JPH0655140B2 - アルカリセルラーゼ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規なアルカリセルラーゼＫ−４２５に関す
る。

〔従来の技術〕

繊維素分解酵素セルラーゼの開発は、従来、バイオマス
資源、特にセルロース資源の有効利用を一大目標として
進められてきた。セルラーゼ生産菌として分離された来
た菌株は多種類にわたり、アスペルギルス属、ペニシリ
ウム属、トリコデルマ属、フザリウム属、フミコーラ
属、アクレモニウム属等の糸状菌を中心に、シユウドモ
ナス属、セルロモナス属、ルミノコツカス属、バチルス
属等の細菌、更に、ストレプトマイセス属、サーモアク
チノマイセス属等の放線菌でも報告されている。しかし
ながら、現時点では、バイオマス用セルラーゼの工業的
規模での利用は、多くはない。

一方、セルラーゼの新規な産業的用途として、衣料用洗
浄剤の配合成分としての利用が検討され注目を集めてい
る（特公昭５９−４９２７９号公報、特公昭６０−２３
１５８号公報、特公昭６０−３６２４０号公報）。しか
し、自然界に於いて、微生物の産生するセルラーゼのほ
とんどが、中性乃至酸性領域に於いて最大且つ安定な酵
素活性を示す、所謂中性若しくは酸性セルラーゼに分類
されるものであつて、衣料用洗浄剤組成物中に配合する
ための条件を有するセルラーゼ、すなわち、アルカリ領
域で最大活性を示すか、あるいはアルカリ耐性を有す
る、所謂アルカリセルラーゼ及びアルカリ耐性セルラー
ゼの存在は、極めて少ないのが実情である。ここでアル
カリセルラーゼとは、至適pHがアルカリ領域にあるもの
を言い、アルカリ耐性セルラーゼとは、至適pHは中性か
ら酸性領域にあるが、アルカリ領域に於いても至適pHに
於ける活性に比較して充分に活性を有しかつ安定性を保
持するものを言う。また、中性とはpH６〜８の範囲を言
い、アルカリ性とはこれより高いpH範囲をいう。

すなわち、従来、衣料用洗浄剤組成物において使用し得
るアルカリセルラーゼ及びアルカリ耐性セルラーゼの生
産方法としては、好アルカリ性バチルス属細菌の培養に
よりセルラーゼＡを採取する方法（特公昭５０−２８５
１５号公報）、セルロモナス属に属する好アルカリ性細
菌を培養してアルカリセルラーゼ３０１−Ａを生産する
方法（特開昭５８−２２４６８６号公報）、好アルカリ
性バチルスNo.１１３９を培養してカルボキシメチルセ
ルラーゼを生産する方法（Fukumori,F.,Kudo,T.and Hor
ikoshi,K.,J.Gen.Microbiol.,131,3339,(1985)）及びス
トレプトマイセス属の一種を用いてアルカリセルラーゼ
を生産する方法（特開昭６１−１９４８３号公報）が報
告されているに過ぎず、しかもいずれも工業的発酵生産
に適うものでは無かった。

ところが最近、本発明者らは好アルカリ性細菌の一種で
あるバチルス エスピーＫＳＭ−６３５（Bacillus sp.
ＫＳＭ−６３５）（ＦＥＲＭ Ｐ−８８７２）が衣料用
洗浄剤配合成分として適したアルカリセルラーゼＫを収
率良く生産すること及び更に培養条件を選択することに
より、より生産性が高まり、アルカリセルラーゼの工業
的発酵生産が可能となることを見出した。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、上記バチルス エスピ−ＫＳＭ−６３５
の培養条件は、必ずしも工業的に有利なものと言えな
い。すなわち、好アルカリ性菌株は培養中、pHをアルカ
リ性に保ち続ける必要があるが、現在までのところ、好
アルカリ性菌株を用いる所謂アルカリ性発酵法の歴史は
浅く、通常の中性微生物と比較するとこれら好アルカリ
性微生物の生理、生化学についての知見は充分に蓄積さ
れておらず、工業的発酵生産を行うにあたつての培地調
製、培養方法が操作上の難点となつていた。

