JPH06510984A

JPH06510984A - アスピリンの経皮投与によるトロンボキサンのレベルの抑制

Info

Publication number: JPH06510984A
Application number: JP4511662A
Authority: JP
Inventors: ケイモウィッツ，ルドルフ　エム．; フィッツジェラルド，デスモンド　ジェイ．
Original assignee: ガンダーセン　メディカル　ファウンデーション，リミティド; バンダービルトユニバーシティ
Priority date: 1991-04-03
Filing date: 1992-04-02
Publication date: 1994-12-08
Also published as: ZA922464B; ATE244011T1; AU668352B2; DE69233116D1; DK0578780T3; NO933529D0; CA2107587C; CA2107587A1; FI934324A0; EP0578780A1; KR100247441B1; DE69233116T2; AU2014292A; NO933529L; WO1992020343A1; NO306536B1; EP0578780B1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】アスピリンの経皮投与によるトロンボキサンのレベルの抑制本願は１９９１年４月３日付けで出願した米国特許願第０７／６８０．１９５号の一部継続出願である。

発明の技術分野本発明は、抗血栓剤として、およびトロンボキサンのレベルを抑制することによって利益が得られる他の内科の疾患を治療するための薬剤としてのアセチルサリチル酸（アスピリン）の用途に関する。

特に本発明は、上記の作用を誘発して上記の疾患を治療するためのアスピリンの経皮投与に関する。

発明の背景研究者たちは、臨床医学における抗血栓剤の役割を認識することによって、その効力、最適投与量、投与経路および安全性について追求してきた。アスピリンが、脳血管性疾患および虚血性心臓疾患にかかっている患者にを効な抗血栓剤であることが見出されている。

またアスピリンには他の抗血栓用途があるかもしれない、アスピリンは抗血栓剤として広く使用されるようになってきているが、恐ら（投与量が関連していると考えられる胃腸毒性を含む望ましくない副作用を依然として示している。

前記抑制作用を誘発するために、アスピリンは、血小板および血管壁細胞中に見られる酵素シクロオキシゲナーゼを不可逆的にアセチル化する（Ｂｕｒｃｈ　ら＋　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、＋　６１巻、３１４頁、　１９７８年；Ｍａｊｅｒｕｓ＋　Ｊ、Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、＋　７２巻、　１５２１頁、　１９８３年ＨＲａｔｈら、Ｊ。

Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、、　５６巻、６２４頁、　１９７５年）、シクロオキシゲナーゼはアラキドン酸を、血小板中でトロンボキサン−Ａｔ　（ＴＸＡｚ）に変換し、そして血管壁中でプロスタグランジン−Ｉｔ　＜ＰＧｌＮすなわちプロスタサイクリン）に変換する（例えば、Ｆ　ｉ　ｔｚＧｅｒａ　Ｉ　ｄら＋　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ。

Ｉｎｖｅｓｔ、、　７１巻、６７６頁、　１９８３年ｓ　Ｐｒｅｓｔｏｎ　ら＋　Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、。

３０４巻、７６頁、　１９８１年参照）。ＴＸＡ　！は血小板の凝集と血管収縮を誘発し、一方ＰＧＩｔは血小板の凝集を阻害しかっ血管拡張を誘発する。

換言すれば、アスピリンは抗血栓作用（ＴＸＡ、の産生量を減少させることによる）とトロンボゲン形成作用（ＰＧＩｚの産生量を減少させることによる）の両方をもっている。その結果、ＴＸＡ　！とｐｃ＋ｚの産生量に対するアスピリンの作用間に適切な釣合をとることが、これらの環境下でのアスピリン療法の目的であった。

アスピリンは約１．０００ｍｇ／日の投与量で投与すると、ＴＸＡ、とＰＧＩｔの両方の合成を阻害するということが一般に受入れられている（ＷｅＫｓｌｅｒら、　Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、、　３０８号、８００頁、　１９８３年）。アスピリンを非常に少量の投与量で毎日投与すると（約４０ｍｇ／日）、６−ケドープロスタグランジンＦ　＋ａと２．３−ジノル−６−ケドーブロスタグランジンーＦ、、（両方ともにＰＧＩｚ産生の代謝物である）の尿排泄量に有意な変化を起こさずに、生体外でのトロンボキサンＢｙの合成を阻害し、かつ２．３−ジノル−トロンボキサン−８２の尿排泄量を減少させる（後者の両方ともにＴＸＡＩの代謝物である）と報告されている（Ｐａｔｒｉｇｎａｎｉら、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　６９巻、　１３６６頁、　１９８２年；　ＦｉｔｚＧｅｒａｌｄらの上記文献）　、　４０ｍｇ／日の投与量はプロスタサイクリンの生合成に有意な作用をしないが、いくつかの測定可能な作用がある（ＦｉｔｚＧｅｒａｌｄらの前記文献）、さらにこの投与量では２．３−ジノル−ＴＸＢ、は充分には抑制されず、かつアスピリンがブラジキニンの刺激によるプロスタサイクリンの生成を抑制するか否かについては分かっていない、それ故に、この投与量が、プロスタサイクリンの生成を阻害することなしに、トロンボキサンの合成を選択的に阻害することは立証されていない。

