JPH06510769A - 低血圧症と関連疾患の治療のためのアミノ酸非経口製剤 - Google Patents

低血圧症と関連疾患の治療のためのアミノ酸非経口製剤

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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ｌ徒分洛１ 低血圧症と関連疾患の治療のための アミノ酸非経口製剤 交亙圀１ 本発明は、低血圧症の治療と予防の分野に関する。
さらに詳しくは、限定的酸化窒素産生能を持つ特定製剤の投与と併用療法の実施 による低血圧症と全身性ショックを管理抑制する方法を提供する。さらに、低血 圧症や全身性ショックのおそれがある患者に特に適合させた低アルギニン含量の 栄養製剤あるいは無アルギニン栄養製剤を提供する。これら製剤の特定の実施態 様において、尿素サイクル基質として、オルニチンや、シトルリンを含有するも のもある。さらに本発明は、通常の栄養補給剤として患者に与えうる抗降圧性（ ａｎｔｉ−ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｖｅ）のＴＰＮ　（全非経口栄養）製剤を提供す る。さらに本発明は、併用処方（養生法）、特に酸化窒素阻害剤と非経口製剤と の併用に関する。さらにまた本発明は、低血圧症、敗血症性ショックや関連疾書 、の治療方法の一部として、アルギニン類縁物質、抗腫瘍壊死因子抗体、杭内毒 素抗体およびインターロイキン１受容拮抗剤を使用すること関する。
宵−景１」 低血圧症、つまり血圧の低下は、ショック、外傷、敗血症、免疫モジュレータ− の投与、その他の状況に随伴する複雑な、しかも生命を脅かすことも多い疾患で ある。全世界で低血圧症患者は相当な数にのぼる。
細菌感染症の合併症である、生命の危険がある敗血症を例に取ってみると、アメ リカ合衆国だけでも年間ｌｓ　ｏ、ｏ　ｏ　ｏ〜３００，０００人の患者がいる １゜敗血症に合併する心臓血管虚脱と多発性代謝障害の多くは、細菌性内毒素（ ＥＴ）に起因するが、動物実験２では、この細菌性内毒素を投与すると敗血症性 ショックのような症状になることが証明されている。ＥＴは、低血圧活性を持つ 数種のサイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ）や生物学的媒介物質（メゾイエイタ ）の合成放出を刺激することで知られている。このようにして放出される因子の うち、ＴＮＦ、血小板活性因子（ＰＡＦ）、プロスタサイクリンと、補体由来の Ｃ５ａアナフイラトキシンが、敗血症性ショックによる心臓血管虚脱の誘因とさ れている３−６゜ 実験動物を抗ＴＮＦ抗体７、ＰＡＦ受容体拮抗剤８や、プロスタサイタリン合成 阻害剤９で前処理をすると、有意に敗血症性ショックが起こらないことが証明さ れているが、これらの媒介物質が敗血症性ショックの病因に関連してどんな重要 性をもっているかは現在のところ分かっていない。
また、これら媒介物質のうちのあるものについては、二次媒介物質の放出を介し て間接的に作用するというデータもある。さらに、ＥＴに暴露された後では抗Ｔ ＮＦ抗体を投与してもほとんど、あるいはまったく治療効果がないという所見７ があることから、ＴＮＦは別の因子の産生を刺激していて、実はこれが本当の降 圧性物質であることも考えられる。この因子の合成放出は一旦始まると、ＴＮＦ が検出されな（なった後でも明かに続行する。１９８０年、ファーチゴソト（Ｆ ｕｒｃｈｇｏｔｔ）らは（１９８０）”、血管内側を覆っている内皮細胞を刺激 すると血管平滑筋を弛緩させる（つまり、血管拡張を起こす）物質を放出するこ とを立証した。この物質の化学的性質がまったく分かっていなかったので、単に 内皮誘導弛緩因子（ＥＤＲＦ）と呼ばれていた。生理血管拡張剤として作用する 多くの天然物質があるが、これらの天然物質はＥＤＲＦの放出を刺激することに より血管拡張作用の全部または一部を媒介していると考えられている。これらの 物質としては、アセチルコリン、ヒスタミン、ブラジキニン、ロイコトリエン類 、ＡＤＰ、ＡＴＰ、サブスタンスＰ、セロトニン、トロンビンなどが挙げられる 。
ＥＤＲＦ分子を化学的に同定しようとする試みがなされたが、寿命が極端に短い ため（数秒）、当初は達成することができなかった。１９８７年にいくつかの研 究所から、ＥＤＲＦは酸化窒素（Ｎｏ）であり、これが自然発生的に硝酸塩と亜 硝酸塩に分解している可能性があるとの提案がなされた。しかしながら、哺乳動 物の系にＮｏを合成する酵素経路が存在することが知られていなかったという基 本的な問題から、このＮＯ仮説は受け入られなかった。その」二、Ｎｏ合成にな くてはならない先駆物質も分からなかった。
本発明者らの一部は、アセチルコリンとヒスタミンで誘発された血管ＥＤＲＦ／ Ｎｏ合成が、アルギニンの類縁物質であるＬ　−Ｎ　’−メチルアルギニンＣＬ −ＮＭＡ）によって抑制することができ、且つ過剰のし一アルギニンを添加する ことによりこのＥＤＲＦ／Ｎｏ合成を回復することができることを観察し、アル ギニンがＥＤＲＦ／Ｎｏ生合成の生理学的先駆物質であると提案した１１０　そ の後本発明者らの一部は、麻酔モルモットのＥＤＲＦ／Ｎｏ合成を抑制すると血 圧が上昇することを証明した。
さらに、本発明者らの一部は、Ｎｏ合成を受持つ酵素（酸化窒素シンターゼ）の 部分的な特性評価を行ったが１４、この酵素がアルギニンのグアニジノ基の末端 窒素を酸化し、酸化窒素とシトルリンが産生される。
現在、マクロファージ由来の酸化窒素は、重要な抗腫瘍剤であり、抗菌剤である と考えられている。
試験管内（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）でマクロファージ細胞をガンマインターフェロン 、細菌性内毒素や、種々のサイトカインで処理すると、１２〜１３時間以内に「 活性化」することが報告されている。しかしながら、この試験管内での「活性化 ｊ系は、殺腫瘍細胞の開始にのみ関連があると考えられてきた。
これまで本発明者らの研究以前には、低血圧症と酸化窒素とを関連づけたり、あ るいは低血圧症にマクロファージが関与しているとする文献や研究は一つもなか った。
マクロファージは、正常な血管壁には定量的に意味のないほど微量しか含まれて いない成分であって、血圧の制御になんらかの役割も持っていると証明されたこ とはなかった。つまり、生化学、生理学、あるいは免疫学のいずれにおいても、 マクロファージが低血圧症に役割を果たしているとする資料は一つも存在してい なかった。そこで、本発明者らは、低血圧症発現に関連する系、特にサイトカイ ンが誘発する低血圧症、それも特に血管壁を構成する細胞における、酸化窒素の 役割について研究することとした。
サイトカインは、　「内皮細胞の活性化」とよばれる、内皮細胞の形態的と機能 的変化を引き起こすことが知られている。腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターロ イキン１　（ＩＬ−１）、ガンマインターフェロン（ＩＦＮ）などのこれまでに 分かっている免疫媒介物質は、凝血促進活性の増進、ＰＣｌ３の産生、ＨＬＡ抗 原の表現１８や、リンパ球付着分子の活性化を始めとする、異なるが一部は重複 するパターンの内皮細胞の活性化を引き起こすと考えられる。サイトカインは、 低血圧症、血管出血、虚血の原因となると報告されているが、血管活性変化の基 礎メカニズムは明らかにされていない。
生物反応モデファイアーの効果についての臨床実験、動物実験のいずれにおいて も、服用量を制限する毒性は、低血圧と血管漏泄であった。本発明者らは、動物 実験において内毒素と腫瘍壊死因子が、酸化窒素の過剰産生を誘発することを観 察した。酸化窒素は、安静時血圧を制御する血管活性物質である。このことがら 、本発明者らは、生物反応モデファイアーの投与、あるいは重篤な細菌感染症の 発生に起因してヒトに低血圧が起こるのは、収縮血管を弛緩させるに充分な濃度 の酸化窒素が過剰に産生されるためであろうと考えた。
しかしながら、マクロファージは、正常な血管壁の微量の成分でしかないことで 知られている。さらに、数が限られている血管壁中のマクロファージによって顕 著な生理反応を造出する程の大量の酸化窒素が産生される筈はないのだから、循 環型マクロファージが形成する酸化窒素量は、生理的に「低血圧」効果を示すに 充分な大きさになるとは考えられなかった。このことがあり、さらには生体内（ ｉｎ　ｖｉｖｏ）では酸化窒素の半減期が短い（３〜５秒）ため、マクロファー ジ由来の酸化窒素が低血圧に関連があるとする説が受け入れられることはなかっ た。
本発明者らは、酸化窒素がアミノ酸であるＬ−アルギニンから誘導されることを 観察した。Ｌ−アルギニンは、市販されているＴＰＮ　（全非経口栄養：　ｔｏ ｔａｌｐａｒｅｎｔｅｒａｌ　ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）製剤中の典型的な成分であ る。
本発明者らは、細菌感染症患者の低血圧症と敗血症性ショックの危険を取り除が ないまでも、これを低下させる、低アルギニン含量もしくは実質的に無アルギニ ンのＴＰＮ処方（養生法）を提案する。ＴＰＮ製剤の投与を必要とする典型的な 臨床療法としては、経口栄養に耐える能力がない、もしくはその能力が限られて いる癌患者などに与える栄養補給があげられる。
インターロイキン１−α（ＩＬ−１）は、細胞毒の化学療法剤によってを髄抑止 （ｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ）　Ｌ／たマウスの末梢血液リンパ球の回復 を増進することが証明されている１６゜さらに、ＩＬ−１は試験管内および生体 内において、ネズミ腫瘍の成長を抑制し、数種の腫瘍細胞系に対して殺細胞作用 を示すｌ？、口。現在、国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ ５ｔｉｔｕｔｅ）と協力して臨床実験を実施中であるが、この実験は、化学療法 に伴ってを髄抑止（ｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ）を示す癌患者に対する 免疫回復剤（ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ　ａｇｅｎｔ）としてＩＬ＝ １の効力を評価しようとするものである。この実験でも、ＩＬ−１の用量限定性 副作用として低血圧が発現し１９−２１、このために治療有効量のＩＬ−１を投 与できなくなる可能性がある。
動物実験からも、臨床実験からも、ＩＬ−１と心臓血管系の機能障害との間に関 連が認められるとする多（の文献がある。このうち、ジナレロ（Ｄｉｎａｒｅｌ ｌｏ）らは２２、ウサギにＩＬ−１を投与するとショック様の症候群が起こるこ とを立証し、これはシクロオキシゲナーゼ生成物の産生過剰に起因するとしてい る。また彼らは、外因性のＩＬ−１と腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）との相乗作用によ ってショックが発生することを証明した。
現在では、内毒素に暴露されることによるショック（すなわち、敗血症性ショッ ク）と、ＴＮＦとＩＬ−１の体内産生の増加とは関連があるとする２３多くのデ ータある。最近にいたり、内毒素で処理したウサギにヒト組替えＩＬ−１受容体 拮抗剤を投与すると、生存率を向上させ低血圧の発現を予防することができると の報告がなされた。これにより、ＩＬ−１が内毒素ショックに重要な役割を果た していることが裏付けられている。
本発明者らは前報において、ＴＮＦの投与によるイヌの低血圧症には、酸化窒素 （ＮＯ・）［当時は、内皮誘導弛緩因子（ＥＤＲＦ）”−”と名づけられていた ちの］の病的な産生過剰が介在していることを証明した２６゜ Ｎｏ・は、寿命は短いが、強力な血管拡張剤であって、酸化窒素シンターゼを触 媒とする反応により、Ｌ−アルギニンが二つもっている等価のグアニジノ（すな わち、オメガ）窒素の一つを酸化する酵素経路によって生成される。数個のＮ″ 置換アルギニン類縁物質が酸化窒素シンターゼに対する有効な抑制因子であり、 そのうちの一部については生体内でＮＯの産生を抑制することが証明されている 。
これらのＮ“置換アルギニン類縁物質の一部としては、Ｎ“−メチル−Ｌ−アル ギニン（ＮＭＡ）、ＮＮＡ（Ｎ”−ニトロ−Ｌ−アルギニン）と、ＮＡＡ　（Ｎ “−アミノ−Ｌ−アルギニン）が挙げられる。ＮＭＡなどの酸化窒素抑制因子を 抗降圧薬（ａｎ　ｔ　ｉ　ｈｙｐｏ　ｔ　ｅｎｓ　ｉｖｅ　ａｇｅｎｔｓ）とし て用いる試みに関心が集まった時期もあった。しかしながら、最近になってＮＭ Ａは、非常に大きな用量が必要であるため内毒素論歯動物の死亡率が上昇するこ とが分かるとともに、他の研究でもＮＭＡは内毒素を投与されたラットの肝臓疾 患を悪化させることが示唆されるに及んで、この興味は消滅してしまった。本発 明者ら自身の研究においても、ＮＭＡなどのアルギニン類縁物質を大量投与する と、生体内で・し・抽出量が低下する一方、血圧が上昇し、このため重要臓器に 対する酸素の送りだしを悪化させかねないことが分かっている。従って、これら の薬剤に備わっている正常血圧作用を低用量で最適化する方法や、処方（養生法 ）があれば、臨床現場ではるかに良く受け入れられ、高い有用性を持つことにな ろう。
例えば、一つの方法として、実験動物に無アルギニンの食餌（ＴＰＮ）を与え、 これと組み合わせて適量の酸化窒素ノンターゼを投与することにより、低い生理 アルギニン濃度のもつ有益な抗降圧作用（ａｎｔ　１−ｈｙｐ。
ｔｅｎｓｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ）を最大にすることが考えられる。この方法に より既に低血圧症である、あるいは低血圧症が発現するおそれがある動物の管理 に大きな利点となる。
久」ＬのＪし旨 本発明は、生物学的反応モデファイアーまたは細菌性敗血症が誘発する全身性低 血圧症を防止抑制する方法と製剤に関する。全身性低血圧症の原因として考えら れている生物学的反応モデファイアーの例としては、サイトカイン類や、　ＩＦ Ｎ、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２が挙げられる。本発明の方法によれば、アルギ ニンの血清濃度を全身的に下げて、酸化窒素合成を低下させるよう、無アルギニ ン製剤を、低血圧症動物、あるいは低血圧症発現のおそれがある動物に、好まし くは非経口的に投与する。
本発明者らは、酸化窒素がアミノ酸であるＬ−アルギニンから誘導されることを 観察した。従って、本発明の方法は、きわめて低いアルギニン濃度、好ましくは 実質的に無アルギニンの製剤を含む。酸化窒素濃度が高い動物において、アルギ ニンを減らすことによって酸化窒素合成を減少させ、従って全身性低血圧の発症 を減少させる。
ＴＰＮ抗降圧製剤（ａｎｔｉ−ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｖｅ　ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏ ｎｓ）の特定の実施態様としては、シトルリンおよび／またはオルニチンを添加 したものが挙げられる。シトルリンおよび／またはオルニチンは、酸化窒素の産 生に直接関与するものではないが、例えば尿素サイクルなどの必要とする代謝を 充足させるために添加する。本願における「低濃度」のアルギニンなる語は、栄 養補給溶液中に０．１α６未満のアルギンニンを含有してなるＴＰＮ溶液（ＴＰ Ｎの１００ｍ１あたり１００ｍｇ未満のアルギニン）を指す。製剤のより好まし い実施態様としては、アルギニン含量が０１％〜０．００１％であるものが挙げ られる。さらにより好ましい本発明の抗降圧ＴＰＮとしては、アルギニン含量が 約０．００１％（ＴＰＮ　１００ｍ１あたり］、　ｍ　ｇ　）であるものが挙げ られる。本発明の方法と製剤の最も好ましい実施態様としては、製剤中のアルギ ニン含量が痕跡程度の０．１ｍｇ／１００ｍ１　（約０．０００１％）であるも のが挙げられる。最も好ましい実施態様の製剤では、実質的に無アルギニンであ る。
本発明の方法の最も好ましい実施態様としては、これに使用する製剤が実質的に 無アルギニン製剤であり、さらに実質的に無オルニチン、無シトルリンであるも のが挙げられる。反対に、実質的な無アルギニン製剤にオルニチンか、またはシ トルリンを配合してもよい。
こうすることにより、全身性敗血症の危険がある患者、あるいは酸化窒素が媒介 するその他の低血圧症を持つ慝者に対して、彼らの必要に特に適合させた全非経 口栄養ＣＴＰＮ）製剤を提供することができる。
動物に製剤を投与するには非経口であることが好ましいが、他の投与経路、例え ば経口投与もまた有用な投与経路であると考えられる。
本発明の方法の実施態様の一つにおいては、Ｎｏが媒介する全身性低血圧が発現 する可能性または蓋然性がある、または現在発現している動物に、無アルギニン 製剤を投与する。本発明の方法の無アルギニン製剤では、予定されている治療法 に対応して薬学上許容し得る付加塩を配合することが好ましい。
本発明の方法の特に好ましい用途としては、ＴＮＦ、ＩＬ−２（インターロイキ ン２）、ＩＬ−１（インターロイキン１）、あるいはその混合物などの化学療法 剤を服用している患者に発症する全身性低血圧の予防と治療が挙げられる。この 方法は、収縮期血圧が生理的に許容し得る水準にまで上昇したことが認められる までの期間、低アルギニン含量もしくは実質的に無アルギニンのアミノ酸ＴＰＮ 製剤を栄養供給源としての用量により患者に投与することからなる。ヒト成人に おける生理的に許容し得る収縮期血圧の水準とは、１００ｍｍＨｇ　（水銀で１ ００ｍ１）以上を指す。本発明の治療方法において、収縮期血圧が１００ｍｍＨ ｇ以下のヒト成人は、　「低血圧症」として知られている症状が発症しているも のとする。製剤は、非経口剤として患者に投与するのに適した剤形で製造される ことが最も好ましい。
本発明のさらに他の重要な適用としては、敗血症性ショック、特に細菌性内毒素 が誘発する敗血症性ショックの治療方法が挙げられる。この適用では予防を考え ることは実際的ではないが、この病状を治療して改善したり、除去したりするこ とは重要である。本発明による敗血症性ショックの好ましい治療方法としては、 患者が生理的に許容し得る水準の収縮期血圧を連続して示す時まで、アミノ酸類 混合物からなる無アルギニンまたは低アルギニン含量製剤を患者に継続投与する ことよりなる。ヒト成人においては、生理的に許容し得る収縮期血圧とは、少な くとも約１００ｍｍＨｇ（水銀で１００ｍｍ）である。製剤は、非経口剤として 投与するのに適した剤形で製造され、且つ非経口投与として生理的に許容し得る ｐＨであることが最も好ましい 本発明者らのデータにより、以下に述べる製剤と療法を投与実施することにより 低血圧を抑制予防する方法が提供される。
この製剤には、任意にオルニチン、またはシトルリンを、例えば尿素サイクル基 質の必要などの生理的な必要を賄うに充分な濃度で配合することができる。さら に、溶液のｐＨを７０〜７．４の範囲に調整するなど、製剤を非経口投与に際し て生理的に相客とするための調整を行うべきである。
上記の方法に用いる製剤に、オルニチンおよび／またはシトルリンを配合する場 合、製剤中に配合されるオルニチンとシトルリンの濃度は、オルニチン約１〜２ ｇ／ｌ（すなわち、０．１０〜０．２０％）の範囲および／またはシトルリン１ 〜２ｇ／ｌ　（０，１〜０．２０％）であることが最も好ましい。製剤に配合す る最も特に好ましいオルニチン濃度は、患者にそのまま使用できる栄養補給処方 のＴＰＮ製剤に対して２〜４ｇ／ｌの範囲である。
本願で言う低血圧を発症する「おそれ」がある患者とは、例えば腫瘍壊死因子や 、インターロイキン１、またはインターロイキン２などの免疫モジュレータ−か らなる療法をうけている患者、または処方されている患者、あるいは全身性低血 圧症をもつ患者を指す。
さらに、重篤な細菌性感染症をもつ患者、および細菌性内毒素に暴露された患者 もこのおそれがある患者とする。
本発明で開示する低血症圧予防法によれば、先ず患者に低血圧症の「おそれ」が あることを確認する。この確認後、アミノ酸類混合物を栄養補給用の濃度で含有 する、低アルギニン含量あるいは無アルギニンの製剤をこの患者に投与する。ア ミノ酸類混合物の栄養補給剤としての濃度を表３に示す。特に最良の実施態様の −において、アミノ酸類混合物は、無オルニチン、無シトルリンである。
本発明の抗降圧製剤は、特定の必須アミノ酸類および非必須アミノ酸類からなる 混合物を含有する。　「必須」および「非必須」アミノ酸の分類は当業者によっ て認められ、レーニンガーらの生化学教本２６およびワグナ−論文”（Ｌｅｈｎ ｉｎｇｅｒ　ｅｔ　ａｌ、’ｓ　Ｂｊｏｃｈｅｔｎｉｓｔｒｙｔｅｘｔ、。
およびＷａｇｎｅｒ）に収載されている。これらの文献は、この目的のために引 用することにより特に本明細書の一部とする。
本発明者らの研究によれば、特定のアルギニン類縁物質（アルギニン拮抗物質） が生体内で低血圧症を抑制することが明らかになった。本発明者らは動物実験に おいて、特定のアルギニン類縁物質である拮抗物質が、最も顕著には酸化窒素の 産生を減少させることにより、各種の生化学的経路に生理学的に作用し、最終的 には低血圧、／正常血圧状態に影響を与えることを見いだした。
より一般的な意味において、本発明は全非経口栄養の供給を必要とする患者の酸 化窒素に起因とする全身性低血圧症の予防治療方法に関する。悪心、吐気、食欲 不振を引き起こす化学療法剤を服用している患者に典型的に見られるように、も のを飲み込むことができなくなった場合に、非経口栄養療法を継続的に実施する ことが必要となる。
この療法の実施に当たっては、主治医が「必要」であるとと判断すれば、無アル ギニン製剤を投与し、これを咀者が少なくとも１００ｍｍＨｇの収縮期血圧を示 すようになるまで継続する。
特定の理論あるいは作用機序に限定するものではないが、実質的に無アルギニン の非経口製剤を投与すると、アルギニンの血清濃度が下がることによって酸化窒 素合成が低下し、低血圧症が抑制されると考えられる。既に述べたように、本発 明者らは酸化窒素が血管活性物質であって、敗欠症性ショックを起こす生物学的 反応モディファイア−あるいは内毒素を与えられた動物の低血圧症の原因となる ことを観察した。この理論は、本発明者らが、腫瘍壊死因子を服用している患者 に低血圧が発症しているときには、窒素の血中濃度（酸化窒素の安定な分解生成 物）も上昇していることを観察したために、導き出されたものである。製剤には 、オルニチンまたはシトルリン、あるいはその両方を配合してもよい。既に敗血 症性ショック状態になってしまっているもの、病状が重篤であるもの、レスビレ −ターと全非経口栄養補給を継続使用しているものに、本発明の方法と製剤を用 いることにより、既に存在している敗血症性ショックあるいは低血圧症を悪化さ せることなく、栄養補給を行うことができる。
本明細書に言うｒＮＯＪなる略語は、酸化窒素ならびに血管活性を持つ他の窒素 酸化物類を意味するものとする。本発明のさらに他の実施態様における治療方法 では、患者に無アルギニン非経口製剤の治療有効量を投与すること、および酸化 窒素シンターゼを抑制するアルギニン類縁物質の治療有効量を投与することがら 成り立っている。
非経口製剤の投与と同時に、あるいは続いて、本発明のアルギニン類縁物質を投 与してもよい。最も好ましくは、アルギニン類縁物質の投与に先だって、非経口 製剤を生理アルギニン濃度を低下させるに充分な用量で投与する。
アルギニン類縁物質は、抗降圧効果さえあればどのような数でも本発明の治療方 法と併用することができるが、最も好ましいものとしては、Ｎ“−メチル−Ｌ− アルギニン、Ｎ″−アミノ−し−アルギニン、Ｎ″−二トローＬ−アルギニン、 またはこれらの混合物が挙げられる。最も好ましくは、本発明の治療方法に使用 するアルギニン類縁物質としてＮ″−メチル−Ｌ−アルギニンまたはＮ”−アミ ノ−Ｌ−アルギニンを選択する。
これらの特定類縁物質の治療有効量を、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ の範囲内に定めることができる。本発明をより厳格に規定する場合には、Ｎ”− メチル−Ｌ−アルギニンの治療有効量は、１０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ〜３０　ｍ 　ｇ　／　ｋ　ｇの範囲内であり、最も好ましくは約２０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ である。これらの用量範囲は、酸化窒素抑制作用をもつ他のアルギニン類縁物質 を本発明の実施に使用する場合にも適用することができる。
本発明の治療方法において、無アルギニン製剤はさらに、必須アミノ酸類および 非必須アミノ酸類の混合物を含有するものとしてもよい。必須および非必須アミ ノ酸類の混合物としては、下記で説明するものが挙げられる。この点においても 、この治療法に用いる非経口製剤は無アルギニンである。非経口製剤の薬学的に 許容し得る賦形剤のうち、最も好ましいものはリンゲル液または食塩水である。
このうちで、食塩水が最も好ましい賦形剤である。製剤には、動物の代謝上必要 される尿素サイクルの向上と維持を図るため、オルニチン（約１〜２ｇ／ｌ）お よび／またはシトルリンを添加してもよい。
本治療法のアルギニン類縁物質は通常の医学専門家に知られている経口、非経口 あるいは腸内など、どの投与経路によっても投与することができるが、静脈内（ ＩＶ）、腹腔内（ＩＰ）あるいは皮下などの非経口経路によって投与することが 最も好ましい。このうち、アルギニン類縁物質を静脈内投与、特にＩＶ一括投与 が最も好ましい。
非経口製剤の投与用量は、動物のアルギニン血漿濃度を下げるような、最も好ま しくは正常な生理濃度以下に抑えるような量であるべきである。例えば、アルギ ニン類縁物質の投与前に、本発明の製剤（無アルギニン）を非経口的に２時間に わたって継続して供給すると、動物のアルギニン血漿濃度を下げるのに充分であ る。この療法の最も好ましい形態においては、先ず製剤の非経口投与を完了した 後に、アルギニン類縁物質を非経口経路によって動物に投与する。これに代わっ て、動物に対して前記非経口製剤の投与を継続しなが呟　それと同時に別個の治 療としてアルギニン類縁物質を投与することもできる。
本発明のさらに他の形態として、動物の低血圧症の治療方法を提供する。実施態 様の−では、この方法は、収縮期血圧が約１００ｍｍＨｇ以下の動物を確認し、 必須および非必須アミノ酸類の無アルギニン混合物からなる非経口抗降圧製剤を この動物に投与し、これと同時にまたはこの後に酸化窒素を抑制できるアルギニ ン類縁物質の治療有効量を投与し、少なくとも２４時間中この動物の血圧をモニ ターし、少なくとも約１゜ＯｍｍＨｇの収縮期血圧が検出されるまで前記動物に 製剤とアルギニン類縁物質の投与を継続することよりなる。収縮期血圧が１００ ｍｍＨｇ以下の動物の血圧の検出とモニターには、例えば、ヒトの血圧測定に用 いる血圧力フを使用する、または、動脈カテーテルを埋め込んで正変換機に接続 して（医学専門家には、「動脈線（ａｒｔｅｒｉａｌ　１ｉｎｅ）　Ｊとして知 られている）使用するといった、標準的な血圧モニター法によって行うことがで きる。
この方法によれば、最も好ましいアルギニン類縁物質としてはＮ”−メチル−Ｌ −アルギニン、Ｎ″−アミノ−Ｌ−アルギニン、Ｎ“−二トローＬ−アルギニン 、またはこれらの混合物が挙げられる。最も好ましくは、本発明の治療方法に使 用するアルギニン類縁物質としてＮ″−メチル−Ｌ−アルギニンを選択する。ま た、この方法の非経口抗降圧製剤は、最も好ましくは下記で説明する濃度の必須 および非必須アミノ酸類からなる。
アルギニン類縁物質としてＮ”−アミノ−Ｌ−アルギニンを選択する場合の治療 有効濃度は、好ましくは用量として約０　、１　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ　〜約１０ ０ｍｇ／ｋｇの範囲である。アルギニン類縁物質であるＮ″′−アミノ−Ｌ−ア ルギニンのより好ましい濃度範囲は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０　ｍ　ｇ　／　 ｋ　ｇである。アルギニン類縁物質であるＮ”−アミノ−Ｌ−アルギニンのさら により好ましい治療有効濃度は、約２０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇである。この方法 の最も最良の実施態様によれば、アルギニン類縁物質は静脈内に単回の一括投与 をおこなう。
本発明のさらに他の形態において、化学療法剤を投与されている動物の化学療法 剤に起因する低血圧症の治療方法を提供する。実施態様の−において、この方法 は、化学療法剤を投与されている動物をモニターして収縮期血圧が１００ｍｍＨ ｇ以下に低下することにより全身性低血圧症の動物を検出し、無アルギニン非経 口製剤を用いてこの動物を処置し、これと同時にあるいはこの後に酸化窒素シン ターゼを抑制できるアルギニン類縁物質を治療有効濃度で投与し、さらに収縮期 血圧が少なくとも約１００ｍｍＨｇに上昇したことが検出される時までこの動物 に治療法を継続することよりなる。
動物の血圧の検出とモニターは、血圧力フまたは前記の動脈線などの医学専門家 によ（知られている技術により実施する。
前記の方法は、化学療法剤を服用しているヒトについても使用することができる と考えられる。少な（とも全身性低血圧症発症の危険と関連がある化学療法剤の 例としては、腫瘍壊死因子、インターロイキン２およびインターロイキン１の単 独使用、またはインターフェロン類との併用、または化学療法剤間の併用が挙げ られる。
前記の方法の最も最良の形態において、無アルギニン非経口製剤は必須および非 必須アミノ酸類の混合物を共に薬学的に許容し得る賦形剤に溶解してなる。酸化 窒素産生を抑制できるアルギニン類縁物質をこの方法と併用する場合、治療有効 濃度は約０　、１　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ〜約１００　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇの範囲 である。前記の方法に用いるアルギニン類縁物質の範囲において、最も好ましく 且つ厳格に限定したものは約１０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ〜約３０　ｍ　ｇ　／　 ｋ　ｇである。最も好ましくは、アルギニン類縁物質の治療有効濃度は、約２０ 　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇの用量である。
前記の方法と併用する最も好ましいアルギニン類縁物質としては、Ｎ“−メチル −Ｌ−アルギニン、Ｎ“−アミノ−Ｌ−アルギニン、またはＮ″−二トローＬ− アルギニン、またはこれらの混合物が挙げられる。このうち、Ｎ”−メチル−Ｌ −アルギニンが特に最も好ましい。
本発明のさらに他の形態において、敗血症性ショックに合併する低血圧症の治療 法を提供する。この方法の実施態様の−においては、前記の無アルギニン非経口 製剤を治療有効量で動物に投与し、これと同時にあるいはこの後に酸化窒素シン ターゼを抑制できるアルギニン類縁物質の治療有効量を投与し、さらに少なくと も１００ｍｍＨｇの収縮期血圧が検出される時までこの動物に無アルギニン非経 口製剤の投与を継続する。
敗血症性ショックに合併する低血圧症の例としては、細菌性内毒素に起因する敗 血症ショックを持つ動物に見られるものが挙げられる。上記の方法により敗血症 性ショックに合併する低血圧症をもつ各種の動物を治療することができるが、こ の方法は同様の疾患をもつヒトに特に高い適用性があると考えられる。この方法 の特に最良の実施態様において、好ましいアルギニン類縁物質としては、Ｎ″− メチル−Ｌ−アルギニン、Ｎ“−アミノ−Ｌ−アルギニン、Ｎ″−二トローＬ− アルギニン、またはこれらの混合物が挙げられる。このうち、Ｎ″−メチル−Ｌ −アルギニンとＮ”−アミノ−し−アルギニンが最も好ましい。
本発明のさらに他の形態において、低血圧症をもつ動物、または低血圧症発症の おそれがある動物に栄養補給をする方法を提供する。この方法は、低血圧症を抑 制するに充分な濃度の酸化窒素シンターゼ阻害剤による治療と同時に、あるいは これに先だって栄養補給剤として無アルギニン非経口剤を動物に投与することか らなる。低血圧症発症のおそれがある対象の例としては、ショックに陥っている 、または何等かの外傷を経験した患者、内毒素物質あるいは降圧作用をもつ化学 療法剤に暴露された患者が挙げられる。
本発明の酸化窒素阻害剤は、より特定の名称として、酸化窒素シンターゼ阻害剤 と呼ぶことができる。
低アルギニン含量、もしくは実質的に無アルギニンの製剤からなるＴＰＮ処方と 、酸化窒素シンターゼ阻害剤による処方とを併用して、細菌性感染症患者の低血 圧症と敗血症ショックの危険を消滅させ得ないにしても、これを減少させること を提案する。ＴＰＮ製剤の投与を必要とする臨床治療の典型例としては、口から 栄養補給を受ける能力がないか、そのような能力が限られている癌患者その他の ための栄養補給が挙げられる。
ここで説明するし立体配座のＮ“置換アルギニン類縁物質のうち好ましいものの 例としては、Ｎ″−アミノアルギニン、Ｎ″−ニトロアルギニン、およびＮ″− メチルアルギニン、Ｎ“−二チルアルギニン、Ｎ″−プロピルアルギニンまたは Ｎ”−ブチルアルギニンなどのＮ″−アルキルアルギニン類が挙げられる。置換 または二置換アルギニン類縁物質は、治療有効量を投与することにより、動物ま たはヒトの体内でアルギニンがら酸化窒素が産生されるのを抑制するため、アル ギニンの降圧効果を弱化するのである。Ｎｏ・合成を裏付ける資料が蓄積されて はいるが、当業者にとっては、血圧低下活性をもつ窒素酸化物が他にも存在する 可能性があることが理解されている。
本発明においては、さらに酸化窒素合成に対するグアニジノ系阻害剤と、本発明 の無アルギニン非経口製剤とを併用することにより、低血圧症、敗血症性ショッ クおよびこれに関連する疾患を治療することが提案される。このグアニジノ系阻 害剤は、Ｌ−アルギニンよりも小さな分子（炭素原子５個以下の分子）がらなっ ている。本発明者らは、アルギニンより炭素が一個少ない炭素鎖長を持つグアニ ジノ基含有アミノ酸には、酸化窒素シンターゼ阻害剤としての作用がなく、一方 アルギニンより炭素が一個多い炭素鎖長を持つグアニジノ基含有アミノ酸は、弱 （はあるがある程度の酸化窒素シンターゼ抑制作用を示すことを見いだした。ま た、Ｌ−アルギニンより炭素が二個多い炭素鎖長をもつグアニジノ基含有アミノ 酸には、酸化窒素抑制作用がないことも分かった。さらに、本発明者らは、酸化 窒素合成（または、酸化窒素シンターゼ）を抑制するアルギニン類縁物質が、カ ルボキシル基またはもとのアルギニン分子のアミノ基が−っも無くとも、酸化窒 素シンターゼ抑制作用を保持できることを見いだした。
従って、本発明は、これらのグアニジノ系化合物を含む酸化窒素シンターゼ阻害 剤とアルギニン類縁物質を含む。これらのグアニジノ系化合物の例としては、ア ミングアニジン、およびアルキル基が炭素１〜３個をもつＮ６−アルキル−Ｎ６ −アミノグアニジン類が挙げられる。
本発明者らはさらに、抗ＴＮＦ抗体、坑内毒素抗体およびサイトカイン受容体拮 抗剤（例えば、ＩＬ−１受容体拮抗剤）と、無アルギニン製剤とを併用するとい う、敗血症性ショックとサイトカインに起因するショックを治療するための概念 的に異なる方法を提案する。無アルギニン製剤は、非経口製剤（静脈内投与）あ るいは経口製剤（腸内投与）として容易に入手することができる。非経口製剤の 最良の実施態様は、非経口処方からなる。
抗体と受容体拮抗剤は、初期の段階でサイトカインに対する病理反応に関与する 。従ってこれらの薬剤を最適に使用するには、ショック症状の発生を予期してい なければならない。内毒素またはサイトカインに対する生物学的反応が始まった 後に、これらの薬剤を投与すると重要な生物学的な作用に影響を与えるが、一旦 酵素が誘発されるとＮｏ合成を遮断しなくなってしまう。ＮＯ産生は、平滑筋細 胞で誘発されてしまうと、無すイト力イン培地に移しても、その後１６時間以上 継続する。このため、Ｎｏ合成が一旦始まってしまうと、抗体や受容拮剤により これを遮断したり、遅らせることが難しくなる。最近、グラム陰性菌血症に起因 する敗血症性ショック患者において内毒素に対してヒトのモノクロナール抗体が 効果を持つと考えられることが報告されており（Ｚｉｅｇｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ、 　（１９９１）　Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃ ｉｎｅ、　３２４：４２９）、その理由は、存在している心臓血管プロフィルが 直接改善されるからではなく、むしろサイトカイン媒介物質がさらに誘発するの を防止するがらであるとされている。これとは対照的に、本発明者らの研究では 、酸化窒素シンターゼ阻害剤の投与、あるいは酸化窒素シンターゼ基質の供給を 低下させる作用をもつように行う治療は、重篤なショックの場合であっても数分 以内に作用が発現することを示している。
酸化窒素シンターゼ阻害剤に対する反応が早（、また酸化窒素シンターゼ基質の 供給を制限するように行う治療に対する反応が早いことは、効力が沈降因子（ｐ ｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ）　（例えば、内毒素、Ｔ　Ｎ　Ｆ。
ＩＬ−１またはＪＬ−２）に依存しないことともに、臨床上重要であり、本発明 者らは本発明の治療法と併用療法において、これらの点に焦点を当てた。
本発明の形態の−では、治療有効量の無アルギニン製剤を投与すること、これと 同時にまたはこの後に、治療有効量の坑内毒素抗体を投与することからなる治療 方法を提供している。前記製剤はさらに、必須および非必須アミノ酸類の混合物 を共に薬学的に許容し得る賦形剤に溶解してなるものと定義されている。製剤は 、非経口用、腸内用いずれの剤形でも調製することができるが、非経口製剤が最 も好ましい。坑内毒素抗体は、ポリクロナール抗体、あるいはモノクロナール抗 体のいずれでもよい。しかしながら、この坑内毒素抗体は、モノクロナール抗体 であることが最も好ましい。このモノクロナール抗体の例としては、ＨＡ−ＩＡ が挙げられる。
治療方法に用いる非経口製剤は、ここにおいても、必須および非必須アミノ酸類 の混合物であるが、以下で説明する。
前記治療方法の最良の実施態様において、坑内毒素抗体の投与と同時に（時を同 じくして）、非経口製剤を投与する。最も特定的には、製剤の治療有効量は、動 物の血漿または血清中のアルギニン濃度を低下させるに充分な量と定義する。少 なくとも２時間の非経口静注により、無アルギニン製剤の静脈内補給を継続する ことによって、動物のアルギニンの血漿または血清濃度を低下させることができ ると期待される。この治療方法の好ましい実施形態としては、無アルギニン製剤 の投与と、坑内毒素抗体の投与とを同時に行うことが期待される。同時投与が好 ましい主な理由は、低血圧疾患を最も早く制御するように各種治療を行う必要が あることである。
坑内毒素抗体は医学専門家に知られている各種の経路により投与することができ るが、坑内毒素抗体を静脈内投与することが望ましい。
本発明のさらに他の形態において、治療有効量の無アルギニン製剤を投与するこ と、およびこれと同時にまたはこの後で治療有効量のインターロイキン１受容体 拮抗剤を投与することよりなる治療方法が提供される。この方法においても、非 経口製剤は必須および非必須アミノ酸類の混合物を共に薬学的に許容し得る賦形 剤に溶解してなると説明することができる。この治療方法の非経口製剤は、前記 で引用した濃度によりこれらのアミノ酸類を含有するものであるが、さらにオル ニチンとシトルリンのいずれが一方または両方を含有させてもよい。
インターロイキン１受容体拮抗剤の最も好ましい投与経路は静脈内投与である。
しかしながら、本発明の治療法の実施に当たって、他の経路により投与しても同 等の効果を得ることができる。本発明で用いる最も特に好ましいインターロイキ ン１受容体拮抗剤はＩＬｌｒａである。無アルギニン製剤をインターロイキン１ 受容体拮抗剤と同時に投与することが最も好ましい。
本発明にはさらに、治療有効量の無アルギニン製剤を投与すること、およびこれ と同時にまたはこの後に、治療有効量の抗腫瘍壊死因子抗体を投与することより なる治療方法が含まれている。この方法においても、無アルギニン非経口製剤は 、必須および非必須アミノ酸類の混合物を、共に薬学的に許容し得る賦形剤に溶 解してなり、抗腫瘍壊死因子抗体と同時に投与することが最も好ましい。この製 剤は非経口用あるいは腸内用のいずれでもよいが、非経口製剤であること最も好 ましい。
抗腫瘍壊死因子抗体は、モノクロナール抗体よりなるもの、ポリクロナール抗体 よりなるもののいずれでもよいが、抗腫瘍壊死因子抗体用のモノクロナール抗体 が最も好ましい。これらの抗体は、標準免疫プロトコルおよび／またはハイブリ ドーマ法を始めとする当業者に周知の方法で調製することができる。抗腫瘍壊死 因子抗体は、前記方法による市販製品を入手することができる。例えば、アムジ ェン・バイオロジカルズ社（Ａｍｇｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、　Ｔｈｏｕ ｓａｎｄ　０ａｋｓ、　Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ）からも抗腫瘍壊死因子抗体をめ ることができる。本発明の実施に用いる抗腫瘍壊死因子モノクロナール抗体の例 としては、エックスレーらがランセット誌で記述しているＣ　Ｂ　ＯＯＯ６（Ｅ ｘｌｅｙ　ｅｔ　ａｌ、　（１９９０）　Ｌａｎｃｅｔ、　３３５：１２７５− １２７７）が挙げられる。エックスレーらの引用文献は、特にこの目的のために 、引用することにより本明細書の一部とする。
前記治療方法に用いる抗腫瘍壊死因子抗体の治療有効量は、約０　、１　ｍ　ｇ 　、／　ｋ　ｇ　〜約２０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇの範囲であると考えられる。最 も好ましくは、抗腫瘍壊死因子抗体の治療有効量を約１０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ の用量で動物に与えることが期待される。抗腫瘍壊死因子抗体の最も好ましい投 与経路は、静脈内投与である。非経口製剤の投与と抗腫瘍壊死因子抗体の投与を 同時に実施し、且つアルギニンの血漿あるいは血清濃度を低下させるに充分な投 与量であることが最も好ましい。
動物のアルギニンの血漿または血清濃度を低下させるのに充分な無アルギニン非 経口製剤量は、本発明で説明する無アルギニン非経口製剤を少なくとも２時間静 注により補給することで達成することができる。。
この治療方法の最良の形態では、無アルギニン製剤の投与と、抗腫瘍壊死因子抗 体の投与は、同時に行う。
本発明のさらに他の形態において、敗血症性ショックに合併する低血圧症の治療 方法を提供する。この方法は、動物に治療有効量の杭内毒素抗体を投与すると同 時に、またはこれに先立って、治療有効量の無アルギニン製剤を投与し、その後 に動物の収縮期血圧が少なくとも１００ｍｍＨｇであることが検出されるまでこ の動物の血圧を定期的にモニターし、少なくとも１００ｍｍＨｇの収縮期血圧が 少なくとも２４時間維持されるまでこの動物に無アルギニン非経口製剤の投与を 継続することよりなる。この方法は、細菌性内毒素に起因する敗血症性ショック に合併する低血圧症の治療に最も好ましいものと期待される。無アルギニン製剤 は、非経口製剤として調製されることが最も好ましい。
この方法の杭内毒素抗体は、モノクロナール抗体、ポリクロナール抗体のいずれ でもよいが、内毒素に対するモノクロナール抗体が最も好ましい。杭内毒素モノ クロナール抗体の例としては、ＨＡ−Ｉ　Ａが挙げられるが、これについては後 述の実施例により詳細に説明する。この方法の杭内毒素抗体の治療有効量は、約 ０　、１　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ　〜２０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇの範囲内の濃度で ある。
この方法の他の形態として、化学療法剤に起因する低血圧の治療方法がある。こ の治療法は、化学療法剤を与えられている動物をモニターして収縮期血圧が約１ ００ｍｍＨｇ以下に低下するのを検出して全身性低血圧症の動物を検出し、アル ギニンの血漿または血清濃度を低下させるのに充分な治療有効量の無アルギニン 製剤からなる処方により全身性低血圧症の動物を治療し、これと同時にまたはこ の後に、治療有効濃度のインターロイキン１受容体拮抗剤または抗腫瘍壊死因子 抗体を投与し、収縮期血圧が少なくとも約１００ｍｍＨｇに上昇したことが検出 されるまで動物にこの治療方法を継続することよりなる。無アルギニン製剤は非 経口製剤であることが最も好ましい。この製剤は拮抗剤または抗体と同時に投与 することが最も好ましい。
この方法は、化学療法剤を服用し、低血圧症を発症しているヒトの治療に有用で あることが期待されている。血圧の降下、例えば低血圧症と関連する化学療法剤 の例としては、腫瘍壊死因子、インターロイキン１およびインターロイキン２が 挙げられる。
動物に投与されている化学療法剤が腫瘍壊死因子である場合、この治療方法では インターロイキン１受容体拮抗剤、例えばＩＬ　ｌｒａを投与する。反対に、使 われている化学療法剤がインターロイキン１またはインターロイキン２である場 合、この治療方法では抗ＴＮＦ抗体を使用する。
普通、既にＴＮＦを服用している患者では、抗ＴＮＦ抗体の使用を優先させるわ けにはゆかない。しかしながら、重篤で、しかも難治である低血圧症の場合、使 われている化学療法剤がＴＮＦであっても、抗ＴＮＦ抗体による治療と無アルギ ニンＴＰＮとの併用は有用である。治療の構成にこのような可能性を加えること は、難治の低血圧症疾患の治療戦略に役立つこととなる。
このように、インターロイキン１拮抗剤または抗腫瘍壊死因子抗体と併用する場 合でも、無アルギニン製剤は、前記の濃度によるアミノ酸類を共に薬学的に許容 し得る賦形剤に溶解してなる。前記の理由により、この製剤にオルニチン、シト ルリンのいずれか一方または両方を含有させてもよい。インターロイキン１受容 体拮抗剤の治療有効量は、より特定すると、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００　ｍ　ｇ 　／　ｋ　ｇの範囲であると定義することができる。この方法で用いる抗腫瘍壊 死因子抗体は、モノクロナール抗体であって、治療有効量は約０　、１　ｍ　ｇ 　／　ｋ　ｇ　〜約２０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇの範囲内である。
本発明はさらに、内毒素に暴露された動物の敗血症に起因する低血圧症の治療方 法を提供する。最良の実施態様の−においてこの方法は、アルギニンの血漿また は血清濃度を低下させるのに充分な治療有効量の無アルギニン製剤により動物を 治療し、これと同時にインターロイキン１受容体拮抗剤または杭内毒素抗体ある いはその両方を投与し、この動物の血圧をモニターし、少なくとも１００　ｍ　 ｍ　Ｈｇの収縮期血圧が検出されるまでこの動物に対して無アルギニン非経口製 剤の投与を継続することからなる。この製剤は非経口製剤であることが最も好ま しい。
本発明はさらに、内毒素が関連する敗血症性ショックまたはサイトカインが誘発 するショックをもつ動物の低血圧症の治療方法を提供する。この方法は、血漿ま たは血清中のアルギニン濃度を低下させるのに充分な治療有効量の無アルギニン 製剤を動物に投与し、この製剤の投与を治療有効量の抗腫瘍壊死因子抗体の投与 と同時にまたはそれに先だって行い、動物の血圧をモニターし、少なくとも１０ ０ｍｍＨＨの収縮期血圧が検出されるまでこの動物に対して無アルギニン製剤の 投与を継続することからなる。抗腫瘍壊死因子抗体は、モノクロナール抗体でも よいし、ポリクロナール抗体でもよいが、モノクロナール抗体であることが最も 好ましい。この方法においても、無アルギニン製剤は非経口製剤であることが最 も好ましい。
この方法の無アルギニン非経口製剤は、前記の含量のアミノ酸類を共に薬学的に 許容し得る賦形剤に溶解してなる。この方法においても、製剤にオルニチン、シ トルリンのいずれか一方または両方を含有させてもよい。この方法と併用する抗 腫瘍壊死因子抗体の治療有効量は、動物の体重に対して約０　、１　ｍ　ｇ　／ 　ｋ　ｇ〜約２０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇの範囲内の用量である。この範囲のうち 、抗腫瘍壊死因子抗体約１０ｍｇ／ｋｇが、無アルギニン非経口製剤と併用する 場合の降圧剤として最も効果的である。この様にすると、この方法はヒトの内毒 素が関連する敗血症性ショックまたはサイトカインが誘発するショックの治療に 有用であると期待される。
抗腫瘍壊死因子抗体またはインターロイキン１受容体拮抗剤は、医学専門家に知 られているどの経路によっても動物に投与することができるが、好ましくは静脈 内投与、最も好ましくは単独で一括投与する。この方法は、動物のサイトカイン が誘発するショックを治療する最良の実施態様となることが期待されている。
ＮＯ合成を裏付ける資料が蓄積されてはいるが、他にも血圧降下に活性を持つ窒 素酸化物が存在する可能性があることが当業者に理解されている。本明細書にお いて、Ｎｏなる略語は、酸化窒素その他の血管活性をもつ窒素酸化物を表すもの とする。
この開示の図面その他の箇所で用いられている略語の一部は、次の通りである。
Ａｃｈ＝アセチルコリン（ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌ　１ｎｅ）ＢＡＥＣ＝ウシ大動 脈内皮細胞 Ｂ、Ｐ、＝血圧 ＣＯ＝心拍出量 ＥＤＲＦ＝内皮誘導弛緩因子（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ−Ｄｅｒｉｖｅｄ　Ｒｅ １．ａｘｉｎｇ　Ｆａｃｔｏｒ）ＥＴ＝内毒素 ＧＰ−モルモット ＨＩＳＴ−ヒスタミン Ｉ　ＦＮ＝ガンマインターフェロン ＩＶ−静脈内投与 Ｌ−Ａｒｇ＝Ｌ−アルギニン ＬＰＳ−リポ多糖（内毒素） Ｌ−ＮＭＡ＝Ｌ−ＮＭＭＡ −Ｎ−メチルーＬ−アルギニン ＭＡＰ−平均動脈圧 ＭＢＥＣ＝ネズミ脳内皮細胞（ｍｕｒｉｎｅ　ｂｒａｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａ ｌ　ｃｅｌｌｓ）ＮＡＡ＝Ｎ＝−Ｌ、−７ミ／−Ｌ−フルギニンＮＮＡ＝Ｎ”− 二トローＬ−アルギニンＮＯ＝酸化窒素 ＰＡＦ＝血小板活性因子 （Ｐｌａｔｅｌｅｔ　Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　Ｆａｃｔｏｒ）ｐｐｓ＝血小板が 不足した血漿誘導血清（Ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｐｏｏｒ、　ｐｌａｓｍａ−ｄｅｒ ｉｖｅｄ　ｓｅｒｕｍ）ＳＡＰ＝全身動脈圧 ＳＮＰ二ニトロプルシドナトリウム （ｓｏｄｉｕｍ　ｎ１ｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅ）ＳＶＲ＝全身血管抵抗 ＴＮＦ＝腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ　Ｎｅｃｒｏｓｉｓ　Ｆａｃｔｏｒ）ＴＰＮ ＝全非経口栄養 （Ｔｏｔａｌ　Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ　Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）］【度車重１ 盈１ 図１は、ＩＬ−１のイヌへの投与に起因する低血圧症の逆転を示す図である。実 験は４回繰り返し、そのうちの典型的な実験の記録を示したものである。イヌは 麻酔を施して後述のインキュベーターに入れ、心臓血管データを３０分間モニタ ーして、基線値を測定した。イヌのアル１こン１　ｍ　ｇ　／　ｍ　ｌを含むフ ォスフェート緩衝食塩水（ｐＨ７，４）にＩ　Ｌ　−１を溶解して、溶液を３分 間静脈内に注入することにより用量５０μｇ／ｋ　ｇを送りだした。平均血圧を 連続的にモニターした。血圧が最低点に達し安定に維持されたとき、または平均 血圧が５０ｍｍＨｇ以下になったとき、ＮＡＡ（フォスフェート緩衝食塩水１０ ｍ１中で２０ｍｇ／ｋ　ｇ）を３０秒間静脈内に注入した。平均血圧が基線以上 に回復しその後６０分が経過したとき、Ｌ−アルギニン（４００ｍ　ｇ　／　ｋ 　ｇをフォスフェート緩衝食塩水２０ｍ１に溶解）を５分間ゆっくりと静脈内に 注入した。ＩＬ−１（５０ｎｇ／ｋ　ｇ）を投与したイヌに進行性のやや重篤な 低血圧症が発症し、平均血圧が３時間以内に基線値の１１１±７ｍｍＨｇから８ ０±２ｍｍＨｇにまで低下した。ＮＡＡ　（２０ｍｇ／ｋ　ｇ。
８８ｎｍｏｌ／ｋｇ）を静脈内に一回で一括投与したところ、低血圧は急速に逆 転し平均血圧は４６±９ｍｍＨｇ（５８％）から１２５±８ｍｍＨｇに上昇した 。
図２Ａ、２Ｂ、２Ｃは、ＩＬ−１が活性化したＮ。
産生がＮ°置換アルギニン類縁物質によって抑制されたことを示す図である。
図２Ａは、ＮＡＡＳ　ＮＭＡとＮＮＡのＬ異性体およびＮＭＡのＤ異性体の各々 による、平滑筋細胞の亜硝酸塩合成の抑制を比較する図である。
図２Ｂは、培養基内のアルギニン濃度を変化させて、ＮＡＡによる平滑筋細胞の 亜硝酸塩合成の抑制が濃度依存性であることを示す図である。平滑筋細胞の集密 的ｍ層を９６ウエルのマイクロタイター（ｍ１ｃｒｏｔｉｔｅｒ）プレートにお き、１１００ｎ／ｍｌのＩＬ−１と５０ｎ　ｇ　／　ｍ　！のＩＦＮ−γとの合 剤で２４時間処理した。
細胞をハンクス液で洗い、表に示す濃度のアルギニンを含む新鮮な培地を加えた 。点は、１６時間アルギニン類縁物質（ｎ−３〜４）に暴露した間の、亜硝酸塩 の産生を示すもので、コントロールに対するパーセントを平均値±ＳＤ（標準偏 差）として表している。
図２０は、平滑筋細胞のＮｏシンターゼに対するＮＡＡの効果を示す図である。
サイトカインに感応させた平滑筋細胞（プロティン、約２μｇ）から細胞質ゾル をとり、Ｌ−アルギニン　１ｍＭ、ＮＡＤＰＨ０゜５ｍＭ、ジチオトレイトール 　１ｍＭ、フラビンアデニンジヌクレオチド　１０ｎＭ１　テトラヒドロビオプ テリン　１０ｎＭ１　および、ジヒドロプテリジンレダクターゼ　０．ＩＵ／ｍ ｌの混合物を総量１００μＬとしたものと共にインキュベートした。ＮＡＡ　３ ００μＭの存在下（＋ＮＡＡ）または不存在下（コントロール）でｐ　ｅ　２　 ＋　ミオグロビン酸化の経時変化を測定した。本発明者らは、ミオグロビン酸化 がＬ−アルギニンとＮＡＤＰＨに対して絶対的な依存性を示すことを観察した。
この実験は３回繰り返して実施し、そのうちの典型的な実験を示したものである が、図中の点はＮｏ合成速度の経時変化である。
図３は、ＴＮＦで治療したイヌの軽度の低血圧症に、ＮＭＭＡとＬ−アルギニン を連続投与したときの効果を示す図である。
図４Ａは、ＴＮＦで治療したイヌの重篤な低血圧症に、ＮＭＭＡとＬ−アルギニ ンを連続投与したときの効果を示す図である。
図４Ｂは、治療しないイヌにＮＭＭＡを投与したコントロール実験を示す図であ る。
図４０は、ニトログリセリンに起因するイヌの低血圧症に対するＮＭＭＡの効果 を示す図である。
図５は、ベンドパルビタールによる麻酔を施したイヌに、内毒素（ＬＰＳ、リボ 多糖）（ＥＴ）、Ｎｏ−メチル−Ｌ−アルギニン（Ｌ　−ＨＭ　Ａ　）、および Ｌ−アルギニン（Ｌ−Ａｒｇ）を静脈内投与したときの、全身動脈圧（ＳＡＰ） の経時変化を示す図である。
図６は、ベンドパルビクールによる麻酔を施したイヌに、内毒素、Ｌ−ＮＭＡ　 （２回投与）、およびＬ−Ａｒｇを静脈内投与したときの、全身動脈圧（ＳＡＰ ）の経時変化を示す図である。
図７は、イヌのＴＮＦに起因する全身性低血圧症の経時変化と、Ｎｏ−アミノア ルギニンによる逆転を示す図である。
図８は、内毒素に起因する全身性低血圧症がＮｏ−アミノアルギニンによって逆 転したことを示す図である（３回投与）。
図９は、培養基中において、ラットの大動脈平滑筋細胞の亜硝酸塩産生をＩＬ− １が活性化することを示す図である。
図９Ａは、ＩＬ−１４０ｎｇ／ｍＬ単独（白ヌキ丸）で、および、ＩＦＮ−７５ ０ｎｇ／ｍｌの存在下（白ヌキ三角）で、誘発した亜硝酸塩合成の経時変化を示 す図である。ＩＬ−１の不存在下ではＩ　ＦＮ−γは亜硝酸塩の産生を誘発しな かった。ＩＬ−１、およびＩＬ−１とＩＦＮ−γとによって亜硝酸塩の産生を刺 激し、培養基中にＩＬ−１受容体拮抗剤（４０ｎｇ　／　ｍ　Ｌ、黒い記号）を 滴下するといずれの場合も産生を抑制した。
図Ｂは、平滑筋細胞の亜硝酸産生がＩＬ−１濃度依存性であることを示す図であ る。図中の点は、図中に示す濃度のＩＬ−１単独（白ヌキ丸）、およびＩＬ−１ とＩＦＮ−７５０ｎｇ／ｍＬ（白ヌキ三角）の存在下で２９時間インキュベート して産生じた亜硝酸塩を示している。集密的平滑筋細胞単層を９６ウエルのマイ クロタイタープレート（ウェル−個につき細胞６０〜８０Ｘ１０３個、ｎ　＝　 ３〜４　）で増殖して亜硝酸塩の産生を行った。この場合の数値はすべて平均値 ±Ｓある種のサイトカインなどの生物学的反応モデファイアーの臨床試験の結果 、これらのモデファイアーを投与する際に、服用量を制限する主な毒性は、低血 圧であることが分かってきた。亜硝酸塩は酸化窒素から豊富に、自然に生成され る酸化産物で、アッセイが容易であり、従って本発明ではこれを利用して酸化窒 素産生の分析を行う。酸化窒素（Ｎｏ）は反応性が高い化合物で、培地中で自然 に硝酸塩と亜硝酸塩とに分解する。
ＩＦＮ（１００Ｕ／ｍｌ）　は、　ＴＮＦ　（５００Ｕ／ｍ　Ｉ　’）またはＩ Ｌ−１（ＩＯＵ／ｍｌ）または内毒素（１μｇ　／　ｍ　Ｉ　）のいずれかと組 み合わせて、ネズミの脳内皮細胞（ＭＢＥＣ）を誘発して、４８時間以内に亜硝 酸塩を培地に蓄積する（１５〜８０μＭ）ようにさせることができるとの所見を 本発明者らは得た。
本発明はこの所見を実用化するものである。ＴＮＦ、ＩＬ−１または内毒素単独 では最小量の亜硝酸塩類（１〜３μＭ）の産生しか誘発しないことも認められて いる。
前記化合物を投与すると生体内において低血圧症が発現するのは、内皮細胞が酸 化窒素などの血管活性因子を放出することが役割を果たしているとも考えられる 。本発明は、培養されているネズミの脳内皮細胞がサイトカイン類の各種組合せ に反応して酸化窒素を産生ずることと、および低血圧症と心臓血管虚脱の病理生 理学上の原因におそらく酸化窒素が役割を果たしていることとに関するものであ る。
本発明者らは、無アルギニン培地では、ネズミ脳内皮細胞がＴＮＦやＩＦＮに暴 露されることと、亜硝酸塩類の濃度の上昇とには関連がないことを見いだした。
ネズミ脳内皮細胞を培養している培地にＬ−アルギニンを添加すると、亜硝酸塩 濃度が用量依存性の上昇をすることも認められた。本発明者らはさらに、培養し ているマウス内皮細胞を免疫モジュレータ−と内毒素に暴露すると亜硝酸塩が蓄 積することを見いだした１７゜本発明は、酸化窒素の合成を低下させることによ って、低血圧症ならびに敗血症性ショックを抑制または防止する方法に関する。
さらに詳しくは、この方法は、無アルギニン非経口製剤を投与することにより、 血清中のアルギニン濃度を低下させようとするものである。
アルギニンは酸化窒素を生成する基質であるから、血清アルギニン濃度が下がれ ば酸化窒素の合成も低下すると考えられる。最近にいたり、本発明者らは酸化窒 素がＬ−アルギニンから誘導されることを示した。
酸化窒素は低血圧症と敗血症性ショックの発症と結び付（強力な血管活性物質で ある。本発明によれば、アルギニンの血清濃度と酸化窒素の合成を制御すること によりこれら疾患を抑制予防することが提案される。
本発明においては、動物の血清アルギニン濃度をゼロにしたり、低下させること によって酸化窒素を減少させる。降圧効果を持たない非経口製剤のアルギニン含 量を０．１％以下におさえたものを動物に与えることによって、動物の血清アル ギニン濃度を低下させる。
本発明の製剤の特定実施態様においては、動物の尿素サイクルが必要とする基質 を補給するため、オルニチンとシトルリン、オルニチン単独またはシトルリン単 独を配合している。
本発明の説明において用いる「細胞増殖抑制性（ｃｙｔｏｓｔａｔｉｃ）Ｊなる 語は、活発な細胞分裂が行われていないことを特徴とする細胞の生理状態として 定義する。
従って、「細胞増殖抑制」状態の細胞培養物または細胞群では、活発に分裂して いない、つまり増殖が抑制されている（即ち、事実上細胞増殖していない）。
「抗降圧性（ａｎｔｉ−ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｖｅ）Ｊおよび「非降圧性（ｎｏｎ −ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｖｅ）　Ｊなる語は、本発明の説明に使用する際は相互に 互換できるものとする。これらの語は、製剤の性格がアルギニン濃度を下げて血 清中のアルギニンを減らすことによって低血圧症の発症を抑えるものであること を示そうとするものである。
本発明において用いる［昇圧（ｐｒｅｓｓｏｒ）ｊ剤なる語は、動物に投与した とき血圧が上昇する薬剤を指す。　「昇圧」剤の例としてはフェニレフリンが挙 げられるが、他の昇圧剤でも本発明で説明する系で同様の効果を示すものと思わ れる。他の昇圧剤の例としては、ドーパミン、エピネフリン、ノルエピネフリン 、およびフェニレフリンが挙げられる。
本発明はさらに、敗血症性ショック、またはＴ　Ｎ　Ｆ。
ＩＬ−１あるいはＩＬ−２などの化学療法剤による治療に伴う低血圧症を治療す るのに有用な独特の処方を提供する。本発明ではこの処方について各種の治療法 と製剤を説明するが、このうちには無アルギニン非経口製剤を投与することが挙 げられる。これは、先ずこの製剤を動物に投与し、同時にあるいはその後で酸化 窒素産生を抑制することができるアルギニン類縁物質によって治療を行うもので ある。酸化窒素産生を抑制できる薬剤としては、酸化窒素シンターゼを抑制する アルギニン類縁物質、およびＮＭＡ、ＮＡＡ、ＮＮＡとこれらの混合物を挙げる ことができる。
ヒト組替えＩＬ−１α（以下ＩＬ−１と言う、比活性は、リンパ球活性因子単位 で２ｘｌＯ’／ｍｇ）は、大日本製薬株式会社製で、国立癌研究所（Ｎａｔｉｏ ｎａｌＣａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）から提供された。ヒト組替えＩＬ− １受容体拮抗剤は、シナ−ジエン社製（Ｓｙｎｅｒｇｅｎ。
Ｃｏ、　）で、これはヨーネル大学医学部外科学科（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏ ｆ　Ｓｕｒｇｅｒｙ、　Ｃｏｒｎｅｌｌ　Ｌｌｎｖｅｒｓｉｔｙ　Ｍｅｄｉｃａ ｌ　ＣｏｌＣｏ１１ｅのライル・モルダワ−（Ｌｙｒｅ　Ｍｏｌｄａｗｅｒ）お よびステファン・ロウリ−（５ｔｅｐｈｅｎ　Ｌｏｗｒｙ）両博士から提供され た。ラットのインターフェロンγは、アムジェン・バイオロジカルズ社（Ａｍｇ ｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、　Ｔｈｏｕｓａｎｄ　０ａｋｓ、　ＣＡ　）か ら入手した。
Ｎ１−メチル−Ｌ−アルギニン（ＮＭＡ）およびＮＡＡと塩酸塩は、グロスら（ Ｇｒｏｓｓ　ｅｔ　ａｌ、　、　１９９０）　（旧ｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙ ｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、、　１７０：９６−１０３）およびコルビン（ Ｃｏｒｂｉｎ）　（Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　、　５７：３１０−３１２ ）の報告に従って合成した。これら二つの文献はこの目的のために引用すること により特に本明細書の一部とする。生化学試薬は、特に別設の記載がない限り、 すべてシグマ・ケミカル社（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、　Ｓｔ。
Ｌｏｕｊｓ、　！１０）製である。細胞培養用の培地と試薬は、特に別設の記載 がない限り、ウィッチカー・バイオプロダクツ社（Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ　Ｂｉｏ ｐｒｏｄｕｃｔｓ、　Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、　ＭＤ）製である。
マウスＡ３７５黒色腫細胞は、テキサス大学医学部アンダーソン癌センター（Ｔ ｈｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ＴｅｘａｓＭ、　Ｄ、＾ｎｄｅｒｓｏｎ　 Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅｎｔｅｒ）のＥ、フレイナーマン（Ｅ、　Ｋｌｅｉｎｅｒｍ ａｎ）博士がら提供された。細胞は、ヘペス（ｔｌＥＰＥｓ）緩衝液（ｐＨ７， ４）　１０　ｍＭとウシ胎児血清１０％を含むダルベツコ改良型イーグル培地（ ＤｕｌｂｅｃＣＯｏｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　ｍｅｄｉｕｍ）および ハムスピー１２培地（Ｈａｌｓ　Ｆ−１２ｍｅｄｉｕｍ）に保持した。すべての 組織培養試薬には、リムルス・アメポサイト試験（ｌｉｍｕｌｕｓａｍｅｂｏｃ ｙｔｅ　、ａｓｓａｙ）で測定して、内毒素０．２５　ｎ　ｇ／ｍ１を加えた。
ネズミＤＩＯＴ細胞（Ｍｕｒｉｎｅ　ＤＩＯＴｃｅｌｌｓ）はアメリカン・タイ プ・カルチュアー・コレクショ７　（Ａｍｅｒｉｃａｌｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔ ｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、　Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）から入手Ｌ　ｆ 、−０大動脈平滑筋細胞は、フィシャ−（Ｆｉｓｃｈｅｒ）　３４４ラツトの雄 の成獣から大動脈を採取し、中間層の外植片を作って培養した。大動脈は無菌的 に採取し、管腔の内外表面を掻爬して外皮細胞と内皮細胞を取り除いた。中間片 をブリマリア（Ｐｒｉｍａｒｉａ）　２５　ｃ　ｍ　’組織培養フラス］　（Ｂ ｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、　Ｌｉｎｃｏｌｎ　Ｐａｒｋ、　ＮＪ）に付 着させて、増殖培地で湿気を与えながら細胞が出現するまで放置した。ウシ胎児 血清１０％、ヘペス緩衝液（ｐｔ１７．４）　２５　ｍＭ、Ｌ−グルタミン２ｍ Ｍ、内皮細胞増殖助剤４０　ｕ　ｇ　／　ｍ　Ｉ　（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｔ ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ、、　Ｓｔｏｕｇｈｔｏｎ、　ＭＡ）を培地１ ９９に含ませ、これを週二回前記培養物に添加した。初代培養が集密的になると 、トリプシン処理して継代を行い、外植片は捨てた。本発明の実験においては、 継代１２〜１４から細胞を取り、９６ウエルのプレートに２０，０００個／ウェ ルの割合で接種、集密的となった細胞（６ｏ。
０００〜８０，０００個／ウェル）を使用した。これらの細胞は、丘と谷からな る形態を示す古典的なＳＭＣ表現を呈し、平滑筋アクチンで陽性の染色を示した 。
１１土展ｌλ ９６ウエルのマイクロタイタープレートに置いたラットの大動脈平滑筋細胞を、 ３−　（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラ ゾリウムブロマイド（３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈａｚｏｌ−２−ｙｌ ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ：　Ｍ ＴＴ）　０　、２　ｍ　ｇ　／　ｍ　＋を含むＲＰＭＩ−１６４０培地中で９６ 時間インキュベートし、これをハンクス液で洗い、ジメチルスルフオキシド１０ ０μｌで可溶化した。細胞内でホルマザンに対してＭＴＴが減少する量を、５５ ０ｎｍの吸光度（ＯＤｓｓｏ）を測定して定量し、これを細胞呼吸の指標とした 。この検定方法は、クロスチルガードら（Ｋｌｏｓｔｅｒｇａａｒｄ　ｅｔ　ａ ｌ、　（１９８７）　）によって詳細に説明されている（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、 　Ｍｅｔｈｏｄｓ、　１０１：９７−１０８）。この文献は、この目的のために 、引用することにより特に本明細書ＩＬ−１依存性のＴ細胞系であるネズミＤ１ ０細胞を用いてＩＬ−１のミトゲン活性を測定した。ＩＬ−１の存在下で細胞を 増殖させて、バクーシエら（Ｂａｋ。
ｕｃｈｅ　ｅｔ　ａｌ、、　（１９８７）　）の報告（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、 　、　１３８：４２４９−４２５５）に従って［３Ｈ］チミジンを組み入れてこ の増殖を分析した。この文献は、この目的のために、引用することにより特に本 明細書の一部とする。
ＩＬ−」ｂ＜　−１，ｆ、：、　ＩＩ　（７）」良シとＡ３７５腫瘍細胞をウェ ル当り６０００個の密度で９６ウエルのマイクロタイタープレートに置いて、Ｉ Ｌ−１が誘発する細胞毒性の試験を行った。−晩付着したままで放置した後、Ｎ ＡＡまたはＮＭＡの存在下、あるいは不存在下でＩＬ−１（３〜３００ｎｇ／ｍ ｌ）を添加した。細胞を３日間インキュベートし、その後２時間「３Ｈ］チミジ ンを添加した（ウェル当り１μＣ１）。細胞を採取して、グラスファイバー製の ディスク　（ＰＨＤ　Ｃｅ１ｌ　Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ；　Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ　 Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、　Ｉｎ（、、Ｗａｔｅｒｔｏｎ、　ＭＡ）に入れた。皿 は一晩自然乾燥し、放射能を１９００ＴＲモデルのシンチレーションカウンター （Ｐａｃｋａｒｄ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、　Ｄｏｗｎｅｒ ｓ　Ｇｒ。
ｖｅ、　ＩＬ）で測定した。
王」Ｌ筋−藍盈皮ｊ　−ムＪの−と ラット大動脈平滑筋細胞をＲＰＭＩ−１６４０培地と共にインキュベートした。
この培地には、子ウシ血清１０％、ヘペス緩衝液（ｐＨ７，４）　２５　ｍ　Ｍ ｌ　グルタミン２ｍＭ１　フンギシン８０Ｕ／ｍｌ、さらに図の註に示す濃度の ＩＬ−１、ＩＦＮ−γおよび各種の阻害剤を含有させた。９６ウエルのマイクロ タイタープレートの読取り器にあわせた標準グリース検定（５ｔａｎｄａｒｄＧ ｒｉｅｓｓ　ａｓｓｅｙ）”により、所望の時期に培養液中の亜硝酸塩濃度を測 定した。グリース検定法について、グロスら（Ｇｒｏｓｓ　ｅｔ　ａｌ、　（１ ９９１））　ｓ７の詳細な説明があるが、この文献は、この目的のために、引用 することにより特に本明細書の一部とする。このようにしておいて、グリース試 薬（スルファニル酸０．５％、ナフタレンジアミン０．０５％、リン酸２．５％ ）１００μＬを等量の培養液に加え、ＯＤ６．。を測定して、亜硝酸塩濃度の標 準曲線を作図した。細胞の不存在下でインキュベートした培地のバックグラウン ド０Ｄ５−ｏは、実験値からラット大動脈平滑筋細胞をＲＰＭＩ−１６４０培地 と共にインキュベートした。この培地には、子ウシ血清１０％、へペス緩衝液（ ｐＨ７，４）　２５　ｍ　Ｍ、グルタミン２ｍＭ、ペニシリン８０μｇ　／　ｍ 　Ｉ、ストレプトマイシン８０μｇ　／　ｍ　Ｉ、フンギシン２μｇ　／　ｍ　 Ｉ、リポ多糖（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　０１１１：Ｂ４）　３０　 ｕ　ｇ　／　ｍ　Ｌおよび５００／ｍｌのＩＦＮ−γを含有させた。２４時間後 細胞を採取し、前記のグロスらの論文（１９９１）４１と同様にして細胞質ゾル を調製した。細胞質ゾルの酸化窒素シンターゼ活性を前述のＦｅ２′″ミオグロ ビン法により検定した。
ＩＬ−１が０　したイヌの氏　圧症の１マイクロフイラリア（ｍ１ｃｒｏｆｉｌ ａｒｉａ）がなく、体重各々２５〜２８ｋｇの雑種の健康なイヌを用いて実験を 行った。プロトコルはすべて、テキサス大学動物福祉委員会（Ｔｈｅ　Ｕｎｉｖ ｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｘａｓ　Ａｎｉｍａｌ　ＷｅｌｆａｒｅＣｏ＋＋＋ｍ １ｔｔｅｅ）によって承認されており、また動物の管理モ「実験動物の管理使用 指針Ｊ　（Ｇｕｉｄｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｃａｒｅ　ａｎｄ　Ｕｓｅ　ｏｆ　Ｌ ａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ａｎｉｍａｌｓ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＨｅａｌ ｔｈ、　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｗｅｌｆａｒｅ、　Ｇｕｉｄｅ　ｆｏｒ 　ｔｈｅ　Ｃａｒｅ　ａｎｄ　Ｕｓｅ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ａｎｉｍ ａｌｓ　Ｐｕｂ、Ｎｏ、７８−２３゜Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、　ＤＣ，Ｈｅａｌ ｔｈ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　（１９７８）　）に定めているすべての基準を満 足していた。イヌを一晩断食させた後、ベンドパルビタール（２５ｍｇ／ｋｇ１ 静注）で麻酔、口腔気管的にインキュベートし、動物用レスビレ−ター（Ｈａｒ ｖａｒｄ　Ａｐｐａｒａｔｕｓ、　５ｏｕｔｈ　Ｎａｔｉｃｋ、　Ｍ＾）により 換気を行った。このレスビレ−ターは、大気を用い、１５　ｍ　ｌ　／　ｋ　ｇ の一回換気量で、毎分１４回の呼吸速度で、通常のｐＨとＣｏ２圧に調整した。
カテーテルを経皮的に大腿動脈に接続し、流れ方向熱希釈カテーテル（ｆｌｏｗ −ｄｉｒｅｃｔｅｄ　ｔｈｅｒａ＋ｏｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｃａｔｈｅｔｅｒ）を 頚静脈を通して挿入し、遠位の開口部が肺動脈中に入る位置に置いた。平均動脈 圧（ＭＡＰ）、心拍数、心拍出量および全身血管抵抗を、キルボーンら（Ｋ１１ ｂｏｕｒｎ　ｅｔ　ａｌ、　（１９９０）　Ｂｉｏｃｈｅｉ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ 、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、。
１７２：１１３２〜１１３８）の報告と同様にして測定した。この文献は、引用 することにより本明細書の一部とする。
本発明で説明する各種の治療方法において、低血圧症を典型的な合併症とする各 種疾患を治療する新規な、より効果的な方法を提供する。例えば、低血圧症は特 色として敗血症患者とある種の化学療法剤（ＴＮＦ。
インターロイキン１１　インターロイキン２）を服用する患者に発現する。無ア ルギニン非経口製剤と、坑内毒素抗体、抗腫瘍壊死因子抗体、および／またはイ ンターロイキン１受容体拮抗剤との創意的な組合せにより、生命を脅かす低血圧 症を発現することなく動物に化学療法剤を使用することができる。
組替えＩＬ−１やＴＮＦは、アムジエン社（Ａａ＋ｇｅｎ。
Ｔｈｏｕｓａｎｄ　０ａｋｓ、　Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ）から入手することがで きる。これら抗原に標準的な免疫法を適用して、これたの抗原に対するポリクロ ナール抗体を得ることができる。一方、免疫動物から牌臓その他の組織をとり、 無限増殖性細胞系（ｉｍｍｏｒｔａｌ　ｃｅｌｌ　１ｉｎｅ）と融合させてハイ ブリドーマ細胞系を作ることができる。ハイブリドーマから各抗原に特異的なモ ノクロナール抗体を得ることができる。
全身性敗血症を持つ患者あるいは動物におけるなどの低血圧症を治療する本発明 の詳細な説明において、つぎの症状のモニターを実施する。すなわち、熱または 低体温症（体温が３８．３℃［１０１’Ｆ］より高い、または、３５．６℃［９ ６°Ｆ］未満）、頻脈（β遮断の不存在下で、拍動毎分が９０回を越える）およ び頻呼吸（呼吸数が毎分２０回を越えるか、または機械的換気が必要である）や 、さらに、つぎの二つのうちのいずれか、即ち低血圧症［収縮期血圧≦９０　ｍ 　ｍ　Ｈｇ、あるいは、適当な液体投与（ａｄｅｑｕａｔｅ　ｆｌｕｉｄ　ｃｈ ａｌｌｅｎｇｅ）下および抗昇圧剤の不存在下において収縮期血圧が連続して４ ０ｍｍｔ（ｇ以上下がる状態］、または、全身毒性あるいは過少潅流（ｔ＋ｙｐ ｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）を示す次の６つの徴候のうちの二つの徴候、すなわち、 説明できない代謝性アシド−シス（ｐＨ≦７．３とリットル当り〉５ミリモルの 塩基不足、または血漿乳酸塩濃度が上昇する）、動脈性低酸素血症（酸素分圧≦ ７５ｍｍＨｇまたは呼息酸素分画に対する酸素分圧の比が〈２５０）、急性腎不 全（１時間当り体重１ｋｇにつき、腎排泄量０５ｍ１以下）、プロトロンビンま たは部分トロンボプラスチン時間の増加（ｅｌｅｖａｔｅｄ　ｐｒｏｔｈｒｏｍ ｂｉｎ　ｏｒ　ｐａｒｔｉａｌ−ｔｈｒｏｍｂｏｐｌａｓｔｉｎ　ｔｉｍｅ）、 あるいは血小板数が基線値の半分以下または１　ｍｍ３当り１００，０００個以 下に減少すること、精神明瞭度が急に低下すること、および８００ダイン秒／　 ｃ　ｍ　Ｓ以下の全身性血管抵抗を伴う４リットル／分／ｍ２以上の心係数。
本発明はある程度の特異性をもって説明されており、従って以下に述べる開示に より多くの代案、改良および変造が可能であることは当業者にとって明白である 。
従ってこのような代案、改良および変造はすべて、本発明の精神と範囲にはいる ものとして、本発明の請求の範囲に含めるものとする。
本発明の最良の実施態様と有用性を次の実施例により説明するが、特にその旨を 述べている場合を除き、この実施例をもって本発明の請求の範囲を限定するもの と解釈してはならない。
実」１医」２ アルギニン　と　の相　、 本実施例により、血漿アルギニン濃度と血圧との相関関係を説明する。詳しくは 、内毒素で処理した動物では、血漿アルギニン濃度が下がると、血圧が上昇する 相関関係を証明する。
本実施例はさらに、酸化窒素合成を防止または低下させることによって血圧を上 昇させる、無アルギニンまたは低アルギニン含量の非経口製剤を使用する効用を 証明する。本発明はさらに、無アルギニン非経口製剤と、アルギニン類縁物質で あるＮＭＡＳ　ＮＡＡ、ＮＮＡやその合剤などの酸化窒素シンターゼ阻害剤とを 動物に連続使用し、しかもこの場合アルギニン生理濃度が正常値以上の動物が必 要とするよりもはるかに低い用量のアルギニン類縁物質を用いることによって、 両成分の抗降圧効果を増幅させる方法を提供する。生体内でＮＡＡその他の酸化 窒素阻害剤を単独で用いる場合の昇圧効果についてもこの開示中で説明する。こ の方法により、サイトカインが誘発する低血圧症や敗血症性ショックの典型的な 随伴症状である生命を脅かすほどの低血圧の発現を防止したり、軽減することが できる。この方法により、低血圧症や敗血症性ショックの典型的な随伴症状であ る生命を脅かすほどの低血圧の発現を防止したり、軽減することができる。
酵素のアルギナーゼを用いてスプラグ・ドーリ一種（Ｓｐｒａｑｕｅ−Ｄａｗｌ ｙ）のラット（ラット１匹当りの体重＝２５０〜３００　ｇｍ）の血漿アルギニ ン濃度を低下させた。アルギナーゼは、Ｌ−アルギニンを不可逆的にＬ−オルニ チン＋尿素に転換する酵素である。ラットはエチルエーテルで麻酔を施して、シ ラプレーとチルデン（Ｓｈｉｐｌｙ　ａｎｄ　Ｔｉ１ｄｅｎ）　”の方法により 脳を髄を穿刺した。血圧の神経学的制御を避けるため、脳を髄の穿刺はこの実験 の開始前に実施した。
アルギナーゼは滅菌食塩水（１０００１，Ｕ、　／　ｍｌ）に溶解し、３００１ ．Ｕ、／ｍ　ｉ　ｎの速度で２０分間静脈内に注入した。１１．Ｕ、は、１分に つきアルギニン１μｍ０１を生成物に転換するのに必要なアルギナーゼの量を言 う。既に報告されている１２のと同様にして、頚動脈にカテーテルを埋め込み、 これに圧変換器を接続して血圧を測定した。
１１Ｌｙ”Ｆ’二之１遣 内毒素（１５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）に暴露した穿刺ラットと暴露しない穿刺ラッ トの両方に前記で略述した用量のアルギナーゼを投与したが、数分以内に血漿ア ルギニン濃度は１５０μＭから≦４μＭに下がった。
アルギナーゼの注入をやめた徒歩なくとも１時間濃度≦４μＭの血漿アルギニン が続いた。
ｍ星考ｊユ」」血圧の　み　− 血圧読み取りのため、先ず各ラットの気管を切開し、人工的に大気を呼吸させた 。各ラットとも左側縁頚動脈にカニユーレを挿入、スタツサム圧力変換器（Ｓｔ ａｔｈａｍ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ｔｒａｎｄｕｃｅｒ、　Ｈａｔｏ　Ｒｅｙ、　 Ｐｕｅｒｔｏ　Ｒｉｃｏ）で血圧を測定して、フィジオグラム（Ｇｒａｓｓ　Ｉ ｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、　Ｑｕｉｃｙ　ＭＡ）に表示した。心拍数はリードｍ心 電図から測定した。
ラットは２群に分けて試験を行った。１群は「コントロール」群で、内毒素を投 与しなかった。　「コントロール」群の血圧は、アルギナーゼ投与前１回、アル ギナーゼ投与後１回と、時期を変えて合計２回測定した。
もう１群は内毒素群で、この群のラットには内毒素１５ｍｇ／体重ｋｇを単回投 与した。投与時期はこの後に続くアルギナーゼ処理の少なくとも６時間前に行っ た。両群のすべてのラットの血圧は、アルギナーゼ投与前１回、アルギナーゼ投 与後１回と、時期を変えて合計２回測定した。
この実施例の実験結果を表１に示す。
表１ 血漿アルギナーゼの減少が血圧に与える影響コントロールの脳を髄穿刺ラット４ 匹の血圧は、６１．６０．６０．５８ｍｍＨｇであった（平均５８．８±１．３ ｍｍＨｇ）（表１参照）。アルギナーゼ投与後の血圧は、２匹では変化がなく、 他の２匹では各々４および１０ｍｍＨｇ上昇した（平均３．５±４．７ｍｍＨｇ で統計的には有意ではながった）。
静注によりリボ多糖（内毒素）１５ｍｇ／ｋｇを与えた５匹のラットの６時間後 の血圧は、３６．３４．２８．３２．３６ｍｍＨｇ（平均３３．企±３　、３　 ｍ　ｍＨｇ、表１参照）であった。内毒素処理ラットはコントロールと比較して 、明かに低血圧であることに注意されたい。
アルギナーゼ投与後、内毒素処理ラットの血圧は、８．６．０．４．８ｍｍＨｇ 　（平均５．２±３．３ｍｍＨｇ）上昇した。内毒素処理の脳を髄穿刺ラットに アルギナーゼを投与した場合の血圧は、平均１５．７％上昇した（統計的に有意 、ｐ＜０．０５）。
この実験を総括すると、血漿アルギニン濃度を下げた場合、コントロールラット の血圧には顕著な効果はなかったが、内毒素ラットの血圧では顕著な効果が認め られた。コントロールラットに明白な効果がながったのは、コントロールラット の酸化窒素生成の速度が遅く、外因性（つまり、血漿）アルギニンの必要がなか ったことによるとも考えられる。従って、このような動物では、血漿アルギニン 濃度を降下させても、酸化窒素生成の制限要因とはならないのである。
これとは対照的に、内毒素ラットの酸化窒素生成の速度は、コントロール（非内 毒素ラット）よりもはるかに早いため、低血圧症が発現する。この内毒素ラット では、酸化窒素を作る細胞は血漿から余分のアルギニンを得なくてはならない。
内毒素ラットの血漿アルギニンが非常に少量である場合（すなわち、アルギナー ゼ投与後）、血管壁に結び付いた細胞（すなわち、内皮細胞）が異常な速度で酸 化窒素を合成するのを支える充分なアルギニンがないことになる。このようにし て、酸化窒素濃度を下げると、同時にラットの血管系の血圧低下の程度を少なく することになる。従って、血清アルギニン濃度の低下を利用して、低血圧症動物 の血圧を上昇させることができる。
無アルギニンＴＰＮ溶液、または血漿アルギニン濃度を充分に減らし、酸化窒素 の合成が、例えばアルギニン約４μＭ以下（つまり、血清アルギニン４ｎＭ／ｍ ｌ）になるように充分に低いアルギニン濃度の溶液を用いることにより、動物の 低血圧症、特に敗血症性ショックに伴う低血圧症の予防と治療に、アルギナーゼ 投与に匹敵する有益な効果があると期待されている。
え五五ユ おアルギニン　と ４旦亙超」　る　・、との相　、 本実施例により、内毒素で処理したラットの生体内において血漿アルギニン濃度 を低下させ−ることと、「昇圧」剤に対する反応が増加することとの相関関係を 説明する。
ラットには、実施例１と同様にして脳を髄穿刺を行った。血圧測定は実施例１と 同様にして実施した。アルギナーゼは実施例１の方法により調製した。
左右両側の頚静脈にカニユーレを挿入して薬剤投与用とした。左側頚部はフェニ レフリンの一括投与に用い、右側頚部はアルギナーゼの連続注入に使用した。
両群（コントロール群と内毒素群）のラットにはすべて、０，３．１．０．２． ０、および６．Ｏｕｇ／ｋｇの用量でフェニレフリンを連続投与した。
この実施例の試験結果を表２に示す。
表２ アルギナーゼと内毒素の血圧に対する影響この実施例は、脳を髄穿刺ラットにお いて、フェニレフリンに反応する平均収縮期血圧に対して内毒素とアルギナーゼ がどのような効果を示すかを示している。
内毒素（１５ｍｇ／体重ｋｇ）は実験開始６時間前に静注により投与した。アル ギナーゼは（３００１，Ｕ。
７分、２０分間）、　「アルギナーゼなし」の測定完了後、各ラットに静脈内投 与した。
表２は各ラットについて示している用量でフェニレフリンを投与したことによる 最大の昇圧（「生データ」）を示している。データが対になっていることに注意 されたい。これは各ラットとも、最初にアルギナーゼなしの試験（フェニレフリ ン０３．１．０．２，０、および６．Ｏｕｇ／ｋｇ、連続投与）を行い、その後 アルギナーゼ処理を終えてから同一の用量と順序でフェニレフリンの再試験を実 施したからであるう　この表の第１行目のデータ見ると、コントロールラット４ 匹の各々は、フェニレフリン０３μｇ／ｋｇを投与されている。
第１のコントロールラットの血圧は、アルギナーゼなしでは１６ｍｍＨｇであっ たが、アルギナーゼ投与後（「アルギナーゼあり」）では４ｍｍＨｇでしかなか った。第２、第３および第４のラットの血圧増加は、アルギナーゼ前てはそれぞ れ１４．３２および９で、アルギナーゼ後ではそれぞれ９．２０および１０であ った。
表２のデータは、内毒素ラットをアルギナーゼて処理して血漿アルギニン濃度を 下げると、　「昇圧」剤（フェニレフリンなどの）に対する反応が向上し、この 場合内毒素ラットとコントロールラットに同一用量の昇圧剤を投与すると昇圧の 差が小さくなっていることを示している。さらに、内毒素ラットをアルギナーゼ で前処理をすると、アルギナーゼを投与しない内毒素ラットの昇圧反応と比較し て、　「昇圧」効果が向上する（血圧上昇が統計的に大きくなる）（表２参照） 。
内毒素は、正常な昇圧反応（すなわち、血圧の上昇）を示そうとする動物の能力 を減殺してしまう。コントロールラットと内毒素ラットについて、フェニレフリ ン各用量の「アルギナーゼなし」データを比較されたい（表２）。このことは、 内毒素ラットがアルギニンから多量の酸化窒素を作り、このため低血圧症が発症 し、フェニレフリンに対する反応が鈍くなることが原因となっている。
アルギナーゼを投与すると、フェニレフリンなどの昇圧剤に対する昇圧反応が向 上する。アルギナーゼを投与しなかった時にはコントロールラットと内毒素ラッ トとの間に大きな差があった（反応性が大きく喪失したことをしめず）のに較べ て、アルギナーゼを投与したときのコントロールラットと内毒素ラットの差は小 さくなっていた（反応性の喪失が小さいことを示す）。
例えば、アルギナーゼを与えないラットに（すなわち、血清アルギニン濃度が高 い）フェニレフリン６μｇ／ｋｇを投与すると、フェニレフリンに対する昇圧反 応は、コントロールラットでは９３．０±１０．３ｍｍＨｇ（薬理的に有用な昇 圧反応）、内毒素ラットでは３３．７±９．６ｍｍＨｇ　（貧弱な昇圧反応）、 その差は５９．３ｍｍＨｇであった。これと対照的に、ラットにアルギナーゼを 与えてから同一用量のフェニレフリンを投与すると、コントロールラットと内毒 素ラットの昇圧反応はそれぞれ７９．８±１３　、４　ｍ　ｍ　Ｈｇおよび４８ ．５±７　、６　ｍ　ｍ　Ｈｇで、差は３１．３ｍｍＨｇにすぎなかった。つま り、アルギナーゼによって血漿アルギニンを減少させるとフェニレフリンなどの 昇圧剤に対する「正常」　（昇圧）反応を顕著に回復する。
本実施例のデータは、低血圧症、特に内毒素症の動物の低血圧症が、この動物の 血清アルギニン濃度を操作することによってコントロールできることを証明して いる。血清アルギニン濃度は、アルギナーゼの投与によってコントロールするよ うに、部分的ではあるが動物の栄養によってコントロールすることもできる。
従って、本実施例のデータから、アルギニンが低濃度（低降圧または抗降圧性と なる程度に）あるいは存在しない栄養補給法を動物に対して継続することにより 、低血圧症（血圧が低い）を治療するメカニズムが可能となる。この技術を利用 して、さらに低血圧症のおそれがある患者にＴＰＮ製剤の単独投与、あるいは昇 圧剤またはＮＭＡ、ＮＮＡなどの酸化窒素阻害剤の１っとの併用投与、あるいは 本実施例で説明した併用投与により発症を予防することもできる。
本実施例において、本発明の抗降圧性（ａｎｔｉ−ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｖｅ）Ｔ 　Ｐ　Ｎ製剤の定義を行う。
抗降圧性ＴＰＮ製剤は、低血圧症患者、あるいは低血圧または全身性ショックの おそれある患者に非経口的に投与する無菌の、発熱物質がない、安定な溶液であ る。純粋の結晶アミノ酸類を次の濃度になるようにグルコース溶液（５％〜２０ ％）に溶解して２倍濃度のＴＰＮまたは最終側形のＴＰＮ製剤を調製する。
表３ ２倍濃縮物　最終濃度 ＬＬＬＩＩＭ　ｍ　１００ｍ１　４”　ｌイソロイシン　６００−８００　３− ４０インシン　８００−１２００　４−６パリン　６００−８００　３−４ フエニルアラニン　２００−４００　１−２メチオニン　２００−４００　１− ２ リシン　６００−８００　３−４ ヒスチジン　２００−４００　１−２ トレオニン　４００−６００　２−３ トリプトフアン　＋００−３００　０．５−１．５チロシン　５０−１５０　０ ．２５−０．７５アラニン　１１００−１０００　４−５アスパラギン酸　４０ ０−６００　２−３グリシン　８００−１０００　４−５ プロリン　６００−８００　３−４ セリン　２００−４００　１−２ 栄養補給処方として好ましいＴＰＮ製剤の濃度を得るためには、２倍濃度（表３ で定める）の５００ｍ１と、デキストロース溶液５００ｍ１とを混合して、最終 剤形１リットルとする（すなわち、２倍濃度のアミノ酸類５００ｃｃとデキスト ロース溶液５００ｃｃ）。
最も好ましくは、デキストロース溶液に、生理的に許容し得る濃度のビタミン類 とミネラル類を配合する。
本方法のＴＰＨには、グルタミン酸（４００〜６００　ｍ　ｇ　／　２倍濃度１ ００ｍ１、または２〜３ｇ／最終濃度最終語よび／またはタウリン（５０〜１０ ０ｍｇ／２倍濃度１００ｍ１、または０．２５〜０．５　ｇ／最終濃度１）を加 えてもよい。
この溶液を濾過により滅菌して、適当な静注液用容器に充填する。投与に際して は、等量の滅菌グルコース溶液で希釈して所望の投与濃度とする。このようにし て得た投与用ＴＰＮは冷蔵保存する。患者には静脈内投与（１，Ｖ、　）する。
ＴＰＮ液のｐＨは、生理的に許容し得るｐＨである７　０〜７．４に調整してお かなければならない。この製剤は無アルギニンである。
実１１１ イ氏アルギニン　庁の几　ｆＥ１１１ 低血圧症患者、あるいは低血圧または敗血症性ショックのおそれある患者に用い るアミノ酸類製剤にアルギニンを加えたいと所望する際は、実施例３で述べた製 剤にアルギニンを補って、用いることができる。アルギニンは製剤の最終濃度に 対して０．１重量％以下（投与用ＴＰＮ液１リットル当りアルギニン約１ｇ）と する。必須および非必須アミノ酸類（ロイシン、イソロイシン、バリン、フェニ ラミン、リジン、バリン、イソロイシン、トレオニン、トリプトファン、ヒスチ ジン、チロシン、アラニン、グリシン、プロリンおよびセリン）は同一の含量を 用い、同一の方法で調製する。
