JPH0699320B2 - 抗エイズウイルス活性を有する硫酸化βグルカンのレトロウイルス感染症治療用薬剤 - Google Patents
抗エイズウイルス活性を有する硫酸化βグルカンのレトロウイルス感染症治療用薬剤Info
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- JPH0699320B2 JPH0699320B2 JP3150827A JP15082791A JPH0699320B2 JP H0699320 B2 JPH0699320 B2 JP H0699320B2 JP 3150827 A JP3150827 A JP 3150827A JP 15082791 A JP15082791 A JP 15082791A JP H0699320 B2 JPH0699320 B2 JP H0699320B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はレトロウイルスに起因す
る感染症、特にヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に起因
するエイズ（ＡＩＤＳ）の治療の新規薬剤に関する。
る感染症、特にヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に起因
するエイズ（ＡＩＤＳ）の治療の新規薬剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】現今、人類が直面している難病の一つで
ある後天性免疫不全症候群（ＡＣＱＵＩＲＥＤ ＩＭＭ
ＵＮＥ ＤＥＦＩＣＩＥＮＣＹ ＳＹＮＤＲＯＭＥ：Ａ
ＩＤＳ）はレトロウイルスに属するヒト免疫不全ウイル
ス（ＨＩＶ）に起因することが解明されている。
ある後天性免疫不全症候群（ＡＣＱＵＩＲＥＤ ＩＭＭ
ＵＮＥ ＤＥＦＩＣＩＥＮＣＹ ＳＹＮＤＲＯＭＥ：Ａ
ＩＤＳ）はレトロウイルスに属するヒト免疫不全ウイル
ス（ＨＩＶ）に起因することが解明されている。
【０００３】世界保険機構（ＷＨＯ）によると１９９０
年の時点においてエイズウイルス感染者数は８００万
人、発病者又は死亡者数は８０万人以上であり、我国に
おいても１９９０年１２月３１日の時点で３７１人の患
者が確認され、その内、発症にいたらないが、該ウイル
スに感染者数は１６２７人となっている。
年の時点においてエイズウイルス感染者数は８００万
人、発病者又は死亡者数は８０万人以上であり、我国に
おいても１９９０年１２月３１日の時点で３７１人の患
者が確認され、その内、発症にいたらないが、該ウイル
スに感染者数は１６２７人となっている。
【０００４】しかし、本病の治療法は全く不明であり本
病ウイルスとしては現在ＨＩＶ−１と、ＨＩＶ−２型の
２例が発見されているが、このウイルスが変異している
ことによりワクチン開発の実施化は非常な困難に直面し
ている、そこで抗ＨＩＶ剤による治療および予防的効果
が要求されている現況である。
病ウイルスとしては現在ＨＩＶ−１と、ＨＩＶ−２型の
２例が発見されているが、このウイルスが変異している
ことによりワクチン開発の実施化は非常な困難に直面し
ている、そこで抗ＨＩＶ剤による治療および予防的効果
が要求されている現況である。
【０００５】抗ＨＩＶ剤として唯一実用化されているも
のは、アジトチミジン（ＡＺＴ）がある（Ｎａｔｕｒｅ
３２６，４３０，１９８７）ＨＩＶの逆転写酵素の阻
害効果に基づく抗ＨＩＶ剤であるが、この薬剤は、生体
に強い副作用を示し、患者の造血作用を阻害することが
明らかになると共に多くの患者に極度の貧血症が発現し
ている。近年、硫酸化デキストランのように多糖体類を