更に、前述した報告例のうち、至適pHがアルカリ領域に
ある本来のアルカリセルラーゼとしては、バチルス Ｎ
１菌株、Ｎ２菌株、Ｎ３菌株（特公昭５０−２８５１５
号公報）の生産する、至適pHがそれぞれ８〜９、９、８
〜９の酵素、バチルスNo.１１３９の産生する、至適pH
９のもの及びバチルス エスピ−ＫＳＭ−６３５の産生
する至適pH１０のアルカリセルラーゼＫ（特願昭６１−
２５７７７６号）が存在するが、更に洗浄剤組成物に配
合し用いることのできる至適pHがアルカリ側にあり、か
つその作用pH範囲の広いアルカリセルラーゼの提供が求
められていた。

〔問題点を解決するための手段〕

斯る実情において本発明者らは中性培地で生育し、しか
も作用の優れたアルカリセルラーゼを産生することので
きる菌株を得べく種々研究をおこなつた。

かかる問題点を解決するには、中性領域で生育する菌株
を宿主として、該当するセルラーゼ遺伝子をクローニン
グする、所謂遺伝子組換えの手法を取ることも可能であ
るが、アルカリ領域に至適pHを有するアルカリセルラー
ゼを生産する中性微生物を自然界に探索し、これを分離
することがより有効である。しかして、本発明者らは上
記微生物を自然界に求めた結果、栃木県芳賀郡の土壌よ
り分離した微生物は、上記要望を満すものであることを
見出し、本発明を完成した。

本発明アルカリセルラーゼを産生する菌株は、下に示す
ような菌学的性質を示す。なお、菌株の分類には、次に
示す１〜２５の培地を用いた。（表示は、重量％） 培地1.肉エキス，1.0；バクトペプトン，1.0；NaCl,0. 5；バクト寒天，1.5(pH 7.2) 培地2.肉エキス，1.0；バクトペプトン，1.0；NaCl,0. 5；（pH 7.2） 培地3.肉エキス，1.0；バクトペプトン，1.0；NaCl,0. 5；ゼラチン，1.0(pH 7.2) 培地4.バクトリトマスミルク，10.0 培地5.バクトペプトン，1.0；KNO₃,0.1 培地6.バクトペプトン，1.0；NaNO₃,1.0 培地7.バクトペプトン，0.7；NaCl,0.5；ブドウ糖，0.5 (pH 7.0) 培地8.バクトペプトン，1.0 培地9.ＴＳＩ寒天（栄研化学製）：指示量 培地10.肉エキス，1.0；バクトペプトン，1.0；NaCl,0. 5；可溶性澱粉，0.2；寒天，1.5 培地11.NaNH₄HPO₄・4H₂O,0.15；KH₂PO₄,0.1；MgSO₄・7H ₂O,0.02：クエン酸ナトリウム，0.25(pH 6.8） 培地12.クリステンセン(Christensen)培地（栄研化学 製）：指示量 培地13.ブドウ糖，1.0；KH₂PO₄,0.1；MgSO₄・7H₂O,0.0 5；KCl,0.02；窒素源，0.1(pH 7.2） 窒素源は、硝酸ナトリウム及び硫酸アンモニウ
ムを用いた。

培地14.キングＡ培地“栄研”（栄研化学製）：指示量 培地15.キングＢ培地“栄研”（栄研化学製）：指示量 培地16.尿素培地“栄研”（栄研化学製）：指示量 培地17.チトクローム・オキシダーゼ試験用濾紙（日水 製薬製） 培地18.３％過酸化水素水 培地19.ＯＦ基礎培地（Difco社製）：指示量 培地20.(NH₄)₂HPO₄,0.1；KCl,0.02 ；MgSO₄・7H₂O,0.02；酵母エキス，0.02 ；バクト寒天，2.0；ＢＣＰ（0.2％溶液）， 0.4 培地21.バクト・サブロー・デキストロース寒天培地（D ifco社製）：指示量 培地22.肉エキス，0.3；バクトペプトン，0.5；酵母エ キス，1.0；グリセリン，2.0 培地23.フエニルアラニンマロン酸塩培地（日水製薬社 製）：指示量 培地24.スキムミルク，5.0；バクト寒天，1.5 培地25.肉エキス，0.3；バクトペプトン，0.5；Ｌ−チ ロシン，0.5；バクト寒天，1.5 （菌学的性質） (a)顕微鏡的観察結果 菌体の大きさは、0.４〜0.８μｍ×1.５〜4.０μｍの桿
菌であり、菌体の一端に楕円形の内生胞子（0.８〜1.２
μｍ×1.２〜1.５μｍ）を作る。周鞭毛を有し運動性が
ある。グラム染色は不定。抗酸性はない。

(b)各種培地に於ける生育状態 肉汁寒天平板培養（培地１） 生育状態は弱い。集落の形状は円形であり、表面は円
滑、周縁も円滑である。又集落の色調は白色半透明で光
沢がある。

肉汁寒天斜面培養（培地１） 生育は弱く、その状態は拡布状で光沢が有り、白色半透
明である。

肉汁液体培養（培地２） 生育し、混濁する。

肉汁ゼラチン穿刺培養（培地３） 生育するが、その状態は弱く、ゼラチンの液化は認めら
れない。

リトマスミルク培地（培地４） ミルクの凝固、液化は認められない。又、リトマスの変
色も認められなかつた。

(c)生理学的性質 硝酸塩の還元及び脱窒反応（培地５，６） 共に、陰性。

ＭＲテスト（培地７） 陰性、陽性は、はつきりせず（pH 5.2）。

ＶＰテスト（培地７） 陰性（pH 5.2）。

インドールの生成（培地８） 陰性。

硫化水素の生成（培地９） 陰性。

澱粉の加水分解（培地１０） 陽性。

クエン酸の利用（培地１１，１２） コーサ培地及びクリステンセン培地で、ともに陰性。

無機窒素源の利用（培地１３） 硝酸塩、アンモニウム塩ともに陰性。

色素の生成（培地１４，１５） 陰性。

ウレアーゼ（培地１６） 陰性。

オキシダーゼ（培地１７） 陽性。

カタラーゼ（培地１８） 陽性。

生育の範囲（培地２） 生育の温度範囲は１５〜３７℃、生育最適温度範囲は２
５〜３０℃。

生育のpH範囲はpH５〜１０、生育最適pH範囲はpH６〜９
であつた。

酸素に対する態度 通性嫌気性。

Ｏ−Ｆテスト（培地１９） 生育するが、好気嫌気共に生育悪し。

糖の利用性（＋：利用する、−：利用しない） 1.Ｌ−アラビノース ＋ 2.Ｄ−キシロース ＋ 3.Ｄ−グルコース ＋ 4.Ｄ−マンノース ＋ 5.フラクトース ＋ 6.Ｄ−ガラクトース ＋ 7.麦芽糖 ＋ 8.シヨ糖 ＋ 9.乳糖 ＋ １0.トレハロース ＋ １1.Ｄ−ソルビツト ± １2.Ｄ−マンニツト ＋ １3.イノシツト − １4.グリセリン ± １5.デンプン ＋ ＶＰ培地に於けるpH（培地７） pH 5.2 食塩含有培地に於ける生育（培地１を改変） ５％で生育せず。

７％で生育せず。

１０％で生育せず。

pH 5.7に於ける生育（培地２１） 生育せず。

ジハイドロキシアセトンの生成（培地２２） 陰性、陽性は、はつきりせず。

フエニルアラニンの脱アミノ化（培地２３） 陰性。

カゼインの分解（培地２４） 陰性。

チロシンの分解（培地２５） 陰性。

以上の菌学的性質について、バージーズ・マニユアル・
オブ・デイタミネイテイブ・バクテリオロジー（Berge
y′ｓ Mannual of Determinative Bacteriology）、第
８版及びザ・ジーナス・バチルス（“The Genus Bacill
us”，Ruth,E.Gordon著Agriculture Handbook No.４２
７，Agricultural Research Service,U.S.Department o
f Agriculture,Washington D.C.(1973)）を参照し比
較、検索した結果、本発明の菌株は、有胞子桿菌である
バチルス（Bacillus）属の一種であると認められる。そ
して本菌株は、最近、掘越と秋葉（“Alkalophilic Mic
roorganism”，Japan Scientific Society Press(Toky
o),1982刊年）の主張している、所謂好アルカリ性（Alk
alophilic）微生物がpH８以上のアルカリ培地に於いて
生育し、これ以下の中性pH領域では生育出来ないのに対
し、弱酸性領域からアルカリ領域（pH５〜１０）に於い
て生育が可能である事からこの好アルカリ性微生物とは
明らかに異なるものであり、一般的な中性で生育するバ
チルス属微生物と判断できる。

更に本菌株を他の公知のバチルス属の菌株と比較する
と、最も類縁の種としてバチルス・サーキユランス（Ba
cillus circulans）が挙げられる。しかしながら、公知
のサーキユランスに属する菌株と本菌株とを比較する
と、ゼラチンの加水分解能の点に於いて相異する。更に
上記公知菌株は少なくともアルカリセルラーゼを産生し
ないので、本発明者らは本菌株を新菌株と判断し、バチ
ルス エスピー ＫＳＭ−４２５と命名して工業技術院
微生物工業技術研究所に寄託した（ＦＥＲＭ Ｐ−９０
０７）。

この菌株を用いて本発明のアルカリセルラーゼ Ｋ−４
２５を得るには、培地に該菌株を接種し、常法に従つて
培養すれば良い。培地中には、資化し得る炭素源及び窒
素源を適当量含有せしめておくことが好ましい。この炭
素源及び窒素源については特に制限はないが、その例と
しては、窒素源としてコーングルテンミール、大豆粉、
コーンスチープリカー、カザミノ酸、酵母エキス、フア
ーマメデイア、イワシミール、肉エキス、ペプトン、ハ
イプロ、アジパワー、コーンソイビーンミール、コーヒ
ー粕、綿実油粕、カルチベータ、アミフレツクス及びア
ジプロン、ゼスト、アジツクスなどが挙げられる。又、
炭素源としては、籾殻、麸、濾紙、一般紙類、おが屑な
どの植物繊維質、廃糖蜜、転化糖、カルボキシメチルセ
ルロース（ＣＭＣ）、アビセル、セルロース綿、キシラ
ン、ペクチンに加え、資化し得る炭素源、例えば、アラ
ビノース、キシロース、グルコース、ガラクトース、マ
ンノース、フラクトース、麦芽糖、シヨ糖、乳糖、トレ
ハロース、マンニツト、ソルビツト、グリセリン、可溶
性デンプンや資化し得る有機酸、例えば酢酸などが挙げ
られる。また、その他、リン酸、Mg²⁺,Ca²⁺,Mn²⁺,Zn²⁺,
Co²⁺,Na⁺,K⁺などの無機塩や、必要であれば、無機、有
機微量栄養源を培地中に適宜添加することもできる。

斯くして得られた培養物中からの目的物質であるセルラ
ーゼ Ｋ−４２５の採取及び精製は、一般の酵素の採取
及び精製の手段に準じて行なうことが出来る。即ち、遠
心分離又は濾過等の通常の固液分離手段により菌体を培
養液から除去して粗酵素液を得ることが出来る。この粗
酵素液は、そのまま使用することも出来るが、必要に応
じて、塩析法、沈澱法、限外過法等の分離手段により
粗酵素を得、更に公知の方法により精製結晶化して、精
製酵素として使用することも可能である。

斯くして得られた本発明のアルカリセルラーゼ Ｋ−４
２５は、以下に示す酵素学的性質を有する。なお、酵素
活性の測定は、以下の方法に従つて行ない、用いた緩衝
液は次の通りである。

pH３〜８ マクルベイン緩衝液 pH８〜１１ グリシン−水酸化ナトリウム緩衝液 pH１２〜１３ 塩化カリウム−水酸化ナトリウム緩衝
液 酵素活性測定法： (1)ＣＭＣアーゼ活性 １０mgＣＭＣ（Ａ−０１Ｌ，山陽国策パルプ社）、１０
０μmol各種緩衝液（マクルベイン、リン酸、グリシン
−NaOH等）を含む基質溶液0.９mlに0.１mlの酵素溶液を
加え、３０℃、２０分反応した、反応後、３，５−ジニ
トロ−サリチル酸（３，５−dinitro-salicylic acid(D
NS)）法にて還元糖の定量に行つた。すなわち、反応液
1.０mlにＤＮＳ試薬1.０mlを加え、５分間、１００℃で
加熱発色させ、冷却後、4.０mlの脱イオン水を加えて希
釈した。これを波長５３５nmで比色定量した。酵素力価
は、上記の条件下で１分間に１μmolのグルコースに相
当する還元糖を生成する酵素量を１単位とした。

(2)ｐ−ニトロフエニルセロビオシド分解活性0.１μmol
ｐ−ニトロフエニルセロビオシド（シグマ社）、１００
μmolリン酸緩衝液（pH7.０）を含む反応液1.０ml中に
適当量のＣＭＣアーゼを３０℃で作用させた後、１ＭNa
₂CO₃を0.３ml、脱イオン水を1.７ml順次加え、遊離する
ｐ−ニトロフエノールを４００nmで比色定量した。酵素
力価は、上記の条件下で１分間に１μmolのｐ−ニトロ
フエノールを遊離させる酵素量を１単位とした。

(3)アビセル、セルロース粉末 紙分解活性 ２０mgアビセル（メルク社）、２００μmolリン酸緩衝
液（pH7.０）を含む反応液2.０ml中に適当量の酵素液を
加え、３０℃、２５０rpmで振とうしながら作用させ
た。反応後、冷却遠心分離（５℃、３０００rpm、２０
分）を行い、その上清1.０mlを３，５−ジニトロ−サリ
チル酸（３，５−dinitro-salicylic acid(DNS)）法に
て還元糖の定量を行つた。セルロース粉末分解活性はセ
ルロース粉末（東洋濾紙社）を、濾紙分解活性は濾紙
（セルラーゼ活性検定用濾紙、東洋No.５１−特）を用
い、アビセラーゼ活性の時と同様に行つた。酵素力価
は、上記の条件下で１分間に１μmolのグルコースに相
当する還元糖を生成する酵素量を１単位とした。

(4)セロビアーゼ活性 １０mgセロビオース（関東化学社）、１００μmolリン
酸緩衝液（pH 7.０）を含む反応液1.０ml中に適当量の
酵素液を３０℃で作用させた後、１００℃、２分処理し
酵素を失活させた後、生成グルコース量をムロターゼ・
ＧＯＤ法（Glucose C-Test、和光純薬工業社）で測定し
た。酵素力価は、上記の条件下で１分間に２μmolのグ
ルコースを生成する酵素量を１単位とした。

（酵素学的性質） (1)作用 ＣＭＣ、セルロース、濾紙、アビセル等の繊維素によく
作用し、これらを溶解せしめ、グルコース等の還元糖を
生成する。

(2)基質特異性 本酵素は、ＣＭＣの他にも、セルロースパウダー、アビ
セル、濾紙及びｐ−ニトロフエニルセロビオシド、セロ
ビオースに対する活性を有していた。セロビオース分解
活性は、ＣＭＣアーゼ活性の約４％であつた。

(3)作用pH及び至適pH 作用pH範囲は、3.５〜１2.５と極めて広範囲にわたる。
最適pHは、８〜１０と幅広く、5.５〜１0.５の範囲に於
いても至適pHに於ける活性の５０％以上の相対活性を有
しており、従つて過去に研究されたアルカリセルラーゼ
の中でも最もアルカリ側で充分活性が発揮される酵素と
言える（第１図）。

(4)pH安定性 各々のpHで３０℃、１時間保持した後の残存活性を測定
し、pH安定性を調べた。その結果、pH５〜１１で極めて
安定で失活せず、pH３〜１２に於いても、約５０％以上
の活性を維持していた。本酵素は、このように高アルカ
リ領域に於いても充分に安定である（第２図）。

(5)最適温度 作用温度は、１５〜７５℃の広範囲にわたり、その至適
温度は５０℃であつた。又、３５〜５５℃の範囲に於い
ても、至適温度での活性の５０％以上を有していた（第
３図）。

(6)温度安定性 至適pHに於いて、３０分間各温度で処理した後、残存活
性を測定した結果、３０℃では安定しており、５０℃に
於いても約５０％の残存活性を有していた（第４図）。

(7)分子量 本酵素をセフアデツクス Ｇ−１００（SephadexＧ−１
００）によるゲル濾過法に基づき分子量を測定したとこ
ろ、約3.５万であつた。

(8)金属イオンの影響 本酵素について、各種金属イオン（Al³⁺,Fe³⁺,Ba²⁺,Ca
²⁺,Cd²⁺,Co²⁺,Cr²⁺,Cu²⁺,Fe²⁺,Hg²⁺,Mn²⁺,Mo²⁺,Ni²⁺,Pb
²⁺,Zn²⁺,Li⁺,K⁺,Na⁺）を活性測定時に共存させて、その
影響を検討した（K⁺,Na⁺については濃度を５０mMとし、
他のイオンについては、１mMとした）。その結果、H
g²⁺,Ba²⁺で阻害が、Co²⁺により活性化が認められた。

(9)界面活性剤の影響 各種界面活性剤（例えば、ＬＡＳ、ＡＳ、ＥＳ、ＡＯ
Ｓ、α−ＳＦＥ、ＳＡＳ、石鹸、ポリオキシエチレンセ
カンダリーアルキルエーテルの酵素活性に及ぼす影響を
調べた。本酵素を界面活性剤0.０５％溶液で３０℃、１
５分間処理後、活性測定を行つた。その結果、何れの界
面活性剤によつても阻害を受けなかつた。強力なデター
ジエントであるソデイウム・ドデシルサルフエートによ
つても活性の阻害は認められなかつた。

(10)プロテアーゼ耐性 洗剤用プロテアーゼ、例えばＡＰＩ−２１（昭和電
工）、マクサターゼ（ギスト社）及びアルカラーゼ（ノ
ボ社）を、活性測定時に共存（0.１mg／ml）させてその
影響を調べたところ、何れのプロテアーゼに対しても強
い耐性を有することがわかつた。

(11)キレート剤の影響 キレート剤 ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、トリポリリン酸ソー
ダ、ゼオライト、クエン酸を活性測定時に共存させ、そ
の影響を検討したが、ほとんど阻害は認められなかつ
た。

〔発明の効果〕

本発明のアルカリセルラーゼ Ｋ−４２５は、従来のア
ルカリセルラーゼに比較して高アルカリ側（pH１０）に
至適pHを有している。その上、pH5.５〜１0.５の広範囲
に於いて、至適pHにおける活性の５０％以上の活性を有
しており更にpH５〜１１に於いても極めて安定である。

また、界面活性剤、プロテアーゼ、キレート剤等の洗浄
剤配合成分によつてもほとんど阻害を受けない。したが
つて、本酵素は洗浄剤組成物の配合成分として有利に使
用することができるものである。

〔実施例〕

以下、実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説明する。

参考例１ 栃木県芳賀郡市貝町の土壌を薬匙一杯（約0.５ｇ）、滅
菌生理食塩水に懸濁し、８０℃で１０分間熱処理した。
この熱処理液の上清を適当に希釈して、分離用寒天培地
（培地１）に塗布した。次いで、これを３０℃にて３日
間培養し、集落を形成させた。集落の周囲にＣＭＣの溶
解に基づく透明帯を形成するものを選出し、ＣＭＣアー
ゼ生産菌を取得した。更に、取得菌を培地２の液体培地
に接種し、３０℃で３日間振盪培養した。培養後、遠心
分離した上清液についてＣＭＣアーゼ活性を、pH３〜１
３にて測定し、アルカリセルラーゼ生産菌をスクリーニ
ングした。

