JPH07100347A - 懸濁脂質粒子の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】量産的に、また効率的で歩留まりよく、懸濁脂
質粒子を微細化・均一化し得る懸濁脂質粒子の製造方法
の提供。 【構成】 厚さ方向に平行な口径、もしくは一主面側が
径大なすり鉢状に開口する貫通孔を有する多孔支持板
と、前記多孔支持板の一主面に配置された微細な網目構
造の流路を設けられたメンブレンフィルターとを具備し
て成るフィルターユニットを配置し、前記メンブレンフ
ィルター側から脂質粒子含有の懸濁液を 8 kgf／cm² 以
上の加圧下で、メンブレンフィルターの微細な網目構造
の流路および多孔支持板の貫通孔を通過（前記フィルタ
ーユニットを強制通過）させることにより、前記懸濁液
中に含有されている脂質粒子を微細化・均一化すること
を特徴とする。なお、一主面に半径方向に傾斜付きで延
設された液流通溝、およびに前記延設された液流通溝に
交叉する形で同心円的に液流通溝が形設された耐圧性の
支持板を用いる構成を採ってもよい。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】脂質粒子懸濁液の製造方法に係
り、特に微細粒子で粒径（粒度）の揃ったリポソームや
エマルジョン製剤などに適する懸濁脂質粒子の製造方法
に関する。

【０００２】

【従来の技術】たとえば、ＤＤＳ(Drug Delivery Syste
m,薬物送達システム）などの手法は、制ガン剤，抗エイ
ズ薬など薬理学的適用において、実用に多くの期待が寄
せられており、またこの手法としては、a)化学的手法、
b)物理化学的手法、およびc)生物学的手法が挙げられ
る。そして、b)物理化学的手法において、微粒子を用い
る形態としては、リポソーム，エマルジョン，混合ミセ
ル，マイクロカプセル，マイクロスフェアなどが挙げら
れる。このうち、水と油とを両親媒性脂質により乳化し
たエマルジョン、もしくは内部に水の相を有し脂質の二
分子膜により閉鎖小胞化されたリポソームの場合は、一
般的に静注による全身投与が可能な製剤として位置付け
られているが、近年、経皮吸収用製剤としても注目され
ている。

【０００３】また、この種の懸濁脂質粒子（脂質懸濁粒
子）は、前記薬理学的適用以外の分野、たとえば食品工
業的な分野、あるいは化粧品工業的な分野でも適用され
ており、一般的に、ある限定された平均粒径および限定
された粒径分布を有することが望まれている。特に、前
記薬理学的適用における製剤用では、前記平均粒径およ
び粒径分布の制御が重要視される。

【０００４】このようなリポソームやエマルジョンにお
ける脂質粒子の整粒化という要望に対応して、前記懸濁
脂質粒子などを微細化し整粒するため、次のような方法
が採られている。

【０００５】(a) 高圧ホモジナイザーなどの機械的剪断
力を利用し、微細化して整粒する製造方法、(b) 荷電粒
子の照射およびアルカリエッチング処理により均一な微
細孔を貫通させた膜厚の薄い特別のメンブレンフィルタ
ーを用いて、加圧下に通過（押し出し濾過）させて微細
化・均一化する方法（バイオキミカ・エト・バイオフィ
ジカ・アクタ、 555巻、 9頁、1979年）が知られてい
る。

【０００６】なお、本発明において、懸濁脂質粒子の製
造方法とは、前記のように、予め製造された脂質粒子懸
濁液中の脂質粒子を微細化し、整粒することを意味す
る。そして、このような脂質粒子懸濁液として、前記エ
マルジョンやリポソームなどが代表的に挙げられ、また
これらの脂質粒子懸濁液は、たとえばレシチン、スフィ
ンゴミエリンなどのリン脂質、コレステロール、ジセチ
ルリン酸、ジグリセライド、トリグリセライド、トコフ
ェルなどの脂質、ガングリオシドなどの糖脂質、ポリオ
キシエチレンソルビタン脂肪酸、ポリエチレングリコー
ル脂肪酸エステルなどの非イオン性界面活性剤、ラウリ
ン硫酸ナトリウムなどのイオン性界面活性剤を原料とし
て調製され、具体的には、水溶性薬物、脂溶性薬物、油
溶性薬物などがある。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記微
細脂質の製造方法（懸濁脂質粒子の微細化・均一化方
法）は、実用上次のような不都合な問題がある。すなわ
ち、前記(a) の方法の場合には、その強い剪断力のため
に、多糖類やタンパク質のような高分子薬物の一部が、
切断もしくは変性したりする。また、部分的に加わる高
熱のために、熱に弱い薬物が分解を起こしたりする。さ
らに、前記脂質の微細化に機械的な乳化力を利用するた
め、粒径の精密な制御が実質的に至難であるという問題
がある。

【０００８】一方、(b) の方法の場合には、前記(a) の
方法に較べて、薬物などの分解の危険性が少ないもの
の、メンブレンフィルターの種類に制限がある。すなわ
ち、前記文献（バイオキミカ・エト・バイオフィジカ・
アクタ、 555巻、 9頁、1979年）紹介されている均一な
微細孔を貫通させた膜厚の薄いポリカーボネートメンブ
レンフィルターを用いた場合のみ、メンブレンフィルタ
ーに対する化学的・物理的吸着がなく、懸濁脂質粒子が
微細化を通過する際に破砕されて、より小さい粒子径化
が可能で、脂質粒子の回収もほぼ 100％とされている
（アニュアル・レビュー・オブ・バイオフィジックス・
アンド・バイオエンジニアリング、 9巻、 467頁、1980
年）。