実質的に無アルギニンのアミノ酸類製剤にオルニチンとシトルリンを加えて、低 血圧症または敗血症性ショックのおそれある患者あるいはＴＮＦ　（腫瘍壊死因 子）などこれらの疾患の原因となる薬剤を服用している患者らに使用したいと所 望する際は、実施例３で述べた製剤にオルニチンとシトルリンを補って使用する ことができる。
オルニチンは、投与用ＴＰＮ液１リットル当り約１〜２グラム（オルニチン０． １重量％〜０．２重量％）を添加する。シトルリンは、投与用ＴＰＮ液１リット ル当り約１グラム（シトルリン約０．１重量％）を添加する。実施例３と同一の アミノ酸類の含量を用い、同一の方法により溶液を調製する。この抗降圧製剤は 無アルギニンである。
１凰１ 儂１１１Ｌ　ＥＥ　１」１敗」〔症］しり」しん汐ユを訓し絆Ｊ二１ｍｌ上つＬ 法本予期例において、特定の無アルギニンまたは低アルギニン濃度の製剤を使用 して、低血圧症や敗血症性ショックが発症するおそれある患者、あるいは非経口 的栄養補給を必要とする患者や低血圧症や敗血症性ショックが既に発症している 患者を治療する方法を提供する。
本予期例で提案する製剤と方法は、全非経口栄養補給を必要とし、且つ免疫モジ ュレータ−を服用している患者の臨床管理に最も特異的に使用することができる 。　「免疫モジュレータ−」の例としては、インターフェロン、インターロイキ ン２および腫瘍壊死因子が挙げられる。
免疫モジュレータ−として認められている物質の多くは、抗癌化学療法剤として 用いられている。従って、本予期例で説明する方法は、非経口栄養補給を連続使 用し、且つ免疫調節作用をもつ化学療法剤を服用している轡、者の臨床管理に有 効であることが予想される。
本発明によれば、アミノ酸類の混合物を薬学的に許容し得る希釈剤に溶解してい る非降圧剤を動物に投与することよりなる、動物の酸化窒素生成が昂進すること に起因する全身性低血圧症の予防治療方法が提供される。この方法の最良の実施 態様では、製剤は実質的に無アルギニンである。低アルギニン濃度の非降圧剤は 、本発明の他の実施態様で使用することができる。
この製剤は、動物が生理的に許容し得る血圧を持ち、且つこれを持続するまで、 患者に投与を続ける。ヒトの場合、生理的に許容し得る収縮期血圧は約１００ｍ ｍ　Ｈｇである。
より詳しくは、本発明の方法としては、アミノ酸類の混合物からなり、且つ実質 的に無アルギニンまたは低アルギニ、ン濃度の（約０．００１％〜約０．１９６ ）製剤を挙げることができる。この製剤は、患者に静脈内投与する高栄養（全非 経口栄養剤）溶液として生理的に許容し得るものでなくてはならない。
本予期例の方法の製剤および必要に特異的に適合させた製剤の、最も好ましいア ミノ酸類混合物の濃度範囲を表４に示す。最も好ましくは、このような製剤に表 ４の濃度を含有させることが提案される。
表４ 匪？旦ｍソυましいアミ　の イソロイシン　約３−４ｇ／　＋（０，３−０，４％）ロイジノ　約４−６ｇ／ 　ｌ（０，４−０，６％）リノン　約３−４ｇ／　］（０，３−０，４％）メチ オニン　約１−２ｇ／ｌ（０、ｌ−０，２％）フェニルアラニン　約１−２ｇ／ ｌ（０，１−０，２％）トレオニン　約２−３ｇ／　ｌ（０，２−０，３％）ト リプトファン　約０．５−１．５ｇ／　１（０，０５−０，１５％）バリン　約 ３−４ｇ／　１（０，３−０，４％）アラニン　約４−５ｇ／　＋（０，４−０ ，５％）ヒスチジン　約１−２ｇ／ｌ（０，１−０，２％）プロリン　約３−４ ｇ／　＋（０，３−０，４％）セリン　約１−２ｇ／　ｌ（０，ｌ−０，２％） チロシン　約０．２５−０．７５ｇ／＋（０，０２５−０，０７５％）グリシン 　約４−５ｇ／　ｌ（０，４−０，５％）アスパラギン酸　約２−３ｇ／　ｌ（ ０，２−０，３％）この製剤にはオルニチンを含有させてもよい。オルニチンを 特定製剤に配合する場合、その濃度は投与用ＴＰＮ液に対し７て約１〜２グラム 、／１　（オルニチン約０１〜０２％）とする。
非経口製剤の場合、この混合物を生理的に弁径］」投与が可能であるように調整 しなければならない。
本予期例の非降圧非経口栄養のもう一つの製剤として、低血圧症動物の酸化窒素 産生に必要な基質を充分に（ｊえない低アルギニン濃度であるものがある。本発 明において、これを目的とする低アルギニン濃度とは、慝昔投５用栄養補給製剤 に対してアルギニン約０１％またはそれ以下とする。最も好ましくは、製剤中に 約０．０１％〜０１０６のアルギニンを含有する。
本発明のさらに他の最良の実施態様は、実質的に無アルギニンである。実質的に 無アルギニンである特定の実施態様の−においては、アミノ酸であるオルニチン およびシトルリンが配合されている。オルニチンとントルリンは動物が必要とし ている尿素サイクルの基質となるものである。製剤に含まれるオルニチンとシト ルリンの最も好ましい含量は、オルニチン約０１〜０．２０６（すなわち、１〜 ２ｇ／ｌ）およびシトルリン約Ｑ、１９６（すなわち、Ｉｇ／ｌ）である。
アミノ酸類混合物の無アルギニン製剤 ２倍濃縮物　最終栄養補給 り旦ｕｌ　ニー１乙ｊｐｏｒｒ己ユ　１駈工り乙ＬＬインロイ、／ン　６００　 ３ ０イン７　１．０００５ リシン　１．０００　５ メチオニン　２００　＋ フェニルアラニン　３００　１．５ トレオニン　４００　２ トリプトフア／２００　１ バリン　５＋Ｉ０　２．５ アラニン　９００　４．　５ ヒスチジン　３００　１．５ プロリン　７００　３．５ セリン　４００　２．０ チロシン　４５０　２．０ グリシ／８００　４．　０ アスパラギン酸　６００　３ オルニシン　４００　２ 前記製剤について述べたオルニチン含量を省いて、代わりに濃度約２ｇ／ｌのシ トルリンで置き換えることができる。アミノ酸類濃縮物（２倍の）は、例えばグ ルコース溶液などの薬学的に許容し得る希釈剤と１対１の比率（デキストロース 溶液１部に対してアミノ酸類１部）で混合する。さらに、微量成分、ビタミン助 剤、および必須塩（Ｎａ”、Ｋ′″、ＰＯ４−１Ｃａ”、Ｍｇ”）を添加しても よい。
低血圧症の治療予防法の一部をなす抗降圧製剤は、医学専門家に知られている非 経口法により、非経口栄養製剤として投与することができる。
本発明の方法を実施するに当たっては、無アルギニン製剤の投与をやめる時点を 生理基準に従って決定しなくてはならない。例えば、患者が生理的に許容し得る 水準に達する時期を測定する収縮期血圧をモニターを実施しておく。そして、正 常な収縮期血圧を回復したら、これもって酸化窒素産生が減少し、末梢血管抵抗 または動脈圧が大きく低下する危険が去ったと判断する。
本発明の一般的な定義として、低血圧（血圧が低い）とはヒト成人の収縮期血圧 が約１００ｍｍＨｇ以下であることを言う。生理的に許容し得るヒト成人の収縮 期血圧とは少なくとも約１００ｍｍＨｇの収縮期血圧をいう４０゜ これまでに、標準的なＴＰＮ製剤を投与すると、血清アルギニン濃度が上昇する ことが観察されていた４１゜従って、本発明者らはＴＰＮ製剤から成分としての アルギニンを取り除き、無アルギニンＴＰＮ製剤を患者に服用させて、同様の疾 患を持ち標準的なＴＰＮ製剤を投与されている患者と比較して、血清アルギニン 濃度を顕著に減少させることを提案する。アルギニン約０１０６以上を含有する 標準的なのＴＰＮ製剤では、降圧剤としての効果はない。
夾１■引ユ ＩＬ−１に起　る出血　症に・　る 化　ＮＡＡの生 本実施例は、ＮＡＡ　（Ｎ“−アミノ−Ｌ−アルギニン）その他の窒素類縁物質 の、特にサイトカインに起因する低血圧を昇圧する有用性を立証する。
ＩＬ−１に起　る氏　圧　に・　るＮＡＡのｌ′１表６に要約し、且つ図１に図 示しているように、イヌ（ｎ＝４）に麻酔を施し、ＩＬ−１（５０μｇ／ｋｇ） を与えたところ、進行性のやや重篤な低血圧症が発症し、３時間以内に平均動脈 圧が基線の１１１±７ｍｍＨｇから８０±２ｍｍＨｇに降下した。このいし−１ が誘発した低血圧はＮＡＡ（２０ｍｇ／ｋｇ、８８μｍｏｌ／ｋｇ）を静脈内に 単回の一括投与することにより急速に逆転した。平均動脈圧は４６±９ｍｍＨｇ 　（５８％）から１２５±３ｍｍＨＨに上昇した。
すべてのイヌにおいて、ＮＡＡ投与投与量均動脈血圧は、ＩＬ−１投与前の平均 動脈圧の基線より著しく高かった（上昇の平均＝１４３±７．７ｍｍＨｇ）。Ｉ Ｌ−１を与えなかったコントロールのイヌにＮＡＡを投与してところ、平均動脈 圧の基線を超える昇圧が認められた。平均動脈圧は平均２０．１±３．８ｍｍＨ ｇ上昇したが、この値はＩＬ−１を投与したイヌ（ｎ＝０．２５４）に認められ た基線を超える昇圧と著しく異なるものではなかった。従って、ＩＬ−１投与し て低血圧にさせていたイヌの方により大きなＮＡＡ効果が認められたが、ＮＡＡ 投与投与量終平均動脈圧はコントロールのイヌも、ＩＬ−１で処理したイヌも同 様であった。
ＩＬ−１で処理したイヌとコントロールのイヌのいずれにおいても、ＮＡＡ昇圧 効果の特異性としてＬ−アルギニンによって急速に、且つ完全に逆転することが 挙げられる（４００ｍｇ／ｋｇ、２．３ｍｍｏｌ／ｋｇ）。アルギニン投与後Ｉ Ｌ−１で処理したイヌの平均動脈圧は６６±２７ｍｍＨｇであったが、これはコ ントロールのイヌでは実質的に基線の水準であった。
本発明者らは、さらにＩＬ−１その他のサイトカイン（例えば、ＴＮＦやＩＬ− ２）を対象とする実験を行い、Ｌ−アルギニンの不存在下におけるＮＡＡ昇圧効 果の持続時間を測定した。サイトカインで処理したイヌにＮＡＡ　（２０ｍｇ／ ｋｇ）を１回注射したところ、最高約６０分以内平均動脈圧が基線またはより高 い水準に維持されたことが認められた。ＮＡＡ　（２０ｍｇ／ｋ　ｇ）の第２回 、第３回注射では、効果はより長く持続し、生理的に許容し得る平均動脈圧を最 高７時間にわたって読み取ることができた（図８）。
ＩＬ−１が媒介した低血圧症の血管拡張の中心的な要因の例として、平均動脈圧 が下降したときに、全身血管抵抗も３３．５％低下したことが挙げられる（表６ ）。
ＮＡＡ投与後平均動脈圧の回復に並行して全身血管抵抗も上昇した。ＮＡＡ注射 後、イヌの個体間に著しい差異を認めたが、全身血管抵抗値は基線より平均４３ ％高った。ＩＬ−１で処理したイヌにアルギニンを投与したところ、すべてのイ ヌの全身血管抵抗にがなりの低下が認められた（平均低下＝６１％）。コントロ ールのイヌにおいても、ＮＡＡの昇圧効果は全身血管抵抗と関連していた。
ＮＡＡ単独で処理したイヌでは、心拍出量が２９．２９６減少したことが認めら れた（ｎ＝０．０４６）。その後Ｌ−アルギニンを投与したところ、この減少は 完全に逆転した（図６）。ＩＬ−１処理のイヌでは、心拍出量は若干の増加が見 られたが顕著なものではなかった（ｎ＝０．３７１）。ＮＡＡ投与投与量拍出量 は、ＩＬ−１投与後と比較して２５．２％低かった（ｎ＝０゜０３７）。しかし ながら、統計的には、この値は心拍出量の基線とほとんど同じであった（１．９ ３対２．２５Ｌ／分、ｎ＝０．２０４）。これらの変化はＬ−アルギニンの投与 によって逆転した（図６）。心拍数が著しく変化させた化合物は１つもなかった 。
イヌの酸化窒素シンターゼ押切 本イヌは麻酔を施して上述の処理を行った。初期ノ意ラメ−ターは一定値（基線 ）ｌ：なるまでモニターした。コノトロールのイヌにはＮ八人（２０ｍｇ／ｋｇ ）を３０秒力）けて単回、一括投与した。平均動脈圧が少なくとも２０分間安定 した後Ｌ−アルギニン（４０°ｍｇ／ｋｇ）を投与した。ＩＬ−１処理のイヌに はＩＬ−１（５０μｇ／ｋｇ）を３分間か１すて静注し、連続モニターした。ｒ ｌＬ−１後」の値は、ＮＡＡ投与直前平均動脈圧が最低点１こ違したときの値で ある。血圧はＮΔΔ投与後数分で回復した。「ＮＡＡ後」の値ζｔＮ八八へ人与 後１０分の値である。Ｌ−アルギニン（４００ｍｇ／ｋｇ）は５分間力＼けて投 与し、ｌＯ分後生！！Ｉ！測定を行った。上述のデータは、平均土桿準偏差であ る。
実ＩＪＩ旦 生」本ＪＬは」■ａＮ　Ｍ　Ｍ八−と Ｔ　Ｎ　Ｆ−１：ｌ−一起ユ因二す一五」１遣り圧」［ｐしブニ獣２Ｌｊ本実施 例は、ＮＭＭＡなどの酸化窒素阻害剤が生体内で低血圧症を抑制する有用性を立 証する。詳しくは、イヌにＴＮＦを投与して低血圧症を起こし、続いてＮＭＭＡ を投与してこの低血圧をブロックすることができることを立証する。さらに、こ の血圧の上昇はアルギニンの投与によって逆転できることを証明する。ＮＭＭＡ の遊離塩基は次のような構造になっている。
ＯＯＨ ８２Ｎ　ＣＨ Ｈｔ 　Ｈ２ Ｈ Ｃ＝ＮＨ 畷 Ｈ ■ Ｈｓ さらに、この低血圧症の抑制は、過剰のアルギニンを投与すると逆転する。これ らの試験結果は、ＴＮＦが低血圧症を誘発し、酸化窒素がこれに介入することを 示している。さらに、酸化窒素合成の活性化は敗血症性ショックの病因と関連し ている可能性もある。また、この実験では、ＴＮＦで処理した動物に予めＮＭＭ Ａを投与して正常血圧にし、これにアルギニンを与えると昇圧作用を示すことを 証明する。
比活性２Ｘ１０’単位／　ｍ　ｇのヒト組替えＴＮＦを日本の東京都大日本化学 株式会社（Ｄａｉｎｉｐｐｏｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、 　Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）から入手した。ＴＮＦは、１ｏμｇ／ｋｇをイヌア ルブミン１７ｍｇ／ｍ１を含むリン酸塩緩衝液１０ｍ１中に溶解して投与した。
ＮＭＭＡは、コルビンおよびレポーター（Ｃｏｒｂｉ口ａｎｄ　Ｒｅｐｏｒｔｅ ｒ、　Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　５７：３１０−３１２．　１９７４）の 方法の改良法により調製した。この文献はこの目的のために引用することにより 特に本明細書の１部とする。ＮＭＭＡは、用量２０＋ηｇ／ｋ　ｇをリン酸塩緩 衝食塩水５ｍｌに溶解し、投与用とした。アルギニンはシグマ・ケミカル社（Ｓ ｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｓｔ。
Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ’）から入手した。
実）（−物 雄２匹雌２匹合計４匹、体重２８〜３０ｋｇの雑種のイヌを実験動物とした。こ れらのイヌはアメリカ実験動物承認協会（へｍｅｒｉｃａｎ　Ａｓ５ｏｃｉａｔ ｉｏｎ　ｆｏｒ　Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉ、ｏｎ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ＾ｎｉｍａｌｓ　［ＤＨＥＷ（Ｄ）Ｉｎ２）　ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ　Ｎｏ、 　（ＮＩＨ）　７８−２３．　ｒｅｖｉｓｅｄ、　１９７８］　）の勧告に従っ て管理した。実験の当日、イヌを一晩断食させ、フエノバルビタール（２５ｍ　 ｇ　／　ｋ　ｇ　）で麻酔を施した。＃１０ｆｒ、気管内チューブを経口的に挿 入し、バーバード・ポンプ・ベンチレーター（Ｈａｒｖａｒｄ　ｐｕｍｐｖｅｎ ｔＮａｔｏｒ）を取り付け、呼吸速度毎分１４回、１回換気量１５　ｍ　ｌ　／ 　ｋ　ｇで換気した。実験の日において、動脈線を経皮的に大腿動脈に接続した 。
緊張型圧力計（ｓｔｒａｉｎ　ｇａｕｇｅ　ｍａｎｏｍｅｔｅｒ、　Ｈｅｗｌｅ ｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ　ｍｏｄｅｌ　１２９０Ａ）を使用するヒユーレットパラ カード・レコーディングシステム（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ　ｒｅｃｏ ｒｄｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ　ｍｏｄｅｌ　７７５８Ｂ）を動脈線に接続し、平均 （エレクトロニック）および反応時期ごとの全身動脈圧（５ＡＰ）を連続記録し た。心拍数（ＨＲ）はＥＫＧの自動記録から測定して、ヒユーレットパラカード ・レコーディングシステムに連続記録した。オキシヘモグロビンの飽和（ＳａＯ ２）は脈拍酸素計（ＢＩＯＸ　１１１．　Ｂｏｕｌｅｒ、　Ｃｏ）によって測定 した。ラブマスターＡＤコンバータ（Ｌａｂ　Ｍａｓｔｅｒ　ａｎａｌｏｇ−ｔ ｏ−ｄｉｇｉｔａｌ　ｃｏｎｖｅｒｔｏｒ、１６チヤンネル、　１２ビツト、３ ０　ｋ　Ｈｚ、５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃＳｏｌｕｔｉｏｎｓ、　Ｉｎｃ、　）を用 いて５５Ｈｚでサンプリング、６秒毎の平均を磁気ディスクに記録することによ り、全身動脈圧、心拍数、オキシヘモグロビン飽和の連続時系列記録を実施した 。
ＮＭＭＡによってＴＮＦの投与に起因する低血圧症が逆転するのが認められた（ 図３）。ＮＭＭＡの昇圧効果は急速に発現するが（２分以内）、過剰のし一アル ギニンの投与により拮抗させることができた。ＮＭＭＡの昇圧効果に対するアル ギニンの拮抗作用はＬ体に立体特異性であった。
図３のデータは、動物実験を数回繰り返し、そのうちの典型的な実験を示してい る。ＴＮＦを投与したことによる低血圧の程度と発現時間には若干の差異が認め られた。ＴＮＦ投与による最も重篤な低血圧症の例を図４３に示す。ＴＮＦ体重 １ｋｇ当りＩＯμｇを１０分時点で、Ｎ　Ｍ　Ｍ　Ａ、　４　、４　ｍ　ｇ　／ 　ｋ　ｇを約５３分時点で、さらにＬ−アルギニン３ｇを約６３分時点で静脈内 投与した。ＴＮＦ投与後３０〜６０分で低血圧症が発現するのが認められた。全 身動脈圧は、１０６から急速に３６まで降下した。ＮＭＭＡを投与したところ、 血圧が急速に」二昇し、全身動脈圧も１１６に回復した。
このときのＮＭＭＡ投与による血圧上昇幅は８０　ｍ　ｍＨｇであった。
未処置のイヌにＮＭＭＡを単独投与する実験も行った。ＮＭＭＡ注人後２分以内 で血圧は１２ｍｍＨｇ上昇した。これに続いて、心拍数が代償的に減少し、血圧 も基線まで下降した。このＮＭＭＡが誘発した徐脈は３１分継続した。この反応 は事前にＴＮＦで処理したイヌでは認められなかった。その後Ｌ−アルギニンを 投与することにより、全身動脈圧にみられたこれらの小変化は逆転さねた。もう １つのコントロール実験において、ニトログリセリンを２８μｇ／ｋｇ／分の速 度で静脈内に注入し、血圧を腫瘍壊死因子による場合の水準にまで下降させた（ 図４ｃ）。これらのニトログリセンを注入したイヌにＮＭＭＡを投与しても、血 圧は１４ｍｍＨｇＬか上昇しなかった。その後Ｌ−アルギニンを投与して、この 小さな効果を逆転させた。
サイトカインで処理したイヌにおいて、Ｌ−アルギニンの投与によってＮＭＭＡ の抗降圧効果が逆転した。
事前に処理を行わなかった正常血圧のイヌでは、Ｌ−アルギニンを投与しても血 圧に変化はなかった。
ＴＮＦを患者に投与する際、用量依存性毒性として低血圧が発現する。これらの 実験により、内皮誘導弛緩因子としても知られているる酸化窒素が低血圧の媒介 物質であると言うことができる。さらに、これらの血行力学的な変化はＮ“置換 アルギニン誘導体によって拮抗され、その後過剰なアルギニンを添加すると再び 低血圧となる。このことは、アルギニンが酸化窒素合成に基質の役割を果たして いること示している。本発明者らはＮＭＭＡはモルモットの安静時血圧を一旧昇 させることができることを証明した。従って、酸化窒素は正常動脈圧のホメオス タシス（ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ）に役割を果たしているとも考えられる。この ことはイヌについても言える。
ＮＭＭＡの昇圧効果は、ＴＮＦに起因する低血圧症をもつイヌにおりる方が正常 血圧のイヌよりもはるかに劇的である。このことから、ＴＮＦが低血圧を誘発す るのは、通常の安静時血圧の制御作用を持つ血管活性因子（つまり、酸化窒素） が過剰に産生されるためであることが分かる。
ＴＮＦは敗血症性ショックの毒性の発現にも関連がある。敗血症性ショックは、 通常グラム陰性菌の細胞壁成分である内毒素によって引き起こされる。ＴＮＦに 暴露接抗ＴＮＦ抗体を投与しても低血圧を防ぐことはできない。しかしながら、 ＴＮＦに暴露する前に抗ＴＮＦ抗体を投与すると低血圧を防止することができる 。これは内毒素が他の低血圧媒介物質を誘発していることを意味し、本に実施例 の実験結果では酸化窒素がこの反応の真の媒介物質であることを示唆している。
ＬＭＪＬ！ 生」（周」ユ友訪支↓ニーＮコ止」−ξ１１１苅−Ｕ鬼正旦 本実施例は、アルギニン類縁物質であるＬ−ＮＭＡなどの酸化窒素シンターゼ阻 害剤が動物の低血圧を治療する有用性を立証する。
この実験において、イヌの内毒素に起因するショックに対するＬ−ＨＭＡの効果 を検討した。本実施例の所見では、酸化窒素が内毒素に起因する低血圧症の重要 な媒介物質であり、酸化窒素合成の阻害剤は敗血症性ショック治療に有用である 。
試薬　Ｎｏ−メチル−Ｌ−アルギニンは、コルビンらの前報の方法（Ｃｏｒｂｉ ｎ、　ｅｔ　ａｌ、　（１９７４）　Ｎ＝−Ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ　Ａｒｇｉｎ ｉｎｅｓ：　Ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉ、ｏｎ　ｏｆ　Ｎ−− Ｍｅｔｈｙｌａｒｇｉｎｉｎｅｓ、　Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　５７． ３１０−３１２）により調製した。この文献は、この目的のために、引用するこ とにより特に本明細書の一部とする。この調製物を結晶化により精製し、モノフ ラビアン酸塩とした。この塩をＤｏｗｅｘ−１（ＯＨ）に懸濁し、懸濁液を攪拌 して遊離アミノ酸溶液を得た。塩酸塩で中和した後、結晶フラビアン酸塩をスタ ンダードに用いるアミノ酸分析法によりＬ−ＮＭＡａ度を測定した。内毒素（Ｅ ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＢＯ１２８：Ｂ１２）その他すべての試薬は シグマ・ケミカル社（Ｓｉｇｍａａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｓ ｔ、　Ｌｏｕｉｓ、　Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）から入手した。ニトログリセリンはシ ュポン製薬（ＤｕＰｏｎｔ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、　Ｗｊｌｍｉｎ ｇｔｏｎ。
Ｄ、　Ｅ、　）から入手した。
実験動物・体重２２〜３２ｋｇ　（平均２５．３　ｋ　ｇ＞の、条件付けを行っ た雑種のイヌ１２匹（ｉ！９匹、雌３匹）を用いて実験を行った。動物の飼育は 、アメリカ実験動物飼育承認協会の勧告にしたがって行い、実験動物の飼育使用 指針（Ｇｕｉｄｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｃａｒｅ　ａｎｄ　Ｕｓｅｏｆ　Ｌａｂｏ ｒａｔｏｒｙ　Ａｎｉｍａ］ｓ　（１９８７）　Ｄｅｐｔ、　ｏｆ　Ｈｅａｌｔ ｈ。
Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｗｅｌｆａｒｅ、　Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、　Ｄ 、Ｃ，（Ｐｕｂｌ、　Ｎｏ、　７８−２３）　）のすべての基♀に合格していた 。実験動物プロトコルは、テキサス大学動物福祉委員会（ＴｈｅＵｎｉｖｅｒｓ ｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｘａｓ　Ａｎｉｍａｌ　Ｗｅｌｆａｒｅ　Ｃｏｍｍ１ｔｔｅ ｅ）によって承認されている。実験の日に先立ちイヌを一晩断食させた。ベント パルビタールナトリウム（２５ｍｇ　／　ｋ　ｇ、静注）で麻酔し、気管内にチ ューブを挿入、大気を用いて１回換気量１５　ｍ　ｌ　／　ｋ　ｇ、呼吸数１分 当り１２〜１４回、正常動脈ｐＨとｐ　ＣＯ２（Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏ ｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　ＩＬ１３０２　ｐＨ／Ｂｌｏｏｄ　Ｇａｓ　Ａ ｎａｌｙｚｅｒ）に調整したピストン運転レスビレ−ター（Ｈａｒｖａｒｄ　Ｉ ｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）により換気した。カテーテルを経皮的に挿入し、大腿お よび肺動脈に接続した。後者のカテーテルとして、流れ制御型熱膨張カテーテル （ｆｌｏｗ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ　ｔｈｅｒｍａｌ−ｄｉｌａｔｉｏｎ　ｃａｔｈ ｅｔｅｒ）を使用した。
生理測定　平均全身動脈圧と心拍数は連続モニターしくＰａｒａｍｅｔｒｏｎ　 ７０４８　Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ　Ｓｙｓｔｅｍ、　Ｒｏｃｈｅ）、ＡＤコンバ ータ（ａｎａｌｏｇ−ｔｏ−ｄｉｇｉｔａｌ　ｃｏｎｖｅｒｔｅｒ、　５ｃｉｅ ｎｔｉｆｉｃ　５ｏｌｕｔｉｏｎｓ、Ｉｎｃ、）を用いて磁気ディスクに記録し た。心拍出量（Ｃｏ）は、熱希釈（ｔｈｅｒｍａｌ−ｄｉｌｕｔｉｏｎ）により ６回測定し、その平均値を取った。全身血管抵抗は、　（全身動脈圧Ｘ８０）／ Ｃｏとして計算し、ダイン７秒／　ｃ　ｍ　５として表した。
プロトコル、血圧と心拍数が安定した後、内毒素（４０μｇ／ｋｇをリン酸塩緩 衝液（ＰＢＳ）　１０　ｍ　ｌに溶解したもの、　（ｐＨ７，４）　）を２分掛 けて静脈内に注入した。この用量の内毒素は、典型的に重篤にして致命的である ことが多いイヌの心臓血管系虚脱を誘発する。
血圧のモニターを実施し、全身動脈圧が６０ｍｍＨ，ｇ以下に下がるか、または 全身動脈圧（５ＡＰ）の最低点が１０分間安定して維持されたとき、Ｌ−ＨＭＡ を投与した（　２０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇをリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）　５　ｍ 　ｌに溶解したものを、１分間掛けて静脈内に投与）。はとんどの実験では、１ ０分後接しアルギニン（４００ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇをリン酸塩緩衝液２０ｍ１に 溶解したもの）を２分間掛けて静脈内に注入した。コントロール実験では、事前 にイヌを内毒素に暴露しないで、Ｌ−ＨＭＡ単独を与えた。内毒素を与えたイヌ の低血圧を刺激するため、１群のイヌに注入速度を全身動脈圧６０〜７０ｍｍＨ ｇが維持できるように調整しながらニトログリセリン（２ｍ　ｇ　／　ｍ　Ｉ　 ）を静脈内に連続注入した。
ニトログリセリン処理を行ったイヌに対しては、その後Ｌ−ＮＭＡ　（２０ｍｇ ／ｋｇ）、さらに２０分後Ｌしアルギニン（４００ｍｇ／ｍｌ）を投与した。
統計ニスチュープント法により統計的な意味を評価すると共に、比較の場合には テーリング１個あるいは２個の分析のうち、適当なものを用いた。
図５は、麻酔イヌの全身動脈圧に対する内毒素の効力を示す、典型的な血圧の自 動記録である。このイヌと他の３匹のイヌの心臓血管パラメーターを表７に示す 。
にＬ−ＮＭＡが　−１二　。
実験１：内毒素処理（ｎ＝４） 基＠　１２１１．３±９．４　１１９．５±６．０　２．９９±０．３２　３５ ６５±４５４内毒素後　５９．５±３．１°”　１２４．０±７．６　２．１７ ±０．４４　２４０３±３５２Ｌ−ＮＭＡ後　１０７３±９６°”　１２３．３ ±４．８　２．０３±０．３２　４４６２±５５２３１Ｌ−アルギニン後　１２ ８３±９．４　１１９．５±６．０　２．９９±０．３２　３５６５±４５４実 験２・ニトログリセリン処ＩＩ！（ｎ＝３）基線　１２９．３±１０．２　１４ ３．７±１２．１　３．１４±０．２１　３２９４世７４ニトログリセリン　６ ４７±２７°’　１３７．３±５．０　２．７２±０．２７　１９２４±１３２ °。
奏功期間 Ｌ−ＮＭＡ後　８１８±３５”　１９１７±３５．０　３．８５±０．８０　１ １１５８止３９９Ｌ−アルギニン後　５７．Ｏ±１３．０　１４８．７±１９． ９　５．１５±１．０８　１０８８±４９１実験ｌにおいては、イヌを麻酔し、 実験器具を取り付け、心臓血管の基線測定値を記録した（前処理）。内毒素（４ ０μｇ／ｋｇ）を投与し、心臓血管パラメーターをモニターした。
血圧が最低色で安定するか、６０ｍｍＨｇ以下に下がったとき（内毒素後）　、 Ｌ−ＨＭＡ（２０ｍｇ／ｋｇ）を投与し、再び心臓血管パラメーターを測定した （Ｌ−ＮＭＡ後）。さらに１０分抜上しアルギニノ（４００ｍｇ／ｋｇ）を投与 し、２分後心臓血管の測定を行った（し−アルギニン後）。結果は平均±標阜偏 差として報告する。実験２は、内毒素を投与しなかったことを除いては、同様に して行った。代わりに、ニトログリセリン（２ｍｇ／ｍりを滴定によりイヌに連 続注入して、全身動脈圧　ＡＴを６５ｍｍＨＨに保った（ｎ＝３）。
アステリスクは、直前の状響と比較して統計的に有意の差Ｊ４　（”ｐ＜０．０ ０５、”ｐ＜０．００１）があったことを意味する。
内毒素（４０ｕ　ｇ／ｋ　ｇ）　ｉ：、Ｊ：す、１２０分以内に血圧の顕著な下 降が認められた（△全身動脈圧＝−６９±１６ｍｍＨｇ、ｐ＜０．０５）。未処 理のイヌでは、この用量の内毒素により致命的な心臓血管虚脱が発症する。Ｌ− ＨＭＡはほとんどの場合１．５分以内に低血圧症を逆転させ、全身動脈圧は４７ ．８±６．８ｍｍＨｇ（ｐ＜０．０１）、全身血管抵抗は２０６０＋３３８ダイ ン−秒／ｃｍ５（ｐ＜０．０１）上昇した。心拍数と心拍出量は変化しなかった く表７）。Ｌ−アルギニンはＩ−ＮＭＡの効果を逆転し、内毒素に起因する低血 圧症を回復し、全身動脈圧（ｐ＜０．０．０１）と全身血管抵抗（ｐｒｏ、０１ ）の両方をＬ−ＮＭＡの投与前の値の近似値まで下降させた。図５に示すように 、Ｌ−アルギニンの投与後では、血圧はＬ−ＮＭＡ前の水準近（まで低下した。
図５は、ベンドパルビタールで麻酔したイヌに内毒素（ＥＴ）、Ｎｏ−メチル− Ｌ−アルギニン（Ｌ−ＮＭＡ）およびＬ−アルギニン（Ｌ−Ａ　ｒ　ｇ）を静脈 内投与をした後の全身動脈圧の経時変化を示している。この実験と追加実験のデ ータを要約したものを表７に示す。
内毒素ヤサイトカインが誘発したショックに酸化窒素含阻害剤を臨床使用するに 当たっては、Ｌ　−ＮＭＡの低血圧に対する逆転効果が長時間持続することを確 認することが重要である。Ｌ−ＮＭＡ　（２０ｍｇ／ｋｇ）を静脈内に単回投与 したとき、３０〜６０分間正常血圧が回復したことが認められた。血圧が再び下 がり始めたときＬ−ＨＭＡをもう１回投与したところ（２０ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ 　）、内毒素で処理したイヌでは少な（とも２時間正常血圧を持続した。代表的 な実験結果を図６に示す。この実験では、正常血圧がＬ　−ＮＭＡに依存しなが ら２時間以後も持続し、Ｌ−アルギニンはこの時点から内毒素による低血圧を回 復した（すなわち、血圧が４５ｍｍＨｇ以下に下落）。図６はフエノバルビター ルによる麻酔イヌに内毒素を静脈内投与した後の平均全身動脈圧の経時変化を示 すものである。
５３分後血圧が４７ｍｍＨｇ（△全身動脈圧＝−６１ｍｍ　Ｈｇ　）まで下降し た。Ｌ−ＨＭＡ　（２０ｍｇ／ｋｇ）を投与すると、重篤な低血圧症は急速に逆 転した（１０分以内に全身動脈圧が７３ｍｍＨｇ上昇）。Ｌ−ＮＭＡの第１回目 用量で血圧が４８分間維持された後下降し始めた。Ｌ−ＮＭＡの第２回目用量に よって第１回目と同等の水準まで血圧が回復し、全身動脈圧も１００ｍｍＨｇ以 上を２時間持続した。低血圧再現の可能性が存在すること証明するため、過剰の し一アルギニン（４００ｍｇ／ｍｌ）によってＬ−ＨＭＡの効果を逆転させた。
これによって、血圧は４３ｍｍＨｇ迄下降した（△全身動脈圧−−７７ｍｍＨｇ ）。
表８に示すように、Ｌ−ＮＭＡは内毒素で処理していないコントロールのイヌに おいて有意ではあるが、大きいとは言えない昇圧効果があった。Ｌ−ＮＭＡにに 過ぎなかったし、全身血管抵抗もこれに関連して増加したに留まり（ｐ＝ｏ、ｏ ｌ）、心拍数と心拍出量は減少して統計的意味がある数値を得ることはできなっ かた。Ｌ−アルギニンは（４００ｍｇ／ｋ　ｇ）　Ｌ−ＮＭＡの昇圧効果を完全 に逆転させた。
表８ Ｌ−ＮＭＡがコントロールのイヌの血行に与えた影響基線　１２９０±１０．９ 　１２１±１７．９　３．５４±０．６８　３１１５±３４７Ｌ−ＮＭＡ後　１ ５３．８±１１．４°”　８２．５±６．１　２．１２±０．２６　５９６７± ５２３゜実験は内毒素を投与しなかったことを除いては、図５で示す実験と同様 にして行った。結果は平均上標準偏差として示している（ｎ；４）。アステリス クは基線と有意の差１１４　（”ｐ＜０゜００５、”ｐ＜０．００１）があうた ことを示している。
Ｌ−ＮＭ＾＝Ｌ−−メチル−Ｌ−アルギニン。
さらに、別の１連の実験において、Ｌ−アルギニンと酸化窒素シンターゼに依存 しないメカニズムとによって酸化窒素を生成する降圧剤であるニトログリセリン を静脈内に連続注入して、血圧を６５ｍｍＨＨに下降させた。これらのイヌに、 Ｌ−ＮＭＡ　（２０ｍｇ／ｋｇ）を投与したが１７．１±５．０ｍｍＨｇｔ、、 か変化せず、さらにまた心拍数、心拍出量、または全身血管抵抗にも著しい変化 はなかった。
肺虫症性ショックの間に起こる心臓血管虚脱の病因はよく分かっていない。現在 行われている治療としては、液剤を静脈内に投与したり、昇圧剤を使って、末梢 血管抵抗と心拍出量を増加させることが挙げられる。
ごく近年に至り、ポリミキシンＢなどの内毒素結合剤（Ｂａｎａｓａｗａ　ｅｔ 　ａｌ、、１９８９．　Ｎｅｗ　Ａｐｐｒｏａｃｈ　ｔｏ　Ｅｎｄｏｔｏｘｉｃ 　ａｎｄ　５ｅｐｔｉｃ　５ｈｏｃｋ　ｂｙ　Ｍｅａｎｓ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｍｙ ｘｉｎ　Ｂ　ｉｍｍ。
ｂｉｌｉｅｄ　Ｆｉｂｅｒ　Ｓｕｒｇ、Ｇｙｎｅｃｏｌ、０ｂｓｔｅｔ、１６８ ：２３２）　や、ＴＮＦを中和する抗体（Ｔｒａｃｅｙ　、　ｅｔ　ａｌ、、　 １９８７．　Ａｎｔｉ−ｃａｃｈｅｃｔｉｎ／　ＴＮＦ　ｍｏｍｏｃｌｏｎａｌ 　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｐｒｅｖｅｎｔ　５ｅｐｔｉｃ　５ｈｏｃｋ　ｄｕｒ ｕｎｇ　１ｅｔｈａｌ　ｂａｃｔｅｒｅｍｉａ　Ｎａｔｕｒｅ　３３０：６６２ −６６４）を使って、敗血症性ショックの後遺症を軽減している。後者の方法は 予防として価値があるのかも知れないが、内毒素やＴＮＦを除くことによって敗 血症性ショックを逆転できる証拠はない。
既に敗血症性ショックを起こしている患者の治療には、内毒素が起爆したカスケ ード反応の第２段階、第３段階にまで介入する必要がある。敗血症性ショックに 関連して低血圧症その他の変化が発現するのは、サイトカイン類、エイコサノイ ド類、血小板活性因子、活性化した補体成分その他の因子類間の複雑な相互作用 によるものである。従って、若干の動物モデルにおいて、数段階の介入を行って 少なくとも部分的な効果が認められているが、これは意外とするに当たらない。
プロスタグランジン合成阻害剤と血小板活性因子受容体拮抗剤には、治療に利用 できる考えられる２つの大きな級の化合物がある（８〜９）。これらの薬剤は効 果があるようにみうけられるが、動物実験で非常に大量の内毒素を使って試験さ れている（例えば、１〜４０ｍｇ／ｋｇ、すなわち、本発明の使用量の約１００ ０倍）。このような実験動物では数分以内に低血圧症が発現してしまい、臨床上 の敗血症性ショックに特徴的なサイトカインが媒介するプロセスを正確に反映し なくなるおそれがある。
内毒素を対象とする本実施例、および前述のＴＮＦを対象とする実施例では、内 毒素とＴＮＦはマイクログラム単位の用量を投与しているため、低血圧反応は３ ０〜９０分遅れて発現した。
本発明者らはＴＮＦをイヌに与えると重篤な低血圧症を発症し、この低血圧症は Ｌ−ＮＭＡを投与することにより実質的に逆転できることを証明した。このこと は、酸化窒素の過大産生がＴＦＨに起因するショックの大きな要因であることを 示唆している。表８のデータは、Ｌ−ＮＭＡが内毒素血症を持つイヌに対して急 速にして、且つ強力な抗降圧効果を示すことを証明している。
コントロールのイヌ４匹において、心拍出量と全身血管抵抗に対するＬ−ＮＭＡ の効果にがなりの差異が認められた。このうちの２匹では、心拍出量が著しく減 少しく△≧１．５　Ｌ／分）、全身血管抵抗の計算値が劇的に増加した（△≧３ ５００ダインー秒／ｃｍ’）。
対照的に、内毒素で処理をしたイヌや、前記以外のコントロールのイヌ２匹では 、Ｌ−ＨＭＡ投与投与信心拍出量きな変化が見られなかった。後者の全身血管抵 抗は約１４００ダイン−秒／　ｃ　ｍ　’増加したにすぎなかった。この実験結 果は、コントロール条件下において、Ｌ−ＮＭＡが心拍出量に直接的な効果を持 つ可能性があることを示唆しているが、さらに研究する必要がある。コントロー ル条件下で、Ｌ−ＮＭＡが心拍数と心拍出量の減少を誘導するのは、動脈圧受容 器の反射メカニズムが活性化することが原因であると思われる。
この考え方を支持する所見として、全身動脈圧がＬ−ＮＭＡを単独投与する場合 と同様の水準にまで上昇する用量のフェニレフリンを、コントロールのイヌに与 えると、心拍数と心拍出量に類似の減少が見られることが挙げられる。Ｌ−ＮＭ Ａが低血圧症を持つイヌの心拍数と・し・拍出量に対して効果がなかったのは、 低血圧の程度が圧受容器反射の感受性範囲以下であったためと考えられる。
多数の媒介物質が敗血症性シヨツクの病因と関係力（あると報告されており、従 って酸化窒素の生成を完全に抑制したとしても、内毒素に起因するシヨツクの４ 氏血圧症を完全に逆転させることはできないと予想（まされティた。実際、Ｌ− ＨＭＡ２０ｍｇ／ｋｇで（よ、血圧を処理前の値にまで完全に回復することはで きなかった。このことは、酸化窒素以外にも、内毒素血症をもつイヌの低血圧症 の病因に若干の関与をしている媒介物質が存在することを示唆している。また、 Ｌ−ＨＭＡは使用した用量では、酸化窒素合成を完全には抑制できなかったので 、このために血圧を処理前の水準にまで回復できなかった可能性も捨て去ること はできない。酸化窒素合成抑制の度合を生体内で直接測定することはできないの で、限られた範囲ではあるが用量反応の実験を行ったところ、Ｌ−ＮＭＡの昇圧 効果は用量を２０ｍｇ／ｋｇ以上にしても、有意に大きくはならないとの結果が 出ている。酸化窒素以外の媒介物質のために、Ｌ　−Ｎ　Ｍ　Ａ　２０　ｍ　ｇ 　／　ｋ　ｇでは内毒素に起因する低血圧症を遮断できなかったのかも知れない 。
Ｌ−ＮＭＡは■、−アルギニンに転換する性質があるため、この薬剤による長時 間抑制は本質的には限られたものであるかも知れない（Ｓａｌｖｅｍｉｎｉ、　 ｅｔ　ａｌ、、１９９０゜Ｉｍｍｅｄｉａｔｅｄ　Ｒｅ１ｅａｓｅ　ｏｆ　ａ　 Ｎ１ｔｒｉｃ　０ｘｉｄｅ−Ｌｉｋｅ　Ｆａｃｔｏｒｆｒｏｍ　Ｂｏｖｉｎｅ＾ ｏｒｔｉｃ　Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｃｅ１ｌｓ　ｂｙ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ ｉａ　ｃｏｌｉ　Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａ ｔｌ、　ＡｃａｄＳｃｉ、　８７：２５９３）、しかしながら、表５に示すＬ　 −ＨＭＡの短時間昇圧効果はこのメカニズムから影響されることはない。いずれ にせよ、Ｌ−ＮＭＡが血圧を正常値、またはこれに近い値にまで回復すると言う ことは、酸化窒素の過大産生が内毒素性ショックに合併する低血圧症の主要原因 の１つ、おそらくは唯一の主要原因であることを示している。
実験の−において、Ｌ−ＮＭＡ　（２０ｍｇ／ｋｇ）を単回注射することにより 、内毒素に起因する低血圧症を３０〜６０分にわたり逆転させることができた。
図６に示すように、その後Ｌ−ＮＭＡを１回投与して少なくとも２時間正常血圧 を維持することができた。
Ｌ−ＮＭＡは内毒素に起因する低血圧症を長時間にわたり逆転する点で、臨床上 有用である。結論として、本実施例の結果は酸化窒素合成阻害剤は敗血症性ショ ックの治療に大きな価値を持っていること示していると言うことがてきる。アル ギニンの投与によりＬ−ＮＭＡの昇圧効果が逆転するので（図５、図６）、血漿 アルギニン濃度が高いとＬ−ＨＭＡの有益な効果に拮抗したり、これを完全に消 滅させることは明かである。
Ｌ−ＮＭＡや、これと類縁の酸化窒素シンターゼ阻害剤は、低アルギニン含量の 栄養源（無アルギニンＴＰＮ）などにより、血漿アルギニン濃度を連続的に低（ 抑えている低血圧症動物に特に有用である。
え１五ユニ 生　におするＮＭＭＡとＮＡＡ 良りの１反り皮１月１１ ＮＭＭＡは、試験管内でＴＮＦおよびＩＬ−２の抗腫瘍作用を抑制しない。ＴＮ Ｆの生物活性は試験管内でネズミＬ９２９細胞に対する細胞毒性により測定した 。試験管内において、ＮＭＭＡまたはＮ１アミノア・ルギニンを添加しても腫瘍 細胞に対するＴＮＦの細胞溶解効果は変わらなかった。
表１０ アクチノマイシンＤ処理のＬ９２９細胞に対するｒｈ−ＴＮＦの細胞溶解活性に ＮＭＭＡが与える影響［ＮＭＭＡ］　ＴＮＦ活性 （ｍＭ）　（単位／ｍ１） ０　５９４、５ ０、１２５　５３６．９ ０、２５０　５３８．２ ０、５００　５６２．４ ０、７５０　４０４．７ 同様に、試験管内において、ＮＭＭＡはＩＬ−２に暴露されたヒトＬＡＫ細胞の 増殖相または溶解相のいずれも変化させなかった。
表１１ ［ＮＭＭＡ］　−目標細胞溶解の％０ アミノアルギニンは、これまで報告されている最も強力な酸化窒素産生に対する 阻害剤である。ＮＭＭＡは代謝してシトルリンとなり、このシトルリンがアルギ ニン生合成の先駆物質としての役割を果たす。従って、他のアルギニン類縁物質 についても、酸化窒素産生を抑制する性能を試験した（表１２）。
表１２ 各種Ｎ″−置換アルギニン類縁物質のＥ　Ｄ　ｉｅｗ”値の比較Ｎ　Ｍ　Ｍ　Ａ 　３３６．７ アミノアルギニン　１０９．５ ニトロ−Ｌ−アルギニン　２１１５ ニトロ−〇−アルギニン　＞　４５００ニトロ−Ｌ−アルギニンベンジルエステ ル　＞１２００ニトロ−し−アルギニンメチルエステル　１８２６ニトロー〇− アルギニンメチルエステル　＞　４５００”ＥＤ＋ｓ＋＋は、試験管内でガンマ インターフェロン（１００ＯＵ／ｍｌ）とＴＮＦ　（５００Ｕ／ｍｌ）に暴露さ れたネズミ内皮細胞が産生ずる酸化窒素の５０％を抑制した薬剤の有効用量。
試験した誘導体のうち最も強力なものはＮ”−アミノアルギニンであった。その 後の生体内試験において、アミノアルギニンがＴＮＦ投与に起因するイヌの低血 圧症を逆転する効果は、ＮＭＭＡの効果と同等であることが証明された（図７） 。
Ｎｏ−アミノアルギニン（ＮＡＡ）を複数回投与することにより、内毒素ショッ ク（致死量）が４時間３８分にわたって逆転したことが認められた。図８は全身 動脈圧（５ＡＰ）対時間（分）を示している。致死量の内毒素（２ｍｇ／ｋｇ） を６０分かけて注入し、ＮＡＡは９７．１６５、および３７４分時点で投与して 血圧を維持した。イヌは２４時間生存させ、その後剖検を行った。肝臓、肺、心 臓、脳、腸および腎臓に病理変化を認めなかった。
実１１引ユ」２ アルギニンのｒ　圧主ＴＰＮ 本実施例において、本発明の抗降圧性（ａｎｔｉ−ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｖｅ）Ｔ 　Ｐ　Ｎ製剤の定義を行う。この無アルギニン製剤は、動物の血漿アルギニン濃 度を下げるために使用することを意図している。動物のアルギニン濃度が下がる と、本発明で説明する酸化窒素シンターゼ阻害剤の抗降圧効果を増進させること ができる。この併用療法は、低血圧症が唯一または随伴する症状である疾患の治 療に用いることができる。例えば、この療法は敗血症性ショックを持つ動物、血 圧を降下させることがある化学療法剤の治療を受けている動物、あるいは外傷の ため低血圧症を経験している動物の治療に使用することができる。
次の濃度により精製結晶アミノ酸類をグルコース溶液に溶解（５％〜２９６）Ｌ 、２倍濃度のＴＰＮまたは最終剤形のＴＰＮ製剤を作り、さらにこれを滅菌、発 熱物質を取り除き、安定な溶液をとする。この製剤は、低血圧症を持つ患者、低 血圧症または敗血症性ショックが発現のおそれがある患者、特に免疫モジュレー タ−剤を服用している患者に使用する。
表１３ ２倍濃縮物　最終濃度 Ｌｉｊ員１ｍ　１００　ｍ　ｌ　、１ イソロイシン　６００−８００　−　３−４０イシン　８０Ｇ−１２００４−６ パリン　６００−８００　３−４ フエニルアラニン　２００−４００　１−２メチオニン　２００−４００　１− ２ リシン　６００−８００　３−４ ヒスチジン　２００−４００　１−２ トレオニン　４００−６００　２−３ トリプトフ７　ン１００−３００　０．５−１．５チロシン　５０−１５０　０ ．２５−０．７５アラニン　８００−　＋０００　４−５アスパラギン酸　４０ ０−６００　２−３グリシン　８００−１０００　４−５ プロリン　６００−８００　３−４ セリン２００−４００　１−２ 投与するのに適当な好ましいＴＰＮ製剤の濃度を得るため、２倍濃度物（表１３ に定める）５００ｍｌと５０９６デキストロ一ス５００ｍ１を混合して、投与剤 形１リットルを調製する（すなわち、アミノ酸類の２倍濃度物５００ｃｃとデキ ストロース溶液５００ｃｃ）。
最も好ましくは、デキストロース溶液には生理的に許容し得る濃度のビタミン類 やミネラル類を配合する。
本方法のＴＰＮには、グルタミン酸（４００〜６゜Ｏｍ　ｇ　／　２倍濃度物１ ００ｍ１、または２〜３ｇ／最終濃度１リツトル）および／またはタウリン（５ ０〜１００　ｍ　ｇ　／　２倍濃度物１００ｍ１、または０．２５〜０５ｇ／最 終濃度１リットル）を加えてもよい。
この溶液を濾過により滅菌し、非経口液用の容器に充填する。投与に際しては、 等量の滅菌グルコース溶液で所望の補給溶液濃度に希釈する。このように希釈し たＴＰＮ補給製剤は冷蔵保存する。患者には静脈内に投与する（　ＩＶ）。ＴＰ Ｎ溶液のｐＨは、生理的に許容し得るｐＨである７、０〜７．４に調整する。こ の製剤は無アルギニンである。
ｉ尻五ユ」 ５［１旺【亙景−虹ＬｆＬクーｊｊ−久（二胆亙、ｉｉＭＪ」Ｊ１本予期例にお いて、本発明の無アルギニン製剤を使用して低血圧症または敗血症性ショックを 発症するおそれがある患者、非経口的栄養補給を必要とし且つ低血圧症または敗 血症性ショックを発症するおそれがある患者、あるいは既に低血圧症または敗血 症性ショックを発症している患者を治療する方法を提供する。
本予期例で提案する製剤と方法は、全非経口栄養補給を必要とし且つ免疫モジュ レータ−を服用している患者の臨床管理に特に有用である。本発明の説明で用い る「免疫モジュレーター−１なる語は、インターフェロン、インターロイキン２ 、インターロイキン１および腫瘍壊死因子などの薬剤を指す。
免疫モジュレーターとして知られている多くの級の化合物は、標準的な細胞毒性 薬剤を服用している癌患者に抗癌化学療法剤、あるは免疫回復剤（ｉｍｍｕｎｏ ｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ）として使用されている。従って、本予期例で説明する 方法は、非経口栄養補給を継続しながら免疫調整作用または免疫回復作用をもつ 化学療法剤（例えば、インターロイキン１）を服用している患者の臨床管理に有 効である。
本発明において、アミノ酸類の混合物を薬学的に許容し得る希釈剤に溶解してい る無アルギニン製剤を動物に投与することよりなる、動物の酸化窒素産生進に起 因する全身性低血圧症の予防治療方法を提供する。
この方法においても、製剤は無アルギニンである。
この製剤は、動物の血圧が生理的に許容し得る水準に達し、この水準が維持され るまで、患者に投与を継続する。ヒトの生理的に許容し得る収縮期血圧とは約１ ００ｍｍＨｇである。
詳しくは、本発明の方法は、アミノ酸類の混合物を含有する実質的に無アルギニ ンの製剤からなる。この製剤は、患者が必要とする高栄養（全非経口栄養）溶液 を静脈内投与するのが生理的に適当となるように調製する。
最も好ましいアミノ酸類混合物の濃度範囲として、本発明で開示する方法と特製 の無アルギニン製剤の処方を表１４に示す。最も好ましくは、製剤は表１４の濃 度で成分を含有する。
！！１４ の　ミ　の　い イソロイシン　約３−４ｇ／　＋　（０，３−０，４％）ロイシン　約４−６ｇ ／＋　（０，４−０，６％）リジン　約３−４ｇ／＋　（０，３−０，４％）メ チオニン　約１−２ｇ／＋　（０，１−０，２％）フェニルアラニン　約１−２ ｇ／Ｉ　（０，１−０，２％）トレオニン　約２−３ｇ／］　（０，２−０，３ ％）トリプトファン　約０．５−１．５ｇ／ｌ　（０，０５−０，１５％）バリ ７　約３−４ｇ／Ｉ　（０，３−０，４％）アラニン　約４−５．／＋　（０， ４−０，５％）ヒスチジン　約１−２ｇ／Ｉ　（０，１−０，２％）プロリン　 約３−４ｇ／ｌ　（０，３−０，４％）セリン　約１−２ｇ／＋　（０，１−０ ，２％）チロシン　約０．２５−０．７５ｇ／　＋　（０，０２５−０，０７５ ％）グリノン　約４−５ｇ／ｌ　（０，４−０，５％）アスパラギン酸　約２− ３ｇ／　ｌ　（０，２−０，３％）製剤にはオルニチンを配合してもよい。オル ニチン配合の場合の濃度は、約１〜２グラム／投与用希釈ＴＰＮ製剤１リツトル （オルニチン約０．１〜０．２％）である。
これは非経口製剤であるので、混合物は生理的に非経口投与が可能であるように 調整しなければならない。
本予期例で説明する非降圧非経口栄養製剤のもう１つの剤形において、低血圧症 動物の酸化窒素産生に必要な基質を充分に供給しないことを確認できる低濃度の アルギニンを含有していてもよい。本発明で言う低濃度のアルギニンとは、投与 用希釈製剤に対してアルギニン約０．１％またはこれ以下の量を指す。最も好ま い製剤のアルギニン含量は約０．０１％〜約０．１％である。
本発明の最も好ましい他の実施態様は実質的に無アルギニンである。実質的に無 アルギニンの製剤の特に好ましい実施態様の１において、アミノ酸であるオルニ チンとシトルリンが配合されている。オルニチンとシトルリンは、動物が必要と する尿素サイクルの基質として働くものである。オルニチン、またはシトルリン のいずれか一方、あるいはその両方を任意の成分として製剤に添加する。これら ２つの成分を配合する目的は、尿素サイクルが必要とする栄養の補給にある。
オルニチンとシトルリンを製剤に配合する場合の最も好ましい濃度は、オルニチ ン約０．１〜０．２％（または、　１〜２ｇ／Ｉ）、シトルリン約０１％（また は、１　ｇ　／　Ｉ　）である。
表１５ アミノ酸類混合物の無アルギニン製剤 ２倍濃縮物　最終栄養補給ａ度 り主１１１　ｍ　”　Ｏｍ’　−ユ、Ｚ土工イソロイノン　６００３ ０インン　１．０００　５ リシン　１．０００　５ メチオニノ　２００１ フエニルアラニン　３００　１．５ トレオニン　４００２ トリプトフアノ　２００１ バリン　５００　２．　Ｓ アラニン　９００　４．５ ヒスチジン　３００　１．５ プロリン　７００　３．５ セリン　４００　２．０ チロ／ン　４５０　２．０ グリシン　８００　４．０ アスパラギンＩＩ　６００　３ オルニチ：／　４００　２ 前記の製剤中のオルニチン含量を省いて、濃度約２ｇ／Ｉのシトルリンに置き換 えることができる。アミノ酸類の（２倍）濃縮物は１対１の比率で、例えばグル コース溶液などの薬学的に許容し得る希釈剤と混合する（デキストロース溶液１ 部に対してアミノ酸溶液１部）。さらに、微量成分、ビタミン助剤、および必須 塩（Ｎａ’、Ｋ４、ＰＯ，＼　Ｃａ　”、Ｍ　ｇ　”）を添加してもよい。
低血圧症の治療予防方法の一部として、抗降圧剤を非経口栄養製剤の形にして医 学専門家に周知の非経口補給方法により投与してもよい。
本発明の方法を実施するに当たっては、無アルギニン製剤の投与をやめる時点を 決定する生理基準を設ける。例えば、患者が生理的に許容し得る血圧水準（約１ ００ｍｍＨｇとする）に達したことを測定する目的で、患者の収縮期血圧水準の モニターを行う。正常収縮期血圧を回復したならば、この時点で酸化窒素産生が 低下し、治療している動物の末梢血管抵抗や、動脈血圧が大きく低下する危険を 脱したと判断する。
本発明の方法による一般的な定義として、低血圧症（血圧が低い）とは、ヒト成 人の収縮期血圧が約１００ｍｍＨｇ以下であることを言う。ヒト成人の生理的に 許容し得る収縮期血圧とは、収縮期血圧が少なくとも１００ｍｍＨｇであること を言う。
これまで、標準ＴＰＮ製剤を投与すると血清アルギニン濃度が上昇することが観 察されてきた。そこで、本発明者らは、ＴＰＮ製剤から成分としてのアルギニン を取り除き、この無アルギニンＴＰＮ製剤を患者に服用させて、標準ＴＰＮ製剤 により治療されている同様の疾患を持つ患者と比較して、血清アルギニン濃度を 顕著に低下させることを提案する。
約０．１％以上のアルギニンを含有している標準ＴＰＮ製剤では、本発明が意味 する降圧製剤となり得ない。
予」Ｌ桝１３ １アルギもノＩ−をＬシ二酸化５、阻　剤に表（【１瓜］災崖Ｊｎ 本予期例において、動物の敗血症性ショックなどの各種疾患に合併する低血圧症 や化学療法に起因する低血圧などを治療する方法を提供する。詳しくは、ヒトな どの動物の低血圧症を無アルギニン製剤とアルギニン類縁物質で治療する最も好 ましい方法を提供する。
本発明者らは、本発明で言うアルギニン類縁物質が酸化窒素阻害剤、より特定的 には酸化窒素シンターセ阻害剤であることを証明した。従って、本方法と療法の 説明では、これら２つの語は相互に互換できるものとする。
本発明においてこれまで、動物の生理アルギニン濃度を低下させることの効果、 および各種のアルギニン類縁物質や、酸化窒素シンターゼ抑制剤の効果に関する 生体内、試験管内の実験結果を開示してきた。本予期例では、患者の低血圧症の 治療に本発明の療法や方法を応用する充分な技術を開示する。レミントンの薬学 書（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ ｓ　（１９９０）。
Ｈａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎ ５ｙＬｖａｎｊａ１８０４２　（１８ｔｈ　ｅｄｉｔｉｏｎ）　）を始めとする 各種の医学専門書を参照すれば、患者に合わせて用量や、患者に使用することと 生理的に相客てきる溶液を調整する特定の生理指針を得ることができる。前記レ ミントンの薬字書（、１９９０）は、低血圧性疾患患者の治療に用いる生理的に 相客であり、且つ毒性のない製剤を調製する際に臨床家が考慮しなくてはならな い生理的および／または薬理的指針を得る目的のために、引用することにより特 に本明細書の一部とする。
本発明者らは、動物、特に低血圧症動物の生理アルギニン濃度を低下させると、 昇圧薬に対する動物の昇圧反応が向上し、生体内で血圧を上昇させることができ ることを証明した。さらに、本発明者らは、ＮＭＡ、ＮＡＡ、およびＮＮＡを初 めとする各種のアルギニン類縁物質を投与することが、低血圧症動物の血圧を上 昇させる効果的な手段になることを証明した。この効果は、より特定的には内毒 素に起因する低血圧症を持つ動物において証明されたものである。この実験では さらに、生理アルギニン濃度を下げる処理を何も行わなかった低血圧症動物にお いて、血圧を上昇させる薬剤（つまり、昇圧剤）に対する反応が鈍化することが 認められた。これらの実験を総合すると、低血圧症動物の生理アルギニン濃度を 下げること、血圧を上げることができるアルギニン類縁物質を同時に投与するこ と、あるいは生理アルギニン濃度を効果的に低下させた後で前記のアルギニン類 縁物質を投与することよりなる併用療法によって、患者の低血圧性疾患を改善し たり、および／または除去したりする効果的な治療を行うことを期待できる。ま た、実験動物を用いたこれらの結果と反応とを関連付けて、患者としてのヒトも 同様の反応を示すと期待できる。
従って、患者の低血圧症は、先ず患者に無アルギニン補助栄養源を継続して与え ることによって効果的に治療することができる。患者に無アルギニン非経口製剤 （ＴＰＮ）の投与を継続すると、この患者の生理アルギニン濃度が下がると考え られている。非経口製剤からアルギニンを除くと、動物のアルギニン量を減少さ せる性能を持つようになる。本発明の実施例で証明されているように、低血圧症 動物のアルギニン濃度が低下すると、昇圧薬に対する動物の反応が増進するよう になる。最も好ましくは、患者に無アルギニン非経口製剤を２〜６時間継続投与 してこの患者のアルギニン濃度を充分に下げる。主治医は患者のアルギニン濃度 の低下状況をモニターする。初期血漿または血清アルギニン濃度を基線とし、こ れと比較して生理アルギニン濃度の相対的な増減を計測する。最も好ましくは、 患者にアルギニン類縁物質を投与する前に、血漿または血清アルギニン濃度を４ μＭ以下に下げる。但し、血清アルギニン濃度の場合、この値まで下がらなくと も本方法の実施に支障はなく、より好ましい場合すらある。
患者によって異りはするが、患者に少なくとも２〜２４時間無アルギニン非経口 弁径の継続投与を続けると、この患者の生理アルギニン濃度が充分に低下し、本 発明のアルギニン類縁物質に対する昇圧反応が増進すると考えられている。この 説明で用いられているアルギニン類縁物質、酸化窒素阻害剤および酸化窒素シン ターゼ阻害剤なる語は、相互に互換できるものとする。
患者の生理アルギニン濃度が許容し得る濃度（微量から原アルギニン濃度の半分 までの範囲）にまで下がったら、この患者にＮＭＡ、ＮＡＡ、ＮＮＡまたはその 合剤などの類縁物質を投与する。最も好ましくは、このアルギニン類縁物質を静 脈内に単回一括投与する。
アルギニン類縁物質の最も好ましい調製方法として、患者に与えられるアルギニ ン類縁物質の１回用量が０゜１ｍｇ／ｋｇ〜約１００　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇとな る濃度を無菌食塩水に溶解することが挙げられる。さらに最も好ましくは、この 方法で使用することが最も好ましいアルギニンの用量としては、約１０　ｍ　ｇ 　／　ｋ　ｇ〜約３０ｍｇ／ｋ　ｇ、または約２０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇを挙げ ることができる。
治療期間中、特にアルギニン類縁物質投与後は、毎時間少なくとも１回想者の血 圧の相対的増減を連続モニターしなければならない。最も好ましいアルギニン類 縁物質はＮＭＡである。アルギニン類縁物質を投与しても血圧が上がらない場合 には、アルギニン類縁物質の用量を増量する。増量の場合、初回投与後３０分以 内に患者に投与しなくてはならない。
夾」Ｌガ」−土 Ｗｆト毒」し抗」ＩＱ」１製 本実施例において、無アルギニン非経口製剤との併用療法および方法に使用する 坑内毒素抗体の調製方法を提供する。
内毒素に対するポリクロナール抗体は、動物の坑内毒素抗体の力価水準を確認で きるようになるに充分な量の市販の内毒素製剤をこの動物に注射する免疫プロト コルを用いて調製することができる。市販の内毒素の供給源の例としては、シグ マ・ケミカル社（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ 、　Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）が挙げられる。
内毒素には、グラム陰性菌と大腸菌（Ｅｓｃｅｒｊａｃｈｉａ　ｃ。
１ｉ）の細胞壁素材の両方に共通するポリペプチドかある。
ＨＡ−ＩＡ（セントキシン（Ｃｅｎｔｏｘｉｎ）　）は、内毒素の脂質Ａドメイ ンに結び付くヒトモノクロナールＩｇＭ抗体で、テンプ、カブランおよびブロー ド（Ｔｅｎｇ。
Ｋａｐｌａｎ　ａｎｄ　Ｂｒａｕｄｅ）が開発した安定な異種骨髄腫（ｈｅｔｅ ｒｒｏｍｙｅｌｏｍａ）細胞系Ａ６　（Ｈ４Ｃ５）により産生される（Ｔｅｎｇ 　ｅｔ　ａｌ、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ。
、Ａ、　８２：１７９０−４．１９８５）。テンプらの文献は、特にこの目的の ために、引用することにより特に本明細書の一部とする。ＨＡ−Ｉ　Ａは、多く の内毒素および広範囲のグラム陰性菌の臨床遊離物と特異的に結び付くことが立 証されている。菌属症および内毒素血症の各種動物モデルにおいて、ＨＡ−Ｉ　 Ａは誘発試験（ａｆｔｅｒ　ｃｈａｌｌｅｎｇｅ））を行ってがら投与すると、 皮膚のシュワルツマン（Ｓｈｗａｒｔｍａｎ）反応の発現と死亡を防止する（　 Ｔｅｎｇ　ｅｔ　ａｌ、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、 Ｓ、Ａ、　８２：１７９０−４゜１９８５；　Ｚｉｅｇｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　 Ａ、　Ｃ１１ｎ、　Ｒｅｓ、　３５：６１９＾、１９８７）。
ＨＡ−Ｌ　Ａは、連続潅流細胞培養を行った後、選択的沈澱とカラムクロマトグ ラフィを始めとするｌ連の工程により上澄み液を精製して調製する（　Ｚｉｅｇ ｌｅｒ　ｅｔａｌ、　Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　３２４：４２９−４ ３６．　１９９１）。ＨＡ−ＩＡを産生ずる細胞系は広く試験されていて、ヒト ウィルスに汚染されていないことが証明されている。さらに、ＨＡ−ＩＡの精製 工程には特異的なウィルス失活法か含まれていて、ウィルスが存在しないことを 確認する試験も行われている。感度ミリリットル当り３μｇの検定試験において 、検出し得る内毒素を含むロフトが出たことがない。
内毒素に対する２つのモノクロナール抗体、Ｅ５とＨＡ−Ｉ　Ａが、現在米国食 料薬品局（Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　ＤｒｕｇＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）に申請 中である。Ｅ５は、ネズミスプレノサイｌ−（５ｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ）をＪ５ 変異大腸菌（Ｅ。
ｃｏｌｉ）細胞で免疫感作して開発されたもので、脂質Ａに対して反応性を持つ ＩｇＭ抗体である（　Ｇｒｅｅｎｍａｎ　ｅｔ　ａｌ、、　ＪＡＭＡ　２６６： １０９７−１１０２．　１９９１）。ＨＡ−Ｉ　Ａはヒト１ｇＭ抗体で（これも Ｊ５変異細胞を免疫感作して誘導した）、脂質Ａに特異的に結び付＜　（Ｚｉｅ ｇｌｅｒ　ｅｔａｌ、、　Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　３２４：４２９ −４３６．１９９１）。Ｅ５とＨＡ　−Ｌ　Ａは共に、きわめて多種のグラム陰 性菌から放出される内毒素に結び付くことが証明され、いずれもランダム化、二 重盲験およびコントロールからなる試験によって評価されている。
ＨＡ−Ｉ　Ａ臨床試験のにおいて、２６２名の患者にこの抗体１００ｍｇを静脈 内に単回投与し、２８１名にはプラシーボ（偽薬）を与えた（　Ｚｉｅｇｌｅｒ 　ｅｔ　ａｌ、　Ｎ。
Ｅｎｇｌ、Ｊ、　Ｍｅｄ、　３２４：４２９−４３６．　１９９１）。この結果 、グラム陰性菌血症患者２００名（この臨床試験全対象患者の３７％）の２８日 間死亡率が３９％改善された。
グラム陰性菌血症患者のうち１０１名は、試験開始時においてショックを併発し ていた（収縮期血圧かく９０ｍｍＨｇであるか、または血圧を維持するため血管 昇圧剤を使用している）。このサブグループの２８日間死亡率は４２％改善され た。また、グラム陰性菌血症患者の臓器不全では、緩解が増加した。ＨＡ−Ｉ　 Ａを投与した６１名中３８名（６２％）、プラシーポ（偽薬）を与えた６２名中 ２６名（４２％）では、７日以内にすべての臓器不全の症状が消失した。
杭内毒素コア抗血清の試験が否定的な結果に終わったとする幾つかの報告がある 。これらの実験のほとんどはマウスを使って行われた。矛盾する結果が出た理由 は完全には分からないが、いくつかの要因が考えられる。　（ＭｃＣａｂｅ　ｅ ｔ　ａｌ、　Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　１５８：２９１−３００、　１ ９８８；　Ｚｉｅｇｌｅｒ、Ｅ、Ｊ、Ｊ、Ｉｎｆｅｃｔ、Ｄｉｓ、１５８：　２ ８６−２９０、　１９８８）。これらの要因としては、鰯歯動物が内毒素に対し て相対的抵抗を示すこと、グラム陰性感染症と内毒素血症の充分な動物モデルを 確立するためには宿主の防御を容赦なく弱体化しなくてはならないこと、型特異 的抗体に較べ交差反応性の杭内毒素コア抗血清の親和力がかなり弱いことが挙げ られる。最近にいたり、ボームガードナーら（Ｂａｕｍｇａｒｔｎｅｒ　ｅｔ　 ａｌ、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１７１：８８９−９６．１９９０）は、Ｈ Ａ−ＩＡなどと同じ原クローンから細胞を単離し、この細胞からヒトモノクロナ ール抗体を誘導したところ防御を示さながったと報告したが、この抗体はＨＡ− Ｉ　Ａを生産したメーカーが生産精製したものではなかった。内毒素感受性がヒ トに似ている種の実験が行われる際には、Ｊ５抗体による防御を証明することが できる（Ｓｐｉｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　Ｃ１ｒｃ、　５ｈｏｃｋ　２８：２３５− ４８．１９８９）。カランドラらが行った、グラム陰性敗血症ショック患者にＪ ５免疫グロブリンを使用する実験は失敗に終わった（　Ｃａ　１ａｎｄｒａｅｔ 　ａｌ、Ｊ、Ｉｎｆｅｃｔ、Ｄｉｓ、１５８：３１３−９．　１９８８）が、こ れは製剤中にＩｇＭが含まれていなかったためかも知れない。
ＨＡ−ＩＡはフェーズＩ試験で癌患者１５名に（Ｋｈａｚａｅｌｉ　ｅｔ　ａｌ 、　Ｊ、　Ｂｉｏ、　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅ　Ｍｏｄ、　９：１７８−８４．１９９ ０）、盲験ではない方法で敗血症患者３４名に（Ｆｉｓｈｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　 Ｃｒ１ｔ、　Ｃａｒｅ　Ｍｅｄ、１８：１３１１−５．　１９９０）に投与され 、さらに前記の試験で２９１名の患者がこの抗体を服用した。これらの患者すべ てにおいて、ＨＡ−Ｉ　Ａは安全であり、耐薬性に優れ、且つ免疫原性ではなか った。
杭内毒素抗体と併用する酸化窒素シンターゼ阻害剤としては、前記の実施例で説 明したような、酸化窒素シンターゼに対して抑制作用を持つアルギニン類縁物質 がある。杭内毒素抗体は、無アルギニン非経口製剤と同時に、あるいはその後投 与することにより低用量であっても治療効果を示すことが期待される。
支育貫」」− ■（−死」Ｅ子」し体！し具１ 本実施例において、本発明で説明する療法と治療方法で使用する抗腫瘍壊死因子 抗体を調製する方法を明示する。腫瘍壊死因子に特異的なポリクロナール抗体と モノクロナール抗体は、いずれも当業者に知られている方法により調製すること ができる。ポリクロナール抗体の調製には、動物に腫瘍壊死因子で免疫感作させ る免疫法を用いることができる。さらに、モノクロナール抗体は、腫瘍壊死因子 により免疫感作された動物の牌臓を無限増殖性腫瘍細胞系と融合させてハイブリ ドーマを得、こねから抗腫瘍壊死因子抗体を産生させる標準ハイプリドーマプロ トコルによって調製することができる。
ＴＮＦαに対する抗体を投与すると、その後内毒素が誘発されても致命的な作用 がら動物を守ることができる（Ｂｅｕｔｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　５ｃｉｅｎｃｅ 　２２９：８６９−８７１．　１９８５；Ｔｒａｃｅｙ　ｅｔ　ａｌ、　Ｎａｔ ｕｒｅ　３３０：６６２−６６４．１９８７；　０ｐａｌ　ｅｔａｌ、　Ｊ、Ｉ ｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　１６１：　１１４８−１１５２．１９９０：　５ｉｌ ｖａｅｔ　ａｌ、　Ｊ、Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、　１６２：４２１−４２７． １９９０）。この防護効果は、抗ＴＮＦα抗体を内毒素の誘発がら３゜分経過し た後に投与し場合でも、発現することができる。　（Ｈｉｎｓｈａｗ　ｅｔ　ａ ｌ、Ｃ１ｒｃ、５ｈｏｃｋ、３０：２７９−２９２．　１９９０；　Ｂａｈｒａ ｍｉ　ｅｔ　ａｌ、Ｉｎ：　Ｐｒｏｇｒａｍ　ａｎｄ　Ａｂｓｔｒａｃｔｓ　ｏ ｆｔｈｅ　５ｅｃｏｎｄ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｎｇｒｅｓｓ　ｏ ｎ　ｔｈｅ　ＩｍｍｕｎｅＣｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｔｒａｕｍａ、　 ５ｈｏｃｋ、　ａｎｄ　５ｅｐｓｉｓ：　Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ａｎｄ　Ｔｈ ｅｒａｐｅｕｔｉｃ　Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ；　Ｍａｒｃｈ　６−９．１９９１ ；　Ｍｕｎｉｃｈ、　Ｇｅｒｍａｎｙ、＾ｂｓｔｒａｃｔ）　Ｔ　Ｎ　Ｆαが敗 血症の発症に中心的な役割を果たしていると考えられ、従って抗ＴＮＦα抗体を 投与ることは、特に無アルギニン非経口製剤と併用する場合、よい結果を得るた めの魅力的な方法であると思われる。
ヒトの低血圧症に対する抗ＴＮＦα抗体の治療効果は、エックスレーら（Ｅｘｌ ｅｙ　ｅｔ　ａｌ、、　１９９０）が臨床試験により立証した。従って、エック スレーらが説明した抗ＴＮＦα抗体は、本発明に使用するモノクロナール抗体と して特に最も好ましいものである。本文献は、この目的のために引用することに より特に本明細書の一部とする。フェーズ１試験（Ｅｘｌｅｙ　ｅｔ　ａｌ、　 Ｌａｎｃｅｔ３３５：１２７５−１２７７、１９９０）においてエラクレーらは 、組替えヒトＴＮＦα（ＣＢＯＯＯ６）に対するネズミＩｇＧモノクロナール抗 体を、重篤な敗血症性ショック患者１４名に投与した。ＣＢＯＯＯ６抗体を注入 後平均動脈圧は顕著に上昇したが、この治療に対する副作用を認めなかった。コ ントロールを用いる、抗ＴＮＦα抗体の臨床試験が現在進行中である。
ＴＮＦαに対するモノクロナール抗体には、グラム陰性菌、ダラム陽性菌いずれ に起因する敗血症にも治療効果があると言う利点を持っている可能性がある。
しかしながら、この薬剤の成功を限られたものにする要因も幾つか存在する。第 一に、おそら（は人体中でＴＮＦαの半減期が短いため（１４〜１８分）、これ までにＴＮＦα濃度が検出がなされたのは、敗血症患者の３分の１にすぎなかっ た（　Ｍａｒｋｓ　ｅｔ　ａｌ、　Ａｍ、　Ｒｅｖ。
Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、１４１：９４−９７．１９９０）。このため、抗ＴＮ Ｆα抗体の投与時期が遅すぎたり（あるいは、早すぎたり）して、効果が発現で きないこともあろう。第二に、いくつかの研究において、ＴＮＦα濃度が上昇し たのみではショックが起こるのに充分な原因にならないことが証明されている（ 　５ｉｌｖａ　ｅｔ　ａｌ、　Ｊ、　Ｔｎｆｅｃｔ。
Ｄｉｓ、１６２：４５４−４５９．１９９０；　Ｓｕｎ　ｅｔ　ａｌ、　Ａｍ、 　Ｊ、　Ｐａｔｈｏｌ。
１３６：　９４９９５６．１９９０）。第三に、抗ＴＮＦα抗体は敗血症の原因 全部には有効でないかも知れない。
しかしながら、抗ＴＮＦα抗体は、本発明の無アルギニン非経口製剤と併用する ことにより、低血圧症、特に敗血症性ショックに合併する低血圧症の有効な治療 方法と療法となるものと期待される。
王Ｉ−何」一旦 ＴＬｌｆＬＭ素■１ζに乙丑−４ヨー乙−ＴＰＮ臣Ｉ玉１１−症１呟合ＪＬｔＪ −低」Ｌ圧１−血１予期期例においては、インターロイキン１受容体拮抗剤（特 にＩＬ　１ｒａ）と無アルギニン非経口製剤および酸化窒素シンターゼ阻害剤と の併用による低血圧症の治療について述べる。
ＩＬ−１に特異的な阻害剤は、これまでヒト単球から作られてきた（Ｓｅｃｋｉ ｎｇｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３９：１５４１−１５４ ５．　１９８７：　Ａｒｅｎｄ　ｅｔ　ａｌ、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３４： ３８６８−３８７５．１９８５）。この阻害剤は、Ｉ　Ｌ　−１が細胞表面の受 容器に結び付くのを遮断する（　Ｓｅｃｋｉｎｇｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　Ｊ、　Ｉ ｍｍｕｎｏｌ、　１３９：１５４１−１５４５．１９８７）。この阻害剤はクロ ーンされており、また配列分析では４０％のアミノ酸がＩＬ−１βと相同である ことを示している。
これまでに、ＩＬ−１受容体拮抗剤（ＩＬ　１ｒａ）と改名された（Ｈａｎｎｕ ｍ　ｅｔ　ａｌ、　Ｎａｔｕｒｅ　３４３：３３６−３４０．　１９９０；　Ｅ ｉｓｅｎｂｅｒｇ　ｅｔ　ａｌ、　Ｎａｔｕｒｅ　３４３：　３４１−３４６． １９９０；Ｃａｒｔｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　Ｎａｔｕｒｅ　３４４：　６３３−６ ３８．１９９０）。この阻害剤とＩＬ−１とは、お互いに表面受容器に付こうと して競合するが、作動効果を起こすことはない。
ワカバヤシらは（ＦＡＳＥＢ　Ｊｏｕｒｎａｌ　５：３３８−３４３．１９９１ ）、大腸菌（Ｅ、　ｃｏｌｉ）が誘発したラビットのショックのモデルにおいて 、ヒト組替えＩＬ　ｌｒａによる前処理をして内因性ＩＬ−１活性を遮断した。
すなわち、ｒＬｌｒａ処理群には１０ｍ１のＩＬ　１　ｒａ　（１０ｍｇ／　ｋ 　ｇ　）をｔ＝−１５分より、続いて４時間の間、一定速度（１５μｇ−ｋｇ− ’−ｍｉｎ−’）で静注により投与した。食塩水処理コントロール群では、低血 圧が４時間継続し、ラビット５匹中２匹が死亡した。ＩＬｌｒａで処理したラビ ットでは、一過性の血圧低下を認めたが、大腸菌（Ｅ、　ｃｏｌｉ）処理前の血 圧に戻り、死亡したラビットはなかった。合併症として白血球減少を認めたが、 拮抗剤（Ｐ＜　０．０５）で改善することができた。肺の組織検査では、ＩＬ　 ｌｒａ処理群で浸潤好中球が減少していた。ＩＬ　ｌｒａ処理群のラビットの反 応が弱くはなっていたが、循環型ＴＮＦおよびＩＬ−１の濃度は両群ともほとん ど同一であった。受容器のレベルでＩＩ、−１が特異的に遮断されることは、こ のサイトカインが敗血症性ショックの病因に欠くことができない役割を果たして いることを示している。
本発明の形懇の−とじて、ＩＬ　ｌｒａと無アルギニン非経口製剤とを併用し、 同時に投与することにより低血圧症を治療する。ワカバヤシら（１９９０）の論 文は、本発明の実施に使用するＩＬ−１受容体拮抗剤の調製方法を、説明する目 的で、引用することにより特に本明細書の一部とする。
予」Ｌ制」−ヱ え丘１１１一体３Ｌ無二乙斗−ギニンＴＰＮＵ血」【」Ｌン」しニー久Ｊ咥合」 ルＪ゛る出血圧　の−療予期期例においては、無アルギニン非経口製剤と坑内毒 素抗体よりなる治療方法を用いる低血圧症の治療を説明する。詳しくは、内毒素 に暴露されたおよび／または敗血症性ショックが発症した患者の低血圧症の治療 に、本予期例の方法と組成物を使用することを提案する。
内毒素由来の（敗血症性）ショックの場合、内毒素そのものに対する抗体、また は内毒素（例えば、腫瘍壊死因子とＩＬ−１）が起爆するカスケードに関与する サイトカイン類に拮抗する抗体を使用して、できる限り早く処置しなければなら ない。サイトカインが治療目的で使用されている研究、例えばオチョアら（Ｏｃ ｈｏａ　ｅｔ　ａｌ、、　（１９９２）　Ｊ、　Ｎａｔｌ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉ ｎ５ｔ、、　８４：８５４−８６７）の研究では抗体は役に立たないが、敗血症 性ショックでは抗体は臨床的に若干の活性を示している（Ｚｉｅｇｌｅｒ　ｅｔ 　ａｌ、（１９９２）　Ｎ、　Ｅｎｇ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　３２４：４２９−４ ３７）；Ｂａｕｍｇａｒｔｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　（１９９０）　Ｊ、　Ｅｘｐ 、　ｌｅｄ、１７１：８８９−８９６；　Ｃａ１ａｎｄｒａ　ｅｔ　ａｌ、　（ １９８８）　Ｊ、　１ｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、１５８：３１２−３１９）。抗体 治療の利点としては、内毒素の副作用は理論上すべてを避けることができること と、必要な（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉ〜・ｅ）酸化窒素シンターゼが抑制されない ことが挙げられる。最も好ましくは、抗体は酸化窒素シンターゼが誘発される前 に投与する。酸化窒素シンターゼは、一旦誘発されると活性が２４〜４８時間継 続する。臨床現場が必要とする確度でＮｏ（酸化窒素）が介在するショックを予 想することはできない。
内毒素に対する抗体は、本発明で説明しているように、動物に内毒素を注射する 免疫プロトコルを用いたり、あるいは標準ハイブリドーマ法など当業者に周知の 方法によって調製することができる。さらに、もう一つの抗体調製方法も本発明 で説明している。本発明で使用する最も好ましい坑内毒素抗体は、前記のＨＡ− ＩＡである。市販の内毒素はシグマ・ケミカル社（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａ ｌ　Ｃｏ、　（Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ、　Ｍｉｓｓｏｕｒｉ））などから入手する ことができる。
坑内毒素抗体は好ましくは、無アルギニンＴＰＮと同時に患者に投与する。無ア ルギニンＴＰＮについては、実施例１で説明しであるが、最も好ましくはシトル リン、オルニチンのいずれか一方、またはその両方を含有して、動物の尿素サイ クルの必要物を補給する。
坑内毒素抗体の治療有効濃度は患者の反応である低血圧の病状改善度によって決 定する。本発明の説明を目的として、低血圧症状の改善とは患者の収縮期血圧が 少なくとも１００ｍｍＨｇに上昇することと定義する。さらに、本発明の説明を 目的として、少なくとも１００ｍｍＨｇの収縮期血圧は正常血圧状態であると定 義する。最も好ましくは酸化窒素シンターゼの誘発前に、抗体を投与すると完全 な効果を得ることができろう。
予」Ｌ皿」一旦 本予期例において、無アルギニン非経口製剤とインターロイキンｌ受容体拮抗剤 を使用することによる、動物の低血圧症、特に内毒素に対する暴露に起因する、 または敗血症性ショックに随伴する低血圧症を治療する方法を説明する。本発明 で用いる最も好ましいインターロイキン１受容体拮抗剤は、ワヵバヤシら（１９ ９１）が述べた方法により調製したものである。ワヵバヤシらの文献は、この目 的のために引用することにより特に本明細書の一部とする。
本発明で使用する特定のインターロイキン１受容体拮抗剤の例としては、ＩＬ１ ’ｒａが挙げられる。このインターロイキン１受容体拮抗剤は、ワヵバヤシら（ １９９１）　”が説明しているが、最も好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍ ｇ／ｋｇ、さらニ最も好マシくは約１０ｍｇ／ｋｇを静脈内注入により一括投与 する。
無アルギニン非経口製剤については、本発明で説明している。この治療方法は収 縮期血圧が約１００ｍｍＨｇ以下の患者を目標とする。このような患者に対して は、本発明で説明している必須および非必須アミノ酸類の混合物を含む無アルギ ニン非経口製剤の連続投与を行う。実施態様の−において、この製剤にオルニチ ン　１〜２ｇ／Ｉおよび／またはシトルリン　１〜２ｇ／ｌを配合している。患 者には、無アルギニンＴＰＮとインターロイキン１拮抗剤の同時投与を継続する 。患者から血液サンプルを採取して、アルギニンの血清または血漿濃度を測定す る。インターロイキン１受容体拮抗剤、最も好ましくはＩＬ　ｌｒａは、患者の 静脈内に一括投与する。この特定のインターロイキン１受容体拮抗剤は、ワカバ ヤシら（１９９１）　”が説明しているが、この文献はこの目的のために引用す ることにより本明細書の一部とする。
これまでも、頻脈（β遮断の不存在下で、毎分〉９０）と頻呼吸（呼吸数毎分〉 ２０または機械呼吸が必要である。）とが全身毒性の徴候であるとされてきた（ Ｚｉｅｇｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　（１９９１）　Ｔｈｅ　Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎ ｄ　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、　３２４（７）：４２９−４３６ ）。本発明で説明する併用療法による治療患者は、このような全身毒性症状を発 現することなく、正常水準の収縮期血圧を回復することができる。
インターロイキン１受容体拮抗剤を投与したら、例えばカフ型血圧モニター計を 用いて患者の血圧をモニターする。拮抗剤の投与前と投与後いずれの場合でも、 患者に無アルギニンＴＰＮの非経口投与を継続する。
本発明の方法により患者の治療を開始した直後に、正常水準の血圧（収縮期血圧 少なくともｌｏＯｍｍＨｇ）を回復することもある。血漿／血清アルギニン濃度 を低下させることと、拮抗剤とを結び付けることにより、拮抗剤単独投与（ＩＬ 　１ｒａ）の前報の場合とは違って、全身毒性の余分な徴候を発現することがな い。
本予期例において、本発明で説明する療法や方法を用いて低血圧症を治療する好 ましい方法の−を明示する。
抗腫瘍壊死因子抗体は、カランドラらが説明した方法（Ｃａｌａｎｄｒａ　ｅｔ 　ａｌ、　（１９９１）、　Ｉｎ：　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　Ｅｎｄｏｔ。
ｘｉｎｓ：　Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ　ａｎｄ　Ｎｅｗ　Ｔｈ ｅｒａｐｉｅｓ　ｆｏｒＳｅｐｓｉｓ、　ｌ）り、　１４１−１５９）により調 製することができる。
カランドラらの文献は、この目的のために引用することにより本明細書の一部と する。この抗腫瘍壊死因子抗体の例としては、ボートラ−らが説明した（　Ｂｅ ｕｔｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８５）、　５ｃｉｅｎｃｅ、　２２９：８６ ９−８７１）ポリクロナール抗ＴＮＦ抗体が挙げられる。ポートラ−らの文献は 、この目的のために引用することにより本明細書の一部とする。さらに、本発明 の方法に使用することができ、且つ本発明の特により好ましい形態として抗ＴＮ Ｆモノクロナール抗体がある。このＴＮＦに対するモノクロナール抗体は、トレ ーシーら（１９８７）がネイチャー誌で説明している（Ｔｒａｃｅｙ　ｅｔ　ａ ｌ、　（１９８７）、　Ｎａｔｕｒｅ、　３３０：６６２−６６４）。トレーシ ーらの文献は、本発明の併用療法および治療方法に使用する抗ＴＮＦモノクロナ ール抗体の調製方法を説明する目的で引用することにより本明細書の一部とする 。好ましい抗ＴＮＦモノクロナール抗体はＣＢＯＯＯ６である。
患者は先ず、低血圧症があることを確認しなければならない。本発明の目的のた め、低血圧とは収縮期血圧が約１００ｍｍＨｇ以下の病状を指すものとする。
患者に低血圧症があることが確認されたならば、無アルギニン非経口製剤の投与 を開始する。無アルギニンＴＰＮの組成は本発明で説明している。この製剤には 、動物が代謝上必要としている尿素サイクルを確保するために、シトルリンおよ び／またはオルニチンを配合してもよい。動物あるいは患者には、血清または血 漿アルギニン濃度が低丁するまで、無アルギニンＴＰＮの投与を続行する。この ため、患者または動物から採取した血清および／または血漿サンプル中のアルギ ニン濃度の変化を連続モニターする。
抗ＴＮＦ抗体、特にエックスレーら（１９８９）　（Ｍｕｒｉｎｅ　ｍｏｎｏｃ ｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｏ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｈｕｍａｎ　 ｔｕｍ。
ｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏ ｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　５ｅｖｅｒｅ　５ｅｐｔｉｃ　５ｈｏｃｋ、 ＾ｂｓｔｒａｃｔ　Ｎｏ、　３２４．　Ｐｒｏｇｒａｍｓ　ａｎｄ　ａｂｓｔｒ ａｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　２９ｔｈ　１ｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ　ｃｏｎｆｅｒ ｅｎｃｅ　ｏｎ　ａｎｔｉ−ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｇｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｃｈ ｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ。
１５５）が説明した抗ＴＮＦモノクロナール抗体の一括投与用量を、無アルギニ ン非経口製剤と同時に患者に投与する。こうすることにより、抗ＴＮＦ抗体の投 与中、患者および／または動物に無アルギニン非経口製剤が与えられている。こ の治療により、患者および／または動物の全身血圧の水準が正常血圧水準（すな わち、少なくとも約１００ｍｍＨｇ）に上昇する。
重篤な全身性ショック患者を、組替えヒトＴＮＦに対するネズミモノクロナール 抗体（抗ｒｈＴＮＦ）によって治療したところ、患者１ｏ名のうち９名の低血圧 症が逆転したことをエックスレーらが報告している（　１９８９）。　しかしな がら、正常血圧水準に達した後７日以内に回復患者の５０％が死亡したとも報告 されている。エックスレーらが報告したこの死亡率は、敗血症性ショック患者を 治療しない場合の死亡率と相対的には同じである（カランドラら（１９８８）参 照）。従って、感染誘発後抗ＴＮＦ抗体を単独投与すると、死を防ぐ手段が無い ことになる。抗体による治療前、あるいはこれと同時に無アルギニン全非経口製 剤を患者に投与すると、患者の生存を増進し、患者の死亡率を向上させる。
支見丘ｌ別 本実施例において、ＩＬ−１，またはＩＬ−１およびＩＦＮ−αによる酸化窒素 シンターゼの誘発に対する、インターロイキン１受容体拮抗剤の効果について果 であるが、データとしてはインターロイキン１受容体拮抗剤を生体内（ｉｎ　ｖ ｉｖｏ）で使用する場合に期待できる効果も示唆するものとなっている。
本実施例では、血管平滑筋においてＩＬ−１αが誘発した酸化窒素シンターゼの 抑制について説明する。
左旋■」 ヒト組替えＩＬ−１α（以下、ＩＬ−１と言う。比活性、リンパ球活性化因子２ ｘｌＯ”単位／　ｍ　ｇ　）は、大日本製薬株式会社（日本の大阪市）製造のも のを、国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ） から恵贈された。ヒト組替えＩＬ−１受容体拮抗剤はシナ−ジエン（Ｓｙｎｅｒ ｇｅｎ、　Ｂｏｕｌｄｅｒ、　Ｃｏ、　＞から産生させた。ラットインクフェロ ンγ（ＩＦＮ−γ）は、アムジェン・バイオロジカルス社（＾ｍｇｅｎ　Ｂｉｏ ｌｏｇｉｃａｌｓ、　Ｔｈｏｕｓａｎｄ　０ａｋｓ、　ＣＡ）から入手した。別 段の特記がないかぎり、生化学試薬はすべてシグマ・ケミカル社（Ｓｉｇｍａ　 Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ、　Ｍｏ）から入手した。細胞 培養基および試薬は、別段の特記のないかぎり、ウィテソカー°バイオプロダク ト　（Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ　Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌ ｅ、ｌｂ、、）から入手した。
虹囚亙遣 マウスＡ３７５黒色腫細胞は、テキサス大学医学部アンダーソン癌センターのＥ 　フレイナーマン博士（Ｄｒ、　Ｅ、　Ｋｌｅｉｎｅｒｍａｎ、　Ｔｈｅ　Ｕｎ ｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｘａｓ　Ｍ、Ｄ。
へｎｄｅｒｓｏｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅｎｔｅｒ）から恵贈された。細胞は、ヘ ペス（ＨＥＰＥＳ）緩衝液（ｐＨ７，４）　１０ｍＭオヨヒウシ胎児血清１ｏ９ ６を含むダルベツコ改良型イーグルの培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　ｍｏｄｉｆ ｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　ｍｅｄｉｕｍ）とハムスＦ−１２培地（Ｈａｍ’ｓ　Ｆ− １２ｍｅｄｉｕｍ）中に保持した。全ての組織培養試薬中の内毒素含量は、リム ルステスト（ｌｉｍｕＬｕｓ　ａｍｅｂｏｃｙｔｅ　ａｓｓａｙ）による測定で ０．２５　ｎＫ　／　ｍ　Ｌ以下であった。ネズミＤＩＯＴ細胞は、アメリカン ・タイプ・カルチュアー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、　Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、　Ｍｄ、）がら入手 した。
フィッシャー３４４ラツトの雄成獣（ａｄｕｌｔ　ｍａｌｅ　Ｆｉｓｃｈｅｒ　 ３４４　ｒａｔｓ）がら大動脈を採取し、中間層を外植して大動脈平滑筋を培養 した。大動脈は無菌的に外し、管腔の内外表面を掻爬して、外股および内皮細胞 を取り除いた。中間片をブリマリア２５ｃｍ”組織培養フラスコ（Ｐｒｉｍａｒ ｉａ　２５ｍ２ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｆｌａｓｋｓ）に付着させて、 細胞が現れるまで増殖培地で水分を保ちながら放置した。培養物には週二回、ウ シ胎児血清１０％、ヘペス緩衝液（ｐＨ７，４）　２５　ｍＭ、Ｌ−グルタミン ２ｍＭ、内皮細胞増殖助剤（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ 、　１ｎｃ、、　Ｓｔｏｕｇｈｔｏｎ、　１ｌＩＡ）　４０　μｇ　／　ｍ　Ｌ 、ゲンタマイシン（ＧＩＢＣＯＢＲＬ、　Ｇｒａｎｄ　ｌ５ｌａｎｄ、　ＮＹ） 　１０　ｕ　ｇ／ｍ　Ｉを含む培地１９９を補給した。初代培養が集密的となっ たとき、トリプシン処理により継代を行い、外植片は捨てた。この実験では、１ ２〜１４継代の細胞を、９６ウエルのプレートにウェル当り２０，０００を接種 し、集密となったものを使用した。この細胞は古典的な谷と丘を有する平滑筋細 胞の表現形を示し、平滑筋アクチンに対する染色に陽性の反応を示した。
１１土玉七文 ラット大動脈平滑筋細胞を９６ウエルのマイクロチター（ｍ１ｃｒｏｔｉｔｅｒ ）プレートに置き、３−（４，５ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジ フェニルテトラゾリウムブロマイド（３−（４，５ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈａｚｏ １２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ　ｂｒｏｎ＋ ｉｄｅ：　ＭＴＴ）　０　．２ｍ　ｇ　／　ｍ　Ｌを含むＲＰＭＩ−１６４０培 地中で９０分間インキュベートシ、ハンクス液で洗い、ジメチルスルフオキシド １００μＬ中で可溶化を行った。細胞内でＭＭＴがホルマザンに対して減少する 程度を、５５０　ｎ　ｍ　（ＯＤ５ｓｏ）における吸光度測定によって定量化し て、これを細胞呼吸の指標とした（　Ｋｌｏｓｔｅｒｇａａｒｄ、　Ｊ、　。
ｅｔ　ａｌ、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　１０１：９７１０８． １９８７）。
上上二上−沖−【【シた細胞ｆｌ　＠＠仝畏芙ＩＬ−１依存性のＴ細胞系である ネズミＤ１０細胞を使って、ＩＬ−１のミトゲン活性を測定した。ＩＬ−１の存 在下における細胞増殖を、前報と同様にして（Ｂａｋｏｕｃｈｅ、　０９ｅｔ　 ａｌ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３８：４２４９−４２５５゜１９８７）　（ ’Ｈ）チミジンの取り込みによって評価した。
＋Ｌ−↓）１」ルｆ：　ｍ　ｄ　Ｆ１及且渾Ａ３７５腫瘍細胞を９６ウエルのマ イクロタイター（ｍ１ｃｒｏｔｉｔｅｒ）プレートにウェル当り６０００個の密 度で接種して、ＩＬ−１が誘発した細胞毒性を検討し。
た。−晩付着させた後、ＮＡＡまたはＮＭＡの存在下あるいは不存在下でＩ　Ｌ 　−１（３〜３００　ｎ　ｇ／ｍＬ）を添加した。細胞を３日間インキュベート した後、さらに２時間かけて（３Ｈ）チミジン（ウェル当り１μＣ１）を添加し た。細胞をグラスファイバーディスク（ＰＨＤ　Ｃｅ１ｌ　ｈａｒｖｅｓｔｅｄ ；　Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、　Ｉｎｃ、。