上述の方法により、本発明のバチルス エスピーＫＳＭ
−４２５株（ＦＥＲＭ Ｐ−９００７）を取得すること
が出来た。

培地1.ＣＭＣ ２％ ポリペプトン 0.5％ 酵母エキス 0.05％ KH₂PO₄ 0.1％ Na₂HPO₄・12H₂O 0.25％ MgSO₄・7H₂O 0.02％寒天 0.75％ pH 6.8 培地2.CMC １％ ポリペプトン １％ 酵母エキス 0.5％ KH₂PO₄ 0.1％ Na₂HPO₄・12H₂O 0.25％MgSO₄・7H₂O 0.02％ pH 6.8 実施例１ 参考例１で得たバチルス エスピーＫＳＭ−４２５株を
同参考例の液体培地２に接種し、３０℃で３日間振盪培
養した。培養後、菌体を遠心分離して除き、粗酵素液を
得た。この粗酵素液１に対してドライアイス−エタノ
ール中で、３のエタノールを加え、生じた沈澱を遠心
分離し、更に凍結乾燥を行ない、乾燥粉末として、アル
カリセルラーゼ Ｋ−４２５（比活性^＊１０単位／ｇ）
１０ｇを得た。

＊ 酵素活性はpH９に於ける測定値である。

実施例２ ＣＭＣを蔗糖に代え、ポリペプトンを７％ＣＳＬに代え
る以外は参考例１の液体培地２と同じ組成の培地にバチ
ルス エスピーＫＳＭ−４２５株を接種し、３０℃で２
日間振盪培養した。この培養物を遠心分離し、得られた
上清のＣＭＣアーゼ活性を測定したところ１６０単位／
であつた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、酵素反応pHと相対活性の関係を示す図面であ
る。 第２図は、酵素処理pHと相対活性の関係を示す図面であ
る。 第３図は、酵素反応温度と相対活性の関係を示す図面で
ある。 第４図は、酵素処理温度と相対活性の関係を示す図面で
ある。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】次の酵素学的性質を有するアルカリセルラ
   ーゼＫ−425。 (1)作用 カルボキシメチルセルロース、セルロース、濾紙、アビ
   セル等の繊維素によく作用し、これらを溶解せしめ、グ
   ルコース等の還元糖を生成する。 (2)基質特異性 カルボキシメチルセルロースの他にも、セルロースパウ
   ダー、アビセル、濾紙及びｐ−ニトロフェニルセロビオ
   シド、セロビオースに対する活性を有する。 (3)作用pH及び最適pH 作用pH範囲は、3.5〜12.5である。最適pHは、８〜10で
   あり、5.5〜10.5の範囲に於いても最適pHに於ける活性
   の50％以上の相対活性を有する。 (4)pH安定性 pH５〜11で極めて安定で失活せず、pH３〜12に於いて
   も、約50％以上の活性を維持する。 (5)最適温度 作用温度は、15〜75℃の広範囲にわたり、その至適温度
   は50℃である。又、35〜55℃の範囲に於いても、至適温
   度での活性の50％以上を有する。 (6)分子量 約3.5万（セファデックスＧ１００を用いたゲル濾過法
   による） (7)金属イオンの影響 Hg²⁺及びBa²⁺により阻害され、Co²⁺により活性化され
   る。 (8)界面活性剤の影響 ＬＡＳ、ＡＳ、ＥＳ、ＡＯＳ、α−ＳＦＥ、ＳＡＳ、石
   鹸、ポリオキシエチレンセカンダリーアルキルエーテル
   はほとんど活性を阻害しない。 (9)プロテアーゼ耐性 プロテアーゼに対して耐性を有する。 (10)キレート剤の影響 ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、クエン酸、トリポリリン酸ソー
   ダ、ゼオライトは活性を阻害しない。