硫酸化することにより一部のウイルスに対して抗ウイル
ス作用を示すことが確認されている（Ａｎｎ，Ｎ．Ｙ，
Ａｃａｄ，Ｓｃｉ １３，３６５，１９６５）
のは、アジトチミジン（ＡＺＴ）がある（Ｎａｔｕｒｅ
３２６，４３０，１９８７）ＨＩＶの逆転写酵素の阻
害効果に基づく抗ＨＩＶ剤であるが、この薬剤は、生体
に強い副作用を示し、患者の造血作用を阻害することが
明らかになると共に多くの患者に極度の貧血症が発現し
ている。近年、硫酸化デキストランのように多糖体類を
硫酸化することにより一部のウイルスに対して抗ウイル
ス作用を示すことが確認されている（Ａｎｎ，Ｎ．Ｙ，
Ａｃａｄ，Ｓｃｉ １３，３６５，１９６５）
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】生理活性能が分子量に
依存するデンプンやデキストラン等のα−グルゴッド結
合を有する多糖体は体内酵素によって分解される、以上
の理由を考え、本発明者等は体内酵素の分解を受けにく
い、β−１．３結合の分枝鎖を高頻度に有するβ−１．
６およびβ−１．６分枝鎖結合をもつβ−１．３グルカ
ンを硫酸化することにり強い抗ＨＩＶ作用を有する薬剤
の開発を勘案した。
依存するデンプンやデキストラン等のα−グルゴッド結
合を有する多糖体は体内酵素によって分解される、以上
の理由を考え、本発明者等は体内酵素の分解を受けにく
い、β−１．３結合の分枝鎖を高頻度に有するβ−１．
６およびβ−１．６分枝鎖結合をもつβ−１．３グルカ
ンを硫酸化することにり強い抗ＨＩＶ作用を有する薬剤
の開発を勘案した。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は上述の事由に鑑
み本発明者等は、硫酸化βグルカンはヒト、Ｔ細胞由来
株（ＭＴ−４）を用したＩｎ ｖｉｔｒｏにおける抗Ｈ
ＩＶ活性テストによりＨＩＶの増殖を完全に抑えること
を明らかにし、なお、最小有効濃度は１０ｍｇ／ｍｌで
あり、従来より最も有効であると言われる硫酸デキスト
ランの最小有効濃度に比較しても同等である。
み本発明者等は、硫酸化βグルカンはヒト、Ｔ細胞由来
株（ＭＴ−４）を用したＩｎ ｖｉｔｒｏにおける抗Ｈ
ＩＶ活性テストによりＨＩＶの増殖を完全に抑えること
を明らかにし、なお、最小有効濃度は１０ｍｇ／ｍｌで
あり、従来より最も有効であると言われる硫酸デキスト
ランの最小有効濃度に比較しても同等である。
【０００８】
【作用】即ちマイタケから得た多糖タンパク体をクロル
スルフオン酸法で硫酸化し、抗ＨＩＶ活性をもつ物質の
発明に至った。本発明薬剤の実施例に示す様にＨＩＶ
（ヒト免疫不全ウイルス）としてＨＩＶ−１（ＬＡＶ又
はＨＴＬＶ−ＩＩＩＢ）を用いているがこの他ＨＩＶ−
２（２型エイズウイルス）にも同様の効果を有するもの
であり、非硫酸化物がＭパーＴ細胞（Ｔ４細胞）の活性
を賦活化することを発見していることからＨＩＶによっ
て変性を受けるＴ４細胞の変性が軽減されることにより
抗ＨＩＶ作用が示し得るものである。
スルフオン酸法で硫酸化し、抗ＨＩＶ活性をもつ物質の
発明に至った。本発明薬剤の実施例に示す様にＨＩＶ
（ヒト免疫不全ウイルス）としてＨＩＶ−１（ＬＡＶ又
はＨＴＬＶ−ＩＩＩＢ）を用いているがこの他ＨＩＶ−
２（２型エイズウイルス）にも同様の効果を有するもの
であり、非硫酸化物がＭパーＴ細胞（Ｔ４細胞）の活性
を賦活化することを発見していることからＨＩＶによっ
て変性を受けるＴ４細胞の変性が軽減されることにより
抗ＨＩＶ作用が示し得るものである。
【０００９】［製造例１］ 本件出願人が実施を容認された、特許第１５１４１１４
号に基づく製法は、 （１）マイタケの子実体または菌糸体を粉砕し３００ｇ