【０００９】ここで、前記ポリカーボネートメンブレン
フィルターとは、構造的に相違する網目構造の微細孔を
有するメンブレンフィルターを利用することも検討され
てきたが、懸濁脂質粒子の微細化・均一化は成功してい
ない。たとえばセルロースエステル系高分子素材の溶剤
処理による膨潤，乾燥によって、微細孔を網目状に設け
たメンブレンフィルターの場合、メンブレンフィルター
自体の材質に由来する化学的吸着、微細孔の網目構造お
よび膜厚に由来して懸濁脂質粒子の物理的捕捉（extrus
ion ，押し出し濾過）にならず、いわゆる濾過（filtra
tion）となる。つまり、使用するメンブレンフィルター
の微細孔ないし細孔よりも小さい粒子径の懸濁脂質粒子
が、初期段階で濾過されるものの、その後は目詰まりを
起こして濾過機能がなくなる。さらに言及すると、微細
孔などを網目状に設けたメンブレンフィルターの場合、
脂質粒子懸濁液に 1〜7kgf／cm² の圧力を加え、無理や
り（強制的）に通過させるても、製造工程の途中で目詰
まりを起こし、懸濁脂質粒子の微細化による整粒をなし
得ない（脂質粒子の回収率が極端に悪い）。

【００１０】さらに、前記 (b)の変形的な手段として、
特殊形状の貫通微細孔を有するセラミックフィルターを
用いる方法（特開昭63- 502410号公報，USP,no4737323
号明細書）、不織布をフイルターとして用いる方法（US
P,no4927637 号明細書）、あるいは金属焼傑体をフイル
ターとして用いる方法（特開平 2- 502978号公報）など
も試みられている。しかし、これらの方法は特殊な方法
であり、たとえばＧＭＰ対応，無菌製造工程のバリデー
ションなど点で、医薬品分野および化粧品分野などでの
適用には、解決を要する問題が残されている。

【００１１】前記 (b)の場合は、フィルター（濾材）と
しての機能においては、濾滓が主として皮膜の表面に発
生するので、皮膜表面の濾滓を容易に剥離し、反復使用
し得るという利点を有する。しかし、懸濁脂質粒子につ
いて、所要の微細化を効率的に、また量産的に達成する
には、脂質粒子懸濁液が、メンブレインフィルターを強
制通過可能に補強的に支持されていることが前提とな
る。そして、前記メンブレインフィルターの補強的な支
持体においては、脂質粒子の通過が可能なことが要求さ
れる。ここで、フィルター支持体を多孔質体としても、
開口率に限度があるため、メンブレンフィルターの微細
孔を加圧により通過し、微細化した懸濁脂質粒子（脂質
懸濁粒子）の流れが阻害される。したがって、結果的に
は所要の微細化を効率的・量産的になし得ないことにな
るので、前記メンブレンフィルターを支持するフィルタ
ー支持体の構成・選択も重要な要素を成すといえる。な
お、前記メンブレンフィルターは薄いフイルムであるた
め、たとえば平らな金属スクリーン、もしくはモノフィ
ラメント平織りのメッシュスクリーンなどの支持スクリ
ーンで支持し、カセット化もしくはユニット化して使用
されている。

【００１２】いずれにしても、前記エマルジョンやリポ
ソームに代表される懸濁脂質粒子を量産的に微細化し整
粒するには、(1) 整粒器がたとえば貯蔵タンクに直結可
能で、一度に大量の脂質粒子懸濁液を処理できること、
(2) 被処理脂質懸濁を、その脂質の相転移温度以上に保
つための温度制御を要すること、(3) 加圧という圧力制
御を要すること、(4) 対象が医薬品用の場合（弱酸性，
弱塩基性が多い）耐蝕性を要求されることが前提にな
り、さらに加えて(5) たとえば薬理学的もしくは食品工
業的な利用ないし適用においては、滅菌ないし減菌効果
なども要望される。しかしながら、従来の濾過装置（も
しくは懸濁脂質粒子の製造手段）は、前記(1) 〜(4) の
要件を備えていないし、さらに(5) の滅菌・減菌作用も
認められない。

【００１３】上記説明したように、従来、懸濁脂質粒子
などの、より微細化および粒径分布範囲の挟小化（整粒
化）に適する有効な製造方法がない。したがって、懸濁
脂質粒子などの効率的な微細化、および粒径分布範囲の
効率的な挟小化もしくは整粒化が可能な、懸濁脂質粒子
の製造方法の開発が待たれていた。そして、本発明者ら
は、このような期待に対応して検討を重ねた結果、網目
構造の微細孔を有するメンブレンフィルターを、適切な
形で補強的に支持して、懸濁脂質粒子を約8kgf／cm² 以
上の圧力を加えて強制通過させると、 100％近い回収率
で、微細化・均一化が達成されることを見出し、本発明
の達成に至ったものである。

