JPH0651720B2 - 抗体−キレート剤結合体 - Google Patents
抗体−キレート剤結合体Info
- Publication number
- JPH0651720B2 JPH0651720B2 JP60503820A JP50382085A JPH0651720B2 JP H0651720 B2 JPH0651720 B2 JP H0651720B2 JP 60503820 A JP60503820 A JP 60503820A JP 50382085 A JP50382085 A JP 50382085A JP H0651720 B2 JPH0651720 B2 JP H0651720B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- chelating agent
- diethylenetriaminepentaacetic acid
- metal ion
- chelator
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
- A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
- A61K49/10—Organic compounds
- A61K49/14—Peptides, e.g. proteins
- A61K49/16—Antibodies; Immunoglobulins; Fragments thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
- A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
- A61K49/085—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier conjugated systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/534—Production of labelled immunochemicals with radioactive label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2121/00—Preparations for use in therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 １．発明の分野 本発明は、生体内(in vivo)または試験管内(in vitro)
の標的部位に金属イオンを運搬することが可能な抗体系
の一般的な分野に関する。金属イオンが放射性同位元素
または他の検出可能なイオンである実施態様において、
抗体系は、抗体に結合した放射性同位元素または他の検
出可能なイオンによって同定および／または検出され得
る。さらに詳細には、本発明は、実質的にもとの抗体の
免疫特異性および免疫反応性を保有する抗体−金属イオ
ン複合体の調製に有効な抗体−キレート剤結合体に関す
る。
の標的部位に金属イオンを運搬することが可能な抗体系
の一般的な分野に関する。金属イオンが放射性同位元素
または他の検出可能なイオンである実施態様において、
抗体系は、抗体に結合した放射性同位元素または他の検
出可能なイオンによって同定および／または検出され得
る。さらに詳細には、本発明は、実質的にもとの抗体の
免疫特異性および免疫反応性を保有する抗体−金属イオ
ン複合体の調製に有効な抗体−キレート剤結合体に関す
る。
本発明の抗体−キレート剤結合体から調製された抗体−
金属イオン複合体は、免疫分析、特異な組織の結像およ
び金属イオンおよび／または放射性同位元素の特異組織
部位への運搬に限定されることはないがこれらを含む標
識抗体または金属イオンの検出または運搬を伴なう種々
の試験管内または生体内の応用に使用され得る。
金属イオン複合体は、免疫分析、特異な組織の結像およ
び金属イオンおよび／または放射性同位元素の特異組織
部位への運搬に限定されることはないがこれらを含む標
識抗体または金属イオンの検出または運搬を伴なう種々
の試験管内または生体内の応用に使用され得る。
２．発明の背景 多くの薬剤は、結像係においてある程度成功して担体分
子として使用されていた。実用上担体は、非毒性および
標的部位に特異的であるべきだ。理想的には標的部位に
おける検出可能な化合物または薬剤の保持機構が存在す
べきである。
子として使用されていた。実用上担体は、非毒性および
標的部位に特異的であるべきだ。理想的には標的部位に
おける検出可能な化合物または薬剤の保持機構が存在す
べきである。
非侵入性の生体内の結像方法で一般に使用された放射性
薬品技術は、放射性薬品ラベルを循環から除去する標的
器官能力を基礎とする。これらの技術は、放射性の化合
物を希望の標的に運搬する種々の物質を使用する；その
ような物質は、基質類、基質類似物質類、配位子、ホル
モン、放射性核種、二価性キレート（重金属または放射
性同位元素と結合可能な一端でキレート剤を、標的細胞
に共有結合的に付着し得る他端で反応基を有するリンカ
ー基群）およびリポソーム（エッケルマンおよびレバン
ソン、1977、イントル．ジェイ．アプル．ラジアット．
アイソト．28：67-82)(Eckelman and levanson 1977、In
tl.J.Appl.Radiat.Isot.28：67-82)を含む。
薬品技術は、放射性薬品ラベルを循環から除去する標的
器官能力を基礎とする。これらの技術は、放射性の化合
物を希望の標的に運搬する種々の物質を使用する；その
ような物質は、基質類、基質類似物質類、配位子、ホル
モン、放射性核種、二価性キレート（重金属または放射
性同位元素と結合可能な一端でキレート剤を、標的細胞
に共有結合的に付着し得る他端で反応基を有するリンカ
ー基群）およびリポソーム（エッケルマンおよびレバン
ソン、1977、イントル．ジェイ．アプル．ラジアット．
アイソト．28：67-82)(Eckelman and levanson 1977、In
tl.J.Appl.Radiat.Isot.28：67-82)を含む。
他の一般的に利用できる非侵入性技術は、エミッション
断層撮影法、核磁気共鳴結像法および試験管内分光法で
ある。イソチオシアネートをカップリング剤として使用
する方法は、ケイ光化合物をケイ光顕微鏡検定法で使用
する抗体分子に付着するのが常であった（ブランドツァ
エグ、1973、スカンド，ジェイ、エムノル．２：273-29
0)(Brandtzaeg、1973、Scand.J.Immunol.2：273-290)。
断層撮影法、核磁気共鳴結像法および試験管内分光法で
ある。イソチオシアネートをカップリング剤として使用
する方法は、ケイ光化合物をケイ光顕微鏡検定法で使用
する抗体分子に付着するのが常であった（ブランドツァ
エグ、1973、スカンド，ジェイ、エムノル．２：273-29
0)(Brandtzaeg、1973、Scand.J.Immunol.2：273-290)。
2.1.モノクローナル抗体を使用するラジオイムノイメ−
ジング法（放射線免疫結像法） コーラー(Kohler)およびミルシュタイン(Milstein)のハ
イブリドーマ技術（1975、ネイチャー256：495-497；19
76、ユーロ．ジュイ．イムノル．６：511-519)(1975、Na
ture 256：495-497；1976、Eur.J.Immunol.6：511-519)
または関連技術により得られたモノクローナル抗体は、
イメージング系（imaging systems：結像系）担体とし
ての使用については著しい利益を提供する。第一にモノ
クローナル担体は、特異な会合定数を有する１個の分子
部位（すなわちエピトープ）にのみ会合する。第二にか
かる抗体は均質であり、比較的簡単に精製される。第三
にモノクローナル担体は、特にハイブリドーマ細胞系に
より大量に得られる。
ジング法（放射線免疫結像法） コーラー(Kohler)およびミルシュタイン(Milstein)のハ
イブリドーマ技術（1975、ネイチャー256：495-497；19
76、ユーロ．ジュイ．イムノル．６：511-519)(1975、Na
ture 256：495-497；1976、Eur.J.Immunol.6：511-519)
または関連技術により得られたモノクローナル抗体は、
イメージング系（imaging systems：結像系）担体とし
ての使用については著しい利益を提供する。第一にモノ
クローナル担体は、特異な会合定数を有する１個の分子
部位（すなわちエピトープ）にのみ会合する。第二にか
かる抗体は均質であり、比較的簡単に精製される。第三
にモノクローナル担体は、特にハイブリドーマ細胞系に
より大量に得られる。
腫瘍産生抗原または腫瘍会合抗原の発見は、ヒトの結
腸、胸、肝がん(heptatoma)、メラノーマおよび生殖細
胞腫瘍の如き固形腫瘍に免疫特異であるモノクローナル
抗体の調製を認めた〔カラスクウィロー等、1984、癌処
理報告68：317-328；ケネル等．、1984、バイオ．サ
イ．34：150-156(Carrasquillo、et all.、1984、Cancer T
reatment Repts.68：317-328；Kennel、et all.、1984、Bi
o Sci.34：150-156)を参照のこと〕。胎児腫瘍抗原、胎
盤性抗原、遺伝子腫瘍性または腫瘍ウィルス会合抗原、
組織会合抗原、器官会合抗原、変異ホルモン、通常抗原
およびそれらの変異型を含む種々のカテゴリーの腫瘍会
合抗原に特異な抗体またはフラグメントを使用して腫瘍
を発見しかつ位置を明らかにする方法が開発された。例
えば、ゴールデンベルク等(Goldenberg、etat.)は、発癌
抗原に特異な131 Ｉ放射性標識抗体を使用してヒト患
者中に臨床的に腫瘍を検出したことを示した〔1987、ニ
ューイング．ジェイ．メド．289：1384-1388；同様に米
国特許第4331647号、および米国特許第3927193号を参照
のこと(1978、New Eng.J.Med.298：1384-1388；United S
tates Patent No、4331647 issued to Goldenberg,Unite
d States Patent No、3927193 to Hansen、et al.)〕。ゴ
ールデンベルク等(Goldenberg、etal.)に使用された方法
は、しかしながら、腫瘍を非標的領域から区別するため
十分な解像力を得るために、他の放射性物質を繰り返し
注入しまたは放射性抗体混合物を一度注入するいずれか
の方法を必要とした。
腸、胸、肝がん(heptatoma)、メラノーマおよび生殖細
胞腫瘍の如き固形腫瘍に免疫特異であるモノクローナル
抗体の調製を認めた〔カラスクウィロー等、1984、癌処
理報告68：317-328；ケネル等．、1984、バイオ．サ
イ．34：150-156(Carrasquillo、et all.、1984、Cancer T
reatment Repts.68：317-328；Kennel、et all.、1984、Bi
o Sci.34：150-156)を参照のこと〕。胎児腫瘍抗原、胎
盤性抗原、遺伝子腫瘍性または腫瘍ウィルス会合抗原、
組織会合抗原、器官会合抗原、変異ホルモン、通常抗原
およびそれらの変異型を含む種々のカテゴリーの腫瘍会
合抗原に特異な抗体またはフラグメントを使用して腫瘍
を発見しかつ位置を明らかにする方法が開発された。例
えば、ゴールデンベルク等(Goldenberg、etat.)は、発癌
抗原に特異な131 Ｉ放射性標識抗体を使用してヒト患
者中に臨床的に腫瘍を検出したことを示した〔1987、ニ
ューイング．ジェイ．メド．289：1384-1388；同様に米
国特許第4331647号、および米国特許第3927193号を参照
のこと(1978、New Eng.J.Med.298：1384-1388；United S
tates Patent No、4331647 issued to Goldenberg,Unite
d States Patent No、3927193 to Hansen、et al.)〕。ゴ
ールデンベルク等(Goldenberg、etal.)に使用された方法
は、しかしながら、腫瘍を非標的領域から区別するため
十分な解像力を得るために、他の放射性物質を繰り返し
注入しまたは放射性抗体混合物を一度注入するいずれか
の方法を必要とした。
心臓細胞死または損傷に対し抗体を循環するために入手
しやすい収縮性たんぱく様物質であるミオシン特異なモ
ノクローナル抗体の開発は、心筋梗塞の位置明らかにし
かつ定量化するために放射線免疫結像を使用する方法の
開発をうながした（米国特許第4036945号を参照のこ
と）。シュトラウス(Strauss)〔ディアグノスティック
イメージング1984年２月54頁(Diagnostic Imaging Fe
b.1984、P.54〕は、かかる抗体の可能な使用方法および
潜在的問題を強調する。
しやすい収縮性たんぱく様物質であるミオシン特異なモ
ノクローナル抗体の開発は、心筋梗塞の位置明らかにし
かつ定量化するために放射線免疫結像を使用する方法の
開発をうながした（米国特許第4036945号を参照のこ
と）。シュトラウス(Strauss)〔ディアグノスティック
イメージング1984年２月54頁(Diagnostic Imaging Fe
b.1984、P.54〕は、かかる抗体の可能な使用方法および
潜在的問題を強調する。
2.2.放射性標識の付着１２５ Ｉ、１３１Ｉ、１１１Inおよび６７Cuを含む多く
の放射性同位元素は、動物モデル生体中の腫瘍検出のた
めのモノクローナルまたはポリクローナル抗体に付着さ
せられた。ヴィンカー(Vincour)〔1984、ディアグノス
ティック イメージング、1984年２月56-61頁(1984、Dia
gnostic Imaging Feb.1984、pp.56-61)〕は、そのような
放射性標識抗体で体験した問題を報告し、抗体分子にさ
らに安定した付着としてとどまる放射性標識の必要性に
ついて特に注目した。（57と同様）。
の放射性同位元素は、動物モデル生体中の腫瘍検出のた
めのモノクローナルまたはポリクローナル抗体に付着さ
せられた。ヴィンカー(Vincour)〔1984、ディアグノス
ティック イメージング、1984年２月56-61頁(1984、Dia
gnostic Imaging Feb.1984、pp.56-61)〕は、そのような
放射性標識抗体で体験した問題を報告し、抗体分子にさ
らに安定した付着としてとどまる放射性標識の必要性に
ついて特に注目した。（57と同様）。
近年、ナフトブィッチ等(Hnatowich)〔1983、サイエン
ス220：613-615(1983,Science 220：613-615)〕および
ポーウィ等(Powe、et al)〔1984、キャンサードラッグデ
リバリー１：125-135(1984、Cancer Drug Delivery 1：1
25-135)は、ジエチレントリアミンペンタ酢酸DTPA)の水
溶性環状または二重環状無水物を使用して１１１Inを抗
体分子またはフラグメントに付着する方法を述べてい
る。これらの両文献において、抗体はアシル化反応によ
り水溶性キレート剤、DTPAに付着させられた。
ス220：613-615(1983,Science 220：613-615)〕および
ポーウィ等(Powe、et al)〔1984、キャンサードラッグデ
リバリー１：125-135(1984、Cancer Drug Delivery 1：1
25-135)は、ジエチレントリアミンペンタ酢酸DTPA)の水
溶性環状または二重環状無水物を使用して１１１Inを抗
体分子またはフラグメントに付着する方法を述べてい
る。これらの両文献において、抗体はアシル化反応によ
り水溶性キレート剤、DTPAに付着させられた。
2.3.放射性免疫結像および局在定位 抗体に付着した放射性金属キレートまたは１３１Ｉのい
ずれかで生み出された生体内結像の従来技術の一般的特
徴は、肝臓または脾臓（または１３１Ｉの甲状腺）の如
き器官中の非標的局在定位にある。かかる非特異局在定
位は、計画された標的の位置、配向性または大きさを正
確に描かない結像を生じる。しばしば、非特異性局在化
放射能の「バックグラウンド消去」は、十分に補償しな
い。
ずれかで生み出された生体内結像の従来技術の一般的特
徴は、肝臓または脾臓（または１３１Ｉの甲状腺）の如
き器官中の非標的局在定位にある。かかる非特異局在定
位は、計画された標的の位置、配向性または大きさを正
確に描かない結像を生じる。しばしば、非特異性局在化
放射能の「バックグラウンド消去」は、十分に補償しな
い。
2.4.ラジオイムノテラピー（放射性標的免疫治療） ラジオイムノイメージング(radiommunoimaging：放射性
免疫結像）またはラジオイムノテラピーに使用された物
質間の主要な差は、使用されが放射線量および種類であ
る。治療に関連して、放射線は、非標的細胞に最小の毒
性を及ぼすのに対して標的細胞を殺すために使用され
る。このように、放射線は、理想的には組織中で高エネ
ルギーおよび短い移動範囲を有する。治療への応用が細
胞に致命的な抗体結合体を含むので、いかなる非特異局
在定位も、「バックグラウンド消去」により補償され得
ないために多くの問題を提供する。結局、生体内結像で
ある程度の成功を提供する産品および方法は、決して治
療への応用に適しないであろう。
免疫結像）またはラジオイムノテラピーに使用された物
質間の主要な差は、使用されが放射線量および種類であ
る。治療に関連して、放射線は、非標的細胞に最小の毒
性を及ぼすのに対して標的細胞を殺すために使用され
る。このように、放射線は、理想的には組織中で高エネ
ルギーおよび短い移動範囲を有する。治療への応用が細
胞に致命的な抗体結合体を含むので、いかなる非特異局
在定位も、「バックグラウンド消去」により補償され得
ないために多くの問題を提供する。結局、生体内結像で
ある程度の成功を提供する産品および方法は、決して治
療への応用に適しないであろう。
３．発明の要約 本発明の一般的な方法に従って、金属イオンは、標的抗
原に向けられた抗体又は抗体フラグメントに付着させら
れる。付着は、金属イオンおよび抗体間にキレート剤
（すなわち、電子を放出しかつキレート複合体と称され
る構造を形成するため金属イオンとの配位結合により結
合可能な化合物）を使用して行なわれる。抗体−金属イ
オン複合体成形後、非特異性付着金属イオンは除去され
るべきである。本発明の公的な実施態様に従って、その
後、複合体からの非特異性付着金属イオンの除去は、高
性能液体モノキュラーシーブクロマトグラフィーシステ
ムを使用して行なった。今述べたことは、生体内に複合
体を使用する際に得られた放射線結像の正確性および分
解可能を高め、そして50%より少ない金属イオンが抗体
−キレート剤結合体のキレート剤部分に特異的に結合
し、そして抗体のいくらかが凝集する従来技術よりも大
きく改良されたことを示す。
原に向けられた抗体又は抗体フラグメントに付着させら
れる。付着は、金属イオンおよび抗体間にキレート剤
（すなわち、電子を放出しかつキレート複合体と称され
る構造を形成するため金属イオンとの配位結合により結
合可能な化合物）を使用して行なわれる。抗体−金属イ
オン複合体成形後、非特異性付着金属イオンは除去され
るべきである。本発明の公的な実施態様に従って、その
後、複合体からの非特異性付着金属イオンの除去は、高
性能液体モノキュラーシーブクロマトグラフィーシステ
ムを使用して行なった。今述べたことは、生体内に複合
体を使用する際に得られた放射線結像の正確性および分
解可能を高め、そして50%より少ない金属イオンが抗体
−キレート剤結合体のキレート剤部分に特異的に結合
し、そして抗体のいくらかが凝集する従来技術よりも大
きく改良されたことを示す。
最も一般的概念で、本発明は、分子の抗原部位の一部分
ではなくまたはその抗原部位と直接関係がない抗体また
は抗体フラグメントのこれらの領域へ適合性キレート剤
の部位選択付着をさせようとするものである。このよう
に、（抗原結合領域の外部に位置した）これらの部位の
一つに適合性キレート剤を選択的に付着した後、形成さ
れた抗体結合体は、非結合抗体または抗体フラグメント
と実質的に同一な免疫反応性および免疫特異性を有す
る。
ではなくまたはその抗原部位と直接関係がない抗体また
は抗体フラグメントのこれらの領域へ適合性キレート剤
の部位選択付着をさせようとするものである。このよう
に、（抗原結合領域の外部に位置した）これらの部位の
一つに適合性キレート剤を選択的に付着した後、形成さ
れた抗体結合体は、非結合抗体または抗体フラグメント
と実質的に同一な免疫反応性および免疫特異性を有す
る。
本発明の一実施態様において、第一級アミノ、ヒドラジ
ン、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、フェニルヒドラ
ジン、セミカルバジドおよびチオセミカルバジド基群か
ら成る群から選ばれたアミン基を有する適合性キレート
剤は、ここに記載した付着方法に従って抗体および抗体
フラグメントの酸化炭水化物部分に直接付着させられ
る。
ン、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、フェニルヒドラ
ジン、セミカルバジドおよびチオセミカルバジド基群か
ら成る群から選ばれたアミン基を有する適合性キレート
剤は、ここに記載した付着方法に従って抗体および抗体
フラグメントの酸化炭水化物部分に直接付着させられ
る。
本発明の他の実施態様において、スルフヒドリル基と反
応可能なある反応基を有する適合性キレート剤は、還元
抗体または還元（Fab′）２フラグメントに付着させら
れるだろう。
応可能なある反応基を有する適合性キレート剤は、還元
抗体または還元（Fab′）２フラグメントに付着させら
れるだろう。
４．図面の簡単な説明 本発明は、添付図面を参照することによりさらに理解さ
れる： 第１図は、高圧液体ゲルパーミエーションクロマトグラ
フィーによる１１１In-CYT-015-P-アミノエニリン−ジ
エチレントリアミンペンタ酢酸（１１１In-CYT-015-ADT
PA）の溶出パターンを示す（6.2.2.節参照のこと）。
れる： 第１図は、高圧液体ゲルパーミエーションクロマトグラ
フィーによる１１１In-CYT-015-P-アミノエニリン−ジ
エチレントリアミンペンタ酢酸（１１１In-CYT-015-ADT
PA）の溶出パターンを示す（6.2.2.節参照のこと）。
第２図は、１１１In−標識抗体ブラウン・ノールウェイ
(anti-Brown Norway,BN)主要組織適合性複合体(MHC)抗
体−金属イオン複合体、１１１In-CYT-015-ADTPAを注入
されたブラウン・ノールウェイ(Brown Norway,BN)腫瘍
発生ヌードマウスのオートラジオグラフ像を示す。像
Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、それぞれ注入後24、24、48およ
び78時間に撮影された（8.1節参照のこと）。
(anti-Brown Norway,BN)主要組織適合性複合体(MHC)抗
体−金属イオン複合体、１１１In-CYT-015-ADTPAを注入
されたブラウン・ノールウェイ(Brown Norway,BN)腫瘍
発生ヌードマウスのオートラジオグラフ像を示す。像
Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、それぞれ注入後24、24、48およ
び78時間に撮影された（8.1節参照のこと）。
第３図は、１１１In標識抗ヒトNHC抗体−金属イオン複
合体、１１１In-CTY-012-ADTPAを注入された比較例のBN
腫瘍発生ヌードマウスのオートラジオグラフ像を示す。
像ＥおよびＦは、それぞれ注入後24および78時間に撮影
された（8.1節参照のこと）。
合体、１１１In-CTY-012-ADTPAを注入された比較例のBN
腫瘍発生ヌードマウスのオートラジオグラフ像を示す。
像ＥおよびＦは、それぞれ注入後24および78時間に撮影
された（8.1節参照のこと）。
第４図は、１１１In標識抗BN MHC抗体−金属イオン複合
体、１１１In-CYT-015-ADTPAを注入された比較例非腫瘍
発生ヌードマウスのオートラジオグラフ像を示す。像Ｇ
およびＨは、それぞれ注入後24および78時間に撮影され
た（8.1節参照のこと）。
体、１１１In-CYT-015-ADTPAを注入された比較例非腫瘍
発生ヌードマウスのオートラジオグラフ像を示す。像Ｇ
およびＨは、それぞれ注入後24および78時間に撮影され
た（8.1節参照のこと）。
第５図は、１１１In標識抗BN抗体−金属イオン複合体、
１１１In-CYT-015-ADTPA（像Ａ）およびその後９９ｍTC
-DTPA（像Ｂ）を注入された移植BNXレヴィス(Lewis)ラ
ット肝臓を有するレヴィスラットのオートラジオグラフ
像を示す（8.2節参照のこと）。
１１１In-CYT-015-ADTPA（像Ａ）およびその後９９ｍTC
-DTPA（像Ｂ）を注入された移植BNXレヴィス(Lewis)ラ
ット肝臓を有するレヴィスラットのオートラジオグラフ
像を示す（8.2節参照のこと）。
５．発明の詳細な説明 本発明は、金属イオンを標的抗原に向かう抗体または抗
体フラグメントに付着させることにより調製した抗体−
金属イオン複合体に関する。金属イオンと配位結合可能
な適合性キレート剤は、金属イオンを抗体または抗体フ
ラグメントに付着するために使用される。かかるキレー
ト剤は、分子の抗原部位の一部分ではなくまたその抗原
部位と直接関係がない抗体または抗体フラグメントのこ
れらの領域に選択的に付着する。
体フラグメントに付着させることにより調製した抗体−
金属イオン複合体に関する。金属イオンと配位結合可能
な適合性キレート剤は、金属イオンを抗体または抗体フ
ラグメントに付着するために使用される。かかるキレー
ト剤は、分子の抗原部位の一部分ではなくまたその抗原
部位と直接関係がない抗体または抗体フラグメントのこ
れらの領域に選択的に付着する。
特に、本発明は、次の段階からなる抗体−金属イオン複
合体の調製法に関する： （ａ）抗体または抗体フラグメントに炭水化物成分中に
アルデヒド基を形成するために、抗体または抗体フラグ
メントと酸化剤とを反応させること； （ｂ）非結合抗体または抗体フラグメントと実質的に同
一な免疫反応性および免疫特異性を有する抗体キレート
剤結合体を形成するために、酸化された抗体または抗体
フラグメントのアルデヒド基と第１級アミン、ヒドラジ
ン、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、フェニルヒドラ
ジン、セミカルバジドおよびチオセミカルバジド基群か
ら成る群から選ばれたアミン基を有する適合性キレート
剤とを反応させること；そして （ｃ）抗体−金属イオン複合体を形成するために、金属
イオンを抗体キレート剤結合剤にキレート化する条件下
で、抗体キレート剤結合体と金属イオンとを結合させる
こと。
合体の調製法に関する： （ａ）抗体または抗体フラグメントに炭水化物成分中に
アルデヒド基を形成するために、抗体または抗体フラグ
メントと酸化剤とを反応させること； （ｂ）非結合抗体または抗体フラグメントと実質的に同
一な免疫反応性および免疫特異性を有する抗体キレート
剤結合体を形成するために、酸化された抗体または抗体
フラグメントのアルデヒド基と第１級アミン、ヒドラジ
ン、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、フェニルヒドラ
ジン、セミカルバジドおよびチオセミカルバジド基群か
ら成る群から選ばれたアミン基を有する適合性キレート
剤とを反応させること；そして （ｃ）抗体−金属イオン複合体を形成するために、金属
イオンを抗体キレート剤結合剤にキレート化する条件下
で、抗体キレート剤結合体と金属イオンとを結合させる
こと。
ある状況下において、上記の抗体−金属イオン複合体調
製法を二つに分けることが好ましい。最初の段階では、
最終抗体−金属イオン複合体の産生において中間体であ
ると思われる抗体キレート剤結合体を産生する。かかる
抗体キレート剤結合体は、興味ある特有な金属イオンと
あとから結合するため貯蔵される。このように二部分を
含む方法の最初の段階は、抗体キレート剤結合体中間体
を形成する上記(a)および(b)の段階である。第２段階で
は、おそらく時間的に遅い時点で、最終抗体−金属イオ
ン複合体を産生するために、抗体キレート剤結合体と金
属イオンを複合化することである。
製法を二つに分けることが好ましい。最初の段階では、
最終抗体−金属イオン複合体の産生において中間体であ
ると思われる抗体キレート剤結合体を産生する。かかる
抗体キレート剤結合体は、興味ある特有な金属イオンと
あとから結合するため貯蔵される。このように二部分を
含む方法の最初の段階は、抗体キレート剤結合体中間体
を形成する上記(a)および(b)の段階である。第２段階で
は、おそらく時間的に遅い時点で、最終抗体−金属イオ
ン複合体を産生するために、抗体キレート剤結合体と金
属イオンを複合化することである。
かかる抗体−金属イオン複合体は、他の方法、例えば最
初に適合性キレート剤を金属イオンに配位結合させ、そ
の後、抗体−金属イオン複合体を形成するために、抗体
または抗体フラグメントとキレート剤金属イオン複合体
とを反応させることによっても得られる。このように本
発明は、さらに、次の段階から成る抗体−金属イオン複
合体の調製法に関する： （ａ）抗体または抗体フラグメントに炭水化物成分中に
アルデヒド基を形成するために、抗体または抗体フラグ
メントと酸化剤とを反応させること；そして （ｂ）非結合抗体または抗体フラグメントと実質的に同
一な免疫反応性および免疫特異性を有する抗体−金属イ
オン複合体形成のため、得られた酸化抗体または抗体フ
ラグメントのアルデヒド基と、金属イオンと配位結合し
た第１級アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、ヒドロキシ
ルアミン、フェニルヒドラジン、セミカルバジドおよび
チオセミカルバジド基から成る群から選ばれたアミン基
を含有する適当なキレート剤を含むキレート剤金属イオ
ン複合体とを反応させること。
初に適合性キレート剤を金属イオンに配位結合させ、そ
の後、抗体−金属イオン複合体を形成するために、抗体
または抗体フラグメントとキレート剤金属イオン複合体
とを反応させることによっても得られる。このように本
発明は、さらに、次の段階から成る抗体−金属イオン複
合体の調製法に関する： （ａ）抗体または抗体フラグメントに炭水化物成分中に
アルデヒド基を形成するために、抗体または抗体フラグ
メントと酸化剤とを反応させること；そして （ｂ）非結合抗体または抗体フラグメントと実質的に同
一な免疫反応性および免疫特異性を有する抗体−金属イ
オン複合体形成のため、得られた酸化抗体または抗体フ
ラグメントのアルデヒド基と、金属イオンと配位結合し
た第１級アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、ヒドロキシ
ルアミン、フェニルヒドラジン、セミカルバジドおよび
チオセミカルバジド基から成る群から選ばれたアミン基
を含有する適当なキレート剤を含むキレート剤金属イオ
ン複合体とを反応させること。
この実施態様において、適合性連結は、キレート剤の抗
体または抗体フラグメントへの共有結合前に金属イオン
に配位置結合させられる。
体または抗体フラグメントへの共有結合前に金属イオン
に配位置結合させられる。
本発明は、上記方法に中間体および最終生成品にみ関す
る。さらに詳細には、本発明は、酸化抗体または抗体フ
ラグメントの炭水化物成分に共有結合により付着した適
合性キレート剤を含み、非結合抗体または抗体フラグメ
ントと実質的に同一な免疫反応性および免疫特異性を有
する抗体キレート剤結合体に関する。さらに本発明は、
酸化された抗体または抗体フラグメントの炭水化物成分
に共有結合により付着した適合性キレート剤を含み、非
結合抗体または抗体フラグメントと実質的に同一な免疫
反応性および免疫特異性を有する抗体−金属イオン複合
体を形成するために適合性キレート剤を金属イオンに配
位結合させた抗体キレート剤結合体を有する抗体−金属
イオン複合体に関する。
る。さらに詳細には、本発明は、酸化抗体または抗体フ
ラグメントの炭水化物成分に共有結合により付着した適
合性キレート剤を含み、非結合抗体または抗体フラグメ
ントと実質的に同一な免疫反応性および免疫特異性を有
する抗体キレート剤結合体に関する。さらに本発明は、
酸化された抗体または抗体フラグメントの炭水化物成分
に共有結合により付着した適合性キレート剤を含み、非
結合抗体または抗体フラグメントと実質的に同一な免疫
反応性および免疫特異性を有する抗体−金属イオン複合
体を形成するために適合性キレート剤を金属イオンに配
位結合させた抗体キレート剤結合体を有する抗体−金属
イオン複合体に関する。
同様に本発明には、適合性キレート剤が還元抗体または
Fab′フラグメントのイオウ原子に結合する抗体キレー
ト剤結合体および抗体−金属イオン複合体がある。本発
明のこれらの実施態様は、次の方法を含む抗体−金属イ
オン複合体調製法を含む： （ａ）スルフヒドリル基を有する還元抗体またはFab′
フラグメントを形成するため抗体または抗体（Fab′）
２フラグメントと温和な還元剤を反応させること； （ｂ）非結合抗体または（Fab′）２フラグメントと実
質的に同一な免疫反応性および免疫特異性を有する抗体
キレート剤結合体を形成するため、該スルフヒドリル基
とハロアルキル基、ｐ−安息香酸第２水銀基およびミハ
イル(michael)型付加反応可能な基から成る群から選ば
れた反応基を有する適合性キレート剤を反応させるこ
と：および （ｃ）抗体−金属イオン複合体形成のため、金属イオン
を抗体キレート剤結合体とキレート化する条件下で抗体
キレート剤結合体と金属イオンとを結合させること。
Fab′フラグメントのイオウ原子に結合する抗体キレー
ト剤結合体および抗体−金属イオン複合体がある。本発
明のこれらの実施態様は、次の方法を含む抗体−金属イ
オン複合体調製法を含む： （ａ）スルフヒドリル基を有する還元抗体またはFab′
フラグメントを形成するため抗体または抗体（Fab′）
２フラグメントと温和な還元剤を反応させること； （ｂ）非結合抗体または（Fab′）２フラグメントと実
質的に同一な免疫反応性および免疫特異性を有する抗体
キレート剤結合体を形成するため、該スルフヒドリル基
とハロアルキル基、ｐ−安息香酸第２水銀基およびミハ
イル(michael)型付加反応可能な基から成る群から選ば
れた反応基を有する適合性キレート剤を反応させるこ
と：および （ｃ）抗体−金属イオン複合体形成のため、金属イオン
を抗体キレート剤結合体とキレート化する条件下で抗体
キレート剤結合体と金属イオンとを結合させること。
代わりとして、同一抗体−金属イオン複合体は、次の方
法を含む他の方法によっても得られる： （ａ）スルフヒドリル基を有する還元抗体またはFab′
フラグメントを形成するため、抗体または（Fab′）２
フラグメントと温和な還元剤を反応させること；および （ｂ）非結合抗体または（Fab′）２フラグメントと実
質的に同一な免疫反応性および免疫特異性を有する抗体
−金属イオン複合体を形成するため、該スルフヒドリル
基とハロアルキル基、ｐ−安息香酸第二水銀基およびミ
ハイル(Michael)型付加反応可能な基から成る群から選
ばれた反応基を有し、金属イオンに配位結合した適合性
キレート剤を含むキレート剤金属イオン複合体とを反応
させること。
法を含む他の方法によっても得られる： （ａ）スルフヒドリル基を有する還元抗体またはFab′
フラグメントを形成するため、抗体または（Fab′）２
フラグメントと温和な還元剤を反応させること；および （ｂ）非結合抗体または（Fab′）２フラグメントと実
質的に同一な免疫反応性および免疫特異性を有する抗体
−金属イオン複合体を形成するため、該スルフヒドリル
基とハロアルキル基、ｐ−安息香酸第二水銀基およびミ
ハイル(Michael)型付加反応可能な基から成る群から選
ばれた反応基を有し、金属イオンに配位結合した適合性
キレート剤を含むキレート剤金属イオン複合体とを反応
させること。
得られた抗体−金属イオン複合体は、還元抗体または
（Fab′）２フラグメントのイオウ原子に共有結合によ
り付着した適合性キレート剤を含み、非結合抗体または
（Fab′）２フラグメントと実質的に同一な免疫反応性
および免疫特異性を有する抗体−金属イオン複合体を形
成するために適合性キレート剤により金属イオンに配位
結合した抗体キレート剤結合体を含む。
（Fab′）２フラグメントのイオウ原子に共有結合によ
り付着した適合性キレート剤を含み、非結合抗体または
（Fab′）２フラグメントと実質的に同一な免疫反応性
および免疫特異性を有する抗体−金属イオン複合体を形
成するために適合性キレート剤により金属イオンに配位
結合した抗体キレート剤結合体を含む。
さらに、本発明は、還元抗体またはFab′フラグメント
のイオウ原子に共有結合により付着した適合性キレート
剤を含み、非結合抗体または（Fab′）２フラグメント
と実質的に同一である免疫反応性および免疫特異性を有
する中間体抗体キレート剤結合体をも期待する。
のイオウ原子に共有結合により付着した適合性キレート
剤を含み、非結合抗体または（Fab′）２フラグメント
と実質的に同一である免疫反応性および免疫特異性を有
する中間体抗体キレート剤結合体をも期待する。
本発明の抗体−金属イオン複合体が得られる方法から独
立して、非キレート化金属イオンを実質的に含まない抗
体−金属イオン複合体を得るために、抗体−金属イオン
複合体を非キレート化金属イオンから分離するため精製
するとき、、改良された結果は、その後該複合体を、特
に生体内使用で得られることが判った。非キレート化金
属イオンを「実質的に含まない」とは、少なくとも約80
〜90%がそのようなイオンを含まないことを意味する。
更に詳細には、本発明の精製複合はキレート剤にキレー
ト化された金属イオンを含むが、付随的に抗体に結合し
た金属イオン、すなわちキレート剤と結合しないで抗体
たんぱく質または炭水化物と結合した金属イオンを実質
的に含まない。精製は、高性能ゲルパーミエーション液
体クロマトグラフィーを用いるがそれに限定されること
なくどんな好適な精製方法によっても達成し得る。
立して、非キレート化金属イオンを実質的に含まない抗
体−金属イオン複合体を得るために、抗体−金属イオン
複合体を非キレート化金属イオンから分離するため精製
するとき、、改良された結果は、その後該複合体を、特
に生体内使用で得られることが判った。非キレート化金
属イオンを「実質的に含まない」とは、少なくとも約80
〜90%がそのようなイオンを含まないことを意味する。
更に詳細には、本発明の精製複合はキレート剤にキレー
ト化された金属イオンを含むが、付随的に抗体に結合し
た金属イオン、すなわちキレート剤と結合しないで抗体
たんぱく質または炭水化物と結合した金属イオンを実質
的に含まない。精製は、高性能ゲルパーミエーション液
体クロマトグラフィーを用いるがそれに限定されること
なくどんな好適な精製方法によっても達成し得る。
この精製段階では、投薬前に好ましくない凝集物を除去
するという他の利益を有する。どのようなかかる抗体凝
集物または変性抗体も、網内除去システムにより捕縛さ
れ、結像される標的部位または特異組織から離れている
この移送は、結像の局在定位または質の程度を減少させ
るであろう。
するという他の利益を有する。どのようなかかる抗体凝
集物または変性抗体も、網内除去システムにより捕縛さ
れ、結像される標的部位または特異組織から離れている
この移送は、結像の局在定位または質の程度を減少させ
るであろう。
本発明の抗体−金属イオン複合体は、理想的に生体内に
高解像組織像用に適する。特異組織のかかる結像は、抗
体−金属イオン複合体が特異組織の抗体性決定基に免疫
反応性および免疫特異性であり、非特異性組織に実質的
に非免疫反応性および非免疫特異性であり、そして該抗
原性決定基が非特異組織中で実質的な量で見い出されな
いという有効抗体−金属イオン複合体をヒトに投薬する
ことを含む。後の実施例で示されるように、この方法
は、金属イオンの最少「バックグランド」分散で特異組
織の局在定位に使用され得る。
高解像組織像用に適する。特異組織のかかる結像は、抗
体−金属イオン複合体が特異組織の抗体性決定基に免疫
反応性および免疫特異性であり、非特異性組織に実質的
に非免疫反応性および非免疫特異性であり、そして該抗
原性決定基が非特異組織中で実質的な量で見い出されな
いという有効抗体−金属イオン複合体をヒトに投薬する
ことを含む。後の実施例で示されるように、この方法
は、金属イオンの最少「バックグランド」分散で特異組
織の局在定位に使用され得る。
さらに、本発明の抗体−金属イオン複合体の生体内使用
は、細胞障害の治療処置を含む。かかる方法は、本発明
の治療上有効量の抗体−金属イオン複合体、すなわち該
抗体−金属イオン複合体が細胞障害で関連した標的部位
に免疫反応性および免疫特異性であり、該細胞障害非関
連組織に非免疫反応性および非免疫特異性であり、金属
イオンが細胞毒のベータ粒子またはアルファ粒子を放出
するところの該複合体の投薬を含む。
は、細胞障害の治療処置を含む。かかる方法は、本発明
の治療上有効量の抗体−金属イオン複合体、すなわち該
抗体−金属イオン複合体が細胞障害で関連した標的部位
に免疫反応性および免疫特異性であり、該細胞障害非関
連組織に非免疫反応性および非免疫特異性であり、金属
イオンが細胞毒のベータ粒子またはアルファ粒子を放出
するところの該複合体の投薬を含む。
最後に、本発明の複合体は、次の事項を含む抗原試験方
法にも使用される；例えば、(a)抗原に免疫反応性およ
び免疫特異性である抗体−金属イオン複合体と粒子状抗
原を含むと思われるサンプルを混合し、そして(b)該抗
体−金属イオン複合体とサンプル中の抗原とのどんな相
互作用も検出すること。
法にも使用される；例えば、(a)抗原に免疫反応性およ
び免疫特異性である抗体−金属イオン複合体と粒子状抗
原を含むと思われるサンプルを混合し、そして(b)該抗
体−金属イオン複合体とサンプル中の抗原とのどんな相
互作用も検出すること。
他の試験管内の使用方法は、通常の熟練者により同様に
見い出されかつ開発されるであろう。
見い出されかつ開発されるであろう。
5.1.抗体 本発明によれば、抗原またはハプテンに向けられた抗体
が使用される。通常の抗体（抗血清）が使用されるが、
モノクローナル抗体はいくつかの利点を提供する。各モ
ノクローナル抗体は、ある抗原決定基に特異である。さ
らに、多くの各モノクロナール抗体が産生され得る。
が使用される。通常の抗体（抗血清）が使用されるが、
モノクローナル抗体はいくつかの利点を提供する。各モ
ノクローナル抗体は、ある抗原決定基に特異である。さ
らに、多くの各モノクロナール抗体が産生され得る。
本発明に使用した抗体は、どんな標的、たとえば、腫
瘍、細菌の、真菌の、ウイルス性の、寄生虫性の、マイ
コプラスマ属の、組織適合性、分化および他の細胞膜抗
原、病原体表面抗原、トキシン、酵素、アレルガン、薬
剤およびバイオ活性分子に向けてもよい。
瘍、細菌の、真菌の、ウイルス性の、寄生虫性の、マイ
コプラスマ属の、組織適合性、分化および他の細胞膜抗
原、病原体表面抗原、トキシン、酵素、アレルガン、薬
剤およびバイオ活性分子に向けてもよい。
特別に興味ある薬剤は、オピオイド類、アンフェタミン
類、バルビツレート類、ステロイド類、カテコールアミ
ン、ディランチン(dilantin)、テオフィリン、ヒスタミ
ン、カンナビノイド類(cannabinoids)等である。より完
全な抗原のリストは参照としてこの明細書に組み込まれ
ている米国特許第4193983号を参照のこと。例えば心筋
梗塞後の心血管の疾病または障害を結像することが好ま
しいときは、ミオシンまたは他の心性シトソルたんぱく
質に向う抗体を使用してもよい。さらに、違なる抗原性
決定基と反応性がある抗体の結合物を使用してもよい。
担体として使用される免疫グロブリンには次のものが含
まれる。IgA、IgD、IgE、IgM、の如きあるクラスの抗体；
あるクラスのIgG；または他のある免疫グロブリンフラ
グメント、例えば1/2抗体分子（一つのＨ：Ｌ鎖対）ま
たはFaB、Fab′、または（Fab′）２フラグメント。
類、バルビツレート類、ステロイド類、カテコールアミ
ン、ディランチン(dilantin)、テオフィリン、ヒスタミ
ン、カンナビノイド類(cannabinoids)等である。より完
全な抗原のリストは参照としてこの明細書に組み込まれ
ている米国特許第4193983号を参照のこと。例えば心筋
梗塞後の心血管の疾病または障害を結像することが好ま
しいときは、ミオシンまたは他の心性シトソルたんぱく
質に向う抗体を使用してもよい。さらに、違なる抗原性
決定基と反応性がある抗体の結合物を使用してもよい。
担体として使用される免疫グロブリンには次のものが含
まれる。IgA、IgD、IgE、IgM、の如きあるクラスの抗体；
あるクラスのIgG；または他のある免疫グロブリンフラ
グメント、例えば1/2抗体分子（一つのＨ：Ｌ鎖対）ま
たはFaB、Fab′、または（Fab′）２フラグメント。
抗体フラグメントが増加された速度で標的部位に浸透す
るため抗体フラグメントの使用は、組織結像システムに
有効であろう。IgG免疫グロビリンのFab′フラグメント
は、抗体分子をペプシン（２価フラグメント、（Fa
b′）２を生ずる）またはパパイン（２つの一価フラグ
メント、2Fabを生ずる）により分解することにより得ら
れる。パーハム、1983、ジェイ．イムノル．131：2895-
2902；ラモリおよびニソノフ、1983、ジェイ、イムノ
ル．メソ．56：235-243(Parham、1983 J.Immunol.131：2
895-2902；Lamoyi and Nisonoff、1983、J.Immunol.Meth.
56：235-243)。一若しくは若干のジスルフィド結合を徐
々に還元することにより２価の（Fab′）２フラグメン
トを分解し得、一価のFab′フラグメント産生する。Fab
および（Fab′）２フラグメントは抗体分子全体よりも
小さいために、標準部位または組織に簡単に浸透する。
結合体は、より簡単に生体内で部位（例えば腫瘍塊、感
染部位等）に浸透するため、上で述べたことは生体内結
像に有効である。抗体フラグメントで形成した結合体を
使用することは、これらのフラグメントが胎盤バリアー
を横切らないのでさらに有効である。結局。本発明のこ
の実施態様に使用することにより、生体内部位（腫瘍の
如き）は、胎児を結像化合物に暴露することなく妊娠し
た情勢中に結像するであろう。
るため抗体フラグメントの使用は、組織結像システムに
有効であろう。IgG免疫グロビリンのFab′フラグメント
は、抗体分子をペプシン（２価フラグメント、（Fa
b′）２を生ずる）またはパパイン（２つの一価フラグ
メント、2Fabを生ずる）により分解することにより得ら
れる。パーハム、1983、ジェイ．イムノル．131：2895-
2902；ラモリおよびニソノフ、1983、ジェイ、イムノ
ル．メソ．56：235-243(Parham、1983 J.Immunol.131：2
895-2902；Lamoyi and Nisonoff、1983、J.Immunol.Meth.
56：235-243)。一若しくは若干のジスルフィド結合を徐
々に還元することにより２価の（Fab′）２フラグメン
トを分解し得、一価のFab′フラグメント産生する。Fab
および（Fab′）２フラグメントは抗体分子全体よりも
小さいために、標準部位または組織に簡単に浸透する。
結合体は、より簡単に生体内で部位（例えば腫瘍塊、感
染部位等）に浸透するため、上で述べたことは生体内結
像に有効である。抗体フラグメントで形成した結合体を
使用することは、これらのフラグメントが胎盤バリアー
を横切らないのでさらに有効である。結局。本発明のこ
の実施態様に使用することにより、生体内部位（腫瘍の
如き）は、胎児を結像化合物に暴露することなく妊娠し
た情勢中に結像するであろう。
5.2.適合性キレート剤 ここで使用される「適合性キレート剤」とは、(a)電子
を供給し、配位結合により金属イオンと結合しキレート
またはキレート複合体と称される構造を構成し、(b)金
属イオンをキレート化する能力を損失することなく、ま
たは抗体または抗体フラグメントの免疫反応性または免
疫特異性を破壊することなく抗体または抗体フラグメン
ト付着に適するいかなる化合物をも示す。必要により、
既知キレート剤誘導体は、生成品が本発明の方法による
抗体または抗体フラグメント付着に適する適合性キレー
ト剤であるので合成される。
を供給し、配位結合により金属イオンと結合しキレート
またはキレート複合体と称される構造を構成し、(b)金
属イオンをキレート化する能力を損失することなく、ま
たは抗体または抗体フラグメントの免疫反応性または免
疫特異性を破壊することなく抗体または抗体フラグメン
ト付着に適するいかなる化合物をも示す。必要により、
既知キレート剤誘導体は、生成品が本発明の方法による
抗体または抗体フラグメント付着に適する適合性キレー
ト剤であるので合成される。
さらに興味あるのは金属イオンのキレート化に対し多く
の部位を有する適合性キレート剤である。多部位かつ適
合性キレート剤によって、抗体または抗体フラグメント
への一つの共有結合付着は、多くの部位において金属イ
オンと結合可能な結合体を生ずるであろう。かかる結合
体の放射性複合体は高特異放射能、すなわち単位抗体分
子当り高い放射能を有する。
の部位を有する適合性キレート剤である。多部位かつ適
合性キレート剤によって、抗体または抗体フラグメント
への一つの共有結合付着は、多くの部位において金属イ
オンと結合可能な結合体を生ずるであろう。かかる結合
体の放射性複合体は高特異放射能、すなわち単位抗体分
子当り高い放射能を有する。
代りとして、高特異放射能（または抗体分子に対する高
い比率の金属イオン）は、抗体または抗体フラグメント
の多くの部位において一部位適合性キレート剤の付着に
より達成され得る。二方法におずれかにより多様な部位
が抗体または抗体フラグメント中へ導入される。第一
に、同一抗体分子中に多数のアルデヒド基および／また
はスルフヒドリル基を生じさせる。第二に、抗体分子の
アルデヒド基またはスルフヒドリル基に、その後の適合
性キレート剤への付着用多機能部位を有する「枝分かれ
したリンカー」を付着させる。枝分かれしたリンカーの
多機能部位は、アルデヒドまたはスルフヒドリル基また
は適切な「キレート剤」が攻撃するどの化学的部位でも
ある。さらに高特異放射能は、これら二つのアプローチ
を結合すること、すなわち抗体または抗体フラグメント
上の各種の部位で多様な部位の適合性キレート剤を付着
させることにより得られるであろう。
い比率の金属イオン）は、抗体または抗体フラグメント
の多くの部位において一部位適合性キレート剤の付着に
より達成され得る。二方法におずれかにより多様な部位
が抗体または抗体フラグメント中へ導入される。第一
に、同一抗体分子中に多数のアルデヒド基および／また
はスルフヒドリル基を生じさせる。第二に、抗体分子の
アルデヒド基またはスルフヒドリル基に、その後の適合
性キレート剤への付着用多機能部位を有する「枝分かれ
したリンカー」を付着させる。枝分かれしたリンカーの
多機能部位は、アルデヒドまたはスルフヒドリル基また
は適切な「キレート剤」が攻撃するどの化学的部位でも
ある。さらに高特異放射能は、これら二つのアプローチ
を結合すること、すなわち抗体または抗体フラグメント
上の各種の部位で多様な部位の適合性キレート剤を付着
させることにより得られるであろう。
以下は、本発明の使用に適する確認されたある重要なク
ラスの適合性キレート剤である。適合性キレート剤は、
最近ガンソー(Gansow)等により記載されている様な〔19
81、ジェイ．ヘテロサイクリック ケミ．18：297(198
1、J.Heterocyclic Chem.18：297)〕ジエチレトリアミン
−ペンタ酢酸、エチレジンアミン四酢酸(EDTA)、ジメル
カプトコハク酸、２，３−ジメルカプトプロパンスルホ
ン酸、メタロチオネインおよびクリプテート(cryptate)
の誘導体を上げることができるがこれらに限定されるこ
とはない。
ラスの適合性キレート剤である。適合性キレート剤は、
最近ガンソー(Gansow)等により記載されている様な〔19
81、ジェイ．ヘテロサイクリック ケミ．18：297(198
1、J.Heterocyclic Chem.18：297)〕ジエチレトリアミン
−ペンタ酢酸、エチレジンアミン四酢酸(EDTA)、ジメル
カプトコハク酸、２，３−ジメルカプトプロパンスルホ
ン酸、メタロチオネインおよびクリプテート(cryptate)
の誘導体を上げることができるがこれらに限定されるこ
とはない。
5.2.1.炭水化物付着用の適合性キレート剤 前に説明したように、適合性キレート剤は、金属イオン
を抗体分子に付着させるために使用される。本発明によ
れば、酸化された抗体または抗体フラグメントとの反応
に好適かつ適合性のキレート剤は、第１級アミン、ヒド
ラジン、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、フェニルヒ
ドラジン、セミカルバジドおよびチオセミカルバジド基
から成る群から選ばれたアミン基を含む。
を抗体分子に付着させるために使用される。本発明によ
れば、酸化された抗体または抗体フラグメントとの反応
に好適かつ適合性のキレート剤は、第１級アミン、ヒド
ラジン、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、フェニルヒ
ドラジン、セミカルバジドおよびチオセミカルバジド基
から成る群から選ばれたアミン基を含む。
かかる反応性多機能基は、キレート剤構造の一部として
存在し、またはかかる基を含有しないキレート剤上に好
適は化学的方法により導入されるであろう。
存在し、またはかかる基を含有しないキレート剤上に好
適は化学的方法により導入されるであろう。
例えば、ジエチレントリアミンペンタ酢酸(DTPA)は、酸
化された炭水化物への容易な付着用の特異なアミン基を
欠いている。しかしながら、ｐ−アミノアニリン−DTP
A、ヒドラジド−DTPA、フェニルヒドラジド−DTPA、ヒ
ドロキシルアミン−DTPA、セミカルバジド−DTPA、チオ
セミカルバジド−DTPA、ポリエチレンイミン−DTPA、ｐ
−フェニレンジアミン−DTPA、DTPAモノ〔（４−アミノ
フェニル）メチル〕アミドを挙げることができるがこれ
らに限定されることのないDTPAの混合無水物のアミン含
有誘導体およびα−Ｎ−DTPA−Ｌ−リジン、グリシル−
チロシルーリジン−DTPAおよびＬ−リジンペンジルエス
テル−DTPAを挙げることができるがこれらに限定される
ことのない）DTPAのアミノ酸含有誘導体のような多種類
の好適な誘導体を、化学修飾により製造できる。
化された炭水化物への容易な付着用の特異なアミン基を
欠いている。しかしながら、ｐ−アミノアニリン−DTP
A、ヒドラジド−DTPA、フェニルヒドラジド−DTPA、ヒ
ドロキシルアミン−DTPA、セミカルバジド−DTPA、チオ
セミカルバジド−DTPA、ポリエチレンイミン−DTPA、ｐ
−フェニレンジアミン−DTPA、DTPAモノ〔（４−アミノ
フェニル）メチル〕アミドを挙げることができるがこれ
らに限定されることのないDTPAの混合無水物のアミン含
有誘導体およびα−Ｎ−DTPA−Ｌ−リジン、グリシル−
チロシルーリジン−DTPAおよびＬ−リジンペンジルエス
テル−DTPAを挙げることができるがこれらに限定される
ことのない）DTPAのアミノ酸含有誘導体のような多種類
の好適な誘導体を、化学修飾により製造できる。
5.2.2スルクヒドリル付着用の適合性キレート剤 本発明に従えば、還元されが抗体または抗体フラグメン
トの付着に適する適合性キレート剤は、還元された抗体
またはFab′フラグメントのスルフヒドリル基と反応可
能なある反応性基を含有するキレート剤である。かかる
反応性基は、反応性ハロアルキル基（例えば、ハロアセ
チル基を含有する）、ｐ−安息香酸第二水銀基およびミ
ハエル(Michael)型付加反応可能な基（例えば、マレイ
ミドおよびミトラおよびロートン著1979年ジャーナル
オブ アメリカン ケミカル ソサイアティー第101
巻、3097-3110頁）(Mitra and Lawton,1979,J.Amer,Che
m.Soc.101：3097-3110)に記載のタイプの基を含む）を
含むがこれらに限定されることはない。「ハロアルキ
ル」とは、臭素、ヨウ素および塩基で置換された１〜３
の炭素原子のアルキル基を意味する。ヨードアルキル基
は、例えば、ジエチレントリアミン五酢酸、エチレンジ
アミン四酢酸、ジメルカプトコハク酸、2,3-ジメルカプ
トプロパンスルホン酸、メタロチオエイン(metallothio
ein)およびクリプテーテス(crytates)を含むこれらに限
定されることのない既知キレート剤構造中に導入され
る。
トの付着に適する適合性キレート剤は、還元された抗体
またはFab′フラグメントのスルフヒドリル基と反応可
能なある反応性基を含有するキレート剤である。かかる
反応性基は、反応性ハロアルキル基（例えば、ハロアセ
チル基を含有する）、ｐ−安息香酸第二水銀基およびミ
ハエル(Michael)型付加反応可能な基（例えば、マレイ
ミドおよびミトラおよびロートン著1979年ジャーナル
オブ アメリカン ケミカル ソサイアティー第101
巻、3097-3110頁）(Mitra and Lawton,1979,J.Amer,Che
m.Soc.101：3097-3110)に記載のタイプの基を含む）を
含むがこれらに限定されることはない。「ハロアルキ
ル」とは、臭素、ヨウ素および塩基で置換された１〜３
の炭素原子のアルキル基を意味する。ヨードアルキル基
は、例えば、ジエチレントリアミン五酢酸、エチレンジ
アミン四酢酸、ジメルカプトコハク酸、2,3-ジメルカプ
トプロパンスルホン酸、メタロチオエイン(metallothio
ein)およびクリプテーテス(crytates)を含むこれらに限
定されることのない既知キレート剤構造中に導入され
る。
5.3.抗体または抗体フラグメントへの付着方法 本発明の方法に従えば、適合性キレート剤（または適合
性キレート剤金属イオン複合体）は、(a)抗体または抗
体フラグメントの炭水化物部分への付着、または(b)抗
体分子のスルフヒドリル基への付着により、標的抗原に
向かう抗体に付着させられる。たとえどのような方法を
使用しようとも、その付着は、免疫特異性および免疫反
応性という抗体または抗体フラグメントの基本的な特性
を著るしく変化させてはいけない。さらに考慮すると、
反応の容易性および得られた抗体結合体の安定性も含ま
れる。
性キレート剤金属イオン複合体）は、(a)抗体または抗
体フラグメントの炭水化物部分への付着、または(b)抗
体分子のスルフヒドリル基への付着により、標的抗原に
向かう抗体に付着させられる。たとえどのような方法を
使用しようとも、その付着は、免疫特異性および免疫反
応性という抗体または抗体フラグメントの基本的な特性
を著るしく変化させてはいけない。さらに考慮すると、
反応の容易性および得られた抗体結合体の安定性も含ま
れる。
5.3.1酸化炭水化物部分への付着 糖たんぱく質類は、ポリペプチドバックボーンに共有結
合的に付着した炭水化合物残基を含む構造特性を共有す
る生化学的に重要な巨大分子である。抗体は糖たんぱく
質であるので、化合物は分子の炭水化物化合物部分に付
着させられる。ある炭水化物部分は、免疫グロブリンの
Fc領域に位置し、Cl結合を起こすために必要である。免
疫グロブリンのFc領域の炭水化物部分は、この中で述べ
た構成中で使用される。代わりとして、炭水化物部分を
含むどんな免疫グロブリンのFabまたはFab′フラグメン
トは、この中で述べた反応構成中で使用される。かかる
免疫グロブリンの一実施例は、プットマン等(Putman)ら
によって配列決定されたヒトIgMである〔1973年サイエ
ンス第182巻、第287頁(1973、Science 182：287)〕。
合的に付着した炭水化合物残基を含む構造特性を共有す
る生化学的に重要な巨大分子である。抗体は糖たんぱく
質であるので、化合物は分子の炭水化物化合物部分に付
着させられる。ある炭水化物部分は、免疫グロブリンの
Fc領域に位置し、Cl結合を起こすために必要である。免
疫グロブリンのFc領域の炭水化物部分は、この中で述べ
た構成中で使用される。代わりとして、炭水化物部分を
含むどんな免疫グロブリンのFabまたはFab′フラグメン
トは、この中で述べた反応構成中で使用される。かかる
免疫グロブリンの一実施例は、プットマン等(Putman)ら
によって配列決定されたヒトIgMである〔1973年サイエ
ンス第182巻、第287頁(1973、Science 182：287)〕。
後に詳細に述べるように、抗体、FabまたはFab′フラグ
メントの炭水化物側鎖は、選択的に酸化されてアルデヒ
ドを生ずる。得られるアルデヒドは、その後アミン基
（例えば、第１アミン、ヒドロキシルアミン、ヒドラジ
ン、ヒドラジド、フェニルヒドラジン、セミカルバジ
ド、またはチオセミカルバジドの如きアンモニア誘導
体）と反応し、シッフ塩基(Schiff Base)または還元シ
ッフ塩基（例えば、イミン、エナミン、オキシム、ヒド
ラゾン、フェニヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミ
カルバゾンまたはそれらの還元体）を生じる。
メントの炭水化物側鎖は、選択的に酸化されてアルデヒ
ドを生ずる。得られるアルデヒドは、その後アミン基
（例えば、第１アミン、ヒドロキシルアミン、ヒドラジ
ン、ヒドラジド、フェニルヒドラジン、セミカルバジ
ド、またはチオセミカルバジドの如きアンモニア誘導
体）と反応し、シッフ塩基(Schiff Base)または還元シ
ッフ塩基（例えば、イミン、エナミン、オキシム、ヒド
ラゾン、フェニヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミ
カルバゾンまたはそれらの還元体）を生じる。
代わりとして、抗体の炭水化物部分は、他の科学的な基
に付着または反応するように酵素的技術により修飾され
る。そのような酵素の１例は、酸素存在下でガラクトー
スを酸化してアルデヒドを生じさせるガラクトースオキ
シダーゼである。
に付着または反応するように酵素的技術により修飾され
る。そのような酵素の１例は、酸素存在下でガラクトー
スを酸化してアルデヒドを生じさせるガラクトースオキ
シダーゼである。
5.3.1.1.化学的な酸化方法 抗体分子の炭水化物部または成分を酸化するとアルデヒ
ド基を形成する。過ヨウ素酸、パラ過ヨウ素酸、メタ過
ヨウ素酸ナトリウム、およびメタ過ヨウ素カリウムのよ
うな多様な酸化剤が使用し得る。これらの化合物の中
で、酸素酸およびそれらの塩は、２次または好ましくな
い副反応が少ないために好まれる。一般的な検討に関し
ては次のものを参照のこと。〔ジャクソン、1944、オー
ガニック リアクションズ２、P.341；ブントン、196
5、オキシデーション イン オーガニック ケミスト
リー ヴォル．１（ヴィーベルク、、イーデー．）、ア
カディミック プレス、ニューヨーク、P.367(Jackson,
1944,Organic Reactions 2,P.341；Bunton,1965,Oxidat
ion in Organic Chemistry,Vol.1(Wiberg,ed.),Academi
c Press,New York,p.367)〕。
ド基を形成する。過ヨウ素酸、パラ過ヨウ素酸、メタ過
ヨウ素酸ナトリウム、およびメタ過ヨウ素カリウムのよ
うな多様な酸化剤が使用し得る。これらの化合物の中
で、酸素酸およびそれらの塩は、２次または好ましくな
い副反応が少ないために好まれる。一般的な検討に関し
ては次のものを参照のこと。〔ジャクソン、1944、オー
ガニック リアクションズ２、P.341；ブントン、196
5、オキシデーション イン オーガニック ケミスト
リー ヴォル．１（ヴィーベルク、、イーデー．）、ア
カディミック プレス、ニューヨーク、P.367(Jackson,
1944,Organic Reactions 2,P.341；Bunton,1965,Oxidat
ion in Organic Chemistry,Vol.1(Wiberg,ed.),Academi
c Press,New York,p.367)〕。
抗体とこれらの酸化剤との酸化反応は、既知の方法によ
り実施され得る。酸化反応において、抗体は一般に水溶
性液状態で使用され、その濃度は一般に100mg/ml以下で
あり、好ましくは１〜20mg/mlである。酸素酸またはそ
の塩が酸化剤として使用されるときは、一般に水溶液状
態で使用され、その濃度は一般に0.001〜10mM、好まし
くは1.0〜10mMである。酸素酸またはそれらの塩の使用
量は、抗体の種類に依存するが、一般に過剰で、例えば
酸化される炭水化物の２〜10倍量で使用される。しかし
ながら、最適量は、所定の実験により決定し得る。
り実施され得る。酸化反応において、抗体は一般に水溶
性液状態で使用され、その濃度は一般に100mg/ml以下で
あり、好ましくは１〜20mg/mlである。酸素酸またはそ
の塩が酸化剤として使用されるときは、一般に水溶液状
態で使用され、その濃度は一般に0.001〜10mM、好まし
くは1.0〜10mMである。酸素酸またはそれらの塩の使用
量は、抗体の種類に依存するが、一般に過剰で、例えば
酸化される炭水化物の２〜10倍量で使用される。しかし
ながら、最適量は、所定の実験により決定し得る。
抗体と酸素酸またはその塩との酸化反応行程において、
最適範囲は、pHが約４〜８、温度が０〜37℃、反応時間
が約15分〜12時間である。
最適範囲は、pHが約４〜８、温度が０〜37℃、反応時間
が約15分〜12時間である。
糖たんぱく質と酸素酸またはその塩との酸化反応中、糖
たんぱく質の過酸化を防ぐために光を除くことが好まし
い。
たんぱく質の過酸化を防ぐために光を除くことが好まし
い。
5.3.1.2酸素的酸化法 抗体分子の炭水化物部の酸化は、酵素、ガラクトースオ
キシダーゼによっても行なわれる〔コーパー等．、195
9、ジェイ，バイオル．ケミ．234；445〜448(Cooper、et
al.,1959,J.Biol.Chem.234：445〜448)〕。抗体は水溶
液状態で使用される。その濃度が一般に0.5-20mg/mlで
ある。酵素は一般にpH約5.5〜約8.0において溶液１ml当
り約５〜100ユニットで使用される。酵素反応に対するp
H、基質濃度、バッファーおよびバッファー濃度の影響
はコバー(Cooper)等の上記文献中に報告されている。
キシダーゼによっても行なわれる〔コーパー等．、195
9、ジェイ，バイオル．ケミ．234；445〜448(Cooper、et
al.,1959,J.Biol.Chem.234：445〜448)〕。抗体は水溶
液状態で使用される。その濃度が一般に0.5-20mg/mlで
ある。酵素は一般にpH約5.5〜約8.0において溶液１ml当
り約５〜100ユニットで使用される。酵素反応に対するp
H、基質濃度、バッファーおよびバッファー濃度の影響
はコバー(Cooper)等の上記文献中に報告されている。
5.3.1.3.抗体−キレート剤結合体の調製法 本発明の抗体−キレート剤結合体（またはキレート剤と
抗体との反応前にプレキレート化金属イオンがキレート
剤に付着するときの抗体−金属イオン複合体）は、酸化
抗体と第１級アミン、ヒドラジン、ヒドタジド、ヒドロ
キシルアミン、フェニルヒドラジン、セミカルバジド、
およびチオセミカルバジド基から成る群から選ばれた有
効なアミン基を有する適合性キレート剤とを反応させる
ことにより産生される。生じたばかりの生成品（抗体キ
レート剤結合体または抗体−金属イオン複合体）は，最
初の付加生成品から水分子を除去することにより生ずる
炭素−窒素二重結合を含む； 抗体-CH＝0+NH2-R→抗体-CH＝N-R+H2O アルデヒドとヒドラジドとの反応の一般的な議論に関し
