｒ−ｓｅｒ　）　ｚをコードする遺伝子またはヒンジ領域、である。これらの 連結遺伝子を次いで、発現ベクター、この場合には、Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏｇｅｎ　 ［ｎｔＪ）らのベクターｐＲＣ／ＣＭＳ、あるいは当技術で公知のその他の類似 発現ベクターに挿入する。この二重特異性−重鎖遺伝子の発現ベクターへの挿入 に引き続き、この組み合わせベクターを当該発現ベクターのホストに導入する。
このｐＲＣ／ＣＭＳの場合ては、哺乳動物細胞かホストである、多くのホスト　 ベクターが存在し、当業者に周知のある種の利点を有することは明らかなことで ある。これらの系の例として、Ｅ、ｃｏｌｉ、イースト、および昆虫細胞は上記 系に係わる技術で周知の範囲にある。
発現された二重特異性−重鎖の採取は、当技術で公知のたんばく質精製方法によ り行われ、採取されたたんばく質の特徴を、動物およびヒトの両方における腫瘍 の処置用の物質の純度を測定するための触媒活性と組み合わせて、触媒活性およ び結合活性に係わる特異活性を測定することにより確認する。伝統的なモノクロ ーナル法により、およびまたファージライブラリー技法により誘発された抗体を 化合物１ａに結合し、そして化合物１ａを分解させる。これは精製二重特異性一 本Ｍ４（２価）抗体の場合と同様である。
これらの２価抗体およびプロトラッグは、前記「組成および投与」の項で前記さ れているように、組成物の形態にし、投与する。
例４３ 例３６のプロトラッグ＋４１のハブテン、５−−０−　（２，４，６−１−リメ トキソｌ＼ンゾイル）−５−フルオロウリジンの線状ホスホネート、化合物１５ ２、の製造 この例の番号付き化合物に関しては、図４９を参照する。
１、　３．　５−トリメトキシベンゼンをｎ−ブチルリチウムによりリチェート 化し、次いてＮ、　Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミドクロライドと反応 させ、１５０を生成させる。引き続いて、テトラゾールの存在の下に３ｆと縮合 させ、次いてその場てｍＣＰＢＡにより酸化し、１５１を得る。チオフェノール 、接触水素添加、および水酸化アンモニウムを使用して、全部の保護基を分離し 、プロ１”ラッグハブテン１５２を得る。
詳細：この合成は下記のとおりにして行う。
化合物　＋５０ ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中２−５Ｍ、１ミリモル）を、混合物の温度を０ °Ｃ以下に維持しながら、ＴＨＦ２ｍｌ中の１．　３．　５−トリメトキシベン ゼン（１ミリモル）の溶液に添加する。この添加の完了後に、この混合物をさら に２４時間、０°Ｃて撹拌する。次いで一７８°Ｃに冷却し、ここでＮ、　Ｎ− ジイソプロピルメチルホスホンアミド　クロライド（１ミリモル）を添加する。
この添加の完了後に、この混合物をさらに２時間、−７８°Ｃて撹拌する。Ｅｔ ＯＡｃ（４５ｍｌ）中のトリエチルアミン（５ｍｌ）を加え、この混合物を飽和 重炭酸ナトリウム（７５ｍｌ）中に注ぎ入れる。このを機相を飽和重炭酸ナトリ ウム（７５ｍｌ）、ブライン（５０ｍｌ）を使用して仕上げ処理し、無水Ｎａ２ ５ＯＪ上で乾燥させ、減圧てＣ４縮し、ヘキサン（２，７ｍ１）中のトリエチル アミン（０，３ｍ１）に再溶解し、次いてヘキサン中ｌＯ％トリエチルアミンを 使用するフラッシュクロマトグラフィにより精製し、生成物（化合物１５０）を 無色固形物とし化合物＋５０（１ミリモル）をＣＨ２Ｃ１２３ｍ　ｌに溶解し、 次いで化合物３ｆ　（０，２０ミリモノリを、次いてテトラゾール（２，５ミリ モル）を添加する。
１時間後に、ｍＣＰＢＡ　（１，２５ミリモル）を加え、この混合物をさらに１ ５分間撹拌し、飽和ＮＨ４ＣＩ　（３０ｍ　ｌ　）中に注ぎ入れ、次いでＥｔＯ Ａｃ　（２ｘ５０ｍｌ）により抽出する。この存機層を無水Ｍｇ５ＯＪ上で乾燥 させ、減圧で濃縮する。この混合物をフラッシュクロマ１−グラフィにより精製 し、生成物、化合物１５１．を得る。
化合物　！５２ 化合物１５１（１ミリモル）をジオキサン１ｍｌに溶解し、次いでジオキサン（ ５ｍｌ）中のトリエチルアミン（ＩＯミリモル）およびチオフェノール（１０ミ リモル）の溶液を添加する。この混合物を１６時間撹拌する。減圧で濃縮し、Ｃ Ｈ２Ｃ１２２ｍ１に再溶解し、次いて撹拌しながら石油エーテル３００ｍ１に滴 下して添加する。デカンテーションして、沈殿を採取し、ＣＨ２Ｃ１２２ｍｌに 再溶解し、次いで撹拌しながら追加の石油エーテル３００ｍ１に滴下して添加す る。この沈殿を再度、デカンテーションにより採取し、ＥｔＯＡｃ２０ｍｌに再 溶解し、次いて５％Ｐｄ−Ｃ（１０重量％）を加え、この混合物を水素雰囲気の 下に、水素吸収か完了するまで、室温で撹拌する。触媒をセライトのパッドに通 す濾過により除去し、メタノールにより洗浄する。この濾液を採取し、減圧で濃 縮し、次いてメタノール（ＩＯｍｌ）中の、この水素添加化合物（１ミリモル） および水酸化アンモニウム（ＩＯｍｌ）の溶液を封鎖管内で一夜にわたり加熱す る。反応が完了した後に、溶媒を減圧で除去し、生成物を逆相ＨＰＬＣにより精 製し、化合物１５２を得る。
例４４ 例１ａのプロドラッグｌｃのためのハブテン、５−−０−（２，６−ジメトキシ ベンゾイル）−５−フルオロウリジンの線状ホスホネート、化合物１５５、の製 造 この例の番号付き化合物に関しては、図５０を参照する。
１、　５−ジメトキシベンゼンをｎ−ブチルリチウムによりリチェート化し、次 いてＮ、　Ｎ−ジイソプロピルメチルホスホンアミドクロライドと反応させ、１ ５０を得る。引き続いて、テトラゾールの存在の下に、３ｆと縮合させ、次いて その場で、ｍＣＰＢＡにより酸化し、１５１をを得る。チオフェノール、接触水 素添加し、および水酸化アンモニウムを用いて、全部の保護基を分離し、プロド ラッグ　ハブテン１５２を得る。
詳細、この合成は下記のとおりに行う：ＴＨＦ２ｍｌ中の１．　５−ジメトキシ ベンゼン（１ミリモル）の溶液に、混合物の温度を０°Ｃ以下に維持しながら、 ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中の２−５Ｍ、１ミリモル）を添加する。この添 加が完了した後に、この混合物を０°Ｃで、さらに２時間撹拌する。次いで一７ ８℃に冷却し、ここでＮ、　Ｎ−ジイソプロピ、ルメチルホスホンアミドクロラ イド（１ミリモル）を添加する。この添加が完了した後に、この混合物を一７８ °Ｃで、さらに２時間撹拌する。ＥｔＯＡｃ（４５ｍｌ）中のトリエチルアミン （５ｍｌ）を加え、この混合物を飽和重炭酸ナトリウム（７５ｍｌ）中に注ぎ入 れる。この有機相を飽和重炭酸ナトリウム（７５ｍ１）、ブライン（５０ｍｌ） によりさらに仕上げ処理し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧で濃縮し、ヘ キサン（２，７ｍ１）中のトリエチルアミン（０゜３ｍ１）に再溶解し、次いて ヘキサン中の１０％トリエチルアミンを用いるフラッシュクロマトグラフィによ り精製し、生成物（化合物１５３）を無色固形物と化合物＋５３（ＩＥリモル） をＣＨ２Ｃ１２３ｍｌに溶解し、次いて化合物３ｆ（０，２０ミリモル）を、次 いてテトラゾール（２，５ミリモル）を添加する。
１時間後に、ｍＣＰＢＡ（１，２５ミリモル）を添加し、この混合物をさらに１ ５分間撹拌し、飽和ＮＨ４ＣＩ　（３０ｍ　ｌ　）中に注ぎ入れ、次いでＥｔＯ Ａｃ（２Ｘ５０ｍｌ）により抽出する。を機相を無水Ｍｇ５ＯＡ上で乾燥させ、 次いて城用で濃縮する。この混合物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し 、生成物、化合物＋５４を得る。
化合物　１５５ 化合物！５４（１ミリモル）をジオキサン１ｍｌに溶解し、次いでジオキサン（ ５ｍｌ）中のトリエチルアミン（ＩＯミリモル）およびチオフェノール（１０ミ リモル）の溶液を添加する。この混合物を１６時間撹拌する。次いて減圧で濃縮 し、ＣＨＩ　Ｃ１，２ｍｌに再溶解し、次いて撹拌しながら、石油エーテル３０ ０ｍ１に、滴下して添加する。デカンテーションの後に、沈殿を採取し、次いで ＣＨ２Ｃ１２２ｍ１に再溶解し、次いて撹拌しなから、再度追加の石油エーテル ３００ｍ１に、滴下して添加する。デカンテーションの後に、沈殿を再度採取し 、ＥｔＯΔｃ２０ｍｌ中に再溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ（１０重量％）を加え、この 混合物を水素雰囲気の下に、水素吸収か止むまで、室温で撹拌する。触媒をセラ イトのバットに通して濾別し、メタノールにより洗浄する。この濾液を採取し、 減圧で濃縮し、次いでメタノール（１０ｍｌ）中の、この水素添加した化合物（ １ミリモル）および水酸化アンモニウム（ｌｏｍｌ）の溶液を封鎖管内で一夜に わたり加熱する。反応終了後に、溶媒を減圧で除去し、次いで生成物を逆相ＨＰ ＬＣにより精製し、化合物＋５５を得る。
＊＊＊ 前記の記載は、本発明を説明しようとするものであり、制限するものではない。
多くの変更および修正を、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、行う ことかできる。
ＦＩＧ、ＩＤ（ｉ） ＦＩＣ，２Ａ（ｉ） Ｆ：［Ｇ、ＩＤ（ｉｉ） ＦＩＣ，２ｘ（ｉｉ） ＦＸＧ、２Ｂ（ｉ） ＦＩＧ、２Ｂ（ｉｉ） ＦＩＧ、］（１） ＦＩＧ、３（ｉｉ） ＦＩＣ，、４（ｉ） ＦＩＣ，４（ｉｉ） ＦＩＣ，５Ａ（ｉ） ＦＩＣ，５Ａ（ｉｉ） Ｆ工Ｇ、５Ｂ Ｆ工Ｇ、５Ｃ Ｆ工Ｇ、６ Ｆ工Ｇ、７ ＦＩＧ、８Ａ（ｉ） ＦＩＣ，８Ｂ（ｉ） ＦＩＣ，ａｘ（ｉｉ） ω ＦＩＣ，ｓＢ（ｉｉ） Ｆ工Ｇ、８Ｃ（ｉ） Ｆ工Ｇ、８Ｃ（ｉｉ） Ｆ工Ｇ、９ （００９）ＣＩＯ Ｆ工Ｇ、　１０ ＦＩＧ、　１１ ＦＩＧ、１２ ＦＩＧ、　１３ 閣Ｓロロロ ａ）　［Ｆ］　寸　へ　○ ＩＴＩ／ＬＩＳＬＩＳ ＦＩＧ、　１４ ■翠ロロロ ＩＴＩ／ｕｓ川 Ｆ工Ｇ、　１５ ■凶ロロロ ｌＴ１７ｕｓｓ４Ｂ Ｆ工Ｇ、　１６ ■田ロロロ ＣＤ　Ｏ寸　へ　Ｑ １ｉ７ｕＳＬ１１ Ｆ工Ｇ、　１７ ■凶ロロロ ＯＣＯ［Ｆ］寸へ０ 田川！田 Ｆ工Ｇ、　１８ も （００９）Ｇ。
Ｆ工Ｇ、　１９ Ｆ工Ｇ、２０ Ｆ工Ｇ、　２３ ０ロロロロ画 ’Ｉ／Ｔｌ５ＴＪ工 Ｆ工Ｇ、　２４ ”ＩＴＩ／ＬＩＳＬｉｌ Ｆ工Ｇ、　２５ 」ｎ口ｅＪ／ＭＯＯＴ Ｆ工Ｇ、　２６（ｉ） ＦＸＧ、　２６（ｉｉ） ＦＩＧ、　２７　（ｉ） ＦＩＣ，２Ｂ（ｉｉ） ＦＩＣ，２９（ｉ） ＦＩＣ，３ｏ（ｉ） ＦＩＧ、３０（ｉｉ） ＦＩＧ、３１（ｉ） Ｆ工Ｇ、３２（ｉｉ） Ｆ工Ｇ、　３３ ＦＩＧ、３５ ＦＩＧ、３６ ＦＩＧ、　３７ ＦＩＧ、　３８ Ｆ工Ｇ、　３９ Ｆ工Ｇ、　４０ Ｆ工Ｇ、４２ Ｆ工Ｇ、４３（ｉ） Ｆ：ＣＧ、　４４（ｉｉ） ＦＩＧ、４５ ヤ ロ ＦＩＧ、　４６ ＦＩＧ、４７（ｉ） ＦＩＧ、　４７（ｉｉ） ＦＩＧ、　４８Ａ（ｉ） ＦＩＧ、４８Ａ（ｉｉ） ＦＩＧ、４８Ｂ（ｉ） ＦｘＧ、４８Ｂ（ｉｉ） ＦｘＧ、４９（ｉ） ＦｘＧ、　５０（１） ＦＩＣ，５ｏ（ｉｉ） フロントベージの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ａ６１Ｋ　３１／７０　 ９４５４−４Ｃ３９／３９５　Ｃ９２８４−４Ｃ ４７／４８　Ｚ　７４３３−４Ｃ Ｃ０７Ｄ　２２７１０２　７４３１−４Ｃ２３３／６４　１０２　９３６０−４ Ｃ２３３／羽　９３６０−４Ｃ ４０５１０４２１１７６０２−４Ｃ ２３９７６０２−４Ｃ ４１７／１２　２０５　９０５１−４Ｃ４１７／１４　９０５１−４Ｃ Ｃ０７Ｆ　９／２６　９１５５−４Ｈ ９／６５０９　Ｚ　９１５５−４Ｈ ９／６５７４　Ａ　９１５５−４Ｈ ＣＯ７Ｈ１５／２５２　７８２２−４Ｃ１９１０６７７８２２−４Ｃ １９／１０　７８２２−４Ｃ Ｃ１２Ｐ　２１１０８　８２１４−４８ＧＯＩＮ　３３１５３　Ｇ　８３１０− ２Ｊ／／（Ｃ１２Ｐ　２１１０８ Ｃ１２Ｒ１：９２） Ｃ１２Ｎ　１５／１３ Ｉ （３１）優先権主張番号　９１９，８５１（３２）優先臼　１９９２年７月３１ 日（３３）優先権主張国　米国（ＵＳ） （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、Ｊ３Ｅ、ＣＨ，ＤＥ。
Ｄ、に、　ＥＳ、　Ｆ：’Ｒ，ＧＢ、　ＧＲ，ＪＥ、ＩＴ、　ＬＵ、　ＭＣ，Ｎ Ｌ、ＳＥ）、ＡＵ、ＣＡ、ＪＰ、ＫＲ（７２）発明者　カサディ、ジャン、エム 。
アメリカ合衆国２０８１７　メリーランド州ベセスダ、ウィルソン　レーン　６ ４０９（７２）発明者　カミレディ、パルレディアメリカ合衆国２０８５２　メ リーランド州ロックビル、ロックビル　パイク　１００１．アパートメント　ナ ンバー　１００６ （７２）発明者　マーチン、マーク、ティー。
アメリカ合衆国２０８７６　メリーランド州ジャーマンタウン、ヘイルソープ　 レーン２０２０３　、アパートメント　ナンバー　２２（７２）発明者　マッセ イ、リチャード、ジェイ。
アメリカ合衆国２０８５２　メリーランド州ロックビル、バレリアン　コート　 ５ （７２）発明者　ネイパー、アンドリュー、ディー。
アメリカ合衆国０１７６０　マサチューセッツ州ナティック、ビレッジ　プルツ ク　レーン２０ （７２）発明者　シンプソン、デビット、エム。
アメリカ合衆国２０７８３　メリーランド州アデルフィア、ロセット　レーン　 ８３０６（７２）発明者　スミス、ロジャー、ジー。
アメリカ合衆国２１７５５　メリーランド州ジェファーソン、ミルフォード　コ ート （７２）発明者　ティットマス、リチャード、シー。
アメリカ合衆国２０８５１　メリーランド州ロックビル、クルツクストン　レー ン １２９０５　、アパートメント　ナンバー　１０３（７２）発明者　ウィリアム ス、リチャード、オウ。
アメリカ合衆国２０８５４　メリーランド州ポトマック、アルセア　コート９４ ０８

Claims (132)

    【特許請求の範囲】
  1. １．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＯＨの基であり、 Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ６は同一または異なり、Ｈであるか、または炭 素原子１−１０個を有するアルキル、炭素原子１−１０個を有するアルコキシ、 一環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有するアルケン、ヒドロキシル、ヒドロ キシアルキル、アミノアルキル、チオアルキル、アミノ、アルキルアミノ、アル キルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレート、または アルキルアンモニウムであり、ただしＲ１−６の少なくとも１個はＨではなく、 そして Ａｒａ−Ｃ−２，４，６−トリメチルベンゾエート、Ａｒａ−Ｃ−３，４，５− トリメチルベンゾエートおよびＡｒａ−Ｃ−２，６−ジメチルベンゾエートは除 く、 を有する置換芳香族エステル化合物。
  2. ２．ＸＯＨが細胞毒性薬物である、請求項１に記載の化合物。
  3. ３．ＸＯＨが抗新生物性ヌクレオシド類縁体、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂ ｉｃｉｎ）またはエノール型のアルドホスフアミドである、請求項１に記載の化 合物。
  4. ４．Ｒ１またはＲ５がＨではない、請求項１に記載の化合物。
  5. ５．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項１のＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんぱく質に結合 していてもよく、 ＢはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、ＤはＰ（Ｏ）ＯＨ、ＳＯ２、ＣＨＯＨま たはＳＯであり、ただしＤがＣＨＯＨである場合にはＢはＣＨ２であり、そして Ｒ１′、Ｒ２′、Ｒ３′、Ｒ４′およびＲ５′は同一または異なり、担体たんぱ く質に結合していてもよく、そしてＨであるか、または炭素原子１−１０個を有 するアルキル、炭素原子１−１０個を有するアルコキシ、一環状芳香族基、炭素 原子１−１０個を有するアルケン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アミノ アルキル、チオアルキル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルホスホネート、ア ルキルスルホネート、アルキルカルボキシレート、またはアルキルアンモニウム であり、ただしＲ１′−Ｒ５′の少なくとも１個はＨではない、を有する化合物 。
  6. ６．Ｒ１′またはＲ６′がＨではない、請求項５に記載の化合物。
  7. ７．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＯＨの基であり、 Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は同一または異なり、そしてＨであるか、または炭 素原子１−１０個を有するアルキル、炭素原子１−１０個を有するアルコキシ、 一環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有するアルケン、ヒドロキシル、ヒドロ キシアルキル、アミノアルキル、チオアルキル、アミノ、アルキルアミノ、アル キルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレート、または アルキルアンモニウムであり、 Ｊは炭素原子１−９個を有する直鎖状アルキルまたは１−９個の原子を有し、ヘ テロ原子を含む直鎖状アルキルであり、この基は置換基として、フェニル、アル キルまたはヘテロ原子を含むアルキルを有しており、そしてＹはＯＨ、ＮＨ２、 ＮＨＲまたはＳＨであり、Ｒはアルキル、アルケニルまたはアルキニルであり、 この基は−ＯＨ、クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、−ＳＯ３、アリール、− ＳＨ、−（ＣＯ）Ｈ、−（ＣＯ）ＯＨ、エステル基、エーテル基、−ＣＯ−、シ アノ、エポキシド基およびヘテロ原子からなる群から選ばれる１個または２個以 上の置換基により置換されていてもよい、を有する置換芳香族エステル化合物。
  8. ８．ＸＯＨが細胞毒性薬物である、請求項７に記載の化合物。
  9. ９．ＸＯＨが抗新生物性ヌクレオシド類縁体、ドキソルビシンまたはエノール型 のアルドホスフアミドである、請求項７に記載の化合物。
  10. １０．Ｒ６−９の少なくとも１個がＨではない、請求項に記載の化合物。
  11. １１．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項７のＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんぱく質に結合 していてもよく、 ＢはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、Ｄ′はＰ（Ｏ）、ＣＯＨであり、ただし Ｄ′がＣＯＨである場合には、ＢおよびＹ′はＣＨ２であり、 Ｙ′はＯ、ＮＨ、ＮＲ、ＳまたはＣＨ２であり、Ｒはアルキル、アルケニルまた はアルキニルであり、この基は−ＯＨ、クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、− ＳＯ３、アリール、−ＳＨ、−（ＣＯ）Ｈ、−（ＣＯ）ＯＨ、エステル基、エー テル基、−ＣＯ−、シアノ、エポキシド基およびヘテロ原子からなる群から選ば れる１個または２個以上の置換基により置換されていてもよく、Ｒ６′、Ｒ４′ 、Ｒ８′およびＲ９′は同一または異なり、担体たんぱく質に結合していてもよ く、そしてＨであるか、または炭素原子１−１０個を有するアルキル、炭素原子 １−１０個を有するアルコキシ、一環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有する アルケン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、チオアルキル 、アミノ、アルキルアミノ、アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、ア ルキルカルボキシレート、またはアルキルアンモニウムであり、そして Ｊは炭素原子１−９個を有する直鎖状アルキル、１−９個の原子を有し、ヘテロ 原子を含む直鎖状アルキルであり、この基は置換基として、フェニル、アルキル またはヘテロ原子を含むアルキルを有している、を有する化合物。
  12. １２．Ｒ６′−９′の少なくとも１個がＨではない、請求項１１に記載の化合物 。
  13. １３．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＯＨの基であり、そしてＲ１０、Ｒ１１およびＲ１２は同一ま たは異なるが、これらの中で少なくとも２個はＨではなく、そしてＨであるか、 または炭素原子２−２２個を有するアルキル、ヘテロ原子を含むアルキル、シク ロアルキルジオール、一環状芳香族基、アルキルホスホネート、アルキルスルホ ネート、アルキルカルボキシレート、アルキルアンモニウムまたはアルケンであ る、 ただしＡｒａ−Ｃ−ジエチルアセテートは除く、を有する置換アセテートエステ ル化合物。
  14. １４．ＸＯＨが細胞毒性薬物である、請求項１３に記載の化合物。
  15. １５．ＸＯＨが抗新生物性ヌクレオシド類縁体、ドキソルビシンまたはエノール 型のアルドホスフアミドである、請求項１３に記載の化合物。
  16. １６．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項１３のＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんぱく質に結 合していてもよく、 ＢはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、ＤはＰ（Ｏ）ＯＨ、ＳＯ２、ＣＨＯＨま たはＳＯであり、ただしＤがＣＨＯＨである場合には、ＢはＣＨ２であり、そし てＲ１０′−１２′は同一または異なり、担体たんぱく質に結合していてもよく 、そしてこれらの中で少なくとも２個はＨではなく、そしてＨであるか、または 炭素原子２−２２個を有するアルキル、ヘテロ原子を含むアルキル、シクロアル キルジオール、一環状芳香族基、アルキルホスホネート、アルキルスルホネート 、アルキルカルボキシレート、アルキルアンモニウムまたはアルケンである、を 有する化合物。
  17. １７．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＯＨの基であり、 Ｊは炭素原子１−９個を有する直鎖状アルキル、１−９個の原子を有し、ヘテロ 原子を含む直鎖状アルキルであり、この基は置換基として、フェニル、アルキル またはヘテロ原子を含むアルキルを有しており、ＹはＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＲまた はＳＨであり、そしてＲ１３−１４Ｈは同一または異なるが、両方共にはＨでは なく、そしてＨであるか、または炭素原子２−２２個を有するアルキル、ヘテロ 原子を含むアルキル、シクロアルキルジオール、一環状芳香族基、アルキルホス ホネート、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレート、アルキルアンモ ニウムまたはアルケンである、 を有する置換アセテートエステル化合物。
  18. １８．ＸＯＨが細胞毒性薬物である、請求項１７に記載の化合物。
  19. １９．ＸＯＨが抗新生物性ヌクレオシド類縁体、ドキソルビシンまたはエノール 型のアルドホスフアミドである、請求項１７に記載の化合物。
  20. ２０．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項１７のＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんぱく質に結 合していてもよく、 ＢはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、Ｄ′はＰ（Ｏ）、ＣＯＨであり、ただし Ｄ′がＣＯＨである場合には、ＢおよびＹ′はＣＨ２であり、 Ｙ′はＯ、ＮＨ、ＮＲ、ＳまたはＣＨ２であり、Ｊは炭素原子１−９個を有する 直鎖状アルキル、１−９個の原子を有し、ヘテロ原子を含む直鎖状アルキルであ り、この基は置換基として、フェニル、アルキルまたはヘテロ原子を含むアルキ ルを有しており、そしてＲ１３′−１４′は同一または異なり、担体たんぱく質 に結合していてもよく、そしてこれらの中で少なくとも２個はＨではなく、そし てＨであるか、または炭素原子２−２２個を有するアルキル、ヘテロ原子を含む アルキル、シクロアルキルジオール、一環状芳香族基、アルキルホスホネート、 アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレート、アルキルアンモニウムまた はアルケンである、を有する化合物。
  21. ２１．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、式は薬物式ＮＨ２の基であり、そしてＲ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８お よびＲ１９は同一または異なり、そしてＨであるか、または炭素原子１−１０個 を有するアルキル、炭素原子１−１０個を有するアルコキシ、一環状芳香族基、 炭素原子１−１０個を有するアルケン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、ア ミノアルキル、チオアルキル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルホスホネート 、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレートまたはアルキルアンモニウ ムである、 を有する芳香族アミド化合物。
  22. ２２．ＸＮＨ２が細胞毒性薬物である、請求項２１に記載の化合物。
  23. ２３．ＸＮＨ２がドキソルビシンまたはメルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）で ある、請求項２１に記載の化合物。
  24. ２４．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項２１のＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんぱく質に結 合していてもよく、 ＢはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、ＤはＰ（Ｏ）ＯＨ、ＳＯ２、ＣＨＯＨま たはＳＯであり、ただしＤがＣＨＯＨである場合には、ＢはＣＨ２であり、そし てＲ１５′、Ｒ１６′、Ｒ１７′、Ｒ１８′およびＲ１９′は同一または異なり 、担体たんぱく質に結合していてもよく、そしてＨであるか、または炭素原子１ −１０個を有するアルキル、炭素原子１−１０個を有するアルコキシ、一環状芳 香族基、炭素原子１−１０個を有するアルケン、ヒドロキシル、ヒドロキシアル キル、アミノアルキル、チオアルキル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルホス ホネート、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレートまたはアルキルア ンモニウムである、 を有する化合物。
  25. ２５．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＮＨ２の基であり、 Ｊは炭素原子１−９個を有する直鎖状アルキル、１−９個の原子を有し、ヘテロ 原子を含む直鎖状アルキルであり、この基は置換基として、フェニル、アルキル またはヘテロ原子を含むアルキルを有しており、ＹはＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＲまた はＳＨであり、Ｒはアルキル、アルケニルまたはアルキニルであり、この基は− ＯＨ、クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、−ＳＯ３、アリール、−ＳＨ、−（ ＣＯ）Ｈ、−（ＣＯ）ＯＨ、エステル基、エーテル基、−ＣＯ−、シアノ、エポ キシド基およびヘテロ原子からなる群から選ばれる１個または２個以上の置換基 により置換されていてもよく、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２およびＲ２３は同一また は異なり、そしてＨであるか、または炭素原子１−１０個を有するアルキル、炭 素原子１−１０個を有するアルコキシ、一環状芳香族基、炭素原子１−１０個を 有するアルケン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、チオア ルキル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルホスホネート、アルキルスルホネー ト、アルキルカルボキシレートまたはアルキルアンモニウムである、 を有する芳香族アミド化合物。
  26. ２６．ＸＮＨ２が細胞毒性薬物である、請求項２５に記載の化合物。
  27. ２７．ＸＮＨ２がドキソルビシンまたはメルファランである、請求項２５に記載 の化合物。
  28. ２８．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項２５の薬物ＸＮＨ２の類縁体であり、そしてＸ′は担体たん ぱく質に結合していてもよく、 ＢはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、Ｄ′はＰ（Ｏ）またはＣＯＨであり、た だしＤ′がＣＯＨである場合には、ＢおよびＹ′はＣＨ２であり、 Ｙ′はＯ、ＮＨ、ＮＲ、ＳまたはＣＨ２であり、Ｒはアルキル、アルケニルまた はアルキニルであり、この基は−ＯＨ、クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、− ＳＯ３、アリール、−ＳＨ、−（ＣＯ）Ｈ、−（ＣＯ）ＯＨ、エステル基、エー テル基、−ＣＯ−、シアノ、エポキシド基およびヘテロ原子からなる群から選ば れる１個または２個以上の置換基により置換されていてもよく、Ｊは炭素原子１ −９個を有する直鎖状アルキル、１−９個の原子を有し、ヘテロ原子を含む直鎖 状アルキルであり、この基は置換基として、フェニル、アルキルまたはヘテロ原 子を含むアルキルを有しており、そしてＲ２０′、Ｒ２１′、Ｒ２２′およびＲ ２３′は同一または異なり、担体たんぱく質に結合していてもよく、そしてＨで あるか、または炭素原子１−１０個を有するアルキル、炭素原子１−１０個を有 するアルコキシ、一環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有するアルケン、ヒド ロキシル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、チオアルキル、アミノ、アル キルアミノ、アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカルボキ シレートまたはアルキルアンモニウムである、を有する化合物。
  29. ２９．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＮＨ２の基である、 を有するホルミルアミド化合物。
  30. ３０．ＸＮＨ２が細胞毒性薬物である、請求項２９に記載の化合物。
  31. ３１．ＸＮＨ２がドキソルビシンまたはメルファランである、請求項２９に記載 の化合物。
  32. ３２．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項２９のＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんぱく質に結 合していてもよく、 ＢはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、そしてＤ′′はＨＰ（Ｏ）ＯＨ、ＣＨ２ ＯＨ、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２またはＳＯ２Ｈであり、ただしＤ′′がＣＨ２ＯＨで ある場合には、ＢはＣＨ２である、を有する化合物。
  33. ３３．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＮＨ２の基であり、そしてＲ２４、Ｒ２５およびＲ２６は同一 または異なり、そしてＨであるか、または炭素原子２−２２個を有するアルキル 、ヘテロ原子を含むアルキル、シクロアルキルジオール、一環状芳香族基、アル キルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレート、アルキ ルアンモニウムまたはアルケンである、を有するアセチルアミド化合物。
  34. ３４．ＸＮＨ２が細胞毒性薬物である、請求項３３に記載の化合物。
  35. ３５．ＸＮＨ２がドキソルビシンまたはメルファランである、請求項３３に記載 の化合物。
  36. ３６．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項３３のＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんぱく質に結 合していてもよく、 ＢはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、ＤはＰ（Ｏ）ＯＨ、ＳＯ２、ＣＨＯＨま たはＳＯであり、ただしＤがＣＨＯＨである場合には、ＢはＣＨ２であり、そし てＲ２４′−２６′は同一または異なり、担体たんぱく質に結合していてもよく 、そしてＨであるか、または炭素原子２−２２個を有するアルキル、ヘテロ原子 を含むアルキル、シクロアルキルジオール、一環状芳香族基、アルキルホスホネ ート、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレート、アルキルアンモニウ ムまたはアルケンである、 を有する化合物。
  37. ３７．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＮＨ２の基であり、 Ｊは炭素原子１−９個を有する直鎖状アルキル、１−９個の原子を有し、ヘテロ 原子を含む直鎖状アルキルであり、この基は置換基として、フェニル、アルキル またはヘテロ原子を含むアルキルを有しており、ＹはＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＲまた はＳＨであり、Ｒはアルキル、アルケニルまたはアルキニルであり、この基は− ＯＨ、クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、−ＳＯ３、アリール、−ＳＨ、−（ ＣＯ）Ｈ、−（ＣＯ）ＯＨ、エステル基、エーテル基、−ＣＯ−、シアノ、エポ キシド基およびヘテロ原子からなる群から選ばれる１個または２個以上の置換基 により置換されていてもよく、Ｒ２７−２８は同一または異なり、そしてＨであ るか、または炭素原子２−２２個を有するアルキル、ヘテロ原子を含むアルキル 、シクロアルキルジオール、一環状芳香族基、アルキルホスホネート、アルキル スルホネート、アルキルカルボキシレート、アルキルアンモニウムまたはアルケ ンである、を有するアセチルアミド化合物。
  38. ３８．ＸＮＨ２が細胞毒性薬物である、請求項３７に記載の化合物。
  39. ３９．ＸＮＨ２がドキソルビシンまたはメルファランである、請求項３７に記載 の化合物。
  40. ４０．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項３７のＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんぱく質に結 合していてもよく、 ＢはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、Ｄ′はＰ（Ｏ）、ＣＯＨであり、ただし Ｄ′がＣＯＨである場合には、ＢおよびＹ′はＣＨ２であり、 Ｙ′はＯ、ＮＨ、ＮＲ、ＳまたはＣＨ２であり、Ｒはアルキル、アルケニルまた はアルキニルであり、この基は−ＯＨ、クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、− ＳＯ３、アリール、−ＳＨ、−（ＣＯ）Ｈ、−（ＣＯ）ＯＨ、エステル基、エー テル基、−ＣＯ−、シアノ、エポキシド基およびヘテロ原子からなる群から選ば れる１個または２個以上の置換基により置換されていてもよく、Ｊは炭素原子１ −９個を有する直鎖状アルキル、１−９個の原子を有し、ヘテロ原子を含む直鎖 状アルキルであり、この基は置換基として、フェニル、アルキルまたはヘテロ原 子を含むアルキルを有しており、そしてＲ２７′−２８′は同一または異なり、 担体たんぱく質に結合していてもよく、そしてＨであるか、または炭素原子２− ２２個を有するアルキル、ヘテロ原子を含むアルキル、シクロアルキルジオール 、一環状芳香族基、アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカ ルボキシレート、アルキルアンモニウムまたはアルケンである、 を有する化合物。
  41. ４１．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ３０およびＲ３１の少なくとも１個はＯＸであり、Ｘは薬物ＸＯＨの基 であり、そして ＯＸではないＲ２９−３３は同一または異なり、そしてＨであるか、または炭素 原子１−１０個を有するアルキル、炭素原子１−１０個を有するアルケニル、一 環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ環状基またはフ ェニル基を有するか、あるいは有していない、カルボキシアルキル、炭素原子１ −１０個を有するアルコキシ、炭素原子１−１０個を有するアルキルアミノ、炭 素原子１−１０個を有するアミノアルキル、炭素原子１−１０個を有し、置換基 としてヘテロ環状基またはフェニル基を有するか、あるいは有していない、アシ ルオキシ、または炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ環状基または フェニル基を有するか、あるいは有していない、アシルアミノであり、Ｒ２０は ＳＯ２ＨまたはＳＯ４Ｈであることもできる、を有するモノラクタム化合物。
  42. ４２．ＸＯＨが細胞毒性薬物である、請求項４１に記載の化合物。
  43. ４３．Ｒ３０および／またはＲ２１が抗新生物性ヌクレオシド類縁体、ドキソル ビシンまたはエノール型のアルドホスフアミドである、請求項４１に記載の化合 物。
  44. ４４．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ３０′およびＲ３１′の少なくとも１個は請求項４１のＸの類縁体であ り、そしてこの類縁体は担体たんぱく質に結合していてもよく、Ｄ′′′はＳＯ ２、ＳＯまたはＣＨＯＨであり、ただしＤ′′′がＣＨＯＨである場合には、Ｚ ′はＣＨであり、 Ｚ′はＯ、ＮまたはＣＨであり、ただしＺ′がＯである場合には、Ｒ２９′は存 在せず、 上記類縁体ではないＲ２９′−３３′は同一または異なり、そしてＨであるか、 または炭素原子１−１０個を有するアルキル、炭素原子１−１０個を有するアル ケニル、一環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ環状 基またはフェニル基を有するか、あるいは有していない、カルボキシアルキル、 炭素原子１−１０個を有するアルコキシ、炭素原子１−１０個を有するアルキル アミノ、炭素原子１−１０個を有するアミノアルキル、炭素原子１−１０個を有 し、置換基としてヘテロ環状基またはフェニル基を有するか、あるいは有してい ない、アシルオキシ、または炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ環 状基またはフェニル基を有するか、あるいは有していない、アシルアミノであり 、そして Ｒ２９′はＳＯ３ＨまたはＳＯ４Ｈであることもでき、そしてＲ２９′−３３′ は担体たんぱく質に結合していてもよい、を有する化合物。
  45. ４５．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＯＨの基であり、 Ｒ３４、Ｒ３５、Ｒ３６およびＲ３７は同一または異なり、そしてＨであるか、 または炭素原子１−１０個を有するアルキル、炭素原子１−１０個を有するアル コキシ、一環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有するアルケン、ヒドロキシル 、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、チオアルキル、アミノ、アルキルアミ ノ、アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレート またはアルキルアンモニウムであり、ただしＲ３４−３７の少なくとも１個はＨ ではなく、ｎは０−３の整数であり、 Ｅは任意に存在し、そして酸素、カルボニルオキシまたはオキシカルボニルであ り、ただしＥが存在していない場合には、ｎは０に等しいことはなく、Ａは下記 の基であり： ▲数式、化学式、表等があります▼ この基において、Ｒ３８、Ｒ３９、Ｒ４０、Ｒ４１またはＲ４２はＥに対する結 合部位であり、あるいはＥが存在していない場合には、［ＣＨ２］ｎに対する結 合部位であり、あるいはＥが存在しておらず、かつまたｎ＝０である場合には、 フェニル環に対する結合部位であり、 Ｒ３８、Ｒ３９、Ｒ４０、Ｒ４１またはＲ４２は同一または異なり、そしてＨで あるか、または炭素原子１−１０個を有するアルキル、炭素原子１−１０個を有 するアルケニル、一環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘ テロ環状基またはフェニル基を有するか、あるいは有していない、カルボキシア ルキル、炭素原子１−１０個を有するアルコキシ、炭素原子１−１０個を有する アルキルアミノ、炭素原子１−１０個を有するアミノアルキル、炭素原子１−１ ０個を有し、置換基としてヘテロ環状基またはフェニル基を有するか、あるいは 有していない、アシルオキシ、または炭素原子１−１０個を有し、置換基として ヘテロ環状基またはフェニル基を有するか、あるいは有していない、アシルアミ ノであり、そしてＲ３８はＳＯ３ＨまたはＳＯ４Ｈであることもできる、を有す るモノラクタム化合物。
  46. ４６．ＸＯＨが細胞毒性薬物である、請求項４５に記載の化合物。
  47. ４７．ＸＯＨが抗新生物性ヌクレオシド類縁体、ドキソルビシンまたはエノール 型のアルドホスフアミドである、請求項４５に記載の化合物。
  48. ４８．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項４５のＸの類縁体であり、そして担体たんぱく質に結合して いてもよく、 ＢはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、Ｒ３４′、Ｒ２６′、Ｒ２８′およびＲ ３７′は同一または異なり、そしてＨであるか、または炭素原子１−１０個を有 するアルキル、炭素原子１−１０個を有するアルコキシ、一環状芳香族基、炭素 原子１−１０個を有するアルケン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アミノ アルキル、チオアルキル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルホスホネート、ア ルキルスルホネート、アルキルカルボキシレートまたはアルキルアンモニウムで あり、ただしＲ３４′−Ｒ３７′の少なくとも１個はＨではなく、 Ｒ３４′、Ｒ３５′、Ｒ３６′およびＲ３７′は場合により、担体たんぱく質に 対する結合部位であり、 ｎは０−３の整数であり、 Ｅ′は任意に存在し、そしてＣＨ２、Ｏ、カルボニルオキシ、カルボニルメチレ ン、オキシカルボニルまたはメチレンカルボニルであり、Ａ′は下記の基であり ： ▲数式、化学式、表等があります▼ この基において、Ｄ′′′はＳＯ２、ＳＯまたはＣＨＯＨであり、ただしＤ′′ ′がＣＨＯＨである場合には、Ｚ′はＣＨであり、Ｚ′はＯ、ＮまたはＣＨ（い づれかの立体配置を有する）であり、ただしＺ′がＯである場合には、Ｒ３８′ は存在しておらず、そしてＲ３８′、Ｒ３９′、Ｒ４０′、Ｒ４１′またはＲ４ ２′はＥ′に対する結合部位であり、あるいはＥ′が存在していない場合には、 （ＣＨ２）ｎに対する結合部位であり、またはＥ′が存在しておらず、かつまた ｎ＝０である場合には、フェニル環に対する結合部位であり、Ｒ３８′、Ｒ３９ ′、Ｒ４０′、Ｒ４１′およびＲ４２′は同一または異なり、そしてＨであるか 、または炭素原子１−１０個を有するアルキル、炭素原子１−１０個を有するア ルケニル、一環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ環 状基またはフェニル基を有しているか、または有していないカルボキシアルキル 、炭素原子１−１０個を有するアルコキシ、炭素原子１−１０個を有するアルキ ルアミノ、炭素原子１−１０個を有するアミノアルキル、炭素原子１−１０個を 有し、置換基としてヘテロ環状基またはフェニル基を有しているか、または有し ていないアシルオキシ、または炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ 環状基またはフェニル基を有しているか、または有していないアシルアミノであ り、そしてＲ３６′はＳＯ３ＨまたはＳＯ４Ｈであることもできる、を有する化 合物。
  49. ４９．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＯＨの基であり、 ｎは０−４の整数であり、 Ｒ４２およびＲ４４は同一または異なるが、両方ともにＨであることはなく、そ して炭素原子２−２２個を有するアルキル、ヘテロ原子を含むアルキル、シクロ アルキルジオール、一環状芳香族基、アルキルホスホネート、アルキルスルホネ ート、アルキルカルボキシレート、アルキルアンモニウムまたはアルケンであり 、Ｅは任意に存在し、そして酸素、カルボニルオキシまたはオキシカルボニルで あり、 Ａは下記の基であり： ▲数式、化学式、表等があります▼ この基において、Ｒ３８、Ｒ３９、Ｒ４０、Ｒ４１またはＲ４２はＥに対する結 合部位であり、またはＥが存在していない場合には、（ＣＨ２）ｎに対する結合 部位であり、またはＥが存在しておらず、かつまたｎ＝０である場合には、Ｒ４ ３またはＲ４４が結合している炭素原子に対する結合部位であり、Ｒ３８、Ｒ３ ９、Ｒ４０、Ｒ４１およびＲ４２は同一または異なり、そしてＨであるか、また は炭素原子１−１０個を有するアルキル、炭素原子１−１０個を有するアルケニ ル、一環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ環状基ま たはフェニル基を有しているか、または有していないカルボキシアルキル、炭素 原子１−１０個を有するアルコキシ、炭素原子１−１０個を有するアルキルアミ ノ、炭素原子１−１０個を有するアミノアルキル、炭素原子１−１０個を有し、 置換基としてヘテロ環状基またはフェニル基を有しているか、または有していな いアシルオキシ、または炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ環状基 またはフェニル基を有しているか、または有していないアシルアミノであり、そ してＲ３６はＳＯ３ＨまたはＳＯ４Ｈであることもできる、 を有するモノラクタム化合物。
  50. ５０．ＸＯＨが細胞毒性薬物の基である、請求項４９に記載の化合物。
  51. ５１．ＸＯＨが抗新生物性ヌクレオシド類縁体、ドキソルビシンまたはエノール 型のアルドホスフアミドである、請求項４９に記載の化合物。
  52. ５２．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項４９のＸの類縁体であり、そして担体たんぱく質に結合して いてもよく、 ＢはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、ｎは０−４の整数であり、 Ｒ４３′およびＲ４４′は同一または異なるが、両方ともにＨであることはなく 、そして炭素原子２−２２個を有するアルキル、ヘテロ原子を含むアルキル、シ クロアルキルジオール、一環状芳香族基、アルキルホスホネート、アルキルスル ホネート、アルキルカルボキシレート、アルキルアンモニウムまたはアルケンで あり、 Ｅ′は任意に存在し、そしてＣＨ２、Ｏ、カルボニルオキシ、カルボニルメチレ ン、オキシカルボニルまたはメチレンカルボニルであり、Ａ′は下記の基であり ： ▲数式、化学式、表等があります▼ この基において、Ｄ′′′はＳＯ２、ＳＯまたはＣＨＯＨであり、ただしＤ′′ ′がＣＨＯＨである場合には、Ｚ′はＣＨであり、Ｚ′はＯ、ＮまたはＣＨであ り、ただしＺ′がＯである場合には、Ｒ３８′は存在しておらず、Ｒ３８′、Ｒ ３９′、Ｒ４０′、Ｒ４１′またはＲ４２′はＥに対する結合部位であり、また はＥが存在していない場合には、（ＣＨ２）ｎに対する結合部位であり、または Ｅが存在しておらず、かつまたｎ＝０である場合には、Ｒ４３′またはＲ４４′ が結合している炭素原子に対する結合部位であり、Ｒ３８′、Ｒ３９′、Ｒ４０ ′、Ｒ４１′およびＲ４２′は同一または異なり、そしてＨであるか、または炭 素原子１−１０個を有するアルキル、炭素原子１−１０個を有するアルケニル、 一環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ環状基または フェニル基を有しているか、または有していないカルボキシアルキル、炭素原子 １−１０個を有するアルコキシ、炭素原子１−１０個を有するアルキルアミノ、 炭素原子１−１０個を有するアミノアルキル、炭素原子１−１０個を有し、置換 基としてヘテロ環状基またはフェニル基を有しているか、または有していないア シルオキシ、または炭素原子１−１０個を有し、置換基としてヘテロ環状基また はフェニル基を有しているか、または有していないアシルアミノであり、そして Ｒ３８はＳＯ３ＨまたはＳＯ４Ｈであることもできる、 を有する化合物。
  53. ５３．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＱＨの基であり、ＱはＯまたはＮＨであり、そしてＲ４５およ びＲ４６は同一または異なり、そして非置換のアルキル、置換基として、ハロゲ ン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アルキルア ンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を有するアルキルである、ただしア ルドホスフアミドジエチルアセタールは除く、を有するアルキルアセタール化合 物。
  54. ５４．ＸＱＨが細胞毒性薬物である、請求項５３に記載の化合物。
  55. ５５．ＸＱＨがヌクレオシド類縁体またはホスホラミドマスタード［ＨＯＰ（Ｏ ）（ＮＨ２）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ）２］、メルファランまたはドキソルビシン である、請求項５３に記載の化合物。
  56. ５６．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｑ′はＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、Ｘ′は請求項５３のＸの類縁体 であり、そしてＸ′は担体たんぱく質に結合していてもよく、 Ｂ′はＮＨまたはＣＨ２であり、ただしＢ′がＮＨである場合には、Ｑ′はＣＨ ２であり、そして Ｒ４５′およびＲ４６′は同一または異なり、そしてＨであるか、または非置換 のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート 、カルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケン、または一環状芳香族基 を有するアルキルであり、そして担体たんぱく質に結合していてもよい、を有す る化合物。
  57. ５７．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ４６′およびＲ４０′は同一または異なり、そしてＨであるか、または 非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホ ネート、カルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケン、または一環状芳 香族基を有するアルキルであり、そして担体たんぱく質に結合していてもよい、 を有する化合物。
  58. ５８．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｑ′はＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、Ｘ′は請求項５３のＸの類縁体 であり、そしてＸ′は担体たんぱく質に結合していてもよく、そして Ｒ４５′およびＲ４６′は同一または異なり、そしてＨであるか、または非置換 のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート 、カルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケン、または一環状芳香族基 を有するアルキルであり、そして担体たんぱく質に結合していてもよい、を有す る化合物。
  59. ５９．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ４５′およびＲ４６′は同一または異なり、そしてＨであるか、または 非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホ ネート、カルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケン、または一環状芳 香族基を有するアルキルであり、そして担体たんぱく質に結合していてもよい、 を有する化合物。
  60. ６０．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＯＨの基であり、そしてＲ４７、Ｒ４８およびＲ４９は同一ま たは異なり、そして非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホ スホネート、スルホネート、カルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケ ン、または一環状芳香族基を有するアルキルであり、そして Ｒ４９はＨであることもできる、 を有するオルトエステル化合物。
  61. ６１．ＸＯＨが細胞毒性薬物である、請求項６０に記載の化合物。
  62. ６２．ＸＯＨがヌクレオシド類縁体またはドキソルビシンまたはエノール型のア ルドホスフアミドである、請求項６０に記載の化合物。
  63. ６３．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項６０のＸの類縁体であり、そして担体たんぱく質に結合して いてもよく、 Ｑ′は０、ＣＨ２、ＳまたはＮＨであり、そしてＲ４７′およびＲ４８′は同一 または異なり、そしてＨであるか、または非置換のアルキル、置換基としてハロ ゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アルキル アンモニウム、アルケン、または一環状芳香族基を有するアルキルであり、そし て担体たんぱく質に結合していてもよい、を有する化合物。
  64. ６４．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ４７′、Ｒ４８′およびＲ４９′は同一または異なり、そしてＨである か、または非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネー ト、スルホネート、カルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケン、また は一環状芳香族基を有するアルキルであり、そして担体たんぱく質に結合してい てもよい、 を有する化合物。
  65. ６５．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項６０のＸの類縁体であり、そして担体たんぱく質に結合して いてもよく、 Ｑ′はＣＨ２であり、そして Ｒ４７′およびＲ４８′は同一または異なり、そしてＨであるか、または非置換 のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート 、カルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケン、または一環状芳香族基 を有するアルキルであり、そして担体たんぱく質に結合していてもよい、を有す る化合物。
  66. ６６．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ４７′およびＲ４８′は同一または異なり、そしてＨであるか、または 非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホ ネート、カルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケン、または一環状芳 香族基を有するアルキルであり、そして担体たんぱく質に結合していてもよい、 を有する化合物。
  67. ６７．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＱＨの基であり、そしてＱはＯまたはＮＨであり、そしてＲ５ ０およびＲ５１は同一または異なり、そしてＨであるか、または非置換のアルキ ル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボ キシレート、またはアルキルエステルあるいはアルキルアミド、ヒドロキシル、 アルキルアンモニウム、アミノ、アルケン、または一環状芳香族基を有するアル キルである、 を有するジオールアセタール化合物。
  68. ６８．ＸＱＨが細胞毒性薬物である、請求項６７に記載の化合物。
  69. ６９．ＸＱＨがヌクレオシド類縁体またはホスホラミドマスタード［ＨＯＰ（Ｏ ）（ＮＨ２）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ）２］、メルファランまたはドキソルビシン である、請求項６７に記載の化合物。
  70. ７０．Ｒ５０とＲ５１とが、この分子のアセタール部分内に対称の鏡面が存在す るようにシスでありかつまた同一であり、そして異性体の数が最小にされている 、請求項６７に記載の化合物。
  71. ７１．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ５０′およびＲ５１′は同一または異なり、そしてＨであるか、または 非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホ ネート、カルボキシレート、またはアルキルエステルあるいはアルキルアミド、 ヒドロキシル、アルキルアンモニウム、アミノ、アルケン、または一環状芳香族 基を有するアルキルであり、そして担体たんぱく質に結合していてもよい、を有 する化合物。
  72. ７２．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｑ′はＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、Ｘ′は請求項１７のＸの類縁体 であり、そしてＸ′は担体たんぱく質に結合していてもよく、 Ｂ′はＮＨまたはＣＨ２であり、ただしＢ′がＮＨである場合には、Ｑ′はＣＨ ２であり、そして Ｒ５０′およびＲ５１′は同一または異なり、そしてＨであるか、または非置換 のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート 、カルボキシレート、またはアルキルエステルあるいはアルキルアミド、ヒドロ キシル、アルキルアンモニウム、アミノ、アルケン、または一環状芳香族基を有 するアルキルであり、そして担体たんぱく質に結合していてもよい、を有する化 合物。
  73. ７３．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｑ′はＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、Ｘ′は請求項６７のＸの類縁体 であり、そしてＸ′は担体たんぱく質に結合していてもよく、そして Ｒ５０′およびＲ５１′は同一または異なり、そしてＨであるか、または非置換 のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート 、カルボキシレート、またはアルキルエステルあるいはアルキルアミド、ヒドロ キシル、アルキルアンモニウム、アミノ、アルケン、または一環状芳香族基を有 するアルキルであり、そして担体たんぱく質に結合していてもよい、を有する化 合物。
  74. ７４．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ６０′およびＲ６１′は同一または異なり、そしてＨであるか、または 非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホ ネート、カルボキシレート、またはアルキルエステルあるいはアルキルアミド、 ヒドロキシル、アルキルアンモニウム、アミノ、アルケン、または一環状芳香族 基を有するアルキルであり、そして担体たんぱく質に結合していてもよい、を有 する化合物。
  75. ７５．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＱＨの基であり、そしてＱはＯまたはＮＨであり、そして ＧはジオールＧ（ＯＨ）２の基であり、Ｇ（ＯＨ）２は糖、シクロアルキルジオ ールまたはオルトフェニルジオールであり、そしてＧは置換基として、ハロゲン 、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アルキルアン モニウム、アルケン、または一環状芳香族基を有していてもよい、を有するジオ ールアセタール化合物。
  76. ７６．ＸＱＨが細胞毒性薬物である、請求項７５に記載の化合物。
  77. ７７．ＸＯＨがヌクレオシド類縁体またはホスホラミドマスタード［ＨＯＰ（Ｏ ）（ＮＨ２）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ）２］、メルファランまたはドキソルビシン である、請求項記載の化合物。
  78. ７８．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｑ′はＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、Ｘ′は請求項７５のＸの類縁体 であり、そしてＸ′は担体たんぱく質に結合していてもよく、 Ｂ′はＮＨまたはＣＨ２であり、ただしＢ′がＮＨである場合には、Ｑ′はＣＨ ２であり、そして Ｇ′はジオールＧ（ＯＨ）２の基であり、Ｇ（ＯＨ）２は糖、シクロアルキルジ オールまたはオルトフェニルジオールであり、そしてＧ′は置換基として、ハロ ゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アルキル アンモニウム、アルケン、または一環状芳香族基を有していてもよく、そして担 体たんぱく質に結合していてもよい、を有する化合物。
  79. ７９．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｇ′はジオールＧ（ＯＨ）２の基であり、Ｇ（ＯＨ）２は糖、シクロアル キルジオールまたはオルトフェニルジオールであり、そしてＧ′は置換基として 、ハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、ア ルキルアンモニウム、アルケン、または一環状芳香族基を有していてもよく、そ して担体たんぱく質に結合していてもよい、を有する化合物。
  80. ８０．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｑ′はＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、Ｘ′は請求項７５のＸの類縁体 であり、そしてＸ′は担体たんぱく質に結合していてもよく、そして Ｇ′はジオールＧ（ＯＨ）２の基であり、Ｇ（ＯＨ）２は糖、シクロアルキルジ オールまたはオルトフェニルジオールであり、そしてＧ′は置換基として、ハロ ゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アルキル アンモニウム、アルケン、または一環状芳香族基を有していてもよく、そして担 体たんぱく質に結合していてもよい、を有する化合物。
  81. ８１．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｇ′はジオールＧ（ＯＨ）２の基であり、Ｇ（ＯＨ）２は糖、シクロアル キルジオールまたはオルトフェニルジオールであり、そしてＧ′は置換基として 、ハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、ア ルキルアンモニウム、アルケン、または一環状芳香族基を有していてもよく、そ して担体たんぱく質に結合していてもよい、を有する化合物。
  82. ８２．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＯＨの基であり、そしてＲ５２、Ｒ５３およびＲ５４は同一ま たは異なり、そしてＨであるか、または非置換のアルキル、置換基としてハロゲ ン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、またはアル キルエステルあるいはアルキルアミド、ヒドロキシル、アルキルアンモニウム、 アミノ、アルケン、または一環状芳香族基を有するアルキルである、 を有するジオールオルトエステル化合物。