【００１４】したがって、本発明は量産的に、また効率
的で歩留まりよく、懸濁脂質粒子を微細化・均一化し得
る懸濁脂質粒子の製造方法の提供を目的とする。

【００１５】

【課題を解決するための手段】本発明に係る懸濁脂質粒
子の製造方法は、厚さ方向に平行もしくは一主面側が径
大に開口したすり鉢状の貫通孔を有する多孔支持板と、
前記多孔支持板の一主面面に配置された微細な網目構造
の流路を設けられたメンブレンフィルターとを具備して
成るフィルターユニットを配置し、前記メンブレンフィ
ルター側から脂質粒子含有の懸濁液を約 8 kgf／cm² 以
上の加圧下で、メンブレンフィルターの微細な網目構造
の流路および多孔支持板の貫通孔を通過（前記フィルタ
ーユニットを強制通過）させることにより、前記懸濁液
中に含有されている脂質粒子を微細化・均一化すること
を特徴とする。

【００１６】なお、上記多孔支持板の代わりに、一主面
に半径方向に傾斜付きで延設された液流通溝、およびに
前記延設された液流通溝に交叉する形で同心円的に液流
通溝が形設された耐圧性の支持板を用い、かつ加圧下で
メンブレンフィルターの微細な網目構造の流路および耐
圧性支持板の流通溝を流通（前記フィルターユニットを
強制通過）させるような構成を採ってもよい。

【００１７】本発明において使用するメンブレンフィル
ターは、たとえばセルロースエステル，ポリビニリデン
ジフロライド，グラスファイバー，アクリル酸共重合
体，ポリテトラフロロエチレン，ナイロン，ＨＴ−タフ
リンなどを素材とし、平均孔径1.0μm 以下、好ましく
は0.45μm 以下、さらに好ましくは0.22μm 以下の微細
孔を網目構造に設けられた、いわゆるスポンジ状の態様
を有する膜である。ここで、メンブレンフィルターの網
目構造を成す微細孔は、製造する懸濁脂質粒子の平均粒
子径および粒子径分布を決める重要な因子であり、平均
孔径 1.0μm を超えると、たとえば医薬用の場合、体内
動態や製剤としての粒子径の安定性保証の点で不都合が
認められる。また、平均孔径0.45μm 以下の場合、濾過
減菌作用が、さらに平均孔径0.22μm 以下の場合は、濾
過除菌作用もあり、脂質粒子の微細化・均一化ととも
に、製剤の減菌をも同時に行い得るという利点がある。

【００１８】本発明において、前記メンブレンフィルタ
ーを支持し、フィルターユニットを構成する多孔支持板
が、厚さ方向に平行な口径の貫通孔、もしくはすり鉢状
の貫通孔（本発明では段付き貫通孔なども含む）を有す
る多孔支持板の場合、一主面側の開口径／他の主面側の
開口径比は、特に限定されるものでないが、一主面側の
開口径（径大の開口径）を 1としたとき他の主面側の開
口径（径小の開口径）を0.01〜 1の範囲内で選択・設定
することが好ましい。その理由は径大の開口径／径小の
開口径比が 1：0.01〜 1の範囲を外れると、メンブレン
フィルターの有効な微細孔の領域を十分に確保し得ない
傾向が認められるからである。さらに、前記段付き貫通
孔を有する多孔支持板の径大開口の開口率は30〜90％，
好ましくは60〜70％程度であり、かつその厚さは一般的
に 0.1〜 5mm程度でよい。

【００１９】また、このすり鉢状の（段付きを含む）貫
通孔を有する多孔支持体は、前記被処理体（懸濁脂質粒
子）へ加える圧力に対して、十分耐え得る機械的な強度
が要求されるので、たとえばSUS316， SUS316Lなどのス
テンレス鋼、もしくは鉄などを芯材として表面にテトラ
フロロエチレン樹脂などのプラスチック類やガラスなど
をライニングした材質製の支持板で補強支持することが
望ましい。そして、その厚さは多孔支持体の大きさや形
状などを考慮して選択，設定され、一般的には3〜10mm
程度に選択される。ここで、多孔支持体は、前記のよう
に、貫通孔が段付きであることが被処理体の通流通性な
どの点で好ましいけれど、たとえば開口径が連続的に変
化するテーパー付きの構成であってもよい。

【００２０】また、前記半径方向に傾斜付きで延設され
た液流通溝、ならびにこの半径方向の液流通溝に交叉さ
せて同心円的に液流通溝を形設した主面を備えた耐圧性
支持板の場合も、構成するフイルターユニットの大き
さ、被処理体（懸濁脂質粒子）へ加える圧力などによ
り、材質や大きさ，傾斜度など適宜選択，設定される。
プラスチックス、たとえばポリカーボネート樹脂製で、
直径 290mm程度の場合は厚さ 5〜20mm程度、ステンレス
鋼製で直径 290mm程度の場合は、厚さ 5〜20mm程度に選
択，設定すれば十分である。そして、半径方向に傾斜付
きで延設される液流通溝も、たとえば外周側の深さを
0.8mm程度、内周側の深さ 4.8mm程度に傾斜付けされて
いる。ここでは、外周側のピッチに比べて内周側のピッ
チを狭めているが、このような構成に限定されるもので
なく、たとえば外周側の液流通溝数を多くし、液流通溝
数の少ない内周側の液流通溝に合流させてもよい。さら
に、前記半径方向に傾斜付きで延設された液流通溝に、
同心円的に交叉させて形設される液流通溝は、隣接する
半径方向に延設された液流通溝間を接続するとともに、
メンブレンフィルターの有効面積を稼ぐ役割を成し、こ
れらのピッチや深さも用途，容量などに応じて適宜選択
・設定される。

