JPH07121880B2

JPH07121880B2 - 免疫結合体による感染症の検出と治療

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Publication number: JPH07121880B2
Application number: JP2512984A
Authority: JP
Inventors: ゴールデンバーグ，エム．デビツド
Original assignee: IMYUNOMEDEITSUKUSU Inc
Current assignee: IMYUNOMEDEITSUKUSU Inc
Priority date: 1989-08-24
Filing date: 1990-08-22
Publication date: 1995-12-25
Anticipated expiration: 2010-12-25
Also published as: KR0179953B1; IE903071A1; ATE151994T1; EP0417927A1; ES2100164T3; SG46451A1; ZA906703B; AU636172B2; AU6408290A; DE69030545T2; KR920700686A; IL95457A0; JPH04506217A; WO1991002541A1; EP0417927B1; DE69030545D1; CA1339415C; IL95457A

Description

【発明の詳細な説明】発明の背景本発明は、病原体または病原体関連抗原の１つ以上の接
近可能なエピトープに特異的に結合する抗体結合体（co
njugate）を標的に向ける（target）ベヒクルとして使
用することにより、診断薬及び／または治療薬を病原体
感染の病巣に向ける試薬及び方法に関する。

従来、病原体に対する薬物療法では、病原体が体内のど
こに潜伏していても、病原体に対して毒性な薬物血中濃
度を得るために薬剤を全身投与する。すなわち、感染部
位で適当な薬剤濃度を得るためには一定の血中濃度が必
要である。このため、大量投与が必要となり、また、こ
のような薬剤の多くは一般に細胞毒性作用を持つため患
者に許容されない副作用を与えることなく所望の毒性効
果を得ることはできないことが多い。

感染性生物に対するマウスモノクローナル抗体（MAbs）
の開発や説明についての総説が数多く出されている（例
えば、M.C.Harrisら,Indian J.Pediatr.,54:481−488,1
987;S.Cohen,Brit.Med.Bull.,40:291−296,1984;R.A.Po
lin,Eur J.Clin.Microbiol.,3:387−398,1984;R.C.Nowi
nskiら,Science,219:637−644,1983;Part V,Monoclonal
antibodies to Microorganisms,17−20章、R.H.Kennet
tら（編）,Monoclonal Antibodies.Hybridomas:A New D
imension in Biological Aalyses,New York and Londo
n,Plenum Press,1980,pp.295−362）。これらの文献や
この分野の他の文献は、細菌、ウィルス、原生動物（原
虫）及び蠕虫を含む感染性微生物の診断テストを改善す
るための、このようなモノクローナル抗体試薬の使用に
関するものである。

これらのMAbsをある種の細菌疾患例えばＢ群ストレプト
コッカス感染症（Harris、上記）では診断と治療の両方
に、ウイルス性疾患（Harris、上記）では診断のみに使
用できることが提起されている。Ｂ群ストレプトコッカ
ス感染症の場合には、MAbsは感染症を治療するためにゲ
ッシ動物で使用されており、この限定された実験では、
感染後すぐに注入した場合のみMAbsが効果的であり、６
時間後以降では動物の生存は認められないことが示され
た（Christensenら,Pediatric Res.,18:1093−1096,198
4）。マラリア寄生体の場合には、マラリアスポロゾイ
トの表面コートに対するモノクローナル抗体のFab断片
はマラリア感染からマウスを保護しうることが示されて
おり、宿主受容体細胞へのスポロゾイトの係合をこの断
片が阻止することを示している（P.Potocnjakら,J.Exp.
Med.,151:1503−1513,1980）。また、Fc部分を欠いた免
疫グロブリン分子によるものであることから、抗体の保
護活性は補体または細胞に無関係であることを示してい
る。

これらの動物実験は、ある種の細菌及び寄生体を使用す
る管理の優れた実験では生物特異性のあるMAbsを使用す
ることにより初期感染に対処できることを示している。
何年も前にこれらの報告がなされているが、MAbsがヒト
の感染症に治療的役割を有していることはまだ示されて
いない。１つの主な原因は、このようなMAbsが通常は感
染の初期の段階にのみ特異的に保護作用を示し、注入さ
れたMAbsとの相互作用を受けにくい組織貯蔵器官内に感
染性微生物が広がっているときにはMAbsは感染微生物と
相互作用しにくいことである。このようなMAbsを使用し
て治療用結合体を形成することは参考文献には示唆され
ていない。

従って、より効率的にまたは高い治療指数で診断薬例え
ば造影剤または治療薬例えば薬剤もしくは放射性同位元
素を感染病巣に向かわせ、感染をより効果的に診断及び
／または治療できる方法が必要とされている。

発明の目的本発明の目的は、感染病巣に標的を合わせる（target）
効果的で選択的な方法を提供することである。

本発明の別の目的は、感染病巣に高い特異性を持つ診断
用及び治療用薬剤を提供することである。

本発明の別の目的は、化学療法が効果を示さず比較的反
応しない、衰弱させたり生命を脅かす疾患を引き起こす
微生物及び寄生体感染症の治療のための化学療法の代替
薬または補助薬を提供することである。

本発明の別の目的は、化学療法剤及び／または放射性医
薬品の治療指数を改良することである。

本発明の他の目的は以下の説明から当業者に明かになろ
う。

発明の概要本発明のこれら及び他の目的は、診断薬または治療薬を
感染病巣に向ける方法を提供することにより達成され
る。この方法は病原体に感染した患者に、前記感染部位
に付着した前記病原体または病原体関連抗原の接近可能
なエピトープと特異的に結合する抗体結合体を非経口的
に注入することからなり、この抗体結合体は感染を検出
し、造影しまたは治療する結合した診断薬または治療薬
をさらに含んでいる。

本発明はさらに感染病巣を標的にするための多特異性ま
たは単一特異性抗体結合体も提供し、この抗体結合体は
少なくとも１つの診断薬または治療薬と結合した少なく
とも１つの実質的に単一特異性抗体または抗体断片を含
む免疫反応性成分からなり、ここで抗体または抗体断片
は病原体または病原体関連抗原の接近可能なエピトープ
と特異的に結合する。これらは滅菌した注入可能（inje
ctable）製剤及び前記方法を実施するために使用するキ
ットの形で提供されうる。

発明の詳細な説明抗微生物薬はこれまで次の４つの主なグループ、（１）
細菌細胞壁の合成に作用するもの、（２）細胞質膜に作
用するもの、（３）蛋白質合成に作用するもの、及び
（４）核酸合成に作用するものに分類されており、多く
の場合これらのグループはさらにいくつかに細分され
る。抗微生物化学療法の総説はM.P.E.Slackによる章（O
xford Textbook of Medicine,第２版，第１巻,D.J.Weat
herall,J.G.G.Lidingham及びD.A.Warrell編,pp.5.35−
5.53;Oxford University Press,Oxford/Melbourne/New
York,1987）及びChemotherapy of Microbial Diseases
のXII節（Goodman and Gilman′s The Pharmacological
Basis of therapeutics,第６版,Goodmanら編,pp.1080
−1248;Macmillan Publishing Co.,New York,1980）に
見られる。