の乾燥粉末を得た後、これに３ｌの蒸溜水を加え、１０
０℃で６時間の熱水抽出、また１．２気圧、温度１２０
℃で１時間加熱処理し、冷却後遠心分離法によって得た
上澄液に等量のエタノールを加え、温度４℃、２０時間
放置後、１４．５ｇの沈殿を集めた。この沈殿１ｇに対
し、水４４０ｍｌを加えて溶解し、ｐＨ１２になるよう
セチルトリメチルアンモニュウムヒドロキシドを添加
し、１３．８ｇの沈澱物を得た。これを３０％及び５０
％の酢酸で処理し、酸可溶物を除いて３ｇの酸不溶物を
得た。ここに６％水酸化ナトリウムを加えアルカリ可溶
物を集めた。これに４倍量の９９％エタノールを加えて
沈殿を得た。この物質にクロロホルム−メタノール混液
（２：１）を加え、タンパクを除いた後エタノールを４
倍量添加後、温度４℃で２０時間放置し、遠心分離によ
り、約１ｇの沈殿を得た。該物質は、冷水に難溶な淡褐
色粉末でアンスロン反応は陽性であり、ローリー（Ｌｏ
ｗｒｙ）法により約２２％のタンパク質が検出されたこ
とから、ブロテオグルカンであることが確認された。 （２）次に、この糖タンパク質を先ず、セファロース
（ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）ＣＬ−４Ｂ，２．５×４５ｃｍ
カラムを用いてゲル濾過し、分子量２００×１０４の高
分子糖タンパク質を得た。更に、この物質をＤＥＡＥ−
セファロースＣＬ−６Ｂ２．０×４．５ｃｍカラムに吸
着させ、ｐＨ７．２の１／１５Ｍリン酸緩衝液で溶出さ
れる物質を得た。この物質をセルロース透析チューブを
用いて４℃で精製水に対して透析し、さらにセフアデッ
クスＧ−２５．３×３７ｃｍカラムで完全に脱塩した。
これを蒸発乾固させ、淡褐色無定形粉末状の目的物を得
た。この物質は、０．６％のタンパク質を含む多糖であ
った。 （３）次に、前記（２）で得た物質の化学構造を明らか
にした。即ち前記の物質１ｍｇを採り、５％塩酸−メタ
ノール１ｍｌに溶解し、温度１００℃で６時間封管分解
した後、分解物にトルエン−エタノール（１：１）混液
を添加して減圧下で蒸発乾固させた。これにトリメチル
けい素化剤を添加して温度７０℃で１０分間反応させ、
ＳＥ−２０（シリコンゴムＧＥ）を充填剤とするガスク
ロマトグラフ分析にかけたところ、グルコースのみが検
出された。さらに、この物質をエクソーβ−１，３−グ
ルカナーゼをｐＨ５．０でマツキュルビン緩衝液の下で
反応させたところ、４８時間後に構成グルコース残基の
約４５％が遊離した。以上の結果から、この物質はβ−
１．３結合を有するグルカンであることが確認された。
号に基づく製法は、 （１）マイタケの子実体または菌糸体を粉砕し３００ｇ
の乾燥粉末を得た後、これに３ｌの蒸溜水を加え、１０
０℃で６時間の熱水抽出、また１．２気圧、温度１２０
℃で１時間加熱処理し、冷却後遠心分離法によって得た
上澄液に等量のエタノールを加え、温度４℃、２０時間
放置後、１４．５ｇの沈殿を集めた。この沈殿１ｇに対
し、水４４０ｍｌを加えて溶解し、ｐＨ１２になるよう
セチルトリメチルアンモニュウムヒドロキシドを添加
し、１３．８ｇの沈澱物を得た。これを３０％及び５０
％の酢酸で処理し、酸可溶物を除いて３ｇの酸不溶物を
得た。ここに６％水酸化ナトリウムを加えアルカリ可溶
物を集めた。これに４倍量の９９％エタノールを加えて
沈殿を得た。この物質にクロロホルム−メタノール混液
（２：１）を加え、タンパクを除いた後エタノールを４
倍量添加後、温度４℃で２０時間放置し、遠心分離によ
り、約１ｇの沈殿を得た。該物質は、冷水に難溶な淡褐
色粉末でアンスロン反応は陽性であり、ローリー（Ｌｏ
ｗｒｙ）法により約２２％のタンパク質が検出されたこ