ては、次の文献を参照のこと：マーチ、1978、アドバン
スト オーガニック ケミストリー：リアクションズ、
メカニズム アンド ストラクチャー、マグローヒル
コーポ、ニューヨーク、ピー823-825(March,1978,Advan
ced Organic Chemistry：Reactions,Mechanism and Str
ucture、McGraw-Hill Co.,New York、P.824-825)。
抗体との反応前にプレキレート化金属イオンがキレート
剤に付着するときの抗体−金属イオン複合体）は、酸化
抗体と第１級アミン、ヒドラジン、ヒドタジド、ヒドロ
キシルアミン、フェニルヒドラジン、セミカルバジド、
およびチオセミカルバジド基から成る群から選ばれた有
効なアミン基を有する適合性キレート剤とを反応させる
ことにより産生される。生じたばかりの生成品（抗体キ
レート剤結合体または抗体−金属イオン複合体）は，最
初の付加生成品から水分子を除去することにより生ずる
炭素−窒素二重結合を含む； 抗体-CH＝0+NH2-R→抗体-CH＝N-R+H2O アルデヒドとヒドラジドとの反応の一般的な議論に関し
ては、次の文献を参照のこと：マーチ、1978、アドバン
スト オーガニック ケミストリー：リアクションズ、
メカニズム アンド ストラクチャー、マグローヒル
コーポ、ニューヨーク、ピー823-825(March,1978,Advan
ced Organic Chemistry：Reactions,Mechanism and Str
ucture、McGraw-Hill Co.,New York、P.824-825)。
約0.5〜20mg/mlの酸化された抗体溶液を適合性キレート
剤（抗体アルデヒドに対する反応性キレート剤基のモル
比が約１〜10,000である）と混合し、その溶液を約１〜
18時間インキュベート（保温）した。好適な温度は、０
〜37℃、、pHは約６〜８といってよい。
剤（抗体アルデヒドに対する反応性キレート剤基のモル
比が約１〜10,000である）と混合し、その溶液を約１〜
18時間インキュベート（保温）した。好適な温度は、０
〜37℃、、pHは約６〜８といってよい。
5.3.1.4.抗体−キレート剤結合体の安定化 抗体−キレート剤結合体（または抗体−金属イオン複合
体）は、3.1.3節で記載したように抗体と適合性キレー
ト剤間で形成された後、シアノホウ水素化ナトリウムま
たはホウ水素化ナトリウムのような好適は還元剤で必要
により安定化される： 還元剤 抗体-CH＝N-R → 抗体-CH2-NH-R 一般に還元剤は、有効なアルデヒド基のモル過剰、約10
〜100倍モル加えられる。一般的な論説は、次の文献を
参照のこと〔ジェントフト アンド ディアボーン、19
79、ジェイ．バイオル．ケム．254：4396(Jentoft and
Dearborn、1979,J,Biol.chem.254：4359)〕。
体）は、3.1.3節で記載したように抗体と適合性キレー
ト剤間で形成された後、シアノホウ水素化ナトリウムま
たはホウ水素化ナトリウムのような好適は還元剤で必要
により安定化される： 還元剤 抗体-CH＝N-R → 抗体-CH2-NH-R 一般に還元剤は、有効なアルデヒド基のモル過剰、約10
〜100倍モル加えられる。一般的な論説は、次の文献を
参照のこと〔ジェントフト アンド ディアボーン、19
79、ジェイ．バイオル．ケム．254：4396(Jentoft and
Dearborn、1979,J,Biol.chem.254：4359)〕。
5.3.2.スルフヒドリル基への付着 遊離スルフヒドリル基は、免疫グロブリン分子のジスル
フィド結合から生成し得る。上述のことは、抗体分子の
マイルドな還元により達成される。一般に最も還元され
やすいIgGのジスルフィド結合は、２個の重い(H)鎖をリ
ンクする結合である。抗体分子の抗原結合領域近傍に位
置するジスルフィド結合は、相対的に影響を受けずにそ
のまま残る。かかる還元は、結果的に補体固定能力を失
うこととなるが、抗体抗原結合能力を妨害することはな
い〔カラッシ等、1979，バイオケム．18：2226-2232(Ka
rush,et al.,1979,Biochem.18：2226-2232)〕。内部Ｈ
鎖領域内に生成した遊離スルフヒドリル基は、適合性キ
レート剤の反応基と反応して免疫グロブリンの抗原結合
部位を緩衝しない共有結合を形成する。かかる反応性基
は反応性ハロアルキル基（例えばハロアセチル基であ
る）、ｐ−安息香酸第二水銀基、ミハエル(Michael)型
付加反応可能な基〔例えば、マレイミド類およびモトラ
およびロートン著1979年 ジャーナル オブ アメリカ
ン ケミカル ソサイアティ 第101巻、3097〜3110頁
(Mitra and Lawton、1979,J,Amer,Chem,Soc.101：3097-3
110)に記載のタイプの基である〕であるがこれらに限定
されることはない。「ハロアルキル」という言葉は、臭
素、ヨウ素または塩素で置換された１〜３の炭素原子の
すべてのアルキル基を示す。
フィド結合から生成し得る。上述のことは、抗体分子の
マイルドな還元により達成される。一般に最も還元され
やすいIgGのジスルフィド結合は、２個の重い(H)鎖をリ
ンクする結合である。抗体分子の抗原結合領域近傍に位
置するジスルフィド結合は、相対的に影響を受けずにそ
のまま残る。かかる還元は、結果的に補体固定能力を失
うこととなるが、抗体抗原結合能力を妨害することはな
い〔カラッシ等、1979，バイオケム．18：2226-2232(Ka
rush,et al.,1979,Biochem.18：2226-2232)〕。内部Ｈ
鎖領域内に生成した遊離スルフヒドリル基は、適合性キ
レート剤の反応基と反応して免疫グロブリンの抗原結合
部位を緩衝しない共有結合を形成する。かかる反応性基
は反応性ハロアルキル基（例えばハロアセチル基であ
る）、ｐ−安息香酸第二水銀基、ミハエル(Michael)型
付加反応可能な基〔例えば、マレイミド類およびモトラ
およびロートン著1979年 ジャーナル オブ アメリカ
ン ケミカル ソサイアティ 第101巻、3097〜3110頁
(Mitra and Lawton、1979,J,Amer,Chem,Soc.101：3097-3
110)に記載のタイプの基である〕であるがこれらに限定
されることはない。「ハロアルキル」という言葉は、臭
素、ヨウ素または塩素で置換された１〜３の炭素原子の
すべてのアルキル基を示す。
この中で一般的に記載された抗体および抗体フラグメン
トのマイルドな還元に適する詳細な条件、方法および物
質は、次の文献の中に見い出せる：スタンワース アン
ド ターナー、イン ハンドブック オブ イクスペリ
メンタル イムノロジー、ボル．１、セコンド エディ
ション、ヴィヤー（エディ）チャプター10、ブラックウ
ェル サイエンティフィック パブリケーションズ．ロ
ンドン・1973)Stanworth and Turner,IN Hanbook of Ex
perimetal Immunology,Vol.i,Second Edition,Weir(e
d.),Chapter 10,Blackwell Scientific Publications,L
ondon,1973)その章は参照として組み込まれている。
トのマイルドな還元に適する詳細な条件、方法および物
質は、次の文献の中に見い出せる：スタンワース アン
ド ターナー、イン ハンドブック オブ イクスペリ
メンタル イムノロジー、ボル．１、セコンド エディ
ション、ヴィヤー（エディ）チャプター10、ブラックウ
ェル サイエンティフィック パブリケーションズ．ロ
ンドン・1973)Stanworth and Turner,IN Hanbook of Ex
perimetal Immunology,Vol.i,Second Edition,Weir(e
d.),Chapter 10,Blackwell Scientific Publications,L
ondon,1973)その章は参照として組み込まれている。
適合性キレート剤を還元された免疫ブロクリンまたは還
元された抗体フラグメントの遊離スルフヒドリン基に付
着することにより産生される抗体キレート剤結合体（ま
たはキレート剤と抗体との反応前にキレート剤にプレキ
レート化金属イオンが付着させられる抗体−金属イオン
複合体）は、補体を活性化することはない。このよう
に、結合体の複合体は、金属イオンの放出が好ましくな
い生体内の結像システムにおいて有効に使用される。
元された抗体フラグメントの遊離スルフヒドリン基に付
着することにより産生される抗体キレート剤結合体（ま
たはキレート剤と抗体との反応前にキレート剤にプレキ
レート化金属イオンが付着させられる抗体−金属イオン
複合体）は、補体を活性化することはない。このよう
に、結合体の複合体は、金属イオンの放出が好ましくな
い生体内の結像システムにおいて有効に使用される。
5.4.複合体の調製 キレート剤金属イオン複合体は、金属イオンを直接キレ
ート剤に付着させる通常の方法は、キレート剤への結合
を完成するために使用される。例えば、１１１インジウ
ム（１１１In）は、酢酸ナトリウム中の１１１In-C13と
キレート剤を、例えば37℃で１時間インキュベートする
ことにより水溶性キレート剤化合物に付着させられる。
ート剤に付着させる通常の方法は、キレート剤への結合
を完成するために使用される。例えば、１１１インジウ
ム（１１１In）は、酢酸ナトリウム中の１１１In-C13と
キレート剤を、例えば37℃で１時間インキュベートする
ことにより水溶性キレート剤化合物に付着させられる。
前記の如く、本発明の金属イオンは、キレート剤が抗体
分子に付着させられる前または後のいずれかにキレート
剤に付着させられる。いかなる付着方法を使用したとし
ても、キレート剤化合物に特に付着しなかった金属イオ
ンを、複合体が特に生体内で使用される前に除去するこ
とが重要である。好適な実施例によれば、非特異付着金
属イオンは、高性能液体モノキュラーシーブクロマトグ
ラフィーシステムを使用して除去される。
分子に付着させられる前または後のいずれかにキレート
剤に付着させられる。いかなる付着方法を使用したとし
ても、キレート剤化合物に特に付着しなかった金属イオ
ンを、複合体が特に生体内で使用される前に除去するこ
とが重要である。好適な実施例によれば、非特異付着金
属イオンは、高性能液体モノキュラーシーブクロマトグ
ラフィーシステムを使用して除去される。
試験管内の検出システム、例えば改良された免疫ラジオ
メーター定量システムで抗体分子または抗体フラグメン
トが、この中に記載した方法により適合性キレート剤に
付着させられ、抗体キレート剤結合体中間体は生成さ
れ、必要により、-20℃で、凍結して必要になるまで貯
蔵される。その後金属イオンは、抗体キレート剤結合体
に付着させられる。例えば、１１１インジウムは、
１１１In-C13をアセテートバッファ中に抗体キレート剤
結合体とpH6.0、37℃で１時間保温することにより付着
させられる。そのような付着方法は、試料を放射性物質
の余分な取り扱いにさらすことなく、そして、作業領域
において長期間放射性同位元素を貯蔵することなく抗体
キレート剤中間体を有効に精製する。
メーター定量システムで抗体分子または抗体フラグメン
トが、この中に記載した方法により適合性キレート剤に
付着させられ、抗体キレート剤結合体中間体は生成さ
れ、必要により、-20℃で、凍結して必要になるまで貯
蔵される。その後金属イオンは、抗体キレート剤結合体
に付着させられる。例えば、１１１インジウムは、
１１１In-C13をアセテートバッファ中に抗体キレート剤
結合体とpH6.0、37℃で１時間保温することにより付着
させられる。そのような付着方法は、試料を放射性物質
の余分な取り扱いにさらすことなく、そして、作業領域
において長期間放射性同位元素を貯蔵することなく抗体
キレート剤中間体を有効に精製する。
5.5.抗体−金属イオン複合体の使用 本発明の抗体−金属イオン複合茶委は、多様な治療およ
び試験管内および生体内の診断の使用に有効である。
び試験管内および生体内の診断の使用に有効である。
本出願を通じて、「細胞疾患」とは全新生物を含むこと
を意味し、癌、アデノーマおよび増殖；ある免疫上の疾
患を含み、自己免疫疾患、移植片対宿主疾患（例えば、
骨髄移植後の）、例えば肝臓または骨髄移植後の免疫抑
制疾患を含む。例えば、骨髄移植を含む細胞疾患処理
は、例えば悪性細胞または成熟Ｔリンパ球である好まし
くない細胞を（殺すことによって）除去することを含
む。
を意味し、癌、アデノーマおよび増殖；ある免疫上の疾
患を含み、自己免疫疾患、移植片対宿主疾患（例えば、
骨髄移植後の）、例えば肝臓または骨髄移植後の免疫抑
制疾患を含む。例えば、骨髄移植を含む細胞疾患処理
は、例えば悪性細胞または成熟Ｔリンパ球である好まし
くない細胞を（殺すことによって）除去することを含
む。
5.5.1.生体内治療 一般に治療上の使用は、本の有効量の抗体−金属イオン
複合の投薬による、上記の多くの細胞疾患を含む多様な
細胞疾患処理に集中している。特異抗原に免疫特異性お
よび免疫反応性である抗体の特性は、金属イオンを特異
抗原を有する特異細胞、組織、器官または他の部位に運
搬するのに理想的に適している。
複合の投薬による、上記の多くの細胞疾患を含む多様な
細胞疾患処理に集中している。特異抗原に免疫特異性お
よび免疫反応性である抗体の特性は、金属イオンを特異
抗原を有する特異細胞、組織、器官または他の部位に運
搬するのに理想的に適している。
本発明のこの態様に従って、抗体−金属イオン複合体の
抗体または抗体フラグメントは、該複合体を標的部位に
運搬するように機能し、その部位で細胞キリング特性の
ために選ばれる金属イオンが付近の細胞を破壊すること
ができる。治療の使用に好適なベータ放出イオンは４６
スカンジウム，４７スカンジウム，４８スカンジウム，
７２ガリウムおよび７３ガリウムである。好適なアルフ
ァ放出金属イオンは、相対的に約４日またはそれ以下の
短い半減期を有するものであり、２１１ビスマス，
２１２ビスマス，２１３ビスマスおよび２１４ビスマス
であり、２１２ビスマスが好ましい。
抗体または抗体フラグメントは、該複合体を標的部位に
運搬するように機能し、その部位で細胞キリング特性の
ために選ばれる金属イオンが付近の細胞を破壊すること
ができる。治療の使用に好適なベータ放出イオンは４６
スカンジウム，４７スカンジウム，４８スカンジウム，
７２ガリウムおよび７３ガリウムである。好適なアルフ
ァ放出金属イオンは、相対的に約４日またはそれ以下の
短い半減期を有するものであり、２１１ビスマス，
２１２ビスマス，２１３ビスマスおよび２１４ビスマス
であり、２１２ビスマスが好ましい。
生体内投薬は、ヒト血清アルブミンの如き他のたんぱく
質を含みまたは含まずに、血清または生理食塩水を含
む、好適な担体中の抗体−金属イオン複合体の製薬組成
物を使用することを含む。複合体投薬量は、当業者によ
り簡単に決定され、そして支障細胞疾患および金属イオ
ンの性質に依存して異なるだろう。投薬ルートは非経口
であり、一般に静脈内投薬が好ましい。
質を含みまたは含まずに、血清または生理食塩水を含
む、好適な担体中の抗体−金属イオン複合体の製薬組成
物を使用することを含む。複合体投薬量は、当業者によ
り簡単に決定され、そして支障細胞疾患および金属イオ
ンの性質に依存して異なるだろう。投薬ルートは非経口
であり、一般に静脈内投薬が好ましい。
5.5.1.生体内診断 生体内診断上の使用は、本発明の抗体−金属イオン複合
体の十分な量を投薬し該複合体を適当な時間内に組織上
に位置させることにより特異組織または細胞疾患を結像
することを含む。生体内複合体の投薬量および他の態様
は、先の節で一般的に議論される。
体の十分な量を投薬し該複合体を適当な時間内に組織上
に位置させることにより特異組織または細胞疾患を結像
することを含む。生体内複合体の投薬量および他の態様
は、先の節で一般的に議論される。
生体内組織結像に適する多種類の金属イオンがテストさ
れ、臨床的に使用された。放射性同位元素で結像させる
ため次の特性が一般的に好ましくおよび／または必要と
認められる： 一般的にこのましくおよび／または必要と認められる： (a)患者に対し低放射線量；(b)核薬剤処理を短時間で行
なわせる高ホトン収量；(c)十分な量で産生される能
力：(d)許容される価格：(e)投薬用に簡単な製剤（調製
法）；および(f)患者のその後の隔離が不必要。これら
諸特定は一般に次のように形を変えて表わされる；(a)
最も臨界的な器官への放射線暴露は、5rad以下である；
(b)一つの結像は１時間で得られる；(c)放射線同位元素
は粒子放出（例えばβ−またはβ＋により崩壊しない；
(d)同位体は簡単に検出され得る；そして(e)半減期は４
日以下である〔ラム アンド クラマー，「コマーシャ
ル プロダクション オブ ラジオアイソトープ フォ
ー ヌクレアー メディシン」，イン ラジオトレーサ
ーズ フォー メデカル アプリケーションズ，ヴォル
１，ラユドゥ（エド）シーアールシープレス，インコー
ポレーテッド，ボカ ラトン，ピーピー17-62〔Lamb an
d Kramer,"Commercial Production of Radioisotopes f
or Nuclear Medicine",IN Radiotracers For Medical A
pplications,Vol.1,Rauyudu(ed.)CRC Press,Inc.,Boca
Raton,pp.17-62)〕。
れ、臨床的に使用された。放射性同位元素で結像させる
ため次の特性が一般的に好ましくおよび／または必要と
認められる： 一般的にこのましくおよび／または必要と認められる： (a)患者に対し低放射線量；(b)核薬剤処理を短時間で行
なわせる高ホトン収量；(c)十分な量で産生される能
力：(d)許容される価格：(e)投薬用に簡単な製剤（調製
法）；および(f)患者のその後の隔離が不必要。これら
諸特定は一般に次のように形を変えて表わされる；(a)
最も臨界的な器官への放射線暴露は、5rad以下である；
(b)一つの結像は１時間で得られる；(c)放射線同位元素
は粒子放出（例えばβ−またはβ＋により崩壊しない；
(d)同位体は簡単に検出され得る；そして(e)半減期は４
日以下である〔ラム アンド クラマー，「コマーシャ
ル プロダクション オブ ラジオアイソトープ フォ
ー ヌクレアー メディシン」，イン ラジオトレーサ
ーズ フォー メデカル アプリケーションズ，ヴォル
１，ラユドゥ（エド）シーアールシープレス，インコー
ポレーテッド，ボカ ラトン，ピーピー17-62〔Lamb an
d Kramer,"Commercial Production of Radioisotopes f
or Nuclear Medicine",IN Radiotracers For Medical A
pplications,Vol.1,Rauyudu(ed.)CRC Press,Inc.,Boca
Raton,pp.17-62)〕。
放射性同位元素で結像させる代りの方法は、ポジトロン
放出断層撮影法である。好適なポジトロン放出同位体
は、４３スカンジウム，４４スカンジウム，５２鉄，
５５コバルトおよび６８ガリウムである。
放出断層撮影法である。好適なポジトロン放出同位体
は、４３スカンジウム，４４スカンジウム，５２鉄，
５５コバルトおよび６８ガリウムである。
組織結像法は、核磁気共鳴スペクトロスコピーで検出で
きる５４鉄，５６鉄，５７鉄，５８鉄，１５７カドリニ
ウムおよび５５マンガンの如き非放射性常磁性金属イオ
ンをも使用する。
きる５４鉄，５６鉄，５７鉄，５８鉄，１５７カドリニ
ウムおよび５５マンガンの如き非放射性常磁性金属イオ
ンをも使用する。
結像させられる組織は、固形新生物；リンパ節、上皮小
体、脾臓および肝臓の如き器官：炎症または感染部位
（例えば、そのような部位の大食細胞）；心筋梗塞また
は血栓症（フィブリンまたは血小板上の新抗原性決定
子）等である。
体、脾臓および肝臓の如き器官：炎症または感染部位
（例えば、そのような部位の大食細胞）；心筋梗塞また
は血栓症（フィブリンまたは血小板上の新抗原性決定
子）等である。
5.5.3試験管内診断 本発明の抗体−金属イオン複合体を使用する特異抗原を
検出する試験管内分析方法は、標準免疫放射線検定技術
を使用する。かかる技術一般的な報告は、次の文献を参
照のこと：ホールス アンド ウッドヘッド，メソドス
イン エイザイモロジー70：334-355(1980)〔Hales and
Woodhead,Methods in Enzymology 70：334-355(198
0)〕。一般に免疫放射線検定法(IRA)は、未標識化抗原
検出用に標識抗体を含む。免疫放射線検定法の多くの変
形が開発され、例えば、２サイトIRAおよび間接IRAがあ
る。これら二方法は、次に一般的に議論される。
検出する試験管内分析方法は、標準免疫放射線検定技術
を使用する。かかる技術一般的な報告は、次の文献を参
照のこと：ホールス アンド ウッドヘッド，メソドス
イン エイザイモロジー70：334-355(1980)〔Hales and
Woodhead,Methods in Enzymology 70：334-355(198
0)〕。一般に免疫放射線検定法(IRA)は、未標識化抗原
検出用に標識抗体を含む。免疫放射線検定法の多くの変
形が開発され、例えば、２サイトIRAおよび間接IRAがあ
る。これら二方法は、次に一般的に議論される。
２サイトIRAの目的は、固相、例えばセルロースまたは
セファロース上の特異抗体を使用して抗原を取り出すこ
とである。抗体が固相に結合してとどまると、第２標識
抗体は抗原の他部位に結合する。第２抗原は、その後結
合した標識抗体量の関数として測定し得る。この方法で
は抗原は、抗原の二部位で２つの異なる抗体と結合させ
られている。他の方法では、精製された抗原は、固相担
体に吸着またはカップルされている。
セファロース上の特異抗体を使用して抗原を取り出すこ
とである。抗体が固相に結合してとどまると、第２標識
抗体は抗原の他部位に結合する。第２抗原は、その後結
合した標識抗体量の関数として測定し得る。この方法で
