JPH0690204B2 - 腫瘍に関連した特殊な抗原シアロシルラクトテトラオースに特異的な抗体 - Google Patents
腫瘍に関連した特殊な抗原シアロシルラクトテトラオースに特異的な抗体Info
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Description
【発明の詳細な説明】 この発明はヒトの腫瘍の診断および治療処置に用いるの
に有用な、特殊な腫瘍関連の炭化水化物性の抗原、シア
ロシルラクトテトラオースIV3NeuNAcLcOse4〔IUPAC-IUB
リピッドドキュメント（Lipid Document）,1977〕に対
して特異性を有する抗体に関する。
に有用な、特殊な腫瘍関連の炭化水化物性の抗原、シア
ロシルラクトテトラオースIV3NeuNAcLcOse4〔IUPAC-IUB
リピッドドキュメント（Lipid Document）,1977〕に対
して特異性を有する抗体に関する。
すなわち、本発明は （ｉ）NeuNAcα‐3Galβ‐3GlcNAcβ‐3Galβ‐4Glc および／または （ii）NeuNAcα‐3Galβ‐3GlcNAcβ‐3Galβ‐4Glcお
よび および／または （iii）末端グルコールでリピッドまたはタンパク質部
分にグリコシド結合した前記（ｉ）または（ii）の抗原 から選択される腫瘍抗原に対して特異性を有する抗体に
関する。
よび および／または （iii）末端グルコールでリピッドまたはタンパク質部
分にグリコシド結合した前記（ｉ）または（ii）の抗原 から選択される腫瘍抗原に対して特異性を有する抗体に
関する。
組織細胞の腫瘍細胞への変換は細胞表面における炭水化
物構造の変化に関連することが確認されている。多くの
炭水化物構造は抗原として働き、腫瘍修飾構造はいわゆ
る腫瘍関連抗原の形体を代表するものである。細胞表面
炭水化物構造はリビツド部分と結合している、この場合
はグリコリピツドと称される、あるいはタンパク（ペプ
タイド）と結合している、この場合はグリコプロテイン
（グリコペプチド）と称される。これら２つの形体につ
いての一般名はグリココンジユゲートである。
物構造の変化に関連することが確認されている。多くの
炭水化物構造は抗原として働き、腫瘍修飾構造はいわゆ
る腫瘍関連抗原の形体を代表するものである。細胞表面
炭水化物構造はリビツド部分と結合している、この場合
はグリコリピツドと称される、あるいはタンパク（ペプ
タイド）と結合している、この場合はグリコプロテイン
（グリコペプチド）と称される。これら２つの形体につ
いての一般名はグリココンジユゲートである。
腫瘍関連のグリココンジユゲート抗原はかつてはヒトの
腫瘍病との関係において知られていた。黒色腫瘍におい
て、炭化水素構造であるシアロシルガングリオテトラオ
ースおよびシアロシルラクトースはリピツド部分に結合
しているものとして特定されてきた。二つのガン関連抗
原CEA（ｃarcino−ｅmbryonal ａntigen）およびGICA
（ｇastroｉntestinal ｃancer ａntigen）は特に胃腸
ガンに見出されているが、一方、第三の抗原CA−50は一
般的なガン抗原と考えられている。これらの抗原はすべ
て腫瘍細胞表面から分泌泌され血清中に見出される。
腫瘍病との関係において知られていた。黒色腫瘍におい
て、炭化水素構造であるシアロシルガングリオテトラオ
ースおよびシアロシルラクトースはリピツド部分に結合
しているものとして特定されてきた。二つのガン関連抗
原CEA（ｃarcino−ｅmbryonal ａntigen）およびGICA
（ｇastroｉntestinal ｃancer ａntigen）は特に胃腸
ガンに見出されているが、一方、第三の抗原CA−50は一
般的なガン抗原と考えられている。これらの抗原はすべ
て腫瘍細胞表面から分泌泌され血清中に見出される。
本発明は、多くの型のガンの患者は、初期の腫瘍および
その転移において、正常組織において発現されないグリ
ココンジユゲートを発現するという驚くべき発見に基づ
くものである。
その転移において、正常組織において発現されないグリ
ココンジユゲートを発現するという驚くべき発見に基づ
くものである。
本発明によれば、グリココンジユゲート抗原はグリコリ
ピツト抗原として分離された。これはガングリオシドで
あつて完全な化学構造としてNeuNAcα−3Galβ−3GlcNA
cβ−3Galβ−4Glc−CerあるいはNeuNAc LcOse4 Cer（I
UPAC−IUBリピツド ドキユメント（Lipid Documen
t）、1977）を有している。本ガングリオシドの基本構
造は有するがシアル酸を有しないグリコリピツドはヒト
の胎便には見出されるが、広範な研究を行つても、本ガ
ングリオシドをヒトの成人の組織から見出すことは不可
能であつた。しかしながら、このガングリオシドは種々
の器官の多くのガンにおけるリピツド抽出物に見出され
る。本発明の範囲において、体液および組織中の当該抗
原の検出のための鋭敏な方法が苦心の末でき上つたので
ある。かかる方法は、非常な低濃度で存在する抗原を特
異なモノクロナール抗体に結合させることによつて定量
できるという事実に基づいている。いくつかのモノクロ
ナール抗体がマウスをヒトの結腸ガンセル・ラインで免
疫することにより調製された。これらのモノクロナール
抗体は、シアロシルラクトテトラオースがモノシアロガ
ングリオシドとして存在するとき、すなわち、シアル酸
を特殊な成分として含有する、炭水化物含有リピツドと
して存在するとき、そのシアロシルラクトテトラオース
を検出するものであり、かつ、同一の炭水化物構造がタ
ンパクに結合している場合、それらすべての抗原を検出
するのである。シアル酸は抗原活性に必要なものであ
る。というのは抗体をシアリダーゼ酵素で加水分解する
と抗原がモノクロナール抗体と結合する活性が完全に除
かれるからである。このモノクロナール抗体はまた、シ
アロシルラクトテトラオースに加え、その分子に結合し
たフコース部分を含有する抗原をも検出する。
ピツト抗原として分離された。これはガングリオシドで
あつて完全な化学構造としてNeuNAcα−3Galβ−3GlcNA
cβ−3Galβ−4Glc−CerあるいはNeuNAc LcOse4 Cer（I
UPAC−IUBリピツド ドキユメント（Lipid Documen
t）、1977）を有している。本ガングリオシドの基本構
造は有するがシアル酸を有しないグリコリピツドはヒト
の胎便には見出されるが、広範な研究を行つても、本ガ
ングリオシドをヒトの成人の組織から見出すことは不可
能であつた。しかしながら、このガングリオシドは種々
の器官の多くのガンにおけるリピツド抽出物に見出され
る。本発明の範囲において、体液および組織中の当該抗
原の検出のための鋭敏な方法が苦心の末でき上つたので
ある。かかる方法は、非常な低濃度で存在する抗原を特
異なモノクロナール抗体に結合させることによつて定量
できるという事実に基づいている。いくつかのモノクロ
ナール抗体がマウスをヒトの結腸ガンセル・ラインで免
疫することにより調製された。これらのモノクロナール
抗体は、シアロシルラクトテトラオースがモノシアロガ
ングリオシドとして存在するとき、すなわち、シアル酸
を特殊な成分として含有する、炭水化物含有リピツドと
して存在するとき、そのシアロシルラクトテトラオース
を検出するものであり、かつ、同一の炭水化物構造がタ
ンパクに結合している場合、それらすべての抗原を検出
するのである。シアル酸は抗原活性に必要なものであ
る。というのは抗体をシアリダーゼ酵素で加水分解する
と抗原がモノクロナール抗体と結合する活性が完全に除
かれるからである。このモノクロナール抗体はまた、シ
アロシルラクトテトラオースに加え、その分子に結合し
たフコース部分を含有する抗原をも検出する。
本発明の範囲内で、腫瘍関連グリコリピツド、シアロシ
ルラクトテトラオシルセラミドをヒトの腫瘍組織から純
粋な形で分離する方法が完成された。特別の方法でえら
れた精製されたガングリオシドは増加した免疫活性を有
し、モノクロナール抗体の製造に使用される。本発明の
範囲内で、組織、組織部分、体液中の当該抗原の特定、
定量に用いられる方法が開発された。診断目的のための
これらの方法は、本抗原は純粋なガングリオシド抗原、
シアロシルラクトテトラオシルセラミドに対して生産さ
れた特異なモノクロナール抗体に結合させることによつ
て検出できるという事実に基いている。以下の例はガン
グリオシドが測定できる種々の材料を示すものである。
すなわち、肺、肝臓、腸管、胃または膵臓の腫瘍組織の
手術あるいはオートプシー材料、および種々の器官の腫
瘍組織のバイオプシー、胃あるいは呼吸管の吸出し、
痰、または胸膜腔の穿刺によつてえられる細胞、ならび
に、血液、血漿、血清、リンパ液、脳脊髄液、尿、唾液
等である。
ルラクトテトラオシルセラミドをヒトの腫瘍組織から純
粋な形で分離する方法が完成された。特別の方法でえら
れた精製されたガングリオシドは増加した免疫活性を有
し、モノクロナール抗体の製造に使用される。本発明の
範囲内で、組織、組織部分、体液中の当該抗原の特定、
定量に用いられる方法が開発された。診断目的のための
これらの方法は、本抗原は純粋なガングリオシド抗原、
シアロシルラクトテトラオシルセラミドに対して生産さ
れた特異なモノクロナール抗体に結合させることによつ
て検出できるという事実に基いている。以下の例はガン
グリオシドが測定できる種々の材料を示すものである。
すなわち、肺、肝臓、腸管、胃または膵臓の腫瘍組織の
手術あるいはオートプシー材料、および種々の器官の腫
瘍組織のバイオプシー、胃あるいは呼吸管の吸出し、
痰、または胸膜腔の穿刺によつてえられる細胞、ならび
に、血液、血漿、血清、リンパ液、脳脊髄液、尿、唾液
等である。
本発明で用いられる抗原はシアロシルラクトテトラオー
スと称され、次の構造を有する。NeuNAcα‐3Galβ‐3G
lcNAcβ‐3Galβ‐4GlcあるいはIV3NeuAcLcOse4（IUPAC
−IUB リピツドドキユメント（Lipid Document）、197
7）。α−４結合のＮ−アセチルグルコサミン分子にフ
コースを結合させて修飾した抗原はすべて本発明の範囲
に属するものである。
スと称され、次の構造を有する。NeuNAcα‐3Galβ‐3G
lcNAcβ‐3Galβ‐4GlcあるいはIV3NeuAcLcOse4（IUPAC
−IUB リピツドドキユメント（Lipid Document）、197
7）。α−４結合のＮ−アセチルグルコサミン分子にフ
コースを結合させて修飾した抗原はすべて本発明の範囲
に属するものである。
モノクロナール抗体を特定するのに用いられた抗原はリ
ピツド基に結合した抗原からつくられたが、すべての他
の化合物への結合を含むものである。本発明で使用され
る抗原は患者のオートプシーによつてえられる腫瘍組織
から分離することができる。
ピツド基に結合した抗原からつくられたが、すべての他
の化合物への結合を含むものである。本発明で使用され
る抗原は患者のオートプシーによつてえられる腫瘍組織
から分離することができる。
特に良好な材料はある形状の肺ガンである。ガン組織中
の抗原濃度は一般に低く、抗原の分離は面倒である。我
々は腫瘍抗原の分離のためのもう一つの生物学的な出発
材料を見出した。
の抗原濃度は一般に低く、抗原の分離は面倒である。我
々は腫瘍抗原の分離のためのもう一つの生物学的な出発
材料を見出した。
セル・ラインColo 205はいわゆるヌード・マウス（一般
名nu/nu）に移植すると腫瘍となる。この腫瘍は抗原を
高濃度で含有し、その抗原にはフコースが結合してい
る。分離したガングリオシドをα−フコシダーゼ酵素で
処理することにより、フコース部分は分離し、グリコリ
ピツト抗原は純粋な形でえられる。
名nu/nu）に移植すると腫瘍となる。この腫瘍は抗原を
高濃度で含有し、その抗原にはフコースが結合してい
る。分離したガングリオシドをα−フコシダーゼ酵素で
処理することにより、フコース部分は分離し、グリコリ
ピツト抗原は純粋な形でえられる。
本発明は、Colo 205細胞によつていわゆるヌード・マウ
スに誘導した腫瘍またはヒトの腫瘍からクロマトグラフ
法によつて腫瘍抗原を誘導することに関する。本発明は
また、ある種のバクテリアの膜に吸着させた純粋な抗原
に対するモノクロナール抗体の製造に関する。本発明
は、また、化学物質シアロシルラクトテトラオース、こ
の物質の誘導体、これらに対するすべての型の抗体を種
々の器官の種々のガンの診断に用いること、および患者
のガンの治療に用いることも含むものである。
スに誘導した腫瘍またはヒトの腫瘍からクロマトグラフ
法によつて腫瘍抗原を誘導することに関する。本発明は
また、ある種のバクテリアの膜に吸着させた純粋な抗原
に対するモノクロナール抗体の製造に関する。本発明
は、また、化学物質シアロシルラクトテトラオース、こ
の物質の誘導体、これらに対するすべての型の抗体を種
々の器官の種々のガンの診断に用いること、および患者
のガンの治療に用いることも含むものである。
実施例１ ヒトのガン組織からの、ガングリオシド形状でのシアロ
シルラクトテトラオース抗原の調製 組織からのガングリオシドの抽出 組織材料１容量に対し３容量の水を加えたのち、組織を
均一化した、腫瘍組織をナイフ・ホモゲナイザーで1500
回転／分、３分均一化したのち、10容量のメタノールを
撹拌しつつ加え、次いで５容量のクロロホルムを加え
た。遠心分離で透明な抽出物を分離した。組織容量４容
量の水を加え、組織は再度均一化した。そして、10容量
のメタノールおよび５容量のクロロホルムを撹拌しなが
ら加えた。透明な抽出物を遠心分離で分離した。抽出物
を合し、水を加えて最終的なクロロホルム‐メタノール
‐水の比が4:8:5.6（容量）になるようにした。分液漏
斗中で混合したのち、二つの上層を分離した。下層に等
容量のメタノールを加え、混合に際し0.7容量の水を加
えた。注意深く混合したのち、分液漏斗を二つの明確な
液層がえられるまで放置した。上層を回収し第１の上層
と合した。合併した上層に泡立ちを防ぐためにイソブタ
ノールを加え、それから、抽出物50℃の水浴中ロータリ
ーエバポレーターで濃縮した。残渣にもとの組織の容量
に対し0.5容量のメタノールおよび0.5容量の1.0M苛性カ
リを加え室温で一夜放置した。それから、烈しく撹拌し
ながら1.0Mの塩酸を加えてpH8とし、水に対し透析を48
時間行つた。