とから、ブロテオグルカンであることが確認された。 （２）次に、この糖タンパク質を先ず、セファロース
（ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）ＣＬ−４Ｂ，２．５×４５ｃｍ
カラムを用いてゲル濾過し、分子量２００×１０４の高
分子糖タンパク質を得た。更に、この物質をＤＥＡＥ−
セファロースＣＬ−６Ｂ２．０×４．５ｃｍカラムに吸
着させ、ｐＨ７．２の１／１５Ｍリン酸緩衝液で溶出さ
れる物質を得た。この物質をセルロース透析チューブを
用いて４℃で精製水に対して透析し、さらにセフアデッ
クスＧ−２５．３×３７ｃｍカラムで完全に脱塩した。
これを蒸発乾固させ、淡褐色無定形粉末状の目的物を得
た。この物質は、０．６％のタンパク質を含む多糖であ
った。 （３）次に、前記（２）で得た物質の化学構造を明らか
にした。即ち前記の物質１ｍｇを採り、５％塩酸−メタ
ノール１ｍｌに溶解し、温度１００℃で６時間封管分解
した後、分解物にトルエン−エタノール（１：１）混液
を添加して減圧下で蒸発乾固させた。これにトリメチル
けい素化剤を添加して温度７０℃で１０分間反応させ、
ＳＥ−２０（シリコンゴムＧＥ）を充填剤とするガスク
ロマトグラフ分析にかけたところ、グルコースのみが検
出された。さらに、この物質をエクソーβ−１，３−グ
ルカナーゼをｐＨ５．０でマツキュルビン緩衝液の下で
反応させたところ、４８時間後に構成グルコース残基の
約４５％が遊離した。以上の結果から、この物質はβ−
１．３結合を有するグルカンであることが確認された。
【００１０】（４）つづいて、この物質を箱守法により
完全メチル化した後、この完全メチル化物を５％塩酸−
メタノールによってメタノリシスした。これをネオペン
チルグリコールサクシネート（Ｎｅｏｐｅｎｔｙｌｇｌ
ｙｃｏｌ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）を充填剤とするガスク
ロマトグラフ分析したところ、β−１．３結合に由来す
る２，４，６−トリー−０−メチル、β−１．６結合に
由来する２，３，６−トリ−０−メチル、１，３，４結
合に由来する２，４−ダイ−０−メチル及び非還元末端
に由来する２，３，４，６−テトラ−０−メチルグルコ
ース誘導体の存在が認められた。
完全メチル化した後、この完全メチル化物を５％塩酸−
メタノールによってメタノリシスした。これをネオペン
チルグリコールサクシネート（Ｎｅｏｐｅｎｔｙｌｇｌ
ｙｃｏｌ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）を充填剤とするガスク
ロマトグラフ分析したところ、β−１．３結合に由来す
る２，４，６−トリー−０−メチル、β−１．６結合に
由来する２，３，６−トリ−０−メチル、１，３，４結
合に由来する２，４−ダイ−０−メチル及び非還元末端
に由来する２，３，４，６−テトラ−０−メチルグルコ
ース誘導体の存在が認められた。
【００１１】以上の結果から、マイタケ子実体を熱水抽
出して得られたこの物質は、β−１．６結合を主鎖と
し、これに高頻度のβ−１．３分枝鎖を有する化学的構
成よりなる多糖タンパクおよびβ−１．６分枝鎖をもつ
β−１．３多糖タンパクからなるものと結論した。ここ
で得られた硫酸化β−１．６グルカンの分子量はマナー
ズ法（Ｍａｎｅｒｓ Ｅｔ Ａｌ．１９７１）の改変法
を用いて約２２万と測定された。
出して得られたこの物質は、β−１．６結合を主鎖と
し、これに高頻度のβ−１．３分枝鎖を有する化学的構
成よりなる多糖タンパクおよびβ−１．６分枝鎖をもつ
β−１．３多糖タンパクからなるものと結論した。ここ
