JPH0651601B2 - 豚の凍結受精卵及び凍結保存方法 - Google Patents
豚の凍結受精卵及び凍結保存方法Info
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- JPH0651601B2 JPH0651601B2 JP26942288A JP26942288A JPH0651601B2 JP H0651601 B2 JPH0651601 B2 JP H0651601B2 JP 26942288 A JP26942288 A JP 26942288A JP 26942288 A JP26942288 A JP 26942288A JP H0651601 B2 JPH0651601 B2 JP H0651601B2
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- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は豚の凍結受精卵及び受精卵の凍結保存方法に関
するものである。
するものである。
一般に、養豚業においては生産効率を高めるために遺伝
的に優秀な豚を多く生産することが望まれている。
的に優秀な豚を多く生産することが望まれている。
従来の豚の繁殖は、繁殖豚に雄豚を交配せしめることに
より妊娠、分娩させることで行なわれてきた。この方法
によると、交配から分娩まで約114日の日数を要するこ
とから、一繁殖雌豚が産業上可能な範囲での分娩回数
は、高々10数回までである。
より妊娠、分娩させることで行なわれてきた。この方法
によると、交配から分娩まで約114日の日数を要するこ
とから、一繁殖雌豚が産業上可能な範囲での分娩回数
は、高々10数回までである。
このように一繁殖雌豚が次の世代に継代できる子豚の数
には限度があり、これを克服する方法として受精卵移植
が利用されてきた。しかしその方法は、受精卵を提供す
る豚から回収された受精卵を少なくとも数日以内に借り
腹となる豚に移植しなければならなかった。
には限度があり、これを克服する方法として受精卵移植
が利用されてきた。しかしその方法は、受精卵を提供す
る豚から回収された受精卵を少なくとも数日以内に借り
腹となる豚に移植しなければならなかった。
ところで、受精卵の凍結保存技術はマウス、兎、山羊、
羊、牛などについて開発されており、凍結保存用には一
般に桑実期胚あるいは初期胚盤胞が使用されている。一
方、豚の受精卵の保存技術はまだ開発されていない。
羊、牛などについて開発されており、凍結保存用には一
般に桑実期胚あるいは初期胚盤胞が使用されている。一
方、豚の受精卵の保存技術はまだ開発されていない。
受精卵移植は家畜の育種繁殖上重要な技術であるが受精
卵は長期にわたって保存することができないためその効
果を十分に発揮することが出来なかった。受精卵を凍結
保存できればこの問題は解決することができるが、豚に
ついての成功例はまだ知られていない。
卵は長期にわたって保存することができないためその効
果を十分に発揮することが出来なかった。受精卵を凍結
保存できればこの問題は解決することができるが、豚に
ついての成功例はまだ知られていない。
本発明者は、豚受精卵を長期に保存する方法を開発すべ
く種々検討を重ねた結果、種々の時期の豚受精卵を摂氏
マイナス35度以下に凍結保存し、その後これを凍結融解
したところ囲卵腔の無くなるまで発育したものが生存し
ていることを確認して本発明を完成するに至った。
く種々検討を重ねた結果、種々の時期の豚受精卵を摂氏
マイナス35度以下に凍結保存し、その後これを凍結融解
したところ囲卵腔の無くなるまで発育したものが生存し
ていることを確認して本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、囲卵腔の無くなるまで発育し又はそ
れ以降の発育期にあって摂氏マイナス35度以下に保存さ
れた豚の受精卵とその保存方法に関するものである。
れ以降の発育期にあって摂氏マイナス35度以下に保存さ
れた豚の受精卵とその保存方法に関するものである。
受精卵は１細胞期胚が分裂して２細胞期胚になり、さら
に分裂を繰返して４細胞期胚、８細胞期胚、桑実期胚、
初期胚盤胞、拡張期胚盤胞、透明帯脱出胚盤胞と成長し
ていって子宮に着床する。一方、胚盤胞が拡張期にはい
ると受精卵と透明帯の間の空隙部である囲卵腔が無くな
る。本発明ではこの拡張期胚盤胞又は透明帯脱出胚盤胞
を使用する。受精後の日数では５〜８日目に相当し、５
〜７日目のものが好ましい。受精後拡散期胚盤胞又は透
明帯脱出胚盤胞になるまでの成長は受精卵を提供する豚
の体内で行なわせればよいが、人工培養によって行なっ
てもよい。培養液には哺乳動物細胞を培養する公知のも
のを用いればよく、例えばTCM-199、Ham's F-10、Brins
ter液（BMOC-3）、Menezo's B-2、SOF修正PBSなどを必
要によりウシ胎児血清等を加えて利用できる。培養条件
も牛の受精卵等の培養条件と同様でよい。
に分裂を繰返して４細胞期胚、８細胞期胚、桑実期胚、
初期胚盤胞、拡張期胚盤胞、透明帯脱出胚盤胞と成長し
ていって子宮に着床する。一方、胚盤胞が拡張期にはい
ると受精卵と透明帯の間の空隙部である囲卵腔が無くな
る。本発明ではこの拡張期胚盤胞又は透明帯脱出胚盤胞