これらの文献に示されているように、抗微生物薬の中に
は、宿主に許容される濃度で微生物を殺すまたはその発
育を阻止するために毒性が選択的なものもある（すなわ
ち、薬剤が宿主細胞のものとは異なる微生物の構造また
は生合成経路に作用する）。微生物の発育を一時的に阻
止できるだけで、阻止剤を除去すると微生物が発育を開
始し得る薬剤もある。多くの場合、微生物または寄生体
を殺すまたは阻止する能力は体内及び体液内の薬剤濃度
の関数である。

これらの原理や入手可能な抗微生物薬が多くの感染症等
に細菌感染の治療に成功をおさめているが、他の感染症
例えばウィルス感染及びある種の真菌、原生動物及び寄
生体感染は薬剤の全身投与に耐性であるかまたは比較的
反応性が低かった。

本明細書中では、「微生物」とはウィルス、細菌、リケ
ッチア、マイコプラズマ、原生動物及び真菌を意味し、
「病原体」とは微生物と感染性多細胞無脊椎動物例えば
蠕虫（腸内寄生虫）、スピロヘータ等との両方を意味す
る。

ウィルスは宿主細胞に感染し、循環している全身投与薬
剤から「隠れる」ことができる。ウィルス増殖が活性で
ウィルスが宿主細胞から放出されるときでさえ、全身投
与薬剤は患者に許容される濃度では十分に強力なもので
はないことがある。

同様に、数多くの真菌、原生動物及び寄生体感染症は薬
剤の全身投与療法に耐性であった。その原因の少なくと
も一部には、薬剤の抗病原体有効用量が患者に許容され
る量より高かったこと、または薬物投与の従来の全身投
与経路では感染に接近が困難であったことが挙げられ
る。

本発明は、微生物または寄生体の抗原に非常に特異的な
抗体を作成し、これを使用して効果的な放射性核種及び
／または化学薬剤を感染の病巣に向け、病原体を選択的
に死滅させることにより、従来の薬物療法に耐性である
感染症の治療に関する問題の多くを解決する。標的部位
では体の他の部位より薬剤濃度が高くなるため、標的に
向けた薬剤の有効性を高めることができる。標的に向け
る抗体は、感染部位に付着している病原体または病原体
が出すもしくはその分断及び／または破壊により形成さ
れた抗原の接近可能なエピトープと結合できる。エピト
ープは病原体または抗原の表面または病原体の接近可能
な部位にありうる。従って、結合体の治療用成分はより
高い効率及び標的部位対非標的部位比で標的部位に局在
する。

標的に向けることは診断薬特に感染部位のシンチグラフ
造影または磁気共鳴造影の薬剤にも有用である。これは
担当医師が患者の感染の程度や段階を評価し、治療プロ
トコールを立案、モニターする際の手助けとなる。

結合体の抗体成分は病原体または病原体抗原の１つのエ
ピトープと反応する１つの単一特異性抗体であってもよ
い。このような場合には、この抗体は患者自身の抗体が
結合するエピトープとは異なる別個のエピトープと結合
するのが好ましい。このことにより、病原体またはその
抗原が生体の抗体で飽和したために遮断され、従って標
的に向けることが阻害されるという問題を避けることが
できる。

また、抗体成分は多特異性であってもよく、すなわち病
原体またはその抗原の複数のエピトープに結合する複数
の抗体を含んでいてよい。多特異的な抗体成分はポリク
ローナル抗血清、好ましくは免疫原性を持つ形の病原体
またはその抗原で免疫し、刺激して、病原体またはその
抗原に対して特異的な複数の抗体を産生させた動物から
アフィニティー精製したポリクローナル抗血清であって
よい。もう１つの方法は「工学処理したポリクローナ
ル」混合物の使用であり、これは規定範囲のエピトープ
特異性を有するモノクローナル抗体の混合物である。

どちらの型のポリクローナル混合物でも、多特異性抗体
を化学的に結合させていくつかのエピトープのいずれに
も結合できる１つの多特異性抗体を形成すると好都合で
ありうる。このような多特異的な標的分子を診断薬また
は治療薬と結合すると、薬剤が感染部位に到達する可能
性が高まり、従って、ベヒクルの標的対非標的比及び有
効性が高くなる可能性がある。このような結合を得る１
つの方法は、例えば、２つの異なる抗体をペプシンで消
化し、還元により切断してFab′断片混合物を形成し、
次にジスルフィド結合を酸化により再形成して元の各抗
原に特異的なFab′部分を含有するハブリッド断片を含
むＦ（ab′）_２断片混合物を作成することにより得られ
た２つの異なるＦ（ab′）_２断片を混合することによ
り、二価のＦ（ab′）_２ハイブリッド断片を作成するこ
とである。このような抗体断片を調製する方法は、Fete
anuの「Labeled Antibodies in Biology and Medicin
e」,pp.321−323（McGraw−Hill Int.Bk.Co.,New York
（1978）;Nisonoffら,Arch.Biochem.Biophys.,93,470
（1961）；及びHammerlingら,J.Exp.Med.,128,1461（19
68）；並びに米国特許第4,331,647号に開示されてい
る。

完全にヘテロ特異的な二価断片を作成する他の方法、例
えば二官能性リンカーを使用して切断断片を連結するこ
とが当業界で知られている。例えば、Bossらの米国特許
第4,816,397号の方法に従って得られる、抗体のＬ鎖と
Ｈ鎖を含有する組換え分子が知られている。抗体の特性
を持つ組換えまたは合成結合分子を作成する同様な方法
も本発明に含まれる。当業界で公知の種々リンカーを使
用して、２つ以上の単一特異性抗体または抗体断片を結
合することができる。

本発明の多特異性結合体の作成に使用する実質的に単一
特異的な、好ましくはモノクローナルな抗体の免疫学的
プロフィールは病原体またはその抗原に対して最適な結
合が得られるように調整でき、個々の感染や標的エピト
ープに対する結合定数によって種々の抗原及びそのエピ
トープに対する抗体特異性を混合し、本発明の試薬の選
択性及び標的効率を微調整して実施する。

本発明の造影用試薬は二特異性、三特異性またはより一
般的には多特異性抗体／断片結合体を含んでよく、さら
に造影用ラジオアイソトープまたは常磁性物質を含有し
てよい。