−それに対して、同じ低投与量のアスピリンによって、動脈と静脈の組織の両方でＰＧｌＮの合成が５０％減少すると報告され（ｐｒＢｓｔｏｎらの前記文献）、そしてさらに少ない投与量（２０ｍｇ／日を１週間）によって、アテローム性動脈硬化症の患者の動脈と静脈の両組織でのＰＧＩｇの合成を５０％阻害すると報告されている（Ｗｅｋｓｌｅｒらの上記文献）。阻害性を評価するため尿代謝物を測定する場合に、ＴＸＡ、とＰＧＴ、の合成の阻害に対するこの特異的な作用が報告されているけれども、ＰＣＩ、の合成を血管壁の生検試料の組織の検定で測定する場合またはＴＸＡ、とＰＧｌｔの検定を血液試料について行う場合、この特異的作用についての有意な証拠はないと提唱されている（Ｉｌｅｋｓｌｅｒらの上記文献）。しかし、標準の経口アスピリンによって血小板の選択性を達成することは不可能ではない、基本的なＰＧＩｚ生合成の阻害作用は、８０〜２，４００　ｍｇ／日の投与量では類似しており、プラジキニンの刺激によるＰＧＴｔの生成は経ロアスピリン７５曽ｇ／日によって消失する。

またアスピリンは、ＴＸＡｚのレベルを下げることによって利益が得られる他の内科の疾患に対する有効な治療法であることも見出されている０例えば妊娠の第３トリメスター中にアスピリンを毎日投与すると、ＴＸＡ、のレベルが低下するため、妊娠誘発性高血圧症および子かん前毒血症にかかる危険性が高い女性にこれらの疾患が起こるのを有意に低下させることができると報告されている（Ｓｃｈｉｆｆら。

Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、、３２１巻３５１頁、　１９８９年）、またアスピリンは、妊娠誘発性高血圧症の危険がある女性に確定的な作用をすると報告されている。低投与量のアスピリンは、母親のトロンボキサンのレベルを選択的に抑制するが、新生児のトロンボキサンは一部分しか抑制せず、胎児と新生児に止血能力を与えると報告された（Ｂｅｎｉｇｎｉら、　Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、、　３２１巻、３５７頁、　１９８９年）。致命的な結腸癌が起こる危険性を低くするためアスピリンを使用することも提案されている（Ｔｈｕｎら、　Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、、　３２５巻、　１５９３頁、　１９９１年）。

またトロンボキサンのレベルを下げることが、狼癒を伴う抗リン脂質症候群にかかっている患者の血栓症を治療する手段として示唆されている（Ｌｅｌ　Ｉｏｕｃｈｅら、　Ｂｌｏｏｄ、　７８巻、　２８９４頁、　１９９１年）。

アスピリンをトロンボキサン抑制側として使用することは、アスピリンを経口投与剤形で投与する伝統的な投与によって胃出血を起こす傾向があるため妨げられてきた。アスピリンは、リューマチ疾患をもっている患者の約８０％に胃粘膜の紅斑を生成し、約４０％に胃のびらんを起し、１５％に胃潰瘍を起こすという研究が報告されている（Ｓｉ　１ｖｏｓｏら、　Ａｎｎ、　Ｉｎｔｅｒｎ、　Ｍｅｄ、、　９１巻、５１７頁、　１９７９年）。

アスピリンを胃腸組織の局所に塗布すると、胃粘膜を損傷し、胃腸に潜在出血を起こす（Ｃｒｏｆｔ、　Ｂｒ、　Ｍｅｄ、　Ｊ、、１巻、１３７頁、　１９６７年）。

またアスピリンを静脈投与すると、経口投与よりは非経口の方が顕著ではないが胃粘膜にいくつかの作用をすることがある（Ｇｒｏｓｓｍａｎら、４０巻、３８３頁、　１９６１年）。アスピリンの希釈溶液を経口投与すると、錠剤剤形で同し投与量の場合よりも出血がかなり少なくなり、かつ充分な緩衝能を有する制酸剤を含有するアスピリン溶液は測定可能な血液減損を起こさない（Ｌｅｏｎａｒｄｓら、　Ａｒｃｈ、　Ｉｎｔｅｒｎ、　Ｍｅｄ、＋１２９巻、４５７頁、　１９７２年）。腸溶性コーティングを施したアスピリンを使用すると、通常のアスピリンより胃と十二指腸の粘膜の損傷が少なくなる（Ｇｒａｈａｓ＋ら、　Ａｎｎ、　Ｉｎｔｅｒｎ、　Ｍｅｄ、、　１０４巻、３９０頁。

１９８６年）。

それ故に、トロンボキサン抑制作用好ましくは選択性トロンボキサン抑制作用を提供し、かつアスピリン療法で現在利用されているアスピリンの投与剤形によって見られる副作用を回避するアスピリンの適切な投与剤形を提供することが要望されている。

アスピリンを各種の鎮痛製剤に混入することについていくつか報告されている。

米国特許第４　、９４８　、５８８号には、グリセリン類またはポリグリセリン類のエーテル誘導体を、経皮吸収促進剤として使用することが開示されている。

モルヒネ、コディンおよびアスピリンのような鎮痛剤は、これら促進剤とともに用いることができる活性物質として示唆されている。一実施例にアスピリンを坐剤に混入することが開示され、雄のウサギに投与された。

米国特許第４．６５４，２０９号には、ニトログリセリンなどの活性成分を含有するクリーム剤が開示されている。アスピリンのような鎮痛剤が活性成分として示唆されている。一実施例で５〜１５重量％のアスピリンを含有するクリーム剤が製造され、被検者の腹部、大腿部または背部の皮膚に塗布すると、この活性成分について血液と尿の検査結果は陽性になった。