を使用する。受精後の日数では５〜８日目に相当し、５
〜７日目のものが好ましい。受精後拡散期胚盤胞又は透
明帯脱出胚盤胞になるまでの成長は受精卵を提供する豚
の体内で行なわせればよいが、人工培養によって行なっ
てもよい。培養液には哺乳動物細胞を培養する公知のも
のを用いればよく、例えばTCM-199、Ham's F-10、Brins
ter液（BMOC-3）、Menezo's B-2、SOF修正PBSなどを必
要によりウシ胎児血清等を加えて利用できる。培養条件
も牛の受精卵等の培養条件と同様でよい。
このような受精卵を細胞凍結に用いられる適当な凍結保
護剤を含む培養液に入れ20〜40゜Cで一定時間静置して平
衡させる。培養液には例えば上記のものを使用すること
ができる。凍結保護剤にはグリセリン、ジメチルスルホ
キシド、エチレングリコール、ポリビニルピロリドン、
ショ糖等を利用すればよい。凍結保護剤は数段階の濃度
に分け、受精卵を順次濃度の高い液に浸漬していくのが
よい。グリセリンの濃度は最終濃度で１〜２モル濃度程
度がよく、例えば0.2、0.35、0.65、0.85、1.0の５段階の液
を用いることができる。各々の液の浸漬時間は５〜10分
間程度でよく、最終濃度の液には15分ないし１時間程度
浸漬する。DMSOも最終濃度で１〜２モル濃度程度がよ
く、やはり段階濃度に分けた液を用いることが好まし
い。
護剤を含む培養液に入れ20〜40゜Cで一定時間静置して平
衡させる。培養液には例えば上記のものを使用すること
ができる。凍結保護剤にはグリセリン、ジメチルスルホ
キシド、エチレングリコール、ポリビニルピロリドン、
ショ糖等を利用すればよい。凍結保護剤は数段階の濃度
に分け、受精卵を順次濃度の高い液に浸漬していくのが
よい。グリセリンの濃度は最終濃度で１〜２モル濃度程
度がよく、例えば0.2、0.35、0.65、0.85、1.0の５段階の液
を用いることができる。各々の液の浸漬時間は５〜10分
間程度でよく、最終濃度の液には15分ないし１時間程度
浸漬する。DMSOも最終濃度で１〜２モル濃度程度がよ
く、やはり段階濃度に分けた液を用いることが好まし
い。
凍結保護剤で平衡した受精卵は凍結保存用容器に入れて
−５〜−10゜C程度まで徐冷し植氷を行なう。容器には受
精卵の凍結保存用に使用されている一般的なものを使用
すればよく、例えば小試験管、小アンプル、凍結精液用
ストロー管などを利用できる。冷却はプログラムフリー
ザーなどを用いて一定速度で行なうことが好ましい。植
氷は小氷片の投入、容器外側に液体窒素で冷却した金属
片を接触させる、冷気を吹き付ける、軽い振動を与える
などの手段によって行なえばよい。
−５〜−10゜C程度まで徐冷し植氷を行なう。容器には受
精卵の凍結保存用に使用されている一般的なものを使用
すればよく、例えば小試験管、小アンプル、凍結精液用
ストロー管などを利用できる。冷却はプログラムフリー
ザーなどを用いて一定速度で行なうことが好ましい。植
氷は小氷片の投入、容器外側に液体窒素で冷却した金属
片を接触させる、冷気を吹き付ける、軽い振動を与える
などの手段によって行なえばよい。
植氷後−30〜−40゜C程度まで更に除冷して受精卵を凍結
させる。この除冷もプログラムフリーザー等を用いて一
定速度で行なうのがよい。
させる。この除冷もプログラムフリーザー等を用いて一
定速度で行なうのがよい。
こうして得られた凍結受精卵はフリーザーまたは液体窒
素中等に保存する。
素中等に保存する。
受精卵を使用する際の融解は急速融解でもよく、緩慢融
解であってもよい。
解であってもよい。
本発明を適用しうる豚の種類は問うところではない。
ランドレース種と大ヨーク種との交配種またはハンプシ
ャー種に雌にデュロック種雄の精液を人工受精し、受精
後５ないし６日後に外科的に受精卵を回収した。
ャー種に雌にデュロック種雄の精液を人工受精し、受精
後５ないし６日後に外科的に受精卵を回収した。
回収された受精卵は20％ウシ胎児血清を添加した燐酸緩
衝液に凍結保護剤としてグリセリンを加えた液に浸漬し
た。グリセリン濃度は５段階とし、濃度の薄いものから
順次濃い濃度の液に浸漬した（グリセリン平衡）。グリ
セリン平衡した後受精卵を0.25ml容量のプラスチックス
トロー内に吸引封入した。封入されたストローはプログ
ラムフリーザーに入れ摂氏35度から摂氏マイナス6.8度
まで１分間摂氏１度の速度で冷却し摂氏マイナス6.8度
で植氷をおこない10分間保持した。その後摂氏マイナス
35度まで１分間に摂氏0.3度の速度で、さらに摂氏マイ
ナス36度まで１分間に摂氏0.1度の速度で冷却し、液体
窒素（摂氏マイナス196度）中に投入して保存した。こ
のようにして凍結保存された受精卵を摂氏37度の温湯中
に直接投入して溶解後グリセリン平衡と逆の手順により
グリセリンを除去した。このようにした受精卵を摂氏37
度、炭酸ガス濃度５％の培養器内で培養した。
衝液に凍結保護剤としてグリセリンを加えた液に浸漬し
た。グリセリン濃度は５段階とし、濃度の薄いものから
順次濃い濃度の液に浸漬した（グリセリン平衡）。グリ
セリン平衡した後受精卵を0.25ml容量のプラスチックス
トロー内に吸引封入した。封入されたストローはプログ
ラムフリーザーに入れ摂氏35度から摂氏マイナス6.8度
まで１分間摂氏１度の速度で冷却し摂氏マイナス6.8度