は抗原は、抗原の二部位で２つの異なる抗体と結合させ
られている。他の方法では、精製された抗原は、固相担
体に吸着またはカップルされている。
間接IRAでは抗原測定用に使用された（第１）抗体は、
第１抗体が高められたと同一種の免疫グロブリンに標識
抗体を使用することにより間接的に標識化される。この
標識アンチ−免疫グロブリン抗体は、その後第１抗体お
よび抗原と反応する。標識抗体は、通常または２サイト
IRAでも使用され得る。
第１抗体が高められたと同一種の免疫グロブリンに標識
抗体を使用することにより間接的に標識化される。この
標識アンチ−免疫グロブリン抗体は、その後第１抗体お
よび抗原と反応する。標識抗体は、通常または２サイト
IRAでも使用され得る。
これら診断技術およびその他のものは、本発明により包
含されるであろう。
含されるであろう。
本発明に関連して抗原試験用のこれらIRA方法の全て
は、一般に次の二つの段階を有する：(a)抗体−金属イ
オン複合体と抗原を含有すると思われたサンプルを混合
すること、および(b)抗原が存在すれば該複合体と抗原
の相互作用を検出すること。
は、一般に次の二つの段階を有する：(a)抗体−金属イ
オン複合体と抗原を含有すると思われたサンプルを混合
すること、および(b)抗原が存在すれば該複合体と抗原
の相互作用を検出すること。
試験管内診断において、5.5.2節の常磁性金属イオンと
同様に、１５３ガドリニウムと同様にガンマおよびポジ
トロン放出金属イオンの全てが好ましい。ケイ光診断検
定法には、ランタニドが使用され、プラセオジウム，ネ
オジム，サマリウム，ユーロピウム，カドリニウム，テ
ルビュウム，ジスプロシウム，ホルミウム，エルピウ
ム，ツリウムおよびイッテルビウムがある。
同様に、１５３ガドリニウムと同様にガンマおよびポジ
トロン放出金属イオンの全てが好ましい。ケイ光診断検
定法には、ランタニドが使用され、プラセオジウム，ネ
オジム，サマリウム，ユーロピウム，カドリニウム，テ
ルビュウム，ジスプロシウム，ホルミウム，エルピウ
ム，ツリウムおよびイッテルビウムがある。
６．実施例：炭水化物付着による抗体−金属イオン複合
体の調製 次の実験例は、本発明に従って生体内結像システム、生
体内治療および試験管内検出システムに有効な特異放射
性標識抗体−金属イオン複合茶委の形成を示す。
体の調製 次の実験例は、本発明に従って生体内結像システム、生
体内治療および試験管内検出システムに有効な特異放射
性標識抗体−金属イオン複合茶委の形成を示す。
6.1.適合性キレート剤の調製 上記の如く、適合性キレート剤は、放射性同位元素のよ
うな金属イオンを担体または抗体フラグメントに付着す
るために使用される。次の実施例は、好適な適合性キレ
ート剤の調製法を示す。
うな金属イオンを担体または抗体フラグメントに付着す
るために使用される。次の実施例は、好適な適合性キレ
ート剤の調製法を示す。
次の実施例の全てにおいて、溶媒としてまたは溶媒系を
形成するために使用された水およびバッファーは、最初
にキレックス(Chelex：登録商標）レジン含有カラム
〔バイオラッド ラボラトリーズ，インコーポレーテッ
ド，リッチモンド，シーエイ(BioRad Laboratories,In
c,Richmond,CA)〕を通過させ、酸洗した容器中で貯蔵し
た。
形成するために使用された水およびバッファーは、最初
にキレックス(Chelex：登録商標）レジン含有カラム
〔バイオラッド ラボラトリーズ，インコーポレーテッ
ド，リッチモンド，シーエイ(BioRad Laboratories,In
c,Richmond,CA)〕を通過させ、酸洗した容器中で貯蔵し
た。
6.1.1.ジエチレントリアミンペンタ酢酸無水物 ジエチレントリアミンペンタ酢酸混合無水物（DTPA混合
無水物）を、クレージュカーレック アンド チュッカ
ーにより1977、バイオケム・バイオフィス・レスコミュ
ン・77：581-585〔Krejcarek and Tucker,1977,Bioche
m,Biophys,Res,Commun,77：581-585〕に記載された方法
により調製した。手短かに言えば、2.54ミリモルのDTPA
と12,7ミリモルのロリエチルアミンを20mlの水に溶解
し、その溶液を真空下で乾燥し、DTPA塩を生産した。そ
の塩を、アセトニトリル−ジメチルホルムアミド(CH3CH
-DMF)の65：35の割合から成る20mlの溶媒システムに溶
解し、氷−岩塩浴で-5℃で冷却した。2.54ミリモルのイ
ソブチルクロロホルメートを加えた後、その溶液を窒素
雰囲気下で20分間攪拌した。溶液中に残ったDTPA混合無
水物生成品を、濾過または遠心分離および上澄液のデカ
ンテーションのいずれかの方法により沈降したトリエチ
ルアミン塩酸塩から分離した。
無水物）を、クレージュカーレック アンド チュッカ
ーにより1977、バイオケム・バイオフィス・レスコミュ
ン・77：581-585〔Krejcarek and Tucker,1977,Bioche
m,Biophys,Res,Commun,77：581-585〕に記載された方法
により調製した。手短かに言えば、2.54ミリモルのDTPA
と12,7ミリモルのロリエチルアミンを20mlの水に溶解
し、その溶液を真空下で乾燥し、DTPA塩を生産した。そ
の塩を、アセトニトリル−ジメチルホルムアミド(CH3CH
-DMF)の65：35の割合から成る20mlの溶媒システムに溶
解し、氷−岩塩浴で-5℃で冷却した。2.54ミリモルのイ
ソブチルクロロホルメートを加えた後、その溶液を窒素
雰囲気下で20分間攪拌した。溶液中に残ったDTPA混合無
水物生成品を、濾過または遠心分離および上澄液のデカ
ンテーションのいずれかの方法により沈降したトリエチ
ルアミン塩酸塩から分離した。
6.1.2.ｐ−アミノアニリン−ジエチレントリアミンペン
タ酢酸 ｐ−アミノアニリン−ジエチレントリアミンペンタ酢酸
無水物(ADTPA)を次のように調製した。手短にいえば、C
H3CN-DMF(65：35)を含む50mlの溶媒システム中の25.4ミ
リモルのｐ−フェニレンジアミンを6.1.1節に記載され
たように調製された2.0ｇの新しいDTPA混合無水物に加
えた。その溶液を-5℃で２時間窒素雰囲気下で攪拌し、
一夜室温（約24℃）で保持した。この期間の終了時に、
初期に均質な溶液が不均質混合となった。この不均質反
応混合を真空上で蒸発して乾燥し、生ずる残留物を小ア
リコート50mlの蒸溜水に溶解した。反応混合物のpHをNa
OH溶液(6M)を使用して11.0に調節した。未反応ｐ−フェ
ニレンジアミンをメチレンクロライドで抽出除去した。
水溶液相を集め、真空下で濃縮し、凍結乾燥し粗製ADTP
Aの青白い（白い）粉末を得た。粗製ADTPAを、エタノー
ルーアンモニア水（４：１）次に蒸留水を用いて充填シ
リカゲルカラムから溶離させ、精製した。
タ酢酸 ｐ−アミノアニリン−ジエチレントリアミンペンタ酢酸
無水物(ADTPA)を次のように調製した。手短にいえば、C
H3CN-DMF(65：35)を含む50mlの溶媒システム中の25.4ミ
リモルのｐ−フェニレンジアミンを6.1.1節に記載され
たように調製された2.0ｇの新しいDTPA混合無水物に加
えた。その溶液を-5℃で２時間窒素雰囲気下で攪拌し、
一夜室温（約24℃）で保持した。この期間の終了時に、
初期に均質な溶液が不均質混合となった。この不均質反
応混合を真空上で蒸発して乾燥し、生ずる残留物を小ア
リコート50mlの蒸溜水に溶解した。反応混合物のpHをNa
OH溶液(6M)を使用して11.0に調節した。未反応ｐ−フェ
ニレンジアミンをメチレンクロライドで抽出除去した。
水溶液相を集め、真空下で濃縮し、凍結乾燥し粗製ADTP
Aの青白い（白い）粉末を得た。粗製ADTPAを、エタノー
ルーアンモニア水（４：１）次に蒸留水を用いて充填シ
リカゲルカラムから溶離させ、精製した。
6.1.3.α−Ｎ−ジエチレントリアミンペンタ酢酸Ｌ−リ
ジン α−Ｎ−ジエチレントリアミンペンタ酢酸Ｌ−リジン(K
DTPA)を次のように調製した。2.26ｍモルのＮ−カルボ
ベンゾキシ−Ｌ−リジンベンジルエステル〔ベガ バイ
オケミカルズ，テュクソン，エイゼット(Vaga Biochemi
cals,Tucson,AZ)〕を40mlのアセトニトリル中の2.71ｍ
モルのトリエチルアミンと、窒素雰囲気下室温で30分間
攪拌して反応させた。20mlのCH3CN-DMF(65：35)内に新
しく調製された2.26ｍモルのDTPA混合無水物を加えた。
反応混合物を窒素雰囲気下０℃で２時間攪拌しながら保
持し、その後室温で一夜保持した。その溶液を真空下で
蒸発して乾燥し、生成する残留物を50mlの蒸溜水に溶解
した。未反応リジンエステルをNaOH溶液でpHを11.0に調
節し、メチレンクロライドで抽出除去した。その水溶液
を真空下で濃縮し、pHを小アレイコートのHClで中性に
調節した。カルボベンゾキシ保護基を、パール水素化装
置(Parr Hydrogenator)中で４時間30 1b-inch2水素下で
パラジウム／活性炭（５％パラジウム）を使用して除去
した。得られる混合物をセライト(Celite)により濾過
し、濾液を凍結乾燥して粗製KDTPAの白い粉末を得た。
この粗製生成品を、エタノール−アンモニア水（４：
１）次に蒸留水を用いてシリカゲルカラムから浴離する
ことにより精製してしてKDTPAを得た。
ジン α−Ｎ−ジエチレントリアミンペンタ酢酸Ｌ−リジン(K
DTPA)を次のように調製した。2.26ｍモルのＮ−カルボ
ベンゾキシ−Ｌ−リジンベンジルエステル〔ベガ バイ
オケミカルズ，テュクソン，エイゼット(Vaga Biochemi
cals,Tucson,AZ)〕を40mlのアセトニトリル中の2.71ｍ
モルのトリエチルアミンと、窒素雰囲気下室温で30分間
攪拌して反応させた。20mlのCH3CN-DMF(65：35)内に新
しく調製された2.26ｍモルのDTPA混合無水物を加えた。
反応混合物を窒素雰囲気下０℃で２時間攪拌しながら保
持し、その後室温で一夜保持した。その溶液を真空下で
蒸発して乾燥し、生成する残留物を50mlの蒸溜水に溶解
した。未反応リジンエステルをNaOH溶液でpHを11.0に調
節し、メチレンクロライドで抽出除去した。その水溶液
を真空下で濃縮し、pHを小アレイコートのHClで中性に
調節した。カルボベンゾキシ保護基を、パール水素化装
置(Parr Hydrogenator)中で４時間30 1b-inch2水素下で
パラジウム／活性炭（５％パラジウム）を使用して除去
した。得られる混合物をセライト(Celite)により濾過
し、濾液を凍結乾燥して粗製KDTPAの白い粉末を得た。
この粗製生成品を、エタノール−アンモニア水（４：
１）次に蒸留水を用いてシリカゲルカラムから浴離する
ことにより精製してしてKDTPAを得た。
6.1.4.ヒドラジド−ジエチレントリアミンペンタ酢酸 DTPAのヒドラジド誘導体(HDTPA)を次のように調製し
た。6.3ミリモルの無水ヒドラジンを２mlのジメチルホ
ルムアミド(DMF)に溶解し、20mlのCH3CN-DMF(65：35)の
2,54ミリモルDTPA混合無水物と反応させた。不均一混合
物を４℃で１時間攪拌しながら保持し、その後室温で１
時間保持した。反応混合物を真空下で蒸発して乾燥し、
残留物をエタノールーアンモニア水（４：１）に溶解し
た。その生成品を、エタノールーアンモニア水、次に蒸
留水を用いてシリカゲルから溶離し、精製した。生成物
含有分画を集め、pHを小アリコートのHClを使用して3.0
に調節した。溶液を濾過し、濾液を凍結乾燥してHDTPA
を得た。
た。6.3ミリモルの無水ヒドラジンを２mlのジメチルホ
ルムアミド(DMF)に溶解し、20mlのCH3CN-DMF(65：35)の
2,54ミリモルDTPA混合無水物と反応させた。不均一混合
物を４℃で１時間攪拌しながら保持し、その後室温で１
時間保持した。反応混合物を真空下で蒸発して乾燥し、
残留物をエタノールーアンモニア水（４：１）に溶解し
た。その生成品を、エタノールーアンモニア水、次に蒸
留水を用いてシリカゲルから溶離し、精製した。生成物
含有分画を集め、pHを小アリコートのHClを使用して3.0
に調節した。溶液を濾過し、濾液を凍結乾燥してHDTPA
を得た。
6.1.5.グリシル−チロシル−リジン−ジエチレントリア
ミンペンタ酢酸 グリシル−チロシル−リジン−ジエチレントリアミンペ
ンタ酢酸無水物(GYK-DTPA)を次のように調製した。バラ
ンス アンド メリフィールド，イン ザ ペプチド
ス，第２巻，クロス アンド メィーンホッファー（編
集）アカデ ミック プレス，ニューヨーク，3-385頁
〔Baranz and Merrifield,IN The Peptides,Vol.2,Gros
s and Meienhoffer(ed.),Acad.Press,New York,pp-3-38
5〕に記載された標準固相合成法に従って初期ペプチド
反応物N-FMOC−グリシル−（０−ベンジル−チロシル−
（ε−Ｎ−カルボベンゾキシ））リジンを調製した。誘
導されたペプチドを樹脂から切り離し、メトキシベンゼ
ン（チロシンに対し50倍モル過剰）含有トリフルオロ酢
酸中の反応混合物懸濁液中にHBrガスを、室温で60分間
バブリングすることにより部分的に脱ブロックした。樹
脂を濾過して除去し、濾液を蒸発して乾燥した。残留物
を最少量のメタノールに溶解し、生成品をエーテルで沈
澱し、さらに精製することなく使用した。
ミンペンタ酢酸 グリシル−チロシル−リジン−ジエチレントリアミンペ
ンタ酢酸無水物(GYK-DTPA)を次のように調製した。バラ
ンス アンド メリフィールド，イン ザ ペプチド
ス，第２巻，クロス アンド メィーンホッファー（編
集）アカデ ミック プレス，ニューヨーク，3-385頁
〔Baranz and Merrifield,IN The Peptides,Vol.2,Gros
s and Meienhoffer(ed.),Acad.Press,New York,pp-3-38
5〕に記載された標準固相合成法に従って初期ペプチド
反応物N-FMOC−グリシル−（０−ベンジル−チロシル−
（ε−Ｎ−カルボベンゾキシ））リジンを調製した。誘
導されたペプチドを樹脂から切り離し、メトキシベンゼ
ン（チロシンに対し50倍モル過剰）含有トリフルオロ酢
酸中の反応混合物懸濁液中にHBrガスを、室温で60分間
バブリングすることにより部分的に脱ブロックした。樹
脂を濾過して除去し、濾液を蒸発して乾燥した。残留物
を最少量のメタノールに溶解し、生成品をエーテルで沈
澱し、さらに精製することなく使用した。
DMF中の１モルN-FMOC-グリシル−チロシルーリジンを、
ジイソプロピルエチルアミンをトリエチルアミンの代り
に使用した以外は6.1.1節の記載の如く調製した１モルD
TPA混合無水物と-15℃で30分間反応させ、室温で１時間
保持した。溶媒をロータリーエバポレータで除去し、オ
イル状残留物を小アリコートのDMFに溶解させた。蒸溜
水を加えて生成したFMOC-GYK-DTPAを沈降させた。等容
量の40％ジメチルアミンをDMF中のFMOC-GYK-DTPA溶液中
に加え、次に室温で30分間保温することによりFMOC基を
除去した。溶媒を蒸発した乾燥し、残留物を蒸溜水中に
取った。粗製生成品をエチルアセテートで抽出精製し、
得られるGYK-DTPA水溶液を凍結乾固した。
ジイソプロピルエチルアミンをトリエチルアミンの代り
に使用した以外は6.1.1節の記載の如く調製した１モルD
TPA混合無水物と-15℃で30分間反応させ、室温で１時間
保持した。溶媒をロータリーエバポレータで除去し、オ
イル状残留物を小アリコートのDMFに溶解させた。蒸溜
水を加えて生成したFMOC-GYK-DTPAを沈降させた。等容
量の40％ジメチルアミンをDMF中のFMOC-GYK-DTPA溶液中
に加え、次に室温で30分間保温することによりFMOC基を
除去した。溶媒を蒸発した乾燥し、残留物を蒸溜水中に
取った。粗製生成品をエチルアセテートで抽出精製し、
得られるGYK-DTPA水溶液を凍結乾固した。
6.1.6.ポリエチレンイミン−ジエチレントリアミンペン
タ酢酸 ポリエチレンイミン−ジエチレントリアミンペンタ酢酸
(PEI-DTPA)を次のように調製した。2.54ミリモルのDTPA
を100mlのＨ２Ｏに溶解し、6M NaOH溶液を使用してpHを
5.0に調整した。その後12.7ミリモルの１−エチル−３
−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド〔シ
グマ ケミカル社，セント．ルイス、エムオ−(Sigma C
hemical Co.,St.Louis,Mo)〕および144μモルのポリエ
チレンイミン〔ポリサイエンシス，インコ，ワリングト
ン，ピーエー(Polyscienes,Inc.Warrington,PA)〕を加
えた。HCl水溶液を使用してpHを5.0に調節し、その溶液
を室温で一夜攪拌しながら保持した。逆相クロマトグラ
フィーまたはゲル濾過のいずれの方法により反応混合物
から生成したPEI-DTPAを除去した。
タ酢酸 ポリエチレンイミン−ジエチレントリアミンペンタ酢酸
(PEI-DTPA)を次のように調製した。2.54ミリモルのDTPA
を100mlのＨ２Ｏに溶解し、6M NaOH溶液を使用してpHを
5.0に調整した。その後12.7ミリモルの１−エチル−３
−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド〔シ
グマ ケミカル社，セント．ルイス、エムオ−(Sigma C
hemical Co.,St.Louis,Mo)〕および144μモルのポリエ
チレンイミン〔ポリサイエンシス，インコ，ワリングト
ン，ピーエー(Polyscienes,Inc.Warrington,PA)〕を加
えた。HCl水溶液を使用してpHを5.0に調節し、その溶液
を室温で一夜攪拌しながら保持した。逆相クロマトグラ
フィーまたはゲル濾過のいずれの方法により反応混合物
から生成したPEI-DTPAを除去した。
6.1.7.ジエチレントリアミンペンタ酢酸モノ〔（４−ア
ミノフェニル）メチル〕アミド ｐ−ニトロベンジルアミンHCl（174mg,0.92ミリモル）
を３mlの0.3N NaOH処理して黄色オイルを形成し、その
オイルをCH2Cl2で除去した。有機相を分離し、真空内で
乾燥しｐ−ニトロベンジルアミン遊離塩基を得た。
ミノフェニル）メチル〕アミド ｐ−ニトロベンジルアミンHCl（174mg,0.92ミリモル）
を３mlの0.3N NaOH処理して黄色オイルを形成し、その
オイルをCH2Cl2で除去した。有機相を分離し、真空内で
乾燥しｐ−ニトロベンジルアミン遊離塩基を得た。
DTPA無水物(CDTPA)をフナトヴィッチ等(Hnatowich,et a
l)の方法により合成した〔1982，イント，ジエ，アプ
ル，ラジアット．イソト．33：327-332(1982,Int.J.App
l.Radiat.Isot.33：327-332)〕。
l)の方法により合成した〔1982，イント，ジエ，アプ
ル，ラジアット．イソト．33：327-332(1982,Int.J.App
l.Radiat.Isot.33：327-332)〕。
CDTPA溶液（150mlの乾燥ジメチルホルムアミド(DMF)中
に4.6ミリモル，1.64ｇ）をｐ−ニトロベンジルアミン
に加え、窒素ガス雰囲気下で60℃に加温した。24時間攪
拌後、薄膜クロマトグラフィーでは溶液中に未反応ｐ−
ニトロベンジルアミンがないことが判った。その溶液を
真空中で乾燥し、飽和NaHCO3溶液で加水分解した。Ｃ
１８逆相高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)を使用
し、反応混合物からｐ−ニトロベンジルアミン−DTPA付
加物を分離した。その後、パール水素化装置を使用して
５％パラジウム／活性炭の存在下、30 lb/in2の水素ガ
スのもとで４時間還元した。溶液をロータリーエバポレ
ータで乾燥し、オイルをアセトン−エーテル（４：１）
ですりつぶして、淡く黄色の生成物を得た。
に4.6ミリモル，1.64ｇ）をｐ−ニトロベンジルアミン
に加え、窒素ガス雰囲気下で60℃に加温した。24時間攪
拌後、薄膜クロマトグラフィーでは溶液中に未反応ｐ−
ニトロベンジルアミンがないことが判った。その溶液を
真空中で乾燥し、飽和NaHCO3溶液で加水分解した。Ｃ
１８逆相高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)を使用
し、反応混合物からｐ−ニトロベンジルアミン−DTPA付
加物を分離した。その後、パール水素化装置を使用して
５％パラジウム／活性炭の存在下、30 lb/in2の水素ガ
スのもとで４時間還元した。溶液をロータリーエバポレ
ータで乾燥し、オイルをアセトン−エーテル（４：１）
ですりつぶして、淡く黄色の生成物を得た。
6.1.8.Ｌ−リジンベンジルエステル−ジエチレントリア
ミンベンタ酢酸 Ｎ−ε−Ｚ−Ｌ−ペンタ酢酸リジンベンジルエステルHC
l（0.5ｇ、1.12ミリモル、ベガ ケミカル社，チュクソ
ン，エイゼット(Vaga Chemical Co.,Tucsom,Az))を５％
NaHCO3および0.1N NaOH溶液でpH9.0に調節した。水溶液
をCH2Cl2で抽出し、そして有機相を分離した。その有機
相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を真空内で
蒸発して乾燥し、Ｎ−ε−Ｚ−Ｌ−リジンベンシルエス
テル遊離塩基を形成した。
ミンベンタ酢酸 Ｎ−ε−Ｚ−Ｌ−ペンタ酢酸リジンベンジルエステルHC
l（0.5ｇ、1.12ミリモル、ベガ ケミカル社，チュクソ
ン，エイゼット(Vaga Chemical Co.,Tucsom,Az))を５％
NaHCO3および0.1N NaOH溶液でpH9.0に調節した。水溶液
をCH2Cl2で抽出し、そして有機相を分離した。その有機
相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を真空内で
蒸発して乾燥し、Ｎ−ε−Ｚ−Ｌ−リジンベンシルエス
テル遊離塩基を形成した。
フナトヴィッチ等の方法〔Hnatowich,et al.(1982,Int.
J.Appl.Radiat.Isot.33：327-332)〕によるDTPA無水物
(CDTPA)を合成した。
J.Appl.Radiat.Isot.33：327-332)〕によるDTPA無水物
(CDTPA)を合成した。
200mlの乾燥ジメシルホルムアミド中の2.19ｇ（6.15ミ
リモル）のCDTPA溶液中に、上で調整したをＮ−ε−Ｚ
−Ｌ−リジンベンジルエステル遊離塩基を加え、窒素ガ
ス雰囲気下で24時間かけて60℃に加温した。全リジンエ
ステルを薄層クロマトグラフィー分析からのCDTPAと反
応させた。反応混合物を真空内で乾燥し、未反応無水物
を飽和NaHCO3溶液で加水分解した。Ｎ−ε−Ｚ−Ｌ−リ
ジンベンシルエステル−DTPA付加物をC18逆相HPLCを使
用して混合物から単離した。パール水素化装置中、５％
パラジウム／活性炭の存在滋賀で30 lb/in2水素ガス中
で５時間CBZ保護基を水添分解により除去した。溶液を
乾燥し、オイル残留物をアセトン−エーテル（４：１）
溶媒混合物ですりつぶして固体生成物を得た。
リモル）のCDTPA溶液中に、上で調整したをＮ−ε−Ｚ
−Ｌ−リジンベンジルエステル遊離塩基を加え、窒素ガ
ス雰囲気下で24時間かけて60℃に加温した。全リジンエ
ステルを薄層クロマトグラフィー分析からのCDTPAと反
応させた。反応混合物を真空内で乾燥し、未反応無水物
を飽和NaHCO3溶液で加水分解した。Ｎ−ε−Ｚ−Ｌ−リ
ジンベンシルエステル−DTPA付加物をC18逆相HPLCを使
用して混合物から単離した。パール水素化装置中、５％
パラジウム／活性炭の存在滋賀で30 lb/in2水素ガス中
で５時間CBZ保護基を水添分解により除去した。溶液を
乾燥し、オイル残留物をアセトン−エーテル（４：１）
溶媒混合物ですりつぶして固体生成物を得た。
6.2.キレート剤の抗体および金属イオンへの付着 実験動物に注入するため次の実験で使用されが特異モノ
クローナル抗体は、ブラウン・ノールウェイ(Brown Nor
way,BN)ラットのクラスＩ主要組織適合性複合体(MHC)抗
原に特異なラットIgG抗体であった。
クローナル抗体は、ブラウン・ノールウェイ(Brown Nor
way,BN)ラットのクラスＩ主要組織適合性複合体(MHC)抗
原に特異なラットIgG抗体であった。
CYT-015と称されるこの抗体は、マッキールン等(McKear
n,etal.)〔1979，イムノル，レブ．47：91-115(1979,Im
munol.Rev.47：91-115)〕により報告された方法により
骨髄腫細胞ラインSP 2/0 AG14とBNラット由来細胞の注
入によりあらかじめ免疫されたLewisラットからの脾臓
細胞との融合により調製された。クローン化後、CYT-01
5含有腹水は、プリスタン−プライムド(pristane-prime
d)ヌードマウスへの細胞の腹腔内注入により得た。IgG
モノクローナル抗体をプロテイン−Ａ−セファロースカ
ラム〔ファ−マシア ファイン ケミカルズ，ピスキャ
タウエイ，エヌジョイ(Pharmacia Fine Chemicals,Pisc
ataway,NJ)〕で特異溶出することによりこの腹水から精
製した。
n,etal.)〔1979，イムノル，レブ．47：91-115(1979,Im
munol.Rev.47：91-115)〕により報告された方法により
骨髄腫細胞ラインSP 2/0 AG14とBNラット由来細胞の注
入によりあらかじめ免疫されたLewisラットからの脾臓
細胞との融合により調製された。クローン化後、CYT-01
5含有腹水は、プリスタン−プライムド(pristane-prime
d)ヌードマウスへの細胞の腹腔内注入により得た。IgG
モノクローナル抗体をプロテイン−Ａ−セファロースカ
ラム〔ファ−マシア ファイン ケミカルズ，ピスキャ
タウエイ，エヌジョイ(Pharmacia Fine Chemicals,Pisc
ataway,NJ)〕で特異溶出することによりこの腹水から精
製した。
ヒト・クラスＩ主要組織適合性複合体の単形性決定基に
特異なマウスモノクローナルIgG抗体は、対照動物に注
入される結合体用の担体抗体として使用された。この抗
体をCYT-012と称する。
特異なマウスモノクローナルIgG抗体は、対照動物に注
入される結合体用の担体抗体として使用された。この抗
体をCYT-012と称する。
6.2.1.抗体キレート剤結合体の形成 最初の抗体−キレート剤結合体成形による本発明の一方
法によって放射性標識抗体−金属イオン複合体を調製し
た。リン酸塩緩衝食塩水中の約1mg/mlの糖たんぱく質と
10mMの過ヨウ素酸ナトリウム(Na104)(pH6.0)とを暗所、
氷上で１時間反応させることにより抗体(CYT-012または
CYT-015)の炭水化物部分を酸化した。そのサンプルをそ
の後セファデックス(Sephadex：登録商標）G-25カラム
〔ファーマシア ファイン ケミカルズ，ピスキャタウ
エイ，エヌジョイ(Pharmacia Fine Chemicals,Pistcata
way,NJ)〕を通過させ、たんぱく質分画を貯蔵した。酸
化された抗体を適合性キレート剤に付着させ、直ちに使
用し、または-20℃で凍結貯蔵した。
法によって放射性標識抗体−金属イオン複合体を調製し
た。リン酸塩緩衝食塩水中の約1mg/mlの糖たんぱく質と
10mMの過ヨウ素酸ナトリウム(Na104)(pH6.0)とを暗所、
氷上で１時間反応させることにより抗体(CYT-012または
CYT-015)の炭水化物部分を酸化した。そのサンプルをそ
の後セファデックス(Sephadex：登録商標）G-25カラム
〔ファーマシア ファイン ケミカルズ，ピスキャタウ
エイ，エヌジョイ(Pharmacia Fine Chemicals,Pistcata
way,NJ)〕を通過させ、たんぱく質分画を貯蔵した。酸
化された抗体を適合性キレート剤に付着させ、直ちに使
用し、または-20℃で凍結貯蔵した。
例えば、200倍モル過剰のグリシル−チロシル−リジン
−エチレントリアミンペンタ酢酸(GYK-DTPA)と抗体アリ
コートをPBS(pH6.0)中で室温で30分間インキュベート
（保温）することによりGYK-DTPAを酸化抗体とカップル
させた。製品安定化のために、ナトリウムシアノボロハ
イドライト(NaCNBH3）を最終濃度10mMになるように加
え、反応混合物を室温で２時間から一夜の間保持した。
そのサンプルをセファデックスG-50カラム〔ファーマシ
ア ファイン ケミカルズ，プィスキャタウエイ，エヌ
ジョイ(Pharmacia Fine Chemicals,Pistcataway,NJ)〕
を通過させ、たんぱく質分画を集めた。
−エチレントリアミンペンタ酢酸(GYK-DTPA)と抗体アリ
コートをPBS(pH6.0)中で室温で30分間インキュベート
（保温）することによりGYK-DTPAを酸化抗体とカップル
させた。製品安定化のために、ナトリウムシアノボロハ
イドライト(NaCNBH3）を最終濃度10mMになるように加
え、反応混合物を室温で２時間から一夜の間保持した。
そのサンプルをセファデックスG-50カラム〔ファーマシ
ア ファイン ケミカルズ，プィスキャタウエイ，エヌ
ジョイ(Pharmacia Fine Chemicals,Pistcataway,NJ)〕
を通過させ、たんぱく質分画を集めた。
他の実施態様において、2000倍モル過剰のADTPAまたはP
EI-DTPAを使用した以外は同一方法により酸化された抗
体を、ｐ−アミノアニリン−ジエチレントリアミンペン
タ酢酸(ADTPA)またはポリエチレンイミン−ジエチレン
トリアミンペンタ酢酸(PEI-ADTPA)にカップルした。
EI-DTPAを使用した以外は同一方法により酸化された抗
体を、ｐ−アミノアニリン−ジエチレントリアミンペン
タ酢酸(ADTPA)またはポリエチレンイミン−ジエチレン
トリアミンペンタ酢酸(PEI-ADTPA)にカップルした。
6.2.2.抗体−金属イオン複合体の形成 結像システムに有効な放射性抗体−金属イオン複合体を
形成するために放射性金属イオンを抗体キレート剤結合
体に付着させた。
形成するために放射性金属イオンを抗体キレート剤結合
体に付着させた。
例えば、１〜2mCiを示す20μｌのストック１１１インジ
ウムクロライド(111In-Cl3)〔ニュー イングランド
ヌクレアー，ボストン，エムエイ(New England Nuclea
r,Boston,MA)〕を20μｌの0.5酢酸ナトリウム(pH6.0)に
加え、上記の如く調製した抗体キレート剤結合体（50〜
200μｇ）と37℃で１時間保温した。サンプルをセファ
デックスG-50カラム〔ファーマシア ファイン ケミカ
ルズ，プィスキャタウエイ，エヌジョイ(Pharmacia Fin
e Chemicals,Pistcataway,NJ)〕を通して溶出させ、た
んぱく質をウォーターズ プロテイン パック(Waters
Protein Pak)300SW高性能液体クロマトグラフィー(HPL
C)カラム〔ウォーターズ アソシエイトス，ミルフォー
ド，エムエイ(Waters Associates,Milford,MA)〕に再び
かけ、分画を集めた。分子量中のIgGの溶出ボリューム
に対応する分画が抗体−金属イオン複合体である。
ウムクロライド(111In-Cl3)〔ニュー イングランド
ヌクレアー，ボストン，エムエイ(New England Nuclea
r,Boston,MA)〕を20μｌの0.5酢酸ナトリウム(pH6.0)に
加え、上記の如く調製した抗体キレート剤結合体（50〜
200μｇ）と37℃で１時間保温した。サンプルをセファ
デックスG-50カラム〔ファーマシア ファイン ケミカ
ルズ，プィスキャタウエイ，エヌジョイ(Pharmacia Fin
e Chemicals,Pistcataway,NJ)〕を通して溶出させ、た
んぱく質をウォーターズ プロテイン パック(Waters
Protein Pak)300SW高性能液体クロマトグラフィー(HPL
C)カラム〔ウォーターズ アソシエイトス，ミルフォー
ド，エムエイ(Waters Associates,Milford,MA)〕に再び
かけ、分画を集めた。分子量中のIgGの溶出ボリューム
に対応する分画が抗体−金属イオン複合体である。
例えば、第１図は１１１インジウム−標識抗ブラウン・
ノールウェイ主要組織適合性複合体抗体−金属イオン複
合体、111In-CYT-015-ADTPAの精製および単離の間に得
られたHPLCクロマトグラムを示す。第１図に示されるよ
うに、ピーク放射能を含むフラクションの光学密度は、
単量体の未結合IgGと抗体−金属イオン複合体との類似
性を表わす。
ノールウェイ主要組織適合性複合体抗体−金属イオン複
合体、111In-CYT-015-ADTPAの精製および単離の間に得
られたHPLCクロマトグラムを示す。第１図に示されるよ
うに、ピーク放射能を含むフラクションの光学密度は、
単量体の未結合IgGと抗体−金属イオン複合体との類似
性を表わす。
実施例：炭水化物またはスルフヒドリル付着による抗体
−金属イオン複合体の調製 次の実施例は、本発明によれが生体内結像システム、生
体内治療および試験管内検出システムに有効な適合性キ
レート剤および放射性標識抗体−金属イオン複合体の形
成を示す。
−金属イオン複合体の調製 次の実施例は、本発明によれが生体内結像システム、生
体内治療および試験管内検出システムに有効な適合性キ
レート剤および放射性標識抗体−金属イオン複合体の形
成を示す。
7.1.ヒドラジド−フィコル(hydrazide-ficoll) フィコル(Ficoll)70を〔ファーマシア ファイン ケミ
カルズ社()Pharmacia Fine Chemicals,Ins.)〔ピスキャ
タウエイ，ニュージャージー(Pistcataway,New Jerse
y)〕から得た。フィコル70(CM-Ficoll)のカルボキシメ
チル誘導体をインマン〔1975，ジョイ，イミュノル。11
4 704(1975,J.Immunol.114：704)〕により述べられたと
同様に調製した。２ｇのCM-Ficollを100mlの水に溶解
し、10ｇのアジピックジヒドラジドを徐々に加えた。1N
HC1を滴下してpH4.7に調節し、1,25ｇの１−エチル−
３−（３−ジメチル−アミノプロピル）カルボジイミド
を加え、1N HC1でpH4.7に調節した。反応混合物を23〜2
5℃で20時間攪拌した。粗反応生成物をセファデックスG
-25の4.5×55cmカラムを用いてゲル透過クロマトグラフ
ィーで精製した。リン酸塩緩衝食塩水(PBS,0.01M リン
酸ナトリウム，0.15M塩化ナトリウム，pH7.4）でカラム
を溶出し、ボイドボリューム画分を取っておいた。その
後、ヒドラジド−フィコルを水に対して透析し、凍結乾
燥した。最終生成物はフィコル１モル当たり約150モル
のヒドラジドを含有した。
カルズ社()Pharmacia Fine Chemicals,Ins.)〔ピスキャ
タウエイ，ニュージャージー(Pistcataway,New Jerse
y)〕から得た。フィコル70(CM-Ficoll)のカルボキシメ
チル誘導体をインマン〔1975，ジョイ，イミュノル。11
4 704(1975,J.Immunol.114：704)〕により述べられたと
同様に調製した。２ｇのCM-Ficollを100mlの水に溶解
し、10ｇのアジピックジヒドラジドを徐々に加えた。1N
HC1を滴下してpH4.7に調節し、1,25ｇの１−エチル−
３−（３−ジメチル−アミノプロピル）カルボジイミド
を加え、1N HC1でpH4.7に調節した。反応混合物を23〜2
5℃で20時間攪拌した。粗反応生成物をセファデックスG
-25の4.5×55cmカラムを用いてゲル透過クロマトグラフ
ィーで精製した。リン酸塩緩衝食塩水(PBS,0.01M リン
酸ナトリウム，0.15M塩化ナトリウム，pH7.4）でカラム
を溶出し、ボイドボリューム画分を取っておいた。その
後、ヒドラジド−フィコルを水に対して透析し、凍結乾
燥した。最終生成物はフィコル１モル当たり約150モル
のヒドラジドを含有した。
7.2.（４−ヨードアセチル）−アミノベンゾイックヒド
ラジド−フィコル 30mgのＮ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）−
アミノベンゾエート〔エスアイエービー，ピアース ケ
ミカル社，ロックフォード，アイエル(SIAB,Pierce Che
mical Co.,Rockford,IL)〕を３mlのアセトニトリルに溶
解した。６つの0.48ml SIAB溶液アリコートを0.1Mリン
酸ナトリウム緩衝液、pH7.0に溶解された20mlの５mg/ml
ヒドラジド−フィコル溶液（第7.1節で記載の如く調製
した）に30分間間隔で加えた。SIAB溶液の２回目の添加
前に、溶液を澄明にするために５mlのテトラハイドロフ
ランを加えた。その後反応混合物を23〜25℃で20時間攪
拌した。反応混合物中を窒素ガスでバブリングすること
により有機溶媒を除去し、得られた曇りをおびた溶液を
遠心分離により透明にした。透明な上澄液を凍結乾燥し
た。乾燥粉末をテトラハイドロフランで抽出することに
より余分のSIABを除去し、余分の溶媒を減圧下で蒸発し
て除去した。乾燥粉末を５mlの水に溶解し、４℃で４時
間透析した。（４−ヨードアセチル）−アミノベンゾイ
ックヒドラジド−フィコルを-70℃で凍結貯蔵し、ヒド
ラジド−フィコル１モル当たり約16のヨードアセチル基
を含んでいた。
ラジド−フィコル 30mgのＮ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）−
アミノベンゾエート〔エスアイエービー，ピアース ケ
ミカル社，ロックフォード，アイエル(SIAB,Pierce Che
mical Co.,Rockford,IL)〕を３mlのアセトニトリルに溶
解した。６つの0.48ml SIAB溶液アリコートを0.1Mリン
酸ナトリウム緩衝液、pH7.0に溶解された20mlの５mg/ml
ヒドラジド−フィコル溶液（第7.1節で記載の如く調製
した）に30分間間隔で加えた。SIAB溶液の２回目の添加
前に、溶液を澄明にするために５mlのテトラハイドロフ
ランを加えた。その後反応混合物を23〜25℃で20時間攪
拌した。反応混合物中を窒素ガスでバブリングすること
により有機溶媒を除去し、得られた曇りをおびた溶液を
遠心分離により透明にした。透明な上澄液を凍結乾燥し
た。乾燥粉末をテトラハイドロフランで抽出することに
より余分のSIABを除去し、余分の溶媒を減圧下で蒸発し
て除去した。乾燥粉末を５mlの水に溶解し、４℃で４時
間透析した。（４−ヨードアセチル）−アミノベンゾイ
ックヒドラジド−フィコルを-70℃で凍結貯蔵し、ヒド
ラジド−フィコル１モル当たり約16のヨードアセチル基
を含んでいた。
7.3.２−ピリジルジスルフィドヒドラジDTPA 10mgのヒドラジド−DTPA（第6.1.4節の記載の如く調製
した）を0.1mlの0.2M重炭酸ナトリウム緩衝液、pH9.5に
溶解した。1/10mlの0.1M重炭酸ナトリウム緩衝液、pH7.
2を加え、得られる溶液のpHを8.0に調節した。0.3mlの
テトラハイドロフランおよび0.1mlのN,N-ジメチルホル
ムアミドをその後加えた。1.0mlのテトラハイドロフラ
ンに溶解した100mgのＮ−スクシンイミジル−３−（２
−ピリジル−ジチオ）−プロピオネート〔ファ−マシア
ファイン ケミカル社，ピスキャタウエイ，エヌジェ
イ(Pharmacia Fina Chemicals,Inc.,Pistcataway,NJ)〕
をヒドラジド−DTPA溶液に加え、反応混合物を23〜25℃
で16時間攪拌した。溶液中に窒素をバブリングすること
によりテトラハイドロフランを除去し、得られた懸濁液
を遠心分離により清澄化した。不必要な反応生成物を１
mlの水を加えて沈降させ、清澄な上澄液はバイオ−ゲル
−P-2〔バイオラド ラボラトリーズ，リッチモンド、
シーエイ(BioRad Laboratories,Richmond,CA)〕カラム
上で繰り返してゲル濾過することによりさらに精製し、
水で溶出した。生成物は、DTPA1モル当り約0.15〜0.20
モルの２−ピリジル−ジスルフィドを含有していた。
した）を0.1mlの0.2M重炭酸ナトリウム緩衝液、pH9.5に
溶解した。1/10mlの0.1M重炭酸ナトリウム緩衝液、pH7.
2を加え、得られる溶液のpHを8.0に調節した。0.3mlの
テトラハイドロフランおよび0.1mlのN,N-ジメチルホル
ムアミドをその後加えた。1.0mlのテトラハイドロフラ
ンに溶解した100mgのＮ−スクシンイミジル−３−（２
−ピリジル−ジチオ）−プロピオネート〔ファ−マシア
ファイン ケミカル社，ピスキャタウエイ，エヌジェ
イ(Pharmacia Fina Chemicals,Inc.,Pistcataway,NJ)〕
をヒドラジド−DTPA溶液に加え、反応混合物を23〜25℃
で16時間攪拌した。溶液中に窒素をバブリングすること
によりテトラハイドロフランを除去し、得られた懸濁液
を遠心分離により清澄化した。不必要な反応生成物を１
mlの水を加えて沈降させ、清澄な上澄液はバイオ−ゲル
−P-2〔バイオラド ラボラトリーズ，リッチモンド、
シーエイ(BioRad Laboratories,Richmond,CA)〕カラム
上で繰り返してゲル濾過することによりさらに精製し、
水で溶出した。生成物は、DTPA1モル当り約0.15〜0.20
モルの２−ピリジル−ジスルフィドを含有していた。
7.4.３−メルカプトプロピオニックヒドラジド−DTPA-
153Gd １mgの２−ピリジルジスルフィドヒドラジドDTPA(PDS-D
TPA,第7.3節の記載の如く調製した）を0.1mlの水に溶解
し、0.1mlの0.05M HC1に溶解した0.024mCiの153GdCl
3〔アマーシャム コーポレースヨン，アーリントンハ
イツ，アイエル(Amersham Corporation,Arlington Heig
hts,IL)〕で標識化した。PDS-DTPA-153Gdをその後0.5mM
のジチオトレイトールで還元し、得られた３−メルカプ
トプロピオニックヒドラジド−DTPA-153Gdをセファデッ
クスG-10でゲル濾過により精製した。
153Gd １mgの２−ピリジルジスルフィドヒドラジドDTPA(PDS-D
TPA,第7.3節の記載の如く調製した）を0.1mlの水に溶解
し、0.1mlの0.05M HC1に溶解した0.024mCiの153GdCl
3〔アマーシャム コーポレースヨン，アーリントンハ
イツ，アイエル(Amersham Corporation,Arlington Heig
hts,IL)〕で標識化した。PDS-DTPA-153Gdをその後0.5mM
のジチオトレイトールで還元し、得られた３−メルカプ
トプロピオニックヒドラジド−DTPA-153Gdをセファデッ
クスG-10でゲル濾過により精製した。
7.5. 153Gd-DAPA-ヒドラジド−チオアセチル−アミノベ
ンゾイック−ヒドラジド−フィコル−アセチルチオ−Ig
G １mgのマウス・抗淋菌(N.gonorrhoeae)モノクロナールI
gGを0.25mlのPBS,pH7.4中に希釈した。IgG溶液をその後
5mMジチオトレイトールを用いて23〜25℃で30分間還元
した。還元抗体を１×19cmセファデックスG-50カラムを
通過させ、1mMエチレンジアミン四酢酸を含有する0.1M
トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン緩衝液，pH
8.0（トリス／EDTA）溶媒出した。1mgの（４−ヨードア
セチル）−アミノベンゾイックヒドラジド−フィコル
（第7.2節の記載の如く調製した）を還元抗体に加え、
ヨードアセチル−アミノベンゾイックヒドラジド−フィ
コル−アセチルチオ−IgG結合体を形成するためにその
反応混合物を４℃で16時間保温した。
ンゾイック−ヒドラジド−フィコル−アセチルチオ−Ig
G １mgのマウス・抗淋菌(N.gonorrhoeae)モノクロナールI
gGを0.25mlのPBS,pH7.4中に希釈した。IgG溶液をその後
5mMジチオトレイトールを用いて23〜25℃で30分間還元
した。還元抗体を１×19cmセファデックスG-50カラムを
通過させ、1mMエチレンジアミン四酢酸を含有する0.1M
トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン緩衝液，pH
8.0（トリス／EDTA）溶媒出した。1mgの（４−ヨードア
セチル）−アミノベンゾイックヒドラジド−フィコル
（第7.2節の記載の如く調製した）を還元抗体に加え、
ヨードアセチル−アミノベンゾイックヒドラジド−フィ
コル−アセチルチオ−IgG結合体を形成するためにその
反応混合物を４℃で16時間保温した。
0.20mgの３−メルカプトプロピオニックヒドラジド−DT
PA-153Gd（第7.4.節に記載の如く調製した）をヨードア
セチル−アミノベンゾイックヒドラジド−フィコル−ア
セチルチオ−IgG結合体に加え、その反応混合物を４℃
で16時間保温した。153Gd-DTPA-ヒドラジド−チオアセ
チル−アミノベンソイック−ヒドラジド−フィコル−ア
セチルチオ−IgG複合体はシアノゲルブロマイド活性化
セファロース(Sepharose)4B〔シグマ ケミカル社，セ
ントルイス，エムオー(Sigma Chemisal Co.,St.Louis,M
O)〕に共有結合させたヒツジ・抗マウスIgG抗体〔クー
パー バイオメディカル，サイエンティフック ディビ
ジョン、マルバーン，ピーエー(cooper Biomedical,Sce
entific Division,Malvern,PA)〕から成る樹脂を用いて
免疫吸着により精製した。結合複合体を0.1Mのグリシン
緩衝液pH2.0で溶離し、セファデックスG-25を使用して
トリス／EDTA緩衝液に脱塩した。
PA-153Gd（第7.4.節に記載の如く調製した）をヨードア
セチル−アミノベンゾイックヒドラジド−フィコル−ア
セチルチオ−IgG結合体に加え、その反応混合物を４℃
で16時間保温した。153Gd-DTPA-ヒドラジド−チオアセ
チル−アミノベンソイック−ヒドラジド−フィコル−ア
セチルチオ−IgG複合体はシアノゲルブロマイド活性化
セファロース(Sepharose)4B〔シグマ ケミカル社，セ
ントルイス，エムオー(Sigma Chemisal Co.,St.Louis,M
O)〕に共有結合させたヒツジ・抗マウスIgG抗体〔クー
パー バイオメディカル，サイエンティフック ディビ
ジョン、マルバーン，ピーエー(cooper Biomedical,Sce
entific Division,Malvern,PA)〕から成る樹脂を用いて
免疫吸着により精製した。結合複合体を0.1Mのグリシン
緩衝液pH2.0で溶離し、セファデックスG-25を使用して
トリス／EDTA緩衝液に脱塩した。
上に述べたことは、第5.2.節に記載したように抗体のス
ルフヒドリル基に導入された多くの部位への単一部位適
合性キレート剤に付着により形成されが抗体−金属イオ
ン複合体調製の一例である。
ルフヒドリル基に導入された多くの部位への単一部位適
合性キレート剤に付着により形成されが抗体−金属イオ
ン複合体調製の一例である。
7.6.（４−ヨードアセチル）−アミノベンゾイックヒド
ラジド−フィコル−IgG 1/2mgのマウス・抗淋菌(N.gonorrhoeae)モノクローナル
IgGを第6.2.1.節の方法により酸化した。PBS,pH7.4に対
して透析後、抗体をPBS,pH7.4で希釈して最終0.577mlと
した。0.702mlの（４−ヨードアセチル）−アミノベン
ゾイックヒドラジド−フィコル溶液（16.7mg/ml、第7.
2.節の記載の如く調製した）を0.1Mリン酸ナトリウム溶
液、pH6.0に溶解した0.128mlのナトリウムシアノボロア
ヒドライド溶液とともに加えた。反応混合物を23〜25℃
で２時間保温した。（４−ヨードアセチル）−アミノベ
ンソイックヒドラジド−フィコル−IgG結合体はシアノ
ゲンプロマイド活性化セファロース(Sepharose)4B〔シ
グマ ケミカル社，セントルイス，エムオー(Sigma Che
mical Co.,St.Louis,MO)〕に共有結合されたヒツジ・抗
マウスIgG抗体〔クーパー バイオメディカル，サイエ
ンティフック ディビジョン，ピーエー(Cooper Biomed
ical,Scientific Division,Malvern,PA)〕から成る樹脂
を用いて免疫吸着により精製した。結合複合体を0.1Ｍ
のグリシン緩衝液pH2.0で溶離し、セファデックスG-25
を使用して1mMのエチレンジアミン四酢酸を有する0.1M
トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタンに脱塩し
た。精製した結合体は、IgG１モル当り約２〜３モルの
（４−ヨードアセチル）−アミノベンゾイックヒドラジ
ド−フィルコを含み、-70℃で貯蔵された。
ラジド−フィコル−IgG 1/2mgのマウス・抗淋菌(N.gonorrhoeae)モノクローナル
IgGを第6.2.1.節の方法により酸化した。PBS,pH7.4に対
して透析後、抗体をPBS,pH7.4で希釈して最終0.577mlと
した。0.702mlの（４−ヨードアセチル）−アミノベン
ゾイックヒドラジド−フィコル溶液（16.7mg/ml、第7.
2.節の記載の如く調製した）を0.1Mリン酸ナトリウム溶
液、pH6.0に溶解した0.128mlのナトリウムシアノボロア
ヒドライド溶液とともに加えた。反応混合物を23〜25℃
で２時間保温した。（４−ヨードアセチル）−アミノベ
ンソイックヒドラジド−フィコル−IgG結合体はシアノ
ゲンプロマイド活性化セファロース(Sepharose)4B〔シ
グマ ケミカル社，セントルイス，エムオー(Sigma Che
mical Co.,St.Louis,MO)〕に共有結合されたヒツジ・抗
マウスIgG抗体〔クーパー バイオメディカル，サイエ
ンティフック ディビジョン，ピーエー(Cooper Biomed
ical,Scientific Division,Malvern,PA)〕から成る樹脂
を用いて免疫吸着により精製した。結合複合体を0.1Ｍ
のグリシン緩衝液pH2.0で溶離し、セファデックスG-25
を使用して1mMのエチレンジアミン四酢酸を有する0.1M
トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタンに脱塩し
た。精製した結合体は、IgG１モル当り約２〜３モルの
（４−ヨードアセチル）−アミノベンゾイックヒドラジ
ド−フィルコを含み、-70℃で貯蔵された。
7.7.153Gd-DTPA-ヒドラジド チオアセチル アミノベ
ンゾイックヒドラジド−フィコル−IgG 0.081mgの３−メルカプトプロピオニック−ヒドラジド
−DTRA-153Gd（第7.4節に記載の如く調整した）を第7.6
節に記載の如く調整した0.050mgの（４−ヨードアセチ
ル）−アミノベンゾイックヒドラジド−フィコル−IgG
に加えて、その反応混合物を４℃で一夜保存した。遊離
３−メルカプトプロピオニックヒドラジド−DTPA-153Gd
をセファデックスG-50を用いるクロマトグラフィーで除
去した。生じた153Gd-DTPA−ヒドラジド チオアセチル
アモノベンゾイックヒドラジド−フィコル−IgG複合
体はIgG１モル当り13.5モルのDTPAを含んでいた。
ンゾイックヒドラジド−フィコル−IgG 0.081mgの３−メルカプトプロピオニック−ヒドラジド
−DTRA-153Gd（第7.4節に記載の如く調整した）を第7.6
節に記載の如く調整した0.050mgの（４−ヨードアセチ
ル）−アミノベンゾイックヒドラジド−フィコル−IgG
に加えて、その反応混合物を４℃で一夜保存した。遊離
３−メルカプトプロピオニックヒドラジド−DTPA-153Gd
をセファデックスG-50を用いるクロマトグラフィーで除
去した。生じた153Gd-DTPA−ヒドラジド チオアセチル
アモノベンゾイックヒドラジド−フィコル−IgG複合
体はIgG１モル当り13.5モルのDTPAを含んでいた。
これは、第5.2節に記載された抗体の炭水化物部分に導
入された多部位への単一部位適合性キレート剤の付着に
より形成された抗体−金属イオン複合体調整の一例であ
る。
入された多部位への単一部位適合性キレート剤の付着に
より形成された抗体−金属イオン複合体調整の一例であ
る。
7.8.マレイミド ヒドラジド フィコル 22mgの４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン
−１−カルボン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステ
ル〔エスエムシーシー，シグマ ケミカル社，セントル
イス，エムオー（SMCC,Sigma Chemical Co.,St.Louis,M
O）〕を３mlのテトラハイドロフランに溶解した。６つ
の0.5mlアリコートのSMCC溶液を0.1Mリン酸ナトリウム
緩衝液、pH6.8に溶解した20mlの５mg／mlヒドラジド−
フィコル溶液（第7.1節に記載の如く調整した）に30分
間間隔で加えた。SMCC溶液の第２および第３回の添加前
に２mlのテトラハイドロフランを反応混合物に加えた。
その後、窒素ガスを反応混合物中にバブリングすること
により有機溶媒を除去し、得られる濁った溶液を遠心分
離にかけ清澄化した。上澄液を凍結乾燥し、余分のSMCC
をテヨラハイドロフランで抽出した。その後有機溶媒を
減圧下で蒸発して除去した。最終生成物は、フィコル１
モル当り約15モルのマレイミドを含んでいた。この化合
物は、第7.2節の方法により調製された（４−ヨードア
セチル）−アミノベンゾイックヒドラジド−フィコルと
同様に使用し得る。
−１−カルボン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステ
ル〔エスエムシーシー，シグマ ケミカル社，セントル
イス，エムオー（SMCC,Sigma Chemical Co.,St.Louis,M
O）〕を３mlのテトラハイドロフランに溶解した。６つ
の0.5mlアリコートのSMCC溶液を0.1Mリン酸ナトリウム
緩衝液、pH6.8に溶解した20mlの５mg／mlヒドラジド−
フィコル溶液（第7.1節に記載の如く調整した）に30分
間間隔で加えた。SMCC溶液の第２および第３回の添加前
に２mlのテトラハイドロフランを反応混合物に加えた。
その後、窒素ガスを反応混合物中にバブリングすること
により有機溶媒を除去し、得られる濁った溶液を遠心分
離にかけ清澄化した。上澄液を凍結乾燥し、余分のSMCC
をテヨラハイドロフランで抽出した。その後有機溶媒を
減圧下で蒸発して除去した。最終生成物は、フィコル１
モル当り約15モルのマレイミドを含んでいた。この化合
物は、第7.2節の方法により調製された（４−ヨードア
セチル）−アミノベンゾイックヒドラジド−フィコルと
同様に使用し得る。
８．実施例：放射性標識抗体−金属イオン複合体を使用
する結像 次の実施例は、本発明により調製された放射性標識抗体
−金属イオン複合体を使用して特定の組織または器官成
分を局在化する生体内結像方法を示す。
する結像 次の実施例は、本発明により調製された放射性標識抗体
−金属イオン複合体を使用して特定の組織または器官成
分を局在化する生体内結像方法を示す。
8.1.腫瘍結像 一連の実験において、放射性標識抗体一金属イオン複合
体は、放射性結像システムにおいて使用する実験動物中
の潰瘍組織を特異的に探知するために使用された。
体は、放射性結像システムにおいて使用する実験動物中
の潰瘍組織を特異的に探知するために使用された。
ヌードマウスの左後半部皮下に１×106BNラットリンパ
腫細胞を導入した。導入７日後、腫瘍の直径が２〜４mm
になったときに、動物は10μｇの111インジウム−標識
抗ＢＮ主要組織適合性複合体（MHC）抗体−金属イオン
複合体、111In-CYT-015-ADTPAの眼窩後方の空洞または
静脈内注射を受けた。動物には該複合体を一度だけ注射
した。
腫細胞を導入した。導入７日後、腫瘍の直径が２〜４mm
になったときに、動物は10μｇの111インジウム−標識
抗ＢＮ主要組織適合性複合体（MHC）抗体−金属イオン
複合体、111In-CYT-015-ADTPAの眼窩後方の空洞または
静脈内注射を受けた。動物には該複合体を一度だけ注射
した。
２グループの動物を比較例とした。一比較例の非腫瘍保
有ヌードマウスに10μｇの111In-CYT-015-ADTPAを眼窩
後方の空洞または静脈内注射のいずれかの方法で注射し
た。他の比較例のBN腫瘍保有ヌードマウスに10μｇの
111In-CYT-012-ADTPAを注射した。
有ヌードマウスに10μｇの111In-CYT-015-ADTPAを眼窩
後方の空洞または静脈内注射のいずれかの方法で注射し
た。他の比較例のBN腫瘍保有ヌードマウスに10μｇの
111In-CYT-012-ADTPAを注射した。
放射線結像を次のように行なった：放射性標識抗体−金
属イオン複合体を注射後24,48または72時間において、
動物をガンマカメラの逆転された面に直接置いた（ADEC
クリニカル データ システムと境を接するジェネラル
エレクトリックマキシカメラ37）。バックグラウンド放
射線を補正することなく10,000〜25,000カウントが、暴
露Ｘ線フィルム上に蓄積した。
属イオン複合体を注射後24,48または72時間において、
動物をガンマカメラの逆転された面に直接置いた（ADEC
クリニカル データ システムと境を接するジェネラル
エレクトリックマキシカメラ37）。バックグラウンド放
射線を補正することなく10,000〜25,000カウントが、暴
露Ｘ線フィルム上に蓄積した。
第２図は111In-CYT-015-ADTPAで注射したBN腫瘍保有ヌ
ードマウス内に蓄積した生体内放射性結像を示す。像A,
B,CおよびＤはそれぞれ注射後24,24,48および72時間後
に撮影したものだ。第２図は、本発明の複合体がきわめ
て低レベルの非特異局在と共に意図する標的に特異的に
局在することを明確に示す。
ードマウス内に蓄積した生体内放射性結像を示す。像A,
B,CおよびＤはそれぞれ注射後24,24,48および72時間後
に撮影したものだ。第２図は、本発明の複合体がきわめ
て低レベルの非特異局在と共に意図する標的に特異的に
局在することを明確に示す。
第３図は、上記BN腫瘍保有対照マウスの生体内放射性結
像を示す。像ＥおよびＦは、それぞれ注射後24および72
後に撮影した。第３図から明らかなように抗体がクラス
ＩヒトMHC抗原に特異的である111In-CYT-012-ADTPAを注
射されたBN腫瘍保有ヌードマウス中の放射能の局在は検
出されなかった。
像を示す。像ＥおよびＦは、それぞれ注射後24および72
後に撮影した。第３図から明らかなように抗体がクラス
ＩヒトMHC抗原に特異的である111In-CYT-012-ADTPAを注
射されたBN腫瘍保有ヌードマウス中の放射能の局在は検
出されなかった。
第４図は111In-CYT-012-ADTPAを注射された非潰瘍保有
ヌードマウスの生体内結像を示す。像ＧおよびＨは、そ
れぞれ注射後24および72時間後に撮影した。第４図から
明らかなように、BN腫瘍抗原に特異な標識抗体−金属イ
オン複合体111In-CYT-015-ADTPAを注射された非腫瘍保
有ヌードマウス中の放射能の局在も検出されなかった。
ヌードマウスの生体内結像を示す。像ＧおよびＨは、そ
れぞれ注射後24および72時間後に撮影した。第４図から
明らかなように、BN腫瘍抗原に特異な標識抗体−金属イ
オン複合体111In-CYT-015-ADTPAを注射された非腫瘍保
有ヌードマウス中の放射能の局在も検出されなかった。
8.2.腎臓移植結像 他の一連の実験において、放射性標識抗体−金属イオン
複合体は、生体内放射性結像により移植腎臓組織を特異
的に探知するために使用された。
複合体は、生体内放射性結像により移植腎臓組織を特異
的に探知するために使用された。
移植された機能腎臓または腎臓の同種異系移植片を有す
る実験ラットは次のように準備した：レヴィス（Lewi
s）ラットの左腎臓を外科手術で除去し、BNxレヴィス
（Lewis）F1ラットからの腎臓をその場所に移植した。
外来腎臓移植に対するレシピエントの免疫応答は化学的
に抑制された〔シュトーアート等1980，イムノル，レ
ブ．49：127〜165（Stuart,et al.,1980,Immunol.Rev.4
9:127〜１６５）参照のこと〕。このように、レシピエ
ントラットは二つの機能腎臓を有し、そのうちの一つの
みがCYT-015抗体により特異的に認識されるBN MHC抗原
をもっていた。
る実験ラットは次のように準備した：レヴィス（Lewi
s）ラットの左腎臓を外科手術で除去し、BNxレヴィス
（Lewis）F1ラットからの腎臓をその場所に移植した。
外来腎臓移植に対するレシピエントの免疫応答は化学的
に抑制された〔シュトーアート等1980，イムノル，レ
ブ．49：127〜165（Stuart,et al.,1980,Immunol.Rev.4
9:127〜１６５）参照のこと〕。このように、レシピエ
ントラットは二つの機能腎臓を有し、そのうちの一つの
みがCYT-015抗体により特異的に認識されるBN MHC抗原
をもっていた。
移植６〜12カ月後、レシピエントラットは10μｇの111I
n-CYT-015-ADTPAを静脈内に注射され、第8.1節の如く結
像させた。第５図で、像ＡおよびＢは静脈内注射後約１
時間２０分に撮影した。
n-CYT-015-ADTPAを静脈内に注射され、第8.1節の如く結
像させた。第５図で、像ＡおよびＢは静脈内注射後約１
時間２０分に撮影した。
第５図の像Ａに示すように放射性核種は、標識抗体−金
属イオン複合体の静脈内注射後約１時間20分以内に移植
腎臓内に局在した。放射能の最少蓄積量が動物の腎臓、
肺、脾臓または肝臓で検出された。
属イオン複合体の静脈内注射後約１時間20分以内に移植
腎臓内に局在した。放射能の最少蓄積量が動物の腎臓、
肺、脾臓または肝臓で検出された。
第５図、像Ｂは同一のレシピエント動物に市販の腎臓結
像剤、99mテクネチウム−DTPAキレート（Mallinkrodt,S
t.Louis,MO）を注入したときに得られた像を示す。明ら
かに、99mテクネチウム−DTPAキレートにより得られた
像は本発明の抗体−金属イオン複合体を用いて得られた
ものよりも劣っている。
像剤、99mテクネチウム−DTPAキレート（Mallinkrodt,S
t.Louis,MO）を注入したときに得られた像を示す。明ら
かに、99mテクネチウム−DTPAキレートにより得られた
像は本発明の抗体−金属イオン複合体を用いて得られた
ものよりも劣っている。
レジピエント動物の両方の腎臓は、明らかに機能してい
た。
た。
ここに記載した本発明はここに開示した特定の実施態様
によってその範囲が制限されるものではなく、これらの
態様は本発明のいくつかの面を例示するものである。均
等な実施態様は本発明の範囲内に含まれるものとする。
実際、ここに示されたもののほかに本発明の種々の変更
が前述の記載から当業者には明らかになろう。かかる変
更も添付の請求の範囲に含まれるものである。
によってその範囲が制限されるものではなく、これらの
態様は本発明のいくつかの面を例示するものである。均
等な実施態様は本発明の範囲内に含まれるものとする。
実際、ここに示されたもののほかに本発明の種々の変更
が前述の記載から当業者には明らかになろう。かかる変
更も添付の請求の範囲に含まれるものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 アルバレツツ，バーノン レオン アメリカ合衆国 ペンシルバニア州 19067 モーリスヴイレライス ドライブ 187 (72)発明者 ロツドウエル，ジヨン デニス アメリカ合衆国 ペンシルバニア州 19067 ヤードレイ ラムセイ ロード 430 (72)発明者 マツカーン，トーマス ヨーゼフ アメリカ合衆国 ペンシルバニア州 18938 ニユーホープボツクス 119 アー ルデー．ナンバー３ (72)発明者 ジヨアース，ジヨン ウオルター フラン ク アメリカ合衆国 カリフオルニア州 93422 アタスカデロドロレス ストリー ト 5200 (56)参考文献 特開 昭59−46227（ＪＰ，Ａ) 米国特許4454106（ＵＳ，Ａ) Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｖｏｌ．18 Ｎｏ．11（1979）Ｐ．2226〜2231 ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．Ｖｏｌ．80 Ｎ ｏ．１（1977）Ｐ．133〜136
Claims (8)
- 【請求項１】キレート剤のアミン基と抗体または抗体フ
ラグメントの酸化された炭水化物部分のアルデヒド基と
の間の共有結合により抗体または抗体フラグメントに結
合した適合性キレート剤から成り、該共有結合は抗体ま
たは抗体フラグメントの抗原結合領域の外部に位置した
部位に選択的に形成されており、非結合抗体または抗体
フラグメントと実質的に同一の免疫反応性および免疫特
異性を有することを特徴とする抗体−キレート剤結合
体。 - 【請求項２】共有結合がイミン、エナミン、ヒドラゾ
ン、オキシム、フェニルヒドラゾン、セミカルバゾン、
チオセミカルバゾンおよびそれらの還元形態より成る群
から選ばれる、請求の範囲第１項に記載の抗体−キレー
ト剤結合体。 - 【請求項３】抗体フラグメントがFabフラグメント、（F
ab′）２フラグメントおよび1/2抗体分子より成る群か
ら選ばれる、請求の範囲第２項に記載の抗体−キレート
剤結合体。 - 【請求項４】抗体または抗体フラグメントがモノクロー
ナル抗体またはモノクローナル抗体フラグメントであ
る、請求の範囲第２項に記載の抗体−キレート剤結合
体。 - 【請求項５】適合性キレート剤がジエチレントリアミン
ペンタ酢酸、エチレンジアミンテトラ酢酸、ジメルカプ
トコハク酸、2,3−ジメルカプトプロパンスルホン酸お
よびメタロチオネインより成る群から選ばれたキレート
剤のアミン含有誘導体である、請求の範囲第１項に記載
の抗体−キレート剤結合体。 - 【請求項６】適合性キレート剤がｐ−アミノアニリン−
ジエチレントリアミンペンタ酢酸、ヒドラジド−ジエチ
レントリアミンペンタ酢酸、フェニルヒドラジド−ジエ
チレントリアミンペンタ酢酸、ヒドロキシルアミン−ジ
エチレントリアミンペンタ酢酸、セミカルバジド−ジエ
チレントリアミンペンタ酢酸、チオセミカルバジド−ジ
エチレントリアミンペンタ酢酸、ポリエチレンイミン−
ジエチレントリアミンペンタ酢酸、ｐ−フェニレンジア
ミン−ジエチレントリアミンペンタ酢酸、α−Ｎ−ジエ
チレントリアミンペンタ酢酸−Ｌ−リジン、グリシル−
チロシル−リジン−ジエチレントリアミンペンタ酢酸、
ジエチレントリアミンペンタ酢酸モノ〔（４−アミノフ
ェニル）メチル〕アミドおよびＬ−リジンベンジルエス
テル−ジエチレントリアミンペンタ酢酸より成る群から
選ばれる、請求の範囲第２項に記載の抗体−キレート剤
結合体。 - 【請求項７】適合性キレート剤がクリプテートのアミン
含有誘導体である、請求の範囲第２項に記載の抗体−キ
レート剤結合体。 - 【請求項８】適合性キレート剤がグリシル−チロシル−
リジン−ジエチレントリアミンペンタ酢酸である、請求
の範囲第１項に記載の抗体−キレート剤結合体。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US64632784A | 1984-08-31 | 1984-08-31 | |
| US646328 | 1984-08-31 | ||
| US646327 | 1984-08-31 | ||
| US06/646,328 US4741900A (en) | 1982-11-16 | 1984-08-31 | Antibody-metal ion complexes |
| PCT/US1985/001556 WO1986001410A1 (en) | 1984-08-31 | 1985-08-19 | Antibody-metal ion complexes |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5202208A Division JPH0733399B2 (ja) | 1984-08-31 | 1993-08-16 | 抗体−金属イオン複合体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62500119A JPS62500119A (ja) | 1987-01-16 |
| JPH0651720B2 true JPH0651720B2 (ja) | 1994-07-06 |
Family
ID=27094902