【００２１】本発明において、脂質粒子懸濁液に加える
圧力は、少なくとも約8kgf／cm² に選択・設定する必要
がある。つまり、加圧が約8kgf／cm² 未満では、メンブ
レンフィルターの化学的吸着や、網目構造および膜厚に
由来する物理的捕捉などにより、懸濁脂質粒子の回収率
が極端に悪く、実用に適さないからである。一方、加え
る圧力を、たとえば 10kgf／cm² ， 15kgf／cm² ， 20k
gf／cm² ， 25kgf／cm² ， 30kgf／cm² ， 35kgf／c
m² ，あるいは 40kgf／cm² と上げることにより、意外
にも懸濁脂質粒子の回収率は 100％近くなるとともに、
懸濁脂質粒子の微細化・均一化が容易に達成されること
を見出された。

【００２２】本発明を実施するための装置としては、前
記加圧操作が可能な耐圧性を有し、かつメンブレンフィ
ルターユニットを設置し得る濾過器などなら、特に限定
されないが、温度制御機構を備えたものであることが望
ましい。すなわち、原料となる脂質粒子懸濁液の脂質組
成によって、脂質のゲル−液相転移温度以上の温度を要
する場合、たとえば水素添加レシチン，ジステアリルホ
スファチジルコリンなどを主体とした脂質粒子懸濁液を
原料とする場合は、加温を要するので温度制御が可能な
濾過器を用いる。

【００２３】

【作用】本発明に係る懸濁脂質粒子の製造方法は、比較
的低コストな網目構造の微細孔を有するメンブレンフィ
ルターおよび補強的な支持体の適正な組合わせ、さらに
は強制通過させる効果的な加圧力の選択・設定によっ
て、容易にかつ歩留まりよく、一定の平均粒子径および
粒子分布を呈する懸濁脂質粒子の製造が可能となる。つ
まり、補強的な支持体の適正な組合わせによって、懸濁
脂質粒子に少なくとも8kgf／cm² の圧力を加えて、網目
構造の微細孔を有するメンブレンフィルターを強制通過
させることが可能となるとともに、前記高圧力の印加に
より懸濁脂質粒子が容易に、かつ一様な形態をとって平
均粒径の微細化および粒径の均一化がなされることにな
る。

【００２４】

【実施例】

実施例１ 先ず、この発明の実施に用いるフィルターユニットにつ
いて説明する。

【００２５】図１はフィルターユニットの要部構成例を
断面的に示したもので、１は段付き貫通孔1aを有するス
テンレス製の多孔支持板、２は前記多孔支持板１の径大
に開口する上主面に配置された網目構造の微細孔（流通
路を成す）を有するがメンブレンフィルターである。こ
のユニット３の構成においては、実用上多孔支持板１を
機械的に補強支持する構成とすることが望ましいが、使
用条件によっては省略することも可能である。なお、前
記フィルターユニット３の具体的な構成において、多孔
支持板１は、一主面側がたとえば直径0.85mm程度の径大
に開口し，他主面側がたとえば直径 0.5mm程度の径小に
開口する段付き貫通孔1aを有しており、前記径大に開口
する側の開口率が65％程度の、たとえば厚さ 0.5〜 0.7
mm程度のステンレス製の多孔支持板である。

【００２６】前記フィルターユニット３の構成につい
て、図２および図３を参照して、さらに詳細に説明す
る。図２は前記フィルターユニット３の構成例の要部展
開図であり、また図３は同構成例の要部断面図である。
そして、前記フィルターユニット３は、分散的に貫通孔
を有する耐圧性の支持板3a、この耐圧性の支持板3aに支
持される一主面側が径大に開口し他主面側が径小に開口
する段付き貫通孔を有するたとえばステンレス綱製の多
孔支持体（径大開口の径／径小開口の径比は 1：0.01〜
0.5）3b、および前記多孔支持体3bの径大開口面にメッ
シュスクリーン3cを介して配置された微細孔が網目構造
に設けられたメンブレンフィルター3d、およびメンブレ
ンフィルター3d面上に配置されたメッシュスクリーン3e
で構成されている。ここで、メンブレンフィルター3d
は、平均粒径 1μm 以下、たとえば平均粒径0.22μm の
微細な網目構造の流路を有する厚さ 100〜 150μm のセ
ルロース混合エステル膜、ポリビニリデンジフロライド
膜、テフロン膜もしくはポリカーボネート膜などであ
る。

【００２７】さらに、前記多孔性の支持板3aは、たとえ
ば厚さ 4mmのステンレス板に、21mm間隔の同心円上に径
4mmの貫通孔（面取り済み）をほぼ等間隔に形設したも
のであるが、他の構成を採ったものでもよい。なお、こ
の構成において、メンブレンフィルター3dを両面側でメ
ッシュスクリーン3c，3eにて挟持したのは、メンブレン
フィルター3dの保護を図ったもので、使用条件によって
省略することも可能である。

【００２８】次に、一部切り欠き断面的に示す図４、上
面を示す図５を参照して、本発明方法の実施に用いる加
圧整粒器（加圧整粒装置）の構成例について説明する。
先ず、４，５は互いに対応する開口面が対接して封止体
を構成する第１の耐圧性ハウジング部材および第２の耐
圧性ハウジング部材である。３は前記第１の耐圧性ハウ
ジング部材４および第２の耐圧性ハウジング部材５が構
成する封止体の封止部近傍に内装され、内部空間を第１
の耐圧性ハウジング領域4aおよび第２の耐圧性ハウジン
グ領域5aに分離し区画するフィルターユニット、６は前
記フィルターユニット３で分離し区画された第１の耐圧
性ハウジング領域4aに連通する被処理体の加圧供給口、
７は前記フィルターユニット３で分離し区画された第２
の耐圧性ハウジング領域5aに連通する被処理体の排出口
である。ここで、フィルターユニット３は、メンブレン
フィルター3d側を第１の耐圧性ハウジング領域7a側とし
て装着，配置され、また被処理体の加圧供給口６は、た
とえば懸濁脂質粒子液などの被処理体の貯蔵タンク側に
接続され、排出口７は微細化・整粒済み貯蔵タンク側に
接続される。

【００２９】また、８は前記第１の耐圧性ハウジング部
材４の外周面に一体的に配置され、供給される被処理体
の温度を制御する温度制御手段であり、たとえば熱媒
体，冷媒体を切り替えて流し得る媒体流路が一体的に配
置、形設されている。ここで、媒体流路（温度制御手
段）８は、媒体供給口8aから供給され、第１の耐圧性ハ
ウジング部材４の外周面側から第１の耐圧性ハウジング
領域4a内の温度調節に関与する一方、媒体出口8bから排
出する構成を成している。なお、図４および図５におい
て、９は被処理体を加圧供給する加圧供給口６に連接す
る接続管、10は加圧供給口６の壁部および接続管９壁部
に沿って形設された空気抜き路、11は第１の耐圧性ハウ
ジング部材４の開口面および第２の耐圧性ハウジング部
材５の開口面が対接して構成する封止面に配置されてい
るパッキン、12は接続管９などの接続部に配置されたパ
ッキン、13は第１の耐圧性ハウジング部材４および第２
の耐圧性ハウジング部材５を一体化する締め付けボルト
である。

【００３０】上記構成の加圧整粒器を用いて、リポソー
ム懸濁液の脂質粒子を微細化・整粒化を行った。なお、
このリポソーム懸濁液は、以下の条件で調製したもので
ある。 先ず、 L−α−ジミリストイルホスファチジル
グリセロール（DMPG）／卵黄ホスファッチジルコリン／
コレステロールをモル比、 5.7： 1.0： 6.0の割合で、
ガラス製容器に秤取し、少量のクロロホルムにて溶液化
した後、窒素ガス気流下で有機溶媒を除去した。次い
で、減圧下、デシケータ内にて 1時間乾燥させて溶媒を
完全に除去してから、 9％ショ糖水溶液を加え、総脂質
濃度が34mMの水性リポソーム粗分散液を得た。この、水
性リポソーム粗分散液における脂質の平均粒径は 517nm
であり、この水性リポソーム粗分散液を 100mlづつに小
分けして原料素材とした。

【００３１】これらの水性リポソーム粗分散液を加圧供
給口６から、約 8 kgf／cm² 以上である10 kgf／cm² ，
12 kgf／cm² ，15 kgf／cm² もしくは15 kgf／cm² 圧力
で、前記加圧整粒器内に注入して、内装，支持されてい
るフィルターユニット３のメンブレンフィルターの貫通
微細孔を通過させ、微細化し整粒した。その後、前記多
孔支持板3bの貫通孔および支持板3aの貫通孔を介して、
微細化し整粒したリポソーム懸濁液を取り排出口７から
回収した。その結果を表−１に示す。なお、この微細化
し整粒において、いずれの場合もフィルター上に残渣は
ほとんど残らなかった。また、表−１において、Ａは平
均孔径0.22μm のポリビニリデンフロライドを材質とし
て平均孔径0.22μm のセルロース混合エステル膜から成
るメンブレインフィルターを、Ｂは成るメンブレインフ
ィルターを、脂質の回収率は高速液体クロマトグラフィ
ー法（カラム： ODS［ 5μ］、 4mm×25cm、カラム温
度：40℃、移動相：メタノール／水＝99/1、試料溶液：
コレステロールとして約 6mg／mlのリポソーム、分散液
1mlに移動相液を加えて25mlとした液、試料注入料 2.0
μl 、測定波長： 207nm）でコレステロールの定量を行
って求めた。

【００３２】 表−１ メンブレン 濾過圧力 脂質の回収 平均粒子径 フィルター (kgf／cm² ） 率（％） （nm） 実施例1a Ａ 12 96.8 216 実施例1b Ａ 10 97.3 1906 実施例1c Ｂ 20 97.9 222 実施例1d Ｂ 15 97.6 236 比較例1a Ａ 7 濾過ほとんど不可能 比較例1b Ｂ 7 濾過全く不可能 比較例1c Ｅ 7 96.9 183 なお、上記において、原料懸濁液を成す水性リポソーム
粗分散液の水性溶媒を5％グルコース水溶液（薬物保持
率21.4％）にした他は、前記と同様の条件で処理したと
きの結果を、比較例1a，1bとして表−１に合わせて示し
た。この処理後における実施例1eの薬物保持率は14.0
％，実施例1fの薬物保持率は12.4％であった。ここで、
薬物保持率（％）は、ゲル濾過法（カラム：Sephadex G
50、15mm×45cm、カラム温度：室温、移動相：生理食塩
液、試料注入料： 1ml）にてリポソーム粗分散液を分取
後、水相と有機相に分別し、水相中のグルコース濃度を
フェノール硫酸法で定量して求めた。

【００３３】比較例１ 前記実施例１の場合において、水性リポソーム粗分散液
を加圧供給口６から、8 kgf／cm² 以下である 6 kgf／c
m² の加圧で供給した場合、あるいは次のようにして調
製したリポソーム粗分散液および微細孔の網目構造を有
するメンブレンフィルターとして、平均孔径0.45μm の
セルロース混合エステル膜（Ｃ）、平均孔径0.22μm の
ポリビニリデンジフロライド膜（Ａ）、平均孔径0.20μ
m のテフロン膜（Ｄ）、平均孔径0.20μm のポリカーボ
ネート（Ｅ）を用いた他は同様に行った結果を表−１、
表−２にそれぞれ示した。ここで表−２における脂質の
回収率（％）は、ホスホリピッド B−テストワコー（和
光純薬工業製）による酵素反応法でコリンを定量して求
めた。

【００３４】リポソーム粗分散液の調製は、先ず、 L−
α−ジパルミトイルホスファチジルコリン（DPPC） 175
mgを 250mlのガラス製容器に秤取し、少量のクロロホル
ムにて溶液化した後、窒素ガス気流下で有機溶媒を除去
した。次いで、減圧下、デシケータ内にて 1時間乾燥さ
せて溶媒を完全に除去してから、リン酸緩衝化生理食塩
液(PBS：pH 7.4，50℃） 100mlを加え脂質を水和，膨潤
させ、次いで温度を50℃に保ったままTKホモミキサー
（特殊機化工業製，タイプM)による撹拌，乳化を10分間
行って、リポソーム粗分散液を得た。このリポソーム粗
分散液の一部を採り、前記リン酸緩衝化生理食塩液にて
さらに 2.5倍，10倍に希釈して濃度1.47mg／ml，0.588m
g ／ml， 0.147mg／mlの３種のリポソーム粗分散液を用
意した。

【００３５】 表−２ メンブレン リポソーム粗分散液の濃度と回収率（％） フィルター 1.47mg／ml 0.588mg ／ml 0.147mg／ml 比較例1d Ｃ 0.9 66.8 58.7 比較例1e Ａ 1.1 54.6 66.1 比較例1f Ｄ 53.8 65.9 38.7 比較例1g Ｅ 95.5 98.4 95.6 実施例２ 実施例１で用いた加圧整粒器の構成において、フィルタ
ーユニット３を構成する一主面側が径大に開口し、他主
面側が径小に開口する貫通孔を有するステンレス綱製の
多孔支持体3bの代わりに、第６図 (a)に平面的に、第６
図 (b)に断面的に、また第６図 (c)に拡大断面的にそれ
ぞれ示す構成の耐圧性支持板3d′を用いても同様の作用
・効果が得られた。すなわち、直径90mm，厚さ 5〜20mm
のポリカーボネート樹脂板3d₁ の一主面に、外周側の深
さを 0.1〜 5mm程度、内周側の深さ 1〜15mm程度に傾斜
付きで半径方向に第１の液流通溝3d₂ を延設し、さらに
同心円的に、かつ第１の液流通溝3d₂ に交叉させて第２
の液流通溝3d₃ を形設して成る耐圧性の支持板3d′を用
い、この耐圧性の支持板3d′の液流通溝3d₂ ，3d₃形成
面に、メッシュスクリーンでメンブレンフィルターＡ，
Ｂ，Ｃなどを両面側から挟持した形（積層体）で支持し
た構成のフィルターユニットを使用しても、前記実施例
の場合と同様の結果が得られた。

【００３６】実施例３ 精製大豆油200gおよび卵黄ホスファッチジルコリン 12g
を、 2l の温水循環用ジャケット付きガラス容器に秤取
し、80℃にて加熱分散させた後、予め80℃に加温した注
射用蒸留水 100mlを加えて転相乳化を行った。次に、同
じく予め80℃に加温した注射用蒸留水 600ml、および濃
グリセリン 22.5gを加え、温度を80℃に保ったまま、TK
アジホモミキサー（特殊機化工業製、タイプHV-M、回転
数6500rpm)による撹拌，乳化を10分間行って粗乳化液を
得た。この粗乳化液を室温に冷却した後、水酸化ナトリ
ウム水溶液を加え、pHを 7.4に調製してから注射用蒸留
水を加えて、全量で1000mlとした。

