JPH0662894A - 過酸化水素の高感度定量法 - Google Patents
過酸化水素の高感度定量法Info
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- JPH0662894A JPH0662894A JP26264692A JP26264692A JPH0662894A JP H0662894 A JPH0662894 A JP H0662894A JP 26264692 A JP26264692 A JP 26264692A JP 26264692 A JP26264692 A JP 26264692A JP H0662894 A JPH0662894 A JP H0662894A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】本発明の目的は，環境化学，臨床化学，食品化
学の属する分野および他の分野において要求されている
過酸化水素の迅速，高感度定量法に供することである。 【構成】本発明の構成は，過酸化水素とオキソ［５，１
０，１５，２０−テトラ（４−ピリジル）−２１Ｈ，２
３Ｈ−ポルフィリナト］チタン（ＩＶ）との錯体形成反
応により生じるペルオキソ［５，１０，１５，２０−テ
トラ（４−ピリジル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリナ
ト］チタン（ＩＶ）の吸光度を測定するに当たり，連続
流れ分析であるフローインジェクション分析装置を用い
ることからなる。
学の属する分野および他の分野において要求されている
過酸化水素の迅速，高感度定量法に供することである。 【構成】本発明の構成は，過酸化水素とオキソ［５，１
０，１５，２０−テトラ（４−ピリジル）−２１Ｈ，２
３Ｈ−ポルフィリナト］チタン（ＩＶ）との錯体形成反
応により生じるペルオキソ［５，１０，１５，２０−テ
トラ（４−ピリジル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリナ
ト］チタン（ＩＶ）の吸光度を測定するに当たり，連続
流れ分析であるフローインジェクション分析装置を用い
ることからなる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は過酸化水素の定量法に関
するものであって，環境化学，臨床化学，食品化学など
の属する分野および他の分野において要求されている過
酸化水素の高感度定量法に供するものである。
するものであって，環境化学，臨床化学，食品化学など
の属する分野および他の分野において要求されている過
酸化水素の高感度定量法に供するものである。
【０００２】
【従来の技術】過酸化水素は，緩和な酸化剤あるいは殺
菌剤，漂白剤として産業界で広く用いられている。ま
た，過酸化水素は自然界のさまざまな場所で生産が認め
られ，その挙動が注目されている。例えば，近年環境問
題の一つとして取り上げられている酸性雨は，その生成
に過酸化水素の関与が指摘されている。従って，雨水，
霧，大気中の過酸化水素の量を測定することは，大気汚
染の指標として有用である。また，多くの生体成分は，
それぞれ特定の酸化酵素の作用により過酸化水素を生じ
る。この過酸化水素を定量することで特定の生体成分の
存在量を知ることができる。また，過酸化水素は魚肉ね
り製品などの殺菌，漂白を目的として用いられている
が，その発がん性のため食品中への残留が禁止されてい
る。そのため，食品中の過酸化水素を監視することは非
常に重要である。このように，過酸化水素は，環境化
学，臨床化学，食品化学などの属する分野において重要
な測定対象化合物となっている。従来から知られている
過酸化水素の定量法としては，次のようなものがある。
雨水中の過酸化水素の定量法としては，ルミノールとヘ
ミンを用いるルミノール化学発光法［Ａｔｏｍｏｓ．Ｅ
ｎｖｉｒｏｎ．，１８，３９５（１９８４）］，生体成
分の存在量を知ることを目的とした過酸化水素の定量法
としては，ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）の存在下，４−
アミノアンチピリンとフェノールとの酸化的縮合反応に
よる生成物の吸光度を測定するＰＯＤ酵素法［Ａｎｎ．
Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６，２４（１９６
９）］，食品中の過酸化水素の定量法としては，過酸化
水素の酸化作用を利用し，ヨウ化カリウムをヨウ素に変
え，これをチオ硫酸ナトリウムで滴定するヨウ素滴定法
［日本薬学会編，衛生試験法・注解Ｐ４６０（１９９
０）］，過酸化水素にカタラーゼを作用せしめ，生じる
酸素を酸素電極により測定する酸素電極法［厚生省環境
衛生局食品化学課編，食品中の食品添加物分析指針Ｐ２
４（１９８２）］などがある。
菌剤，漂白剤として産業界で広く用いられている。ま
た，過酸化水素は自然界のさまざまな場所で生産が認め
られ，その挙動が注目されている。例えば，近年環境問
題の一つとして取り上げられている酸性雨は，その生成
に過酸化水素の関与が指摘されている。従って，雨水，
霧，大気中の過酸化水素の量を測定することは，大気汚
染の指標として有用である。また，多くの生体成分は，
それぞれ特定の酸化酵素の作用により過酸化水素を生じ
る。この過酸化水素を定量することで特定の生体成分の
存在量を知ることができる。また，過酸化水素は魚肉ね
り製品などの殺菌，漂白を目的として用いられている
が，その発がん性のため食品中への残留が禁止されてい
る。そのため，食品中の過酸化水素を監視することは非
常に重要である。このように，過酸化水素は，環境化
学，臨床化学，食品化学などの属する分野において重要
な測定対象化合物となっている。従来から知られている
過酸化水素の定量法としては，次のようなものがある。
雨水中の過酸化水素の定量法としては，ルミノールとヘ
ミンを用いるルミノール化学発光法［Ａｔｏｍｏｓ．Ｅ
ｎｖｉｒｏｎ．，１８，３９５（１９８４）］，生体成
分の存在量を知ることを目的とした過酸化水素の定量法
としては，ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）の存在下，４−
アミノアンチピリンとフェノールとの酸化的縮合反応に
よる生成物の吸光度を測定するＰＯＤ酵素法［Ａｎｎ．
Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６，２４（１９６
９）］，食品中の過酸化水素の定量法としては，過酸化
水素の酸化作用を利用し，ヨウ化カリウムをヨウ素に変
え，これをチオ硫酸ナトリウムで滴定するヨウ素滴定法
［日本薬学会編，衛生試験法・注解Ｐ４６０（１９９
０）］，過酸化水素にカタラーゼを作用せしめ，生じる
酸素を酸素電極により測定する酸素電極法［厚生省環境
衛生局食品化学課編，食品中の食品添加物分析指針Ｐ２
４（１９８２）］などがある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら，ルミノ
ール化学発光法は試薬溶液の調製法が感度に影響をおよ
ぼし，再現性のある定量法と言えない。また，金属イオ
ン等の存在により定量値が大きく影響される欠点を有し
ている。ＰＯＤ酵素法は過酸化水素の酸化反応を利用し
ているため試料中に共存する還元性物質の影響を受け易
く，正確な定量値が得難い。また，感度の面からも不十
分である。ヨウ素滴定法は試料にヨウ化カリウムを加
え，暗所に１０分間放置した後，チオ硫酸ナトリウムで
滴定するため迅速な定量法と言い難く，感度の面からも
到底満足できるものでない。酸素電極法は溶存酸素の影
響を除くため，窒素ガスを１時間以上通気させた後測定
しなければならず，迅速定量法と言えない。また過酸化
水素の添加回収率は８７％位と言われており，高い信頼
性のある測定法であると言い難い。さらに，これらの測
定法の多くはバッチ方式であり，多大な分析所要時間を
必要とするので迅速性に欠け，また，分析者の熟練度が
測定値に影響を与える。そこで，発明者らはこれらの問
題点を解決すべく鋭意研究を重ねた結果，試料中の共存
物質に影響されず，迅速，高感度で，しかも分析者の熟
練度に影響されず，信頼性の高い過酸化水素の定量法で
ある本発明を完成するに至った。
ール化学発光法は試薬溶液の調製法が感度に影響をおよ
ぼし，再現性のある定量法と言えない。また，金属イオ
ン等の存在により定量値が大きく影響される欠点を有し
ている。ＰＯＤ酵素法は過酸化水素の酸化反応を利用し
ているため試料中に共存する還元性物質の影響を受け易
く，正確な定量値が得難い。また，感度の面からも不十
分である。ヨウ素滴定法は試料にヨウ化カリウムを加
え，暗所に１０分間放置した後，チオ硫酸ナトリウムで
滴定するため迅速な定量法と言い難く，感度の面からも
到底満足できるものでない。酸素電極法は溶存酸素の影
響を除くため，窒素ガスを１時間以上通気させた後測定
しなければならず，迅速定量法と言えない。また過酸化
水素の添加回収率は８７％位と言われており，高い信頼
性のある測定法であると言い難い。さらに，これらの測
定法の多くはバッチ方式であり，多大な分析所要時間を
必要とするので迅速性に欠け，また，分析者の熟練度が
測定値に影響を与える。そこで，発明者らはこれらの問
題点を解決すべく鋭意研究を重ねた結果，試料中の共存
物質に影響されず，迅速，高感度で，しかも分析者の熟
練度に影響されず，信頼性の高い過酸化水素の定量法で
ある本発明を完成するに至った。
【０００４】
【課題を解決するための手段】好ましい具体例としてオ
キソ［５，１０，１５，２０−テトラ（４−ピリジル）
−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリナト］チタン（ＩＶ）を
用いる過酸化水素の定量法について述べるが，本発明は
これに限定されるものではない。発明者らは，オキソ
［５，１０，１５，２０−テトラ（４−ピリジル）−２
１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリナト］チタン（ＩＶ）と過酸
化水素との錯体形成反応が定量的に進行し，反応の前後
において極大吸収波長と吸光度値が変化することを見い
だし，高感度な過酸化水素定量法を確立している。さら
に迅速化と高感度化を目的として，この錯体形成反応を
連続流れ分析法であるフローインジェクション分析法に
応用すべく研究を重ねた結果，１ｐｍｏｌ／検体の高感
度で１時間当たり３０検体を処理することができる本発
明を完成するに至った。さらに，本発明はグルコースオ
キシダーゼ固定化カラムをフローインジェクション分析
装置に組み込むことで，血清中のグルコースを高い選択
性と感度を持って，迅速に定量することができた。以
下，本発明の詳細を図面を用いて説明する。図１は，本
発明の実施に用いるフローインジェクション分析装置の
一例のフローシートを示す図である。１はキャリアとし
ての蒸留水で，２はオキソ［５，１０，１５，２０−テ
トラ（４−ピリジル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリナ
ト］チタン（ＩＶ）を含む過塩素酸溶液（試薬溶液）
で，それぞれポンプ３により送液される。過酸化水素を
含む一定量の試料Ａを試料注入部４よりキャリアに加
え，一定時間後（例えば２分後）に次の試料Ｂを試料注
入部４よりキャリアに加える。以下，次々に一定時間を
置いて試料をキャリアに加える。一方，試薬溶液２はポ
ンプ３により一定流量で送液されており，三方ジョイン
ト５でキャリアと混和される。前記試料Ａはキャリアの
流れにしたがって三方ジョイント５に到達し，試薬溶液
２と混和され，反応コイル６に導かれる。反応コイル６
は恒温槽９によって一定温度に保たれている。ここで，
試料Ａ中の過酸化水素は試薬溶液２中のオキソ［５，１
０，１５，２０−テトラ（４−ピリジル）−２１Ｈ，２
３Ｈ−ポルフィリナト］チタン（ＩＶ）との錯体形成反
応によりペルオキソ［５，１０，１５，２０−テトラ
（４−ピリジル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリナト］
チタン（ＩＶ）を生成し，フローセル付き吸光度検出器
７に導かれる。ここで，吸光度の変化を連続して測定す
ることにより試料中の過酸化水素存在量を知ることが出
来る。なお，連続した吸光度の変化は，記録計１０によ
りピーク高さとして記録される。測定後の液はライン８
より排出される。この各ライン，反応コイルなどは内径
０．５ｍｍのものを使用するのが好ましい。図２は，本
発明を血清中グルコースの定量に応用したフローインジ
ェクション分析装置の一例のフローシートを示す図で，
グルコースオキシダーゼ固定化カラム１１が試料注入部
４と三方ジョイント５の間に組み込まれたものである。
血清試料を試料注入部４よりｐＨ６．０のリン酸緩衝液
キャリアに加える。血清試料はキャリアの流れにしたが
ってグルコースオキシダーゼ固定化カラム１１に到達
し，血清中のグルコースから過酸化水素を生成する。こ
の過酸化水素を，前記図１を用いて説明した過酸化水素
の定量法と同様な操作により定量することで，血清中の
グルコース存在量を知ることができる。なお，本発明に
使用するオキソ［５，１０，１５，２０−テトラ（４−
ピリジル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリナト］チタン
（ＩＶ）は，５，１０，１５，２０−テトラ（４−ピリ
ジル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリンと四塩化チタン
とを窒素気流下ジメチルホルムアミド中で還流すること
で得られる。グルコースオキシダーゼ固定化カラムは，
多孔性ガラス担体（ＣＰＧ）０．５ｇを５％硝酸で煮
沸，乾燥後，３−アミノプロピルトリエトキシシラン５
ｍｌを反応させ，３−アミノプロピルシリルＣＰＧとす
る。次いで，２．５％グルタルアルデヒド溶液（ｐＨ
７．２リン酸緩衝液）３ｍｌを加え，反応後洗浄する。
次いで，グルコースオキシダーゼ（１２００Ｕ／３ｍ
ｌ）を加え固定化反応後，洗浄し，長さ３ｃｍ，内径１
０ｍｍのテフロン管に充填することで得られる。
キソ［５，１０，１５，２０−テトラ（４−ピリジル）
−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリナト］チタン（ＩＶ）を
用いる過酸化水素の定量法について述べるが，本発明は
これに限定されるものではない。発明者らは，オキソ
［５，１０，１５，２０−テトラ（４−ピリジル）−２
１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリナト］チタン（ＩＶ）と過酸
化水素との錯体形成反応が定量的に進行し，反応の前後
において極大吸収波長と吸光度値が変化することを見い
だし，高感度な過酸化水素定量法を確立している。さら
に迅速化と高感度化を目的として，この錯体形成反応を
連続流れ分析法であるフローインジェクション分析法に
応用すべく研究を重ねた結果，１ｐｍｏｌ／検体の高感
度で１時間当たり３０検体を処理することができる本発
明を完成するに至った。さらに，本発明はグルコースオ
キシダーゼ固定化カラムをフローインジェクション分析
装置に組み込むことで，血清中のグルコースを高い選択
性と感度を持って，迅速に定量することができた。以
下，本発明の詳細を図面を用いて説明する。図１は，本
発明の実施に用いるフローインジェクション分析装置の
一例のフローシートを示す図である。１はキャリアとし
ての蒸留水で，２はオキソ［５，１０，１５，２０−テ
トラ（４−ピリジル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリナ
ト］チタン（ＩＶ）を含む過塩素酸溶液（試薬溶液）
で，それぞれポンプ３により送液される。過酸化水素を
含む一定量の試料Ａを試料注入部４よりキャリアに加
え，一定時間後（例えば２分後）に次の試料Ｂを試料注
入部４よりキャリアに加える。以下，次々に一定時間を
置いて試料をキャリアに加える。一方，試薬溶液２はポ
ンプ３により一定流量で送液されており，三方ジョイン
ト５でキャリアと混和される。前記試料Ａはキャリアの
流れにしたがって三方ジョイント５に到達し，試薬溶液
２と混和され，反応コイル６に導かれる。反応コイル６
は恒温槽９によって一定温度に保たれている。ここで，
試料Ａ中の過酸化水素は試薬溶液２中のオキソ［５，１
０，１５，２０−テトラ（４−ピリジル）−２１Ｈ，２
３Ｈ−ポルフィリナト］チタン（ＩＶ）との錯体形成反
応によりペルオキソ［５，１０，１５，２０−テトラ
（４−ピリジル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリナト］
チタン（ＩＶ）を生成し，フローセル付き吸光度検出器
７に導かれる。ここで，吸光度の変化を連続して測定す
ることにより試料中の過酸化水素存在量を知ることが出
来る。なお，連続した吸光度の変化は，記録計１０によ
りピーク高さとして記録される。測定後の液はライン８
より排出される。この各ライン，反応コイルなどは内径
０．５ｍｍのものを使用するのが好ましい。図２は，本
発明を血清中グルコースの定量に応用したフローインジ
ェクション分析装置の一例のフローシートを示す図で，
グルコースオキシダーゼ固定化カラム１１が試料注入部
４と三方ジョイント５の間に組み込まれたものである。
血清試料を試料注入部４よりｐＨ６．０のリン酸緩衝液
キャリアに加える。血清試料はキャリアの流れにしたが
ってグルコースオキシダーゼ固定化カラム１１に到達
し，血清中のグルコースから過酸化水素を生成する。こ
の過酸化水素を，前記図１を用いて説明した過酸化水素
の定量法と同様な操作により定量することで，血清中の
グルコース存在量を知ることができる。なお，本発明に
使用するオキソ［５，１０，１５，２０−テトラ（４−
ピリジル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリナト］チタン
（ＩＶ）は，５，１０，１５，２０−テトラ（４−ピリ
ジル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリンと四塩化チタン
とを窒素気流下ジメチルホルムアミド中で還流すること
で得られる。グルコースオキシダーゼ固定化カラムは，
多孔性ガラス担体（ＣＰＧ）０．５ｇを５％硝酸で煮
沸，乾燥後，３−アミノプロピルトリエトキシシラン５
ｍｌを反応させ，３−アミノプロピルシリルＣＰＧとす
る。次いで，２．５％グルタルアルデヒド溶液（ｐＨ
７．２リン酸緩衝液）３ｍｌを加え，反応後洗浄する。
次いで，グルコースオキシダーゼ（１２００Ｕ／３ｍ
ｌ）を加え固定化反応後，洗浄し，長さ３ｃｍ，内径１
０ｍｍのテフロン管に充填することで得られる。
【０００５】
【実施例】以下に本発明の好ましい実施例を記載する
が，これは例示の目的であり，本発明を制限するもので
はない。本発明の範囲内で変形が可能なことは当業者に
は明らかであろう。
が，これは例示の目的であり，本発明を制限するもので
はない。本発明の範囲内で変形が可能なことは当業者に
は明らかであろう。
【０００６】実施例１雨水中の過酸化水素の定量 １．６ｍｏｌ／ｌ過塩素酸にオキソ［５，１０，１５，
２０−テトラ（４−ピリジル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポル
フィリナト］チタン（ＩＶ）が３×１０−５ｍｏｌ／ｌ
となるように調製し，図１の２に試薬溶液として貯え
る。１には，キャリアとして蒸留水を貯える。キャリア
１と試薬溶液２を流量０．４ｍｌ／ｍｉｎ．でポンプ３
により送液し，恒温槽９は７５°Ｃに保つ。雨水を採取
し，１００μｌを試料注入部４よりキャリアに注入す
る。２分後に次ぎの雨水１００μｌを試料注入部４より
キャリアに注入する。以下，次々に雨水試料をキャリア
に注入する。４５０ｎｍにおける吸光度を連続して測定
し，検量線から過酸化水素の量を求めた。さらに，雨水
に２×１０−７ｍｏｌ／ｌ過酸化水素水を同量加え，添
加回収率を検討した。その結果を表１に示す。
２０−テトラ（４−ピリジル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポル
フィリナト］チタン（ＩＶ）が３×１０−５ｍｏｌ／ｌ
となるように調製し，図１の２に試薬溶液として貯え
る。１には，キャリアとして蒸留水を貯える。キャリア
１と試薬溶液２を流量０．４ｍｌ／ｍｉｎ．でポンプ３
により送液し，恒温槽９は７５°Ｃに保つ。雨水を採取
し，１００μｌを試料注入部４よりキャリアに注入す
る。２分後に次ぎの雨水１００μｌを試料注入部４より
キャリアに注入する。以下，次々に雨水試料をキャリア
に注入する。４５０ｎｍにおける吸光度を連続して測定
し，検量線から過酸化水素の量を求めた。さらに，雨水
に２×１０−７ｍｏｌ／ｌ過酸化水素水を同量加え，添
加回収率を検討した。その結果を表１に示す。
【０００７】
【表１】
【０００８】実施例２検量線の作成 雨水１００μｌの代わりに濃度既知の過酸化水素標準溶
液（１×１０−８ｍｏｌ／ｌ，１×１０−７ｍｏｌ／
ｌ，１×１０−６ｍｏｌ／ｌ，１×１０−５ｍｏｌ／
ｌ）を用いて実施例１と同様の操作を行い，表２の検量
線を得た。
液（１×１０−８ｍｏｌ／ｌ，１×１０−７ｍｏｌ／
ｌ，１×１０−６ｍｏｌ／ｌ，１×１０−５ｍｏｌ／
ｌ）を用いて実施例１と同様の操作を行い，表２の検量
線を得た。
【０００９】
【表２】
【００１０】実施例３共存物質の影響 雨水１００μｌの代わりに５×１０−３ｍｏｌ／ｌ塩化
ナトリウムを含む過酸化水素標準溶液（１×１０−６ｍ
ｏｌ／ｌ）を用いて実施例１と同様の操作を行い，共存
物質の影響を検討した。その他の共存物質についても同
様の検討を行い，表３に示すような結果を得た。
ナトリウムを含む過酸化水素標準溶液（１×１０−６ｍ
ｏｌ／ｌ）を用いて実施例１と同様の操作を行い，共存
物質の影響を検討した。その他の共存物質についても同
様の検討を行い，表３に示すような結果を得た。
【００１１】
【表３】
【００１２】実施例４血清中のグルコースの定量 １．６ｍｏｌ／ｌ過塩素酸にオキソ［５，１０，１５，
２０−テトラ（４−ピリジル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポル
フィリナト］チタン（ＩＶ）が３×１０−５ｍｏｌ／ｌ
となるように調製し，図２の２に試薬溶液として貯え
る。１には，キャリアとしてｐＨ６．０のリン酸緩衝液
を貯える。キャリア１と試薬溶液２を流量０．４ｍｌ／
ｍｉｎ．でポンプ３により送液し，恒温槽９は７５°Ｃ
に保つ。１００倍に希釈した血清５μｌを試料注入部４
よりキャリアに注入する。以下，次々に血清試料をキャ
リアに注入する。４５０ｎｍにおける吸光度を連続して
測定し，検量線からグルコース量を求めた。さらに，添
加量が９０ｍｇ／ｄｌになるようにグルコースを血清試
料に加え，添加回収率を検討した。その結果を表４に示
す。
２０−テトラ（４−ピリジル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポル
フィリナト］チタン（ＩＶ）が３×１０−５ｍｏｌ／ｌ
となるように調製し，図２の２に試薬溶液として貯え
る。１には，キャリアとしてｐＨ６．０のリン酸緩衝液
を貯える。キャリア１と試薬溶液２を流量０．４ｍｌ／
ｍｉｎ．でポンプ３により送液し，恒温槽９は７５°Ｃ
に保つ。１００倍に希釈した血清５μｌを試料注入部４
よりキャリアに注入する。以下，次々に血清試料をキャ
リアに注入する。４５０ｎｍにおける吸光度を連続して
測定し，検量線からグルコース量を求めた。さらに，添
加量が９０ｍｇ／ｄｌになるようにグルコースを血清試
料に加え，添加回収率を検討した。その結果を表４に示
す。
【００１３】
【表４】
【００１４】実施例５グルコースの検量線 血清５μｌの代わりに濃度既知のグルコース標準溶液
（１．８×１００ｍｇ／ｄｌ，１．８×１０１ｍｇ／ｄ
ｌ，９．０×１０１ｍｇ／ｄｌ，１．８×１０２ｍｇ／
ｄｌ，９．０×１０２ｍｇ／ｄｌ，１．８×１０３ｍｇ
／ｄｌ）を用いて実施例２と同様の操作を行い，表５の
検量線を得た。
（１．８×１００ｍｇ／ｄｌ，１．８×１０１ｍｇ／ｄ
ｌ，９．０×１０１ｍｇ／ｄｌ，１．８×１０２ｍｇ／
ｄｌ，９．０×１０２ｍｇ／ｄｌ，１．８×１０３ｍｇ
／ｄｌ）を用いて実施例２と同様の操作を行い，表５の
検量線を得た。
【００１５】
【表５】
【００１６】
【発明の効果】本発明を用いることで，従来法と比較し
て簡便な操作により，高い感度と迅速性をもって，しか
も分析者の熟練度に影響されることなく過酸化水素を定
量することができた。従来から知られている過酸化水素
定量法として，例えばルミノール化学発光法，ＰＯＤ酵
素法，ヨウ素滴定法，酸素電極法などがあり，実用に供
されている。しかしながら，いずれの方法も共存物質の
影響を受け易く，またバッチ方式分析法では迅速性に欠
け，分析者の熟練度が測定値に影響をおよぼすことがあ
った。本発明は，過酸化水素とチタン錯体からペルオキ
ソチタン錯体を生成する錯体形成反応によるため，共存
物質の影響をほとんど受けず，フローインジェクション
分析装置を用いるため，１時間当たり３０検体を処理で
きる迅速性を持ち，しかも分析者の熟練度の影響を受け
ることなく過酸化水素を定量することを可能にした。吸
光度測定時の対象となる呈色体ペルオキソチタン錯体の
モル吸光係数が大きいので，その検出限界は１ｐｍｏｌ
／検体と高感度であった。さらに，固定化酵素カラムを
フローインジェクション分析装置に組み込むことで特定
生体成分の迅速，高感度定量が可能となった。従って，
本発明は多数の検体を迅速かつ高感度に分析することが
必要である環境分析，食品分析，臨床分析などの分野に
おいて，極めて有用な過酸化水素の定量法であると言え
る。
て簡便な操作により，高い感度と迅速性をもって，しか
も分析者の熟練度に影響されることなく過酸化水素を定
量することができた。従来から知られている過酸化水素
定量法として，例えばルミノール化学発光法，ＰＯＤ酵
素法，ヨウ素滴定法，酸素電極法などがあり，実用に供
されている。しかしながら，いずれの方法も共存物質の
影響を受け易く，またバッチ方式分析法では迅速性に欠
け，分析者の熟練度が測定値に影響をおよぼすことがあ
った。本発明は，過酸化水素とチタン錯体からペルオキ
ソチタン錯体を生成する錯体形成反応によるため，共存
物質の影響をほとんど受けず，フローインジェクション
分析装置を用いるため，１時間当たり３０検体を処理で
きる迅速性を持ち，しかも分析者の熟練度の影響を受け
ることなく過酸化水素を定量することを可能にした。吸
光度測定時の対象となる呈色体ペルオキソチタン錯体の
モル吸光係数が大きいので，その検出限界は１ｐｍｏｌ
／検体と高感度であった。さらに，固定化酵素カラムを
フローインジェクション分析装置に組み込むことで特定
生体成分の迅速，高感度定量が可能となった。従って，
本発明は多数の検体を迅速かつ高感度に分析することが
必要である環境分析，食品分析，臨床分析などの分野に
おいて，極めて有用な過酸化水素の定量法であると言え
る。
【００１７】
【図１】本発明に係る過酸化水素の定量に用いるフロー
インジェクション分析装置の一例のフローシートを示す
図である。
インジェクション分析装置の一例のフローシートを示す
図である。
【図２】本発明に係るグルコースの定量に用いるフロー
インジェクション分析装置の一例のフローシートを示す
図である。
インジェクション分析装置の一例のフローシートを示す
図である。
１ キャリア溶液 ２ 試薬溶液 ３ ポンプ（０．４ｍｌ／ｍｉｎ．） ４ 試料注入部 ５ 三方ジョイント ６ 反応コイル（１５ｍ） ７ フローセル付き吸光度検出器（４５０ｎｍ） ８ 排水 ９ 恒温層（７５°Ｃ） １０ 記録計 １１ グルコースオキシダーゼ固定化カラム
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 松原 チヨ 東京都清瀬市中里２丁目1426番
Claims (3)
- 【請求項１】試料溶液中に含まれる過酸化水素を定量す
るに当たり，フローインジェクション分析装置を用い，
試料溶液を流路中のキャリアに注入し，次いで，これに
オキソ［５，１０，１５，２０−テトラ（４−ピリジ
ル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリナト］チタン（Ｉ
Ｖ）溶液を合流反応させ，この反応液の吸光度変化を連
続して測定することからなる過酸化水素の定量法。 - 【請求項２】試料溶液中に含まれる生体成分を定量する
に当たり，フローインジェクション分析装置を用い，試
料溶液を流路中のキャリアに注入し，特定のオキシダー
ゼ固定化カラムを通過させ，過酸化水素を生成せしめ，
次いで，これにオキソ［５，１０，１５，２０−テトラ
（４−ピリジル）−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィリナト］
チタン（ＩＶ）溶液を合流反応させ，この反応液の吸光
度変化を連続して測定することからなる生体成分の定量
法。 - 【請求項３】生体成分がグルコース，ガラクトース，ピ
ルビン酸，尿酸，コレステロール，リン脂質，遊離脂肪
酸であるときは，特定のオキシダーゼ固定化カラムがそ
れぞれグルコースオキシダーゼ固定化カラム，ガラクト
ースオキシダーゼ固定化カラム，ピルビン酸オキシダー
ゼ固定化カラム，ウリカーゼ固定化カラム，コレステロ
ールオキシダーゼ固定化カラム，コリンオキシダーゼ固
定化カラム，アシルＣｏＡオキシダーゼ固定化カラムで
ある組み合わせから１種類を選ぶ請求項２記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26264692A JPH0662894A (ja) | 1992-08-19 | 1992-08-19 | 過酸化水素の高感度定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26264692A JPH0662894A (ja) | 1992-08-19 | 1992-08-19 | 過酸化水素の高感度定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0662894A true JPH0662894A (ja) | 1994-03-08 |
Family
ID=17378676
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26264692A Withdrawn JPH0662894A (ja) | 1992-08-19 | 1992-08-19 | 過酸化水素の高感度定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0662894A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2673632A1 (de) * | 2011-02-07 | 2013-12-18 | Robert Bosch GmbH | Anordnung und verfahren zum detektieren von wasserstoffperoxid |
| WO2016199435A1 (ja) * | 2015-06-11 | 2016-12-15 | 野村マイクロ・サイエンス株式会社 | 超純水製造システム及び超純水製造方法 |
-
1992
- 1992-08-19 JP JP26264692A patent/JPH0662894A/ja not_active Withdrawn
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2673632A1 (de) * | 2011-02-07 | 2013-12-18 | Robert Bosch GmbH | Anordnung und verfahren zum detektieren von wasserstoffperoxid |
| JP2014505260A (ja) * | 2011-02-07 | 2014-02-27 | ローベルト ボツシユ ゲゼルシヤフト ミツト ベシユレンクテル ハフツング | 過酸化水素検出のための装置及び方法 |
| WO2016199435A1 (ja) * | 2015-06-11 | 2016-12-15 | 野村マイクロ・サイエンス株式会社 | 超純水製造システム及び超純水製造方法 |
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|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
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