シルラクトテトラオース抗原の調製 組織からのガングリオシドの抽出 組織材料１容量に対し３容量の水を加えたのち、組織を
均一化した、腫瘍組織をナイフ・ホモゲナイザーで1500
回転／分、３分均一化したのち、10容量のメタノールを
撹拌しつつ加え、次いで５容量のクロロホルムを加え
た。遠心分離で透明な抽出物を分離した。組織容量４容
量の水を加え、組織は再度均一化した。そして、10容量
のメタノールおよび５容量のクロロホルムを撹拌しなが
ら加えた。透明な抽出物を遠心分離で分離した。抽出物
を合し、水を加えて最終的なクロロホルム‐メタノール
‐水の比が4:8:5.6（容量）になるようにした。分液漏
斗中で混合したのち、二つの上層を分離した。下層に等
容量のメタノールを加え、混合に際し0.7容量の水を加
えた。注意深く混合したのち、分液漏斗を二つの明確な
液層がえられるまで放置した。上層を回収し第１の上層
と合した。合併した上層に泡立ちを防ぐためにイソブタ
ノールを加え、それから、抽出物50℃の水浴中ロータリ
ーエバポレーターで濃縮した。残渣にもとの組織の容量
に対し0.5容量のメタノールおよび0.5容量の1.0M苛性カ
リを加え室温で一夜放置した。それから、烈しく撹拌し
ながら1.0Mの塩酸を加えてpH8とし、水に対し透析を48
時間行つた。
イオン交換クロマトグラフイーによるモノシアロガング
リオシド部分の分離 透析した粗製のガングリオシド抽出物を蒸発させ、元の
組織1g当り1mlのクロロホルム−メタノール−水（60:3
0:4.5）混合物に再溶解した。内径20mmのカラムに、ス
フエロシル−DEAE−デキストラン（インステイチユート
・メリエオー・リオ、フランス）を同一の溶剤中酢酸塩
の形で−組織各5gに対し少くとも1mlのイオン交換体−
充填した。純粋なガングリオシド抽出物をカラムにゆつ
くりと加え、それからカラムは尿容量の10倍容量のクロ
ロホルム−メタノール−水（60:30:4.5）で溶出した。
モノシアロガングリオシド分画は10床容量の0.02M酢酸
カリメタノール溶液で溶出した。モノシアロガングリオ
シド分画は蒸発させ、蒸留水に対し透析して脱塩した。
リオシド部分の分離 透析した粗製のガングリオシド抽出物を蒸発させ、元の
組織1g当り1mlのクロロホルム−メタノール−水（60:3
0:4.5）混合物に再溶解した。内径20mmのカラムに、ス
フエロシル−DEAE−デキストラン（インステイチユート
・メリエオー・リオ、フランス）を同一の溶剤中酢酸塩
の形で−組織各5gに対し少くとも1mlのイオン交換体−
充填した。純粋なガングリオシド抽出物をカラムにゆつ
くりと加え、それからカラムは尿容量の10倍容量のクロ
ロホルム−メタノール−水（60:30:4.5）で溶出した。
モノシアロガングリオシド分画は10床容量の0.02M酢酸
カリメタノール溶液で溶出した。モノシアロガングリオ
シド分画は蒸発させ、蒸留水に対し透析して脱塩した。
シリカゲルクロマトグラフイーによるシアロシルラクト
テトラオシルセラミドの精製 クロマトグラフイーには元の組織1gに対し1gのラクトビ
ーズ（ラトロン ラボラトリーズ、東京、日本）を用い
た。ただし、少くとも25gは用いた。ゲルをクロロホル
ム−メタノール（容量比4:1）中でスラリーとし、半融
ガラスフイルターを有し、ゲルの量に応じ直径15〜20mm
のガラスカラムに注入した。ガングリオシド分画は10ml
のクロロホルム−メタノール−水（65:25:4容量）に溶
解し、カラムに入れた。最初、ゲルｇ（重量／容量）当
たり15mlのクロロホルム−メタノール−水（65:25:4）
で溶出し、１分画として回収した。溶出は、それから、
クロロホルム−メタノール−2.5Mアンモニア（60:40:
9）容量で続け、5mlの分画を分画コレクターで採取し
た。溶出は、各分画の10μを、カラムクロマトグラフ
イーに用いたのと同じ溶剤、すなわち、クロロホルム−
メタノール−2.5Mアンモニア（60:40:9）を用いた高処
理薄層クロマトグラフイー（HPTLC）でモニターした。
そして、ガングリオシドはレゾルシノール試薬で観察し
た（スヴエンナーホルムＬ、ビオキミカ、ビオフイジカ
・アクタ24、604−614、1957）。シアロシルラクトテト
ラオシルセラミドを含む分画は合併し、蒸発させて乾燥
した。
テトラオシルセラミドの精製 クロマトグラフイーには元の組織1gに対し1gのラクトビ
ーズ（ラトロン ラボラトリーズ、東京、日本）を用い
た。ただし、少くとも25gは用いた。ゲルをクロロホル
ム−メタノール（容量比4:1）中でスラリーとし、半融
ガラスフイルターを有し、ゲルの量に応じ直径15〜20mm
のガラスカラムに注入した。ガングリオシド分画は10ml
のクロロホルム−メタノール−水（65:25:4容量）に溶
解し、カラムに入れた。最初、ゲルｇ（重量／容量）当
たり15mlのクロロホルム−メタノール−水（65:25:4）