【００３７】上記調製した粗乳化液を 200mlづつに小分
して、前記実施例１の場合で使用した加圧整粒器を用
い、加圧・通過処理を10回繰り返して懸濁脂質粒子の製
造を行った。すなわち、前記小分した粗乳化液をを加圧
供給口６から、 8 kgf／cm² ，7 kgf／cm² （比較例）
の圧力で、前記加圧整粒器内に注入して、内装，支持さ
れているフィルターユニット３のメンブレンフィルター
の微細孔の網目構造を通過させ、微細化し整粒した。そ
の後、前記多孔支持板9bの貫通孔および支持板3aの貫通
孔を介して、微細化し整粒したリポソーム懸濁液を取り
排出口11から回収した。その結果を表−３に示す。な
お、この微細化し整粒において、いずれの場合もフィル
ター上に残渣はほとんど残らなかった。

【００３８】 表−３ メンブレン 濾過圧力 脂質の回収 平均粒子径 フィルター (kgf／cm² ） 率（％） （nm） 実施例3a Ａ 8 100.3 285 実施例3b Ｂ 8 98.9 243 比較例3a Ａ 7 目詰りで濾過不可能 比較例3b Ｂ 7 目詰りで濾過不可能 また、上記実施例２で例示した加圧整粒器を用い、上記
に準じて懸濁脂質粒子の微細化・整粒処理を行った場合
も、同様の結果が得られた。

【００３９】本発明は上記実施例に限定されるものでな
く、発明の趣旨の範囲でいろいろの変形を取り得る。た
とえば、脂質粒子懸濁液も、前記リポソーム液やエマル
ジョンの代わりに、他の脂質粒子懸濁液を原料とした場
合も、同様の作用・効果が得られる。

【００４０】

【発明の効果】以上の説明から明らかなように、本発明
に係る懸濁脂質粒子の製造方法によれば、容易な手段
で、かつ量産的でありながら、所要のの或る一定の平均
粒子径および粒子分布を呈する懸濁脂質粒子の製造が可
能となる。つまり、制ガン剤，抗エイズ薬などの薬理学
的適用、食品工業的な適用もしくは化粧品工業的な適用
などにおいて期待されている一定の平均粒子径および粒
子分布をなす懸濁脂質粒子の製造が可能となる。さらに
本発明においては、濾過減菌も可能であり、加えて温度
制御装置付きの製造装置を用いた場合、製造工程などで
の温度を適宜設定し得るし、また、メンブレンフィルタ
ーを支持する多孔支持板の洗浄も容易であるため、汚染
の防止や回避などを行い易いという実用上多くの利点を
もたらすので、医薬用の懸濁脂質粒子の製造に最適な方
法といえる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明において使用するフィルターユニットの
概略構成例の要部を示す断面図。

【図２】本発明において使用するフィルターユニットの
構成例を示す展開図。

【図３】本発明において使用するフィルターユニットの
構成例を示す断面図

【図４】本発明において使用する加圧整粒器の要部構成
例を示す一部切り欠き断面図。

【図５】本発明において使用する加圧整粒器の要部構成
例を示す上面図。

【図６】本発明において使用する加圧整粒器が具備する
フィルターユニットの構成に用いる耐圧性支持板の他の
構造例を示すもので、 (a)は平面図、 (b)は断面図、
(c)は一部拡大断面図。 １…多孔支持板 1a…段付き貫通孔 ２…網目構造
の微細孔を有するメンブレインフィルター ３…フィ
ルターユニット ４…第１の耐圧性ハウジング 4a
…第１の耐圧性ハウジング領域 ５…第２の耐圧性ハ
ウジング 5a…第２の耐圧性ハウジング領域 ６…
加圧供給口 ７…排出口 ８…温度制御手段 8a
…媒体供給口 8b…媒体出口 ９…接続部 10…
空気抜き11，12，16…パッキン 13…締め付けボルト

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 菊池 寛 東京都江戸川区北葛西１丁目16番13号 第 一製薬株式会社開発研究所新剤形研究セン ター内 (72)発明者 山内 仁史 東京都江戸川区北葛西１丁目16番13号 第 一製薬株式会社開発研究所新剤形研究セン ター内 (72)発明者 鈴木 則男 東京都江戸川区北葛西１丁目16番13号 第 一製薬株式会社開発研究所新剤形研究セン ター内 (72)発明者 広瀬 多郁三 神奈川県厚木市岡田二丁目９番８号 野村 マイクロ・サイエンス株式会社営業推進部 内

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 平行もしくは一主面側が径大に開口した
   すり鉢状に厚さ方向へ開口する貫通孔を有する多孔支持
   板と、前記多孔支持板の一主面側に配置された微細な網
   目構造の流路を設けられたメンブレンフィルターとを具
   備して成るフィルターユニットを配置し、前記メンブレ
   ンフィルター側から脂質粒子含有の懸濁液を約 8 kgf／
   cm² 以上の加圧下で、メンブレンフィルターの微細な網
   目構造の流路および多孔支持板の貫通孔を通過させるこ
   とにより、前記懸濁液中に含有されている脂質粒子を微
   細化・均一化することを特徴とする懸濁脂質粒子の製造
   方法。
2. 【請求項２】 互いに対応する開口面が対接して封止体
   を構成する第１の耐圧性ハウジング部材および第２の耐
   圧性ハウジング部材と、前記第１の耐圧性ハウジング部
   材および第２の耐圧性ハウジング部材が構成する封止体
   の封止部近傍に内装され、内部空間を第１の耐圧性ハウ
   ジング領域および第２の耐圧性ハウジング領域に分離し
   区画するフィルターユニットと、前記フィルターユニッ
   トで分離し区画された第１の耐圧性ハウジング領域に連
   通する被処理体の加圧供給口と、前記フィルターユニッ
   トで分離し区画された第２の耐圧性ハウジング領域に連
   通する被処理体の排出口と、前記第１の耐圧性ハウジン
   グ部材の外周面に一体的に配置され、供給される被処理
   体の温度を制御する温度制御手段とを具備した構成で、
   前記フィルターユニットは、平行もしくは一主面側が径
   大に開口したすり鉢状に厚さ方向へ開口する貫通孔を有
   する多孔支持板を支持した構成の複数個の貫通孔を有す
   る耐圧性の支持板、および前記多孔支持体の一主面側に
   配置された厚さ方向に微細な網目構造の流路を設けられ
   たメンブレンフィルターを備え、かつメンブレンフィル
   ターを第１の耐圧性ハウジング領域側として装着，配置
   されて成る加圧型整粒器を用い、 前記第１の耐圧性ハウジング領域に連通する加圧供給口
   から脂質粒子懸濁液を約8kgf／cm² 以上で加圧供給する
   とともに、脂質粒子懸濁液を温度制御手段で温度制御し
   ながら、前記フィルターユニットを強制通過させて、前
   記第２の耐圧性ハウジング領域に連通する排出口から排
   出させることを特徴とする懸濁脂質粒子の製造方法。
3. 【請求項３】 多孔支持板の貫通孔の一主面側開口径／
   他主面側開口径の比が、 1：0.01〜 1であることを特徴
   とする特許請求の範囲第１項もしくは第２項記載の懸濁
   脂質粒子の製造方法。
4. 【請求項４】 一主面に半径方向に傾斜付きで延設され
   た液流通溝、およびに前記延設された液流通溝に交叉す
   る形で同心円的に液流通溝が形設された耐圧性の支持板
   と、前記多孔支持板の流通溝形成面に配置された微細な
   網目構造の流路を設けられたメンブレンフィルターとを
   具備して成るフィルターユニットを配置し、前記メンブ
   レンフィルター側から脂質粒子含有の懸濁液を約 8 kgf
   ／cm²以上の加圧下で、メンブレンフィルターを微細な
   網目構造の流路および耐圧性支持板の流通溝を流通（前
   記フィルターユニットを強制通過）させることにより、
   前記懸濁液中に含有されている脂質粒子を微細化・均一
   化することを特徴とする懸濁脂質粒子の製造方法。
5. 【請求項５】 互いに対応する開口面が対接して封止体
   を構成する第１の耐圧性ハウジング部材および第２の耐
   圧性ハウジング部材と、前記第１の耐圧性ハウジング部
   材および第２の耐圧性ハウジング部材が構成する封止体
   の封止部近傍に内装され、内部空間を第１の耐圧性ハウ
   ジング領域および第２の耐圧性ハウジング領域に分離し
   区画するフィルターユニットと、前記フィルターユニッ
   トで分離し区画された第１の耐圧性ハウジング領域に連
   通する被処理体の加圧供給口と、前記フィルターユニッ
   トで分離し区画された第２の耐圧性ハウジング領域に連
   通する被処理体の排出口と、前記第１の耐圧性ハウジン
   グ部材の外周面に一体的に配置され、供給される被処理
   体の温度を制御する温度制御手段とを具備した構成で、
   前記フィルターユニットは、一主面に半径方向に傾斜付
   きで延設された液流通溝、および前記延設された液流通
   溝に交叉する形で同心円的に液流通溝が形設された耐圧
   性の支持板と、前記多孔支持体の流通溝形成面に配置さ
   れた厚さ方向に微細な網目構造の流路を設けられたメン
   ブレンフィルターとを備え、かつメンブレンフィルター
   を第１の耐圧性ハウジング領域側として装着・配置され
   て成る加圧型整粒器を用い、前記第１の耐圧性ハウジン
   グ領域に連通する加圧供給口から脂質粒子懸濁液を約8k
   gf／cm² 以上で加圧供給するとともに、脂質粒子懸濁液
   を温度制御手段で温度制御しながら、前記フィルターユ
   ニットを強制通過させて、前記第２の耐圧性ハウジング
   領域に連通する排出口から排出させることを特徴とする
   懸濁脂質粒子の製造方法。
6. 【請求項６】 メンブレンフィルターが、セルロースエ
   ステル，ポリビニリデンジフロライド，グラスファイバ
   ー，アクリル酸共重合体，ポリテトラフロロエチレン，
   ポリアミド（ナイロン）もしくはＨＴ−タフリンから成
   ることを特徴とする特許請求の範囲第１項，第２項，第
   ３項，第４項もしくは第５項記載の懸濁脂質粒子の製造
   方法。
7. 【請求項７】 メンブレンフィルターの平均孔径が 1.0
   μm 以下であることを特徴とする特許請求の範囲第１
   項，第２項，第３項，第４項，第５項もしくは第６項記
   載の懸濁脂質粒子の製造方法。
8. 【請求項８】 メンブレンフィルターがセルロースエス
   テルもしくはポリビニリデンジフロライドから成り、か
   つその平均孔径が 1.0μm 以下であることを特徴とする
   特許請求の範囲第１項，第２項，第３項，第４項，第５
   項，第６項，もしくは第７項記載の懸濁脂質粒子の製造
   方法。