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60503820A Expired - Lifetime JPH0651720B2 (ja) | 1984-08-31 | 1985-08-19 | 抗体−キレート剤結合体 |
| JP5202208A Expired - Lifetime JPH0733399B2 (ja) | 1984-08-31 | 1993-08-16 | 抗体−金属イオン複合体 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5202208A Expired - Lifetime JPH0733399B2 (ja) | 1984-08-31 | 1993-08-16 | 抗体−金属イオン複合体 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0173629B1 (ja) |
| JP (2) | JPH0651720B2 (ja) |
| AU (1) | AU588832B2 (ja) |
| CA (1) | CA1260827A (ja) |
| DE (1) | DE3586188T2 (ja) |
| DK (1) | DK195186D0 (ja) |
| GR (1) | GR852111B (ja) |
| WO (1) | WO1986001410A1 (ja) |
Families Citing this family (62)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8331514D0 (en) * | 1983-11-25 | 1984-01-04 | Janssen Pharmaceutica Nv | Visualization method |
| US4722892A (en) * | 1984-08-31 | 1988-02-02 | Meares Claude F | Monoclonal antibodies against metal chelates |
| US4880008A (en) * | 1985-05-08 | 1989-11-14 | The General Hospital Corporation | Vivo enhancement of NMR relaxivity |
| GB8525974D0 (en) * | 1985-10-22 | 1985-11-27 | Nyegaard & Co As | Chemical substance |
| US4831122A (en) * | 1986-01-09 | 1989-05-16 | Regents Of The University Of Minnesota | Radioimmunotoxins |
| GB8603537D0 (en) * | 1986-02-13 | 1986-03-19 | Parker D | Conjugate compound |
| US5271927A (en) * | 1986-02-13 | 1993-12-21 | Celltech Limited | Antibody conjugates with macrocyclic ligands |
| DE3684711D1 (de) * | 1986-04-07 | 1992-05-07 | Francois Dietlin | In der tomo-densitometrie zu verwendende zusammensetzungen. |
| US4801688A (en) * | 1986-05-27 | 1989-01-31 | Eli Lilly And Company | Hydrazone immunoglobulin conjugates |
| AU8152887A (en) * | 1986-10-17 | 1988-05-06 | Cytogen Corporation | Method for preparation of protein-chelator-metal ion compositions suitable for injection |
| US5227474A (en) * | 1987-02-13 | 1993-07-13 | Abbott Laboratories | Bifunctional chelating agents |
| US5057302A (en) * | 1987-02-13 | 1991-10-15 | Abbott Laboratories | Bifunctional chelating agents |
| US5491098A (en) * | 1987-03-09 | 1996-02-13 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Method for depositing metal particles on a marker |
| CA1340803C (en) * | 1987-03-09 | 1999-10-26 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Method for depositing metal particles on a marker |
| US5053493A (en) * | 1987-04-02 | 1991-10-01 | Centocor Cardiovascular Imaging Partners, L.P. | Method for labeling antibodies with a metal ion |
| US5177192A (en) * | 1987-04-02 | 1993-01-05 | Centocor, Incorporated | Method for labeling antibodies with a metal ion |
| GB8719042D0 (en) | 1987-08-12 | 1987-09-16 | Parker D | Conjugate compounds |
| GB8719041D0 (en) * | 1987-08-12 | 1987-09-16 | Parker D | Conjugate compounds |
| JP2581566B2 (ja) * | 1987-09-30 | 1997-02-12 | 和光純薬工業株式会社 | 鉄コロイド標識抗体及びその製法並びにこれを用いる組織細胞化学的検出方法 |
| US4871836A (en) * | 1987-10-13 | 1989-10-03 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Boronic acid adducts of rhenium and radioactive isotopes of rhenium dioxime complexes |
| US5648471A (en) * | 1987-12-03 | 1997-07-15 | Centocor, Inc. | One vial method for labeling antibodies with Technetium-99m |
| US4937183A (en) * | 1988-02-03 | 1990-06-26 | Cytogen Corporation | Method for the preparation of antibody-fragment conjugates |
| US5047227A (en) * | 1988-02-08 | 1991-09-10 | Cytogen Corporation | Novel and improved antibodies for site specific attachment of compounds |
| US5202451A (en) * | 1988-02-17 | 1993-04-13 | Neorx Corporation | Anchimeric radiometal chelating compounds |
| EP0339389B1 (de) * | 1988-04-25 | 1993-09-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Diagnose-Hilfsmittel |
| US5059541A (en) * | 1988-04-29 | 1991-10-22 | Neorx Corporation | Minimal derivatization of proteins |
| US5094950A (en) * | 1988-06-07 | 1992-03-10 | Nihon Medi-Physics Co., Ltd. | Diethylenetriamine pentaacetic acid derivatives |
| US5250702A (en) * | 1988-06-07 | 1993-10-05 | Nihon Medi-Physics Co., Ltd. | Diethylenetriamine pentaacetic acid derivatives |
| US5218128A (en) * | 1988-06-15 | 1993-06-08 | Centocor, Inc. | Bifunctional coupling agents and radionuclide labeled compositions prepared therefrom |
| US5144043A (en) * | 1988-06-15 | 1992-09-01 | Centocor | Cleavable bifunctional coupling agents |
| US5180816A (en) * | 1988-08-24 | 1993-01-19 | Centocor | One vial method for labeling protein/linker conjugates with technetium-99M |
| US5342936A (en) * | 1989-02-10 | 1994-08-30 | David Parker | Tetra-aza macrocycles and processes for their preparation |
| EP0382583B1 (en) * | 1989-02-10 | 1996-01-17 | Celltech Therapeutics Limited | Aza macrocycles and processes for their preparation |
| US5053503A (en) * | 1989-02-17 | 1991-10-01 | Centocor | Chelating agents |
| US5639624A (en) * | 1989-03-14 | 1997-06-17 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Monoclonal antibodies specific for metallic cations and method therefor |
| EP0463110B1 (en) * | 1989-03-14 | 1998-01-07 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Monoclonal antibodies for metallic cations |
| US5972656A (en) * | 1989-03-14 | 1999-10-26 | Bionebraska, Inc. | Mercury binding polypeptides and nucleotides coding therefore |
| US5247077A (en) * | 1989-06-23 | 1993-09-21 | Celltech Limited | Tri-aza macrocycles and processes for their preparation |
| US5162505A (en) * | 1989-09-19 | 1992-11-10 | Centocor | Proteins modified with positively charged carriers and compositions prepared therefrom |
| IL97459A0 (en) * | 1990-03-09 | 1992-06-21 | Hybritech Inc | Trifunctional antibody-like compounds as a combined diagnostic and therapeutic agent |
| US5185433A (en) * | 1990-04-09 | 1993-02-09 | Centocor, Inc. | Cross-linking protein compositions having two or more identical binding sites |
| DE69124132T2 (de) * | 1990-04-18 | 1997-06-05 | Celltech Therapeutics Ltd | Tetra-aza-makrozyklen, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Anwendung in NMR-Bildformung |
| US5684135A (en) * | 1990-04-18 | 1997-11-04 | Celltech Therapeutics Limited | Conjugate compounds containing aza-macro-cycles and processes for their preparation |
| AU648313B2 (en) * | 1990-04-25 | 1994-04-21 | Pharmacia & Upjohn Company | Novel CC-1065 analogs |
| US5582814A (en) * | 1994-04-15 | 1996-12-10 | Metasyn, Inc. | 1-(p-n-butylbenzyl) DTPA for magnetic resonance imaging |
| TW319763B (ja) | 1995-02-01 | 1997-11-11 | Epix Medical Inc | |
| US6111079A (en) * | 1995-06-05 | 2000-08-29 | Bionebraska, Inc. | Lead binding polypeptides and nucleotides coding therefore |
| RU2119167C1 (ru) * | 1995-08-31 | 1998-09-20 | Виха Галина Васильевна | Набор для скринингового анализа онкомаркера в сыворотке и цельной крови |
| US6071490A (en) * | 1998-05-07 | 2000-06-06 | Immunomedics, Inc. | Position emission tomography using gallium-68 chelates |
| CA2331348C (en) * | 1998-05-07 | 2007-07-24 | Immunomedics, Inc. | Positron emission tomography using gallium-68 chelates |
| WO2006080017A2 (en) * | 2005-01-26 | 2006-08-03 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Biologically active silver-coated proteins |
| WO2006123343A2 (en) * | 2005-05-18 | 2006-11-23 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Biologically active metal-coated proteins |
| US9850296B2 (en) | 2010-08-10 | 2017-12-26 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) | Erythrocyte-binding therapeutics |
| US9517257B2 (en) | 2010-08-10 | 2016-12-13 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) | Erythrocyte-binding therapeutics |
| WO2012021512A2 (en) | 2010-08-10 | 2012-02-16 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne | Erythrocyte-binding therapeutics |
| KR102717969B1 (ko) | 2014-02-21 | 2024-10-15 | 에꼴 뽈리떼끄닉 뻬데랄 드 로잔느 (으뻬에프엘) | 글리코타겟팅 치료제 |
| US10953101B2 (en) | 2014-02-21 | 2021-03-23 | École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) | Glycotargeting therapeutics |
| US10046056B2 (en) | 2014-02-21 | 2018-08-14 | École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) | Glycotargeting therapeutics |
| US10946079B2 (en) | 2014-02-21 | 2021-03-16 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne | Glycotargeting therapeutics |
| US11253579B2 (en) | 2017-06-16 | 2022-02-22 | The University Of Chicago | Compositions and methods for inducing immune tolerance |
| EP3727474A1 (en) * | 2017-12-18 | 2020-10-28 | Janssen Biotech, Inc. | Radiolabeling of polypeptides |
| EA202092723A1 (ru) | 2018-05-09 | 2021-04-09 | Зе Юниверсити Оф Чикаго | Композиции и способы, касающиеся иммунной толерантности |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5946227A (ja) * | 1982-06-07 | 1984-03-15 | ミシガン ステイト ユニバーシティー | 金属キレ−ト抱合モノクロ−ン抗体の製造法および使用法 |
| US4454106A (en) * | 1982-06-07 | 1984-06-12 | Gansow Otto A | Use of metal chelate conjugated monoclonal antibodies |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS54113492A (en) * | 1978-02-24 | 1979-09-05 | Sanyo Chem Ind Ltd | Preparation of glucoprotein derivative |
| FR2515046B1 (fr) * | 1981-10-27 | 1985-11-29 | Hybritech Inc | Anticorps monoclonaux marques par un radionucleide et leur application a la visualisation d'une tumeur |
| US4472509A (en) * | 1982-06-07 | 1984-09-18 | Gansow Otto A | Metal chelate conjugated monoclonal antibodies |
-
1985
- 1985-08-16 CA CA000488912A patent/CA1260827A/en not_active Expired
- 1985-08-19 WO PCT/US1985/001556 patent/WO1986001410A1/en not_active Ceased
- 1985-08-19 JP JP60503820A patent/JPH0651720B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-19 AU AU47701/85A patent/AU588832B2/en not_active Expired
- 1985-08-29 EP EP85401695A patent/EP0173629B1/en not_active Expired
- 1985-08-29 DE DE8585401695T patent/DE3586188T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-30 GR GR852111A patent/GR852111B/el unknown
-
1986
- 1986-04-29 DK DK195186A patent/DK195186D0/da not_active Application Discontinuation
-
1993
- 1993-08-16 JP JP5202208A patent/JPH0733399B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5946227A (ja) * | 1982-06-07 | 1984-03-15 | ミシガン ステイト ユニバーシティー | 金属キレ−ト抱合モノクロ−ン抗体の製造法および使用法 |
| US4454106A (en) * | 1982-06-07 | 1984-06-12 | Gansow Otto A | Use of metal chelate conjugated monoclonal antibodies |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＶｏｌ．１８Ｎｏ．１１（１９７９）Ｐ．２２２６〜２２３１ |
| ＦＥＢＳＬｅｔｔ．Ｖｏｌ．８０Ｎｏ．１（１９７７）Ｐ．１３３〜１３６ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0173629B1 (en) | 1992-06-10 |
| JPH0733399B2 (ja) | 1995-04-12 |
| DE3586188T2 (de) | 1992-12-03 |
| EP0173629A1 (en) | 1986-03-05 |
| DE3586188D1 (de) | 1992-07-16 |
| JPS62500119A (ja) | 1987-01-16 |
| DK195186A (da) | 1986-04-29 |
| CA1260827A (en) | 1989-09-26 |
| AU4770185A (en) | 1986-03-24 |
| WO1986001410A1 (en) | 1986-03-13 |
| JPH06234800A (ja) | 1994-08-23 |
| GR852111B (ja) | 1986-01-02 |
| AU588832B2 (en) | 1989-09-28 |
| DK195186D0 (da) | 1986-04-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0651720B2 (ja) | 抗体−キレート剤結合体 | |
| US4741900A (en) | Antibody-metal ion complexes | |
| US5756065A (en) | Macrocyclic tetraazacyclododecane conjugates and their use as diagnostic and therapeutic agents | |
| US5435990A (en) | Macrocyclic congugates and their use as diagnostic and therapeutic agents | |
| JP3051339B2 (ja) | 治療的抗白血球結合体及び哺乳動物用非経口的注射剤 | |
| US5652361A (en) | Macrocyclic ligands and complexes | |
| AU649079B2 (en) | Modified antibodies with controlled clearance time | |
| US5990286A (en) | Antibodies with reduced net positive charge | |
| US6010680A (en) | Thiolation of proteins for radionuclide-based radioimmunodetection and radioimmunotherapy | |
| EP0137457A2 (en) | Trace-labeled conjugates of metallothionein and target-seeking biologically active molecules | |
| JPH08502240A (ja) | 二官能性キレート剤としての置換チオ尿素 | |
| AU617816B2 (en) | Diethylenetriamine pentaacetic acid derivatives | |
| JP2845328B2 (ja) | オルト結合官能性を有するキレート剤類およびそれらの錯塩類 | |
| JP2012131808A (ja) | 減少した正味の正電荷を有する抗体 | |
| US5648059A (en) | Methods for reducing non-target retention of immunoconjugates and metabolites thereof | |
| US5942210A (en) | Methods for lyoprotecting a macromolecule using tricine | |
| WO1997025069A9 (en) | Antibodies with reduced net positive charge | |
| EP0429644A1 (en) | CHELATING AGENT FOR BINDING METALIONS TO PROTEINS. | |
| WO1996014879A9 (en) | Methods for use of novel lyoprotectants and instant kit formulations for radiopharmaceuticals using the same | |
| Hansen et al. | Labeling of anti-tumor antibodies and antibody fragments with Tc-99m | |
| USH735H (en) | Lead-203 as a label for radioimaging | |
| JPH0285239A (ja) | ジエチレントリアミン五酢酸誘導体とその用途 | |
| JPH05178826A (ja) | 二官能性キレート化剤、それと蛋白質との複合体及びその用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |