JPH07112906A - 新規ペプチド性抗菌物質ｆｓ２およびその製造法 - Google Patents
新規ペプチド性抗菌物質ｆｓ２およびその製造法Info
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- JPH07112906A JPH07112906A JP5258461A JP25846193A JPH07112906A JP H07112906 A JPH07112906 A JP H07112906A JP 5258461 A JP5258461 A JP 5258461A JP 25846193 A JP25846193 A JP 25846193A JP H07112906 A JPH07112906 A JP H07112906A
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- peptide
- antibacterial
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 新規なペプチド性抗菌物質ＦＳ２及びその製
造方法。 【効果】 本発明のペプチド性抗菌物質ＦＳ２は、バチ
ルス属、クロストリジウム属、ラクトバチルス属細菌に
対して強い生育抑制力を有し、熱に対して安定であるの
で、食品の保存性を高めるために利用することができ
る。
造方法。 【効果】 本発明のペプチド性抗菌物質ＦＳ２は、バチ
ルス属、クロストリジウム属、ラクトバチルス属細菌に
対して強い生育抑制力を有し、熱に対して安定であるの
で、食品の保存性を高めるために利用することができ
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ペプチド性抗菌物質、
特に病原菌や腐敗菌などの食品有害菌に対して抑制力を
有する新規ペプチド性抗菌物質に関するものである。
特に病原菌や腐敗菌などの食品有害菌に対して抑制力を
有する新規ペプチド性抗菌物質に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来、乳酸菌は病原菌や腐敗菌に対する
抗菌作用を有し、それら乳酸菌がペプチド性抗菌物質を
産生することが知られている。例えばストレプトコッカ
ス・ラクティスはナイシンを産生し、この物質は既にヨ
ーロッパ等約２０カ国で食品添加物として使用されてい
る〔日本食品工業会誌、14巻31頁 (1967年) 〕。また、
ストレプトコッカス・クレモリスはティブロコッキンを
産生することが知られており〔Appl. Environ. Microbi
ol., vol.41, page 84 (1981) 〕、さらには、ラクトバ
チルス・アシドフィラス、ラクトバチルス・ブルガリカ
ス、ストレプトコッカス・デアセチラクティス等もペプ
チド性抗菌物質を産生することが報告されている。
抗菌作用を有し、それら乳酸菌がペプチド性抗菌物質を
産生することが知られている。例えばストレプトコッカ
ス・ラクティスはナイシンを産生し、この物質は既にヨ
ーロッパ等約２０カ国で食品添加物として使用されてい
る〔日本食品工業会誌、14巻31頁 (1967年) 〕。また、
ストレプトコッカス・クレモリスはティブロコッキンを
産生することが知られており〔Appl. Environ. Microbi
ol., vol.41, page 84 (1981) 〕、さらには、ラクトバ
チルス・アシドフィラス、ラクトバチルス・ブルガリカ
ス、ストレプトコッカス・デアセチラクティス等もペプ
チド性抗菌物質を産生することが報告されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記の
既に知られているペプチド性抗菌物質は、その抗菌作用
が有効な菌種が限られており、必ずしも食品製造時に問
題となる有害菌全てに効果があるとは言えず、その効果
も決して強くはない。本発明は以上のような問題点を解
決するためのもので、広範囲の微生物に対して強い抗菌
作用を有し、かつ人体に対する安全性の高い抗菌物質を
提供することを目的としている。
既に知られているペプチド性抗菌物質は、その抗菌作用
が有効な菌種が限られており、必ずしも食品製造時に問
題となる有害菌全てに効果があるとは言えず、その効果
も決して強くはない。本発明は以上のような問題点を解
決するためのもので、広範囲の微生物に対して強い抗菌
作用を有し、かつ人体に対する安全性の高い抗菌物質を
提供することを目的としている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明において用いる微
生物は、ペプチド性抗菌物質ＦＳ２生産能を有するエン
テロコッカス(Enterococcus)属に属する菌株である。そ
の一例として挙げられるエンテロコッカス・フェカリス
(Enterococcus faecalis) ＮＲＩＣ１１４３株は、本発
明のペプチド性抗菌物質ＦＳ２を有利に生産する特性を
有し、本発明方法に有効に利用し得るものである。前記
エンテロコッカス・フェカリスＮＲＩＣ１１４３株（以
下「ＮＲＩＣ１１４３株」ということがある）は、茨城
県つくば市東１丁目１番３号の工業技術院生命工学工業
技術研究所に、平成５年９月２８日付で受託番号：ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１３８７６として寄託されている。
生物は、ペプチド性抗菌物質ＦＳ２生産能を有するエン
テロコッカス(Enterococcus)属に属する菌株である。そ
の一例として挙げられるエンテロコッカス・フェカリス
(Enterococcus faecalis) ＮＲＩＣ１１４３株は、本発
明のペプチド性抗菌物質ＦＳ２を有利に生産する特性を
有し、本発明方法に有効に利用し得るものである。前記
エンテロコッカス・フェカリスＮＲＩＣ１１４３株（以
下「ＮＲＩＣ１１４３株」ということがある）は、茨城
県つくば市東１丁目１番３号の工業技術院生命工学工業
技術研究所に、平成５年９月２８日付で受託番号：ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１３８７６として寄託されている。
【０００５】本発明における使用微生物としてのＮＲＩ
Ｃ１１４３株は、その一例であり、その自然的および人
工的変異株は勿論、エンテロコッカス属に属する菌株
で、後述のペプチド性抗菌物質ＦＳ２の生産能を有する
微生物は、すべて本発明において使用することができ
る。
Ｃ１１４３株は、その一例であり、その自然的および人
工的変異株は勿論、エンテロコッカス属に属する菌株
で、後述のペプチド性抗菌物質ＦＳ２の生産能を有する
微生物は、すべて本発明において使用することができ
る。
【０００６】本発明においてＮＲＩＣ１１４３株の培養
は、乳酸菌の培養に一般に用いられている条件によって
行うことができる。すなわち、培地としては、炭素源、
窒素源、無機物、ビタミン、アミノ酸等を含む通常用い
られる培地が使用され得るが、脱脂乳、ホエー等を含有
する培地が望ましい。培養条件としては、好気条件下お
よび嫌気条件下のいずれでもよいが、好気条件下での静
置培養が好ましい。培地の初発pHは６〜８、特に７付近
が望ましく、培養温度は２０〜４５℃、特に３５℃付近
が好ましい。培養時間は、液体培養の場合通常２〜５日
であるが、培養液中の抗菌物質の蓄積量は約３日で最大
に達するので、この時点で培養を終了するのが好まし
い。
は、乳酸菌の培養に一般に用いられている条件によって
行うことができる。すなわち、培地としては、炭素源、
窒素源、無機物、ビタミン、アミノ酸等を含む通常用い
られる培地が使用され得るが、脱脂乳、ホエー等を含有
する培地が望ましい。培養条件としては、好気条件下お
よび嫌気条件下のいずれでもよいが、好気条件下での静
置培養が好ましい。培地の初発pHは６〜８、特に７付近
が望ましく、培養温度は２０〜４５℃、特に３５℃付近
が好ましい。培養時間は、液体培養の場合通常２〜５日
であるが、培養液中の抗菌物質の蓄積量は約３日で最大
に達するので、この時点で培養を終了するのが好まし
い。
【０００７】上記の培養によって得られる培養生産物
は、菌体を分離し、あるいは分離することなく、そのま
ま本発明の抗菌物質として利用できるが、精製により抗
菌物質を分離し、これを抗菌物質として利用することも
できる。上記の培養液より抗菌物質を取得するには、蛋
白質を分離するために通常用いられる方法を適宜利用で
きる。すなわち、まず培養液から遠心分離等により菌体
を除いて培養上澄液を得、この上澄液から、各種有機溶
媒による抽出法、各種活性吸着剤によるクロマトグラフ
ィーなどを適宜組み合せて、ペプチド性抗生物質ＦＳ２
を採取することができる。なお、本発明のペプチド性抗
菌物質ＦＳ２の製造法、物性および抗菌活性の詳細は、
後記実施例および試験例で詳述する。
は、菌体を分離し、あるいは分離することなく、そのま
ま本発明の抗菌物質として利用できるが、精製により抗
菌物質を分離し、これを抗菌物質として利用することも
できる。上記の培養液より抗菌物質を取得するには、蛋
白質を分離するために通常用いられる方法を適宜利用で
きる。すなわち、まず培養液から遠心分離等により菌体
を除いて培養上澄液を得、この上澄液から、各種有機溶
媒による抽出法、各種活性吸着剤によるクロマトグラフ
ィーなどを適宜組み合せて、ペプチド性抗生物質ＦＳ２
を採取することができる。なお、本発明のペプチド性抗
菌物質ＦＳ２の製造法、物性および抗菌活性の詳細は、
後記実施例および試験例で詳述する。
【０００８】本発明のペプチド性抗菌物質ＦＳ２は、バ
チルス属細菌、クロストリジウム属細菌、ラクトバチル
ス属細菌に対して強い抑制力を有し、これを食品に使用
することにより保存性に優れた食品を得ることができ
る。具体的な使用方法としては、ＮＲＩＣ１１４３株を
用いて発酵を行うと、本発明の抗菌物質を含む発酵乳製
品が得られ、この発酵乳製品は上記微生物で代表される
有害菌の汚染を受けにくく、保存性に優れている。また
本発明の抗菌物質は熱に対しても安定であるため、培養
液から採取した後に他の食品に添加して保存性を高める
ことも可能である。
チルス属細菌、クロストリジウム属細菌、ラクトバチル
ス属細菌に対して強い抑制力を有し、これを食品に使用
することにより保存性に優れた食品を得ることができ
る。具体的な使用方法としては、ＮＲＩＣ１１４３株を
用いて発酵を行うと、本発明の抗菌物質を含む発酵乳製
品が得られ、この発酵乳製品は上記微生物で代表される
有害菌の汚染を受けにくく、保存性に優れている。また
本発明の抗菌物質は熱に対しても安定であるため、培養
液から採取した後に他の食品に添加して保存性を高める
ことも可能である。
【０００９】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
するが、これらの実施例は本発明の範囲を何ら制限する
ものではない。
するが、これらの実施例は本発明の範囲を何ら制限する
ものではない。
【００１０】 実施例１ 抗菌物質の製造およびその物理化学的性質 １）微生物の培養 エンテロコッカス・フェカリスＮＲＩＣ１１４３株（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１３８７６）を、半合成培地〔カシトン
〔カゼインのパンクレアチン分解物；ディフコ（Difco)
社製〕１．０％、酵母エキス０．５％、グルコース２．
０％、５００００ppm ツィーン(Tween）８０溶液１．０
％、Ｂ溶液（硫酸マグネシウム七水和物４０mg/ml 、硫
酸マンガン四水和物２mg/ml 、硫酸鉄（II）七水和物２
mg/ml 、塩化ナトリウム２mg/ml ）０．５％、キサンタ
ン１０mg/l、グアニン１０mg/l、アデニン硫酸塩１０mg
/l、ウラシル１０mg/l、Ｌ−アスパラギン１００mg/l、
Ｌ−グルタミン１００mg/l、リボフラビン１mg/l、ナイ
アシン１mg/l、チアミン塩酸塩０．１mg/lを５０mMのリ
ン酸カリウム緩衝液に加えpH７．０に調整し、オートク
レーブ中１１５℃で１０分間滅菌したもの〕に植菌し、
３７℃で１２時間培養した。
ＥＲＭ Ｐ−１３８７６）を、半合成培地〔カシトン
〔カゼインのパンクレアチン分解物；ディフコ（Difco)
社製〕１．０％、酵母エキス０．５％、グルコース２．
０％、５００００ppm ツィーン(Tween）８０溶液１．０
％、Ｂ溶液（硫酸マグネシウム七水和物４０mg/ml 、硫
酸マンガン四水和物２mg/ml 、硫酸鉄（II）七水和物２
mg/ml 、塩化ナトリウム２mg/ml ）０．５％、キサンタ
ン１０mg/l、グアニン１０mg/l、アデニン硫酸塩１０mg
/l、ウラシル１０mg/l、Ｌ−アスパラギン１００mg/l、
Ｌ−グルタミン１００mg/l、リボフラビン１mg/l、ナイ
アシン１mg/l、チアミン塩酸塩０．１mg/lを５０mMのリ
ン酸カリウム緩衝液に加えpH７．０に調整し、オートク
レーブ中１１５℃で１０分間滅菌したもの〕に植菌し、
３７℃で１２時間培養した。
【００１１】２）抗菌物質の精製 得られた培養液を１００００×g で２０分間遠心分離
し、上清を得た。得られた培養液上清に硫酸アンモニウ
ムを加え、２０％飽和の硫酸アンモニウムを含む溶液に
調整し、この溶液をブチル−トヨパール(Butyl-Toyopea
l)６５０Ｍを充填したカラム（カラム内径２．１cm、長
さ３０cm）に流速２ml/minで通液して吸着させ、２０％
〜０％飽和の硫酸アンモニウム水溶液グラジエントによ
り溶出させ（フラクションボリューム５ml）、フラクシ
ョンナンバー７８〜８０の所で活性画分を得た（図
１）。得られた活性画分を、２０％シュークロースを含
むリン酸緩衝液を外液として透析し、これをセファデッ
クスＧ−７５スーパーファイン(Sephadex G-75 Superfi
ne；ファルマシア社製）を充填したカラム〔カラム内径
２．６cm、長さ８５cm、ボイド ボリューム（Ｖｏ）１
６５ml〕を用いて、流速１０ml/hr 、フラクションボリ
ューム５mlでゲル濾過を行った。精製活性画分は、Ｖｅ
をエリューション・ボリューム(elution volume)とし
て、Ｖｅ／Ｖｏ：２．０の所で得られた（図２）。
し、上清を得た。得られた培養液上清に硫酸アンモニウ
ムを加え、２０％飽和の硫酸アンモニウムを含む溶液に
調整し、この溶液をブチル−トヨパール(Butyl-Toyopea
l)６５０Ｍを充填したカラム（カラム内径２．１cm、長
さ３０cm）に流速２ml/minで通液して吸着させ、２０％
〜０％飽和の硫酸アンモニウム水溶液グラジエントによ
り溶出させ（フラクションボリューム５ml）、フラクシ
ョンナンバー７８〜８０の所で活性画分を得た（図
１）。得られた活性画分を、２０％シュークロースを含
むリン酸緩衝液を外液として透析し、これをセファデッ
クスＧ−７５スーパーファイン(Sephadex G-75 Superfi
ne；ファルマシア社製）を充填したカラム〔カラム内径
２．６cm、長さ８５cm、ボイド ボリューム（Ｖｏ）１
６５ml〕を用いて、流速１０ml/hr 、フラクションボリ
ューム５mlでゲル濾過を行った。精製活性画分は、Ｖｅ
をエリューション・ボリューム(elution volume)とし
て、Ｖｅ／Ｖｏ：２．０の所で得られた（図２）。
【００１２】３）抗菌活性の測定 各精製段階における抗菌活性は次のとおりに測定した。
滅菌したガラスのペトリ皿に５mmの厚さにまいたＧＹＰ
寒天培地〔グルコース１％、酵母エキス１％、ペプトン
１％、ツィーン（Tween)８０ ０．５％、酢酸ナトリウ
ム０．５％、前記Ｂ溶液０．５％および寒天１．５％を
含む水溶液を塩酸でpH８．０に調整し、オートクレーブ
中１１５℃で１０分間滅菌したもの〕に、コルクボーラ
ーで穴をあけ、寒天をスパーテルでくり抜いた。作成し
た穴に溶解したＧＹＰ寒天培地を塗布することで底をシ
ールしてウェル(well)を作成した。ここに実施例１の
１）で得た培養液上清、２）で得た活性画分および精製
活性画分をそれぞれ塗布して２時間寒天中に拡散させ
た。拡散後、スパーテルを用いて寒天培地をペトリ皿の
蓋に落し、今まで底面であった無菌的な面に、指標菌と
して対数増殖中期のラクトコッカス・ラクティス(Lacto
coccus lactis)ＡＴＣＣ１１００７株を接種したＧＹＰ
ソフトアガーを重層して培養し、抗菌物質の指標菌ラク
トコッカス・ラクティスＡＴＣＣ１１００７株に対する
生育阻害活性を観察した。完全に生育が阻害された最終
希釈倍率を活性画分/ml とするクリティカル・ダイリュ
ーション(Critical dilution) を用いて、各精製段階に
おける抗菌活性を活性単位（Activity unit)/ml (AU/m
l) として表示した。各精製段階における抗菌活性を下
記第１表に示す。
滅菌したガラスのペトリ皿に５mmの厚さにまいたＧＹＰ
寒天培地〔グルコース１％、酵母エキス１％、ペプトン
１％、ツィーン（Tween)８０ ０．５％、酢酸ナトリウ
ム０．５％、前記Ｂ溶液０．５％および寒天１．５％を
含む水溶液を塩酸でpH８．０に調整し、オートクレーブ
中１１５℃で１０分間滅菌したもの〕に、コルクボーラ
ーで穴をあけ、寒天をスパーテルでくり抜いた。作成し
た穴に溶解したＧＹＰ寒天培地を塗布することで底をシ
ールしてウェル(well)を作成した。ここに実施例１の
１）で得た培養液上清、２）で得た活性画分および精製
活性画分をそれぞれ塗布して２時間寒天中に拡散させ
た。拡散後、スパーテルを用いて寒天培地をペトリ皿の
蓋に落し、今まで底面であった無菌的な面に、指標菌と
して対数増殖中期のラクトコッカス・ラクティス(Lacto
coccus lactis)ＡＴＣＣ１１００７株を接種したＧＹＰ
ソフトアガーを重層して培養し、抗菌物質の指標菌ラク
トコッカス・ラクティスＡＴＣＣ１１００７株に対する
生育阻害活性を観察した。完全に生育が阻害された最終
希釈倍率を活性画分/ml とするクリティカル・ダイリュ
ーション(Critical dilution) を用いて、各精製段階に
おける抗菌活性を活性単位（Activity unit)/ml (AU/m
l) として表示した。各精製段階における抗菌活性を下
記第１表に示す。
【００１３】
【表１】
【００１４】上記で得られたゲル濾過溶出による活性画
分の純度を確認するために、常法に従いＳＤＳ−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動（ゲル濃度１５％）を行っ
た。精製物質を泳動したゲルを銀染色法により染色した
ところ、単一バンドとして検出された。
分の純度を確認するために、常法に従いＳＤＳ−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動（ゲル濃度１５％）を行っ
た。精製物質を泳動したゲルを銀染色法により染色した
ところ、単一バンドとして検出された。
【００１５】上記方法で得られる本発明の抗菌物質をＦ
Ｓ２と命名した。上記で得られた培養上清又はゲル濾過
溶出画分（以下これを「精製抗菌物質」ということがあ
る）を用いて以下の試験を行った。
Ｓ２と命名した。上記で得られた培養上清又はゲル濾過
溶出画分（以下これを「精製抗菌物質」ということがあ
る）を用いて以下の試験を行った。
【００１６】４）抗菌物質ＦＳ２の物理化学的性質 ４−１）分子量 （ｉ）ゲル濾過法による測定 前記セファデックスＧ−７５スーパーファインゲル濾過
における活性画分の溶出位置から推定した分子量は、８
２００であった。 （ii）ＦＡＢ−ＭＳによる測定 常法に従い、前記で得られた精製抗菌物質ＦＳ２のＦＡ
Ｂ−ＭＳスペクトルを、日本電子（株）製ＪＥＯＬ Ｈ
Ｘ／ＨＸ１１０Ａで測定した。測定されたマススペクト
ラム（マトリックスとしてｍ−ニトロベンジルアルコー
ルを使用）を、図３（低分解能での測定）および図４
（高分解能での測定）に示す。低分解能での測定結果か
ら抗菌物質ＦＳ２の平均分子量は３３３１であり、高分
解能での測定結果から抗菌物質ＦＳ２のＭＨ+ は３３２
９．７であることが明らかとなった。ゲル濾過およびＦ
ＡＢ−ＭＳによる分子量の測定結果から、抗菌物質ＦＳ
２は、同じサブユニット２つあるいは３つから成るもの
と考えられる。
における活性画分の溶出位置から推定した分子量は、８
２００であった。 （ii）ＦＡＢ−ＭＳによる測定 常法に従い、前記で得られた精製抗菌物質ＦＳ２のＦＡ
Ｂ−ＭＳスペクトルを、日本電子（株）製ＪＥＯＬ Ｈ
Ｘ／ＨＸ１１０Ａで測定した。測定されたマススペクト
ラム（マトリックスとしてｍ−ニトロベンジルアルコー
ルを使用）を、図３（低分解能での測定）および図４
（高分解能での測定）に示す。低分解能での測定結果か
ら抗菌物質ＦＳ２の平均分子量は３３３１であり、高分
解能での測定結果から抗菌物質ＦＳ２のＭＨ+ は３３２
９．７であることが明らかとなった。ゲル濾過およびＦ
ＡＢ−ＭＳによる分子量の測定結果から、抗菌物質ＦＳ
２は、同じサブユニット２つあるいは３つから成るもの
と考えられる。
【００１７】４−２）アミノ酸分析 前記で得られた精製抗菌物質ＦＳ２を、６N 塩酸（４％
チオグリコール酸添加）で１１０℃、２２時間加水分解
処理した後、アミノ酸アナライザー（日立８３５型）
で、加水分解物のアミノ酸組成を分析した。この結果お
よびＦＡＢ−ＭＳスペクトルによる分子量測定の結果よ
り、抗菌物質ＦＳ２のアミノ酸含有数を決定した。その
結果を下記第２表に示す。
チオグリコール酸添加）で１１０℃、２２時間加水分解
処理した後、アミノ酸アナライザー（日立８３５型）
で、加水分解物のアミノ酸組成を分析した。この結果お
よびＦＡＢ−ＭＳスペクトルによる分子量測定の結果よ
り、抗菌物質ＦＳ２のアミノ酸含有数を決定した。その
結果を下記第２表に示す。
【００１８】
【表２】
【００１９】４−３）紫外線吸収スペクトル 前記で得られた精製抗菌物質ＦＳ２の紫外線吸収スペク
トルを測定した。その結果を図５に示す。図５から明ら
かなとおり、波長２８０nmにおける吸収は存在しなかっ
た。
トルを測定した。その結果を図５に示す。図５から明ら
かなとおり、波長２８０nmにおける吸収は存在しなかっ
た。
【００２０】４−４）等電点 前記で得られた抗菌物質ＦＳ２の等電点を、ポリアクリ
ルアミド等電点分離法〔生化学実験講座１、タンパク質
の化学Ｉ、p 290 〜 312頁（東京化学同人社刊）〕によ
り測定した。その結果、抗菌物質ＦＳ２の等電点はアル
カリ側にあった。
ルアミド等電点分離法〔生化学実験講座１、タンパク質
の化学Ｉ、p 290 〜 312頁（東京化学同人社刊）〕によ
り測定した。その結果、抗菌物質ＦＳ２の等電点はアル
カリ側にあった。
【００２１】４−５）熱安定性 滅菌したガラスのペトリ皿に５mmの厚さにまいた前記Ｇ
ＹＰ寒天培地に、コルクボーラーで穴をあけ、寒天をス
パーテルでくり抜いた。作成した穴に溶解したＧＹＰ寒
天培地を塗布することで底をシールしてウェルを作成し
た。次に、前記で得られた培養上清を第３表に記載のpH
に調整後、通常の方法により第３表に記載の温度で第３
表に記載の時間処理した。
ＹＰ寒天培地に、コルクボーラーで穴をあけ、寒天をス
パーテルでくり抜いた。作成した穴に溶解したＧＹＰ寒
天培地を塗布することで底をシールしてウェルを作成し
た。次に、前記で得られた培養上清を第３表に記載のpH
に調整後、通常の方法により第３表に記載の温度で第３
表に記載の時間処理した。
【００２２】
【表３】
【００２３】この熱処理液を、上記で作成したウェルに
それぞれ塗布して２時間寒天中に拡散させた。拡散後、
前記３）と同様の方法により抗菌活性を測定した。この
結果を上記第３表に示す。第３表から明らかなとおり、
抗菌物質ＦＳ２は、酸性条件下、１２０℃、１５分間の
熱処理においても安定であり、失活は認められなかっ
た。
それぞれ塗布して２時間寒天中に拡散させた。拡散後、
前記３）と同様の方法により抗菌活性を測定した。この
結果を上記第３表に示す。第３表から明らかなとおり、
抗菌物質ＦＳ２は、酸性条件下、１２０℃、１５分間の
熱処理においても安定であり、失活は認められなかっ
た。
【００２４】４−６）蛋白質加水分解酵素に対する感受
性 前記で得られた培養上清に、各種の蛋白質加水分解酵素
〔α−キモトリプシン（α−Chymotrypsin Type VII ；
シグマ社製）、ディスパーゼ(Dispase；ベーリンガー・
マンハイム山之内（株）製）、プロナーゼ(Pronase；ベ
ーリンガー・マンハイム山之内（株）製）〕を最終濃度
５０units/mlとなるように添加して十分攪拌した。これ
を３７℃で２４時間保温した後、氷冷して前記方法によ
り抗菌活性を測定したが、抗菌活性は認められなかっ
た。以上の結果および前記４−２）アミノ酸分析の結果
から、本発明の抗菌物質ＦＳ２はペプチド性であること
が明らかとなった。
性 前記で得られた培養上清に、各種の蛋白質加水分解酵素
〔α−キモトリプシン（α−Chymotrypsin Type VII ；
シグマ社製）、ディスパーゼ(Dispase；ベーリンガー・
マンハイム山之内（株）製）、プロナーゼ(Pronase；ベ
ーリンガー・マンハイム山之内（株）製）〕を最終濃度
５０units/mlとなるように添加して十分攪拌した。これ
を３７℃で２４時間保温した後、氷冷して前記方法によ
り抗菌活性を測定したが、抗菌活性は認められなかっ
た。以上の結果および前記４−２）アミノ酸分析の結果
から、本発明の抗菌物質ＦＳ２はペプチド性であること
が明らかとなった。
【００２５】実施例２ 抗菌スペクトルの測定 ５mlのＧＹＰ液体培地〔グルコース１％、酵母エキス１
％、ペプトン１％、ツィーン(Tween) ８０ ０．５％、
酢酸ナトリウム０．５％、前記Ｂ溶液０．５％を含む水
溶液を塩酸でpH６．８に調整し、オートクレーブ中１１
５℃で１０分間滅菌したもの〕に、２４時間前培養した
第４表に示す検定菌５０μl と１％精製抗菌物質ＦＳ２
５０μl を加えて、３７℃で２４時間培養した。その
結果を第４表に示す。
％、ペプトン１％、ツィーン(Tween) ８０ ０．５％、
酢酸ナトリウム０．５％、前記Ｂ溶液０．５％を含む水
溶液を塩酸でpH６．８に調整し、オートクレーブ中１１
５℃で１０分間滅菌したもの〕に、２４時間前培養した
第４表に示す検定菌５０μl と１％精製抗菌物質ＦＳ２
５０μl を加えて、３７℃で２４時間培養した。その
結果を第４表に示す。
【００２６】
【表４】
【００２７】表中、抗菌活性は、検定菌のみを加えて培
養した培地の濁度を対照として、検定菌の生育の有無を
目視判定し、次の５段階：＋＋＋（検定菌の生育が全く
認められない）、＋＋、＋、±、−（検定菌の生育が抗
菌物質を加えなかった培地と同じ）で表示した。
養した培地の濁度を対照として、検定菌の生育の有無を
目視判定し、次の５段階：＋＋＋（検定菌の生育が全く
認められない）、＋＋、＋、±、−（検定菌の生育が抗
菌物質を加えなかった培地と同じ）で表示した。
【図１】本発明の抗菌物質ＦＳ２のブチル−トヨパール
６５０Ｍクロマトグラフィーによる溶出プロフィル。
６５０Ｍクロマトグラフィーによる溶出プロフィル。
【図２】本発明の抗菌物質ＦＳ２のセファデックスＧ７
５スーパーファインゲル濾過による溶出プロフィル。
５スーパーファインゲル濾過による溶出プロフィル。
【図３】本発明の抗菌物質ＦＳ２の低分解能ＦＡＢ−Ｍ
Ｓスペクトラム。
Ｓスペクトラム。
【図４】本発明の抗菌物質ＦＳ２の高分解能ＦＡＢ−Ｍ
Ｓスペクトラム。
Ｓスペクトラム。
【図５】本発明の抗菌物質ＦＳ２の紫外線吸収スペクト
ラム。
ラム。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 久留主 泰朗 茨城県稲敷郡阿見町中央８丁目３番１号 三菱油化株式会社筑波総合研究所内 (72)発明者 湯川 英明 茨城県稲敷郡阿見町中央８丁目３番１号 三菱油化株式会社筑波総合研究所内
Claims (3)
- 【請求項１】 下記の理化学的性質を有することを特徴
とするペプチド性抗菌物質ＦＳ２。 （１）分子量 ａ．ゲル濾過法による測定値 ８２００ ｂ．ＦＡＢ−ＭＳによる測定値 平均分子量 ３３３１ （２）アミノ酸組成（残基数／分子） アスパラギン酸又はアスパラギン ３ ランチオニン ６ グリシン ４ アラニン ２ バリン １ メチオニン ２ イソロイシン ３ ロイシン ２ リジン ３ ヒスチジン １ プロリン １ （３）紫外線吸収スペクトル λ ２８０nm 吸収なし （４）等電点 アルカリ側 （５）熱安定性 酸性条件下、１２０℃、１５分間の加熱処理で失活せ
ず。 （６）蛋白質加水分解酵素に対する感受性 感受性（蛋白分解酵素処理により失活） - 【請求項２】 エンテロコッカス属に属するペプチド性
抗生物質ＦＳ２生産菌を培養し、その培養物からペプチ
ド性抗生物質ＦＳ２を分離、採取することを特徴とす
る、請求項１に記載のペプチド性抗菌物質ＦＳ２の製造
法。 - 【請求項３】 ペプチド性抗菌物質ＦＳ２生産菌がエン
テロコッカス・フェカリス(Enterococcus faecalis) Ｎ
ＲＩＣ１１４３株（ＦＥＲＭ Ｐ−１３８７６）であ
る、請求項２に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5258461A JPH07112906A (ja) | 1993-10-15 | 1993-10-15 | 新規ペプチド性抗菌物質ｆｓ２およびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5258461A JPH07112906A (ja) | 1993-10-15 | 1993-10-15 | 新規ペプチド性抗菌物質ｆｓ２およびその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07112906A true JPH07112906A (ja) | 1995-05-02 |
Family
ID=17320553
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5258461A Pending JPH07112906A (ja) | 1993-10-15 | 1993-10-15 | 新規ペプチド性抗菌物質ｆｓ２およびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07112906A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007000023A (ja) * | 2005-06-21 | 2007-01-11 | Asama Chemical Co Ltd | 保存性に優れた炭水化物系加熱加工食品 |
-
1993
- 1993-10-15 JP JP5258461A patent/JPH07112906A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007000023A (ja) * | 2005-06-21 | 2007-01-11 | Asama Chemical Co Ltd | 保存性に優れた炭水化物系加熱加工食品 |
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