で得られた硫酸化β−１．６グルカンの分子量はマナー
ズ法（Ｍａｎｅｒｓ Ｅｔ Ａｌ．１９７１）の改変法
を用いて約２２万と測定された。
【００１２】［製造例２］ 硫酸化β−１．６グルカンの調整 製造例１の方法で得られたβ−プロテオグルカン（ＭＴ
−Ｓ）を以下のようにして硫酸化物に変換した即ち３０
０ｍｌの丸底フラスコにピリジン２５ｍｌを入れ−１０
℃に冷却、攪拌をしながらクロスルホン酸５ｍｌを徐々
に加え１５〜２０分反応させ固化した反応物を６０〜７
０℃のオイルバスに浸し溶解する。この溶解物を約１時
間激しく攪拌した後冷水１００ｍｌを加えて飽和炭酸ナ
トリウム溶液で中和する。中和後５倍量のアセトンを加
えて上澄液と沈殿物に分画する。この沈殿物を５０ｍｌ
の水に溶解しＩＲ１２０Ｂイオン交換樹脂に通し炭酸ナ
トリウムでＰＨ９〜１０に調整したのち５倍量のアセト
ンを加え上澄液と沈殿物に分画する。沈殿物を水に溶解
させ凍結乾燥し収量０．１４ｇを得た。調整した分枝鎖
を有する硫酸化−βプロテオグルカン（ＭＴ−Ｓ）は、
保存性の面からアルカリ金属塩又はアンモニュウム塩の
適当な塩の形にしておくのが望ましい。以上に述べた方
法で調整したイオウ含量の測定法を得られた。
−Ｓ）を以下のようにして硫酸化物に変換した即ち３０
０ｍｌの丸底フラスコにピリジン２５ｍｌを入れ−１０
℃に冷却、攪拌をしながらクロスルホン酸５ｍｌを徐々
に加え１５〜２０分反応させ固化した反応物を６０〜７
０℃のオイルバスに浸し溶解する。この溶解物を約１時
間激しく攪拌した後冷水１００ｍｌを加えて飽和炭酸ナ
トリウム溶液で中和する。中和後５倍量のアセトンを加
えて上澄液と沈殿物に分画する。この沈殿物を５０ｍｌ
の水に溶解しＩＲ１２０Ｂイオン交換樹脂に通し炭酸ナ
トリウムでＰＨ９〜１０に調整したのち５倍量のアセト
ンを加え上澄液と沈殿物に分画する。沈殿物を水に溶解
させ凍結乾燥し収量０．１４ｇを得た。調整した分枝鎖
を有する硫酸化−βプロテオグルカン（ＭＴ−Ｓ）は、
保存性の面からアルカリ金属塩又はアンモニュウム塩の
適当な塩の形にしておくのが望ましい。以上に述べた方
法で調整したイオウ含量の測定法を得られた。
【００１３】その含量は下記の通りである。イオウ含量
の測定試量をよく乾燥し、その約３ｍｇを精密に量り水
３ｍｌ及び過酸化水素水３滴を吸収液とし酸素フラスコ
燃焼法（日本薬局方、一般試験法）によりＳｕｌｆａｔ
ａ中のイオン含量を測定する。
の測定試量をよく乾燥し、その約３ｍｇを精密に量り水
３ｍｌ及び過酸化水素水３滴を吸収液とし酸素フラスコ
燃焼法（日本薬局方、一般試験法）によりＳｕｌｆａｔ
ａ中のイオン含量を測定する。
【００１４】
【表１】
【００１５】以上に述べた方法で得られた硫酸化β−プ
ルテオグルカン（ＭＴ−Ｓ）について抗ＨＩＶ活性の評
価を以下の実施例で実施した。
ルテオグルカン（ＭＴ−Ｓ）について抗ＨＩＶ活性の評
価を以下の実施例で実施した。
【００１６】
【実施例】抗ＨＩＶ活性の測定（ウイルスによる細胞変
性抑制活性のテスト） 国立予防衛生研究所エイズセンターエイズウイルス室で
実施されている方法を用いた。即ち１次スクリーニング
としてＭＴ−４細胞のＨＩＶ感染による細胞障害性の抑
制を指標にしたマイクロプレート法を用い、ここで活性
が認められた試料に関しては他の方法により抗ＨＩＶ活
性の確認及び作用メカニズムの解析を行った。 （マイクロプレート法） ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩＢ Ｓｔｒａｉｎ）およ
びＨＩＶ−２（ＨＩＶ［ＧＨ−１］）に対して高い感受
性を持つＭＴ−４細胞（ＣＤ４抗原陽性・ＨＴＬＶ−１
陽性細胞）は感染後３〜５日間でＣＰＥが出現し、ほと