結合体の抗体成分は完全な抗体、抗体断片または抗体の
サブ断片を含んでよい。本明細書中の「抗体」という用
語は完全な抗体、抗体断片及び抗体サブ断片を含むもの
と理解され、従って、特記しない限り、説明中で互換的
に使用される「抗体／断片」という用語と均等である。
抗体は、全ての種類の完全な免疫グロブリン（IgG）例
えばIgG、IgM、IgA、IgD、IgE、２つまたは複数の抗原
またはエピトープ特異性を持つキメラ抗体またはハイブ
リッド抗体、またはハイブリッド断片を含む断片例えば
Ｆ（ab′）_２、Fab′、Fab等であってよく、さらに任意
の免疫グロブリンまたは特異的抗原に結合して複合体を
形成することにより抗体様の作用をする任意の天然、合
成または遺伝子工学で得た蛋白質も含んでいる。

抗体は一般に使用される種々の動物例えば羊、霊長類、
ろば、ブタ、ウサギ、ウマ、ニワトリ、モルモット、ラ
ットまたはマウスから得た抗血清製剤及びさらに適切に
選択し、精製したヒト抗血清も包含しうる。動物の抗血
清は、慣用法で動物に免疫原性の形の病原体またはその
抗原を接種し、動物を飼育し、血清または免疫グロブリ
ン含有血清画分を回収することにより作成する。

抗血清は好ましくは、慣用手法、例えばセファデックス
のクロマトカラム充填剤に抗原を結合させ、抗血清をカ
ラムに通し、特異性抗体を保持しながら他の免疫グロブ
リンや汚染物質を分離して除き、次にカオトロピック剤
で溶出して精製した抗体を回収し、続いて任意に例えば
結合した血液型抗原または他の非病原性物質のカラムを
通してさらに精製して、アフィニティー精製する。この
手法は、該当の病原体に対する抗体価をすでに有してお
り、露出したエピトープに結合しうる抗体を確実に保持
している患者の血清から所望の抗体を単離するときに好
ましい。

ハイブリドーマ由来のモノクローナル抗体（ヒト、サ
ル、ラット、マウス等）も本発明への使用に適してお
り、特異性が高い利点がある。これらの抗体は、哺乳類
を免疫原性抗原製剤で免疫感作し、免疫リンパまたは脾
臓細胞を永久ミエローマセルラインと融合し、特異的な
ハイブリドーマクローンを単離する現在一般に慣用法と
考えられている方法で容易に製造できる。本発明への有
用性に影響するものは主として抗体の抗原特異性である
ため、独創的なモノクローナル抗体調製法、例えば種間
融合及び超可変領域の遺伝子操作も使用できる。ヒトリ
ンパ球をヒトミエローマセルラインに融合させて、特別
の特異性、好ましくは病原体の主要な抗原部位に対する
循環抗体でマスクされていないエピトープに対する特異
性を持つ抗体を産生できる。

本発明は多特異性抗体結合体を作成するための抗原特異
的断片の使用も包含している。慣用法により完全な免疫
グロブリンをペプシンまたはパパインで消化して抗体断
片を作成できる。抗体をペプシンで酵素的に切断してＦ
（ab′）_２と呼ばれる5S断片を得ることにより抗体断片
を作成できることは公知である。この断片はチオール還
元剤と任意にジスフルィド結合の切断で得られるスルフ
ィドリル基のブロック基とを使用してさらに切断し、3.
5SFab′一価断片を作成することができる。また、パパ
インによる酵素的切断により２つの一価Fab断片と１つ
のFc断片が直接得られる。これらの方法は、特に、Gold
enbergの米国特許第4,036,945号及び4,331,647号並びに
その参考文献に記載されており、前記特許明細書全体は
参照により本明細書に含むものとする。また、Nisonoff
ら,Arch.Biochem.Biophys.,89,230（1960）;Porter,Bio
chem.J.,73,119（1959）；及びEdelmanら，「Methods i
n Immunology and Immunochemistry」,vol.1,422（Aca
d.Press,1967）が慣用技術である。

断片が、その親の抗体が病原体または抗原に対して有し
ている特異性を保持できる限りは、抗体を切断する他の
方法、例えばＨ鎖と分離して一価のＬ−Ｈ鎖断片を形成
すること、断片をさらに切断すること、または他の酵
素、化学または遺伝子学的手法も使用できる。

ウィルスまたはウィルス抗原に対する抗体は、未精製ま
たは精製の、生きている。弱毒化したまたは殺したウィ
ルス、またはウィルスが出す抗原例えばコート蛋白質、
その部分またはウィルスを破壊して得られる断片を宿主
に接種して作ることができる。モノクローナル抗体は、
マウスその他の哺乳類をウィルスまたはウィルス抗原で
免疫感作し、免疫感作した宿主の脾臓細胞を取り出し、
体細胞ハイブリッド形成手法を使用して脾臓細胞と好適
なミエローマセルラインとを融合し、抗ウィルス抗体を
産生するハイブリドーマを作ることにより作成できる。
これらのハイブリドーマを単離し、サブクローニング
し、培養して、モノクローナル抗体を作成することがで
きる。ハイブリドーマ由来のウィルス抗原に対するモノ
クローナル抗体は一般にマウスまたはラット起源であ
り、一般にはIgGまたはIgMであるが、本発明結合体の作
成に使用するのに適した抗体を種またはIgのクラスにつ
いて限定するつもりはない。

一般に、当業界で現在よく知られている多くの慣用法を
使用して、ほとんどの抗原に対する抗体を作成できる。
従って、前記手法を当業界で慣用されている方法に適用
して、他の微生物及び寄生体の抗原に対し生物自身上ま
たはその断片上の抗原、または分泌されたまたは付着し
た抗原で特異的に結合する抗体を作成できる。哺乳類の
体内の感染病巣で十分な濃度で見いだされる病原体また
はその抗原に結合する、すべての抗体を使用して本発明
に使用するための標的結合体を作成することができる。

感染症原因物質に対する広範なモノクローナル抗体が開
発され、Eur.J.Clin.Microbiol.,3（５）:387−398,198
4のPolinの総説に概説されており、容易に入手できるこ
とが示されている。しかし、これまでは、このような抗
体をin vitroの診断アッセイに取り込むことに主として
興味が持たれていたい。２−３の結合していない抗体を
動物モデルで治療剤として試用しているが、ほんのわず
かな成功しか認められていない。

このような抗体を放射性同位元素及び／または薬剤また
はトキシンと結合して感染の標的を定めた検出、造影及
び治療を達成することの価値はこれまで理解されておら
ず、このような薬剤の有効性はこのようなこれまでの開
示からは予測できなかった。

Polin（上記）の述べた病原体及びその抗原に対するモ
ノクローナル抗体（MAbs）には次のものがある：抗細菌MAbs: Streptococcus agalactiae（ストレプトコッカス・アガ
ラクティエ菌） Legionella pneumophilia（レジュネラ・ニューモフィ
ラ菌） Streptococcus pyogenes（化膿連鎖球菌） Eschericia coli（大腸菌） Neisseria gonorrhosae（淋菌） Neisseria meningitidis（髄膜炎菌） Pneumococcus（肺炎球菌） Hemophilis influenzae B（Ｂ型インフルエンザ菌） Treponema pallidum（梅毒トレポネーマ） Lyme disease spirochetes（ライム病スピロヘータ） Pseudomonas aeruginosa（緑濃菌） Mycobacterium leprae（らい菌） Brucella abortus（ウシ流産菌） Mycobacterium tuberculosis（ヒト結核菌） Tetanus toxin（破傷風菌）抗ウィルスMAbs 狂犬病ウィルスインフルエンザウィルスサイトメガロウィルス単純ヘルペスウィルスＩ及びII ヒト血清パルボ様ウィルス呼吸器シンシチウムウィルス（SRウィルス）水痘帯状疱疹ヘルペスウィルスＢ型肝炎ウィルスはしか（麻疹）ウィルスアデノウィルスヒトＴ細胞白血病ウィルスエプステイン−バールウィルスマウス白血病ウィルス＊おたふくかぜウィルス水疱性口内炎ウィルスシンドビスウィルスリンパ性脈絡髄膜炎ウィルスいぼウィルスブルータングウィルスセンダイウィルスネコ白血病ウィルス＊レオウィルスポリオウィルスシミアンウィルス40＊マウス乳癌ウィルス＊デング熱ウィルス風疹ウィルス＊動物ウィルス抗原生動物MAbs Plasmodium falciparum（熱帯熱マラリア原虫） Plasmodium vivax（三日熱マラリア原虫） Toxoplasma gondii（トキソプラズマ） Trypanosoma rangeli Trypanosoma cruzi Trypanosoma rhodesiensei Trypanosoma brucei Schistosoma mansoni（マンソン住血吸虫） Schistosoma japanicum（日本往血吸虫） Babesia bovis Elmeria tenella Onchocerca volvulus（回旋糸状虫） Leishmania tropica（熱帯リーシュマニア） Trichinella spiralis（旋毛虫） Theileria parva Taenia hydantigena（胞状条虫） Taenia ovis Taenia saginata（無鉤条虫） Echinococcus granulosus（単包条虫） Mesocestoides corti 抗マスコプラズマMAbs Mycoplasma arathritidis M.hyorhinis M.orale M.arginini Acholeplasma laidlawii M.salivarium M.pneumoniae（肺炎マスコプラズマ）文献に記載されている感染性微生物に対して産生された
MAbsの他の例を下記に示す。

マラリア寄生体のスポロゾイト、メロゾイト、シゾント
及びガメトサイト段階に対するMAbsが可能である。スポ
ロゾイト（サーカムスポロゾイト（circumsporozoite）
抗原）に対するモノクローナル抗体が生成されており、
in vitro及びゲッシ動物でスポロゾイトを中和すること
が示されている（N.Yosidaら,Science 207:71−73,198
0）。

いくつかのグループがトキソプラズマ症に関与する原生
動物寄生体であるT.gondiiに対するMAbs開発している
（Kasperら,J.Immunol.129:1694−1699;Id.,130:2407−
2412,1983）。

シストソミュラー（schistosomular）表面抗原に対する
MAbsが開発され、これはシストスミュラーに対し、in v
ivoまたはin vitroで作用することが発見されている（S
impsonら,Parasitology,83:163−177,1981;Smithら,Par
asitology,84:83−91,1982;Gryzchら,J.Immunol.,129:2
739−2743,1982;Zoddaら,J.Immunol.,129:2326−2328,1
982;Dissousら,J.Immunol.,129:2232−2234,1982）。

Trypanosoma cruziはチェガス病（Chaga′s diseas）の
原因物質であり、吸血サシガメ昆虫が媒介する。in vit
roで寄生体の１つの形から別な形（上鞭毛型から錘鞭毛
型段階）への分化を特異的に阻止し、細胞表面の糖蛋白
質と反応するMAbsが生成されている。しかし、この抗原
は哺乳類型（血流）の寄生体には存在しない（Sherら,N
ature,300:639−640,1982）。ヒトの大部分の感染症に
関与するほとんどの微生物（細菌、ウィルス、原生動
物、蠕虫）に対して好適なMAbsが開発されており、多く
はこれまでにin vitroでの診断の目的に使用されてい
る。これらの抗体及び、MAbsを組み合わせて使用するこ
とにより標的を定める力をさらに改良するために慣用法
で生成されうる新規のMAbsは、好適な放射性核種及び薬
剤と結合すると造影及び治療薬としてin vivoでの使用
に適している。

一般に、免疫反応性が比較的高く、すなわち結合定数が
少なくとも約10⁵/モル、好ましくは少なくとも約10⁷/モ
ルであり、病原体抗体に対する免疫特異性が高い、すな
わち少なくとも約40％、好ましくは少なくとも約60％、
より好ましくは少なくとも約70−95％である抗体を使用
することが望ましい。

しかし、本発明では用途によって、例えば造影用には、
幾分結合定数の低い抗体の使用が好ましいことがある。
結合定数の高い抗体は感染部位の病原体及びその抗原だ
けでなく循環系に存在するこのような病原体及び／また
は抗原ともしっかり結合する可能性がある。一方、結合
定数のより低い抗体は一種の集合作用効果により濃度の
高い病原体／抗体部位に主として付着する傾向がある。
これにより造影標識の早期排出や非標的への付着が減少
し、感染病巣に向かう有効量が増加する。

造影用抗体結合体は、単純なグルタアルデヒド結合から
より洗練された官能基間の特異的な結合までの種々の常
法で作成できる。抗体及び／または抗体断片は好ましく
は直接または１つの短いまたは長いリンカー部分を介し
て、抗体／断片の１つ以上の官能基例えばアミン、カル
ボキシル、フェニル、チオールまたはヒドロキシル基を
介して互いに共有結合している。グルタアルデヒド以外
の種々の慣用のリンカー例えばジイソシアネート、ジイ
ソチオシアネート、ビス（ヒドロキシサクシンイミド）
エステル、カルボジイミド、マレイミド−ヒドロキシサ
クシンイミドエステル等が使用できる。

簡単な方法はグルタアルデヒドの存在下で抗体／断片を
混合して抗体複合物を形成することである。最初のシッ
フ塩基結合を、例えばホウ水素化物還元により第２アミ
ンとして安定化させることができる。この方法は従来、
蛋白質の他の結合体例えば免疫組織化学的用途または免
疫アッセイに使用するペルオキシダーゼ−抗体結合体の
製造に使用されている。非部位特異性リンカーとしては
グルタルアルデヒドの代わりにジイソチオシアネートま
たはカルボジイミドを使用することができる。

二特異的抗体は種々の慣用法、例えばジスルフィド切断
及び完全なIgGまたは好ましくはＦ（ab′）_２断片混合
物の再形成、１つ以上の特異性を有する免疫グロブリン
を産生するポリオーマを形成するための１つ以上のクロ
ーンの融合、及び遺伝子操作により作成できる。二特異
的抗体は１つ以上のウィルスエピトープと結合できる。
二特異的（「ハイブリッド」）抗体断片は、異なる抗体
の還元的切断により得られたFab′断片を酸化により結
合して作成されている。これらの一部は元の抗体が反応
しうる抗原の両方に対して特異的な断片を含んでいよ
う。

より選択的な結合はマレイミド−ヒドロキシサクシンイ
ミドエステルのようなヘテロ二官能性リンカーを使用し
て得られる。このリンカーと抗体／断片との反応により
抗体／断片上のアミン基を誘導体化し、次にこの誘導体
を例えば遊離スルフィドリル基を有する抗体のFab断片
（または例えばTraut試薬で添加したスルフィドリル基
を持つより大きな断片または完全な免疫グロブリン）と
反応させることができる。このようなリンカーは同じ抗
体の基を架橋結合させることは少なく、結合の選択性を
改善する。

抗原結合部位から離れた部位で抗体／断片を結合すると
有利であり、例えば、上記のように切断した鎖間スルフ
ィドリル基への結合により実施できる。もう１つの方法
には、少なくとも１つの遊離アミン基を有する別の抗体
と炭化水素部分を酸化してある抗体との反応を含んでい
る。これにより最初のシッフ塩基（イミン）結合が得ら
れ、好ましくはこれを例えばホウ水素化物還元により第
２アミンに還元して安定化し、最終的複合物を形成す
る。このような部位特異的な結合は、小さい分子もしく
はポリペプチドまたは固相ポリマー支持体に関しては米
国特許第4,671,958号に、より多きなアデンド（adden
d）に関しては米国特許第4,699,784号に開示されてい
る。

同様の反応を使用して複数の抗体及び／または抗体断片
例えばFabまたはＦ（ab′）_２断片を互いに結合して、
多特異性結合体または病原体またはその抗原に対し１つ
以上のエピトープ特異性を有する結合体を形成し、標的
部位に対する結合親和性または効率を高めることができ
る。二特異性結合体は第３、第４またはそれ以上のエピ
トープに特異的な抗体／断片に結合できる。これは、例
えばヘテロ二官能性マレイミド−ヒドロキシサクシンイ
ミドエステルリンカーを使用してアミン基を誘導体化
し、次に、適宜２−イミノチオランのような試薬を使用
して導入した遊離スルフィドリル基を有する断片と誘導
体を反応させて実施できる。別な結合様式も二特異的複
合物形成に関する開示に基づいて当業者には容易に明ら
かであろうし、このような方法をほんの僅かに変更や改
変するだけでよい。

結合体の抗体成分をシンチグラフ造影剤または磁気共鳴
造影増強剤用の放射性同位元素で標識し、またはこれと
結合し、またはこれと結合できるようにして診断用造影
剤として使用することができる。in vivoで使用するた
めの蛋白質の標識に好適な放射性標識の任意慣用の方法
が一般に複合物の標記に好適であろう。これは、慣用法
またはより洗練された方法を使用して例えばハロゲンま
たは金属イオンの放射性同位元素で直接標識することに
より、または放射性金属または常磁性イオンのキレータ
（chelator）を結合することにより実施できる。このよ
うなキレータ及びその抗体への結合様式は当業者にはよ
く知られており、特に、例えばChildsら,J.Nuc.Med.,2
6:293（1985）；及びGoldenbergの米国特許第4,331,647
号、第4,348,376号、第4,361,544号、第4,468,457号、
第4,444,744号及び第4,624,846号に開示されている。エ
チレンジアミン四酢酸（EDTA）及びジエチレントリアミ
ン五酢酸（DTPA）の誘導体が一般的である。これらは一
般に側鎖上に基を有しており、キレータはこの側鎖で抗
体に結合できる。また、よく知られた方法でキレータの
カルボキシルまたはアミン基を活性化し、次に抗体を結
合させることができる。例えば、Ga−67のキレータでる
デフェロキシアミンは遊離アミン基を有しており、これ
を好適リンカーで活性化し、活性化カルボキシル、イソ
チオシアネート等の基を含有させ、次に抗体のアミンと
結合させることができる。

キレータは直接または短鎖もしくは長鎖リンカー部分を
介して、抗体の１つ以上の官能基例えばアミン、カルボ
キシル、フェニル、チオールまたはヒドロキシル基を介
して抗体に結合できる。種々の慣用のリンカー例えばジ
イソシアネート、ジイソチオシアネート、カルボジイミ
ド、ビス−ヒドロキシサクシンイミドエステル、マレイ
ミド−ヒドロキシサクシンイミドエステル、グルタルア
ルデヒド等、好ましくは選択的な逐次リンカー例えば米
国特許第4,680,388号に開示のアニヒドリドイソチオシ
アネートリンカーを使用できる。

ヨウ素−131（Ｉ−131）またはヨウ素−123（Ｉ−123）
での標識は、放射性のヨウ化カリウムまたはナトリウム
と抗体との混合物をクロラミン−Ｔで処理する酸化的手
法を使用して容易に実施でき、この方法は例えばGreenw
oodら,Biochem.J.,89,114（1963）に記載されており、M
cConaheyら,Int.Arch.Allergy Appl.Immunol.,29,185
（1969）が変法を実施している。この結果、試薬の割合
及び反応条件に応じて、抗体分子のおそらくチロシン残
基、また多分トリプトファン及びさらにフェニルアラニ
ン残基の水素原子がヨウ素原子で直接置換される。ま
た、Feteanu、上記、pp.303及びその参考文献に記載さ
れているように、ラクトペルオキシダーゼヨウ素化も使
用できる。

さらに進んだ標識法は係属中の米国特許出願第742,436
号（６−７−85）第084,544号（８−12−87）及び第17
6,421号（４−１−88）に開示されている。前記全ての
特許及び特許出願の開示は全て参照により本明細書に含
むものとする。Feteanu,「Labeled Antibodies in Biol
ogy and Medicine」,pp.214−309（McGraw−Hill Int.B
ook Co.,New York,1978）には広範囲の標識手法が開示
されている。種々の金属の放射性同位元素の導入は、Wa
ngerら,J.Nucl.Med.,20,428（1979）;Sundbergら,J.Me
d.Chem.,17,1304（1974）；及びSahaら,J.Nucl.Med.,6,
542（1976）の方法に従って実施できる。前記のものは
単に当業界で公知の多数の放射性標識法の例である。

MRI造影増強に有用な化合物の例には、常磁性イオン例
えばGd（III）,Eu（III）、Dy（III）、Pr（III）、Pa
（IV）、Mn（II）、Cr（III）、Co（III）、Fe（II
I）、Cu（II）、Ni（II）、Ti（III）、及びＶ（IV）イ
オン、またはラジカル例えばニトロオキシドを含み、こ
れらの化合物は常磁性イオンキレータ、またはそのイオ
ンの露出キレート化官能基例えばSH、NH₂、COOHまたは
ラジカルアデンドのリンカーを有する基質と結合する。
MRI増強剤は、磁場強度が相応に得られ、患者の安全性
や機械の設計と適合する磁場の強度を使用して外部カメ
ラでの検出を可能にするのに十分な量存在してよい。こ
のような薬剤に対する要件は媒質中の水分子に対して作
用する薬剤について当業界でよく知られており、特に、
例えば、Pykett,Scientific American,246:78（198
2）；及びRungeら,Am.J.Radiol.,141:1209（1987）に開
示されている。

抗体に直接またはキレートの形で金属を導入する同じ方
法の多くは、感染症用造影剤を形成するための本発明の
抗体結合体へのMRI剤の導入にも適していることはよく
理解される。MRI剤は造影増強のために多くの常磁性イ
オンまたはラジカルを有しているのと好都合である。こ
のようなイオを複数導入する方法の一つはキャリアーポ
リマーにキレートを負荷し、担体を抗体複合物に、好ま
しくは結合体の抗原結合部位から離れた部位で部位特異
的に結合させることである。このことは抗体自身のより
少ない部位でより多くのキレートを抗体に結合させるこ
とができるために、免疫反応性がそれど重大にそこなわ
れないという利点がある。キレータを抗体に負荷するた
めに有用なポリマーの例には、例えばポリオール、多糖
類、ポリペプチド等、例えば米国特許第4,699,784号（S
hihら）及び第4,046,722号（Rowland）に記載のものが
含まれる。

１つの型の多糖類はデキストランである。キレータを官
能化してデキストランヒドロキシルに対する反応基例え
ば無水物、イソシアネートまたはイソチオシアネート等
を含有するようにさせうる。また、デキストランは多く
の方法例えばアミノデキストランへの変換により誘導体
化することができる。同様な方法は抗体または抗体結合
体に複数の薬剤分子を載せるために有用であることが理
解されるであろう。このことは後に詳述する。

アミノデキストラン（AD）キャリアーを有する抗体結合
体の製法は通常デキストランポリマー、遊離には平均分
子量（MW）約10,000−100,000、好ましくは約10,000−4
0,000、より好ましくは約15,000のデキストランから出
発する。次に、デキストランを酸化剤と反応させて炭水
化物環の部分を調整して酸化してアルデヒド環を生成す
る。この酸化は糖分解用化学試薬例えばNaIO₄を使用し
て慣用法で実施できる。

分子量約40,000のデキストランに対して約50−100、好
ましくは100個のアルデヒド基を生成し、他の分子量の
デキストランに対してもほぼ同じ割合のアルデヒドを生
成するように酸化剤量を調整すると好都合である。アル
デヒド基及びそれに伴いアミン基がそれ以上多くなる
と、ポリマーがポリリシン様の挙動をとりやすくなるた
めあまり好ましくない。また、より少ないと望ましくな
いキレータまたはホウ素アデンドの負荷が起こり、これ
は不都合でありうる。

次に、酸化したデキストランをポリアミン、好ましくは
ジアミン、より好ましくはモノ−またはポリ−ヒドロキ
シジアミンと反応させる。好適アミンには、例えばエチ
レンジアミン、プロピレンジアミンまたは同様のポリメ
チレンジアミン、ジエチレントリアミンまたは同様のポ
リアミン、1,3−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパンま
たは同様のヒドロキシル化ジアミンまたはポリアミンが
含まれる。アルデヒド基に対して過剰のアミンを使用し
てアルデヒド官能基をシッフ塩基（イミン）基に実質的
に完全に確実に変換することができる。

得られた中間体を還元的に安定化するにはシッフ塩基中
間体を還元剤例えばNaBH₄、NaBH₃CN等と反応させる。過
剰な還元剤を使用して、確実にイミン基を第２アミン基
に実質的に完全に還元し、すべての未反応アルデヒド基
をヒドロキシル基に還元する。得られたアダクトを慣用
のサイジングカラムに通して架橋結合したデキストラン
を除去してさらに精製することができる。AD上の使用で
きる第１アミノ基の数は、計量したサンプルをトリニト
ロベンゼンスルホン酸と反応させ、420nmでの光学密度
と標準との相関から算定することができる。通常、この
方法では、計算した数のアルデヒド基はADの第１アミン
基に本質的に完全に変換される。

また、デキストランをアミン基導入の慣用法により、例
えば臭化シアンと反応させ、次にジアミンと反応させて
誘導体化することができる。ADは特定薬剤またはキレー
タの活性型の誘導体、好ましくは、例えばジシクロヘキ
シルカルボジイミド（DCC）またはその水溶性修飾体を
使用して慣用法で製造したカルボキシル−活性化誘導体
と反応させるとよい。

これまで述べたことは単に放射活性標識及び／または薬
剤またはトキシンを抗体／断片に付加する当業界で公知
の方法を例示しただけであり、本発明の結合体の製造に
は他の方法も使用できることは理解されよう。

本発明のシンチグラフによる造影法は、ヒトの患者に放
射性標識した結合体をシンチグラフ造影剤に有効量非経
口注入して実施する。非経口とは、例えば静脈内、動脈
内、髄腔内、間隙内または腔内を意味する。患者は放射
性標識した結合体を約1mCi−50mCi投与させるが、この
用量は特定の放射性同位元素と投与様式の関数であると
考えられる。静脈投与では、用量は通常次の通りであ
る:I−131では約２−10cmCi、好ましくは約２−5mCi;I
−123では約５−10mCi、好ましくは約8mCi;Tc−99mで
は、約10−40mCi、好ましくは約20mCi;In−111またはGa
−67では約２−5mCi、好ましくは約4mCi。他の造影用放
射性核種の用量は上記同位元素を参照し、核種の半減期
及びそれに結合しようとする抗体／断片／複合物の大き
さを考慮することにより当業者は容易に決定できよう。

放射性標識抗体複合物は通常、感染の病巣にシンチグラ
フ造影剤を向けるための、哺乳類に使用できる注入可能
製剤、好ましくはヒトに使用するための滅菌した注入可
能製剤、好ましくは医薬的に許容される滅菌した注入用
ベヒクル、好ましくは生理的pH及び濃度の燐酸緩衝食塩
水（PBS）中に有効量の放射性標識結合体を含有する滅
菌した注入可能溶液からなる製剤として提供される。他
の慣用の医薬的に許容されるベヒクルも非経口投与の部
位に応じて使用できる。