米国特許第４，４７６．１１５号には、非毒性の水溶性亜硫酸化合物とともにまたはこの化合物に続いて皮膚に塗布する鎮痛組成物が開示されている。実施例には、アスピリンと無水亜硫酸ナトリウムの混合物の製剤が記載され、この製剤は哺乳類の皮膚に塗布され、水を浸透させないプラスチックシートで覆い、そのシートは接着テープで適正な位置に保持されている。生物学的利用性は、被検体の運動性の増大と、スチフネス（ｓｔｉｆｆｎｅｓｓ）の減少によって、証拠として３０〜４０分以内に観察された。

このようなアスピリン製剤はその鎮痛作用を利用して用いられてきたが、アスピリン製剤がトロンボキサンを抑制することが要望される治療法で塗布して用いられることは出願人はまだ知らない。

発明の要約本発明によれば、トロンボキサン抑制作用が、アスピリン療法に通常付随する胃での副作用なしで提供される。アスピリンは、経皮吸収されるように患者の皮膚の局所に塗布される。アスピリンは、ＴＸＡ、の合成を阻害するのに充分な量で血流中に取り入れられる。本発明の方法は、トロンボキサンのレベルを抑制することが有利な内科の疾患を治療するのに利用することができる０例えば本発明の方法を用いて、抗血栓作用を起こさせ、かつ妊娠誘発性高血圧症および子かん前毒血症を治療することができる。

アスピリンはアスピリン製剤を含有する支持体もしくは担体を用いることによって塗布することができる。その製剤としては、限定はなく、アスピリンが可溶化された形態である限り、局所用薬剤を塗布するのに用いる懸濁剤、クリーム剤、水剤、パッチ剤（接着性もしくは非接着性）、ゲル剤、軟膏、硬膏、プラーク（ｐｌａｑｕｅ）などがある。支持体もしくは担体のいくつかの例（例えば接着性パッチの形態）に、アスピリン製剤を混入させた製品を作ることができ、これらの製品は、本発明の治療方法を実施するのに有用である。

吸収促進剤などの医薬担体は公知の方法にしたがってアスピリン製剤に混入することができる。プロピレングリコールは、イソプロピリアルコールもしくはエチルアルコールが共存する場合または共存しない場合があるが好ましい担体である。本発明に用いる製剤には、アスピリンの外に、例えば抗不整脈剤、血圧調整剤などのような他の活性成分を加えることができる。

本発明の製剤のアスピリン含量は、使用される投与形態によって変化する。一つの態様で、アスピリンは約９％のアスピリン濃度で７５０　ｓｇ／日が塗布される。所望の抑制作用を得るために、アスピリンは、好ましくは数日間にわたって、ＴＸＡ、のレベルが最小レベルに下がるまで、好ましくはベースラインの５０％より低いレベルまで、より好ましくはベースラインの１０％より低いレベルまで、最も好ましくはベースラインの５％より低いレベルまで下がるまで投与するのが好ましい。ＴＸＡ！のレベルはほとんど直ちに低下するが、これらのレベルの実質的な低下は、数日間、好ましくは少な（とも４日間、最も好ましくは少なくとも１０日間の過程にわたって毎日投与することによって達成され維持される。

本発明の方法の作用を試験するために、血小板シクロオキシゲナーゼの活性を、血漿中医薬のレベルに加えて、アスピリンの生物学的利用性の尺度として用いた。好ましい賦形剤のプロピレングリコールとエタノールは、皮膚浸透剤として広く使用されており、生体外で脱アセチル化されて、不活性の代謝物のサリチレートになるのを回避するために選択した。ある好ましい態様では、アスピリンを毎日塗布すると、血清ＴＸＢｔで測定した場合、血小板シクロオキシゲナーゼの投与量依存性阻害作用を起こした。最大の阻害率は１０日間で達成され、最大投与量で阻害率は９５％を越えた。このような抑制度は、生体内で血小板の機能とＴＸＡｚの生合成を充分に阻害するのに好ましい。尿ＴＸ−Ｍの阻害も同じパターンであった。　ＴＸ−はＴＸＢ、の主な酵素代謝物であるのでその排泄は生体内でのＴＸＡｔ生合成の指数である。それに対して、賦形剤だけでは血清ＴＸＢ、または尿Ｔχ−Ｈに対して全く作用しなかった。治療を取止めた後、血清ＴＸＢ、とＴＸ−Ｍは数日間かかって徐々に回復した。これは生体内での血小板シクロオキシゲナーゼの阻害と一致している。酵素は不可逆的に阻害されるので、血小板ＴＸＡアの生合成の回復は新しい血小板の生成に平行しており、そのプロセスの半減期は５日間である。

ＴＸＡｚは著しく阻害されるのに対して、ＰＧＴＩの基礎生成または刺激による生成は殆んど阻害されなかった。　ＰＧ４−Ｍの基礎排泄すなわち生体内でのＰＣＩ□生合成の指標は、アスピリンの皮膚への最大投与量の場合に４日目に２４％減少した。塗布を続けたにもかかわらずそれ以上の阻害は起らず、ｌＯ０日目ででＰＣＩ−の排泄はベースラインの８３％にとどまった。このことは、ＰＧＩｘの生合成またはＰＧＩｚ生合成の部分的阻害に対して血小板のエンドペルオキシドが関与していることを反映している。ブラジキニンの注入に応答してＰＧＴＩが生成することも変化しなかった。それに対して、アスピリンを７５ｍｇ／日経ロ投与すると、先に述べたように、Ｊｌ［ＰＣＩ−排泄とプラジキニンの刺激によるＰＣＩ−？Ｉの排泄が抑制された。