んどの細胞が死滅する。顕微鏡下でＣＰＥを判定し、添
加した試料によってこのＣＰＥの発現を抑制するかどう
かを調べるが１次マクリーニングとしてこの方法を用い
た。すなわち丸底９６ウエルマイクロプレート（Ｎｕｎ
ｃ）の左端８ウエルに所定の濃度に希釈した試料溶液２
００μｌを加える。試料の希釈は１０％Ｆｃｓ添加Ｒｐ
ｍＩ １６４０培地で行う。のこりのウエルには培地を
１００μｌづつ入れておく、８連ピペットで左端のウエ
ルから１００μｌをとり右隣のウエルに移しよく攪拌す
る。これを繰返し試料の２倍段階希釈液（１００μｌ／
ウエル１２段階）とする次に対数増殖期にあるＭＴ−４
細胞をプレート１枚あたり６００万個遠心分離により集
め、ごく少量の培地に懸濁する。この細胞浮遊液に遠心
管内で１００ＴＣＩＤ ５０／ｍｌとなるようにＨＩＶ
を加えて３７℃で１時間吸着させる。ＨＩＶは持続感染
Ｍｏｌｔ−４／ＨＩＶ細胞の培養上清を２２μｍミリポ
アフイルターで濾過し−８０℃に保存したもので、あら
かじめＭＴ−４細胞にたいする感染価を決めておいたも
のを用いる。３７℃で１時間吸着後プレート１枚あたり
１０ｍｌの培地を加え１００μｌ／ウエルを試料希釈液
に添加する。このときの細胞濃度は約３０万個／ｍｌに
設定する。非感染細胞と、無添加試料感染細胞を対照と
しておき５％ＣＯ２存在下、３７℃で培養する。ＨＩＶ
感染後３日目に検鏡で試料による細胞毒性を調べると共
に感染時と同じ試料の２倍段階希釈のプレートを用意
し、３日間培養したプレートから１／３〜１／５の細胞
を取り出し移し替える。感染後６日目に判定を行う。検
鏡によりＨＩＶ感染によるＣＰＥの発現の有無を観察す
る。試料が細胞毒性を示さない濃度でＨＩＶ感染による
ＣＰＥの発現を抑制した場合効果が認められるものとし
た。 （抗ＨＩＶ試験結果） 試料：マイタケ由来硫酸化β−プロテオグルカン（ＭＴ
−Ｓ）
性抑制活性のテスト） 国立予防衛生研究所エイズセンターエイズウイルス室で
実施されている方法を用いた。即ち１次スクリーニング
としてＭＴ−４細胞のＨＩＶ感染による細胞障害性の抑
制を指標にしたマイクロプレート法を用い、ここで活性
が認められた試料に関しては他の方法により抗ＨＩＶ活
性の確認及び作用メカニズムの解析を行った。 （マイクロプレート法） ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩＢ Ｓｔｒａｉｎ）およ
びＨＩＶ−２（ＨＩＶ［ＧＨ−１］）に対して高い感受
性を持つＭＴ−４細胞（ＣＤ４抗原陽性・ＨＴＬＶ−１
陽性細胞）は感染後３〜５日間でＣＰＥが出現し、ほと
んどの細胞が死滅する。顕微鏡下でＣＰＥを判定し、添
加した試料によってこのＣＰＥの発現を抑制するかどう
かを調べるが１次マクリーニングとしてこの方法を用い
た。すなわち丸底９６ウエルマイクロプレート（Ｎｕｎ
ｃ）の左端８ウエルに所定の濃度に希釈した試料溶液２
００μｌを加える。試料の希釈は１０％Ｆｃｓ添加Ｒｐ
ｍＩ １６４０培地で行う。のこりのウエルには培地を
１００μｌづつ入れておく、８連ピペットで左端のウエ
ルから１００μｌをとり右隣のウエルに移しよく攪拌す
る。これを繰返し試料の２倍段階希釈液（１００μｌ／
ウエル１２段階）とする次に対数増殖期にあるＭＴ−４
細胞をプレート１枚あたり６００万個遠心分離により集
め、ごく少量の培地に懸濁する。この細胞浮遊液に遠心
管内で１００ＴＣＩＤ ５０／ｍｌとなるようにＨＩＶ
を加えて３７℃で１時間吸着させる。ＨＩＶは持続感染
Ｍｏｌｔ−４／ＨＩＶ細胞の培養上清を２２μｍミリポ
アフイルターで濾過し−８０℃に保存したもので、あら
かじめＭＴ−４細胞にたいする感染価を決めておいたも
のを用いる。３７℃で１時間吸着後プレート１枚あたり
１０ｍｌの培地を加え１００μｌ／ウエルを試料希釈液
に添加する。このときの細胞濃度は約３０万個／ｍｌに
設定する。非感染細胞と、無添加試料感染細胞を対照と
しておき５％ＣＯ２存在下、３７℃で培養する。ＨＩＶ
感染後３日目に検鏡で試料による細胞毒性を調べると共
に感染時と同じ試料の２倍段階希釈のプレートを用意
し、３日間培養したプレートから１／３〜１／５の細胞
を取り出し移し替える。感染後６日目に判定を行う。検
鏡によりＨＩＶ感染によるＣＰＥの発現の有無を観察す
る。試料が細胞毒性を示さない濃度でＨＩＶ感染による
ＣＰＥの発現を抑制した場合効果が認められるものとし
た。 （抗ＨＩＶ試験結果） 試料：マイタケ由来硫酸化β−プロテオグルカン（ＭＴ
−Ｓ）
【００１７】
【表２】
【００１８】なお Ｓｕｌｆａｔｅの導入はｇｌｕｃｏ
ｓｅのＣの２位及び３位及び４位のいずれか１ヶ所又は
その２ヶ所あるいは全てのＣ位に入ってもよい。いずれ
に導入されても抗ＨＩＶ効果に差はない。 （分子量２２万） 方法：ＭＴ−４細胞を用いたマイクロプレート法使用Ｈ
ＩＶはＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２型で行った。 結果 − ６日目判定 − ＣＯｎｃ（μｇ／ｍｌ） 試量 １０００ ５００ ２５０ １２５ ６３ ３
１ １６ ８ ４ ２１ ０．５ ＭＴ−Ｓ ○− ◎− ◎− ◎− ◎− ○− ◎
− ○− ○＋ ○＋＋＋ ＋＋ ×：薬剤による細胞毒性の発現あり ○：細胞の増殖が認められる ◎：非感染対照細胞と同程度の細胞の増殖が認められる ＋：ＨＩＶによるＣＰＥの発現あり ＋＋：ＨＩＶによる強いＣＰＥの発現あり −：ＨＩＶによるＣＰＥの発現なし
ｓｅのＣの２位及び３位及び４位のいずれか１ヶ所又は
その２ヶ所あるいは全てのＣ位に入ってもよい。いずれ
に導入されても抗ＨＩＶ効果に差はない。 （分子量２２万） 方法：ＭＴ−４細胞を用いたマイクロプレート法使用Ｈ
ＩＶはＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２型で行った。 結果 − ６日目判定 − ＣＯｎｃ（μｇ／ｍｌ） 試量 １０００ ５００ ２５０ １２５ ６３ ３
１ １６ ８ ４ ２１ ０．５ ＭＴ−Ｓ ○− ◎− ◎− ◎− ◎− ○− ◎
− ○− ○＋ ○＋＋＋ ＋＋ ×：薬剤による細胞毒性の発現あり ○：細胞の増殖が認められる ◎：非感染対照細胞と同程度の細胞の増殖が認められる ＋：ＨＩＶによるＣＰＥの発現あり ＋＋：ＨＩＶによる強いＣＰＥの発現あり −：ＨＩＶによるＣＰＥの発現なし
【００１９】
【発明の効果】マイタケ由来硫酸化β−プロテオグルカ
ン（ＭＴ−Ｓ）に強い抗ＨＩＶ活性を示した。以上の方
法により培養後ウイルスによる細胞毒性の有無を確認し
た結果対照群では、ウイルスによる細胞変性が認められ
たが硫酸化β−１．６グルカンを１６〜６３μｇ／ｍｌ
の少量を添加した場合でも、ウイルスによる細胞変性が
認められなかった。この結果はウイルスによる細胞変性
の抑制活性すなわち抗ＨＩＶ活性が本発明薬剤に存在す
ることを確認するものである。以上本発明薬剤であるマ
イタケ中に存在するβ−グルカン−タンパク多糖体は明
らかにＨＩＶによる細胞変性を抑制することが判明した
ものである。
ン（ＭＴ−Ｓ）に強い抗ＨＩＶ活性を示した。以上の方
法により培養後ウイルスによる細胞毒性の有無を確認し
た結果対照群では、ウイルスによる細胞変性が認められ
たが硫酸化β−１．６グルカンを１６〜６３μｇ／ｍｌ
の少量を添加した場合でも、ウイルスによる細胞変性が
認められなかった。この結果はウイルスによる細胞変性
の抑制活性すなわち抗ＨＩＶ活性が本発明薬剤に存在す
ることを確認するものである。以上本発明薬剤であるマ
イタケ中に存在するβ−グルカン−タンパク多糖体は明
らかにＨＩＶによる細胞変性を抑制することが判明した
ものである。
Claims (1)
- 【請求項１】マイタケ子実体及び菌糸体中に含まれるタ
ンパクを約０．６％含有する１．３結合の分枝鎖を有す
るβ−１．６グルカンおよび１．６結合の分枝鎖をもつ
β−１．３グルカンを硫酸化して得られるマイタケ由来
の硫酸化多糖タンパク体がヒト、エイズウイルスを含む
レトロウィルスに対しその感染症を治療することを特徴
とする、抗エイズウイルス活性を有する硫酸化βグルカ
ンのレトロウイルス感染症治療用薬剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3150827A JPH0699320B2 (ja) | 1991-04-04 | 1991-04-04 | 抗エイズウイルス活性を有する硫酸化βグルカンのレトロウイルス感染症治療用薬剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3150827A JPH0699320B2 (ja) | 1991-04-04 | 1991-04-04 | 抗エイズウイルス活性を有する硫酸化βグルカンのレトロウイルス感染症治療用薬剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04308531A JPH04308531A (ja) | 1992-10-30 |
| JPH0699320B2 true JPH0699320B2 (ja) | 1994-12-07 |
Family
ID=15505269
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3150827A Expired - Lifetime JPH0699320B2 (ja) | 1991-04-04 | 1991-04-04 | 抗エイズウイルス活性を有する硫酸化βグルカンのレトロウイルス感染症治療用薬剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0699320B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4726274B2 (ja) * | 1999-09-02 | 2011-07-20 | 株式会社雪国まいたけ | マイタケ由来の感染防御・治療剤 |
| JP2004189737A (ja) * | 2002-11-28 | 2004-07-08 | Keiichiro Hiyama | 抗真菌剤 |
| KR100654063B1 (ko) * | 2005-08-11 | 2006-12-06 | 주식회사 코리아나화장품 | 베타-１,６-분지-베타-１,３-글루칸을 포접하여 안정화한나노리포좀을 유효성분으로 함유하는 피부노화 방지용화장료 조성물 |
| CN104277129A (zh) * | 2013-07-01 | 2015-01-14 | 周伯扬 | 一种灰树花多糖提取方法 |
-
1991
- 1991-04-04 JP JP3150827A patent/JPH0699320B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04308531A (ja) | 1992-10-30 |
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