本発明に従って非経口投与する代表的製造は、例えば0.
9％塩化ナトリウム含有0.04M燐酸バッファ（pH7.4、Bio
ware）1ml当り約10mgのヒト血清アルブミン（１％USP:P
arke−Davis）を含有すると好ましい滅菌溶液中に、通
常約0.1−20mg、好ましくは約2mgの放射性標識抗体結合
体を含有する。

標的部位に十分量の放射性同位元素を沈積させたら、慣
用の平面及び／またはSPECTガンマカメラまたは感染の
部位を捜すために外部または内部で使用するハンドヘル
ドのガンマプローブを使用してスキャンニングを実施す
る。シンチグラムは通常50−500Kevのエネルギーを検出
する１つ以上の窓を備えたガンマ造影カメラでとる。標
的部位は比較的集中した病巣にある病原体またはその抗
原を有する任意の部位であってよい。

磁気共鳴造影法（MRI）はシンチグラフ造影法と同様の
方法で実施するが、この造影剤は放射性同位元素よりMR
I増強種を含有している。磁気共鳴現象はシンチグラフ
とは異なる原理で作用することは理解されよう。通常、
発生した信号は造影すべき領域の水分子の水素原子核中
の陽子の磁気モーメントの緩和時間と相関する。磁気共
鳴造影増強剤は緩和速度を高め、造影剤が付着している
領域の水分子と体内の他の場所の水分子とのコントラス
トを増すことにより作用する。しかし、この薬剤は、よ
りはっきりしたコントラストをもたらすT₁とコントラス
トを弱めるT₂の両方を高める作用を持つ。従って、この
現象は濃度依存性であり、通常最大の効率を得るために
は常磁性種の最適濃度がある。最適濃度は使用する特定
の薬剤、造影部位、造影法すなわちスピン−エコー、飽
和−回復及び種々の他の非常にT₁依存性またはT₂依存的
造影手法、薬剤を溶解または懸濁する媒質の組成により
変化しよう。これらの因子及びその相対的な重要性は当
業界で公知である。例えば、Pykett,上記及びRungeら，
上記を参照のこと。

本発明のMRI法は、哺乳類好ましくはヒトに、MRI造影剤
を含抗体結合体である本発明の結合体の磁気共鳴造影有
効量を非経口注入して実施する。患者には感染部位での
MRI信号を少なくとも約20％、好ましくは約50−500％増
強するのに十分な量の標識結合体を投与するが、この量
は特定の常磁性種及び投与様式の関数であると考えられ
る。

また、標識した抗体結合体は通常、哺乳類用の注入可能
製剤、好ましくはヒトに使用するする滅菌した注入可能
製剤として提供される。感染病巣にMRI剤を向けるため
の典型的な製剤は、医薬的に許容される滅菌した注射用
ベヒクル、好ましくは生理的pH及び濃度の燐酸緩衝食塩
水（PBS）中に有効量の標識結合体を含有する滅菌した
注入可能溶液を含む。他の慣用の非経口投与用の医薬的
に許容されるベヒクルも非経口投与の部位に応じて使用
できる。

本発明に従って非経口投与する代表的な製剤は、0.9％
塩化ナトリウム含有0.04M燐酸バッファ（pH7.4、Biowar
e）1ml当り例えば約10mgのヒト血清アルブミン（１％US
P:PArke−Davis）も含有すると好ましい滅菌溶液に標識
した多特異性抗体複合物を通常約0.1−50mg、好ましく
は約5mg含有する。標的部位にMRI剤を沈積させた後、感
染を造影する慣用のMRIカメラでスキャンする。

本発明の好ましい実施態様では、Goldenbergの米国特許
第4,624,846号に関連する像影剤について開示されてい
るように、第１の標識抗体結合体の局在化率は、標的に
向かっていない循環結合体を浄化（scanvenge）しその
除去を促進する標識していない第２の抗体を使用すると
高まる。前記特許の開示全体は参照により本明細書に含
むものとする。この方法は後記するように治療薬剤と結
合した抗体または抗体複合物にも応用できる。「局在化
率」という用語は通常の意味で使用しており、すなわち
標的抗体結合体と非標的抗体結合体の比である。一般
に、第２の抗体は、第１の抗体複合体の局在化率を少な
くとも約20％、通常50％以上上昇させる量で使用する。

第２の抗体は第１の抗体結合体と結合して循環系及び非
標的空間から第１の抗体結合体自体より迅速に除去され
る複合体を形成するものであれば、完全なIgGもしくはI
gMまたはIgGもしくはIgMの断片であってよい。好ましく
は、第２の抗体は完全なIgGまたはIgMである。第１の抗
体がIgGまたはIgMの断片のときには、第２の抗体が完全
なIgGまたはIgMであり、第1/第２複合体が補助カスケー
ド活性化能を保持できるのが好ましい。反対に、第１抗
体が完全なIgGである場合、複合体が補体固定能を保持
していれば第２抗体は断片であってよい。

第1/第２対の少なくとも１つが完全なIgGまたはIgMであ
るのが好ましい。IgMを使用する１つの利点は、IgMが第
１抗体または分離した結合体すなわち診断用主薬及び／
または治療用主薬例えば薬剤、キレート剤、放射性各種
等とより大きな高分子複合体を形成することである。こ
のことにより特に血液からの非標的第１抗体及び／また
は主薬の除去の速度及び効率が増強される。

第２抗体は前記のGoldenbergの'846特許に開示されてい
る方法で製造できる。モノクローナル抗−種IgGも入手
でき、本発明方法で第２抗体として有利に使用できる。
非金属結合体例えば放射性ヨウ素化した結合基または有
機常磁性種例えばニトロキシドも第２抗体が特異的なハ
プテンでありうる。

第２抗体は、第１の多特異性抗体結合体を非経口投与し
てから感染病巣での取り込みが最大となる十分な時間が
経過した後、通常最初の投与の約２−72時間後、好まし
くは投与約４−48時間後に患者に注入する。第１の抗体
が静脈投与されないときには、第２抗原の少なくとも一
部を同じ非経口経路で投与すると有利でありうる。しか
し、第２抗体の少なくとも一部を静脈注入して循環系に
拡散している第１抗体の除去を早めると有利である。

循環している標識した第１抗体を除去し、第１抗体の局
在化率を高めるための第２抗体の使用に代わるものまた
は付け加えるものとしては、前記Goldenbegの特許及び
その参考文献に開示されているような造影増強剤の使用
がある。この方法は当業界で公知の手法であり、無作用
（indifferent）抗体または断片を別々に検出可能な放
射核種で標識し、標識した無作用抗体を患者に注入す
る。この抗体は造影に必要な時間の間、第１抗体と同じ
分配及び代謝の動力学を有している。このような抗体の
注入は慣用の減算剤（subtraction agent）例えばTc−9
9m標識血清アルブミンより好ましい。減算剤はバックグ
ラウンドを補償して造影過程を増強するための使用に適
している。放射性標識した無作用抗体を減算剤として使
用すると、循環系からの抗体の除去に影響する器官から
の非標識バッククラウンド放射についてコンプータで修
正できる。