血管シクロオキシゲナーゼが保持されていることは、皮膚投与のアスピリンの生物学的利用性が低いことと矛盾しない。血漿中のアスピリンとサリチレートは０．Ｉｎｇ／ｓｌより低いレベルを測定できる高感度検定法を用いて測定した−　３２５ｍｇまたは１６２．５ｍｇのアスピリンを経口投与した後の血漿中アスピリンのピークレベルはそれぞれ２．０μｇ／ｍｌと１．３μｇ／ｍｌであった。

それに対して、皮膚にアスピリンを塗布した後の血漿中レベルは２３７±＋１４　ｎｇ／＋＋＋］で、サリチレートの血漿中レベルのピークは７８８±１１４　ｎｇ／＋＊Ｉであった。

これらのデータは、皮膚に塗布されたアスピリンは非常にゆっくりと吸収されるので活性のオンセットとオフセットが遅れることを示唆している。塗布部位を通過する血小板は、比較的高濃度のアスピリンで阻害される。類似の局部に存在している血小板の作用はアスピリンを経口投与する場合に報告されているが、この場合、血清ＴＸＢ、の阻害はアスピリンが全身に出現する前に起こる。血小板のシクロオキシゲナーゼは回復できないので、全血小板の累積阻害が時間の経過とともに起こる。それに対し、アスピリンはほとんど全身に循環するに至らないので血管のシクロオキシゲナーゼは保護される。皮膚に塗布されたアスピリンの全身の生物学的利用性が劣っているのは、皮膚の透過性が低いことと、静脈と肺の循環での希釈と不活性化を反映していると思われる。

１名の被検者には、２５０ｍｇ／日で薬剤を１０日間塗布した後に組織学的変化は全くなかったが、紅斑および皮膚剥脱を含む皮膚反応が被検者の３０％に認められた。同様の反応が高濃度のサリチレートによって起こる。予備試験は、−日置きに塗布することによって上記反応を回避できることを示している。このような治療法は８週間まで反応なしで利用された。あるいはアスピリンのラクテートもしくはナトリウム塩または賦形剤を用いるような製剤の修飾は充分許容される。低濃度と少投与量は、医薬の吸収を促進する閉鎖条件下で利用するのに適している。

本発明の方法は、好ましい態様について以下に示すように使用すると、アスピリンは皮膚を通じて吸収されて、血小板シクロオキシゲナーゼを顕著に選択阻害する。この方法は、消化性潰瘍症にかかっていることが分かっている患者、またはワルファリンもしくはヘパリンのような血液凝固阻止剤を同時に投与中の患者に有効であることが判明している０本発明の方法はワルファリンとともに投与する場合に特に有用である。というのは、アスピリンとワルファリンの経口投与によって高い発生率で出血が胃腸に発生し、経口投与のアスピリンに次ぐ発生率であると考えられるからである。

本発明によるこのようなアスピリン製剤１を用いると、消化管を高い局部濃度のアスピリンに暴露することな（、トロンボキサン抑制作用、好ましくは選択性抑制作用を提供するので、本発明の製剤は、例えば胃過敏症または十二指腸潰瘍もしくは胃潰瘍の患者に使用できるに違いない。

図面の簡単な説明図１は、賦形剤に対比して、アスピリンを２５０ｍｇ／日と７５０ｍｇ／日の投与量で１０日間にわたって皮膚に投与し次いで治療を停止した間の血清中ＴＸＢ、のレベル（ｎｇ／ｓｌ）のグラフである。

図２は、アスピリンまたは賦形剤を１ｏ日間皮膚投与し次いで治療を停止した間のベースラインに対する百分率として表した２、３−ジノル−ＴＸＢ！　（ＴＸ −Ｍ）の尿排泄量のグラフである。ベースラインのレベルは、賦形剤、アスピリン２５０ｍｇおよびアスピリン７５０ｍｇのグループクレアチニンであったことに留意のこと。

図３は、アスピリンまたは賦形剤を１０日間皮膚投与し次いで治療を停止した間のベースラインに対する百分率として表した２．３＝ジノル−６−ケトＰＧＦ＋ｔ　（ＰＣＩ−Ｍ）の尿排泄量のグラフである。ベースラインのレベルは、賦形剤、アスピリン２５０ｍｇおよびアスピリン７５０　ｍｇ（Ｄグループそれぞれニー’ｌ）イテ２４４＋６８，　４０２＋１３９および２４８±７３ｐｇ／ｍｇクレアチニンであったことに留意のこと。

好ましい態様の詳細な説明本発明の利点は下記の実施例を参照することによって理解することができるが、この実施例は例示を目的とするもので本願を限定するものではない。

叉隻搭１５名の健康な成人のボランティア（男性３名、女性３名）について試験した。各々試験前２週間はアスピリンの経口摂取を止めた。

本発明による処置を行う前にベースラインのトロンボキサンレベルと増血を測定した。

トロンボキサンのレベルは、Ｂｒａｄｅｎら，　Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，　８２巻，１７８頁，　１９９０年に記載の方法にしたがってトロンボキサン−Ｂアの血中レベルを検定することによって測定した．またトロンボキサンレベルは、限定はしないが以下の文献に開示されている方法を含む公知の方法にしたがって血液中もしくは尿中について測定することができる。すなわち旧ｒｓｈ　らの前記文献；　Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ　ら、　Ｎ．　Ｅｎｇｌ．　Ｊ。

門ｅｄ．，　３０４巻，９９８頁，　１９８１年；　Ｐｅｄｅｒｓｅｎら，　Ｎ．　Ｅｎｇｌ．　Ｊ．　Ｍｅｄ．＋３１１巻．　１２０６頁，　１９８４年ｉ　Ｐａｔｒｉｇｎａｎｉら，　Ｎ．　ＣＩｉｎ．　Ｉｎｖｅｓｔ．＋　６９巻。

１３６６頁，　１９８２年；　Ｐｒｅｓｔｏｎ　ら、　Ｎ，　Ｅｎｇｌ．　Ｊ．　Ｍｅｄ．、　３０４巻，７６頁。

１９８１年；および旧ｒｓｈら，　Ｎ．　Ｅｎｇｌ．　Ｊ．　Ｍｅｄ．、　３０４巻，６８５頁。

１９８１年である。

サリチレートのレベルは以下の方法にしたがって測定した。サリチレートを測定法は、第二鉄とフェノール類との紫色の錯体の生成に基づいている．サリチレート以外の物質が反応して陽性の試験結果を示すことがあるが偽陰性の試験結果は起こらない。呈色試薬は酸と水銀イオンを含有し、タンパク質を沈澱させる．この検定法に関連する文献としては、Ｔｒｉｎｄｅｒ，　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ＋　５７巻．　３０１頁，　１９５４年；Ｔｉｅｔｚ，　Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　Ｗ．Ｂ。

Ｓａｕｎｄｅｒｓ　Ｃｏ．、　１９７０年，　８８２　〜８８４頁；　Ｍｅｉｔｅｓ，　Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ　ＣｌｉｎｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，　Ａ．＾．Ｃ．Ｃ．，　１９７７年，１９２頁がある。

Ｔｒｉｎｄｒｅｒの試薬は次のようにして製造した。塩化第二水銀４０ｇを、約７００＋ｗｌの脱イオン水中に加熱することによって溶解した．その溶液を冷却し、次にＩＮ　ＨＣＩ　１２０＋＊Ｉと硝酸第二鉄（Ｆｅ（ＮＯｓ）ｚ　・９ＨｚＯ）　４０ｇを添加した．硝酸第二鉄が全部溶解したとき、その溶液を脱イオン水で希釈して全容積を１０００ｍｌにした。この貯蔵溶液は約１年間安定である。

標準液は次のようにして調製した．サリチル酸ナトリウム４６４■ｇを脱イオン水に溶解し、次いで希釈して全容積を２００ｍｌにして貯蔵標準液（２００ｍｇ／　１００＋＊Ｉ）を調製した．クロロホルム数滴を保存剤として添加した。この標準液は冷蔵しておくと約６ケ月間安定である。

貯蔵標準液５，　１０．　２５および４０ｍｌをピペットで一連の１００ｍｌのメスフラスコ中に入れ、脱イオン水で希釈して全量１０（１ｗｌとして混合した。

血清またはヘパリン化血漿０．２１を試料被検体として使用した。

各標準液と各試料０．２１づつをそれぞれ標識をつけた使い捨てポリスチレン試験管にピペットで入れた．脱イオン水０．２１を試薬ブランクとして使うために、もう一本のポリスチレン試験管にピペットで入れた．脱イオン水１．Ｏｓｌづつをすべての試験管に添加した．次にＴｒｉｎｄｅｒの試薬１．０１づつを全試験管に添加し、混合して、試験管を５分間静置させた。次いで試験管を１０分間遠心分離した．得られた透明な上澄み液（最少限１．０ｍｌ）をそれぞれ標識を付けたＩＯＸ７５ｎｍのキュベツト中に入れた。　１００％Ｔに設定した試薬ブランクに対して５４０ｎｍにおける％Ｔ値を読取ることによって分析した。試料値を標準値と比較してレベルを決定した．試験結果が７５ｍｇ％を越える場合は希釈して再度分析した。

懸濁用溶液を１０ｍｌの代わりに８１使ったこと、を除いて包装物の説明書にしたがって、°“Ａｓｐｉｒｓｏｌ　（登録商１）”局所用アスピリン（ＮＤＣ　５４１０２−００１−０１　；　ＴＥＲＲＩ　Ｐｈａｙｖａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．　Ｉｎｃ．、米国、テキサス州７７３２５、キングウッド、私書箱６４５４　）を混合することによって、イソプロピルアルコールとプロピレングリコール中にアスピリンを含有する製剤を調製した。得られた溶液は包装のラベルに指示されている７〜８％ではなくて約９％のアスピリンを含有していた。

トロンボキサンの基礎レベルを測定した後、そのアスピリン溶液を、第一に、１日目の朝に、混合後１時間以内に上記アスピリン溶液をヒト被検体の腕および／または胸にこすりつけることによってヒト被検体の皮膚に塗布した．この塗布を、続く４回の各朝（２番目〜５番目の日）に、同じ方法で、新たに調製した溶液で繰返した。

