JPH06510664A

JPH06510664A - チロシンキナーゼ

Info

Publication number: JPH06510664A
Application number: JP5502314A
Authority: JP
Inventors: ホークストラ，メリル，エフ．
Original assignee: ザサルクインスティテュートフォーバイオロジカルスタディーズ
Priority date: 1991-07-03
Filing date: 1992-07-01
Publication date: 1994-12-01
Also published as: DE69231710T2; ES2156860T3; EP0594710A4; EP0594710B1; ATE199395T1; US5705377A; CA2112748A1; DE69231710D1; WO1993001205A1; EP0594710A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】「チロシンキナーゼＪ ■１発明の技術分野本発明は一般に、毒性分析に使用できる遺伝子の分子クローニング、具体的には、ＤＮＡ修復に影響を及はす様々な組成物のスクリーニングのための方法に使用できる哺乳類ＤＮＡ組換体および修復遺伝子の単離に関する。２、関連技術染色体は、高エネルギー照射、化学薬剤、ならびに複製中における自然変異の結果として、一本鎖あるいは二本鎖損傷を生じる。　染色体に存在する遺伝子は、損傷、修復、交換、移動、および接着の作用を継続的に被るが、ある種の酵素は、染色体の特定の塩基配列を保護あるいは復原する。ＤＮＡ損傷の修復は、莫大な数の遺伝子生成物の調整を含む複雑なプロセスである。　この複雑さの一部は、ＤＮＡ損傷および細胞周期の経過の双方に依存している。　例えば、紫外線（ＵＶ）照射に応答して、遺伝子障害を訂正するために、細胞は光回復あるいは切出修復機能を使用することが可能である。　鎖破損の修復は、Ｘ線によって生したようなもので、組換機構を通して行うことかできる。　Ｄ　Ｎ　Ａ　ｔｍ傷の多様な形態に対して、細胞は、細胞周期のＧ２相に捕獲されるように誘導される。このＧ２捕獲期間中に、宵糸分離に先駆けて染色体の正常性を保つために遺伝子障害が修復される。世代間における遺伝子情報の伝達かＤＮＡの正常性に依存していることから、遺伝子組換および修復に影響あるいはそれらを調整する遺伝子生成物を同定することは重要である。　特定の遺伝子変異を行った生物の使用を通して、正常機能遺伝子が取得され、分子的にクローニングされ、そして、遺伝子生成物が研究されている。相同的な正常機能遺伝子の同定方法としての表現型相補性が、広く利用されている。　例えば、酵母細胞周期調節遺伝子のヒト相同体が、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｐｏｍｂｅ　（シゾサッカロミケス　ボンベ）のヒトｃＤＮＡライブラリーを発現し、酵母ｃｄｃ２遺伝子の変異体と相補的なりローンを選択することによってクローニングされている（Ｌｅｅ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｎａｔｕｒｅ、　３２７：３１．１９８７）。酵母のＲＡＳ２°“目９の熱シヨツク感受性を復原することができる哺乳類遺伝子も、相補性を用いることによってクローニングさした酵母のＲＡＳ２遺伝子に関連した成長調節の欠損と相補できる哺乳類ｃＤＮＡをクローニングするために用いられた。　この遺伝子、ＤＰＤ　（ダンス様ホスフォジエストラーゼ）は、高親和性ＣＡＭＰホスフォジエストラーゼをコードする。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　（サッカロミケス　セレビシェ）のような真核生物における遺伝子研究は、３０以上の放射線感受性（ＲＡＤ）変異体の同定を許容する修復不十分な変異体を明らかにした（Ｈａｙｎｅｓ、　ｅｔ　ａｔ、、　ｉｎ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＹｅａｓｔＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、　ｐｐ、３７１．１９８１；　Ｊ、　Ｇａｍｅ　ｉｎ　Ｙｅａｓｔ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ａｓｐｅｃｔｓ、　ｐｐ、１０９．　１９８３）。　これら変異体は、その感受性によって三つのグループに分類できる。これら分類は、切出修復、誤傾向修復、および組換修復機能におおよそ定義できる。　酵母ＲＡＤ遺伝子の分子特徴は、切出修復ならびにＤＮＡ損傷による細胞分割の捕獲を含む酵素的機構の解明を進めるものであった。ＲＡＤ遺伝子およびその発現生成物の理解は、より効果的な治療用組成物の研究を進めるに当たってその重要性は増してきた。これら新規組成物は、特定の腫瘍なとのような、疾患条件に対しては顕著な効果かしばしば認められるか、それら疾患を有する動物におけるｉｎ　ｖｉｖｏ治療において毒性が大きすぎることか証明されている。　実際、これら組成物は突然変異の生成を増大ならしめる。突然変異誘発性あるいは発癌性物質のはとんとは、それら物質中においては非反応性であるが、ｉｎ　ｖｉｖ○では反応性中間体になる。　変異体を生成するＤＮＡと相互作用するのが、これら反応性中間体である。　この現象は、化学的発癌における最初の工程であると考えられている。　莫大な数の遺伝子での変異体は、ＤＮＡを損傷する薬剤に対する細胞性反応に影響を及ぼす。　同様に、これら変異した遺伝子の多くが、Ｄ　Ｎ　Ａ　修復システムに関与する酵素をコードする。　従って、修復システムか成立すれば、細胞は毒性薬剤に対して極度の感受性になる。ＤＮＡ修復機能が順調に作用していればＤＮＡは正常状態に復原されるが、該機能が作用しない場合には、継続的に増殖する形質転換腫瘍細胞を生成する結果となる。化学薬剤および組成物の毒性あるいは突然変異誘発性を決定するための利用可能な試験方法はあるか、それらは、実験室でのスクリーニング方法ならびに動物毒性試験双方に限定されるものである。　これら限定は、実験室データの動物からヒトへの推定をも含む。　実験動物から得た効果に関する結果を、ヒトの事例に相関させるための、多くの不特定な換算法があった。たいていの場合、ヒトに対して安全裏に投与するには多すぎる試験薬剤の用量を動物に用いるものであった。　加えて、特定の種に薬剤が投与されれば、ある毒性か検出できるのであるか、正確な動物種での実験がされない限り詳細は未だ不明゛である。さらに、現在利用可能な実験室試験の多くか、ヒトに発生するある種の毒性発現の検出は不可能である。微生物を用いたスクリーニング分析にて、突然変異誘発強度に関して、薬剤は定常的に試験されている。　アメスとその同僚によって開発された一般的な試験方法（Ａｍｅｓ、　ｅｔ　ａｔ、。用いる。　この細菌株は、特定薬剤への暴露による逆変異か誘発されない限り、ヒスチジン欠損培地にて生長しない。　アメスの試験方法は迅速で感度も良好であるか、ヒトにおける化学物質の発癌性あるいは突然変異誘発強度の予測における有用性は定かではない。以上を要約すると、実験室試験に存在する限定事項と不特定性は、ＤＮＡ正常性に係る組成物の効果を正確に検査する方法の提供がなされているとはいえない。　この観点から、安価で、迅速で、かつ組成物で処置される動物からの関連遺伝子を含むスクリーニング方法の必要性が存在しているのである。　かような方法は、組成物が細胞のＤＮＡ修復システムに干渉するのであれば、決定のための直接分析法を提供するものである。発明の要旨本発明は、ＤＮＡ鎖破損の修復において含まれる新規タンパク質の発見に基づくものである。　このタンパク質はキナーゼ活性を有しているが、キナーゼに関しては、特異的なヌクレオチド配列にて生じるＤＮＡ鎖破損の修復を促進し、正常な有光組換を許容することしか知られていない。　正常もしくは「野注型」タンパク質キナーゼの同定が、ＤＮＡ鎖破損の修復における酵母変異体（ｈｒｒ２５）欠陥の単離によって可能となったが、依然として正常な有基組換の促進は可能となっている。　野性型遺伝子（ＨＲＲ２５）が、ＤＮＡ破損を修復する能力を復原できるヌクレオチド配列のためのＤＮＡライブラリーをスクリーニングするごとによって単離された。本願発明の主要な効果は、他の種、持にヒトから機能的類似体野性型タンパク質の同定を可能にしたことがある。　かような外来タンパク質の同定は、外来タンパク質のＤＮＡ破措修復促進の活性に関する様々な組成物の効果を検査するためのスクリーニング方法の作成に、それを用いることかできるという利点をさらに提供する。図面の簡単な説明図１（Ａ）は、ＨＲＲ２５遺伝子のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を示している。　Ｃ末端におけるプロリンとグルタミンの位置をアステリスクで表示し、タンパク質キナーゼ触媒領域への相同範囲を矢印で示した。　（Ｂ）には、タンパク質キナーゼ相同体を陰を付けた部分として示し、プロリン／グルタミン豊富領域を交差ハツチングした部分として示した。