で溶出し、１分画として回収した。溶出は、それから、
クロロホルム−メタノール−2.5Mアンモニア（60:40:
9）容量で続け、5mlの分画を分画コレクターで採取し
た。溶出は、各分画の10μを、カラムクロマトグラフ
イーに用いたのと同じ溶剤、すなわち、クロロホルム−
メタノール−2.5Mアンモニア（60:40:9）を用いた高処
理薄層クロマトグラフイー（HPTLC）でモニターした。
そして、ガングリオシドはレゾルシノール試薬で観察し
た（スヴエンナーホルムＬ、ビオキミカ、ビオフイジカ
・アクタ24、604−614、1957）。シアロシルラクトテト
ラオシルセラミドを含む分画は合併し、蒸発させて乾燥
した。
シアロシルラクトテトラオシルセラミドの最終精製は調
製用薄層クロマトグラフイーによつて達成された。ガン
グリオシド（５μモル）は薄層板（20×20cm、厚さ0.25
mm、メルクAG、ダルムシユタツト、西ドイツ）に塗布
し、クロロホルム−メタノール−2.5Mアンモニアで21℃
で１時間展開した。クロマトグラフイーが完了したの
ち、0.01％ブロムチモールブルー水溶液を板にスプレー
し、シアロシルラクトテトラオシルセラミドのバンドを
切取つた。ガングリオシドをゲルからクロロホルム−メ
タノール−水（30:60:20、容量）で溶出し、0.1M水酸化
カリメタノール溶液１滴を加え、混合物を乾燥するまで
蒸発させた。ガングリオシドを少量のクロロホルム−メ
タノール（2:1、容量）に溶解し、密栓したチユーブ
（テフロンのスクリユー・キヤツプのついたクリマツク
スチユーブ）中、暗所、４℃で保存した。
製用薄層クロマトグラフイーによつて達成された。ガン
グリオシド（５μモル）は薄層板（20×20cm、厚さ0.25
mm、メルクAG、ダルムシユタツト、西ドイツ）に塗布
し、クロロホルム−メタノール−2.5Mアンモニアで21℃
で１時間展開した。クロマトグラフイーが完了したの
ち、0.01％ブロムチモールブルー水溶液を板にスプレー
し、シアロシルラクトテトラオシルセラミドのバンドを
切取つた。ガングリオシドをゲルからクロロホルム−メ
タノール−水（30:60:20、容量）で溶出し、0.1M水酸化
カリメタノール溶液１滴を加え、混合物を乾燥するまで
蒸発させた。ガングリオシドを少量のクロロホルム−メ
タノール（2:1、容量）に溶解し、密栓したチユーブ
（テフロンのスクリユー・キヤツプのついたクリマツク
スチユーブ）中、暗所、４℃で保存した。
実施例２ 腫瘍組織中のシアロシルラクトテトラオース抗原の定量 腫瘍抗原はグリコリピツトとして分離した。
ガングリオシド抗原の検出 約0.1gの組織に0.5mlの水を加え、組織を氷浴中、テフ
ロンの乳棒を有する円錐形ホモゲナイザーで均一化し
た。均一化が完了したのち、1.6mlのメタノールと0.8ml
のクロロホルムを加えた。充分混合したのち、試験管を
100×ｇで10分間遠心分離した。透明な上澄液をテフロ
ンをキヤツプの付いた少さなキマツクスチユーブに移し
た。試験官内の沈殿物は0.5mlの水に懸濁し、次いで、
第一の抽出に用いたのと同量のメタノールとクロロホル
ムを加えた。混合および遠心分離は前と同様に行つた。
二つの上澄液を合併し、水を加えて最終的なクロロホル
ム−メタノール−水比が4:8:5.6（容量）になるように
した。遠心分離を100×ｇで５分間行つた。上層をすり
ガラスの首のついた少さい円形フラスコに移し、0.5ml
のクロロホルムと1.0mlの水を下層に加えた。混合しな
がら0.7mlの水を加え、さらに混合したのち、遠心分離
を100Xgで５分間行つた。上層をすりガラスの首のつい
た円形フラスコに移し、0.1容量のイソブタノールを加
えた。残渣を0.1MNaOHメタノール溶液と乾燥するまで蒸
発させた。試験管は１時間室温に放置した。
ロンの乳棒を有する円錐形ホモゲナイザーで均一化し
た。均一化が完了したのち、1.6mlのメタノールと0.8ml
のクロロホルムを加えた。充分混合したのち、試験管を
100×ｇで10分間遠心分離した。透明な上澄液をテフロ
ンをキヤツプの付いた少さなキマツクスチユーブに移し
た。試験官内の沈殿物は0.5mlの水に懸濁し、次いで、
第一の抽出に用いたのと同量のメタノールとクロロホル
ムを加えた。混合および遠心分離は前と同様に行つた。
二つの上澄液を合併し、水を加えて最終的なクロロホル
ム−メタノール−水比が4:8:5.6（容量）になるように
した。遠心分離を100×ｇで５分間行つた。上層をすり
ガラスの首のついた少さい円形フラスコに移し、0.5ml
のクロロホルムと1.0mlの水を下層に加えた。混合しな
がら0.7mlの水を加え、さらに混合したのち、遠心分離
を100Xgで５分間行つた。上層をすりガラスの首のつい
た円形フラスコに移し、0.1容量のイソブタノールを加
えた。残渣を0.1MNaOHメタノール溶液と乾燥するまで蒸
発させた。試験管は１時間室温に放置した。
トランスエステル化が完了したのち、4mlのクロロホル
ムと1mlのメタノールを加え、内容物を、クロロホルム
−メタノール−水（60:30:4.5容量）中1gのセフアデツ
クスG25を充填した小さいカラムに注入した。カラムを1
5mlのクロロホルム−メタノール−水（60:30:4.5）で溶
出した。溶出液はゆつくりと、1.0gのDEAE−セフアロー
ス（登録商標、フアルマシア フアイン ケミカルズ、
ウプサラ、スウエーデン）のアセテート型を充填したカ
ラムに加えた。カラムを10mlのメタノールで洗浄したの
ち、モノシアロガングリオシドを10mlの0.02M酢酸カリ
メタノール溶液で溶出した。蒸発およびクロロホルム−
メタノール−水（65:25:4、容量）に再溶解したのち、
単純なモノシアロガングリオシドはシアロシルラクトテ
トラシルセラミドから15カラム容量の65:25:4（重量／
容量）で溶出することによつて分離され、一方、複合ガ
ングリオシド分画は10容量のクロロホルム−メタノール
−水（50:40:10、容量）で溶出された。
ムと1mlのメタノールを加え、内容物を、クロロホルム
−メタノール−水（60:30:4.5容量）中1gのセフアデツ
クスG25を充填した小さいカラムに注入した。カラムを1
5mlのクロロホルム−メタノール−水（60:30:4.5）で溶
出した。溶出液はゆつくりと、1.0gのDEAE−セフアロー
ス（登録商標、フアルマシア フアイン ケミカルズ、
ウプサラ、スウエーデン）のアセテート型を充填したカ
ラムに加えた。カラムを10mlのメタノールで洗浄したの
ち、モノシアロガングリオシドを10mlの0.02M酢酸カリ
メタノール溶液で溶出した。蒸発およびクロロホルム−
メタノール−水（65:25:4、容量）に再溶解したのち、
単純なモノシアロガングリオシドはシアロシルラクトテ
トラシルセラミドから15カラム容量の65:25:4（重量／
容量）で溶出することによつて分離され、一方、複合ガ
ングリオシド分画は10容量のクロロホルム−メタノール
−水（50:40:10、容量）で溶出された。
組織の精製した複合ガングリオシド分画の一部をメタノ
ールに溶解し、抽出物50μをポリビニルマイクロタイ
タープレートの穴に加えた。１〜25pmolの純粋なシアロ
シルラクトテトラオシルセラミドのメタノール溶液標準
溶液をプレートの他の穴に加えた。溶媒を窒素気流下蒸
発させた。未知のサンプルと標準に10〜100μｇの、シ
アロシルラクトテトラオース、もし、それにフコースが
結合しているならばそれに特異的なモノクロナール抗体
を、燐酸バツフアーの生理食塩水pH7.4（PBS）で１％の
牛血清アルブミンを含有するものに溶解して加えた。サ
ンプルは室温で１時間培養し、PBS溶液で３回洗浄し
た。それからI125で標識した抗マウス免疫グロブリンを
加え３時間反応させた。PBSで繰返し洗浄したのち、未
知および標準の穴をマイクロタイタープレートから切取
りガンマーカウンターで測定した。未知のシアロシルラ
クトテトラオース抗原の濃度を純粋なシアロシルラクト
テトラシルセラミドの標準曲線から計算で求めた。
ールに溶解し、抽出物50μをポリビニルマイクロタイ
タープレートの穴に加えた。１〜25pmolの純粋なシアロ
シルラクトテトラオシルセラミドのメタノール溶液標準
溶液をプレートの他の穴に加えた。溶媒を窒素気流下蒸
発させた。未知のサンプルと標準に10〜100μｇの、シ
アロシルラクトテトラオース、もし、それにフコースが
結合しているならばそれに特異的なモノクロナール抗体
を、燐酸バツフアーの生理食塩水pH7.4（PBS）で１％の
牛血清アルブミンを含有するものに溶解して加えた。サ
ンプルは室温で１時間培養し、PBS溶液で３回洗浄し
た。それからI125で標識した抗マウス免疫グロブリンを
加え３時間反応させた。PBSで繰返し洗浄したのち、未
知および標準の穴をマイクロタイタープレートから切取
りガンマーカウンターで測定した。未知のシアロシルラ
クトテトラオース抗原の濃度を純粋なシアロシルラクト
テトラシルセラミドの標準曲線から計算で求めた。
Claims (2)
- 【請求項１】（ｉ）NeuNAcα‐3Galβ‐3GlcNAcβ‐3Ga
lβ‐4Glc および／または （ii）NeuNAcα‐3Galβ‐3GlcNAcβ‐3Galβ−4Glcお
よび および／または （iii）末端グルコールでリピッドまたはタンパク質部
分にグリコシド結合した前記（ｉ）または（ii）の抗原 から選択される腫瘍抗原に対して特異性を有する抗体。 - 【請求項２】モノクローナル手法で生産される特許請求
の範囲第１項記載の抗体。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8404283A SE455445B (sv) | 1984-08-28 | 1984-08-28 | Antikroppar mot sialosyllaktotetraos (iv?723neuaclcose?714) och antikroppens resp antigenets anvendning vid tumordiagnostik |
| SE8404283-7 | 1984-08-28 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61116660A JPS61116660A (ja) | 1986-06-04 |
| JPH0690204B2 true JPH0690204B2 (ja) | 1994-11-14 |
Family
ID=20356831
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60186757A Expired - Lifetime JPH0690204B2 (ja) | 1984-08-28 | 1985-08-27 | 腫瘍に関連した特殊な抗原シアロシルラクトテトラオースに特異的な抗体 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0173663B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0690204B2 (ja) |
| AT (1) | ATE71225T1 (ja) |
| DE (1) | DE3585061D1 (ja) |
| SE (1) | SE455445B (ja) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0287916A1 (en) * | 1987-04-13 | 1988-10-26 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Immunoassay |
| US5079353A (en) * | 1987-12-02 | 1992-01-07 | Chembiomed, Ltd. | Sialic acid glycosides, antigens, immunoadsorbents, and methods for their preparation |
| EP0380084A3 (en) * | 1989-01-27 | 1991-03-13 | The Biomembrane Institute | Method for the inhibition of cell-cell and cell substratum interactions by the blocking of carbohydrate-carbohydrate interactions |
| EP0433452A4 (en) * | 1989-03-09 | 1991-12-04 | Sendai Institute Of Microbiology | Monoclonal antibody, and assay method, reagent kit, search method and drug missile using said antibody |
| CA2432978C (en) * | 2000-12-22 | 2012-08-28 | Medlyte, Inc. | Compositions and methods for the treatment and prevention of cardiovascular diseases and disorders, and for identifying agents therapeutic therefor |
| US9274130B2 (en) | 2006-05-31 | 2016-03-01 | Lpath, Inc. | Prevention and treatment of pain using antibodies to lysophosphatidic acid |
| US20080138334A1 (en) | 2006-05-31 | 2008-06-12 | Sabbadini Roger A | Immune-Derived Moieties Reactive Against Bioactive Lipids, and Methods of Making and Using Same |
| US9274129B2 (en) | 2006-05-31 | 2016-03-01 | Lpath, Inc. | Methods and reagents for detecting bioactive lipids |
| US8796429B2 (en) | 2006-05-31 | 2014-08-05 | Lpath, Inc. | Bioactive lipid derivatives, and methods of making and using same |
| US7862812B2 (en) | 2006-05-31 | 2011-01-04 | Lpath, Inc. | Methods for decreasing immune response and treating immune conditions |
| EP2083862A4 (en) | 2006-10-27 | 2012-09-19 | Lpath Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING OCULAR DISEASES AND DISORDERS |
| BRPI0718118A2 (pt) | 2006-10-27 | 2017-05-30 | Lpath Inc | composições e métodos para ligação de sphingosine-1-fosfato |
| US8361465B2 (en) | 2007-10-26 | 2013-01-29 | Lpath, Inc. | Use of anti-sphingosine-1-phosphate antibodies in combination with chemotherapeutic agents |
| US8871202B2 (en) | 2008-10-24 | 2014-10-28 | Lpath, Inc. | Prevention and treatment of pain using antibodies to sphingosine-1-phosphate |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4471057A (en) * | 1981-06-30 | 1984-09-11 | The Wistar Institute | Detection of colorectal carcinoma |
| CA1215331A (en) * | 1983-03-04 | 1986-12-16 | Tsann M. Chu | Monoclonal antibodies to human breast carcinoma cells and their use in diagnosis and therapy |
| US4569788A (en) * | 1983-05-18 | 1986-02-11 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Monoclonal antibodies against non small cell lung cancer |
-
1984
- 1984-08-28 SE SE8404283A patent/SE455445B/sv not_active IP Right Cessation
-
1985
- 1985-08-06 AT AT85850256T patent/ATE71225T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-08-06 DE DE8585850256T patent/DE3585061D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-06 EP EP85850256A patent/EP0173663B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-27 JP JP60186757A patent/JPH0690204B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0173663A3 (en) | 1987-10-07 |
| EP0173663B1 (en) | 1992-01-02 |
| ATE71225T1 (de) | 1992-01-15 |
| JPS61116660A (ja) | 1986-06-04 |
| EP0173663A2 (en) | 1986-03-05 |
| SE8404283L (sv) | 1986-03-01 |
| SE8404283D0 (sv) | 1984-08-28 |
| SE455445B (sv) | 1988-07-11 |
| DE3585061D1 (de) | 1992-02-13 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
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