投与を行う間の期間、被検体は入浴とシャワリングの通常のスケジュールにしたがった。５回目の投与を終って（５日目に）から８時間後に、血液を採取し、サリチレートのレベルとトロンボキサンのレベルを測定した．１人の被検体の場合は、新しいアスピリン溶液を投与する直前（すなわちその前のアスピリン溶液の投与を終ってから約２４時間後）、毎日ＴＸＡ．レベルを測定するために血液を採取した。潜血も試験した。

２名の被検体は毎日の塗布をさらに５日間続けた（合計１０日間）。

６日目と７日目は、さきに述べたのと同様に新たに調製したアスピリン溶液を使用した。８日目に異なるアスピリン裂開の使用を開始した．この第２の製剤は、約９７５ｍｇのアスピリンを含有するアスピリンの錠剤をくだいて粉末を作ることによって調製した。この粉末を、約２ｍｌの蒸留水を使ってペーストにした。

このペーストをプロピレングリコール４１およびエタノール４ｍｌと混合して約１０−１の濁った溶液を製造した．この濁った溶液を濾過して：くだかれたアスピリン錠剤中に見られる賦形剤などの不溶性物質を除去した．濾過した後、約１０−１の透明溶液が得られたがこれは約９％のアスピリンを含有していた。得られた溶液８１を各塗布に使用した．この第２の溶液は、先に述べた塗布を継続している２名の被検体に塗布した。

サリチレートとトロンボキサンのレベルは１００日目日に検査した。

トロンボキサンのレベルを表１に要約する。

糞１トロンボキサンのレベル　ｎｃｃ ■＝左側の数字は新しい５日目の投与物を投与する前の５日目の朝に測定したレベルである。右側の数字は５日目の投与を投与してから８時間後に測定したレベルである。

２：被検体３のベースラインのトロンボキサンの測定されたレベルは非常に低かったがサンプリングの誤まりであったと考えられる。

表１に要約したように、ベースラインのトロンボキサンのレベルは、５名の被検体のうちの４名が３０７〜４０２　ｎｇ／ｃｃの範囲内にあることが分かる。被検体３のベースラインが低いのは誤まりであると考えられる。したがって被検体３のデータは適切でないとみなした。

本発明の方法にしたがって、アスピリンを毎日１回づつ合計５回投与したところ、トロンボキサンのレベルが少なくとも５０％減少した。

本発明にしたがってさらに５日間治療を続けた２名の被検体は、ＩＯ０日目でに１８と１２ｎｇ／ｃｃのレベルまでの９５％と９７％の抑制率を示した。５名の患者のうち４名のサリチレートのレベルは１＋ｍｇパーセント以下と測定された（約１ｍｇパーセントが検定法の感度の最低限界である）。潜血はすべて陰性であった。胃腸症などの副作用に、被検体は全く気付かず報告もしなかった。

実Ｊｕｌ影健康な男女のボランティアだけを試験した。これらの被検者は、試験前の１０日間と試験期間中は、アスピリンなどのシクロオキシゲナーゼ阻害剤を避けるように要請された。アスピリン（アセチルサリチル酸、米国薬局方）の粉末をプロピレングリコールおよびイソプロピルアルコールもしくはエタノール（１，７：　１　ｖ／ｖ）に溶解し、最終濃度を９４ｍｇ／ｍｌにした。予備試験によって、室温で２４時間後に１％より低いサリチレートが検出され、上記の賦形剤中でアスピリンが安定であることが立証された。アスピリンの製剤はそれを塗布する直前に毎日作った。ボランティアは、製剤を塗布したときに臨床医に診察してもらい、塗布された領域は少なくとも１２時間洗わないよう要請された。アスピリン溶液は１５分間の間隔をあけて前腕と１腑に塗布した。ボランティア達はアスピリン２５０ｍｇ（ｎ＝４）、アスピリン７５０ｍｇ　（ｎ　＝　６　）または賦形剤（ｎ＝６）の投与を１０日間受け、医薬の投与を停止してから８日間追跡された。ボランティア達の年齢は３１〜５６歳で、各処置グループ男女同数で構成されていた。

血清ＴＸＢ、すなわちＴＸＡｚの安定な代謝物を測定するための抗凝血側なしの血液をアスピリンを投与する前投与中および投与後に採取した。得られた血液は、３７°Ｃで６０分間３７°Ｃにてガラス中で凝固させ、血清を除いて、分析するまで一２０°Ｃで貯蔵した。２．３−ジノル−ＴＸＢｉ　（ＴＸ−Ｍ）と２．３−ジノル−６−ケドーＰＧＦ＋ａ　（ＰＣＩ−Ｍ）　、すなわちそれぞれＴＸＡ、とＰＧＩｔの主要酵素代謝物を測定する時間に相当する２４時間にわたって尿を採集した（Ｌａｗｓｏｎら、　Ａｎａｌｙｔ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、＋１５０巻、４６３頁、　１９８５年ＨＦｉｔｚＧｅｒａｌｄら、　Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、、　３１０巻、　１０６５頁、　１９８４年）。これらの生成物の排泄は、これらの生成物の親の化合物が生体内で生成していることを示す指標である（Ｆｉｌｚ（ｉｅｒａｌｄらの上記文献；Ｒｅ１ｌｌｙおよびＦｉｔｚｇｅｒａｌｄ、　Ｂｌｏｏｄ、　６９巻、１８０頁、　１９８７年）。血清ＴＸＢ２と尿の代謝物は、さきに述べたように（Ｂｒａｄｅｎらの前記文献）標準のシュウチリウム化標準を用いて、負イオン化学イオン化ガスクロマトグラフィー質量分析法（ＮＩＣＩ−ＧＣＭＳ）によって測定した。

血清ＴＸＢ、、すなわちＴＸＡ　ｔを生成する血小板の容量の指標は、試験を行う前の全被検体について正常な範囲内にあったので、被検体はだれもシクロオキシゲナーゼ阻害剤に暴露されていなかったことを示している。賦形剤のみ投与した場合は、６名の被検体の血清ＴＸＢｚに対して全く作用しなかった（図１）。

アスピリンを７５ｈｇ／日（ｎ＝６）を投与すると、ボランティアの１名を除く全員の血清ＴＸＢ。

が次第に低下した。残りの被検体の血清ＴＸＢ！は、投与開始してからＩＯ０日目ベースラインの５±３％になった（ｎ＝５．　ｐ＝ｏ、ｏ０３　；図１）。アスピリンを２５０ｍｇ／日投与した場合は血清ＴＸＢｔの低下は少なかったが、投与開始してから１００日目ベースラインの５５±１１％になった。アスピリンの投与を停止すると血清ＴＸＢｚは徐々に増大し、８日目に、アスピリンを２５０ｍｇと７５０ｍｇ投与した場合それぞれのベースラインの９３±７％と６５± ９％になった。

ＴＸＡ、の生合成は同様の応答を示した。したがって、ＴＸ−Ｈの尿排泄雫は投１量に依存して減少した。アスピリンを７５０ｍｇ／日皮膚投与した場合、ＴＸ −旧ま徐々に減少し、薬剤投与のｌＯ０日目ベースラインの３２±７９≦になった（ｎ　＝　５　；　ｐ　＝０．００２　）。薬剤投与を停止してから８日目にこの代謝物（ＴＸ−Ｍ）の排泄量は処置前の値の６５±９％まで回復した（回２）。血小板シクロオキシゲナーゼの著しい阻害が起こったにもかかわらず、尿中ＰＣＩ−Ｍの測定に基づいた、ＰＧＭ、の生合成はごくわずかしか低下しなかった（図３）。その変化は統計的有意性を得られなかったが（Ｐ＝ＡＮＯＶ＾によって０．０７４　＞　、明らかな投与量応答関係があった。したがって、ＰＣＩ −Ｈの尿中排泄量は、アスピリンを２５Ｏｎ＋ｇ／日および７５０ｍｇ／日で投与した場合それぞれ−１−スラインの８４±４％および７６±７％まで低下した（図３）。

ＰＣＩ−１’ｌ排泄量の減少のピークは、ＴＸ−Ｈの排泄量と異なり、両方の投与量について４日目に起こった。

尖隻拠１１４日間毎日、アスピリン７５ｍｇを経口投与するかまたはアスピリン７５０ｍｇを皮膚投与する前および投与中、静脈投与されたブラジキニンに応答して生成するＰＣＩ□の増大を別の４名の被検体について試験した。プラジキニン測定の方法はすでに発表されている（Ｃ１ａｒｋ。

Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、、　３２５巻、　１１３７頁、　１９９１年）。ボランティア達は一夜絶食した後、臨床研究センター（Ｃ１ｉｎｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ）に収容された。血清ＴＸＲ２を測定するのに用いる血液試料が採取されその被検体は排尿するよう要請された。末梢静脈を通して、通常食塩水１９を１時間かけて注入した。さらに１時間後、ブラジキニンを、１００〜８００　ｎｇ／ｋｇ／ｗｉｎのインクリメンタル投与量で各々１５分間かけて注入した。その注入は、最大耐薬量で合計２時間続けた。

血圧と心拍数は連続的に監視した。犀は、ブラジキニンを注入する前　注入中および注入後、２時間分づつ別個に採取した。

さきの試験では、ブラジキニンはｐＧｎｔの生合成を平均２〜６倍増大させた。

この試験を行った４名の被検体の場合、ブラジキニンによってＰＣＩ−１１の排泄量が５．１±６倍に増大した。２名の被検体にアスピリン１５ｍｇ１日を１４日間経口投与し、２名はアスピリン７５０ｍｇ／日を皮膚に投与した。両方の製剤の投与によって尿のＴＸ−Ｍは著しく低下した（表２）。アスピリンを経口投与した場合、ブラジキニンによる刺激を行う前と行った後に尿中ＰＣＩ−Ｍが低下した。これに対して、アスピリンを皮膚投与した場合は、ブラジキニンによる刺激を行う前後ともにＰＣＩ−Ｈの排泄量は大きく変化しなかった。

表２′ 皮膚アスピリン　経口アスピリン投与（７５０ｍｇ／日）投与（７５ｍｇ／日）■　ブラジキニンの投与前（ｒｅｓｔ）と投与後（ｓｔｉ＋＊）にアスピリン７５０　ｍｇを皮膚投与する前と投与した後のＴＸ−阿とＰＧＩ−Ｍの排泄量。

アスピリンの皮膚投与によってＴＸ−Ｍは抑制されたが、ＰＣＩ−Ｈに対して影響はなかった。

実施■↓ 血清ＴＸＢ、の著しい減少（９０％を越える減少）を示す４名の被検体（男性２名、女性２名）に、１日月と１４日日目アスピリンを投与後に、０．０．２５．０．５．０．７５．１．１．５，２．　４．　６．　８．１２および２４時間の間隔をおいて、血漿中のアスピリンとサリチレートを測定した。