Ｗａｔｅｒｔｏｗｎ、　Ｍａ）に採取した。ディスクは一晩大気乾燥し、モデル １９００ＴＲシンチレーシヨンカウンター　（Ｐａｃｈａｒｄ　Ｉｎｓｔｒｕｍ ｅｎｔ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、　Ｄｏｗｎｅｒｓ　Ｇｒｏｖｅ。
１１、）で放射能を測定した。
滑　細胞中の亜石酸声Δ　の７−上製１ウシ胎児血清１０％、ヘペス緩衝液（ｐ Ｈ７，４）　２５　ｍＭｌ　グルタミン２ｍＭ、ペニシリン８０Ｕ／ｍＬ、スト レプトマイシン８０μｇ／ｍＬ、フンギシン２μｇ／　ｍ　Ｌ、および図中の註 に示す濃度にょるＩＬ−１、ＩＦＮ−γと各種阻害剤を含むＲＰＭＩ−１６４０ 培地中で、ラット大動脈平滑筋細胞をインキュベートした。９６ウエルのマイク ロタイター（ｍ１ｃｒｏｔｉｔｅｒ）プレートの読み取り器に標準グリース検定 器（Ｇｒｅｍｍ、　Ｌ、　。
ｅｔ　ａｌ、　Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、１２６：１３１−１３８．　１９８ ２）を取り付けて、所望時に培養基中の亜硝酸塩濃度の測定を行えるようにした 。このようにして、グリース試薬（スルファニル酸０　、５９６、ナフタレンシ アミン０．０５％、リン酸２，５％）■００μＬを等量の培養基に加え、ＯＤ　 ｓｓｏを測定して亜硝酸塩濃度の標準曲線を作図した。
細胞の不存在下でインキュベートした培地のバックグラウンド０Ｄ５５ｏは実験 値から減じた。
平坦−於しさ□０（酸化室−１）シンタニニザゴプ膚［事［≧−法□淀ウシ胎児 血清１０９６、ヘペス緩衝液（ｐＨ７，４）　２５　ｍＭｌ　グルタミン２ｍＭ 、ペニシリン８０１ｔ　ｇ　／　ｍ　Ｌ、ストレプトマイシン８０μｇ／ｍＬ、 フンギシン２μｇ　／　ｍ　Ｌ、リポ多糖（大腸菌（Ｅ、　ｃｏｌｉ）　０１１ １　：　Ｂ４）３０μｇ／ｍＬ、ＩＦＮ−７５０Ｕ／ｍＬを含むＲＰＭＩ−１６ ４０培地中で、ラット大動脈平滑筋細胞をインキュベートした。細胞は２４時間 後採取し、細胞質ゾルを調製した（　Ｇｒｏｓｓ、　Ｓ、　Ｓ６．ｅｔ　ａｌ、 　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　１７８： ８２３−８２９．１９９１）。前記報で説明されているＦｅ２゛ミオグロビン法 （Ｇｒｏｓｓ。
Ｓ、Ｓ、ｅｔ　ａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏ ｍｍｕｎ、　１７８：８２３−８２９．１９９１）により、細胞質ゾルのＮｏシ ンターゼ活性を分析した。
火Ｊｌ果 血−管だ七ａ＠訓」【ぢ］」窒慢」）二ンじ乙：＝だ」λ１［発生物学的反応モ デファイアーの不存在下で増殖したところ、ラット大動脈平滑筋細胞は酸化窒素 シンターゼ活性の徴候を示さなかった。しかしながら、ヒト組替えＩ　Ｌ　−１ （４０ｎ　ｇ、／ｍＬ）の存在下で培養すると、この細胞はＮｏの安定な分解産 物である亜硝酸塩を多量に生成放出した。１４時間以内に亜硝酸塩合成がはっき りと観察されるようになり、少なくとも４０時間増加を続けた（図２８）。これ らの観察結果は、ＩＬ−１が培養物中のラット（Ｂｅａｓｌｅｙ、　Ｄ、　、　 ｅｔ　ａｌ。
Ｊ、　Ｃｈｉｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　８７：６０２−６０８．１９９１）および ラビット（Ｂｕｓｓｅ　＆　Ｍｕｌｓｃｈ　Ｆｅｂｓ　Ｌｅｔｔ、　２７５：８ ７−９０．１９９０）大動脈平滑筋細胞を誘発して、グアニル酸シクラーゼを活 性化し亜硝酸塩に分解する因子を放出させるとの最近の報告と一致する。図２８ に示す通り、ＩＦＮ−γは自らは平滑筋細胞の酸化窒素シンターゼを誘発しない が、ＩＩ、−１によるシンターゼの誘発を顕著に増進した。ＩＬ−１受容体拮抗 剤は、ＩＬ−１、またはＩＬ−１およびＩＦＮ−γによる酸化窒素シンターゼの 誘発を９８０６以上阻害した。ｌｎｇ／ｍＬと言う低い濃度水準であっても、Ｉ Ｌ−１は平滑筋細胞中で検出できるほどの酸化窒素シンターゼ活性を誘発した。
ＩＬ−１単独およびＩＬ−１およびＩＦＮ−７のＥＤ５゜（すなわち、最大反応 の５０９６の反応をする用量）はそれぞれ約５　ｎ　ｇ　／　ｍ　Ｌと約１ｎｇ ／ｍＬであった（図２８、パネルＢ）。
酸化窒素シンターゼの誘発は、ＲＮＡとタンパク両方の合成に依存することが認 められた。従って、平滑筋細胞のコントロール単層をＩＬ−１（１００ｎｇ／ｍ Ｌ）とＩＦＮ−７（５０ｎｇ／ｍＬ）の存在下で１４時間培養し、これを無すイ ト力イン培地に移してさらに１６時間培養することにより、亜硝酸塩２．５２＝ ０．２８ｍｎ（＋Ｉ（平均上標準偏差）を産生じた。同数の細胞をダクチノマイ シン０　、５　ｍ　ｇ　／　ｍ　Ｌまたはシクロへキシミド１　ｍ　ｇ　／　ｍ 　Ｌのいずれかを加えた培地により同様にして培養した時の亜硝酸塩産生は０． １　ｎｍ０１以下に過ぎなかった。ミトコンドリア呼吸の尺度であるＭＴＴの減 少から判断すると、ダクチノマイシン、シクロへキシミドのいずれもこの条件下 では細胞の生活力に悪影響を与えなかった。　（ダクチノマイシンまたはシクロ へキシミドで処理し、ＩＬ−１で活性化された細胞によりＭＴＴは、ＩＬ−１単 独で処理したコントロール細胞による測定値に対してそれぞれ１０１％±６　％ と９５％±７９６減少した［平均上標準偏差コ　。　） 薬学および／または神経生理学技術の当業者は、本発明の開示により本発明を実 施することができるが、さらに下記の参照文献により特定の態様の実施を促進し 、その理解を増進することができる。文献をこの表加えたことをもって、該文献 が本発明の先行技術であると承認したと解釈してはならない。
次に掲げる文献は、本発明の目的の関連する部分について引用することにより特 に本明細書の一部とする。
狙」Ｌ又ｊｋ １、Ｐａｒｒｉｌｌｏ、Ｊ、Ｅ、　（１９８９）、　５ｅｐｔｉｃ　５ｈｏｃｋ 　ｉｎＨｕｍａｎｓ：　Ｃ１ｊｎｉｃａｌ　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ、　Ｐａｔｈ ｏｇｅｎｅｓｉｓ。
ａｎｄ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　Ａｐｐｒｏａｃｈ　ｉｎ：　Ｔｅｘｔｂｏｏ ｋ　ｏｆＣｒｉｔｉｃａｌ　Ｃａｒｅ、２ｎｄ　ｅｄ。
２、　Ｎａｔａｎｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、（１９８９）、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、。
１６９：８２３ ３、　Ｈａｌｕｓｈａ　ｅｔ　ａｌ、（１９８５）、Ｃｒ１ｔ、Ｃａｒｅ　Ｍｅ ｄ、。
１３：４５１ ４、　Ｓｍｅｄｅｇａｒｄ　ｅｔ　ａｌ、（１９８９）、Ａｍ、Ｊ、Ｐａｔｈｏ ｌ、。
１３５：４８９ ５、　Ｂｕｅｔｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ、（１９８５）、５ｃｉｅｎｃｅ、２２９： ８６９６、　Ｃａ５ａｌｓ−５ｔｅｎｚｅｌ　（１９８７）、Ｅｕｒｏｐｅａｎ 。
Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１３５：１１７７、　Ｗｉｓｅ　ｅｔ　ａｌ、（１ ９８５）、Ｃ１ｒｃ、５ｈｏｃｋ、１７：５９８、　Ｈａｎａｓａｗａ　ｅｔ　 ａｔ、（１９８９）、Ｓｕｒｇ、ＧｙｎｅｃｏｌＯｂｓｔｅｔ、、１６８：２３ ２ ９、　Ｔｒａｃｅｙ　ｅｔ　ａｌ、（１９８７）、Ｎａｔｕｒｅ、３３０：６６ ２−６６４１０、　Ｆｕｒｃｈｇｏｔｔ　ｅｔ　ａｌ、（１９８０）、　Ｎａｔ ｕｒｅ。
２８８：３７３−３７６ １］、　Ｓａｋｕｍａ　ｅｔ　ａｌ、（１９８８）、ＰＮＡＳ、８５：８６６４ −８６６７１２、　Ａ１５ａｋａ　ｅｔ　ａｔ、（１９８９）、ＢＢＲＣ，１６ ０：８８１−８８６１３、５ｔｕｅｈｒ　ｅｔ　ａｌ、（１９８９）、Ｊ、Ｅｘ ｐ、Ｍｅｄ、。
１６９：１０１１−１０２０ １４、５ｔｕｅｈｒ　ｅｔ　ａｌ、（１９８９）、ＢＢＲＣ，１６１：４２０− ４２６１５、　Ｗａｇｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ、（１９８３）、ＰＮＡＳ、８０：４ ５１８−４５２１１６、　Ｂｅｖｉｌａｑｕａ　（１９８６）、ＰＮＡＳ、８３ ：４５３３−５４３７１７、　Ｒｏｓｓｉ　（１９８５）、５ｃｉｅｎｃｅ、２ ２９：１７４１８、　Ｐｏｂｅｒ　（１９８７）、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１３ ８：２１４９−２１５４１９、　Ｇｏｌｄｂｌｕｍ　ｅｔ　ａｌ、（１９８９） 、Ｉｎｆｅｃｔ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、。
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３４（２）・４１３Ａ ２２、　Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ　ｅｔ　ａｌ、（１９８９）、Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　 １ｎＣｌｉｎｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｓ、、　２８６： ２４３−２６３２３、　Ｋ１１ｂｏｕｒｎ　ｅｔ　ａｌ、、（１９９０）、Ｐｒ ｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ。
Ｓｃｉ、、８７：３６２９−３６３２ ２４、　Ｋ１１ｂｏｕｒｎ　ｅｔ　ａｌ、（１９９０）、Ｂ、Ｂ、Ｒ，Ｃ，。
１７２・１１３２−１１３８ ２５、Ｋ１１ｂｏｕｒｎ　（１９９０）、Ｊ、Ｎ、Ｃ，！、、　８２（９）ニア ９２−７９６２６、　Ｌｅｈｎｌｎｇｅｒ　ｅｔ　ａｔ、Ｅｄｓ、、Ｂｉｏｃｈ ｅｍｉｓｔｒｙ、２ｎｄ　ｅｄ。
（１９７５）、Ｃｈｐｔ、２５：６９３−７２３２７、　Ｗａｇｎｅｒ　ｅｔ　 ａｌ、（１９８３）、ＰＮＡＳ、８０：４５１８−４５２１２８、　Ｔｒａｃｅ ｙ　ｅｔ　ａｌ、（１９８６）、５ｃｉｅｎｃｅ、２３４：４７０２９、Ｃａｖ ｅｎｄｅｒ　（１９８７）、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１３８：２１４９−２１５ ４３０、　５ｈｉｐｌｅｙ　ｅｔ　ａｌ、（１９４７）、Ｐｒｏｃ、Ｓｏｃ、Ｅ ｘｐ、Ｂｉｏｌ。
Ｍｅｄ、６５：４５３−４５５ ３１、　Ｌｉ　ｅｔ　ａｌ、（１９８９）、Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃａｌ　 Ｊｏｕｒｎａｌ。
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１６６：　１４７ ３３、　Ｅｔｉｅｎｎｅ　ｅｔ　ａｌ、（１９８６）、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、Ｒ ｅｓ。
Ｃｏｍｍｕｎ、、１８ニア１ ３４、Ｓａｌｖｅｍｉｎｉ　ｅｔ　ａｌ、　（１９９０）、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａ ｔｌ、　Ａｃａｄ。
Ｓｃｉ、、８７：２５９３ ３５、Ｃｅｃｉｌ’ｓ　Ｔｅｘｔｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　（１９８ ２）。
Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ　Ｄｉｓｅａｓｅ、Ｅｄｓ、、ｐｐ、１５５−１ ６８３６、　Ｖａｎｚｅｅ　ｅｔ　ａｌ、（１９９０）、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、 。
１４６：３４７８−３４８２ ３７、１ｇｎａｒｒｏ、Ｌ、Ｊ、＋　Ａｎｎ　Ｒｅｖ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、Ｔ ｏｘｉｃｏ１３０：５３５−６０．　１９９０ ３８、　Ｈｉｂｂｓ、　Ｊ、、ａｎｄ　Ｔａ１ｎｔｏｒ、Ｒ，（１９８６）、Ｍ ｅｔ加λ。
ｎ」エエリｌ−用、１３２．５０８−５２０３９、Ａ１５ａｋａ　Ｋ、、　Ｓ、 Ｇｒｏｓｓ、Ｏ，Ｇｒｉｆｆｉｔｈ　ａｎｄＲ，Ｌｅｖｉ：　Ｂｉｏｃｈｅｍ　 Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ１６０：８８１−８８６．　１９８９ ４０、　Ｒｅｅｓ、Ｄ、、Ｒ，Ｐａｌｍｅｒ　ａｎｄ　Ｓ、Ｍｏｎｃａｄａ：　 ＰｒｏｃＮａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　８６：３３７５−３３７８．　 １９８９４１、　Ｆｉｂｂｅ、Ｗ、Ｅ、、Ｊ、Ｗ、Ｍ、ｖａｎ　ｄｅｒ　Ｍｅｅ ｒ、Ｊ、Ｈ，Ｆ。
Ｆａｌｋｅｎｂｕｒｇ、Ｍ、Ｓ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、Ｐ、Ｍ、Ｋｌｕｉｎ　ａｎ ｄＣ，Ａ、Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ：　Ｅｘｐ　Ｈｅｍａｔｏ１１７：８０５−８０ ８．　１９８９ ４２、　０ｎｏｚａｋｉ、Ｋ、、Ｋ、Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ、Ｂ、Ａｇｇａｒｗ ａｌ　ａｎｄＪ、Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ：　Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍ ｍｕｎｏｌｏｇｙ１３５：３９６２−３９６７、　１９８５４３、　Ｂｒａｕｎ ｓｃｈｗｅｉｇｅｒ、Ｐ、、Ｃ，Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｎ、Ｋｕｍａｒ。
Ｖ、Ｏｒｄ　ａｎｄ　Ｐ、Ｆｕｒｍａｎｓｋｉ：　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒ ｃｈ４８：６０１１−６０１６．　１９８８４４．　Ｓｍ１ｔｈ　ｅｔ　ａｌ、 （１９９０）、Ａｍ　Ｓａｃ　Ｃ１１ｎ　０ｎｃｏ１９ニア１７７２１ ４５、　Ｃｒｏｗｎ　ｅｔ　ａｌ、、Ｂｌｏｏｄ　（Ｉｎ　ｐｒｅｓｓ）４６、 ５ｔｅｉｓ　ｅｔ　ａｌ、（１９９１）、Ｐｒｏｃ　Ａｍ　Ｓａｃ　Ｃ１１ｎ　 ０ｎｃｏ１１０：２１１ ４７、　Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ　ｅｔ　ａｌ、（１９８９）、Ｐｏｇ　Ｃ１１ｎ　 Ｂｉｏｌ　Ｒｅ５２８６：２４３−２６３ ４８、　Ｃａ１ａｎｄｒａ　ｅｔ　ａｌ、（１９９０）、Ｊ　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄ ｉｓ１６１　：　９８２−９８７ ４９、０ｈｌｓｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、（１９９０）、Ｎａｔｕｒｅ　３４８：５ ５０−５５２５０、　Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ　ｅｔ　ａｌ、（１９９１）、Ｆ ＡＳＥＢ　Ｊ５：３３８−３４３ ｅｄ、Ｓ、Ｍｏｎｃａｄａ　ａｎｄ　ａ　Ｈｉｇｇｓ、３５−４６、へｍｓｔｅ ｒｄａｍ：　Ｅｘｃｅｒｐｔａ　Ｍｅｄｉｃａ、　１９９０５２、　Ｇｒｏｓｓ 　ｅｔ　ａｌ、（１９９０）、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ＡｎｄＢｉｏｐｈｙｓ ｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉ、ｏｎｓ１７０：９６− １０３ ５３、　Ｆｕｋｕｔｏ　ｅｔ　ａｌ、（１９９０）、Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐ ｈｙｓ　Ｒｅｓ。
Ｃｏｍｍｕｎ　１６８：４５８−６５ ５４、　Ｆａｓｅｈｕｎ　ｅｔ　ａｌ、（１９９０）、ＦＡＳＥＢ　Ｊ　４：Ａ ３０９５５、　Ｇｒｏｓｓ　ｅｔ　ａｌ、（１９９１）、Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉ ｏｐｈｙｓ　ＲｅｓＣｏｍｍｕｎ　１７８：８２３−８２９５６、Ｌａｍｂｅｒ ｔ　ｅｔ　ａｌ、（１９９１）、Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ　４８ニー６９−７５５７、 Ｎａｖａ　ｅｔ　ａｌ、（１９９１）、Ｌａｎｃｅｔ　３３８：１５５５−１５ ５７５８、Ｂ１１１ａｒ　ｅｔ　ａｌ、（１９９０）、Ｊ、Ｌｅｕｋ、Ｂｉｏｌ 。
４８：５６５〜５６９ ５９、　Ｇｒｅｅｎ、Ｌ、、　Ｄ、Ｗａｇｎｅｒ、　Ｊ、Ｇｌｏｇｏｗｓｋｉ。
Ｐ、５ｋｉｐｐｅｒ、Ｊ、Ｗｉｓｈｎｏｋ　ａｎｄ　Ｓ、Ｔａｎｎｅｎｂａｕｍ ：Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｎ１ｔｒａｔｅ、　Ｎ１ｔｒｉｔｅ、　ａｎｄ　［ １Ｎ］Ｎ１ｔｒａｔｅ　ｉｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｆｌｕｉｄｓ、　Ａｎａ ｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１２６：１３１−１３８．　１９８ ２６０、Ｐａｌｍｅｒ　Ｒ，Ｒｅｅｓ　Ｄ、＾５ｈｔｏｎ　Ｄ　ａｎｄ　Ｍｏｎ ｃａｄａ　５（Ｊｕｎｅ　１９８８）、Ｂｉ、ｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒ ｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ、。
１５３・１２５１−１２５６ ６１、Ｆｌｉｂｂｓ　Ｊ、Ｖａｖｒｉｎ　Ｚ、Ｔｉａｔｏｒ　ＲＲ（Ｊａｎ、１ ５．　１９８７）。
Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１３８：５５０−５５６６２、Ｚｉｅｇｌｅｒ　ＥＪ　 ｅｔ　ａｌ、（１９９１）、Ｔｈｅ　Ｎｅｗ　ＥｎｇｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌ　 ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３２４（７）：４２９−４３６６３、Ｂａｕｍｇａｒ ｔｎｅｒ　ＪＤ　ｅｔ　ａｌ、（１９９０）、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、。
１７１：８８９−８９６ ６４、Ｃａ１．ａｎｄｒａ　Ｔ　ｅｔ　ａｌ、（１９８８）、Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒ ｎａｌ　ｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ、１５８（２）：３１２ −３１９６５、　Ｒｏｇｅｒ　Ｃ，Ｂｏｎｅ　（１９９１）、ＪＡＭ＾。
２６６（１２）：１６８６−１６９１ ６６、　０ｐａｌ　ＳＭ　ｅｔ　ａｌ、（１９９１）、Ｊ、Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅ ｓｔ、。
８８・８８５−８９０ ６７、Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ　Ｇｏ　ｅｔ　ａｌ、（１９９１）、ＦＡＳＥＢ 。
５：３３８−３４３ ６８、　Ｗｏｌｆｅ　ＳＭ　（１９９１）、Ｔｈｅ　Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ、３２４（７）：４８６−４８８６９、 Ｃａ１ａｎｄｒａ　Ｔ　ｅｔ　ａｌ、（１９９１）、Ｉｎ　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓ：　Ｃｙｔｏｋｉｎｅ　Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ　ａｎｄ　Ｎ ｅｗＴｈｅｒａｐｉｅｓ　ｆｏｒ　５ｅｐｓｉｓ、　ｐｐ、１４１−１５９７０ 、ＥｉｓｅｎｂｅｒｇＳＰ　ｅｔ　ａｌ、（１９９０）、Ｎａｔｕｒｅ。
７１、Ｉ’ｌａｎｎｕｍ　Ｃｌ　ｅｔ　ａｌ、（１９９０）、Ｎａｔｕｒｅ。
３４３：３３６−３４０ ７２、Ｃａｒｔｅｒ　ＤＢ　ｅｔ　ａｌ、（１９９０）、Ｎａｔｕｒｅ。
３４４　：６３３−６３８ ７３、　Ｔｅｎｇ、ＮＮＨｅｔ　ａｌ、（１９８５）、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、、 ＾ｃａｄ。
Ｓｃｉ、ＵＳＡ、８２：１７９０−１７９４７４、Ａｊａｎｉ　ｅｔ　ａｌ、、 Ｕ、Ｓ、Ｐａｔｅｎｔ　Ｎｏ、４．９８８．７２４７５、Ａｊａｎｉ　ｅｔ　ａ ｌ、、Ｕ、Ｓ、Ｐａｔｅｎｔ　Ｎｏ、４，８５９，４５２ＦＩＧ、１ ２５　Ｓｏ　７５１００１２５１５０１７５２００２２５２５０２７５３００Ｆ ■Ｃｙ　、２　＃ Ｆ−Ｇ、２Ｆ １　１　１０　１００　１（ＸＸ） Ｆ■Ｃ１２［ Ｆ■（，３ １−６，４Ａ ＦＩＧ、４−厘ヨ ＴＩＭＥ　ｔＭＩＮｌ碕閤（夕つ Ｆ冒０．４−［ ＴＩＭＥ　＋ＭＩＮｌ　ψ吟閏　（タノＴＩＭＥ　（ＭＩＮ　ｌ　輪切（ｔ〕 Ｆ■（、ｆ５ −１０　１０　３０　Ｓｏ　７０　９０　１１０　１３０　１５０ＴＩＭＥ　＋ ＭＩＮ１時哨（５） Ｆ■０．７ 補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） １、国際出願番号 ＰＣＴ／ＵＳ９２１０８２２７ ２、発明の名称 低血圧症と関連疾患の治療のためのアミノ酸非経口製剤３、特許出願人 国　籍　アメリカ合衆国 （ほか１名） ４、代理人　〒１０７ ５、補正書の提出年月日 １９９３年９月２４］コ ロ、添付書類の目録 （１）　補正書の翻訳文　１通 請求の範囲 １、実質的に無アルギニンであるアミノ酸類の混合物からなり、該アミノ酸混合 物が、 アスパラギン酸 からなり、低血圧症の動物に投与することにより該動物の血圧を生理的に許容し 得る水準に維持することができる抗降圧性非経口製剤。
２、動物に投与することにより腫瘍壊死因子または内毒素が誘発する該動物の全 身低血圧症を予防する非経口製剤であって、薬学的に許容し得る希釈剤中に、ア ルギニン を含み、該動物の血漿アルギニン濃度を４μＭまｔこ（まそれ未満に維持できる アルギニン含量を配合してなる非経口製剤。
フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／Ｉ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／Ｉグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ を含んでなり、動物の酸化窒素合成を低下させることができる動物の低血圧症治 療用の抗降圧性非経口栄養製剤。
４、さらにオルニチンおよびシトルリンを含有する請求項３に記載の抗降圧性非 経口製剤。
５、イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７　ｓ　ｇ／ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ を含むアミノ酸類を含有している無アルギニン製剤力１らなる低血圧症のおそれ がある動物のための栄養補給製剤。
６　上記アミノ酸類にオルニチン約１〜２ｇ／ｌまたはシトルリン約１ｇ／ｌが さらに含まれている請求項５に記載の製剤。
７、動物の低血圧症の治療方法において用いる実質的に無アルギニンのアミノ酸 混合物からなる抗降圧性非経口製剤であって、該方法が、 収縮期血圧が１００ｍｍＨｇ未満である動物を特定することと、 実質的に無アルギニンのアミノ酸混合物からなる抗降圧性非経口製剤を該動物に 投与することと、該動物の血圧測定を定期的に行うことと、該動物の収縮期血圧 が１００夏η夏ηＨｇ以上であることが検出されるようになるまで該抗降圧性非 経口製剤の投与を継続することと、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．　、５　ｇ　／　１バリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ を含有する抗降圧性非経口製剤。
８、必須および非必須アミノ酸類の混合物と薬学的に許容し得る賦形剤ならびに 酸化窒素産生を抑制できるアルギニン類縁物質の治療有効量からなる低血圧症治 療用処方として使用される無アルギニン非経口製剤。
９　アルギニン類縁物質がＮ”−アミノ−Ｌ−アルギニン、Ｎ″−メチル−Ｌ− アルギニン、またはそれらの合剤である請求項８に記載の製剤。
１０、アルギニン類縁物質がＮ“−メチル−Ｌ−アルギニンまたはＮ“−メチル −Ｌ−アルギニンである請求項８に記載の製剤。
１１　アルギニン類縁物質がＮ″−メチル−Ｌ−アルギニンであり、その治療有 効量が約０　、１　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ〜１００　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇである請 求項８に記載の製剤。
１２、Ｎ”−メチル−Ｌ−アルギニンの治療有効量が約１０　ｍ　ｇ　／　ｋ　 ｇ　〜３０　＋ｎ　ｇ　／　ｋ　ｇである請求項８に記載の製剤。
１３　上記非経口製剤が、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイノン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ ｌ−レオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０５〜１．５　ｇ／　１バリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５　ｇ／　ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラキン酸　約２〜３ｇ／ｌ からなる必須および非必須アミノ酸類の混合物を含有する請求項８に記載の製剤 。
１４　オルニチン約１〜２ｇ／Ｉを含有する請求項８に記載の製剤。
１５　血漿または血清アルギニン濃度を低下させるのに充分な用量の上記非経口 製剤をアルギニン類縁物質の前に投与する請求項８に記載の製剤。
１６、動物の低血圧症を治療するためにアルギニン類縁物質とともに用いられる 必須及び非必須アミノ酸の無アルギニン混合物がらなり、該アルギニン類縁物質 がＮ′″−アミノ−Ｌ−アルギニン、Ｎ”−ニトロ−Ｌ−アルギニン、Ｎ′−メ チル−Ｌ−アルギニン、またはそれらの合剤である、抗降圧性製剤。
１７　アルギニン類縁物質がＮ“−メチル−Ｌ−アルギニンである請求項１６に 記載の製剤。
１８、抗降圧性非経口製剤が、薬学的に許容し得る賦形剤に、 フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／Ｉグリシン　約４〜５ｇ／Ｉおよび アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ の必須および非必須アミノ酸類を含んでなる請求項１６に記載の製剤。
１９　アルギニン類縁物質がＮ″−メチル−Ｌ−アルギニンであり、その治療有 効量が約０　、１　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ〜１００　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇである請 求項１６に記載の製剤。
２０、上記製剤の治療有効濃度中に濃度約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０　ｍ　ｇ　／ 　ｋ　ｇのＮ″−アミノ−Ｌ−アルギニンを含有している請求項１６に記載の製 剤。
２１、Ｎ”−アミノ−Ｌ−アルギニンの治療有効濃度が約２０　ｍ　ｇ　／　ｋ 　ｇである請求項１６に記載の製剤。
２２　化学療法剤に関連する動物の低血圧症の治療のための治療処方として用い られる無アルギニン非経口製剤であって、該処方が治療有効濃度の酸化窒素抑制 性アルギニン類縁物質を含み、該アルギニン類縁物質が該製剤と同時またはその 後に投与される、無アルギニン非経口製剤。
２３　上記化学療法剤が腫瘍壊死因子、インターロイキン２、インターロイキン １、またはそれらの合剤である請求項２２に記載の製剤。
２４　無アルギニン非経口製剤が、薬学的に許容し得る賦形剤に、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リジン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５　ｇ／　１バリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５　ｇ／　１グリシン　約４〜５ｇ／ｌおよび アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ の必須および非必須アミノ酸類の混合物からなる請求項２２に記載の製剤。
２５、アルギニン類縁物質の治療有効量が約０．１ｍｇ　／　ｋ　ｇ　〜１００ 　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇである請求項２２に記載の製剤。
２６、アルギニン類縁物質がＮ″−メチル−Ｌ−アルギニンであり、その治療有 効量が約０．１ｍｇ／ｋｇ〜２０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇである請求項２２に記載 の製剤。
２７、アルギニン類縁物質がＮ”−メチル−Ｌ−アルギニン、Ｎ“−アミノ−Ｌ −アルギニン、Ｎ”−二トローＬ−アルギニン、またはそれらの合剤である請求 項２２に記載の製剤。
２８、敗血症ショックに伴う動物の低血圧症の治療のために酸化窒素抑制性アル ギニン類縁物質とともに用いられる無アルギニン非経口製剤であって、該アルギ ニン類縁物質が該製剤と同時またはその後に投与される、無アルギニン非経口製 剤。
２９　上記敗血症性ショックが細菌性内毒素に関連する敗血症性ショックである 請求項２８に記載の製剤。
３０、アルギニン類縁物質がＮ″−メチル−Ｌ−アルギニン、Ｎ″−アミノ−Ｌ −アルギニン、Ｎ″−二トローＬ−アルギニン、またはそれらの合剤である請求 項２８に記載の製剤。
３１　アルギニン類縁物質がＮ″−メチル−Ｌ−アルギニンである請求項２８に 記載の製剤。
３２　アルギニン類縁物質の治療有効濃度が動物の体重に対して約１５　ｍ　ｇ 　／　ｋ　ｇ　〜約３０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇである請求項２８に記載の製剤。
３３、低血圧症が発症するおそれがあるか、発症している動物の栄養補給のため に酸化窒素シンターゼ阻害剤とともに用いる栄養補給無アルギニン非経口製剤で あって、該製剤の投与と同時またはその後に該阻害剤が投与される、無アルギニ ン非経口製剤。
３４　酸化窒素シンターゼ阻害剤がＮ“−メチル−Ｌ−アルギニン、Ｎ”−アミ ノ−Ｌ−アルギニン、またはＮ”−二トローＬ−アルギニン、またはそれらの合 剤である請求項３３に記載の製剤。
３５　実質的に無アルギニンである非経口製剤が、薬学的に許容し得る賦形剤に 、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ の濃度の必須および非必須アミノ酸類の混合物を含んでなる請求項３３に記載の 製剤。
３６、酸化窒素シンターゼ阻害剤がＮ”−メチル−Ｌ−アルギニンである請求項 ３３に記載の製剤。
３７、酸化窒素シンターゼ阻害剤の低血圧症抑制有効濃度が約２０　ｍ　ｇ　／ 　ｋ　ｇである請求項３３に記載の製剤。
３８　坑内毒素抗体とともに治療処方に用いる無アルギニン製剤であって、必須 および非必須アミノ酸類の混合物を薬学的に許容し得る賦形剤に含んでなり、該 製剤の投与と同時またはその後に該坑内毒素抗体を投与する、無アルギニン製剤 。
３９　無アルギニン製剤が非経口的または腸内に投与される請求項３８に記載の 治療処方。
４０　無アルギニン製剤が非経口製剤である請求項３８に記載の治療処方。
４１　上記非経口製剤が、薬学的に許容し得る賦形剤に、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイノン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５　ｇ／　１グリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ を含んでなる請求項３８に記載の製剤。
４２　上記製剤がさらにオルニチンを濃度約１〜２ｇ／Ｉで含有している請求項 ３８に記載の製剤。
４３、上記製剤がシトルリンを濃度約１〜２ｇ／ｌで含有している請求項３８に 記載の製剤。
４４　坑内毒素抗体がＨＡ−Ｉ　Ａである請求項３８に記載の製剤。
４５、インターロイキン１受容体拮抗物質とともに治療処方に用いる無アルギニ ン製剤であって、必須および非必須アミノ酸類の混合物を薬学的に許容し得る賦 形剤に含んでなり、該製剤の投与と同時またはその後に該拮抗物質を投与する、 無アルギニン製剤。
４６　上記製剤が、薬学的に許容し得る賦形剤に、フェニルアラニン　約１〜２ ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５　ｇ／　１グリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ を含んでなる請求項４５に記載の製剤。
４７　上記製剤がさらにオルニチンを濃度約１〜２ｇ／ｌで含有している請求項 ４５に記載の製剤。
４８　上記製剤がシトルリンを濃度約１〜２ｇ／ｌで含有している請求項４５に 記載の製剤。
４９　インターロイキン１受容体拮抗物質がＩＬ　１ｒａである請求項４５に記 載の製剤。
５０　抗腫瘍壊死因子抗体とともに治療処方に用いる無アルギニン製剤であって 、必須および非必須アミノ酸類の混合物を薬学的に許容し得る賦形剤に含んでな り、該製剤の投与と同時またはその後に該抗体を投与する、無アルギニン製剤。
５１　抗腫瘍壊死因子抗体がモノクロナール抗体またはポリクロナール抗体であ る請求項５０に記載の製剤。
５２　抗腫瘍壊死因子抗体がモノクロナール抗体である請求項５０に記載の製剤 。
５３　抗腫瘍壊死因子モノクロナール抗体がＣＢ０００６である請求項５０に記 載の製剤。
５４　上記製剤が、薬学的に許容し得る賦形剤に、イソロイシン　約３〜４ｇ／ ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５　ｇ／　１グリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ からなる必須および非必須アミノ酸類の混合物を含んでなる請求項５ｏに記載の 製剤。
５５、非経口製剤がオルニチンを濃度約１〜２ｇ／ｌで含有している請求項５ｏ に記載の製剤。
５６、非経口製剤がシトルリンを濃度約１〜２ｇ／ｌで含有している請求項５ｏ に記載の製剤。
５７　抗腫瘍壊死因子抗体の治療有効量が約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０　ｍ　ｇ 　／　ｋ　ｇ　テある請求項５ｏに記載の製剤。
５８、坑内毒素抗体とともに敗血症ショックに伴う動物の低血圧症の治療に用い る無アルギニン製剤であって、該製剤の投与と同時またはその後に該抗体を投与 する、無アルギニン製剤。
５９　敗血症ショックが細菌性内毒素に関連する敗血症性ショックである請求項 ５８に記載の製剤。
６０　無アルギニン製剤が非経口製剤である請求項５８に記載の製剤。
６１、坑内毒素抗体がＨＡ−Ｉ　Ａである請求項５８に記載の製剤。
６２　坑内毒素抗体の治療有効濃度が約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０　ｍ　ｇ　、 ／　ｋ　ｇである請求項５８に記載の製剤。
６３、無アルギニン非経口製剤が、薬学的に許容し得る賦形剤に、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リジン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０５〜１．５ｇ／ｌヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜Ｑ、７５　ｇ／　１グリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ を含んでなる請求項５８に記載の製剤。
６４、化学療法剤に関連する動物の低血圧症の治療のための治療処方としてイン ターロイキン１受容体拮抗物質または抗腫瘍壊死因子抗体とともに用いられる製 剤であって、該抗体が該製剤と同時またはその後に投与される、無アルギニン非 経口製剤。
６５、インターロイキン１受容体拮抗物質がＩＬ　１ｒａである請求項６４に記 載の製剤。
６６、上記処方に抗腫瘍壊死因子抗体を含み、上記化学療法剤がインターロイキ ン１またはインターロイキン２である請求項６４に記載の製剤。
６７　上記処方にインターロイキン１受容体拮抗物質を含み、上記化学療法剤が 腫瘍壊死因子またはインターロイキン２である請求項６４に記載の製剤。
６８　無アルキニン非経口製剤が、薬学的に許容し得る賦形剤に、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リジン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５　ｇ／　１グリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ を含んでなる請求項６４に記載の製剤。
６９　インターロイキン１受容体拮抗物質の治療有効量が約１　ｍ　ｇ　／　ｋ 　ｇ　〜約１００ｍｇ／ｋ　ｇである請求項６４に記載の製剤。
７０、上記処方に抗腫瘍壊死因子抗体を含み、上記化学療法剤が腫瘍壊死因子で ある難治性低血圧症の治療に用いる請求項６４に記載の製剤。
７１　内毒素に暴露され、敗血症ショックに関連した低血圧症にある動物の治療 に用いるようにインターロイキン１受容体拮抗物質または坑内毒素抗体と組み合 わされる、該拮抗物質・抗体と同時に投与される無アルギニン非経口製剤。
７２、坑内毒素抗体がＨＡ−Ｉ　Ａである請求項７１に記載の製剤。
７３、非経口製剤である請求項７１に記載の製剤。
７４、抗腫瘍壊死因子抗体とともに内毒素関連敗血症ショックまたはサイトカイ ン誘発ショックにある動物の低血圧症の治療に用いる無アルギニン非経口製剤で あって、該製剤の投与と同時またはその後に該抗体を投与する、無アルギニン製 剤。
７５、無アルギニン非経口製剤が、薬学的に許容し得る賦形剤に、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５　ｇ／　１グリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ を含んでなる請求項７４に記載の製剤。
７６、抗腫瘍壊死因子抗体の治療有効量が約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０　ｍ　ｇ 　／　ｋ　ｇである請求項７４に記載の製剤。
７７　抗腫瘍壊死因子抗体がＣＢＯＯＯ６である請求項７４に記載の製剤。
７８　サイトカインが誘発したショックを治療するための請求項７４に記載の製 剤。
国際調査報告 フロントページの続き （３１）優先権主張番号　９１０，８６８（３２）優先日　１９９２年７月１日 （３３）優先権主張国　米国（ＵＳ） （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。
ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、０Ａ （ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＧＮ、　ＭＬ、　ＭＲ， ＳＮ、　ＴＤ、　ＴＧ）、　ＡＴ、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　 ＣＨ，Ｃ３゜ＤＥ、ＤＫ、ＥＳ、ＦＩ、ＧＢ、ＨＵ、ＪＰ、ＫＰ、ＭＧ、ＭＮ、 ＭＷ、ＮＬ、Ｎｏ、ＰＬ、ＲＯ，ＲＵ、ＳＤ、　５Ｅ （７２）発明者　キルボーン、ロバート・ジ−アメリカ合衆国、７７０９６　テ キサス、ヒユーストン、アパートメント　４０８、プレース・ヴアリー　５４９ ０ （７２）発明者　グリフイス、オーウェン・ダブリューアメリカ合衆国、１００ ２１　ニュー・ヨーク、ニュー・ヨーク、アパートメント　６エイチ、シックス テイーサード・ストリートイースト　４３０ （７２）発明者　グロス、スティーヴン・ニスイギリス国、ダブりニー８６キユ ーデイー　ロンドン、ストラドフォード・ロード

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １．実質的に無アルギニノであるアミノ酸類の混合物からなり、低血圧症の動物 に投与することにより該動物の血圧を生理的に許容し得る水準に維持することが できる抗降圧性非経口製剤。 ２．実質的に無オルニチンおよび無ノトルリノである請求項１に記載の抗降圧性 非経口製剤。 ３．上記アミノ酸類の混合物が、 アラニノ プロリノ セリノ ロイノノ メチオニノ フェニルアラニノ リノノ バリノ イノロイノノ トレオニノ トリプトファノ ヒスチノノ チロノノ グリノノ アスパラギノ酸 からなる請求項１に記載の抗降圧性非経口製剤。 ４．さらにオルニチンまたはノトルリノを含有する請求項１に記載の非経口製剤 。 ５．製剤全量に対してオルニチン約２ｇ／ｌおよびノトルリノ約１ｇ／ｌを含有 する請求項１に記載の抗降圧性非経口製剤。 ６．動物に投与することにより腫瘍壊死因子または内毒素が誘発する該動物の全 身低血圧症を予防する非経口製剤であって、薬学的に許容し得る希釈剤中に、ア ルギニノ ロイノノ メチオニノ フェニルアラニノ リノノ バリノ イノロイノノ トレオニノ トリプトファノ アラニノ プロリノ セリノ チロノノ グリノノ ヒスチノノ アスパラギノ酸 を含み、 該動物の血漿アルキニノ濃度を４μＭまたはそれ未満に維持できるアルギニノ含 量を配合してなる非経口製剤。 ７．アルギニノ　約０．１〜１ｇ／ｌ イノロイノノ　約３〜４ｇ／ｌ ロイノノ　　約４〜６ｇ／ｌ リノノ　約３〜４ｇ／ｌ メチオニノ約　１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニノ　約１〜２ｇ／ｌ トレオニノ　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファノ　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリノ　約３〜４ｇ／ｌ アラニノ　約３〜４ｇ／ｌ ヒスチノノ　約１〜２ｇ／ｌ プロリノ　約３〜４ｇ／ｌ セリノ　約１〜２９ｇ／ｌ チロノノ　約０．２５〜０．７５ｇ／ｌグリノノ　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギノ酸　約２〜３ｇ／ｌ を配合し、動物の酸化窒素合成を低下させることがてきる動物の低血圧症治療用 の抗降圧性非経口栄養製剤。 ８．さらにオリニチノおよびノトルリノを含有する請求項７に記載の抗降圧性非 経口製剤。 ９．イノロイノノ ロイノノ リノノ メチオニノ フェニルアラニノ トレオニノ トリプトファノ ハリノ アラニノ ヒスチノノ プロリノ セリノ チロノノ グリノノ アスパラギノ酸 の化合物からなる群より選ばれるアミノ酸類の実質的に無アルギニノの製剤から なり、該製剤が動物の酸化窒素合成を抑制する、低血圧のおそれある動物に用い る栄養補給製剤。 １０． イソロイノノ　約３〜４ｇ／ｌ ロイノノ　約４〜６ｇ／ｌ リノノ　約１〜２ｇ／ｌ メチオニノ　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニノ　約２〜３ｇ／ｌ トレオニノ　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファノ　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリノ　約３〜４ｇ／ｌ アラニノ　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ からなるアミノ酸類を含有している請求項９に記載の製剤。 １１．上記アミノ酸類にオルニチン約１〜２ｇ／ｌまたはシトルリン約１ｇ／ｌ が含まれている請求項９に記載の製剤。 １２．動物の低血圧症の治療方法であって、該動物の収縮期血圧か１００ｍｍＨ ｇ以下であることを確認することと、 実質的に無アルギニンのアミノ酸混合物からなる抗降圧性非経口製剤を該動物に 投与することと、該動物の血圧測定を定期的に行うことと、該動物の収縮期血圧 が１００ｍｍＨｇ以上であることが検出されるようになるまで該抗降圧性非経口 製剤の投与を継続することと、 からなる低血圧症治療方法。 １３．上記抗降圧性非経口製剤が、 オルニチン　約１〜２ｇ／ｌ イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６９／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌトリプトファン　約０．５〜１．５ｇ ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン約３〜４ｇ／ｌ セリン約１〜２ｇ／ｌ チロシン約０．２５〜０．７５ｇ／ｌ グリシン約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸約２〜３ｇ／ｌ を含有している請求項１２に記載の方法。 １４．上記抗降圧性非経口製剤が、オルニチン約１〜２ｇ／ｌまたはシトルリン 約１ｇ／ｌを含有している請求項１２に記載の方法。 １５． イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約４〜５ｇ／ｌ よりなるアミシ酸類混合物を含有し、抗降圧性濃度である約０．０１重量％〜約 ０．１重量％のアルギニンを配合した抗降圧性非経口製剤をこの動物に投与する ことよりなる敗血症性ショックにある動物に栄養補給する方法。 １６．抗降圧性非経口栄養製剤がオルニチンを全量に対して約１〜２ｇ／ｌの濃 度で含有している請求項１５に記載の方法。 １７．必須および非必須アミシ酸類の混合物を薬学的に許容し得る賦形剤に含ま せたものを含有する無アルギニン非経口製剤の治療有効量ならびに酸化窒素産生 を抑制できるアルギニン類縁物質の治療有効量からなる低血圧症治療用処方。 １８．アルギニン類縁物質がＮω−アミノ−Ｌ−アルギニン、Ｎω−メチル−Ｌ −アルギニン、またはそれらの合剤である請求項１７に記載の処方。 １９．アルギニン類縁物質がＮω−メチル−Ｌ−アルギニンまたはＮω−メチル −Ｌ−アルギニンである請求項１７に記載の処方。 ２０．アルギニン類縁物質がＮω−メチル−Ｌ−アルギニンであり、その治療有 効量が約０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである請求項１７に記載の処方。 ２１．Ｎω−メチル−Ｌ−アルギニンの治療有効量が約１０ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍ ｇ／ｋｇである請求項１７に記載の処方。 ２２．上記非経口製剤が、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ からなる必須および非必須アミシ酸類の混合物を含有する請求項１７に記載の処 方。 ２３．上記製剤がオルニチン約１〜２ｇ／ｌを含有する請求項１７に記載の処方 。 ２４．血漿または血清アルギニン濃度を低下させるのに充分な用量の上記非経口 製剤をアルギニン類縁物質の前に投与する請求項１７に記載の処方。 ２５．動物の低血圧症の治療方法であって、該動物の収縮期血圧が約１００ｍｍ Ｈｇ以下であることを確認することと、 必須および非必須アミシ酸類からなる実質的に無アルギニンの混合物を含有する 抗降圧性製剤を該動物に投与することと、 該製剤と同時に、またはその後、酸化窒素抑制性アルギニン類縁物質の治療有効 量を該動物に投与することと、 該動物の血圧のモニターを少なくとも２４時間にわたって行うことと、 少なくとも１００ｍｍＨｇの収縮期血圧が検出されるようになるまで、該動物に 該製剤と該アルギニン類縁物質の投与を継続することと、 よりなる低血圧症の治療方法。 ２６．アルギニン類縁物質がＮω−アミシ−Ｌ−アルギニン、Ｎω−ニトロ−Ｌ −アルギニン、Ｎω−メチル−Ｌ−アルギニン、またはそれらの合剤である請求 項２５に記載の方法。 ２７．アルギニン類縁物質がＮω−メチル−Ｌ−アルギニンである請求項２５に 記載の方法。 ２８．抗降圧性非経口製剤が、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌおよび アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ の濃度の必須および非必須アミノ酸類を薬学的に許容し得る賦形剤に含ませたも のを含有している請求項２５に記載の方法。 ２９．アルギニン類縁物質がＮω−メチル−Ｌ−アルギニンであり、その治療有 効量が約０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである請求項２５に記載の方法。 ３０．上記製剤の治療有効濃度中に濃度約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの Ｎω−メチル−Ｌ−アルギニンが含有されている請求項２５に記載の方法。 ３１．Ｎω−メチル−Ｌ−アルギニンの治療有効濃度が約２０ｍｇ／ｋｇである 請求項２５に記載の方法。 ３２．化学療法剤に起因する低血圧症の治療方法であって、 該化学療法剤を服用している動物をモニターし、収縮期血圧が約１００ｍｍＨｇ 以下に低下して全身低血圧症になった動物を検出することと、無アルギニン非経 口製剤と、これと同時またはこの後に投与する治療有効濃度の酸化窒素抑制性ア ルギニン類縁物質とからなる処方によって該動物を治療することと、 収縮期血圧が少なくとも約１００ｍｍＨｇに上昇したことが検出されるようにな るまで、該動物に該処方を継続することと、 からなる治療方法。 ３３．上記化学療法剤が腫瘍壊死因子、インターロイキン２、インターロイキン １、またはそれらの合剤である請求項３２に記載の方法。 ３４．無アルギニン非経口製剤が、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ からなる必須および非必須アミシ酸類の混合物を薬学的に許容し得る賦形剤に含 ませたものを含有する請求項３２に記載の方法。 ３５．アルギニン類縁物質の治療有効濃度が約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ ／ｋｇである請求項３２に記載の方法。 ３６．アルギニン類縁物質が治療有効濃度約２０ｍｇ／ｋｇのＮω−メチル−Ｌ −アルギニンである請求項３２に記載の方法。 ３７．アルギニン類縁物質がＮω−メチル−Ｌ−アルギニン、Ｎω−アミシ−Ｌ −アルギニン、Ｎω−ニトロ−Ｌ−アルギニン、またはそれらの合剤である請求 項３２に記載の方法。 ３８．敗血症性ショックに伴う低血圧症の治療方法であって、 動物に治療有効量の無アルギニン非経口製剤を投与し、これと同時またはこの後 に治療有効量の酸化窒素抑制性アルギニン類縁物質を投与することと、少なくと も１００ｍｍＨｇの収縮期血圧が検出されるようになるまで、該動物に無アルギ ニン非経口製剤の投与を継続することと、 よりなる治療方法。 ３９．上記敗血症性ショックが細菌性内毒素に関連する敗血症性ショックである 請求項３８に記載の方法。 ４０．アルギニン類縁物質がＮω−メチル−Ｌ−アルギニン、Ｎω−アミノ−Ｌ −アルギニン、Ｎω−ニトロ−Ｌ−アルギニン、またはそれらの合剤である請求 項３８に記載の方法。 ４１．アルギニン類縁物質がＮω−メチル−Ｌ−アルギニンである請求項３８に 記載の方法。 ４２．アルギニン類縁物質の治療有効濃度が動物の体重に対して約１５ｍｇ／ｋ ｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇである請求項３８に記載の方法。 ４３．低血圧症が発症するおそれがある動物の栄養補給方法であって、 低血圧症抑制効果がある濃度の酸化窒素シンターゼ阻害剤による治療とともに、 またはこれに先だって、栄養補給無アルギニン非経口製剤を動物に投与すること よりなる栄養補給方法。 ４４．酸化窒素シンターゼ阻害剤がＮω−メチル−Ｌ−アルギニン、Ｎω−アミ シ−Ｌ−アルギニン、またはＮ５−ニトロ−Ｌ−アルギニン、またはそれらの合 剤である請求項４３に記載の方法。 ４５．実質的に無アルギニンである非経口製剤が、イソロイシン　約３〜４ｇ／ ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ の濃度よりなる必須および非必須アミシ酸類の混合物を薬学的に許容し得る賦形 剤に含ませたものを含有する請求項４３に記載の方法。 ４６．酸化窒素シンターゼ阻害剤がＮω−メチル−Ｌ−アルギニンである請求項 ４３に記載の方法。 ４７．酸化窒素シンターゼ阻害剤の低血圧症抑制有効濃度が約２０ｍｇ／ｋｇで ある請求項４３に記載の方法。 ４８．治療有効量の無アルギニン製剤と、これと同時またはこの後に用いる治療 有効量の坑内毒素抗体とからなる治療処方であって、該製剤が必須および非必須 アミシ酸類の混合物を薬学的に許容し得る賦形剤に含ませたものを含有する治療 処方。 ４９．無アルギニン製剤が非経口的または腸内に投与されるものである請求項４ ８に記載の治療処方。 ５０．無アルギニン製剤か非経口製剤である請求項４８に記載の治療処方。 ５１．上記非経口製剤が、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ を薬学的に許容し得る賦形剤に含ませたものを含有する請求項４８に記載の治療 処方。 ５２．上記製剤がさらにオルニチンを濃度約１〜２ｇ／ｌで含有している請求項 ４８に記載の治療処方。 ５３．上記製剤がシトルリンを濃度約１〜２ｇ／ｌで含有している請求項４８に 記載の治療処方。 ５４．抗内毒素抗体がＨＡ−１Ａである請求項４８に記載の治療処方。 ５５．治療有効量の無アルギニン製剤と、これと同時またはこの後に用いる治療 有効量のインターロイキン１受容体拮抗剤とからなる治療処方であって、該製剤 が必須および非必須アミシ酸類の混合物を薬学的に許容し得る賦形剤に含ませた ものを含有する治療処方。 ５６．上記製剤が、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ を薬学的に許容し得る賦形剤に含ませたものを含有する請求項５５に記載の治療 処方。 ５７．上記製剤がさらにオルニチンを温度約１〜２ｇ／ｌで含有している請求項 ５５に記載の治療処方。 ５８．上記製剤がシトルリンを濃度約１〜２ｇ／ｌで含有している請求項５５に 記載の治療処方。 ５９．インターロイキン１受容体拮抗剤がＩＬ　ｌｒａである請求項５５に記載 の治療処方。 ６０．治療有効量の無アルギニン非経口製剤と、とれと同時またはこの後に用い る治療有効量の抗腫瘍壊死因子抗体とからなる治療処方であって、該製剤が必須 および非必須アミシ酸類の混合物を薬学的に許容し得る賦形剤に含ませたものを 含有する治療処方。 ６１．抗腫瘍壊死因子抗体がポリクロナール抗体またはポリクロナール抗体であ る請求項６０に記載の治療処方。 ６２．抗腫瘍壊死因子抗体がポリクロナール抗体である請求項６０に記載の治療 処方。 ６３．抗腫瘍壊死因子ポリクロナール抗体がＣＢ０００６である請求項６０に記 載の治療処方。 ６４．上記製剤が、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ からなる必須および非必須アミシ酸類の混合物を薬学的に許容し得る賦形剤に含 ませたものを含有している請求項６０に記載の治療処方。 ６５．非経口製剤がオルニチンを濃度約１〜２ｇ／１で含有している請求項６０ に記載の治療処方。 ６６．非経口製剤がシトルリンを濃度約１〜２ｇ／１で含有している請求項６０ に記載の治療処方。 ６７．抗腫瘍壊死因子抗体の治療有効量が約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋ ｇである請求項６０に記載の治療処方。 ６８．動物の敗血症性ショックに伴う低血圧症の治療方法であって、 該動物に治療有効量の坑内毒素抗体を投与し、これと同時にまたはこれに先立っ て治療有効量の無アルギニン製剤を投与することと、 少なくとも１００ｍｍＨｇの収縮期血圧が検出されるようになるまで、該動物の 血圧の定期的なモニターを行うことと、 少なくとも１００ｍｍＨｇの収縮期血圧が少なくとも２４時間持続するようにな るまで、該動物に該無アルギニン非経口製剤の投与を継続することと、よりなる 治療方法。 ６９．敗血症性ショックが細菌性内毒素に関連する敗血症性ショックである請求 項６８に記載の治療方法。 ７０．無アルギニン製剤が非経口製剤である請求項６８に記載の治療方法。 ７１．坑内毒素抗体がＨＡ−１Ａである請求項６８に記載の治療方法。 ７２．坑内毒素抗体の治療有効濃度が約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇで ある請求項６８に記載の治療方法。 ７３．無アルギニン非経口製剤か、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ を薬学的に許容し得る賦形剤に含ませたものを含有する請求項６８に記載の治療 方法。 ７４．化学療法剤に関連する低血圧症の治療方法であって、 該化学療法剤を服用している動物をモニターし、収縮期血圧が約１００ｍｍＨｇ 以下に低下したのを検出することにより、全身低血圧症になった動物を発見する ことと、 血漿または血清アルギニン濃度を低下させるのに充分な治療有効量の無アルギニ ン製剤と、これと同時またはこの後の治療有効量のインターロイキン１受容体拮 抗剤または抗腫瘍壊死因子抗体の投与とからなる処方により該全身低血圧症動物 を治療することと、収縮期血圧が少なくとも約１００ｍｍＨｇに上昇したことが 検出されるようになるまで、該動物に該処方を縦続することと、 よりなる低血圧症の治療方法。 ７５．インターロイキン１受容体拮抗剤がＩＬ　ｌｒａである請求項７４に記載 の方法。 ７６．上記処方には抗腫瘍壊死因子抗体を含み、且つ化学療法剤がインターロイ キン１またはインターロイキン２である請求項７４に記載の方法。 ７７．難治性低血圧症の治療方法として、上記処方には抗腫瘍壊死因子抗体を含 み、且つ上記化学療法剤が腫瘍壊死因子である請求項７４に記載の方法。 ７８．上記処方にはインターロイキン１受容体拮抗剤を含み、且つ上記化学療法 剤が腫瘍壊死因子またはインターロイキン２である請求項７４に記載の方法。 ７９．無アルギニン非経口製剤が、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ を薬学的に許容し得る賦形剤に含ませたものを含有する請求項７４に記載の方法 。 ８０．インターロイキン１受容体拮抗剤の治療有効量が約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ ０ｍｇ／ｋｇである請求項７４に記載の方法。 ８１．内毒素に暴露された動物の敗血症性ショックか関連する低血圧症の治療方 法であって、血漿または血清アルギニン濃度を低下させるのに充分な治療有効量 の無アルギニン製剤と、これと同時にインターロイキン１受容体拮抗剤または坑 内毒素抗体とにより該動物を治療することと、 該動物の血圧をモニターすることと、 少なくとも１００ｍｍＨｇの収縮期血圧が検出されるまで、該動物に無アルギニ ン製剤を継続することと、 よりなる治療方法。 ８２．インターロイキン１受容体拮抗剤がＩＬ　ｌｒａであり、坑内毒素抗体が ＨＡ−１Ａである請求項８１に記載の方法。 ８３．無アルギニン製剤が非経口製剤である請求項８１に記載の方法。 ８４．内毒素が関連する敗血症性ショックまたはサイトカインが誘発した敗血症 性ショックを持つ動物の低血圧症の治療方法であって、 血漿または血清アルギニン濃度を低下させるのに充分な治療有効量の無アルギニ ン非経口製剤を該動物に投与することと、 治療有効量の抗腫瘍壊死因子抗体の投与と同時に、あるいはこれに先立って、該 製剤を投与することと、この動物の血圧をモニターすることと、少なくとも１０ ０ｍｍＨｇの収縮期血圧が検出されるまで、該動物に該無アルギニン非経口製剤 の投与を継続することと、 よりなる治療方法。 ８５．無アルギニン非経口製剤が、 イソロイシン　約３〜４ｇ／ｌ ロイシン　約４〜６ｇ／ｌ リシン　約３〜４ｇ／ｌ メチオニン　約１〜２ｇ／ｌ フェニルアラニン　約１〜２ｇ／ｌ トレオニン　約２〜３ｇ／ｌ トリプトファン　約０．５〜１．５ｇ／ｌバリン　約３〜４ｇ／ｌ アラニン　約４〜５ｇ／ｌ ヒスチジン　約１〜２ｇ／ｌ プロリン　約３〜４ｇ／ｌ セリン　約１〜２ｇ／ｌ チロシン　約０．２５〜０．７５ｇ／ｌグリシン　約４〜５ｇ／ｌ アスパラギン酸　約２〜３ｇ／ｌ を薬学的に許容し得る賦形剤に含ませたものを含有する請求項８４に記載の方法 。 ８６．抗腫瘍壊死因子抗体の治療有効長が約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋ ｇである請求項８４に記載の方法。 ８７．サイトカインが誘発したショックを治療する請求項８４に記載の方法。 ８８．抗腫瘍壊死因子抗体がＣＢ０００６である請求項８４に記載の方法。
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