JPH0664038B2 - テトラサイクリン類の分析法 - Google Patents
テトラサイクリン類の分析法Info
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- JPH0664038B2 JPH0664038B2 JP11961985A JP11961985A JPH0664038B2 JP H0664038 B2 JPH0664038 B2 JP H0664038B2 JP 11961985 A JP11961985 A JP 11961985A JP 11961985 A JP11961985 A JP 11961985A JP H0664038 B2 JPH0664038 B2 JP H0664038B2
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- mobile phase
- alkaline earth
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Description
【発明の詳細な説明】 （イ）産業上の利用分野 この発明は、高速液体クロマトグラフイーによる分離分
析技術に関する。さらに詳しくは、逆相液体クロマトグ
ラフイーによるテトラサイクリン類の分析法に関する。
析技術に関する。さらに詳しくは、逆相液体クロマトグ
ラフイーによるテトラサイクリン類の分析法に関する。
（ロ）従来の技術 高速液体クロマトグラフイーは近年著しい発展を示し、
高分子化学、有機化学をはじめ薬学、生化学、臨床化学
に到るまであらゆる分野において分離分析技術の柱とな
つている。
高分子化学、有機化学をはじめ薬学、生化学、臨床化学
に到るまであらゆる分野において分離分析技術の柱とな
つている。
薬学の分野において、抗菌力を有するテトラサイクリン
類の分離分析の必要があり、これは通常、高速液体クロ
マトグラフイーを用いて行なわれる。
類の分離分析の必要があり、これは通常、高速液体クロ
マトグラフイーを用いて行なわれる。
しかしながら、テトラサイクリン類は周知のように錯体
を形成しやすく、そのため固定相であるカラムの充填剤
に含まれる金属または流路壁の金属とキレートを形成し
て吸着され易いものである。従つて、通常の逆相クロマ
トグラフイー用の移動相を用いてクロマト分離を行なツ
た場合には、カラムからの溶出が困難になつたり、ピー
クにテーリング現象が現われたりして実用上の分離分析
を行なうことは困難である。
を形成しやすく、そのため固定相であるカラムの充填剤
に含まれる金属または流路壁の金属とキレートを形成し
て吸着され易いものである。従つて、通常の逆相クロマ
トグラフイー用の移動相を用いてクロマト分離を行なツ
た場合には、カラムからの溶出が困難になつたり、ピー
クにテーリング現象が現われたりして実用上の分離分析
を行なうことは困難である。
これらの問題点を解決するための対策として従来技術で
は、強酸性の移動相を用いてキレート形成を抑制した
り、またはテトラサイクリン類と同様に金属とキレート
を形成しやすい化合物、例えば、エチレンジアミン四酢
酸などを移動相に添加して、キレート形成においてエチ
レンジアミン四酢酸とテトラサイクリン類とを競合させ
て後者のキレート形成を抑制することが行なわれてい
る。
は、強酸性の移動相を用いてキレート形成を抑制した
り、またはテトラサイクリン類と同様に金属とキレート
を形成しやすい化合物、例えば、エチレンジアミン四酢
酸などを移動相に添加して、キレート形成においてエチ
レンジアミン四酢酸とテトラサイクリン類とを競合させ
て後者のキレート形成を抑制することが行なわれてい
る。
（ハ）発明が解決しようとする問題点 しかしながら、テトラサイクリン類のキレート形成を抑
制して問題点を解決しようとするかかる従来技術の方法
は、テトラサイクリン類のキレート形成自体を積極的に
防止しようとする方法ではなくて、抑制しようとする方
法であるから十分な効果は得られていない。すなわちピ
ークのテーリング現象を解消するという問題点が十分に
は解消されていない。
制して問題点を解決しようとするかかる従来技術の方法
は、テトラサイクリン類のキレート形成自体を積極的に
防止しようとする方法ではなくて、抑制しようとする方
法であるから十分な効果は得られていない。すなわちピ
ークのテーリング現象を解消するという問題点が十分に
は解消されていない。
この発明はかかる問題点を解決すべくなされたものであ
り、テトラサイクリン類のテーリングのないピークを得
る分析法を提供しようとするものである。
り、テトラサイクリン類のテーリングのないピークを得
る分析法を提供しようとするものである。
（ニ）問題点を解決するための手段及び作用 かくしてこの発明によれば、テトラサイクリン類を含み
得る試料を高速液体クロマトグラフイーに付すことから
なり、該クロマトグラフイーにおける移動相として、ア
ルカリ土類金属イオンを含みかつ水と混合しうる有機溶
媒を任意に含むpH4以上の緩衝液を用いることを特徴と
するテトラサイクリン類の分析法が提供される。
得る試料を高速液体クロマトグラフイーに付すことから
なり、該クロマトグラフイーにおける移動相として、ア
ルカリ土類金属イオンを含みかつ水と混合しうる有機溶
媒を任意に含むpH4以上の緩衝液を用いることを特徴と
するテトラサイクリン類の分析法が提供される。
この発明の方法を用いて分析されるテトラサイクリン類
とは、例えばテトラサイクリン、クロルテトラサイクリ
ン、オキシテトラサイクリン、ジメチルクロルテトラサ
イクリン、メタサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサ
イクリンまたはロリテトラサイクリンなどである。
とは、例えばテトラサイクリン、クロルテトラサイクリ
ン、オキシテトラサイクリン、ジメチルクロルテトラサ
イクリン、メタサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサ
イクリンまたはロリテトラサイクリンなどである。
この発明に使用するカラムとしては、通常の逆相液体ク
ロマトグラフイー用のカラムが使用でき、例えばいわゆ
るODSカラム、Ｃ８カラムまたはTMSカラムなどが使用可
能である。
ロマトグラフイー用のカラムが使用でき、例えばいわゆ
るODSカラム、Ｃ８カラムまたはTMSカラムなどが使用可
能である。
この発明に用いる移動相のベースとしては、pH4以上の
緩衝液が使用できる。移動相がpH4以下であれば移動相
に添加したアルカリ土類金属とのキレート形成が起りに
くい点で不適切である。特にpH5〜８が好ましい。緩衝
液としては、例えば酢酸緩衝液またはイミダゾール緩衝
液が使用可能である。
緩衝液が使用できる。移動相がpH4以下であれば移動相
に添加したアルカリ土類金属とのキレート形成が起りに
くい点で不適切である。特にpH5〜８が好ましい。緩衝
液としては、例えば酢酸緩衝液またはイミダゾール緩衝
液が使用可能である。
この発明で移動相ベースに含ませるアルカリ土類金属イ
オンは、ベリリウムイオン、マグネシウムイオン、カル
シウムイオン、ストロンチウムイオンまたはバリウムイ
オンであり、マグネシウムイオンが好ましい。これらの
アルカリ土類金属イオンは、可溶性塩や水酸化物の形態
で上記移動相に添加される。通常は、酢酸塩や硫酸塩の
形態で添加するのが適している。
オンは、ベリリウムイオン、マグネシウムイオン、カル
シウムイオン、ストロンチウムイオンまたはバリウムイ
オンであり、マグネシウムイオンが好ましい。これらの
アルカリ土類金属イオンは、可溶性塩や水酸化物の形態
で上記移動相に添加される。通常は、酢酸塩や硫酸塩の
形態で添加するのが適している。
これらの移動相ベースへの添加量は意図する分析濃度範
囲に応じて設定してよいが、一般に10mM〜500mMであ
る。この添加量が少なすぎると効果が不充分で不都合で
あるし、多すぎると塩の析出やカラムの劣化の点で不都
合である。
囲に応じて設定してよいが、一般に10mM〜500mMであ
る。この添加量が少なすぎると効果が不充分で不都合で
あるし、多すぎると塩の析出やカラムの劣化の点で不都
合である。
一方、上記移動相にはさらに水と混合しうる有機溶媒を
添加するのが好ましい。すなわち水と混合しうる有機溶
媒を添加しなくてもテーリングの防止は可能であるが、
しかしながらこの有機溶媒の添加は各種分離成分の保持
時間の短縮化に役立つものであるから、実用分析の点で
不可欠なものである。なお、この添加量は移動相に対し
て０〜50％が適切である。
添加するのが好ましい。すなわち水と混合しうる有機溶
媒を添加しなくてもテーリングの防止は可能であるが、
しかしながらこの有機溶媒の添加は各種分離成分の保持
時間の短縮化に役立つものであるから、実用分析の点で
不可欠なものである。なお、この添加量は移動相に対し
て０〜50％が適切である。
移動相の流量は0.5〜1.5ml／分が適当であり、カラム温
度は20〜50℃が適当である。
度は20〜50℃が適当である。
検出は吸光度検出器を用いて通常268nmで行なわれる。
この発明は、要するに従来行なわれていたようにキレー
ト形成の抑制や防止を意図するものではなくて、逆にア
ルカリ土類金属イオンに加えて、このイオンとテトラサ
イクリン類との間に積極的にキレートを生成させ、これ
によりテトラサイクリン類をキレートの形態で分離分析
するものである。すなわち分析対象成分はすでにキレー
トとなつているので、流出壁やカラムの充填剤に含まれ
る金属とキレートを形成して吸着されるということはな
く溶出し、シヤープなテーリングのないピークを与える
のである。
ト形成の抑制や防止を意図するものではなくて、逆にア
ルカリ土類金属イオンに加えて、このイオンとテトラサ
イクリン類との間に積極的にキレートを生成させ、これ
によりテトラサイクリン類をキレートの形態で分離分析
するものである。すなわち分析対象成分はすでにキレー
トとなつているので、流出壁やカラムの充填剤に含まれ
る金属とキレートを形成して吸着されるということはな
く溶出し、シヤープなテーリングのないピークを与える
のである。
（ホ）実施例 この発明を実施例を用いて説明する。
実施条件を以下に示す。
カラム:Shim−pack CLC−ODS （6.0mmI.D×150mmL.,島津製作所製）、 カラム温度;40℃、 流量;1ml／分、 検出器；紫外吸光光度計、 検出波長;268nm、 移動相;50mM Mg（CH３COO）２（70容量％）とメタノー
ル（30容量％）との混合溶媒（pH6.2）。
ル（30容量％）との混合溶媒（pH6.2）。
上記この発明の方法において得られたクロマトグラムを
第１図に示した。図中（１）はオキシテトラサイクリ
ン、（２）はテトラサイクリン、（３）はクロルテトラ
サイクリンのピークを表わす。このようにこの発明の方
法によれば、ピークのテーリング現象なくテトラサイク
リン類の適正なピークが得られることがわかる。
第１図に示した。図中（１）はオキシテトラサイクリ
ン、（２）はテトラサイクリン、（３）はクロルテトラ
サイクリンのピークを表わす。このようにこの発明の方
法によれば、ピークのテーリング現象なくテトラサイク
リン類の適正なピークが得られることがわかる。
第２図はマグネシウムイオンを加えなかつた場合の参考
例であり、この時移動相は10mM KH２PO４（70容量％）
とメタノール（30容量％）の混合溶媒であり他は前記条
件と同一である。図中（１）はオキシテトラサイクリ
ン、（２）はテトラサイクリンのピークと思われるが確
かではなく、またクロルテトラサイクリンは溶出しなか
つた。このようにまつたく実用性のないものである。
例であり、この時移動相は10mM KH２PO４（70容量％）
とメタノール（30容量％）の混合溶媒であり他は前記条
件と同一である。図中（１）はオキシテトラサイクリ
ン、（２）はテトラサイクリンのピークと思われるが確
かではなく、またクロルテトラサイクリンは溶出しなか
つた。このようにまつたく実用性のないものである。
（ヘ）発明の効果 この発明の方法によれば、テトラサイクリン類の分析に
おいてテーリングのないシヤープなピークを得ることが
できて、従来にはない定量性の高い分析を行なうことが
できる。またこれにあわせて保持時間の短縮化の効果も
得られる。さらにこの発明の特徴となるアルカリ土類金
属イオンの添加もアルカリ土類金属イオンは紫外部の光
を吸収しないのでノイズレベルの低い検出を可能にす
る。
おいてテーリングのないシヤープなピークを得ることが
できて、従来にはない定量性の高い分析を行なうことが
できる。またこれにあわせて保持時間の短縮化の効果も
得られる。さらにこの発明の特徴となるアルカリ土類金
属イオンの添加もアルカリ土類金属イオンは紫外部の光
を吸収しないのでノイズレベルの低い検出を可能にす
る。
第１図はこの発明の方法の実施例で得られるクロマトグ
ラム図、および第２図は参考例のクロマトグラム図であ
る。
ラム図、および第２図は参考例のクロマトグラム図であ
る。
Claims (3)
- 【請求項１】テトラサイクリン類を含み得る試料を高速
液体クロマトグラフイーに付すことからなり、 該クロマトグラフイーにおける移動相として、アルカリ
土類金属イオンを含みかつ水と混合しうる有機溶媒を任
意に含むpH4以上の緩衝液を用いることを特徴とするテ
トラサイクリン類の分析法。 - 【請求項２】アルカリ土類金属イオンの量が10〜500mM
である特許請求の範囲第１項記載の方法。 - 【請求項３】アルカリ土類金属イオンがマグネシウムイ
オンである特許請求の範囲第１項記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11961985A JPH0664038B2 (ja) | 1985-05-31 | 1985-05-31 | テトラサイクリン類の分析法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11961985A JPH0664038B2 (ja) | 1985-05-31 | 1985-05-31 | テトラサイクリン類の分析法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61277057A JPS61277057A (ja) | 1986-12-08 |
| JPH0664038B2 true JPH0664038B2 (ja) | 1994-08-22 |
Family
ID=14765912
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11961985A Expired - Lifetime JPH0664038B2 (ja) | 1985-05-31 | 1985-05-31 | テトラサイクリン類の分析法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0664038B2 (ja) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10061140A1 (de) * | 2000-12-08 | 2002-06-13 | Merck Patent Gmbh | Verfahren und Mittel zur Bestimmung von Gesamthärte |
| CN102998405A (zh) * | 2011-09-09 | 2013-03-27 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 | 一种测定土壤、污泥及动物粪便中磺胺类及四环素类抗生素的方法 |
| CN103091435B (zh) * | 2012-10-31 | 2015-06-03 | 轻工业环境保护研究所 | 一种有机肥料中药物残留的检测方法 |
| CN103439419B (zh) * | 2013-07-12 | 2014-10-15 | 南开大学 | 一种确定蚯蚓中土霉素残留浸提剂的实验方法 |
| CN106153741A (zh) * | 2015-03-26 | 2016-11-23 | 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 | 一种牛乳中四环素类抗生素的检测方法 |
| CN106770804B (zh) * | 2017-02-28 | 2019-07-12 | 云南农业大学 | 烟草幼苗中土霉素含量的检测方法 |
| WO2019165249A1 (en) * | 2018-02-23 | 2019-08-29 | Silcotek Corp | Liquid chromatography technique |
| CN110763798B (zh) * | 2019-11-16 | 2022-02-15 | 江西国药有限责任公司 | 一种盐酸土霉素含量的检测方法 |
| CN113702525A (zh) * | 2021-08-23 | 2021-11-26 | 瑞普（天津）生物药业有限公司 | 一种用hplc测定土霉素注射液中土霉素含量的方法 |
-
1985
- 1985-05-31 JP JP11961985A patent/JPH0664038B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61277057A (ja) | 1986-12-08 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |