JPH0689034B2

JPH0689034B2 - Ｃｒｆ類似体

Info

Publication number: JPH0689034B2
Application number: JP59072606A
Authority: JP
Inventors: ジヤン・エドワ−ル・フレデリツク・リベ−ル; ヨアヒム・シユピ−ス; ワイリ−・ウオ−カ−・ベ−ル・ジユニア−
Original assignee: Salk Institute for Biological Studies
Current assignee: Salk Institute for Biological Studies
Priority date: 1983-04-14
Filing date: 1984-04-11
Publication date: 1994-11-09
Anticipated expiration: 2009-11-09
Also published as: EP0122798A3; ES8606406A1; NZ207779A; DK169784D0; IL71326A; IL71326A0; US4489163A; EP0122798A2; EP0122798B1; IE61617B1; JPS59199662A; DE3486238D1; AU565699B2; KR840009075A; DK169784A; CA1247602A; GR81467B; AU2677784A; IE840867L; ATE96807T1

Description

【発明の詳細な説明】本発明はラットCRF（rCRF）およびrCRFを含む医薬組成
物に関する。

発明の背景視床下部が脳下垂体前葉にある副腎皮質刺激細胞の分泌
機能に重要な役割を演ずるという概念は、実験的ならび
に臨床的観察により支持されてきた。25年以上前に、Gu
illemin,Rosenberg,SaffranおよびSchallyはそれぞれ別
々に、試験管内でインキュベートした脳下垂体または器
官培養で維持した脳下垂体からのACTHの分泌量を増加さ
せる因子が視床下部に存在することをつきとめた。性状
決定がなされたどの分泌促進剤も、羊CRF（oCRF）が198
1年に性状決定されるまで、生理学的なコルチコトロピ
ン放出因子（CRF）の期待された基準を満たすものでは
なかった。前記oCRFは米国特許第4415558号明細書に開
示されるように、次式： H-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-
His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Thr-Lvs-Ala-As
p-Gln-Leu-Ala-Glu-Glu-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-
Leu-Asp-Ile-Ala-NH₂ で表わされることが見い出された。

サウバジン（Sauvagine）は南アメリカ産のカエルのフ
イロメデユササウバゲイ（Phyllomedusasauvagei）の
皮膚から単離された40個のアミノ酸残基からなるほぼ類
似したアミド化ペプチドである。これはErspamer等によ
り性状決定がなされ、Regulatory Peptides,第２巻,1〜
13ページ（1981年）に記載されている。サウバジンは次
式： pGlu-Gly-Pro-Pro-Ile-Ser-Ile-Asp-Leu-Ser- Leu-Glu-Leu-Leu-Arg-Lys-Met-Ile-Glu-Ile-Glu-Lys-Gl
n-Glu-Lys-Glu-Lys-Gln-Ala-Ala-Asn-Asn-Arg-Leu-Leu-
Leu-Asp-Thr-Ile-NH₂ で表わされる。サウバジンおよびoCRFは哺乳動物の血圧
を低下させ、かつACTHおよびβ‐エンドルフインの分泌
を刺激するという生物学的活性を有することが報告され
た。

発明の概要ラットCRF（rCRF）が今や単離され、精製され、そして
次式： H-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-
His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Arg-Ala-Gl
u-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-
Met-Glu-Ile-Ila-NH₂ で表わされるヘンテトラコンタペプチドであると性状決
定された。これは別名ラットアムニン（rat Amunine）
と称される。ヒトCRFの構造式はrCRFのそれと同じであ
ることがわかった。その41−アミノ酸残基ペプチドの合
成が完了し、そして単離rCRFおよび合成rCRFは双方とも
試験管内ならびに生体内でACTHとβ−エンドルフインの
活性を刺激する。合成rCRFは長期間にわたり実質的に血
圧を低下させることが見い出された。その結果、合成rC
RFは本質的に純粋な形（すなわち、粗生物学的抽出物と
残存物や関連した合成複製物を本質的に含まない）で利
用可能であり、そして少なくとも約５％の純度をもつ合
成化合物（これは天然に存在するペプチドよりもその純
度が本質的に高い）は有用性をもつと考えられる。実際
に、少なくとも約90％またはそれ以上の純度のものを得
ることができ、これは臨床試験用に使用されるだろう。

次式で表わされる41−アミノ酸残基CRFペプチドの類似
体またはそれらの無毒性付加塩は少なくとも実質的に同
じ生物学的活性を有する： Y-R₁‐Pro-Pro-Ile-Ser-R₈‐R₉‐leu-R₁₁‐R₁₂‐R₁₃‐l
eu-leu-Arg-R₁₇‐R₁₈‐R₁₉‐Glu-R₂₁‐R₂₂‐R₂₃‐R₂₄‐
R₂₅‐R₂₆‐R₂₇‐R₂₈‐R₂₉‐Gln-ala-R₃₂‐R₃₃‐Asn-Arg
-R₃₆‐R₃₇‐R₃₈‐R₃₉‐R₄₀‐R₄₁‐NH₂ 式中、Ｙは炭素原子数７以下のアシル基または水素原子
であり； R₁はSer-Gln-Glu,pGlu-Gly,Gln-Glu,Glu,D-Ser-Gln-Gl
u,Ser-Glu-Glu,D-Ser-Glu-Glu,Glu-Glu,D-pGlu-Glyまた
はデスR₁であり； R₈，R₁₂，R₁₉およびR₂₄はleu,Ile,ala,Gly,Val,Nle,Phe
およびGlnよりなる群から選択され； R₉はAspまたはGluであり； R₁₁はThrまたはSerであり； R₁₃はHis,TyrまたはGluであり； R₁₇はGluまたはLysであり； R₁₈はVal,NleまたはMetであり； R₂₁はMet,Nva,Ile,ala,leu,Nle,Val,PheまたはGlnであ
り； R₂₂はala,Thr,AspまたはGluであり； R₂₃はArg,Orn,HarまたはLysであり； R₂₅はAspまたはGluであり； R₂₆はGln,AsnまたはLysであり； R₂₇はleu,Ile,ala,Val,Nva,Met,Nle,Phe,Asp,Asn,Glnま
たはGluであり； R₂₈はala,ArgまたはLysであり； R₂₉はGlnまたはGluであり； R₃₂はHis,Gly,Tyrまたはalaであり； R₃₃はSer,Asn,len,Thrまたはalaであり； R₃₆はLys,Orn,Arg,HarまたはLeuであり； R₃₇はleuまたはTyrであり； R₃₈はMetまたはleuであり； R₃₉はGluまたはAspであり； R₄₀はIle,Thr,Glu,ala,Val,leu,Nle,Phe,Nva,Glyまたは
Glnであり； R₄₁はala,Ile,Gly,Val,Leu,Nle,Phe,GlnまたはデスR₄₁
である；ただし、R₃₈がLeuである場合には、R₂₂はAlaでありかつ
／またR₃₃はleuである。

本発明による薬剤組成物は薬学的にまたは獣医学的に許
容される液体もしくは固体の担体に分散された、rCRFま
たはその無毒性付加塩を含有する。本発明によるペプチ
ド類またはそれらの薬学的にまたは獣医学的に許容され
る付加塩の哺乳動物（特にヒト）への投与は、ACTH、β
−エンドルフイン、β−リポトロピン、プロ−オピオメ
ラノコルチン（pro-opiomelanocortin）遺伝子の他の生
産物およびコルチコステロンの分泌を調節するために、
そして／また血圧を低下させるために、そして／また気
分、行動および胃腸の機能ならびに自律神経系の活動に
影響を及ぼすために実施される。さらにCRF類似体は脳
下垂体、心臓血管系、胃腸系または中枢神経系の機能状
態を鑑定するために使用することができる。

発明の開示ペプチドを定義するために使用される命名法はSchroder
およびLubkeによる“The Peptides"アカデミックプレス
発行（1965年）に定められたものであり、慣用的な表示
法によればアミノ基は左に、そしてカルボキシル基は右
に記載される。α−アミノ酸残基を示すために標準的な
３文字の略号が用いられ、そしてアミノ酸残基が異性体
を有する場合、それは他の特別に指示されない限り表示
されたアミノ酸のＬ体である：例えばSer＝Ｌ−セリン,
Nie＝Ｌ−ノルロイシン,Nva＝ノルバリン,Har＝ホモア
ルギニン,Orn＝オルニチンなど。また、次の略号が使用
される:leu＝Ｌ−ロイシンまたはC CH₃−Ｌ−ロイシン
（CML）のいずれか一方、およびala＝Ｌ−アラニンまた
はC CH₃−Ｌ−アラニン（CMA）のいずれか一方。

CRF類似体は次式（Ｉ）で表わされる： Y-R₁‐Pro-Pro-Ile-Ser-R₈‐R₉‐leu-R₁₁‐R₁₂‐R₁₃‐l
eu-leu-Arg-R₁₇‐R₁₈‐R₁₉‐Glu-R₂₁‐R₂₂‐R₂₃‐R₂₄‐
R₂₅‐R₂₆‐R₂₇‐R₂₈‐R₂₉‐Gln-ala-R₃₂‐R₃₃‐Asn-Arg
-R₃₆‐R₃₇‐R₃₈‐R₃₉‐R₄₀‐R₄₁‐NH₂ 式中、Ｙは炭素原子数７以下のアシル基または水素原子
であり； R₁はSer-Gln-Glu,pGlu-Gly,Gln-Glu,Glu,D-Ser-Gln-Gl
u,Ser-Glu-Glu,D-Ser-Glu,Glu,Glu-Glu,D-pGlu-Glyまた
はデスR₁であり； R₈，R₁₂，R₁₉およびR₂₄はleu,Ile,ala,Gly,Val,Nle,Phe
およびGlnよりなる群から選択され； R₉はAspまたはGluであり； R₁₁はThrまたはSerであり； R₁₃はHis,TyrまたはGluであり； R₁₇はGluまたはLysであり； R₁₈はVal,NleまたはMetであり； R₂₁はMet,Nva,Ile,ala,leu,Nle,Val,PheまたはGlnであ
り； R₂₂はala,Thr,AspまたはGluであり； R₂₃はArg,Orn,HarまたはLysであり； R₂₅はAspまたはGluであり； R₂₆はGln,AsnまたはLysであり； R₂₇はleu,Ile,ala,Val,Nva,Met,Nle,Phe,Asp,Asn,Glnま
たはGluであり； R₂₈はala,ArgまたはLysであり； R₂₉はGlnまたはGluであり； R₃₂はHis,Gly,Tyrまたはalaであり； R₃₃はSer,Asn,len,Thrまたはalaであり； R₃₆はLys,Orn,Arg,HarまたはLeuであり； R₃₇はleuまたはTyrであり； R₃₈はMetまたはleuであり； R₃₉はGluまたはAspであり； R₄₀はIle,Thr,Glu,ala,Val,leu,Nle,Phe,Nva,Glyまたは
Glnであり； R₄₁はala,Ile,Gly,Val,Leu,Nle,Phe,GlnまたはデスR₄₁
である；ただし、R₃₈がLeuである場合に、R₂₂はAlaでありかつ／
またR₃₃はleuである。

合成されたこれらの類似体は天然のCRFと比べて少なく
とも同程度の効能を有する。本発明は次式： H-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-
His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Arg-Ala-Gl
u-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-
Met-Glu-Ile-Ile-NH₂ で表わされるrCRFを提供する。

ペプチドは適当な方法、例えば独占的固相法、部分的固
相法、断片縮合または古典的な溶液付加などにより合成
される。Ｄ−異性体残基または天然に存在しないアミノ
酸残基を含まないある種のCRF類似体は、最近開発され
た組換えDNA法により合成することができる。

組換えDNA法の使用による合成は、本出願にとって、意
図した形のCRF類似体を暗号化する構造遺伝子の適切な
使用を包含するものであることを理解すべきである。合
成CRFペプチドは、このような構造遺伝子と共にプロモ
ーターおよびオペレーターを含む発現ベクターを使用し
て微生物を形質転換させ、そしてその形質転換微生物に
CRFペプチドを発現させることにより得られる。また、
ヒト以外の動物も、このような構造遺伝子と米国特許第
4276282号明細書（1981年６月30日交付）に記載の一般
方法を用いる遺伝子操作、またはWO83/01783（1983年５
月26日発行）およびWO82/04443（1982年12月23日発行）
に記載されたような発生初期の胚の顕微注入を用いる遺
伝子操作により、CRFペプチドを産生させるのに使用す
ることができる。合成CRFペプチドはその後血清からの
抽出などにより動物から適切に回収される。

各種のアミノ酸部分の不安定な側鎖基を適当な保護基
（その保護基が最終的に除去されるまでその部位での化
学反応の発生を防ぐ役目をする）で保護することは、ペ
プチドの化学合成において通常のことである。また、ア
ミノ酸やペプチド断片のα−アミノ基を保護して、その
間にその物質をカルボキシル基の部分で反応させ、続い
てα−アミノ保護基を選択的に除去してその部位で次の
反応を行わせることも一般的なことである。従って、ペ
プチド合成の一段階として、側鎖保護基をもつ各種のア
ミノ酸残基を用いてペプチド鎖中の意図した配列位置に
配置させた各アミノ酸残基からなる中間体化合物が製造
されることは通常のことである。

中間体は次式（II）で表わされる： X¹‐R₁‐Pro-Pro-Ile-Ser（X²）‐R₈‐R₉（X⁵）‐leu-R
₁₁（X²）‐R₁₂（X⁴）‐R₁₃（ＸまたはX⁵）‐leu-leu-Ar
g（X³）‐R₁₇（X⁵またはX⁶）‐R₁₈‐₁₉（X⁴）‐Glu
（X⁵）‐R₂₁‐R₂₂（X²またはX⁵）‐R₂₃（X³またはX⁶）
‐R₂₄（X⁴）‐R₂₅（X⁵）‐R₂₆（X⁴またはX⁶）‐R₂₇（X⁴
またはX⁵）‐R₂₈（X³またはX⁶）‐R₂₉（X⁴またはX⁵）‐
Gln（X⁴）‐Ala-R₃₂（Ｘ）‐R₃₃（X²またはX⁴）‐Asn
（X⁴）‐Arg（X³）‐R₃₆（X⁶）‐R₃₇（Ｘ）‐R₃₈‐R₃₉
（X⁵）‐R₄₀（X²またはX⁴またはX⁵）‐R₄₁（X⁴）‐X⁷ 式中、Ｒ基は先に定義した通りである。

X¹は水素原子またはα−アミノ保護基である。X¹により
意図されるα−アミノ保護基は、ポリペプチドの段階合
成の技術分野で有用であることが知られたものである。
X¹に包含されるα−アミノ保護基の部類には（１）アシ
ル型保護基、例えばホルミル基、アクリリル基（Ac
r）、ベンゾイル基（Bz）およびアセチル基（Ac）、こ
れらの保護基は好ましくはＮ−末端でのみ使用される；
（２）芳香族ウレタン型保護基、例えばベンジルオキシ
カルボニル基（Ｚ）および置換Ｚ（例えばｐ−クロロベ
ンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトロベンジルオキシ
カルボニル基、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル基
およびｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基）；
（３）脂肪族ウレタン型保護基、例えばｔ−ブチルオキ
シカルボニル基（BOC）、ジイソプロピルメトキシカル
ボニル基、イソプロピルオキシカルボニル基、エトキシ
カルボニル基およびアリルオキシカルボニル基；（４）
シクロアルキルウレタン型保護基、例えばフルオレニル
メチルオキシカルボニル基（FMOC）、シクロペンチルオ
キシカルボニル基、アダマンチルオキシカルボニル基お
よびシクロヘキシルオキシカルボニル基；および（５）
チオウレタン型保護基、例えばフェニルチオカルボニル
基；である。有利なα−アミノ保護基はBOCである。

X²はThrおよびSerのヒドロキシル基のための保護基であ
り、アセチル基（Ac）、ベンゾイル基（Bz）、ｔ−ブチ
ル基、トリフェニルメチル基（トリチル基）、テトラヒ
ドロピラニル基、ベンジルエーテル基（Bzl）および2,6
−ジクロロベンジル基（DCB）よりなる群から有利に選
択される。最適な保護基はBzlである。X²は水素原子で
あることもでき、この場合にはヒドロキシル基に保護基
が存在しない。

X³はArgまたはHarのグアニジノ基のための保護基であ
り、ニトロ基、ｐ−トルエンスルホニル基（Tos）、
Ｚ、アダマンチルオキシカルボニル基およびBOCよりな
る群から有利に選択されるか、あるいは水素原子であ
る。Tosが最適である。

X⁴は水素原子、またはAsnおよびGlnのアミド基のための
保護基、好ましくはキサンチル基（Xan）である。

X⁵は水素原子、またはAspおよびGluのβ−またはα−カ
ルボキシル基のためのエステル形成保護基であり、ベン
ジルエステル、2,6−ジクロロベンジルエステル、メチ
ルエステル、エチルエステルおよびｔ−ブチルエステル
よりなる群から有利に選択される。OBzlが最適である。

X⁶は水素原子、またはLysおよびOrnの側鎖アミノ基のた
めの保護基である。適当な側鎖アミノ保護基の例はZ,2
−クロロベンジルオキシカルボニル基（２−Cl−Ｚ）、
Tos,t−アミルオキシカルボニル基（Aoc）,BOCおよび先
に特定した芳香族または脂肪族ウレタン型保護基であ
る。

Hisが存在する場合、Ｘは水素原子またはイミダゾール
窒素のための保護基、例えばTosおよび2,4−ジニトロフ
ェニル基（DNP）であり、そしてTyrが存在する場合、Ｘ
は水素原子またはヒドロキシル基のための保護基、例え
ばDCBである。Metが存在する場合、その硫黄原子は所望
により酸素原子で保護されてもよい。

側鎖アミノ保護基の選択は限定的ではないが、ただしそ
の保護基は合成中にα−アミノ保護基の離脱反応で除去
されないものであるべきである。それ故、α−アミノ保
護基と側鎖アミノ保護基とは同じものであってはならな
い。

X⁷はNH₂、エステルのような保護基または固体樹脂支持
体に結合するために固相合成法で使用される定着結合、
好ましくは次式：−NH−ベンズヒドリルアミノ（BHA）
樹脂支持体および−NH−パラメチルベンズヒドリルアミ
ン（MBHA）樹脂支持体で表わされるものである。BHAま
たはMBHA樹脂からの開裂は直接CRF類似体アミドを与え
る。このような樹脂のメチル誘導体を使用することによ
り、メチル置換アミドを製造することができる。

上記の中間体のための式においてX,X¹，X²，X³，X⁴，X⁵
およびX⁶のうちの少なくとも１つは保護基である。各Ｒ
基のために選択した個々のアミノ酸は先に特定した当該
技術分野で一般に知られた保護基を結合するかどうか決
定される。ペプチド合成で使用するための個々の側鎖保
護基を選択する際には次の規則に従う：（ａ）保護基は
合成の各段階でα−アミノ保護基を除去するために選択
された試薬および反応条件下に安定であるべきである，
（ｂ）保護基はその保護特性を保持してカップリング条
件下に開裂されてはならない，そして（ｃ）側鎖保護基
は意図したアミノ酸配列を含む合成の完了時点に、ペプ
チド鎖を変性しない反応条件下で除去できなければなら
ない。

Ｙで表わされるＮ−末端のアシル基のためには、アセチ
ル基、ホルミル基、アクリリル基およびベンゾイル基が
好適である。１個ないし10個のアミノ酸ペプチド（この
ペプチドは効能に逆の影響を及ぼすことなく任意に含ま
れる）についてはどのアミノ酸も使用できるが、通常は
天然に存在するアミノ酸のＬ体またはＤ体が用いられ
る。

こうして、本発明はまた式（Ｉ）で表わされる化合物の
製造方法を提供することが考えられ、その方法は（ａ）少なくとも１個の保護基をもちかつ式（II）で表
わされるペプチド（式中、X,X¹，X²，X³，X⁴，X⁵および
X⁶は各々水素原子または保護基であり、そしてX⁷は保護
基、樹脂支持体の定着結合、OHまたはNH₂である）を生
成し；（ｂ）式（II）の上記ペプチドから１個またはそれ以上
の保護基あるいは定着結合を切り離し；そして（ｃ）所望により、得られたペプチドをその無毒性付加
塩に変換する；ことから成っている。

ペプチドを化学合成で製造する場合に、それらはMerrif
ieldによるJ.Am.Chem.Soc.,86,2149ページ（1964年）に
記載されたような固相合成法を用いて有利に製造できる
が、当該技術分野で知られた他の同様な化学合成法も前
に述べたように使用される。固相合成法はRivier等によ
る米国特許第4244946号明細書（1981年１月21日交付、
その開示は参照することによりここに引用される）に一
般的に説明されるように、保護α−アミノ酸を適当な樹
脂にカップリングさせることによりペプチドのＣ−末端
から開始される。rCRFのこのような出発物質はα−アミ
ノ−保護基IleをBHA樹脂に結合させることにより製造さ
れる。

BOCで保護されたIleは塩化メチレンおよびジメチルホル
ムアミド（DMF）を使用してBHA樹脂にカップリングされ
る。BOC−Ileの樹脂支持体へのカップリング後に、α−
アミノ保護基は塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸（TF
A）、TFA単独、またはジオキサン中のHClを用いること
により除去される。有利には塩化メチレン中50容量％の
TFAが０〜５重量％の1,2−エタンジチオールと共に使用
される。この保護基除去反応は約０℃ないし室温で実施
される。特定のα−アミノ保護基の除去のためのその他
の標準的な開裂試薬ならびにその反応条件は、Schroder
およびLubkeによる“The Peptides"1,72〜75ページ（ア
カデミックプレス発行,1965年）に記載されている。

Ileのα−アミノ保護基の除去後に、残りのα−アミノ
−および側鎖−保護アミノ酸を意図した順序で段階的に
カップリングさせて先に定義した中間体化合物を得る。
各アミノ酸をその合成反応に別々に添加する代りに、そ
れらのアミノ酸のいくつかを固相反応器へ添加する前に
互いにカップリングさせてもよい。適当なカップリング
剤の選択は当業者の知るところである。特に適したカッ
プリング剤としてはN,N′−ジシクロヘキシルカルボジ
イミド（DCCI）およびN,N′−ジイソプロピルカルボジ
イミド（DICI）がある。

ペプチドの固相合成法で使用される活性化試薬はペプチ
ドの技術分野で周知である。適当な活性化試薬の例には
N,N′−ジイソプロピルカルボジイミドおよびＮ−エチ
ル−Ｎ′−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイ
ミドのようなカルボジイミド類がある。他の活性化試薬
およびペプチドカップリングにおけるそれらの使用につ
いては、SchroderおよびLubkeによる同書の第III章およ
びKapoorによるJ.Phar.Sci.,59,1〜27ページ（1970年）
に記載されている。

各保護アミノ酸またはアミノ酸配列は第４倍過剰量で固
相反応器に導入され、そしてカップリングはジメチルホ
ルムアミド（DMF）：CH₂Cl₂（1:1）の混合媒体またはDM
FもしくはCH₂Cl₂の単独媒体中で実施される。カップリ
ングが手動で行われる場合に、合成の各段階におけるカ
ップリング反応の完了はE.Kaiser等によるAnal.Bioche
m.,34,595ページ（1970年）に記載されるようなニンヒ
ドリン反応で監視される。不完全なカップリングが生じ
る場合には、次のアミノ酸をカップリングさせる前のα
−アミノ保護基の除去前にそのカップリング法を繰り返
し行う。カップリング反応は例えばベックマン（Beckma
n）990自動合成器で、Rivier等によるBiopolymers,197
8,17,1927〜1938ページに報告されたようなプログラム
を使用して、自動的に行うことができる。

意図したアミノ酸配列が完了した後、その中間体ペプチ
ドは液状弗化水素のような試薬（これはペプチドを樹脂
から切り離すばかりでなく、残りの側鎖保護基X²，X³，
X⁴，X⁵およびX⁶の全ておよびもしくはX¹が最終ペプチド
中に存在させる予定のアシル基でないならばそのα−ア
ミノ保護基X¹をも切り離す試薬である）で処理すること
により、樹脂支持体から切り離されてペプチドを生ず
る。切り離すために弗化水素を使用する場合、スキヤベ
ンジャーとしてアニソールまたはクレゾールおよびメチ
ルエチルスルフィドを反応容器中に含有させる。Metが
配列中に存在する場合には、ペプチドを樹脂から切り離
す前にそのBOC保護基をトリフルオロ酢酸（TFA）／エタ
ンジチオールで開裂させてＳ−アルキル化を排除するこ
とができる。

次の実施例は固相法でCRF類似体を合成するための好適
な方法を説明する。

実施例Ｉ次式： H-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-
His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Arg-Ala-Gl
u-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-
Met-Glu-Ile-Ile-NH₂ で表わされるrCRFの合成は、樹脂1gあたり約0.1〜0.5ミ
リモルの置換範囲（substitutionrange）をもつBachem
社から市販されているMBHA塩酸塩樹脂上で、段階法によ
り実施した。その合成はベックマン990Bペプチド自動合
成器で適当なプログラム、好ましくは次のようなプログ
ラムを使用して行った。

BOC−Ileのカップリングは樹脂1gあたり約0.35ミリモル
のIleの置換をもたらした。使用する溶媒は全て、ヘリ
ウムや窒素のような不活性ガスを吹き込むことによりガ
ス抜きして、Met残基の硫黄原子を酸化するので望まし
くない酸素を排除した。

保護基の除去および中和後に、ペプチド鎖はその樹脂上
に段階ごとに順次カップリングさせた。一般に、２時間
で樹脂1gあたり塩化メチレン中１〜２ミリモルのBOC−
保護アミノ酸および塩化メチレン中２モルのDCCI1当量
を使用した。BOC−Arg（Tos）をカップリングする場合
はDMFおよび塩化メチレンの50％混合物を使用した。Bzl
はSerおよびThrのためのヒドロキシル側鎖保護基として
使用した。ｐ−ニトロフェニルエステル（ONp）はAsnま
たはGlnのカルボキシル端を活性化するために使用し、
そして例えばBOC−Asn（ONp）はDMFおよび塩化メチレン
の50％混合物中のHOBt1当量を使用して一晩カップリン
グさせた。AsnまたはGlnのアミド基は、活性エステル法
の代りにDCCIカップリングを使用する場合、Xanで保護
した。２−Cl−ＺはLys側鎖のための保護基として使用
した。TosはArgのグアニジノ基およびHisのイミダゾー
ル基を保護するために使用し、そしてGlnまたはAspの側
鎖カルボキシル基はOBzlで保護した。合成終了時に次
式： BOC-Ser（Bzl）‐Glu（OBzl）‐Glu（OBzl）‐Pro-Pro-
Ile-Ser（Bzl）‐Leu-Asp（OBzl）‐Leu-Thr-（Bzl）‐
Phe-His（Tos）‐Leu-Leu-Asp（Tos）‐Glu（OBzl）‐V
al-Leu-Glu（OBzl）‐Met-Ala-Arg（Tos）‐Ala-Glu（O
Bzl）‐Gln（Xan）‐Leu-Ala-Gln（Xan）‐Gln（Xan）
‐Ala-His（Tos）‐Ser（Bzl）‐Asn（Xan）‐Arg（To
s）‐Lys（2-Cl-Z）‐Leu-Met-Glu（OBzl）‐Ile-Ile-
樹脂支持体で表わされる中間体化合物が得られた。Xanはα−アミ
ノ保護基を除去するために使用したTFA処理で部分的に
あるいは完全に除去することができた。

得られた保護ペプチド−樹脂を切り離して保護基の除去
を行うために、ペプチド−樹脂1gあたりアニソール1.5m
l、メチルエチルスルフィド0.5mlおよび弗化水素（HF）
15mlを用いて、最初は−20℃で20分間、次いで０℃で30
分間処理した。高真空下にHFを排除した後、そのペプチ
ド−樹脂を乾燥ジエチルエーテルおよびクロロホルムで
交互に洗浄し、その後ペプチドをガス抜きした2N酢酸水
溶液で抽出し、過して樹脂から分離した。

ペプチドはゲル透過クロマトグラフィーで精製し、次い
でRivier等によるPeptides:Struture and Biological F
unction,125〜1238ページ（1979年）およびRivier等に
よるJ.Chromatography（1983年）に記載された半調製用
HPLCで精製した。クロマトグラフ分画はHPLCで注意しな
がら監視し、そして本質的に純粋な分画のみを集めた。

上記方法で合成しかつ精製したrCRFペプチドの比旋光度
をパーキンエルマー（Perkin Elmer）141型で測定した
ところ▲〔α〕²² _D▼＝51.4±1.0（１％酢酸中ｃ＝１）
（H₂OおよびTFAの存在のために補正した値：−93.5°±
1.0）であり、その純度は約95％であった。

意図した正確なアミノ酸配列が達成されたかどうかを調
べるために、そのrCRFペプチドは沸騰HCl、チオグリコ
ール３μl/mlおよびNle（内部標準として）１ナノモル
を含む密封した排気管中で140℃において９時間加水分
解した。その加水分解物のアミノ酸分析（ベックマン12
1MBアミノ酸分析器使用）は次のようなアミノ酸比:Asx
（1.9）,Thr（0.8）,Ser（3.1）,Glx（9.0）,Pro（2.
1）,Ala（3.8）,Val（0.9）,Net（1.9）,Ile（2.6）,Le
u（7.0）,Phe（0.9）,Lys（1.0）,His（2.O）およびArg
（3.0）を示し、これにより41−アミノ酸残基ペプチドが得られ
たことを確認した。

実施例II rCRFを次の方法で抽出し、単離し、そして精製した。凍
結乾燥したラット視床下部をアセトンで脱脂し、生じた
粉末を1N酢酸（HOAc）,0.1H HCl,0.5％β−メルカプト
エタノール、10ミリモルEDTAおよび５μg/mlペプスタチ
ンＡを含む混合物10容量を用いて90℃以上の温度で抽出
した。その温スラリーをすぐにブレンダーで粉砕し、氷
浴で冷却し、そして遠心分離にかけた。上澄みをとって
おき、沈殿物は20ミリモルNaClを添加した上記混合物で
再び抽出した。合わせた上澄みはエチルエーテル／石油
エーテル（1:2）の混合溶媒２容量で多重抽出すること
により脱脂した。

水相はファーマシア（Pharmacia）K215/100カラム（85c
mセファデックスＧ−50を、その上に5cmセファデックス
Ｇ−10を充填したカラム、V_T＝311）で４℃においてゲ
ル過クロマトグラフィーにかけた。溶離剤は0.2％β
−メルカプトエタノール含有3N HOAcであった。コルチ
コトロピン／β−エンドルフィン放出因子生物−および
免疫−活性はGH放出活性と共にKav＝0.20〜0.31の領域
に溶離した。そのCRF帯域は、RivierによるJ.Liquid Ch
romat.1:343〜367,1978に記載されるような、バイダッ
ク（Vydac）C₁₈充填カートリッジを備えたWaters Assoc
iates Prep500システムおよび燐酸トリエチルアンモニ
ウム（TEAP）／アセトニトリル緩衝液系を使用する調製
用HPLCでさらに精製した。活性分画はバイダックC₄半調
製用カラムおよびトリフルオロ酢酸／アセトニトリル系
を使用するHPLCでさらに精製した。

続いてrCRFの精製を行った。最初にバイダックジフェニ
ル（５μ）カラムでTEAP/CH₃CN勾配を使用して分析分離
を実施した。次に、バイダックC₁₈（５μ）カラムで0.1
％TFA/CH₃CN勾配を使用して２回の連続分析分離を行っ
た。最後に、バイダックジフェニル（５μ）カラムで0.
1％TFA/CH₃CN勾配を使用して２回の付加分離を行った。
最後の段階で約２ナノモルのrCRF（純度約90％）が得ら
れた。組成ならびに構造分析は次の配列を与えた。

H-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-
His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Arg-Ala-Gl
u-Glu-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-
Met-Glu-Ile-Ile-NH₂ 実施例III 合成およひ天然のrCRFについて、それらの試験管内での
ACTHおよびβ−エンドルフィンの分泌に対する作用を試
験した。また、合成rCRFについては生体内でも試験し
た。培養したラット脳下垂体細胞によるACTHおよびβ−
エンドルフィンの分泌を刺激する合成および天然rCRFの
高い効能は、Endocrinology,91,562ページ（1972年）に
一般的に説明される方法を使用して測定した。最小応答
ならびに半−最大応答はそれぞれ約10ピコモルの合成rC
RFと約100ピコモルの合成rCRFに観察された。rCRFの最
大濃度（５ナノモル）に対する分泌応答はプラト−レベ
ルであった。生体内試験はC.Bivier等によるScience,21
8,377ページ（1982年）に記載される一般方法を使用し
て実施した。体重1kgあたり30ngないし３μｇの投与量
はACTHおよびβ−エンドルフィン様物質（β−エンドル
フィンと同様の免疫反応性を示す物質の総称であり、β
−エンドルフィンおよびアシル化β−エンドルフィンを
含む。以下、β−END−LIと称する）の分泌を急速に５
〜20倍高めた。

合成rCRFはラット生体内での強力なACTHおよびβ−END
−LI分泌刺激剤であることがわかった。ネンブタールで
麻酔をかけた雄ラットおよび静止性の雄または雌ラット
に静脈内カニューレを差し込み、それを介してrCRF静脈
内投与した後に、ACTHおよびβ−END−LIの血漿レベル
は少なくとも５〜20分間上昇した。さらに、rCRFはラッ
トおよび犬において血圧を低下させるという劇的な作用
を有することが見い出された。

rCRFの急性毒性試験を以下のようにして行った。

20〜25gの雄Balb−Ｃマウスを、以下の４群に分け、0.9
％生理食塩水および１×10^-4アスコルビン酸を含むビー
クルまたは1mg/mlビークルのCRFを投与した。

A 8匹 V¹⁾ 皮下麻酔無 B 8匹 CRF²⁾ 皮下麻酔無 C 8匹Ｖ静注エーテル麻酔 D 8匹 CRF 静注エーテル麻酔１） V:ビークル２） CRF:10mgCRF/kg体重Ａ群およびＢ群のマウスはいずれも異常を示さず、18時
間後においてもすべて生存した。

Ｃ群およびＤ群のマウスは軽エーテル麻酔から速やかに
覚醒し、正常な麻酔後挙動をしめした。18時間後におい
てマウスはすべて生存した。

以上の結果から、10mg/kg体重の投与量において、CRFは
マウスに対して急性毒性を有しないことが示された。

また、健康なヒトに0.01〜５μg/kg体重のCRFを投与し
たところ、いずれの濃度においても重い副作用は生じな
かった。

参考例Ｉ次式： Ac-Gly-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe
-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Arg-Ala-G
lu-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu
-Met-Glu-Ile-Ile-NH₂ で表わされるペプチド［アセチル−Gly¹］‐rCRFを合成
した。実施例IIIで示した一般方法による試験は、この
ペプチドが同じくACTHとβ−END−L1の分泌を刺激し、
かつ血圧をかなり有意に低下させることを明らかにし
た。

参考例II 次式： H-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-
Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Arg-Ala-Glu-Gln-Leu-Al
a-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Met-Glu-Ile-
Ile-NH₂ で表わされるペプチド［デスSer¹‐Glu²‐Glu³］‐rCRF
を合成した。実施例IIIで説明した一般方法による試験
は、このペプチドが同じくACTHとβ−END−LIの分泌を
刺激し、かつ血圧をかなり有意に低下させることを明ら
かにした。

参考例III 次式： H-Tyr-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-
Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Arg-Al
a-Glu-Glu-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-
Leu-Met-Glu-Ile-Ile-NH₂ で表わされるペプチド［Tyr-Ser¹］‐rCRFを合成した。
実施例IIIで説明した一般方法による試験は、このペプ
チドが同じくACTHとβ−END−LIの分泌を刺激し、かつ
血圧をかなり有意に低下させることを明らかにした。

参考例IV 次式： H-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-
His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Ala-Glu-Met-Thr-Arg-Ala-Gl
u-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-
Met-Glu-Ile-Ile-NH₂ で表わされるペプチド［Ala¹⁹．Thr²²］‐rCRFを合成し
た。実施例IIIで説明した一般方法による試験は、この
ペプチドが同様にACTHとβ−END−LIの分泌を刺激し、
かつ血圧をかなり有意に低下させることを立証した。

参考例Ｖ次式： Acr-Leu-Gly-Val-Ser-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Le
u-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-
Arg-Ala-Glu-Glu-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Ar
g-Lys-Lea-Met-Glu-Ile-Ile-NH₂ で表わされるペプチド［アクリリル−Leu-Gly-Val¹，Se
r²］‐rCRFを合成した。実施例IIIで説明した一般方法
による試験は、このペプチドが同様にACTHとβ−END−L
Iの分泌を刺激し、かつ血圧をかなり有意に低下させる
ことを立証した。

参考例VI 次式： H-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-
Glu-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Val-Ala-Arg-Ala-Gl
u-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-
Met-Glu-Ile-Ile-NH₂ で表わされるペプチド［Glu¹³，Val²¹］‐rCRFを合成し
た。実施例IIIで説明した一般方法による試験は、この
ペプチドがrCRFそれ自体よりもかなりの程度にACTHとβ
−END−LIの分泌を刺激し、かつ血圧をかなり有意に低
下させることを立証した。

参考例VII 次式： H-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Nle-Asp-Leu-Ser-Phe-
His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Arg-Ala-Gl
u-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Leu-Asn-Arg-Lys-Leu-
Met-Glu-Ile-Ile-NH₂ で表わされるペプチド［Nle⁸，Ser¹¹，Leu³³］‐rCRFを
合成した。このペプチドは実施例IIIに記載の一般方法
により同じくACTHとβ−END−LIの分泌を刺激するこ
と、および血圧をかなり有意に低下させることを立証さ
れた。

参考例VIII 次式： H-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-
His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Ala-Ala-Arg-Ala-Gl
u-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-
Leu-Glu-Ile-Nle-NH₂ で表わされるペプチド［Ala²¹，Leu³⁸，Nle⁴¹］‐rCRF
を合成した。このペプチドは実施例IIIに記載の一般方
法により同じくACTHとβ−END−LIの分泌を刺激するこ
と、および血圧をかなり有意に低下させることを立証さ
れた。

参考例IX 次式： Bz-Gly-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Nle-His
-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Arg-Ala-Glu-G
ln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Met
-Glu-Ile-Ile-NH₂ で表わされるペプチド［ベンゾイル−Gly¹，デスGln³，
Nle¹²］‐rCRFを合成した。このペプチドは実施例IIIに
記載の一般方法により同じくACTHとβ−END−LIの分泌
を刺激すること、および血圧をかなり有意に低下させる
ことを立証された。

参考例Ｘ次式： Ac-D-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-P
he-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Arg-Ala
-Glu-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-L
eu-Met-Asp-Ile-Ile-NH₂ で表わされるペプチド［アセチル−D-Ser¹，Asp³⁹］‐r
CRFを合成した。このペプチドは実施例IIIに記載の一般
方法にりrCRFそれ自体よりもかなりの程度にACTHとβ−
END−LIの分泌を刺激すること、および血圧をかなり有
意に低下させることを立証された。

参考例XI 次式： H-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-
His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Lys-Ala-Gl
u-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-
Leu-Glu-Ile-Ile-NH₂ で表わされるペプチド［Gln²，Lys²³，Leu38］‐rCRFを
合成した。このペプチドは実施例IIIに記載の一般方法
により同様にACTHとβ−END−LIの分泌を刺激するこ
と、および血圧をかなり有意に低下させることを立証さ
れた。

参考例XII 次式： H-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-
His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Nle-Ala-Arg-Ala-Gl
u-Glu-Leu-Ala-Glu-Glu-Ala-Tyr-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-
Met-Glu-Ile-Ile-NH₂ で表わされるペプチド［Nle²¹，Tyr³²］‐rCRFを合成し
た。このペプチドは実施例IIIに記載の一般方法によりr
CRFそれ自体よりもかなりの程度にACTHとβ−END−LIの
分泌を刺激すること、および血圧をかなり有意に低下さ
せることを立証された。

参考例XIII 次式： H-Pro-Pro-Ile-Ser-Ile-Asp-Leu-Ser-Leu-Glu-Leu-Leu-
Arg-Lys-Met-Ile-Glu-Ile-Ala-Lys-Gln-Glu-Lys-Glu-Ly
s-Gln-Gln-Ala-Ala-Asn-Asn-Arg-Leu-Leu-Met-Asp-Thr-
Ile-NH₂ で表わされるペプチド［デスpGlu¹‐Gly²，Ala²¹，Met
³⁷］‐サウバジンを合成した。このペプチドは実施例II
Iに記載の一般試験方法により同じくACTHとβ−END−LI
の分泌を刺激すること、および血圧をかなり有意に低下
させることを立証された。

参考例XIV 次式： pGlu-Gly-Pro-Pro-Ile-Ser-Ile-Asp-Leu-Ser-Leu-Glu-L
eu-Leu-Arg-Lys-Met-Ile-Glu-Ala-Arg-Lys-Gln-Glu-Lys
-Glu-Lys-Gln-Gln-Ala-Ala-Asn-Asn-Arg-Leu-Leu-Asp-I
le-Ile-NH₂ で表わされるペプチド［Ala²¹，Arg²²，Ile^39,40］‐サ
ウバジンを合成した。このペプチドは実施例IIIに記載
の一般試験方法により同じくACTHとβ−END−LIの分泌
を刺激すること、および血圧をかなり有意に低下させる
ことを立証された。

参考例XV 次式： pGlu-Gly-Pro-Pro-Ile-Ser-Ile-Asp-Leu-Ser-Leu-Glu-L
eu-Leu-Arg-Lys-Met-Ile-Glu-Ile-Glu-Lys-Gln-Gln-Lys
-Leu-Lys-Gln-Gln-Ala-Ala-Asn-Asn-Arg-Leu-Leu-Met-A
sp-Thr-Ile-NH₂ で表わされるペプチド［Leu²⁶，Met³⁷］‐サウバジンを
合成した。このペプチドは実施例IIIに記載の一般方法
により同じくACTHとβ−END−LIの分泌を刺激するこ
と、および血圧をかなり有意に低下させることを立証さ
れた。

CRF類似体は顕著な血圧低下を示すので、高血圧状態の
処置に、またある種の外科手術を行う患者の処置に特に
価値を有するだろう。

CRFは脳下垂体−副腎皮質軸雄を強く刺激し、それ故CRF
類似体は体内でのグルココルチコイドの産生が乏しいあ
る種の患者において、この軸椎の機能を刺激する場合に
有用だろう。例えば、CRFは脳下垂体−副腎皮質機能が
低下したままであり、生体外からのグルココルチコイド
の治療を受けている患者に対して、その脳下垂体−副腎
皮質機能をもと通りにするのに有用だろう。