アスピリンは７５０ｍｇの投与量で１５分間かけて一方の腕に塗布した。

試料は反対側の腕から採取した。血液はヘパリン（最終濃度１０Ｕ／−１）とフッ化カリウム（最終濃度５％）中に投入した。後者は血漿エステラレーゼによってアスピリンが生体外で代謝されるのを防止するためのものである。血漿を直ちに分離し、分析するまで一７０°Ｃで貯蔵した。アスピリンと、その代謝物であるサリチル酸を、先に述べたように内部標準としてデュウテリウムで標識を付けた類似体を用いてＮＩＣＩ−ＧＣＭＳによって測定した（Ｃ１ａｒｋの前記文献）。

血清ＴＸＢｔが著しく減少する（９０％を越える減少）のを示した５名の被検体にアスピリンを１回皮膚に塗布した後に、血漿中のアスピリンとサリチレートのレベルを測定した。血漿中アスピリンは、塗布してから３時間後にようやく検出可能になり、そのときアスピリンのレベルは２３７±１１４　ｎｇ／ｍｌまで上昇した。６時間後には、そのレベルは５２±１４ｎｇ／ｍｌまで低下し次いで２４時間後には４±３ｎｇ／請ｌまで減少した。血漿中のサリチレートも同様のパターンを示した。

２時間後には６９±２０Ｂ／ｍｌであったのが３時間後には２５０±７７ｎｇ／ｌまで上昇した。６時間後には、血漿中サリチレートは７７４±２９６ｎｇ／ｍｌであった。２４時間後にそのレベルは３２９±８４ｎｇ／ｍｌまで低下した。

サリチレートのレベルの後の方のピークは、それがアスピリンから誘導されたものであることと一致している。さらに、血漿中サリチレートの増大がこのように延長されるのは、その血漿半減期が長いことによると考えられる。アスピリンを経口投与した（　７５ｍｇ　）後の血漿サリチレートは１〜２μｇ／ｍｌであることに留意すべきである。

本発明に引用された文献は各々、全文を本願に援用するものとする。

□ 手続補正書（方式）平成５年１０月２２日

Claims

【特許請求の範囲】

１．哺乳類被検体内のトロンボキサンレベルを抑制する方法であって；前記被検体の皮膚にアスピリンを含有する医薬製剤を塗布することを含んでなり、前記アスピリンを前記被検体のトロンボキサンレベルを減少させるのに充分の量で塗布する方法。
２．前記医薬製剤がさらに医薬担体を含有している請求項１記載の方法。
３．前記医薬担体がプロピレングリコールを含有している請求項２記載の方法。
４．前記医薬担体がさらに、イソプロピルアルコールおよびエチルアルコールからなる群から選択されるアルコールを含有している請求項３記載の方法。
５．前記医薬製剤が約９％のアスピリンを含有している請求項１記載の方法。
６．前記医薬製剤を、毎日少なくとも４日間塗布する請求項１記載の方法。
７．前記医薬製剤を、毎日少なくとも１０日間塗布する請求項６記載の方法。
８．前記医薬製剤がさらに、少なくとも１種の他の活性成分を含有している請求項１記載の方法。
９．前記医薬製剤がさらに、前記アスピリンの吸収を促進する薬剤を含有している請求項１記載の方法。
１０．前記アスピリンが、血清中トロンボキサンのレベルを少なくとも約９０％まで減少させるのに充分な量で存在している請求項１記載の方法。
１１．前記アスピリンが、血清中トロンボキサンのレベルを少なくとも約９５％まで減少させるのに充分な量で存在している請求項１０記載の方法。
１２．前記アスピリンを、前記被検体のプロスタサイクリンのレベルを減少させるには不充分な量で塗布する請求項１記載の方法。
１３．前記アスピリンを、ブラジキニンによる刺激でプロスタサイクリンが生成するのを阻害するには不充分な量で塗布する請求項１記載の方法。
１４．前記医薬製剤を、抗凝血剤を投与するとともに塗布する請求項１記載の方法。
１５．哺乳類の被検体のトロンボキサンレベルを低下させることによって治療し易い内科疾患の治療方法であって；アスピリンを含有する医薬製剤を前記被検体の皮膚に塗布することを含んでなり、前記アスピリンを前記被検体のトロンボキサンレベルを減少させるのに充分な量で塗布する方法。
１６．前記の内科疾患が血栓症、妊娠誘発性高血圧症および子かん前毒血症からなる群から選択される疾患である請求項１５記載の方法。
１７．哺乳類被検体に致命的な結腸癌が起こる危険性を減少させる方法であって；アスピリンを含有する医薬製剤を前記被検体の皮膚に塗布することを含んでなり、前記アスピリンを前記被検体のトロンボキサンレベルを減少させるのに充分な量で塗布する方法。
１８．哺乳類被検体の皮膚に塗布することによって、該被検体のトロンボキサンレベルを抑制するのに有用な製品であって；前記製品がアスピリンを含有する医薬製剤を含んでなり、その製品中には、前記製品を塗布したときに、前記アスピリンが前記被検体のトロンボキサンレベルを減少させるのに充分な量で存在している物品。
１９．前記製品を塗布したときに、前記アスピリンが前記被検体のプロスタサイクリンを減少させるには不充分な量で存在している請求項１８記載の物品。
２０．さらに、前記医薬製剤を含有する支持体または担体を含有している請求項１８記載の物品。