で植氷をおこない10分間保持した。その後摂氏マイナス
35度まで１分間に摂氏0.3度の速度で、さらに摂氏マイ
ナス36度まで１分間に摂氏0.1度の速度で冷却し、液体
窒素（摂氏マイナス196度）中に投入して保存した。こ
のようにして凍結保存された受精卵を摂氏37度の温湯中
に直接投入して溶解後グリセリン平衡と逆の手順により
グリセリンを除去した。このようにした受精卵を摂氏37
度、炭酸ガス濃度５％の培養器内で培養した。
その結果、凍結時に受精卵の発育段階が初期胚盤胞（胚
盤胞腔は形成されてまもなく囲卵腔の認められる受精
卵）より若いものでは28個凍結保存するも凍結後に生存
していたものは１個のみであったのに対し、拡張期胚盤
胞以降の受精卵では134個凍結し49個が生存していた。
盤胞腔は形成されてまもなく囲卵腔の認められる受精
卵）より若いものでは28個凍結保存するも凍結後に生存
していたものは１個のみであったのに対し、拡張期胚盤
胞以降の受精卵では134個凍結し49個が生存していた。
豚受精卵を凍結することにより長期にわたる保存が可能
となった。従来の豚の受精卵移植では、受精卵の保存が
出来なかったため遺伝子の保存には役立たなかったが、
本発明により保存が可能となった。例えば受精卵を産出
した雌豚が死亡した後においても産子を得ることができ
豚の育種改良、繁殖上多大な効果をもたらすことができ
る。
となった。従来の豚の受精卵移植では、受精卵の保存が
出来なかったため遺伝子の保存には役立たなかったが、
本発明により保存が可能となった。例えば受精卵を産出
した雌豚が死亡した後においても産子を得ることができ
豚の育種改良、繁殖上多大な効果をもたらすことができ
る。
Claims (2)
- 【請求項１】囲卵腔の無くなるまで発育し又はそれ以降
の発育期にあって摂氏マイナス35度以下に保存された豚
の受精卵 - 【請求項２】囲卵腔の無くなるまで発育し又はそれ以降
の発育期にある豚の受精卵を摂氏マイナス35度以下に保
存することを特徴とする豚の受精卵の保存方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26942288A JPH0651601B2 (ja) | 1988-10-27 | 1988-10-27 | 豚の凍結受精卵及び凍結保存方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26942288A JPH0651601B2 (ja) | 1988-10-27 | 1988-10-27 | 豚の凍結受精卵及び凍結保存方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02117601A JPH02117601A (ja) | 1990-05-02 |
| JPH0651601B2 true JPH0651601B2 (ja) | 1994-07-06 |
Family
ID=17472202
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26942288A Expired - Fee Related JPH0651601B2 (ja) | 1988-10-27 | 1988-10-27 | 豚の凍結受精卵及び凍結保存方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0651601B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014065736A (ja) * | 1995-01-30 | 2014-04-17 | Organogenesis Inc | 培養組織相当物の凍結保存および貯蔵のための方法およびパッケージデザイン |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2636405B2 (ja) * | 1989-03-14 | 1997-07-30 | 家畜受精卵移植技術研究組合 | 豚受精卵の低温保存方法 |
| WO1995005075A1 (en) * | 1993-08-13 | 1995-02-23 | Bresatec Limited | Cryopreservation of porcine embryos |
| CN103190391B (zh) * | 2013-03-28 | 2015-03-18 | 金�一 | 一种改善保存猪精子冻融后细胞骨架完整性的方法 |
-
1988
- 1988-10-27 JP JP26942288A patent/JPH0651601B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014065736A (ja) * | 1995-01-30 | 2014-04-17 | Organogenesis Inc | 培養組織相当物の凍結保存および貯蔵のための方法およびパッケージデザイン |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02117601A (ja) | 1990-05-02 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |