JPH066058B2 - 酵素剤の製造法 - Google Patents

酵素剤の製造法

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Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は、酵素剤特に、低水分下にエステル交換する
機能に優れた酵素剤の製造法に関するものである。
〔従来の技術〕
リパーゼの基質特異性はエステル交換反応に有利に利用
することが出来る。しかし、元来、リパーゼは水と脂質
の界面で作用すると考えられており、油脂に対する水の
溶解度が約0.2%であることと関連してか、酵素を活性
化する少量の水、基質に対して0.2%以上の水の存在下
でエステル交換を行うことが多く(例えば特開昭52-104
506号)、そのような水分の系では、ジグリセリドの生
成量が多いという難点がある。
本出願人は、これより低い水分の領域、極端には工業的
に可及的水分を取り去った基質水分の系でも高いエステ
ル交換活性を有する酵素剤の製造法を提案したが(特開
昭56-1278087号)、より高いエステル交換活性を賦活で
きる方法を見い出したので、ここに提案するものであ
る。
〔発明目的を達成する為の手段〕
この発明は、リパーゼ活性を有する水和物質を脂肪酸誘
導体と接触下に乾燥することを骨子とする酵素剤の製造
法である。
この発明で「リパーゼ活性を有する物質」の「物質」
は、酵素又は酵素剤であって(以下「リパーゼ活性を有
する物質」を、特に誤解の生じない場合単に酵素又は酵
素剤という)、酵素剤は、沈着法、物理的吸着法、イオ
ン吸着法、包括法、架橋法、共有結合法などによって得
る所謂固定化酵素剤は勿論のこと、菌体内酵素や微生物
培養物も包含する。酵素剤の担体としては、ケイソウ
土、アルミナ、セライト、セルロース及びその他のセル
ロース誘導体、多孔性ガラス、ガラス繊維、ケイ酸ゲ
ル、フロリジル、イオン交換樹脂、二酸化チタン、カオ
リナイト、パーライト等が例示され、又酵素剤が他の適
当な添加物、例えば、2〜3価アルコール、ポリヒドロ
キシ化合物、蛋白質等を含むことは任意である。
酵素又は酵素剤は界面を形成するに足りる量の水の存在
下で「リパーゼ活性」即ち脂質分解性を呈することが必
要で、この活性を示さない酵素又は酵素剤はエステル交
換活性を賦活乃至増大させることができない。酵素又は
酵素剤は、α又はα′位に得意性を有する酵素(例えば
リゾープス属,アスペルギルス属、カンディダ属、ムコ
ール属、に属する微生物に由来する酵素、膵臓リバー
ゼ,米糠リパーゼ等)が特に有用であるが、α,α′位
に非特異性である酵素(例えば、ペニシリウム属、ジオ
トリクム属、コリネバクテリウム属、に属する微生物に
由来する酵素)なども使用することができる。
酵素又は酵素剤は水和された状態から乾燥され、少なく
とも乾燥初期において、該物質が脂肪酸誘導体と接触さ
れていることが必要である。
水和された状態は、水性媒体例えば、水、緩衝溶液、ア
セトン水溶液、アルコール水溶液等が、被水和物の全体
にいきわたる状態に置くことをいうが、後の乾燥工程の
時間を短くするためには酵素乃至酵素含有物の保水能力
を越える(即ち物理的に容易に脱水できる程度の)水性
媒体の量は可及的少なくすることが好ましい。
乾燥時に酵素乃至酵素剤と接触させる脂肪酸誘導体とて
は、脂肪酸、脂肪酸のアルカリ金属塩、ポリカルボン
酸、置換カルボン酸、オキシ酸、アミノ酸、アミド、及
び脂肪酸エステル(例えば脂肪酸の低級アルコールエス
テル、脂肪酸の高級アルコールエステル、ソルビタン脂
肪酸エステル、レシチン、その他の界面活性剤、及びト
リグリセリド)等が例示される。
上記接触状態に置くことにより、エステル交換活性の賦
活度が増大する理由は明らかではないが脂肪酸誘導体が
酵素のある部分に何等かの作用をして、乾燥過程におけ
る酵素乃至酵素剤の立体的配置をエステル交換に都合の
よい状態に保つことに寄与するのではないかと思われ
る。
脂肪酸誘導体の添加時期及び添加方法は、乾燥時に酵素
乃至酵素剤と接触状態にあることが必要である他は特に
制限はないが、好ましくは、酵素等を水溶液にして担体
と混合する時の水溶液中に溶解させたり乳化させたりし
て用い、或いは酵素水和物に噴霧しながら混合する方法
が比較的少量の脂肪酸誘導体の使用量でも均一に分散さ
せるのに有効である。
上記のような分散方法を取るためには、脂肪酸誘導体が
水溶性又は常温で液状であるのが一般に望ましい。又、
この発明により得る酵素剤の用途によっては、酵素基質
の汚染を避ける目的で適当な脂肪酸誘導体を選択するの
が望ましい。本発明者の検討した範囲では、炭素数12以
下の飽和脂肪酸若しくは炭素数22以下の不飽和脂肪酸の
1価低級アルコールとのエステル例えばエチルラウレー
トやエチルオレート等が最適であった。
酵素乃至酵素剤(担体を含む固形物全量換算)に対する
脂肪酸誘導体の使用量は、通常0.02%以上ないと効果に
乏しく、また10%以上になると使用量の増大に伴う効果
の増大が少なくなる。
乾燥方法は初期、即ち水和状態からある程度水分が低下
するまでの乾燥速度を緩慢にすることが一般に重要であ
る。この乾燥速度は、使用した酵素含有物中の成分や、
使用する担体の種類等により異なり一律に定め難いが、
次の要領により実験的に容易に定めることができる。即
ち、最初数種の乾燥速度で全工程を乾燥して適する乾燥
速度を求め、次に、途中で乾燥速度を速くしてもよい時
期を求めればよく、勿論作業効率をさほど問題としない
で、全工程を緩慢な乾燥速度で乾燥することも可であ
る。初期乾燥速度は、1時間当たりの含水率の低下でい
って、一般的には0.5より遅いことが望ましいが、担体
の状態に依存するところもあって、保水性の強い場合
で、粉状のものは1時間に0.3以下の含水率の低下、粒
径2mm程度の顆粒状のものは1時間に0.25以下の含水率
の低下より速くないことが概してより望ましい。製品酵
素剤の品質上最も好ましい緩慢さは一般的にいって0.1
の低下より遅い範囲にある。
乾燥手段としては、減圧による乾燥手段の他、相対的に
低湿度の気体(空気、窒素その他の不活性気体)と接触
させる所謂、通風乾燥、送風乾燥、透気乾燥、熱風乾燥
等の手段、相対的に低湿度の流体(蛋白質を変性せず且
つ水と一定の相溶性のある、グリセリン、プロピレング
リコール、ソルビット等の液体)と接触させる方法、ま
たはこれらの併用が挙げられ、乾燥速度を制御する手段
としては、乾燥に用いる流体との飽差を調節(流体中の
湿度を調節)したり、乾燥流体又は被乾燥物に与える熱
エネルギーを調製する方法等が挙げられる。しかし乾燥
時に熱供給は、被乾燥物の温度が上昇して酵素が失活す
るような過剰を避けるべきで、乾燥初期において媒体の
温度は通常50℃以下、酵素乃至酵素剤の品温としては通
常20℃以下が好ましい。
乾燥の程度は、酵素剤製品を利用する目的により異なる
が、一般には水分10%程度以下がよく、特に製品を水分
の低い系中で使用する場合には例えば水分5%以下にす
るなど、より低下させるのが好ましい。ある程度乾燥し
た酵素剤の脱水は、自体を反応基質例えばグリセリド中
に浸漬し、基質の加水分解に水を使用させることによっ
ても可能である。
〔実施例〕
以下この発明を実施例で説明する。
実施例1 市販リパーゼ(リゾープスデレマー起原)1部を冷水3.
5部に分散し、この分散物にカオリナイト2.5部をさらに
分散させることにより、リバーゼ及びカオリナイトを水
和し、さらに混合しながらエチルオレート0.0005〜0.5
を噴霧した。これを20℃で減圧乾燥して、水分2.5%の
酵素剤を得た。
上記酵素剤A又はDを種々の量用いて、パーム中融点画
分とエチルステアレートを1:1に配合した基質(基質
水分<0.01%)100部に40℃で作用(酵素剤3部使用の
場合、系中水分0.08%)させ、エステル交換の反応率約
80%まで反応させるのに要した時間(日数)は次のよう
であった。
さらに、系中水分が0.5%になるように水を加えた系で
酵素剤の使用部数2部でエステル交換反応させたが、エ
ステル交換反応率約80%に達する時間は酵素剤Aの場合
4日であったのに対して、酵素剤Dの場合2日であり、
比較的水分の多い系においてもエステル交換活性を賦活
することが示された。但し、前記系中水分が0.08%の系
でジグリセリド生成量が5%以下であったのに対して、
前記系中水分が0.5%の系でのジグリセリド生成量は約1
8%であった。
実施例2 市販リパーゼ(リゾープス・ニベウス起原)0.5〜2.0部
及びエチルラウレート0.05部を冷水3.0に分散し、この
分散物に珪藻土2.5部をさらに分散させることにより、
水和物を得、これをカラムに充填し、湿度50%の空気を
通過させることにより、水分1.8%の酵素剤を得た。
得られた酵素剤の酵素使用量(市販リパーゼそのもので
担体なしの量)に対応するエステル交換活性(前出Ka
値)の値は次表に示した。
又、エチルラウレートに代えてエチルステアレートを使
用したが、酵素溶液中での分散状態を良好にする作業性
に劣っていた。
実施例3 酵素剤調製時にエチルオレート0.05部に代えて、オレイ
ン酸、ソルビタンモノオレート、ラウリン酸ナトリウ
ム、グリセロールモノオレート、トリオレイン及びHLB
約5の蔗糖脂肪酸エステルを使用する他は実施例1と同
様にして酵素剤を製造した。これらのエステル交換活性
Ka値は、各々32.1、35.3、39.2、33.4、31.6及び33.8で
あった。
〔効果〕
以上のように、この発明によって、エステル交換活性の
賦活の程度の大きい酵素剤を得ることができ、反応時間
の低減乃至は酵素剤の使用量低減の効果がある。

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】リパーゼ活性を有する水和物質を脂肪酸誘
    導体の接触下に乾燥することを特徴とする酵素剤の製造
    法。
  2. 【請求項2】脂肪酸誘導体が、脂肪酸、脂肪酸の低級ア
    ルコールエステル、界面活性剤、及びトリグリセリドか
    ら選択される特許請求の範囲第(1)項記載の製造法。
  3. 【請求項3】脂肪酸誘導体が常温で液状である特許請求
    の範囲第(1)項記載の製造法。
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Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0665312B2 (ja) * 1987-12-09 1994-08-24 花王株式会社 油脂類のエステル交換反応方法
EP0320132B1 (en) * 1987-12-09 1995-06-21 Kao Corporation Immobilized enzyme and esterification and interesterification therewith
JP2749587B2 (ja) * 1988-04-11 1998-05-13 花王株式会社 固定化酵素の製造方法
US5032513A (en) * 1988-06-01 1991-07-16 Basf Corporation Process for the preparation of gamma and delta lactones
US5108916A (en) * 1989-06-05 1992-04-28 Rhone-Poulenc Rorer, S.A. Process for stereoselectively hydrolyzing, transesterifying or esterifying with immobilized isozyme of lipase from candida rugosa
US5177013A (en) * 1989-07-31 1993-01-05 Ajinomoto Co., Inc. Preparation of an immobilized lipase having a low water content without drying
CA2027649C (en) * 1989-10-20 1996-01-16 John Anthony Bosley Supported enzyme
DE69221024T2 (de) * 1991-05-18 1997-12-18 Mitsubishi Rayon Co Verfahren zur Herstellung von Ascorbinsäure-Estern oder Erythorbinsäure-Estern
DE4119281A1 (de) * 1991-06-12 1992-12-17 Basf Ag Verfahren zur herstellung von enzymzubereitungen
JP2678341B2 (ja) * 1993-09-27 1997-11-17 富士紡績株式会社 固定化リパーゼ
DE4344211A1 (de) * 1993-12-23 1995-06-29 Basf Ag Verfahren zur Erhöhung der Aktivität von hydrolytischen Enzymen
US5990266A (en) * 1997-12-04 1999-11-23 University Of Nebraska Degradable polyesters, a mixed culture of microorganisms for degrading these polyesters, and methods for making these substances
US6524637B2 (en) * 1998-03-20 2003-02-25 Danisco A/S Composition providing a stable suspension of a particulate component
US6716610B2 (en) 1998-12-07 2004-04-06 Kao Corporation Esterification or hydrolysis with substrate treated un-dried immobilized lipolytic enzyme
US6183979B1 (en) * 1999-03-24 2001-02-06 International Technidyne Corporation Preparation of dried synthetic prothrombin time reagents
FR2807445B1 (fr) * 2000-04-10 2002-07-05 Rocher Yves Biolog Vegetale Procede pour stabiliser un enzyme
DE10142124A1 (de) * 2001-08-30 2003-03-27 Henkel Kgaa Umhüllte Wirkstoffzubereitung für den Einsatz in teilchenförmigen Wasch- und Reinigungsmitteln
FI20012151A0 (fi) * 2001-11-05 2001-11-05 Danisco Nestemäinen leivänparannusaine, sen käyttö ja valmistusmenetelmä
BR0302166A (pt) 2002-07-02 2004-09-08 Kao Corp Processo para preparação de enzima imobilizada
JP4616755B2 (ja) * 2004-11-12 2011-01-19 花王株式会社 固定化酵素の製造方法
JP4220957B2 (ja) * 2004-11-12 2009-02-04 花王株式会社 固定化酵素の製造方法
DK2177608T3 (en) * 2007-07-31 2015-12-14 Fuji Oil Co Ltd Immobilized lipase and process for producing the same

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5218797B2 (ja) * 1973-03-10 1977-05-24
GB1577933A (en) * 1976-02-11 1980-10-29 Unilever Ltd Fat process and composition
AU540882B2 (en) * 1980-03-08 1984-12-06 Fuji Oil Company Limited Enzymatic transesterification of lipid and enzyme used therein
IE54838B1 (en) * 1982-04-30 1990-02-28 Unilever Plc Improvements in and relating to interesterification of triglycerides of fatty acids
DK402583D0 (da) * 1983-09-05 1983-09-05 Novo Industri As Fremgangsmade til fremstilling af et immobiliseret lipasepraeparat og anvendelse deraf
GB8417342D0 (en) * 1984-07-06 1984-08-08 Unilever Plc Edible fats
US4735900A (en) * 1984-12-21 1988-04-05 Kao Corporation Enzyme preparation for interesterification
JPH06127087A (ja) * 1992-10-20 1994-05-10 Fuji Xerox Co Ltd 用紙排出システム

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Publication number Publication date
EP0294520A1 (en) 1988-12-14
DE3784923D1 (de) 1993-04-22
EP0294520B1 (en) 1993-03-17
DE3784923T2 (de) 1993-06-24
JPS62134090A (ja) 1987-06-17
US4873194A (en) 1989-10-10

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