JPH0655680B2

JPH0655680B2 - 悪性腫瘍用ヒトモノクロナル抗体複合剤

Info

Publication number: JPH0655680B2
Application number: JP60240242A
Authority: JP
Inventors: 秀昭萩原; 康幸青塚
Original assignee: 萩原義秀
Priority date: 1985-10-26
Filing date: 1985-10-26
Publication date: 1994-07-27
Anticipated expiration: 2009-07-27
Also published as: JPS6299332A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、それ自体単独の使用では悪性腫瘍細胞に対し
て実用性ある死滅効果を示させることの困難な種類及び
／又は量の悪性腫瘍結合性ヒトモノクロナル抗体の少な
くとも二種を含有し、悪性腫瘍細胞に対して全く予想外
且つ驚くべき高度の死滅効果を選択的に発揮できる卓越
した相剰的効果を示す悪性腫瘍処理用のヒトモノクロナ
ル抗体複合剤に関する。

更に詳しくは、本発明は、悪性腫瘍結合性の抗体生産能
を有するヒト／ヒト・ハイブリドーマが生産したヒトモ
ノクロナル抗体（α）、及び同種の悪性腫瘍に結合性の
抗体生産能を有する他のヒト／ヒト・ハイブリドーマが
生産したヒトモノクロナル抗体（β）の少なくとも一種
を含有することを特徴とする悪性腫瘍処理用のヒトモノ
クロナル抗体複合剤に関する。

従来、悪性腫瘍結合性の抗体生産能を有するヒト／ヒト
・ハイブリドーマが生産したヒトモノクロナル抗体を包
含して、病原性抗原特異的ヒト免疫疫グロブリン含有物
質又は該ヒト免疫グロブリンの生産方法及び斯くして得
られる悪性腫瘍結合性ヒトモノクロナル抗体について
は、例えば、特開昭５８−２０１９９４号、特開昭５９
−１３５８９８号、特開昭５９−１３７４９７号などに
開示され、知られている。しかしながら、これら提案に
は、ヒト／ヒト・ハイブリドーマが生産した複数種のヒ
トモノクロナル抗体の併用に関する知見については、全
く記載も示唆もされていない。

一方、ヒト悪性黒色腫結合性の抗体を生産するマウス／
マウス・ハイブリドーマが生産したマウスモノクロナル
抗体及び同種の腫瘍に結合性の抗体を生産する他のマウ
ス／マウス・ハイブリドーマが生産したマウスモノクロ
ナル抗体を併用した試験に関して、The Journal of Imm
unology,vol,１２７、NO.１、July，１９８１、ｐ．１
５７〜１６０の報告が知られている。この報告によれ
ば、補体（complement）の共存下での上記併用によつて
相剰効果が発明したことが報告されている。しかしなが
ら、この報告には、ヒト／ヒト・ハイブリドーマが生産
した複数種のヒトモノクロナル抗体の併用に関しては全
く記載も示唆もされていない。

本発明者等は、上記特開昭５８−２０１９９４号、特関
昭５９−１３５８９８号、特開昭５９−１３７４９７号
などに開示の方法で得ることのできるヒト／ヒト・ハイ
ブリドーマが生産したヒトモノクロナル抗体、とくに悪
性腫瘍結合性のヒトモノクロナル抗体を用いる悪性腫瘍
の処置に関して研究を進めてきた。

その結果、それ自体単独の使用では、悪性腫瘍細胞に対
して実用上満足すべき死滅効果を発揮させることの困難
な種類及び／又は悪性腫瘍結合性ヒトモノクロナル抗体
の少なくとも二種を併用することによつて、該悪性腫瘍
細胞に対して全く予想外且つ驚くべき高度の死滅効果を
選択的に発揮させることが可能となることを発見した。

本発明者等の研究によれば、後記試験例に示すように、
悪性腫瘍結合性の抗体生産能を有するヒト／ヒト・ハイ
ブリドーマが生産したヒトモノクロナル抗体（α）の、
それ自体単独では該腫瘍に対して実質的な死滅効果を示
さない量と、同種の悪性腫瘍結合性の抗体生産能を有す
る他のヒト／ヒト・ハイブリドーマが生産したヒトモノ
クロナル抗体（β）の、同様な量での併用によつて、補
体の保存下において優れた相剰的死滅効果を該悪性腫瘍
細胞に対して選択的に発揮させ得ることが発見された。

更に、前記The Journal of Immunology,vol.１２７、N
O.１、july,１９８１、ｐ．１５７〜１６０の報告によ
れば、該二種のマウスモノクロナル抗体は、１ケの悪性
黒色腫細胞の同じ抗原の２つの結合サイト（site）ｐ９
７^ａ及びｐ９７^ｂに結合することが、競合結合分析（co
mpetition binding assays）により示されたと記載され
ている。本発明者等の研究によれば、本発明複合剤にお
けるヒトモノクロナル抗体（α）とヒトモノクロナル抗
体（β）は、１ケの悪性腫瘍細胞たとえば１ケの脳腫瘍
細胞Ｕ−３７３ＭＧ（ＡＴＣＣＨＴＢ１７）の異なる
抗原の１つの結合サイトに夫々に結合することが、アフ
イニテイ・クロマトグラフイ及び螢光抗体法により確認
された。このことは、上記の二種のマウスモノクロナル
抗体の場合について知られた作用機構とは全く異つて、
本発明複合剤は、悪性腫瘍細胞に対して遥かに増大され
た攻撃の機会を持つ作用機構を有することを意味し得
る。そして、その作用機構の詳細は未だ明らかではない
が、後記試験例に示すように、それ自体単独では悪性腫
瘍に対して実質的な死滅効果を示さない量のヒトモノク
ロナル抗体（α）と同様な量のヒトモノクロナル抗体
（β）の併用によつて、約８０％もしくはそれ以上の高
度の死滅効果が達成されることがわかつた。これに対し
て上記報告によれば、上記二種のマウスモノクロナル抗
体の併用については、その作用機構が異るのに加えて、
夫々単独では実質的な死滅効果を示さない量での併用に
よつて、高々約７０％の死滅効果の達成であることが示
されているにすぎない。

従つて、本発明の目的は新しいタイプの悪性腫瘍用ヒト
モノクロナル抗体複合剤を提供するにある。

本発明の上記目的及び更に多くの他の目的ならびに利点
は、以下の記載から一層明らかとなるであろう。

本発明によれば、悪性腫瘍結合性の抗体生産能を有する
ヒト／ヒト・ハイブリドーマが生産したヒトモノクロナ
ル抗体（α）及び同種の悪性腫瘍に結合性の抗体生産能
を有する他のヒト／ヒト・ハイブリドーマが生産したヒ
トモノクロナル抗体（β）の少なくとも一種を含有する
ことを特徴とする悪性腫瘍用ヒトモノクロナル抗体複合
剤が提供できる。

本発明の複合剤において用いる悪性腫瘍結合性の抗体生
産能を有するヒト／ヒト・ハイブリドーマが生産したヒ
トモノクロナル抗体としては、例えば、特開昭５８−２
０１９９４号、特開昭５９−１３５８９８号、特開昭５
９−１３７４９７号などに開示されたそれ自体公知の手
法により得ることのできる悪性腫瘍結合性の抗体生産能
を有するヒト／ヒト・ハイブリドーマを使用し、これら
を提案に公知の方法で生産し、採取した悪性腫瘍結合性
のヒトモノクロナル抗体が利用できる。

本発明においては、例えば、上記のようにして得ること
のできる悪性腫瘍結合性の抗体生産能を有するヒト／ヒ
ト・ハイブリドーマが生産したヒトモノクロナル抗体
（α）と、同様にして形成できる同種の悪性腫瘍に結合
性の抗体生産能を有する他のヒト／ヒト・ハイブリドー
マが生産したヒトモノクロナル抗体（β）の二種、或は
同様な抗体生産能を有する更に他のヒト／ヒト・ハイブ
リドーマが生産したヒトモノクロナル抗体（γ）の三
種、或は更に四種又はそれ以上の如き、同種の悪性腫瘍
結合性の抗体生産能を有する少なくとも二種のヒト／ヒ
ト・ハイブリドーマが夫々生産した少なくとも二種のヒ
トモノクロナル抗体が併用される。

このようなヒトモノクロナル抗体の例としては、前記特
開昭５８−２０１９９４号、特開昭５９−１３５８９８
号及び特開昭５９−１３７４９７号に詳しく開示されて
いるヒト／ヒト・ハイブリドーマＣＬＮ／ＳＵＺＨ５
株（ＡＴＣＣＨＢ８２０６；微工研寄託受託拒否通知
書、通知番号５７微寄文第６３７号）が生産したヒトＩ
ｇＭ、ヒト／ヒト・ハイブリドーマＣＬＮ／ＳＵＺＨ
１１株（ＡＴＣＣＨＢ８３０７；微工研寄託受託拒否
通知書、通知番号５７微寄文６３８号）が生産したヒト
ＩｇＧ、更には、同一出願人の出願に係わる特開昭６０
−２１０３１０号（昭和６０年９月２４日付出願）に詳
しく記載されたヒト胃癌患者のヒトＢ−セルとヒトリン
パ芽球細胞株のサブクローン例えばＵＣ７２９−６株
（ＡＴＣＣＣＲＬ８０６１；微工研寄託受託拒否通知
書、通知番号５７微寄文６６４号）とのヒト／ヒト・ハ
イブリドーマＳＬＮＦ１０（微工研寄託受託拒否通知
書、通知番号６０微寄文第１１９７号）が生産したヒト
ＩｇＧ、その他、上記特開昭５８−２０１９９４号など
に公知の方法に従つて、同様にして形成できる種々の悪
性腫瘍結合性のヒト／ヒト・ハイブリドーマが生産する
ヒトモノクロナル抗体を挙げることができる。

上記に例示したヒト／ヒト・ハイブリドーマＣＬＮ／Ｓ
ＵＺＨ５株が生成したヒトＩｇＭは、たとえば、子宮
頚部癌由来の株化細胞ＨｅｌａおよびＣａＳｋｉ、肺癌
由来の株化細胞Ｃａｌｕ−１、ＳＫ−ＭＥＳ−１および
Ｔ２９３Ｈ、前立腺癌由来のＬｎ−Ｃｏｐ、胃癌由来の
株化細胞ＡＧＳ、悪性黒色腫由来の株化細胞Ｇ３６１な
どの悪性腫瘍に対して結合性であり、ヒト／ヒト・ハイ
ブリドーマＣＬＮ／ＳＵＺＨ１１株が生産したヒトＩ
ｇＧは、たとえば、子宮頚部癌由来の株化細胞Ｈａｌ
ａ、Ｈｅｌａ２２９およびＣａＳｋｉ、肺癌由来の株化
細胞Ａ５４９、前立腺癌由来の株化細胞ＰＣ−３、胃癌
由来の株化細胞ＡＧＳ、悪性黒色腫由来の株化細胞Ｇ３
６１、大腸腺癌由来の株化細胞Ｔ８４、脳腫瘍由来の株
化細胞Ｕ−３７３ＭＧなどの悪性腫瘍に対して結合性で
あり、またヒト／ヒト・ハイブリドーマＳＬＮＦ１０
株が生産したヒトＩｇＧは、たとえば、子宮頚部癌由来
の株化細胞Ｈｅｌａ２２９、肺癌由来の株化細胞Ａ５４
９、胃癌由来の株化細胞ＡＧＳ、脳腫瘍由来の株化細胞
Ｕ−３７３ＭＧ、悪性黒色腫由来の株化細胞Ｇ３６１、
前立腺癌由来の株化細胞ＰＣ−３などの悪性腫瘍に対し
て結合性であり、互いに少なくとも一つの共通した悪性
腫瘍に対して結合性であるので、適宜に選択組み合わせ
て利用することができる。

本発明の悪性腫瘍用ヒトモノクロナル抗体複合剤は、上
述したように、同種の悪性腫瘍結合性の抗体生産能を有
する少なくとも二種のヒト／ヒト・ハイブリドーマが、
夫々、生産した少なくとも二種のヒトモノクロナル抗体
を含有すればよく、各ヒト／ヒト・ハイブリドーマを別
個独立に培養して、各培養物から分離されたヒトモノク
ロール抗体を配合する態様で調製する必要はなく、両者
のヒト／ヒト・ハイブリドーマを一緒に培養して得られ
る両者のヒトモノクロナル抗体を混合状態で含有する培
養物からこれらを一緒に分離して得た少なくとも二種の
ヒト／ヒト・ハイブリドーマが夫々生産した少なくとも
二種のヒトモノクロナル抗体を含有する態様の複合剤で
あつてもよい。しかし、通常、前者の態様の採用が好ま
しい。

本発明の悪性腫瘍用ヒトモノクロナル抗体複合剤は、同
種の悪性腫瘍に結合性の抗体生産能を有する少なくとも
二種のヒトモノクロナル抗体（α）及び（β）を含有す
るほかに、製剤上公知の各種の生物製剤用添加剤その他
調製剤用添加剤を含有することができる。

このような添加剤の例としては、例えば、ヒト血清アル
ブミンなどの如き重合防止剤；例えば、マニトール、グ
ルコース、ヘキソース、フルクトース、シヨ糖などの如
き糖類；例えば、グリシン、グルタミン、イツロイシ
ン、ロイシン、メチオニン、バリン、アルギニン、トリ
プロフアン、スレオニンなどの如きアミノ酸類；例え
ば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、
リン酸塩、などの如き無機塩類；例えば、乳糖、可溶性
デンプンなどの如き賦形剤類；例えば、ステアリン酸マ
グネシウムなどの如き滑沢剤類；例えば軽質無水ケイ酸
などの如き分散収類；例えばヒドロキシコール酸などの
如き界面活性剤類；例えば、ヒドロキシプロピルセルロ
ース、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース
などの如き結合剤類；例えば、ポリエチレングリコー
ル、グリセリン、ワセリン、パラフイン、ろう、グリセ
ロゼラチンなどの如き基剤類；例えば、オリーブ油、ダ
イズ油、トウモロコシ油、ラツカセイ油、ゴマ油、ツバ
キ油、豚油、カカオ脂、精製ラノリンなどの如き油脂
類；例えば、クレゾール、クロロブタノール、ベンジル
アルコール、パラオキシ安息香酸エステル類、チメロサ
ール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウムなど
の如き保存剤類などを例示することができる。

本発明の悪性腫瘍用ヒトモノクロナル抗体複合剤は、該
腫瘍の種類や発生部位などによつても、各種の剤形で施
用することができる。このような剤形としては、各種の
注射薬剤形、経口投与薬剤形、点滴薬剤形、坐薬剤形、
点眼薬剤形、パツプ剤形などの剤形であることができ
る。このような剤形への調剤手法それ自体はよく知られ
おり、本発明において利用できる。

本発明の悪性腫瘍用ヒトモノクロナル抗体複合剤は、悪
性腫瘍の種類や発生部位に適した各種の投与方法で適用
できる。例えば、局所注射、皮下注射、筋肉内注射、静
脈注射、動脈注射などの注射施用、点滴施用、局所外用
施用、点眼施用、内視鏡による噴霧および注射施用、吸
入施用などの投与方法を挙げることができる。

本発明の悪性腫瘍用ヒトモノクロナル抗体複合剤は補体
の共存下において優れた効果を発揮するが、補体は体内
に存在するので、本発明剤にとくに混合しておく必要は
ない。本発明複合剤は各種の悪性腫瘍の診断、予防、治
療、再発・転位防止などの処置に有用である。このよう
な悪性腫瘍の例としては、たとえば、脳腫瘍、舌癌、喉
頭癌、肺癌、食道癌、胃癌、腸癌、肝癌、膵臓癌、乳
癌、子宮癌、腎癌、前立腺癌、血液癌、皮膚癌骨肉腫な
どを挙げることができる。

本発明複合剤の投与量は、ヒトモノクロナル抗体の組み
合わせ、投与対象腫瘍、症状などにより適当に選択手更
できるが、投与経口の場合約１０μｇ〜約２mg／kg／
日、注射投与の場合約２０μｇ〜２mg／kg／日、外用軟
膏の如き局所投与の場合には基材１ｇ当り約１mg〜約１
０mg、坐薬投与の場合には基材１ｇ当り約１mg〜約２０
mgの如き投与量を例示することができる。

以下、本発明ヒトモノクロナル抗体複合剤の薬理効果に
ついて示す。

（試験例１）脳腫瘍細胞の１種であるグリオーマ細胞（ＣＵ−３７３
ＭＧ）を１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）を含むＤＦ培地
（ＤＭＥ：Ｆ−１２＝１：１）に懸濁させた。この細胞
懸濁液を９６個の穴をもつミクロプレートに細胞数１０
⁵／wellとなるようにまき、プレートに細胞を吸着させ
た。培地を取り除き、１０％牛胎児血清を含むＲＤＦ培
地（ＲＰＭＩ１６４０：ＤＭＥ：Ｆ−１２＝２：１：
１）で培養したヒト×ヒトハイブリドーマ（ＬＮ／ＳＵ
ＺＨ１１（由来濃度１０⁶／ml）の生産されたＩｇＧを
含む培養上清５０ml、１０％牛胎児血清を含むＲＤＦ培
地で培養したヒト×ヒトハイブリドーマＳＬＮＦ１０
（細胞濃度１０⁶／ml）の生産されたＩｇＧを含む培養
上清５０μ、及びラビツト由来の補体含有液５０μ
を加え、３７℃、５％ＣＯ_２条件下のインキユベーター
中で４時間培養を行つた。培養後培地を取り除き、0.25
％トリプシン溶液で細胞を処理した後0.2％トリパンブ
ルー染色液で死滅した細胞を染色し、染色されない生細
胞の数を血球計算盤で数えた。その結果を、後掲表１に
示した（Rwm NO.８）。

尚、比較のために、１０％牛胎児血清を含むＲＤＦ培地
にＵ−３７３ＭＧ細胞を補体なしに培養した対照例（Ru
n NO.１）、上記二種のＩｇＧ含有培養上清及び上記補
体含有液のうち、１つまたは２つを省略したほかは同様
に培養を行つた比較例（Run NO.２〜NO.７）の結果を該
表１に一緒に示してある。

以上の表１の結果から、ヒトモノクロナール抗体それぞ
れ単独では実質的な殺傷効果がない量（Run NO.２及びN
O.３参照）で、補体存在下、これらヒトモノクロナール
抗体を２種併用することによつて、Run NO.８に示され
るように、優れた相乗的な死滅効果が達成されることが
わかる。

（試験例２）脳腫瘍の１種であるグリオーマ細胞（Ｕ−３７３ＭＧ）
１×１０^４個を、ＤＭＥ：Ｆ−１２＝１：１の基礎培地
に１０％のＦＢＳを加えた培地中に植え込み、５日間培
養する。古い培地を取り除き、後掲表２に示す各Run N
O.１〜NO.８の構成成分濃度となるように、２００μ
の反応液を調整した。具体的には、２００μ中、補体
を加える場合には２５μの量、ＣＬＮ−ＩｇＧ（ＣＬ
Ｎ／ＳＵＺＨ１１が生産したＩｇＧ）は５μｇあるい
は１０μｇの量、ＳＬＮ−ＩｇＧ（ＳＬＮＦ１０が生
産したＩｉＧ）は５μｇあるいは１０μｇの量で用い
た。Run NO.１〜NO.８の各々の組成に構成された培養液
中で、上記Ｕ−３７３ＭＧ細胞を３７℃、５％ＣＯ_２イ
ンキユベーターで９時間培養を行つた。培養後培地を取
り除き、0.25％トリプシン溶液で細胞を処理した後、0.
2％トリパンブルー染色液で死滅した細胞を染色し、染
色されない生細胞の数を血球計算盤で、数えた。その結
果を後掲表２に示した。

表２の結果から、ヒトモノクローナル抗体それぞれ単独
では殺傷効果がない量で、補体存在下、これらヒトモノ
クローナルを２種併用することによつて、Run NO.８に
示されるように優れた相乗的な死滅効果が達成されるこ
とがわかる。

以下、本発明の複合剤の数例について示す。

以上をとり、日本薬局法注射法の製法により製する。

製剤例３（パスタ）ＣＬＮ−ＩｇＧ５０mg ＳＩＮ−ＩｇＧ５０mg 酸化亜鉛２５ｇデンプン２５ｇ白色ワセリン４８ｇマニトール２ｇ以上をとり、日本薬局法、座剤の製法により製する。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】悪性腫瘍結合性の抗体生産能を有するヒト
／ヒト・ハイブリドーマが生産したヒトモノクロナル抗
体（α）、及び同種の悪性腫瘍の異なる抗原に結合性の
抗体生産能を有する他のヒト／ヒト・ハイブリドーマが
生産したヒトモノクロナル抗体（β）の少なくとも一種
を含有することを特徴とする悪性腫瘍用ヒトモノクロナ
ル抗体複合剤。