  83. ８３．ＸＯＨが細胞毒性薬物である、請求項８２に記載の化合物。
  84. ８４．ＸＯＨがヌクレオシド類縁体またはドキソルビシンまたはエノール型のア ルドホスフアミドである、請求項８２に記載の化合物。
  85. ８５．Ｒ５２とＲ５３とが、この分子の環状アセタール部分内に対称の鏡面が存 在するようにシスでありかつまた同一であり、そして異性体の数が最小にされて いる、請求項８２に記載の化合物。
  86. ８６．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ５２′、Ｒ５３′およびＲ５４′は同一または異なり、そしてＨである か、または非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネー ト、スルホネート、カルボキシレート、またはアルキルエステルあるいはアルキ ルアミド、ヒドロキシル、アルキルアンモニウム、アミノ、アルケン、または一 環状芳香族基を有するアルキルであり、そして担体たんぱく質に結合していても よい、を有する化合物。
  87. ８７．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項８２のＸの類縁体であり、そしてＸ′は担体たんぱく質に結 合していてもよく、 Ｑ′はＣＨ２またはＮＨであり、そしてＲ５２′およびＲ５３′は同一または異 なり、そしてＨであるか、または非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘ テロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、またはアルキルエ ステルあるいはアルキルアミド、ヒドロキシル、アルキルアンモニウム、アミノ 、アルケン、または一環状芳香族基を有するアルキルであり、そして担体たんぱ く質に結合していてもよい、を有する化合物。
  88. ８８．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ５２′、Ｒ５３′およびＲ５４′は同一または異なり、そしてＨである か、または非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネー ト、スルホネート、カルボキシレートまたはアルキルエステル、あるいはアルキ ルアミド、ヒドロキシル、アルキルアンモニウム、アミノ、アルケンまたは一環 状芳香族基を有するアルキルであり、そして担体たんぱく質に結合していてもよ い、を有する化合物。
  89. ８９．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項８２のＸの類縁体であり、そして担体たんぱく質に結合して いてもよく、 Ｑ′はＣＨ２であり、そして Ｒ５２′およびＲ５３′は同一または異なり、そしてＨであるか、または非置換 のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート 、カルボキシレートまたはアルキルエステル、あるいはアルキルアミド、ヒドロ キシル、アルキルアンモニウム、アミノ、アルケンまたは一環状芳香族基を有す るアルキルであり、そして担体たんぱく質に結合していてもよい、を有する化合 物。
  90. ９０．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＯＨの基であり、 ＧはジオールＧ（ＯＨ）２の基であり、Ｇ（ＯＨ）２は糖、シクロアルキルジオ ールまたはオルトフェニルジオールであり、そしてＧは置換基としてハロゲン、 ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アルキルアンモ ニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を有していてもよく、そしてＲ５６はＨ 、非置換のアルキル、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スル ホネート、カルボキシレートまたはアルキルエステル、あるいはアルキルアミド 、ヒドロキシル、アルキルアンモニウム、アミノ、アルケンまたは一環状芳香族 基を有するアルキルである、を有するジオールオルトエステル化合物。
  91. ９１．ＸＯＨが細胞毒性薬物である、請求項９０に記載の化合物。
  92. ９２．ＸＯＨがヌクレオシド類縁体、エノール型のアルドホスフアミドまたはド キソルビシンである、請求項９０に記載の化合物。
  93. ９３．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項９０のＸの類縁体であり、そして担体たんぱく質に結合して いてもよく、 Ｑ′はＣＨ２またはＮＨであり、そしてＧ′はジオールＧ（ＯＨ）２の基であり 、Ｇ（ＯＨ）２は糖、シクロアルキルジオールまたはオルトフェニルジオールで あり、そしてＧ′は置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホ ネート、カルボキシレート、アルキルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香 族基を有していてもよく、そして担体たんぱく質に結合していてもよい、を有す る化合物。
  94. ９４．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｇ′はジオールＧ（ＯＨ）２の基であり、Ｇ（ＯＨ）２は糖、シクロアル キルジオールまたはオルトフェニルジオールであり、そしてＧ′は置換基として ハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アル キルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を有していてもよく、そして 担体たんぱく質に結合していてもよく、そしてＲ５９′はＨ、非置換のアルキル 、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキ シレートまたはアルキルエステル、あるいはアルキルアミド、ヒドロキシル、ア ルキルアンモニウム、アミノ、アルケンまたは一環状芳香族基を有するアルキル であり、そして担体たんぱく質に結合していてもよい、 を有する化合物。
  95. ９５．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項９０のＸの類縁体であり、そして担体たんぱく質に結合して いてもよく、 Ｑ′はＣＨ２であり、そして Ｇ′はジオールＧ（ＯＨ）２の基であり、Ｇ（ＯＨ）２は糖、シクロアルキルジ オールまたはオルトフェニルジオールであり、そしてＧ′は置換基としてハロゲ ン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アルキルア ンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を有していてもよく、そして担体た んぱく質に結合していてもよい、 を有する化合物。
  96. ９６．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｇ′はジオールＧ（ＯＨ）２の基であり、Ｇ（ＯＨ）２は糖、シクロアル キルジオールまたはオルトフェニルジオールであり、そしてＧ′は置換基として ハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネート、カルボキシレート、アル キルアンモニウム、アルケンまたは一環状芳香族基を有していてもよく、そして 担体たんぱく質に結合していてもよい、を有する化合物。
  97. ９７．式： Ｖ−Ｑ−Ｘ 式中、Ｘ′′は薬物ＸＱＨの基であり、そしてＱはＯまたはＮＨであり、そして Ｖは任意にアルファまたはベータ配置を有する、糖のアノマー部分を経てＱＸに 共有結合しているヘキソピラノースまたはヘキソフラノースである、を存する化 合物。
  98. ９８．ＸＱＨが細胞毒性薬物である、請求項９７に記載の化合物。
  99. ９９．ＸＱＨがヌクレオシド類縁体またはホスホラミドマスタード［ＨＯＰ（Ｏ ）（ＮＨ２）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ）２］、メルファランまたはドキソルビシン である、請求項９７に記載の化合物。
  100. １００．Ｖがグルコース、グルコサミン、Ｄ−キノボピラノース、ガラクトース 、ガラクトサミン、Ｌ−フコピラノース、Ｌ−ラムノピラノース、Ｄ−グルコピ ラヌロン酸、Ｄ−ガラクトピラヌロン酸、Ｄ−マノピラヌロン酸またはＤ−ヨー ドピラヌロン酸である、請求項に記載の化合物。
  101. １０１．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項９７のＸの類縁体であり、そして担体たんぱく質に結合して いてもよく、 Ｑ′はＮＨであり、そして Ｍ′はｎ−ペンタンの１，４−ジラジカルであり、この基のＣ１、Ｃ２、Ｃ３お よびＣ５はＯＨにより置換されていてもよく、そしてＭ′は担体たんぱく質に結 合していてもよい、 を有する化合物。
  102. １０２．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｍ′はｎ−ペンタンの１，４−ジラジカルであり、この基のＣ１、Ｃ２、 Ｃ３およびＣ５はＯＨにより置換されていてもよく、そしてＭ′は担体たんぱく 質に結合していてもよい、 を有する化合物。
  103. １０３．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘ′は請求項９７のＸの類縁体であり、そして担体たんぱく質に結合して いてもよく、 Ｑ′はＣＨ２であり、そして Ｍ′はｎ−ペンタンの１，４−ジラジカルであり、この基のＣ１、Ｃ２、Ｃ３お よびＣ５はＯＨにより置換されていてもよく、そしてＭ′は担体たんぱく質に結 合していてもよい、 を有する化合物。
  104. １０４．請求項１に記載の化合物からなるプロドラッグ。
  105. １０５．（ａ）有効量の請求項１の化合物、および（ｂ）医薬上で許容される担 体 からなる、医薬組成物。
  106. １０６．請求項５に記載の化合物を含有する抗体を産生させるためのハプテン。
  107. １０７．免疫応答による抗体の発現において、ハプテンとして有用性を有する請 求項５に記載の化合物。
  108. １０８．請求項１のプロドラッグを活性化できる、請求項５のハプテンに対して 発現される抗体。
  109. １０９．（ａ）特定の細胞集団のエピトープに結合できる部分、および（ｂ）請 求項１のプロドラッグあるいはＡｒａ−Ｃ−２，４，６−トリメチルベンゾエー ト、Ａｒａ−Ｃ−３，４，５−トリメチルベンゾエートまたはＡｒａ−Ｃ−２， ６−ジメチルベンゾエートを活性化できる、触媒性抗体部分、からなる、特定の 細胞集団を処置するための免疫結合体。
  110. １１０．（ａ）有効量の請求項１０９に記載の免疫結合体、および（ｂ）医薬上 で許容される担体 からなる、医薬組成物。
  111. １１１．（ａ）請求項１に記載のプロドラッグ、および（ｂ）（ｉ）特定の細胞 集団のエピトープに結合できる部分、および （ｉｉ）請求項１に記載のプロドラッグを活性化できる、酵素部分または触媒性 抗体部分、 からなる免疫結合体、 からなる組み合わせ治療剤。
  112. １１２．（ａ）Ａｒａ−Ｃ−２，４，６−トリメチルベンゾエート、Ａｒａ−Ｃ −３，４，５−トリメチルベンゾエートまたはＡｒａ−Ｃ−２，６−ジメチルベ ンゾエート、および （ｂ）（ｉ）特定の細胞集団のエピトープに結合できる部分、および （ｉｉ）Ａｒａ−Ｃ−２，４，６−トリメチルベンゾエート、Ａｒａ−Ｃ−３， ４，５−トリメチルベンゾエートまたはＡｒａ−Ｃ−２，６−ジメチルベンゾエ ートを活性化できる触媒性抗体部分、 からなる免疫結合体、 からなる組み合わせ治療剤。
  113. １１３．（ａ）（ｉ）特定の細胞集団のエピトープに結合できる部分、および （ｉｉ）請求項１に記載のプロドラッグを活性化できる、酸素部分または触媒性 抗体部分； からなる免疫結合体を投与し； （ｂ）上記免疫結合体が上記細胞集団に局在することを可能にし、次いで （ｃ）上記請求項１のプロドラッグを投与する、ことからなる特定の細胞集団の 状態を処置する方法。
  114. １１４．（ａ）（ｉ）特定の細胞集団のエピトープに結合できる部分、および （ｉｉ）Ａｒａ−Ｃ−２，４，６−トリメチルベンゾエート、Ａｒａ−Ｃ−３， ４，５−トリメチルベンゾエートまたはＡｒａ−Ｃ−２，６−ジメチルベンゾエ ートを活性化できる、触媒性抗体部分； からなる免疫結合体を投与し； （ｂ）上記免疫結合体が上記細胞集団に局在することを可能にし；次いで （ｃ）この免疫結合体により活性化されるＡｒａ−Ｃ−２，４，６−トリメチル ベンゾエート、Ａｒａ−Ｃ−３，４，５−トリメチルベンゾエートまたはＡｒａ −Ｃ−２，６−ジメチルベンゾエートを投与する、ことからなる特定の細胞集団 の状態を処置する方法。
  115. １１５．特定の細胞集団の上記状態か癌細胞である請求項１１３に記載の方法。
  116. １１６．対象のプロドラッグを活性化できる抗体を同定する方法であって、（ｉ ）対象のプロドラッグを活性化でき、かつまた抗生物質を不活性化できる、抗体 を誘発させるために選ばれるハプテンにより、ホストを免疫感作し、（ｉｉ）こ の抗体をコードする組み換え遺伝子を単離し、（ｉｉｉ）この抗体をコードする 遺伝子をバクテリア中に挿入し、（ｉｖ）このバクテリアを抗生物質含有培地中 で培養し、（ｖ）生存しているバクテリアを選別し、（ｖｉ）化存しているバク テリアから抗体遺伝子を単離し、（ｖｉｉ）この抗体遺伝子を発現させて、この 抗体を同定するのに充分の量の抗体を生成させ、次いで （ｖｉｉｉ）対象のプロドラッグを活性化できる能力に係わり、抗体を選別する 、工程からなる同定方法。
  117. １１７．対象のプロドラッグを活性化できる抗体を同定する方法であって、（ｉ ）対象のプロドラッグを活性化できる、抗体を誘発させるために選ばれるハプテ ンにより、ホストを免疫感作し、（ｉｉ）この抗体をコードする組み換え遺伝子 を単離し、（ｉｉｉ）この抗体をコードする遺伝子をバクテリア中に挿入し、（ ｉｖ）このバクテリアを、対象のプロドラッグと同一の先行分子（ｐｒｏｍｏｉ ｅｔｙ）により誘導体化されているチミジンを含有する培養培地中で培養し、 （ｖ）生存しているバクテリアを選別し、（ｖｉ）生存しているバクテリアから 抗体遺伝子を単離し、（ｖｉｉ）この抗体遺伝子を発現させて、この抗体の特徴 を確認するのに充分の量の抗体を生成させ、次いで （ｖｉｉｉ）対象のプロドラッグを活性化できる能力に係わり、抗体を選別する 、工程からなる同定方法。
  118. １１８．基質の生成物への変換を触媒することができる抗体の選別方法であって 、（ｉ）ハプテンに対して抗体を発現させ、（ｉｉ）この抗体を不動化し、 （ｉｉｉ）この抗体に基質を添加し、次いで（ｉｖ）基質の生成物への変換を触 媒することができる抗体を同定する、工程からなる選別方法。
  119. １１９．（ｉ）の工程の後に、上記ハプテンを結合する抗体を選択する工程を行 う、請求項１１８に記載の方法。
  120. １２０．反応を触媒することができる抗体を発現する細胞を選別する方法であっ て、 （ｉ）化合物に対して栄養要求体であり、そして抗体遺伝子を含有する細胞を、 先行形態にある当該化合物を含有する培養培地で平板形成させ、次いで（ｉｉ） この先行形態にある化合物を活性化して、当該化合物を放出できる抗体を発現す る、生存している細胞を選別する、工程からなる、選別方法。
  121. １２１．プロドラッグを活性化できる抗体を発現する細胞を選別する方法であっ て、 （ｉ）チミジンのプロドラッグを含有する培養培地で抗体遺伝子を含有するチミ ジン依存性細胞を、平板形成させ、次いで（ｉｉ）このプロドラッグを活性化し て、チミジンを生成できる抗体を発現する、生存している細胞を選別する、 工程からなる、選別方法。
  122. １２２．反応を触媒することができる抗体を発現する細胞を選別する方法であっ て、 （ｉ）トキシン含有培養培地で抗体遺伝子を含有する細胞を、平板形成させ、（ ｉｉ）このトキシンを不活性化できる抗体を発現する、生存している細胞を選別 する、 工程からなる、選別方法。
  123. １２３．プロドラッグを活性化できる抗体を発現する細胞を選別する方法であっ て、 （ｉ）抗生物質含有培養培地で抗体遺伝子を含有するバクテリア細胞を、平板形 成させ、 （ｉｉ）この抗生物質を不活性化できる抗体を発現する、生存しているバクテリ ア細胞を選別する、 工程からなる、選別方法。
  124. １２４．二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体の合成方法であって、（ｉ） 下記の群から選ばれる配列を有する遺伝子を発現させ：ＶＨ抗体１−Ｓ−ＶＬ抗 体１−Ｓ−ＶＬ抗体２−Ｓ−ＶＨ抗体２；ＶＨ抗体１−Ｓ−ＶＬ抗体１−Ｓ−Ｖ Ｈ抗体２−Ｓ−ＶＬ抗体２；ＶＬ抗体１−Ｓ−ＶＨ抗体１−Ｓ−ＶＬ抗体２−Ｓ −ＶＨ抗体２；ＶＬ抗体１−Ｓ−ＶＨ抗体１−Ｓ−ＶＨ抗体２−Ｓ−ＶＬ抗体２ ；ここで、−Ｓ−はリンカー配列である；（ｉｉ）この二重特異性抗体を単離す る、工程からなる合成方法。
  125. １２５．抗体１が特定の細胞のエピトープに結合できる抗体であり、そして抗体 ２が触媒性抗体である、請求項１２３に記載の方法。
  126. １２６．二重特異性抗体の合成方法であって、（ｉ）下記の配列を有する遺伝子 を発現させ：ＶＬ抗体１−Ｓ−ＶＨ抗体２、 （ｉｉ）下記の配列を有する遺伝子を発現させ：ＶＨ抗体１−Ｓ−ＶＬ抗体２、 ここで、−Ｓ−はリンカー配列である、（ｉｉｉ）工程（ｉ）の生成物と工程（ ｉｉ）の生成物とを組み合わせ、（ｉｖ）二重特異性抗体を単離する、 工程からなる合成方法。
  127. １２７．二重特異性抗体の合成方法であって、（ｉ）下記の配列を有する遺伝子 を発現させ：ＶＬ抗体２−Ｓ−ＶＨ抗体１、 （ｉｉ）下記の配列を有する遺伝子を発現させ：ＶＨ抗体２−Ｓ−ＶＬ抗体１、 ここで、−Ｓ−はリンカー配列である、（ｉｉｉ）工程（ｉ）の生成物と工程（ ｉｉ）の生成物とを組み合わせ、（ｉｖ）二重特異性抗体を単離する、 工程からなる合成方法。
  128. １２８．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ６０およびＲ６１は同一または異なり、そして相互に独立してＨ、炭素 原子１−１０個を有するアルキル、一環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有す るアルケン、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキシ、アミノアルキル、チ オアルキル、アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカルボキ シレート、環状アルキル、置換環状アルキル、または少なくとも１個のヘテロ原 子が環中に置換されている環状アルキルである、を有する化合物。
  129. １２９．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ６２は炭素原子１−１０個を有するアルキルまたは炭素原子１−１０個 を有し、置換基としてハロゲン、ヘテロ原子、ホスホネート、スルホネートまた はカルボキシレートを有するアルキルであり、Ｒ６３、Ｒ６４およびＲ６５は同 一または異なり、そして相互に独立して、炭素原子１−１０個を有するアルキル 、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、チオアルキル、アルキルホスホネート、 アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレートまたはアルキルアンモニウム であり、そしてＡ−はアニオンである、 を有する化合物。
  130. １３０．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは薬物ＸＯＨの基であり、そして担体たんぱく質に結合していてもよく 、ＢはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ２であり、ＤはＨＯＰ（Ｏ）、ＳＯ２、ＣＨＯＨ またはＳＯ（いづれかの立体配置を有する）であり、 Ｒ６７、Ｒ６８、Ｒ６９およびＲ７０は同一または異なり、そして相互に独立し て、Ｈ、炭素原子１−１０個を有するアルキル、炭素原子１−１０個を有するア ルコキシ、一環状芳香族基、炭素原子１−１０個を有するアルケン、ヒドロキシ ル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキシ、ハロアルキル、アミノアルキ ル、チオアルキル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルホスホネート、アルキル スルホネート、アルキルカルボキシレートまたはアルキルアンモニウムであり、 ただしＲ６７−７０の少なくとも１個はＨではなく、そしてＲ６８は炭素原子１ −１０個を有するアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、チオアルキル 、アルキルホスホネート、アルキルスルホネート、アルキルカルボキシレートま たはアルキルアンモニウムであり、そしてＡ−はアニオンである、 を有する置換芳香族化合物。
  131. １３１．上記免疫結合体が、当該免疫結合体に複数の非抗原性分子を結合させる ことにより変性されている、請求項１１１に記載の組み合わせ治療剤。
  132. １３２．上記免疫結合体が、当該免疫結合体に複数の非抗原性分子を結合させる ことにより変性されている、請求項１１２に記載の組み合わせ治療剤。
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