他のたいていの調節ペプチドは中枢神経系および胃腸管
に影響ほ及ぼすことが見い出された。ACTHおよびβ−EN
Dの分泌はストレスに対する哺乳動物の応答の“必要条
件”であるので、CRFが身体のストレスの応答の媒介物
質として脳に有意な作用を及ぼすことは予想された。従
って、CRFは精神が正常であるが乱れている人の気分、
学習または行動を改善する際に使用されるだろう。CRF
類似体はACTH,β−END,β−リポトロピン，プロ−オピ
オメラノコルチン遺伝子の他の生産物およびコルチコス
テロンの分泌量を高めるので、その投与は脳やその周辺
にそれらの作用を誘発し、それにより記憶，気分，疼痛
の感知など、より詳しくは興奮、抑うつおよび／または
不安などに影響を与えることができる。例えば、脳室に
投与する場合、CRFはラットの活動性を高めかつ学習行
為を改善して天然の興奮剤としての役目を果すことがで
きる。

CRF類似体はまた哺乳動物（特にヒト）の胃腸管への血
流量を増加させるためにも使用されるだろう。全てのCR
Fに関係したペプチドは腸間膜の血管床を透過すること
がわかった。また、oCRFは胃酸産生を抑制するので、CR
F類似体は胃酸産生を減少させかつ／また胃腸機能を低
下させることにより哺乳動物の胃腫瘍の治療に有効であ
ることが期待される。

薬学的にまたは獣医学的に許容される担体と組合せたCR
F類似体まはその無毒生付加塩は、ヒトを含む哺乳動物
に、静脈内、皮下、筋肉内、経皮口（例えば鼻腔内）、
脳脊髄内、または経口的に投与される。ペプチドは少な
くとも約90％の純度、好ましくは少なくとも約98％の純
度であるべきである。しかしそれより低い純度のものも
有効であり、ヒト以外の哺乳動物に用いることができ
る。この純度は意図したペプチドが存在する全ての類似
ペプチドおよびペプチド断片の上記重量％を構成するこ
とを意味する。血圧を低下させるか、もしくは体内のグ
ルココルチコイド産生を刺激する目的でのヒトの投与は
医師により行われる。必要とされる用量は処置される個
々の症状、その症状の程度およびその処置の持続期間に
より変化するだろう。

これらのペプチドはまた内分泌系または中枢神経系の病
気が疑われる哺乳動物の視床下部、脳下垂体、副腎の諸
機能を検査するために、それらのペプチドを投与した後
に身体機能を監視することにより使用される。例えば、
クッシング病や精神の乱れ（例えば抑うつ症）を検査す
るための診断剤として投与される。

このようなペプチドは薬学的にまたは獣医学的に許容さ
れる無毒性塩、例えば酸付加塩または亜鉛、鉄、カルシ
ウム、バリウム、マグネシウム、アルミニウムなどとの
金属錯体（これは本願発明においては付加塩とみなす）
の形でしばしば投与される。酸付加塩の例には塩酸塩、
臭化水素酸塩、硫酸塩、燐酸塩、タンニン酸塩、蓚酸
塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、アルギン酸塩、マレイ
ン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸
塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩および酒石酸塩など
がある。活性成分が錠剤の形で投与される場合、その錠
剤は結合剤（例えばトリガカント、トウモロコシデンプ
ンまたはゼラチン）；崩壊剤（例えばアルギン酸）；お
よび滑択剤（例えばステアリン酸マグネシウム）を含有
することができる。液剤での投与が望まれる場合には甘
味剤および／またはフレーバー剤が使用され、また等張
生理食塩液または燐酸緩衝液中に溶解して静脈内被与を
行うこともできる。

ペプチドは医師の指導のもので投与されるべきであり、
そして薬剤組成物は通常そのペプチドを慣用の薬学的ま
たは獣医学的に許容される担体と共に含有するだろう。
一般に、用量は動物の体重1kgあたりペプチド約１〜200
μｇの範囲だろう。ある場合には、これらのペプチドで
の患者の治療はACTHまたはコルチコステロイドの投与の
代りに行われ、このような場合は体重1kgあたり約10ng
程度に低い用量が使用される。本明細書で使用する時の
温度は全て℃であり、比は容量比である。液体物質の百
分率もまた容量基準である。

本発明は現在発明者が知るところの最適な実施態様につ
いて記載してきたが、当該技術分野において通常の知識
を有する者には明らかなごとく、各種の変化や修飾がこ
こに添付の特許請求の範囲で説明した本発明の範囲から
逸脱することなく行われうるということが理解されるだ
ろう。例えば、CRFペプチド鎖の他の位置での置換およ
び改変は、そのペプチド類似体の効力を減ずることなし
に現在または未来の開発により行われうる。本発明の合
成ペプチド中に存在する４位から41位までのアミノ酸配
列は重要であると思われるが、一方ペプチド分子のその
他の残りは特に限定的なものとは思われない。例えば、
そ−末端の単純なアミドの代りに、低級アルキル置換ア
ミド（例えばメチルアミド、エチルアミドなど）を導入
してもよい。同様に、１〜10個の追加のアミノ酸残基
を、そのペプチドの生物学的効能に逆の作用を及ぼさな
いようにして、そのＮ−末端に導入することもできる。
このようなペプチドは本発明の範囲内に含まれると考え
られる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ワイリ−・ウオ−カ−・ベ−ル・ジユニア − アメリカ合衆国カリフオルニア州92037 ラ・ホ−ラ・バルデイ−ズ1643 (56)参考文献Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，80（15），4851−4855 （1983) ＥＭＢＯＪ．，２（５），775−779 （1983)

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】次式： H-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-
His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Arg-Ala-Gl
u-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-
Met-Glu-Ile-Ile-NH₂ で表わされる合成ペプチドまたはその非毒性塩。
【請求項２】次式： H-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-
His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Arg-Ala-Gl
u-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-
Met-Glu-Ile-Ile-NH₂ で表わされる合成ペプチドまたはその非毒性塩、および
薬学的もしくは獣医学的に許容される液体または固体の
担体を含む、哺乳動物のACTHおよびβ−エンドルフィン
様物質の分泌を促進するための医薬組成物。