好適な実施態様の詳細な説明本願発明は、ＤＮＡ正常性に関する様々な組成物の効果を検査する分析システムに使用できるＤＮＡ組換および修復遺伝子に関する。　本願発明はまた、正常有余組換を促進するが、チロシンキナーゼ活性が欠けており、またＤＮＡｌ１Ｉ破損の修復を必須的に不能にするポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を提供する。　この欠陥ＤＮＡ配列は、機能的チロシンキナーゼ活性を備えたタンパク質をコードする他のＤＮＡ配列を同定するために非常に有用である。　ＤＮＡ鎖破損を復原する能力で特徴付けられるこれら機能配列は、特定の組成物におけるがような修復活性の復原効果のを無を決定するための組成物のスクリーニングを可能ならしめるものである。　加えて、本願発明は、欠陥ＤＮＡ配列によってコードされたポリペプチドならびに機能的野性型ＤＮＡによってコードされたポリペプチドに関する。チロシンキナーゼ活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を同定するために、がような活性が欠けた変異体にてＤＮＡ鎖破損修復を復原できるヌクレオチド配列に関してＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによる方法が提供される。　チロシンキナーゼ活性を有し、かような活性が欠けた変異体にてＤＮＡ二本鎖破損修復活性を復原できる哺乳類ポリペプチドの活性に影響を与える組成物を同定する方法をさらに提供する。一般に、欠陥タンパク質キナーゼは、正常有余組換を促進するが、開裂部位にて生ずるＤＮＡ二本鎖破損の修復を必須的に不能にする能力によって特徴付けされる。欠陥タンパク質キナーゼの修復が必須的に不能であるＤＮＡ二本鎖破損は、エンドヌクレアーゼ、Ｘ線、アルキル化薬剤を含む放射線様薬剤を含んだ様々な手段で誘発することができる。好ましいエンドヌクレアーゼは、エンドヌクレアーゼＨＯのような同じヌクレオチド開裂部位を認識するものである。　メチルメタンスルホン酸を含む放射線様薬剤が好ましい。　当業者であれば、別設の実験を経なくとも、適当なりＮＡ破損を誘発する他の薬剤を同定できるであろう。本願発明は、接合型相互変換を開始する６５キロクルトン部位特異性エンドヌクレアーゼをコードする、ＤＮＡ二本鎖エンドヌクレアーゼＨＯの継続的発現に感受的な変異体を特に開示しているＣＫｏｓｔｒｉｋｅｎ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｓｙｍｐ、　ＱｕａｎＬ、Ｂｉｏｌ、　、　４９・８９．１９８４）。　これら変異体は、損傷を受けた染色体の認識および修復を含めた機能を理解する上で重要である。本発明は、酵母野性型ＤＮＡ組換およびＨＲＲ２５と称する修復遺伝子（ＨＯおよび／または放射線修復）も開示している。　ホモ接合性変異株ｈｒｒ２５−１は、メチルメタンスルホン酸およびＸ線に感受的であるか、紫外線照射には感受的てない。　野性型遺伝子は、リン酸化によるＤＮＡ修復機能の活性において不可欠である、新規タンパク質キナーゼ、他のセリン／スレオニンキナーゼの相同体をコードする。＋（ＲＲ２５キナーゼは、正常細胞の生長、核分裂、ＤＮＡ修復および減数分裂にとって重要であり、ＨＲＲ２５の削除は細胞周期欠陥の結果をもたらす。　ＨＲＲ２５キナーゼとＲａｆｌｃ−ｍｏｓタンパク質キナーゼサブユニットとの間の配列類似性にて連結された表現型は、Ｓ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ生長および発達において同様の役割を果たすものと思われる。　ＤＮＡ鎖破損修復における欠陥およびＨＲＲ２５キナーゼにおける変異により表れる異常型生長特性は、タンパク質キナーゼが果たす役割にまで及び、ＤＮＡ代謝に関連した特性の機能範祷にＨＲＲ２５を位置させることになる。本願発明のタンパク質キナーゼポリペプチドをコードする特異的ＤＮＡ配列の開発は、様々な技術を用いて達成される。例えば、（１）真核生物のゲノミックＤＮＡからの二本鎖ＤＮＡ配列の単離、（２）重要なポリペプチドのための必須コドンを提供するＤＮＡ配列の化学合成、および（３）真核ドナー細胞から単離したｍＲＮＡの逆転写による二本鎖ＤＮＡ配列のｉｎ　ｖｉｔｒ。合成を含む方法を採用することができる。　後者の方法の場合、ｍＲＮＡの二本鎖ＤＮＡ相補体は、ｃＤＮＡと一般的に称されている形態に形成される。本願発明の新規ＤＮＡ配列は、本願発明の新規タンパク質キナーゼの機能的特性を示すポリペプチドの原核あるいは真核宿主細胞での発現をもたらすのに有用なすべての配列を含む。これらＤＮＡ配列には、（ａ）図１に示したＤＮＡ配列もしくはその相補鎖；（ｂ）前記（ａ）で定義したＤＮＡ配列もしくはその断片によってコードされたアミノ酸配列と、タンパク質キナーゼ領域にて少なくとも約３５％の相同性を有するアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列；および（Ｃ）上記（ａ）および（ｂ）にて定義されたＤＮＡ配列、が含まれる。　（ｂ）において特に包含されるのは、対立性変異体をコードするゲラミックＤＮＡ配列である。　項目（Ｃ）には、タンパク質キナーゼの断片、およびタンパク質キナーゼのＤＮＡ配列が、ｍＲＮＡの翻訳を促進するコドンを組み込んでいる該タンパク質キナーゼの類似体をコードするＤＮＡ配列の製造を包含されている。　項目（Ｃ）にさらに包含されているのは、遺伝子コードの結果として変性されたＤＮＡ配列である。本願発明のＤＮＡ配列は、タンパク質キナーゼ分子全体を必からのＤＮＡの少量のポリペプチド断片を調製し、サブクローニングし、および発現することは今や定型となっている。「ポリペプチド」の給電は、本願発明の変異型もしくは野性型タンパク質キナーゼの特徴的活性を有する、本願発明のＤＮＡ配列の全部もしくは一部によってコードされたアミノ酸の配列を意味している。本願発明のＤＮＡ配列の発現の結果として得られたボ１１ペプチドは、他の真核ポリペプチドもしくは自然の細胞環境下ではタンパク質キナーゼと他の状態で関連を有する汚染物質との関連性が無いという点で、さらに特徴付けできる。本願発明によって提供された微生物的に発現したポリペプチドの単離および精製は、従来の手段によって、調製用クロマトグラフィー分離およびモノクローナルおよび／またはポリクローナル抗体調製物を含む免疫学的分離を含む。一般に、本願発明において有用な発現ベクターは、挿入した真核遺伝子配列の有効な転移を促進するプロモーター配列を含む。　発現ベクターは、典型的には、複製の開始点、プロモーター、およびターミネータ−と同様に、形質転換した細胞の表現型選択を可能かなしめる特異的遺伝子を含む。　形質転換した宿主は、至適細胞生育を達成するために当該技術分野で周知の技術に従い、培養器中で成長させ、培養することができる。本願発明のポリペプチドは、成長培地、細胞溶解物、あるいは細胞膜画分から単離するこ七かできる。本願発明のＤＮＡ配列は、原核細胞もしくは真核細胞のいずれにおいてもｉｎ　ｖｉｖｏで発現することができる。　原核細胞での真核細胞コード配列を含むＤＮＡ配列の発現方法は、当該技術分野では周知である。　宿主細胞での発現および複製のために、本願発明のＤＮＡ配列を組み込むために用いる生物学的機能ウィルスおよびプラスミドＤＮＡベクターは、当該技術分野では周知である。　例えば、ＤＮＡは適当なベクターを用いて酵母に挿入でき、そして宿主細胞に生成物をもたらす。　酵母での外来遺伝子の発現のための様々なシャトルベクターが報告されている（Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ、　ｅｔ　ａｔ、、　Ｎａｔｕｒｅ、　３４０：２０５．１９８９；核細胞および真°核細胞双方にて遺伝子発現を得るための適切な技術、あるいは特別な実験を経ること無しにかような゛技術を容易に確かめつるであろう。宿主には、微生物、酵母、および哺乳類宿主細胞を含む。「宿主」の給電は、原核細胞のみならず、酵母、繊維状真菌のような真核細胞、ならびに本願発明のイントロンを含まないＤＮＡ配列を複製および発現できる植物および動物細胞をも含む。　この語業は、上記した細胞の子孫をも含む。　復製の際に変異が生じるので、前述した子孫は親細胞と同一でないと理解されている。　しかしながら、かような子孫も、上記した給電を使用した場合には当然含まれるものである。組換えＤＮＡでの形質転換は、当業者に周知の技術によって実施できる。　宿主が原核細胞である場合、ＤＮＡ取り込みができる大腸菌のような反応能細胞は、対数増殖期後に収穫した細胞から調製でき、続いて当該技術分野で周知の手順を用いた塩化カルシウム法によって処理することができる。　また、反応において、塩化マグネシウムあるいは塩化ルビジウムが使用できる。　形質転換は、宿主細胞のプロトプラスト形成後でも実施できる。宿主が真核細胞である場合、ＤＮＡ転移の様々な方法が使用できる。　これら方法は、リン酸カルシウム沈殿によるＤＮＡの形質変換、極微注射のような従来の機械的手順、リポソームで包んだプラスミドの挿入、スフ二ロプラスト電気泳動、単細胞生物の塩介在形質転換、もしくはウィルスベクターの使用を含む。真核ＤＮＡは当該技術分野で周知のベクターを用いた原核細胞でクローニングできるので、真核ＤＮＡの分析は非常に簡素化された。　かようにクローニングした配列は大量に容易に取得でき、および細菌遺伝子技術によるｉｎ　ｖｉｖｏ技術および特異的酵素修飾によるｉｎ　Ｖｉｔｒｏ技術に代替できる。　真核細胞遺伝子の機能および発現に関するこれら実験的に誘発した改変の効果を決定するために、クローニングされ、真核生物へ再導入した細菌の配列換えした配列を取り出さなければならない。原核細胞に欠けている多くの機能が真核細胞にはあるので、（例えば、ミトコンドリアへのＡＴＰ生成系の局在化、ヒストンへのＤＮＡの会合、有糸分裂および減数分裂、および細胞の分化）、かような機能の遺伝子調節は、真核細胞環境下で評価しなければならない。　酵母中の他の真核細胞からのクローニング遺伝子は、クローニングした真核遺伝子ならびに他の酵母遺伝子の分析のために有用である。　数多くの多様な酵母ベクターが、この目的のために構築されてきた。　ベクターＤＮＡの増幅にとって重要である、すべてのベクターが大腸菌において複製する。　すべてのベクターが、酵母中で容易に選択できる、例えば、ＬＥＵ２、ＨＩＳ３、ＵＲＡ３などのマーカーを含んでいる。加えて、大腸菌での使用のために、これらベクターは、抗生物質耐性マーカーを保有している。周知の酵母遺伝子のヒト相同体をクローニングするための多くの方法が、当該技術分野では周知である。　特に限定を意図するものではないか、これらには、■ ）分割したヌクレオチド配列を検出するための緩やかな条件下でのハイブリダイゼーション、２）分割した構造特徴を検出するための発現ライブラリーの抗体スクリーニング、および３）同様の機能を有する遺伝子を検出するための変異体の相補性、などがある。本願発明の目的のために、相同体であるタンパク質キナーゼを、構造的および機能的類似性によって同定できる。　構造的類似性は、例えば、アミノ酸相同性、あるいは本願発明のタンパク質キナーゼに存在する独特のエピトープを認識する抗体、特にモノクローナル抗体によるスクリーニングによって評価することで決定できる。　構造的類似性を評価するためにアミノ酸相同性を使用する場合には、タンパク質キナーゼにおいて少なくとも約３５％の相同性を有するアミノ酸配列か、本願発明のアミノ酸配列と必須的に同様であると考えられる。相同的アミノ酸配列か機能的特徴に基ついて評価された場合、にて生ずる破損を含んだＤＮＡ二本鎖破損を、必須的に修復できず（欠陥変異遺伝子の修復の場合）、あるいは修復できる（自然遺伝子の場合）場合、および相同的アミノ酸配列が正常有意図分裂組換えを許容する場合に、相同的アミノ酸配列が、本願発明のアミノ酸配列と同等であると考えられる。本願発明では、好ましくは機能性スクリーニング法を用い、それにより、遺伝子か劣性マーカーの相補性によるプラスミドライブラリーからクローニングされる。　ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓＣｅｒｅｖｉｓｉａｅのような受入株は、目的の遺伝子において劣性変異を保有するように構築される。　この株は、プラスミド、例えば、野性型ゲノミックＤＮＡもしくはｃＤＮＡを含むｐＹＥＳ２（インビトロジエン社、サンディエゴ、カリフォルニア州）によって形質転換される。　目的の遺伝子を保有するクローンは、目的の遺伝子について、野性型表現型から変異体を識別するレプリカ培養によって選択することができる。　プラスミドは、クローンから抽出され、ＤＮＡは研究に付される。　い（つかの酵母ベクターが、酵母遺伝子の単離に結びつく相補性システムへの適用を許容する。　様々な種類の種からの遺伝子を、これらヘクターを用いて単離することかできる。　口のようなシステムにおいて、入手光を問わずに取得したＤＮＡ配列は、ヘクターにクローニングされ、酵母変異体に特異的に相補する活性に関して酵母にて直接スクリーニングできる。好適な態様において、本願発明は、ＨＯエンドヌクレアーゼによって誘発されたＤＮＡ二本鎖破損への感受性によって同定による形質転換およびそれに続くメチルメタン硫酸塩（ＭＭＳ）耐性に関してスクリーニングすることによって単離された。　あるいは、様々な補乳種からの機能遺伝子が、前述したシステムを用いて今やクローニングできるようになっている。酵母遺伝子は、ハイブリダイゼーションプローブとしての精製ＲＮＡ、調節されたＲＮＡ転写の特異性ハイブリダイゼーション、抗体スクリーニング、トランスポゾン変異、変異体表現型の交差抑制、異種ｃＤＮＡもしくはオリゴヌクレオチドプローブを用いた柔差ハイブリダイゼーション、ならびに大腸菌での相補性の使用を含む、様々な方法によってクローニングできる。最初のアミノ酸配列の小さな改変は、図１に示した配列と比較して、実質的に同様あるいは向上した活性を有するタンパク質によるものであると考えられる。　改変は、特定部位の突然変異誘発のような選択的なもの、あるいは微生物を産生ずる図１に示した第１５１位のアスパラギン酸のグリシン酸残基への置換によって、変異体」ニラと同一になった。本願発明により提供される抗体は、変異ポリペプチドおよび／または自然発生タンパク質キナーゼとの免疫反応性を有する。異なるエピトープ特異性を有する無数のモノクローナル抗体あ・ら必須的に構成される抗体、ならびに別異のモノクローナル抗体調製物が提供される。　モノクローナル抗体は、当該技術分野で周知の方法によるポリペプチドの断片を含む抗原から作製本願発明は、チロシンキナーゼ活性を有するポリペプチドの活性に影響を与える組成物を同定するための方法も開示している。　このポリペプチドは、ｈｒｒ２５遺伝子を含む宿主細胞にてＤＮＡ二本鎖損傷修復活性を復原することができる。　組成物およびポリペプチドは、一定の時間、構成要素か相互作用を及はすのに十分な条件下で宿主細胞と共にインキュベートされ、チロシンキナーゼ活性の変化、例えば、ＤＮＡ二本鎖損傷の減少した修復をモニターする。　ＤＮＡ鎖損傷には、例えば、メチルメタン硫酸塩のような放射線様薬剤、Ｘ線、もしくはＨＯのようなエンドヌクレアーゼによるものを含む。　当該技術分野で周知の他の二本鎖損傷を誘発する手段も同様に使用できる。下記の実施例は例示的なものであり、これに本発明が限定されるものではない。　下記実施例は本発明態様典型であるが、当業者に周知の他の手順も選択的に使用できる。を含むＵＲＡ３−に基ついたプラスミドによる標準的方法に従ってうに、エチルメタン硫酸塩（ＥＭＳ）で突然変異された。　培養液を、グリセロール含有の肥沃な培地（ＹＰＧ、プチットを避けるため）に拡散し、コロニーは３０°Ｃて形成し、プレートをグルコース（四抑制）とガラクトース（匹誘導）培地に複製した。　変異体はガラクトースでの非増殖性により同定した。　約２００の変異体が初期性状に関して、また反復単一コロニー精製を通し残りの（２５個の）変異体は、紫外線（ＵＶ）照射ならびにメチルメタンスルホン酸塩（ＶＭＳ）に関する感受性を決定することによって、重複したＤＮＡ修復欠陥を調査した。　このスクリーニング方法は、周知のｒａｄ突然変異の五つの対立遺伝子ならびに一つの新規変異を同定した。　この新規突然変異ｈｒｒ２５−１　（ＨＯおよび／または放射修復）は、重大な欠陥を示し、そしてさらに研究された。劣性ＤＮＡ欠陥は、ＭＭＳに対する感受性を含むｈｒｒ２５−１により付与される。　Ｈｒｒ２５−１株は、放射性修復遺伝子−ＲＡＤ５０及びＲＡＤ５２　（Ｃｏｌｅ、ｅｔ　ａｌ、、Ｍｏ１．　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、、９：　３１０１．　１９８９）における変異にて観察されるのと同様の５−２０　Ｋｒａｄ　Ｘ −線照射にて感受性を示す。　ｈｒｒ２５−１株は野生型よりもＵＶ照射に対して感受的ではなく、また、３７°Ｃでの増殖に関して温度感受性では換えを受ける（Ｃｏｌｅ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｍｏ１．　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、、　９：３１０１゜１９８９）。　自発性遺伝子転換および交換は、ホモ型接合性」ニ２５−１および野生型株に関して同してあった。　しかしながら、の胞子を生成する条件下で、１％以下の胞子（四核細胞）を示す。　ｈｒｒ２５−１変異か、いくつかの」■師表現型を示す多数の放射性感受性変異体（ｒａｄ６．５０．５２．５４および５７）に相補的であるということは、ｈｒｒ２５−１は新規の暴露した二上様変異体であり、前述したこれら遺伝子の一つでないことを示唆するものである。　これらの結果は、ＨＲＲ２５はＤＮＡ修復および減数分裂において役割を果たすが、組換による自発的有糸分裂損傷の修復は特に必要とされないことを示している。ツタライブラリーを用いたＭＭＳ感受性への相補によって取得した　（Ｒｏｓｅ、ｅｔ　ａｌ、、　Ｇｅｎｅ、　６０：２３７．　１９８７）。　ｈｒｒ２５− 株、Ｍ）ＩＭＬで形質転換し、形質転換体はウラシルを含まない培地にて増殖され、０．０１％ＭＭＳを含む培地で複製した。　１２００個の形質転換体の内、単一のＭＭＳ耐性分離株が同定された。　ＭＭＳ感受性に関する相補性は、当該技術分野で周知の方法により決定されたプラスミドで分離するために認められた。１２ｋｂのゲノミック断片が同定され、相補活性が、トランスポゾン変異生成およびサブクローニングにより、３．１ｋｂ　ＢａｍＨＩ−８ａｌＩ断片に局在していた。　この領域は、ＤＮＡ修復欠陥ならびに減数分裂欠如に相補した。　遺伝子目標実験では、このクローニングした領域をｈｒｒ２５−１に結合させた。　同起源のＨＲ且亜ゲノミック遺伝子座へ戻されたｌ］ａｍＨＩ−ジ■［断片内のトランスポゾン挿入変異は、ＭＭＳ感受性に関するｈｒｒ２５−１と相補しなかったのに対し、ｈｒｒ２５−１に対して相補した時に、相補領域の外側の近接する染色体挿入体は、相反して分離した。Ｍｉｎｉ−ＴｎｌＯＬＵＫ　トランスポゾン（Ｈｕｉｓｍａｎ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ。１１６：１９１．　１９８７）は、１２ｋｂのＢａｍＨＩ−５ａｉｌ断片における）ｌＲＲ２５の概ねの位置を定めるために用いられた。　（１２ｋｂのケノミソク断片の）左手側９ｋｂに位置する挿入体は、変異しなかったプラスミドと比較して、ｈｒｒ２５−Ｉ　ＭＭＳの相補耐性を不活性化しなかった。　右手側２ｋｂにある一ＥｃｏＲＶ部位近傍に位置する二つの挿入体は、相補性を不活性化した。　ＨＲＲ２５相補活性は、３．４ｋｂにある５ａｉｌ断片に局在していた。　この断片（１２ｋｂの右手側）の約３００塩基対は、（ｐＢＲ３２２に基づ＜　ＹＣｐ５０の−ＢａｍＨＩ間の）ｐＢＲ３２２テトラサイクリン耐性遺伝子の一部である。　ＨＲＲ２５の読取枠は、右末端３ｋｂにある一ＥｃｏＲＶ部位と二つのＢｇｌＩＩを横断する内部領域にわたっている。３、１ｋｂ断片のＤＮＡ配列は、中央部に位置する１４８２個のヌクレオチドの読取枠を示した。　この読取枠内のトランスポゾン挿入変異体は、」胚性相補性を不活性化したか、１２ｋｂクローンのその他の挿入体は−ＨＲＲ２５相補性に影響を与えなかった。」■擾のトランスポゾンか介在した分裂も、ｈｒｒ２５−１には見られなかったいくつかの表現型を示した。　予期していた通り、プラスミド保有−ＨＲＲ２５コード領域中央部へのＴｎｌＯに基づいたＬＵＫトランスポゾン挿入体（Ｈｕｉｓｍａｎ、旦ａ１．．　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、　１１６：１９１゜１９８７）は、ＭＭＳ感受性に関する相補性を不活性化した。　ゲノのいくつかの成長欠陥は、ｈｒｒ２５−１株には見られなかった。野性型」■亜株は、肥沃な培地にて、３０℃で、各８０〜９０分にて二倍になったのに対し、同系のｈ　ｒ　ｒ２５・：　ＬＵＫ株およびｈｒｒ２５：Δは、各９〜１２時間で二倍になった。　ｈｒｒ２５−１は、二倍になるために２〜４時間の時間を要した。変異体表現型か、ｈｒｒ：：ＬＵＫ分裂対立遺伝子か存在しない表現型を意味するか否かを決定するために、ＨＲＲ２５−全コード配列を削除した。　要約すれば、ＨＲＲ２Σ全コード配列の削除には、ｈｉｓＧ：：ＵＲＡ３：：ｈｉｓＧカセット（Ａｌａｎ、ｅｊ　ａｌ、、　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、　旦５４１、１９８８）を用いた。　３．１ｋｂのＨＲＲ２５５ａｉｌ断片をｐＢｌｕｅｓ−Ｃｒｉｐｔにクローニングした（ストラタジエン社、ラヨラ、カリフォルニア州）。　このプラスミドをＢｇｌＩＩで消化し、ＨＲＲ２５全遺伝子にわたる長さの二つのＢｇｌ１１断片およびその端部処理した配列を削除した。　」二乃Δ対立遺伝子を生成するために、コノ削除部分を、ｐＮＫＹ５１からの３．８ｋｂ　ＢａｍＨＩ−Ｂｇｌｌｌ　旦戚二ｔｌＲＡ３：：ｈｉｓＧ断片に導入した。　５ａｌｌ消化により、ＨＲＲ２５−全遺伝子座が削除された直線状断片を生成した。　削除 −分裂対立遺伝子（ｈｒｒ２５Δ）を保有する酵母は、ＭＭＳ感受性、緩やかな成長、および胞子形成欠陥を含む、野性型ＨＲＲ２５タンパク質がこれらプロセスと関連があり、ならびにＨＲＲ２５：　：ＬＵＫ対立遺伝子がＤＮＡ修復、成長、もしくは胞子形成を間接的に干渉しないという検討したすべての特性に関して、ｈｒｒ２５：　：ＬＵＫ対立遺伝子の表現型と同一であることか示された。　直接対比において、ｈｒｒ２５：：ＬＵＫおよびｈｒｒ２５Δ対立遺伝子は同一の挙動を示した。酵母株ＭＨＦ−１４（ＭＡＴａ／ＭＡＴαｕｒａ３／ｕｒａ３）を、ウラシル原栄養株に対するＢｇｌｌｌ−直線化ＹＣＤ５０−ＨＲＲ２５ユニ　ＬＵＫで形質転換し、成を行い、四分子を切開し、細胞を３０’Ｃで、７日間、成長させた。　２日間の標準培養に先駆けて、ｈｒｒ２５：：ＬＵＫの重大゛な成長欠陥が、１（ＲＲ２５−の欠損が致命的であることを示唆している。しかしながら、分離体の顕米鏡観察では、ｈｒｒ２５：　：ＬＵＫ成長細胞がゆっくりと生育し、観察したすべての事例（２０／２０四分子）にて、緩やかな成長、ＶＭＳ感受性、およびウラシル原栄養株共分離体か認められた。　アデニン生合成での変異のため、二倍体ＭＰＨ１４分離体による、色彩変化か観られた。　ａｄｅ５／ａｄｅ２株は白、およびＡＤＥ５／ａｄｅ２株は赤色を示した。実施例３ＨＲＲ２５遺伝子の配列および構造ＨＲＲ２５遺伝子の両鏡のＤＮＡ配列解析を、セキナーゼ（Ｕ３８社、クリーブランド、オハイオ州）およびＥｘｏ−Ｍｅｔｈ　（ストラジエン社、ラヨラ、カリフォルニア州）方法を用いて使用説明盲に従って、一方向削除によって行った。　図ＩＡには、アステリスクで示したＣ末端でのプロリンおよびグルタミンの位置、およびタンパク質キナーゼ触媒領域と相同の境界を示している。図ＩＢは、ＨＲＲ２５−の構造の概略図である。　タンパク質キナーゼ相同体には影を付け、Ｐ／Ｑ豊富領域は交差斜線によって示した。　突然変異体、担工蔓 −は一つのアミノ酸置換によって、ＨＲＲ２５と区別できる。　１５１位にて、アスパラギン酸はグリシンに置換される。ＨＲＲ２５−の予想される翻訳生成物は、二上様ＤＮＡ修復機能の予想外の特性を示した。　皿Ｒ２５はセリン／スレオニンタンパク質キナーゼの上材（Ｈａｎｋｓ旦ａ１．、５ｃｉｅｎｃｅ　、　２４虹４２．１９８８）の触媒領域との相同配列である特徴的な記号を含む。　比較のために、ＨＲＲ２５翻訳生成物を、ＣＤＣ２８／ｃｄｃ２グループおよびＫＳＳＩα那ニゲループの、酵母タンパク質キナーゼの二つのサブグループの触媒領域と対応させた。　アミノ酸１５および３０の間に位置する領域は、ＧＸＧＸＸＧ保存領域を含んでいた。　この領域のまさにＣ末端では、最も周知のキナーゼに存在するりシンおよびグルタミン酸の保存領域である。　これら領域は、キナーゼ反応（Ｈａｎｋｓ　ｅｔ　ａｔ、、　５ｃｉｅｎｃｅ　、　２４旦４２．１９８８）のヌクレオチド結合およびリン酸転移工程にて機能するものと考えられている。アミノ酸残基１２０から１５０は、ＨＲＤおよびＤＦＧ態様を含み、たいていのタンパク質キナーゼ科にて認められる。　加えて、すべての周知のセリン／スレオニンキナーゼの配列検討にて、た。　タンパク質キナーゼ触媒領域でのＧＸＧＸＸＧ、　ＤＧＦ　、およびＤＸＸＳＸＧの周辺領域にて、最も強力な相同体か認められた。ＨＲＲμｓ−とタンパク質キナーゼとの間で観察された配列類似性機能の関連を、ＨＲＲ２５キナーゼ領域内の特定の残基を交換し、これら変換の表現型の成果を検討することで研究した。　３８位のリジン（Ｌｙｓ３８）を、当該技術分野で周知の方法による、特定部位の突然変異誘発によってアルギニン残基へ変異させた。突然変異誘発性のオリゴヌクレオチドは；５’　−ＣＣＴＧＡＴＣＧＡＴＴＣＣＡＧＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＡＣＴＴＣＴＴＣＡＣＣＡＣＴ−３゜おいて認められるリシンと対応しており、このサブ領域はＡＴＰ結合を含んでいる。　Ｖ−３ｒＣ、Ｖ−ｍＱｓ　、およびＤＢＦ２のようなタンパク質キナーゼにて保存されたりシンの変異は、これらタンパク質を不活性化した。　変異体ｈｒｒ２５−Ｌｙｓ”対立遺伝子は、試験したすべての特性に関ｊ７て、ｈｒｒ２５−］、ｈｒｒ２５：：ＬＵＫ、およ域の相同領域の外側に、数々の顕著な特徴を有している。　例えば、最後の１００アミノ酸は、これら残基の５０個を含むプロリンおよびグルタミンか多く包含されている。　これら二つのアは活性化を含むものであるのに対して、ヒト電解質フルチコイト受容体でのＰ／Ｑ領域は、分子間架橋として作用すると考えられている。　ＨＲＲ２５でのこのプロリン−グルタミン領域は、基質相互作用あるいは亜細胞性局在化の構造特徴として機能すると思われる。　また、この領域でのグルタミンの多さは、ｏｐａ−反復体の機能は定かではないが、いくつかのＤｒｏｓｏｐｈ　ｉ　ｌａ遺伝子にて認められている。　最後に、タンパク質キナーゼに相同な領域のＣ末端における配列ＴＫＫＱＫＹは、ＳＶ４０ラージＴ抗原および酵母ヒストン８２Ｂの核局在シグナルと同様である（Ｓｉｌｖｅｒ。Ｍｏ１．　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、、７：４０４８．　１９８７）。体は、滅菌顕微鏡スライド上のＹＰＤ肥沃培地の薄いフィルム上で切開され、分離物は湿潤した３０°Ｃのチャンバー内のスライドにて発生が許容された。　２日間成長させた後に、コロニーの写真を取った。　増殖しているーＨＲＲ２５Δ およびｈｒｒ２５：・ＬＵＫ細胞の位相差およびＤＡＰＩ染色を比較した。　細胞をＹＰＤ肥沃培地に接種し、３０℃での１．３Ｘ　１０’細胞／ｍｌの中間対数密度にまで成長させ、要するに、凝集を超音波的に破砕し、ホルムアルデヒくの細胞が、ＤＡＰＩ染色できる核を有していなかった。ポゾン破壊は細胞の拡大を招き、細胞の２５〜４０％は、繊維状あるいは伸長していた。　対数相半ばのＤＡＰ＋細胞核染色（Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ、　ａｔ　ａｌ、、　Ｍｅｔｈ、　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、、　１２：３３５．１９７５）は、ｈｒｒ２５変異体での通常の細胞周期か喪失されていたことを示していた。単細胞操作により生存不能とされたＤＡＰ　Ｉ染色できる核を欠いた大量の細胞があった。　この細胞核分離欠陥と一致して、ｈｒｒ２５：：ＬＵＫ半数体のプレート効果も、野生型の７５〜８０％の減少であった。　しかしながら、ごのプレート効果での減少は、重大な生成率の減少を説明するには不十分であった。　血球計計測により決定した細胞の総計に対する肥沃な培地でのコロニー形成の効果を比較することで、プレート効果を対数相半ばの細胞から測定した。　細胞集団を、血球流量分析およびそれに続く（Ｈｕｔｔｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ｇｅｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　１１３：３６９．１９７９）に記載のヨウ化プロビデイウムによる染色によって、ＤＮＡ含量の分布について解析された。　細胞種分析では、ｈｒｒ２５・・ＬＵＫ半数体集団での細胞の多くか、細胞環状に遅れかあり、Ｇ２ＤＮＡ含量を示したか、細胞集団は、細胞周期において均一に抑止される。り質キナーゼ玉料の幾つかの触媒領域を比較した。　最初の配べて含んでいた。　構造的に類似する集団を、配列比較にて対比した。　これらには、無極性鎖状残基、芳香性あるいは環含有残基、略中性極性をもつ小規模残基、酸性残基１、非荷電極性残基、および塩基性極性残基が含まれる。て、３０％の同一性、および４９％の類似性を示した。配列の概要配列番号＝１は、本願発明の酵母由来チロシンキナーゼをコードするゲノミック断片の核酸配列（および推定アミノ酸配列）である。配列番号：２は、本願発明の酵母由来チロシンの推定アミノ酸配列である。配　列　表（１）一般情報（＋）出願人：　ホークストラ、メリル、エフ（目）発明の名称　チロシンキナーゼ（ｉｉｉ）配列の数、２（ｉｖ）連絡先住所。（Ａ）名宛人、スベンスレイ　ホーン　ンユバス　アンド　ルビソッ（Ｂ）番地　４２２５　エクゼクティブ　スフウェア、　スイ−１−１４００（Ｃ）都市名：ラヨラ（Ｄ）州名：カリフォルニア（Ｅ）国名、米国（Ｆ）郵便番号＋　９２０３７（ｖ）コンピューター読取形式（Ａ）媒体　フロッピー　ディスク（Ｂ）コンピューター　ＩＢＭ　ＰＣ互換機（Ｃ）操作システム：　ＰＣ−ＤＯ３／ＭＳ−ＤＯ３（Ｄ）ソフトウェア　パテント　イン　リリース＃１．０、バージョン＃１．２５（Ｖｌ）現出願データ：（Ａ）出願番号：ＵＳ（Ｂ）出願日：　０３−７月−１９９１（Ｃ）分類（ｖｉｉｉ）弁護士／弁理士情報（Ａ）氏名　ウェザ−レール、ビーエイチディー、ジョン　アール（Ｂ）登録番号・１３．６７８（Ｃ）参照／事件番号：　ＰＤ−１３１８（１ｘ）通信情報。（Ａ）電話・（６１９）　４５５−５１００（Ｂ）ファックス　（６１９）　４５５−５１１０（２）配列番号：ｌの情報（ｉ）配列特徴・（Ａ）配列の長さ：　３０９８塩基対（Ｂ）配列の型・核酸（Ｃ）鎖の数ニ一本鎖（Ｄ）トポロジー：直鎖状（１１）配列の種類：　ＤＮＡ（ケノミック）（ｖｉｉ）直接の起源（Ｂ）クローン名　チロシンキナーゼ（ｉｘ）配列の特徴・（Ａ）配列を表す記号：　ＣＤ５（Ｂ）存在位置＋　８７９．　、２３４６（Ｘｌ）配列：配列番号　ＩＧＴＣＧＡＣＴＣＧ（：　ＣＡＡτＣＡＣＣＡＡ　ＧＴＴＣ”ＩＴＡＴＣＣＣＡＣＡＴＣＣＧＡＣＣＡ（：ＴＣＴＣτにＡ　（ＴＣＡＴＣＧsＩＴ　６０ＡＣＣＡＣＣＡＣＣＡ　ＴＡＣＣＡＴＣＯＣＴ　Ｇ（ＴＣＡＴＴｒＧＴ　ＡＡＡ τｃｃｃｒｒτ　ＣτＡＴτＡＣＡ丁ｃ　ＡｃｃＡｃｃｒｃャ■@１２０にＣＡＴＡＡＧ（：（πτＣＴＣＡＡＡＴＧＣＴＡＩ７ｒＡＧＣＧ’ＴＡ　ｍＴ（ＪＧＧＡＴ　ＡＩＴ（ＴＴＧ（ＴｒＴ　ＡＡＡＭ；ＣｒＣ窒f１８０ＴＧＧＣＣＣＡＣＡＡ　ＴｒＴＣＡＡ（：ＣＡＴ　ＣＣＴＣＧＴＧＴＣＣＴｒＧＴＴにＴＴＡ丁　（ＴＴＡＩＪＩ：ττＣτＴＡτττＡτbｋ　２１！ｔ。ＴＣ′ｒＡＡＡ（：ＣＡＡ　ＴｒＣＧＧＴＡＴｒＧ　ＴＣＣ’ｒＣＧＡＴＡ（：　ＧＧＣＡＴＧＣＧＴＡτＡＡＡＩＩ；ＡにＡτＡτＡＡＴsＡＡＡＡＧ　３６０ＡＧｃｒｒＡＴＡ（Ｔ　ＣＡＣＧＴ（ＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＣＣＣＧ　ＣＡＡＣＡＣ：ｒＡＣＣＡＣＡＡＡＡＴＣＣＡ　ｒＡＣＣＩＪＴｃＴ`Ａ　４２０ＴＴＧ（ＴＡＴＡＡＡ　ＡＧ（：ＣＴαπＡτＡτＡＣＧＡＡτＡＡＣＴ＾ｃｃａｃ’ｒｃｃ＾ＴＣＧＡα詰ＴＴ　ＡＴＣ：ＴＣＣＣ４８０ＡＡＴＣＡＴＡＴＡＣＣＡＣＴＧＴ（：ＡＡＧ　ＡにＴＴＡ（ＴＧＣＡ　Ａ（ＴＣＴ（Ｃ（１ττζ 口τＣＡＡＣＧ　Ｃ’ｒＴ（ＴＴＣＣＣi：　５４０ τＣ’ｒｔｎＣＴＡＴＴτＡ（ＴＡ（ＴＡＡＴ　ＡＧにＣＡＧＣＣＣＡ　ＣＣＴＴＴＣＡＡＴＴＴＣＴＴｒＴＴＩＴＣｒｃｃＡｃｙＴＴ了　U００ τｒにＧＴＧＣＡＡＣｃＡｃｃＭＡＡｃｃ　ＡＣＡＣ（：ＡＡＧＡＡ　ＡＡＡＡＡ（ＴｒＧＡ　ＩＷＩＪｃｃＡｃｃＡ　（ＪＴＡＴＡＴにＧ`　６６０ＡｃＧＴｃｃＴｒにＡＡＡＴＡＣＡＡＡＧＡ　ｃｙｃＡＭ０πＴｃｃＡｃａｃｒｃｃ　ＡｃｃＡＡＡｃｃＡτｒｒｃｃｒαｒｃＡ　７２０ＡＡＡＣＡ（：ＡＴＣＴ　ＴＡＧＴＡＧＣＡＴＣＴｒＴＡＡＡＣＣＴＣＴＣττＣＧ（ＴＡＧ　ＴＴＡＣＡＡＡＡＡＴ　ＡＴＴＴＣＣＡＧＡb７８０ＴＴＣＡＡにＣ；ｋＴｋ　ＡＡＡＡＡｋＣ：ＴＣＣ；　ＡＡＡＡにＴＴＡＣＣ：　ＡＣＡＣＡＴＴＣＧＡ　ＣＣＡＡＡＡＡＡＡＡ　ＡＡＡＣbＡＡＡＡＡ　８４０ＣＡＡＡＡＣＡＴＡＴ　ＡＴｒｒＡ？ＡＣＡＡ　ＡＧＣＡＴＡＣＡＴＴ　ＡＡＡＡＡＧＡＧ　ＡＴＣＧＡＣＴｒＡ　ＡＧＡ　（ｉＡ　１１９P Ｈ＠ｔ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　Ａｒｇ　ＶａＬＧＣＡ　ＡＧＯＡＡＡ　ＴｒＴ　Ｃ（Ｔ　ＡＴＴ　ＣＧＣＡｃＣＡＡＧ　ＡＴＴ　ＣＣＣＡ（ＴＣ；Ｔ　ＴＣＣｍ　ＣＣ；Ｔ　９１ａＬＧｌｙ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｐｈａ　Ａｒｇ　Ｉｌａ　にｌｙ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｉｌａ　ＧＬｙ　Ｓａｒ　Ｇｌｙ　Ｓａｔ　Ｐｈａ　Ｇｌｙｌｏ　１５　２０ＧＡＧ　ＡＴＴτＡＣＣＡＣＧＣＣＡ（：Ｇ　ＡＡ（：　ＴｒＡ　ＡＴｒ　Ａ（Ｔ　Ｇ（Ｔ　ＣＡＡ　ＧＡＡ　ＧＴＡ　ＧＣＣＡＴＣ９８９ＡｊＰ工１６τｙｒ　Ｈｉｓ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｌａｕ　Ｘ１ｍ　Ｓａｒ　Ｃ１ｙ　Ｃ１ｕ　にｌｕ　ＶａＩＡｈａ　ＸＬａ２５　３０　コ５ＡＡＧ　（Ｔに　Ｃ；ＡＡ　ＴＣＧ　ＡＴＣＡＣＧ　ＴＣＣＡＧＡ　ＣＡＴ　Ｃ（Ｔ　ＣＡＡ　ＴＴＧ　ＣＡＣＴＡＴ　ＣＡ＋ｌ；　ＴＣＣP０３７ＬｙｊＬ＊ｕ　ＣＬｕ　Ｓａｒ　Ｉｌａ＾ｒｇ　Ｓａｒ　Ａｒｇ　）Ｉｉｓ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎムｕ　Ａｌｐτｙｒ　Ｇｌｕ　５ａｒ４０　１！ｉ５　５０ＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＧＡ　ＴＡＣＴＴＡ　ＡＧ（：　ＣＧＴ　ＧＣＴ　Ｇτｃ　ＧＧＡ　ＡＴＣＣＣＧ　ττＣＡτＣＡＣＡ　１１０８５Ａｒ　Ｖａｌτｙｒ＾ｒｇ　Ｔ）ｒｒ　Ｌａｕ　Ｓｕｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　工ｌｓ　Ｐｒｏ　Ｐｈａ　Ｉｌｅ＾ｒｇτＣＧｍＧＧＣＡＧＡＧＡＧＧ（ＴＣＭＴＡＴＭＴに（ＴＡＴＧＣ：τＣＡτＣＣＡτＣττＣτＡ１１コ３τｒｐ　Ｐｈ＠Ｇ１ｙ　Ａｒｇ　（：１ｕ　Ｇｌｙ　Ｃ１ｕ　Ｔｙｒ　Ａｉｎ　ＡＬａ　Ｍａｃ　ＶａＬ　ＨＬｓ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　ＬａｕＧＣ；ＣＣＣＡ　ＴＣＴ　ＴＴＣＣＭ　ＧＡＴ　ＴＴＡ　ＴｒＣＡｌｌＩＣＴＡＣＴ（Ｔ　ＣＡＣＡＣＡ　ＡＧＣＴｒＣＴＣＣ１１＋１１Ｃ１ｙ　Ｐｒｏ　Ｓａｒ　Ｌａｕ　ＧＬｕ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　Ｐｈ＠Ａｊｎτｙｒ　Ｃｙｓ　Ｈｌｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｐｈａ　Ｓ＠ｒＴＴＴ　ＡＡＧ　ＡＣＧ　ＣＴＴ　ＡＴＣＡＴＣＣＴＣにＣＴ　ＴＴに　ＣＡＡ　ＡＴＣＴＴｒτＣＣＣ（Ｔ　Ａ貢ＣＡＧ　１２２９Ｐｈ＠Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｘ１ｍ　Ｍ＠ｅ　Ｌａｕ　ＡＬａ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　Ｍｓｅ　Ｐｈａ　Ｃｙｓ＾ｒｇ　Ｉｌａ　Ｇ１ｎＴＡＴ　ＡＴＡ　ＣＡＴ　ＣＣＡ　ＡＧＣＴＣに　ｎｃ　Ａ′ｌＴ　ＣＡＴ　ＡＤｋ　ＣＡＴ　ＡＴＣＡＡＡ　ＣＣＡ　ＧＡに　ＡＡＣ１２V７ τｙｒ：　Ｉｌｅ　ＨＬｓ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｓａｒ　Ｐｈａ　工１ａ　）ｌムＡｒｇ　Ａｓｐ　Ｉｌａ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　ｍｐ　ＡＪｎτＴＴＴ丁Ａ　ＡＴＧ　（ｉＧＧ　（ＴＡ　ＧＣＡ　ＣＣ：Ｃ（ｃ′Ｔ　Ｇ（Ｔ　ＡＧＣＡＣＣ（ＴＴ　ＣＡＴ　ＧＴＴ　ＡＴＴ　ＧＡＴ−P３２５Ｐｈａ　Ｌａｕ　Ｍａｅ　（：ｌｙ　ＶａＬ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　ＧＬｙ　Ｓａｒ　Ｔｈｒ　ＶａＬ　Ｈｌｓ　ＶａＬＩＬａ　ＡｓｐττＣＣστＣτＡＴＣＡＡＡＣＡＡ＾τ＾ＣＣＣ＾Ｃ＾τττＣＡ＾ＣＡＣ八ＣＡτＣＣＴＣＡτ Ａτ丁１コア３Ｃ（Ｔ　ＴＡＣＭ：；Ｑ　ＧＡＧ　ＡＡＣＭＣＴＣＣＴＴＧ　ＡｃｋＧＧＴ　Ａ（Ｊ、ＣＧ’ｒ　ＣＧＴ　ＩＪＴ　ＧＣＡ　ＡＧｒ　１１ａQ１にＴＣＡＡτＡＣＧ　ＣＡＴ　ＣＴｒ　ＧＧＡ　ＡＴＡ　ＧＡＧ　ＣＡＡ　Ａ（Ｔ　ＡＧＡ　ＡＣＡ　ＣＡＴ　ＧＡＣＴｒＡ　ＣＡＡ　１４U９ＶａＬ　／ｕｎ　Ｔｈｒ　Ｈｌｓ　Ｌａｕ　Ｇａｙ　ＩＬａ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　５＠ｒ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　ＡＪｐＡＪＰ　Ｌａｕ　１ＪｕτＣＡ　ＣＴＡ　ＣｃＴ　ＴＡＴ　にτＣｎｃ　ＡＴＣＴＡＴ　ｍ　ＴにＴ　ＡＡに　Ｇに’Ｔ　ＴＣＴ　ＴＴＧ　ＣＣＡ　ＴＧＣ１５１７Ｓａｔ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｌａｕ　Ｉｌａ　Ｔｙｒ　Ｆｋｔａ　Ｃｙｓ’　Ｌｙｓ　に１ｙ　Ｓａｒ　Ｌｓ＋ｕ　１’τＯ■■ ２００　２０５　、　２１０ＣＡＧ　ＧＧＴ　ＴＴＣＡＡＡ　にＣＡ　ｋＣＣＡＣＣＡＡ（：　ＡＡＡ　ＣＭ　ＡＡＧ　ＴＡτＧＡ丁ＣＧＴ　ＡＴＣＡＴＣ１５６５Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｌａｕ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｔ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｃａｎ　Ｌｙｇ　Ｔｙｒ　ｋｓｐ　Ａｒｇ　Ｉｌａ　ＭｅｅＧＡＡ　ＡＡＧ　ＡＡＡ　ＴｒＡ　ｋｋＣＧＴＴ　ＡＣＣＧＴＧ　ＣＡＡ　Ａ（Ｔ　ＣＴＡ　１０１τＣＡ　ＣＣ：τ　ＴＴＡ　ＣＣＡ　１U１３ＴＴＡ　ＣＭ；　ＴＴｒ　ＣＡＡ　ＣＡＡ　ＴＡＴ　Ａ丁ＣＣＣτ　ＴＡＣ丁Ｃ τ　ＡＡＧ　ＡＡＴ　ＴＴに　ＡＡＡ　ＴＴＣＣＡＴ　１６U１Ｌｓｕ　Ｇｌｕ　Ｐｈａ　Ｇｂ＋　（Ｊｕ　Ｔｙｒ　Ｍｓｅ　Ａｈａ　丁ｙｒ　Ｃｙｓ　Ｌｙｇ　Ａｓｎ　Ｌａｕ　Ｌｙｓ　Ｐｈｓ　＾１ｐＧＡＧ　ＡＡＧ　ＣＣＡ　ＧＡＴ　ＴＡＴ　ＴＴＩＩ；　ＴＴＣＴＴＧ　にＣＡ　ＭＵＧ　ｃＴＧ　ｍ　ＡＡＡ　ＧＡＴ　ＣＴＧ　ＡＧ’ｒ@１７０９ＧＬｕ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　ＴｙＴＬａｕ　Ｐｈａ　Ｌａｕ＾ｌａ　Ａｒｇ　Ｌａｕ　ｉ’ｈｅ　Ｌｙｓ　Ａｓ＋ｐ　Ｌａｕ　５ａｒＡＴＴ　ＡＡＡ　ＣＴＡ　ＧＡＧ　ＴＡＴ　ＣＡＣＭＣＣｋＣ０１ＣＴＴＧ　ＴＴＣＣＡＴ　ＴＧＧ　ＡＣＡ　Ａ、ＴＧ　ＴＴＧ　１７５７工Ｌｍ　Ｌｙｓ　ｔＪｕ　Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　）ｕｓ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　ＨＬｓ　Ｌａｕ　Ｐｈａ＾ｓｐτｒｐ　Ｔｈｒ　Ｍａｔ　ＬａｕＣＧＴ　ＴＡＧ　ＡＣＡ　ＡＡに　Ｃ：ＣＧ　ＡＴＧ　ＣＴＣＧＡＧ　ＡＡＧ　ＣＡＡ　ＡＧＧ　ＧＡＧ　ＣＴＣ（ＴＣＡＴＣＧＡＡ　１ｌ撃P ０５Ａｒ　ＴＦ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ａｉｍ　Ｍ＊＋：　ＶａＬ　ＧＬｕ　Ｌｙｓ　にｉｎ　Ａｒｇ　Ａｌｐ　Ｌａｕ　Ｌａｕ　ＩＬａ　Ｇｌｕ２９５　３００　コ０５ＡＡＡ　ＣＣＴ　ＧＡＴ　ＴＴＣＡＡＣＧＣＡ　ＡＡＴ　ｋＣＣＡＡＴ　（：Ｃｋ　ＣＣＡ　ＡＧ’ｒ　ＧＣＡ　ＡＧ’Ｔ　ＡＡＣＡＧＣ１W５３Ｌｙｓ　Ｇａｙ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　ＡＪｎ　ＡＩＪＬ人Ｌｍ　Ｓａｒ　ＡＬａ　Ｓ＠ｒ　Ａｓｎ　Ｓａｒコ１０　３１５　３２０　３２５ＡＣＡ　ＧｋＣＡＡＣＡＡＧ　ＴＣＴ　ＧｋＡ　ＡＣＴ　ＴＴＣＡＡＣＡＡＧ　ＡＴＴ　ＡＡＡ　ＣＴに　ＴｒＡ　にＣＣＡＴＣ１９０１Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ａｇｎ　１−ｙＭ　Ｓａｒ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｐｈａ　ＡＪｎ　１−ｙＭ　Ｘ１＠　Ｌ）’＃　Ｌａｕ　Ｌａｕ＾Ｌａ　Ｍ魔■ ＡＡＧ　ＡＡＡ　ＴＴＣＣＣＣＡＣＣＣＡＴ　ＴｒＣＣＡＣτ＾τ　ＴＡＣＡＡＧ　人ＡＴ　ＧＡＡ　ＣＡＣＡＡＡ　ＣＡＴ　１９４９Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｐｈａ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　ＨＬｓ　Ｐｈ＠Ｈ１ｓ　Ｔｙｒτｙｒ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　ＨＬｓ３Ｚｔ５　３５０　３５５ＡＡＴ　ＣＣＴ　ＴＣＡ　ＣＣＡ　ＧＡＡ　ＧＡＧ　ＡＴＣＭＡ　ＣＡＡ　ＣＡＡ　ＡＣＴ　ＡＴＣＴＴＧ　ＡＡＴ　ＡＡＴ　ＡＡＴ　１９X７Ａｇｎ　Ｐｒｏ　Ｓａｒ　Ｐｒｏ　ＣＬｕ　Ｇｌｕ　Ｉｌａ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ｉｌａ　Ｌａｕ　ｋｓｎ＾５ｎ　Ａｓｎ３６０　３６５　コア０ＣｃＡ　ＣＣＣＴＣ’ｒ　ＴＣＴ　ＴＴＡ　ＣＣＡ　ＧＡＧ　ＣＡＡＴＴＡ　ＴＴＧ　ＡＡＣＧＣＡ　ＣＴＡ　ＣＡＴ　ＡＡＡ　ＧＧＴ　２QＯ４５ＡＬ　Ａｈａ　５ａｒ　Ｓａｒ　Ｌａｕ　ｉ’ｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｌａｕ　Ｌａｕ　Ａｘｎ　Ａｈａ　Ｌａｕ　ＡＪＰ　Ｌｙｓ　Ｇｌ■ ＡＩＴＧ　ＧＡＡ　ｋｋｃπＣ；　ＡＧＡ　ＣＡＡ　（：ＡＧ　ＣＡＧ　ＣＣＣＣＡＧ　ＣＡＧ　ＣＡＧ　ＧＴＣＣＡＡ　ＡＧＴ　ＴＣＧ　Q０９）Ｍａｅ　ＧＬｕ　Ａｓｎ　Ｌａｕ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　ＧＬｎ　Ｇｌｎ　Ｐｒｏ　Ｇｌｎ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　ＶａＬ　Ｇｉｎ　Ｓｅｘ：　５ａ■ ＣＡＧ　ＣＣｋ　ＣＡＡ　ＣＣＡ　ＣＡＧ　ＣＣＣＣＡＡ　ＣｋＣ；　ＣＴＡ　ＣＡＧ　ＣＡＧ　ＣＡＡ　ＣＣＡ　ＡＡＴ　ＧＧＣＣＡＡ　Q１４１Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　にｉｎ　Ｐｒｏ　Ｇｌｎ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　ｉ’ｒｏ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｇ１■ ＡＣＡ　ＣＣＡ　ＡＡＴ　ＴＡＴ　ＴＡＴ　ＣｃＴ　ＧＡＡ　ＣＯＣＴＴＡ　Ｃ ’ＴＡ　ＣＡＧ　ＣＡＧ　ＣＡＡ　ＣＡＡ　ＡＧＡ、ＣＡＴ@２１８９ＴＣＴ　ＣＡＧ　ＧＡＧ　ＣＭ　ＣＡＧ　ＣＡＧ　ＣＡＡ　ＧＴＴ　ＣＣＧ　ＡＴＣＧＣ’ｒ　ＡＣＡ　ＡＣＣＡＧＧ　（：ＣＴ　ＡＣＴ　Q２１７Ｓａｒ　Ｇｉｎ　ＧＬｕ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　ＶａＬ　Ｉｒｏ　Ｍａｅ　ＡＩＪＩ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　ＡＬａ　丁ｈ■ ４４０　４４５　／ａ５０ＣＡ（：　ＴＡＴＣＣＣＣＣＡ　ＣＡＡ　Ａτ＾ＡＡＣＡＧ（：　ＡＡτ緑τ：ＴＴＡごＭτＣ緑ＧＣＡ　２２Ｂ５Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　（：Ｌｎ　Ｉｌａ　Ａｓｎ　Ｓａｒ　Ａｉｎ　Ａｊｎ　Ｐｈ＠Ａｊｎ　Ｔｈｒ　Ａｉｎ　Ｇｉｎ　ＡｌａτＣＴ　ＧＴＡ　ＣＣＴ　ＣＣＡ　ＣＡＡ　ＡＴｃ　ＡＧＡ　ＴＣＴ　ＡＡＴ　ＣＣＡ　ＣＡＡ　ＣＡＣＣＣＧ　Ｃ（Ｔ　ＣＡＡ　ＣＡＴ　Q３３３Ｓａｒ　ＶＪＬＬ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　にｉｎ　Ｍａｃ　Ａｒｇ　Ｓ＠ｒ　Ａｘｎ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ｐｔｏ　Ｇｉｎ　Ａｓ■ ４７０　１！＋７５　４１１０　４８５ＡＡＡ　ＣＣＡ　ＧＣＴ　ＣＣＣＣＡＧ　ＴＣＡ　ＡＴｒ　ＴＣＣＴＴＣＴＡＡ　ＣＣＡＡＣＡτ八τ人ττへＣＴＣＭＡＡＣ２３８４Ｌｙｘ　Ｐ＋”ｏ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　５ａｒ　Ｉｌａτ ｒｐ　Ｌｇｕ會４９０　１ａ９５ＧＣＡＣＡＡＡＡＡＴ　ＡＡＡＣＡＴＡＴｃｒ　ＡＴＡＴＡＴＡＧＡＣＡＴＡＣＡＣＡＣＡＣ：　ＡＣＡＴＡＴＡτ人τ　ＡＴＡτＡＴＡＴ窒`　２／ａ４ＡＧＧＣＡＡＡＴＡＴＡ　ＣＡＣＴＡＣＡＴＧＡ　ＣＴＴＣＣＡＧＡＴｒ　ＡＴＧＡにＡＡＣＧＣＴｒＧＧＴＡ（ＴＧＧ　ＡＴ（：Ｃ３０９８（２）配列番号・２の情報（ｉ）配列特徴：（Ａ）配列の長さ：４９５アミノ酸（Ｂ）配列の型・アミノ酸（Ｄ）トポロジー　直鎖状（ｉｉ）配列の種類　タンパク質（ｘｉ）配列：配列番号　２Ｍａｅ　Ａｌｐ　Ｌａｕ　Ａｒｇ　ＶａＬ　にＧｌｙ　Ａｒｇ　Ｌ７１１　Ｐｈａ　Ａｒｇ　１１働　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｌｙｚ　Ｉｌａ　Ｃkｙｌ　５　１０　１５Ｓａｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｐｈａ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ｉｌａ　Ｔｙｒ　）１１ｊＣＬｙ　Ｔｈｒ　Ｊｕｎ　Ｌａｕ　Ｉｌａ　Ｓａｒ　ＧＬｙＧｌｕ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ａｌａ工１ａ　Ｌｙｓ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｓａｒ　工１ａ　Ａｒｇ　Ｓａｒ　Ａｒｇ　ＨＬｓ　Ｐｔｏ　に１ｎ：１５　４０　４５Ｌａｕ　Ａｊｐ　Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　Ｓａｒ　Ａｒｇ　Ｖａｎτｙｒ　Ａｒｇτｙｒ　Ｌａｕ　Ｓａｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｖａｎ　−１１ａ　Ｐｒｏ　Ｐｈａ　Ｉｌａ　Ａｒｇ　Ｔｒｐ　Ｐｈａ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　にｌｕ　にＧｌｙ　にｌｕ　Ｔｙｒ　Ａｓｎ　ＡＬＪＩ　Ｈ≠■ ＶａＬ工Ｌａ　Ａｊｐ　Ｌａｕ　Ｌａｕ　ＧＬｙ　Ｐｒｏ　Ｓａｒ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　ＡＪＰ　Ｌａｕ　Ｐｈａ　Ａｓｎ３６０　Ｃｙｓ８５　’　９０　９５ＨＬｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｐｈａ　Ｓａｗ　Ｐｈａ　Ｌｙｓ　丁ｈｒ　Ｖａｎ　１１ｓ　Ｍａｃ　Ｌａｕ　Ａｌａ　ｆａｕ　Ｇｉｎ　に巳【１ｏｏ　１０５　１１０Ｐｈａ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｉｌａ　Ｇｉｎτｙｒ　Ｉｌａ　Ｈｌｓ　ＧＬｙ　Ａｒｇ　Ｓａｒ　Ｐｈ＠Ｉｌａ　Ｈｌｓ　Ａｒｇ　ＡｓｐＸ１＠Ｌｙｓ　Ｅ’ｒａ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｐｈａ　Ｌａｕ　Ｍａｅ　（Ｊｙ　Ｖａｌ　ＧＬｙ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ１３０　１３５　１／、０Ｖａｌ　Ｈｌｓ　Ｖａｌ　Ｘｌ、ａ　Ａｓｐ　Ｐｈａ　Ｇｌｙ　Ｌａｕ　５ａｒ　Ｌｙｘ　Ｌｙｓ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｐｈｓ　Ａｇ■ １４５　じＯ１５５１６０Ｔｈｒ　ＨＬｓ　Ａｒｇ　Ｈｌｓ　Ｉｌｅ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ＾ｒｇ　（Ｌｕ　Ａｊｎ　Ｌｙｓ　Ｓａｒムｕ　Ｔｈｒ　Ｇａｙ　ＴｈｒＡｉｍ　Ａｒｇ　Ｔｙｒ　Ａｈａ　Ｓａｗ　ＶａＬ　／ｕｎ　Ｔｈｒ　ｕｓ　Ｌｓｕ　Ｇｌｙ　Ｘ１ａ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　Ｓａｒ　Ａｒｇｌｇｏ　１８５　１９０Ａｒｇ　Ａｓｐ　／Ｌｓｐ　Ｌｓｕ　Ｇｌｕ　Ｓａｒ　Ｌａｕ　にｌｙτｙｒ　ＶａＬ　Ｌａｕ　Ｉｌａτｙｒ　Ｐｈａ　Ｃｙｓ　ＬｙｓＧＬｙ　Ｓａｔ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　Ｇｉｎ　ＧＬｙ　Ｌａｕ　Ｌｙｓ　ＡＩＪＬ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｌｙ■ Ｔｙｒ＾ｓｐ〜：ｇ　ｌ１ａ−ζＣ１ｕ　Ｌｙｇ　Ｌｙｓ　Ｌａｕ　ＡＪｎ　Ｖａｎ　Ｓｉｒ　ＶａＬ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｌａｕ２２５　２３０　２コ５　２４０Ｃｙｓ　５ｓｒ　Ｇｌｙ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｆｈａ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ｔ）ｒｒ　Ｍａｅ＾ｌａτｙｒ　Ｃｙｓ　ＬｙｓＡＪｎ　Ｌ＠ｕ　Ｌ７１１　Ｆｈａ　Ａｊｐ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ａｊｐ　Ｔｙｒ　Ｌａｕ　Ｐｈａ　Ｌａｕ　Ａｉｍ〜１ムｕ２６０　、　２６５　、　２７０ｐｈ・Ｌｙｓ　Ａｓｐ　４ｕ　Ｓａｔ　Ｉｔｓ　Ｌｙｍ　Ｌａｕ　Ｇｌｕτｙｒ　Ｈｌｓ　Ａｓｎ＾ｓｐ　１（ｉｓ　Ｌａｕ　Ｐｈａ２７５　２Ｂ０　２８５＾ｓｐτｒｐ　Ｔｈｒ　Ｍａｃ　Ｌａｕ　Ａｒｇ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　ＡＬｍ　１（ａｔ　ＶａＩＧｌｕ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ＾ｒｇＡｓｐ　Ｌａｕ　Ｌａｕ　ＩＩｓ　ＧＬｕ　Ｌｙｇ　Ｇｌｙ　Ａｓｐムｕ　Ａｔｎ　Ａｈｍ　Ａｉｎ　Ｓａｒ　Ａｉｎ　ＡＬＪＬ　ＡＬ！３０５　：ｌｌＯ３１５３２０Ｓｉｒ　ＡＬＪＬ　Ｓａｔ　Ａｇｎ　５ａｒ　Ｔｈｒ　Ａｓｐん＋ｎ　Ｌｙｘ　５ａｒ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｐｈａ　Ａｘｎ　Ｌｙｓ　Ｉｌａ八ｓへ　ＧＬｕ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　ＨＬｓ　Ａｓｎ　Ｐｒｏ　Ｓａｒ　Ｐｒｏ　ＧＬｕ　Ｇｌｕ　Ｉｌａ　Ｌｙｊ　Ｃａｎ　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ工ｌａ　Ｌａｕ　＋ＡＪｎ　ＡＪｎ　ＡＪｎ　ＡＬＩＩ　ＡＩＪＬ　５８１：　Ｓａｒ　ＩＪｕ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｌａｕ　Ｌａｕ■■ Ｇｉｎ　Ｖａｎ　Ｇｌｎ　Ｓａｒ　Ｓａｔ　ＧＬｎ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ｇｌｎ　ＣＬｎ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　ＧｌｎＧｉｎ　Ｇｉｎ　ＧＬｎ　Ａｒｇ　ｋｚｐ　５ａｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　ＶａＬ　Ｐｒｏ　Ｈｅｗ　Ａ１ａ４３５　ム４０　４＆５Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ａｌ！Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　にｉｎ　Ｉｌａ　Ａｊｎ　Ｓａｒ　Ａｉｎ　Ａｓｎ　ＰｈａＡｓｎ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｓａｒ　Ｖａｎ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｍａｅ　Ａｒｇ　Ｓａｒ＾ｓｎ　Ｐｒｏ　（：１ｎ４６５　４７０　４７５　１ａＢＱＧｉｎ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｇｌｎ　ＡＳｐ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　ＡＩＪＬ　Ｇａｙ　（ｉｎ　Ｓａｔ　工ｌａ　Ｔｒｐ　Ｌａｕ　會４Ｂ５　４９０　４９５本願発明について十分に説明してきたが、当業者であれば、本願発明の範−から逸脱すること無しに、様々な変更や改良か容易に加えられることか考えられる。フロントページの続き（５１）　Ｉｎｔ、Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ｃ１２Ｎ　９／１２　９３５９−４ＢＣ１２Ｐ　２１１０８　８２１４−４Ｂ／／（Ｃ１２Ｎ　１５１５４Ｃ１２Ｒ１：８５）（ＣＩ２Ｎ　１／１９Ｃ１２Ｒ１：８５）（Ｃ１２Ｎ　１／乃Ｃ１２Ｒ１：８６５）（Ｃ１２Ｎ　９／１２Ｃ１２Ｒ１：８５）Ｉ

Claims

【特許請求の範囲】

１．不完全なチロシンキナーゼ活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡ配列であって、前記ポリペプチドが、（ａ）正常な有糸分裂組換えを促し、および（ｂ）開裂部位： ▲数式、化学式、表等があります▼ に生じたＤＮＡ二本鎖損傷を本質的に修復できない、ことを特徴とする。
２．前記損傷が、エンドヌクレアーゼによって誘発される請求の範囲第１項に記載のＤＮＡ配列。
３．前記エンドヌクレアーゼがＨＯである請求の範囲第２項に記載のＤＮＡ配列。
４．前記ＤＮＡ配列が、（ａ）前記ポリペプチドのゲノミックコード領域から誘導したヌクレオチド配列を有するｃＤＮＡ；（ｂ）（ａ）のｃＤＮＡによってコードされたアミノ酸配列と、タンパク質キナーゼ領域において少なくとも約３５％の相同性を有するアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列；および（ｃ）（ａ）および（ｂ）のＤＮＡ配列に関する遺伝コードの結果として変性されたＤＮＡ配列、からなるグループから選択された請求の範囲第１項に記載のＤＮＡ配列。
５．前記ＤＮＡ配列が、ｈｒｒ２５遺伝子である請求の範囲第１項に記載のＤＮＡ配列。
６．前記ＤＮＡ配列が、酵母から誘導されたものである請求の範囲第１項に記載のＤＮＡ配列。
７．請求の範囲第１項に記載のＤＮＡ配列を含む宿主細胞。
８．前記ＤＮＡ配列が、形質転換もしくは形質変換により導入される請求の範囲第７項に記載の宿主細胞。
９．請求の範囲第１項に記載のＤＮＡ配列を含む生物学的機能性プラスミドあるいはウィルス性ＤＮＡベクター。
１０．請求の範囲第１項に記載のＤＮＡ配列の全部もしくは一部によってコードされる機能性ポリペプチド。
１１．不完全なチロシンキナーゼ活性を有するポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、（ａ）正常な有糸分裂組換えを促し、および（ｂ）開裂部位： ▲数式、化学式、表等があります▼ に生じたＤＮＡ二本鎖損傷を含むＤＮＡ二本鎖損傷を本質的に修復できない、ことを特徴とする。
１２．前記損傷が、エンドヌクレアーゼによって誘発される請求の範囲第１１項に記載のポリペプチド。
１３．前記エンドヌクレアーゼがＨＯである請求の範囲第１２項に記載のポリペプチド。
１４．請求の範囲第１１項に記載のポリペプチドに対する抗体。
１５．前記抗体が、モノクローナル抗体である請求の範囲第１４項に記載の抗体。
１６．請求の範囲第１０項に記載のポリペプチドに対する抗体。
１７．前記抗体が、モノクローナル抗体である請求の範囲第１６項に記載の抗体。
１８．請求の範囲第６項に記載の宿主にてＤＮＡ二本鎖損傷修復活性を復原することができるチロシンキナーゼ活性を有する機能性ポリペプチドをコードするＤＮＡを同定する方法であって；（ａ）前記ポリペプチドを生成する能力のある配列に関するＤＮＡライブラリーをスクリーニングし、および（ｂ）二本鎖損傷修復活性を復原することができるポリペプチドをコードするＤＮＡを同定する、ことを含む。
１９．前記ＤＮＡが、哺乳類ＤＮＡである請求の範囲第１８項に記載の方法。
２０．前記哺乳類ＤＮＡが、ヒトＤＮＡである請求の範囲第１９項に記載の方法。
２１．前記スクリーニングが、ＤＮＡライブラリーの要素もしくはその発現生成物とスクリーニング手段との構造的類似性を検出する請求の範囲第１８項に記載の方法。
２２．前記スクリーニング手段が、核酸構造あるいは抗原性構造に基づくものである請求の範囲第２１項に記載の方法。
２３．前記スクリーニングが、ＤＮＡライブラリーの発現生成物と宿主のチロシンキナーゼ活性との間の機能的類似性を検出する請求の範囲第１８項に記載の方法。
２４．前記機能的類似性が、相補性により検出される請求の範囲第２３項に記載の方法。
２５．前記相補性が、ＤＮＡ二本鎖損傷に対する耐性の復原を測定するものである請求の範囲第２４項に記載の方法。
２６．前記ＤＮＡ二本鎖損傷が、放射性様アルキル化薬剤によって誘発される請求の範囲第２５項に記載の方法。
２７．前記放射性様アルキル化薬剤が、メチルメタン硫酸塩活性を有する請求の範囲第２６項に記載の方法。
２８．前記放射性様アルキル化薬剤が、メチルメタン硫酸塩である請求の範囲第２７項に記載の方法。
２９．前記ＤＮＡ二本鎖損傷が、エンドヌクレアーゼによって誘発される請求の範囲第２５項に記載の方法。
３０．前記エンドヌクレアーゼが、ＨＯである請求の範囲第２９項に記載の方法。
３１．前記ＤＮＡ二本鎖損傷が、Ｘ線によって誘発される請求の範囲第２５項に記載の方法。
３２．前記宿主が、酵母である請求の範囲第１８項に記載の方法。
３３．前記酵母が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属に属する酵母である請求の範囲第３２項に記載の方法。
３４．前記酵母が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅである請求の範囲第３３項に記載の方法。
３５．チロシンキナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする単離したＤＮＡ配列であって、前記ポリペプチドが、請求の範囲第６項に記載の宿主にてＤＮＡ二本鎖損傷修復活性を復原することができる。
３６．前記ＤＮＡ配列が、（ａ）前記ポリペプチドのゲノミックコード領域から誘導したヌクレオチド配列を有するｃＤＮＡ；（ｂ）（ａ）のｃＤＮＡによってコードされたアミノ酸配列と、タンパク質キナーゼ領域において少なくとも約３５％の相同性を有するアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列；および（ｃ）（ａ）および（ｂ）のＤＮＡ配列に関する遺伝コードの結果として変性されたＤＮＡ配列、からなるグループから選択された請求の範囲第３５項に記載のＤＮＡ配列。
３７．前記ＤＮＡ配列が、哺乳類ＤＮＡである請求の範囲第３５項に記載のＤＮＡ配列。
３８．前記哺乳類ＤＮＡが、ヒトＤＮＡである請求の範囲第３７項に記載のＤＮＡ配列。
３９．請求の範囲第１８項に記載の方法で同定した単離したＤＮＡ配列。
４０．請求の範囲第６項に記載の宿主にてＤＮＡ二本鎖損傷修復活性を復原することができる単離したポリペプチドもしくはその機能性断片であって、前記ポリペプチドが、自然界に関連するその他のポリペプチドを含まないものである。
４１．請求の範囲第３５項に記載のＤＮＡ配列のすべてもしくは機能性部分によってコードされた単離したポリペプチド。
４２．前記ポリペプチドが、哺乳類ポリペプチドである請求の範囲第４０項に記載のポリペプチド。
４３．前記哺乳類ポリペプチドが、ヒトポリペプチドである請求の範囲第４２項に記載のポリペプチド。
４４．請求の範囲第４０項に記載のポリペプチドに対する抗体。
４５．前記抗体が、モノクローナル抗体である請求の範囲第４４項に記載の抗体。
４６．請求の範囲第４１項に記載のポリペプチドに対する抗体。
４７．前記抗体が、モノクローナル抗体である請求の範囲第４６項に記載の抗体。
４８．チロシンキナーゼ活性を有する哺乳類ポリペプチドの活性に影響を与える組成物の同定のための方法であって、前記ポリペプチドが、請求の範囲第６項に記載の宿主にてＤＮＡ二本鎖損傷修復活性を復原することができ、前記方法が、（ａ）宿主の存在下で該組成物および該哺乳類ポリペプチドを含む構成要素をインキュベートし、該インキュベーションが、構成要素が相互作用しうるに十分な条件下で、一定の時間にわたって実施され、および（ｂ）このシステムによって生じたチロシンキナーゼ活性の変化を測定する、ことを含む。
４９．前記工程（ｂ）での変化が、ＤＮＡ二本鎖損傷の減少した修復に相関する請求の範囲第４８項に記載の方法。
５０．前記ＤＮＡ二本鎖損傷が、放射性様アルキル化薬剤によって誘発される請求の範囲第４９項に記載の方法。
５１．前記放射性様アルキル化薬剤が、メチルメタン硫酸塩活性を有する請求の範囲第５０項に記載の方法。
５２．前記放射性様アルキル化薬剤が、メチルメタン硫酸塩である請求の範囲第５１項に記載の方法。
５３．前記ＤＮＡ二本鎖損傷が、エンドヌクレアーゼによって誘発される請求の範囲第４９項に記載の方法。
５４．前記エンドヌクレアーゼが、ＨＯである請求の範囲第５３項に記載の方法。
５５．前記ＤＮＡ二本鎖損傷が、Ｘ線によって誘発される請求の範囲第４９項に記載の方法。
５６．前記分子の影響が、前記ポリペプチドを阻害することである請求の範囲第４８項に記載の方法。
５７．前記哺乳類ポリペプチドが、ヒトポリペプチドである請求の範囲第４８項に記載の方法。