当業者には、第１のモノクローナル抗体と減算剤として
使用される無作用抗体は同じ種またはミエローマ／ハイ
ブリドーマ由来であり、第２の抗体が実質的に同じ速度
で第１のモノクローナル抗体と無作用抗体免疫グロブリ
ンを非標的部位から除去するのが好ましいことは理解さ
れよう。また、第２抗体が第１抗体及び無作用免疫グロ
ブリン種の不変領域に特異的であることが好ましい。

導入する第２抗体の量は一般に、循環する第１抗体を２
−72時間以内に10−85％減少できる量である。除去に影
響を与える第２抗体と第１抗体の比は第１抗体と第２抗
体の対の結合特性に左右される。In vitroで患者の血液
を予めスクリーニングし適当な比を最初に算定すること
ができる。このスクリーニングを使用して、例えばゲル
拡散テストで沈降素帯を得るために必要な第２抗体と第
１抗体の比を決めることができる。これは第２抗体と第
１抗体のモル比の一般的な範囲を示すが、in vivoでの
使用では、このようなin vitroテストで示した第２抗体
と第１抗体の比よりも高い比が必要なことがあるので、
比の最低限度として使用できる。

実際、第２抗体の１抗体に対するモル比は限定的なもの
と考えるべきではないが、一般に約５−50の範囲であ
る。第１及び第２抗体が完全なIgGである場合には、15
−25、好ましくは20−25の第２抗体の第１抗体に対する
モル比が有利であることが判っている。

造影用製剤及びキットには抗体結合体投与後に注入する
ために別な容器に入れた第２抗体も含んでよい。

ヒトに感染し得る病原体微生物に対して細胞毒性効力を
有する多数の薬剤及び毒素が知られている。それらは、
薬剤及び毒素についての容易に入手可能な当業界で周知
の刊行物中、例えばMerk Index等に記載されている。
このような抗生物質又は細胞毒剤は全て抗病原体抗体又
は抗体複合体に結合して、本発明の治療薬を生成し得、
そしてこのような結合体を、その部位での有効濃度を増
大するために抗生物質又は細胞毒剤の感染部位への標的
を改良するために使用することは、本発明の一部であ
る。

一つ又はそれ以上の抗生物質又は細胞毒剤を、高分子担
体に結合し、次にこれを抗体又は抗体複合物に結合し
て、治療に用いる。ある場合には、抗体結合体の一部と
しての薬剤が循環中に部分的に又は完全に解毒し得、こ
れにより薬剤又は毒素の全身的副作用は低減され、薬剤
の全身投与が受け入れられない場合でも薬剤を使用する
ことができる。抗体とさらに結合されるポリマーに結合
した薬剤の分子を投与すると、全身毒性を軽減している
間に治療が可能になる。

本発明の方法は、一次抗体又は抗体複合物を抗生物質又
は細胞毒剤又は毒素に結合することにより感染の治療的
処置に適用される。薬剤又は毒素をイムノグロブリンに
結合する当業界周知の方法は、例えばDrug Carriers
in Biology and Medicine,G.Gregoriadis,ed.,Acade
mic Press London,1979の“The Use of Antibodie
s as Drug Carriers"という表題のO'Neillによる章;
Arnon et al.,Recent Results in Cancer Res.7
5:236,1980;及びMoelton et al.,Immunolog.Res.62:4
7,1982（技術水準を示す）に記載されている。これらの
方法は、種々の疾患誘発性微生物、例えば細菌、ウイル
ス、カビ、及び種々の寄生虫に対して有効な薬剤をこれ
らの微生物、それらの産生物、又はそれらの病変に関連
する抗原に対して発現される抗体と結合するために用い
る方法と非常によく似ている。

例えばテトラサイクリン、クロラムフェニルコール、ピ
ペラジン、クロロキン、ジアミノピリジン、メトロニア
ジド、イソニアジド、リファムピン、ストレプトマイシ
ン、スルホン、エリスロマイシン、ポリミキシン、ナイ
スタチン、アムホテリシン、５−フルオロサイトシン、
５−ヨード−２′デオキシウリジン、１−アダマンタナ
ミン、アデニンアラビノシド、アマニチン、及びアジド
チミジン（AZT）を含めたこのような抗生物質又は細胞
毒剤は、適切な特異的な複数の抗体／断片及び単数の抗
体／断片複合物に結合するために好ましい。本発明にお
ける使用のための考え得る種々のその他の抗生物質／細
胞毒剤は、Goodman et al.,“The Pharmacological
Basis of Therapeutics,"Sixth Edition,A.G.Gilm
an etal.,eds.,Macmillan Publishing Co.,New Yor
k,1980に列挙されている（一般的技術水準を示す）。特
異的標的部位を薬剤の標的にするために適切な且つ望ま
しい条件は、例えばTrouet et al.,が、Targeting o
f Drugs,G.Gregoriadis et al.,eds.,Plenum Pres
s,New York and London,1982,pp.19−30（このよう
な標的方法が感染病変を蒙っている患者にいかに有益で
あるかについての臨床的知識を示す）で検討している。

画像形成の箇所で上記のように、二次抗体の使用は、診
断的画像形成結合体に関するのと同様の方法で、本発明
の治療薬の有効性を増大する。治療薬の有効性は、一般
的意味で用いられ、治療効果と望ましくない副作用の比
として示されるその治療指数によって表わされる。それ
は、しばしば、標準モデル系における効率対毒性の定量
的測定、例えばメジアン致死用量（LD₅₀）対メジアン有
効用量（ED₅₀）の比で示される。本明細書中に上記のよ
うな二次抗体の使用は、非標的一次抗体及び／又は分離
した治療素因を一掃することによって抗ウイルス抗体及
び抗体複合物結合体の治療指数の増大をもたらす。二次
抗体は、上記のように一次モノクローナル抗体に対して
特異的であることに加えて、治療的製剤の場合は治療薬
に対して特異的であり得る。それは、治療薬のための担
体にも特異的であり得る。

本発明で意図される治療製剤は、非経口的投与に好適な
ビヒクル中に、治療的に有効な放射性同位体及び／又は
抗生物質／細胞毒剤に結合した上記のような単一特異性
抗病原体抗体／断片を含有する。また、治療製剤は、放
射性同位元素及び／又は抗生物質／細胞毒剤に結合した
多特異性抗病原体抗体／断片複合物を含有してもよい。

ある場合には、薬剤と放射性核種を組み合わせるのが有
益であり、この場合、病原体は“隠れる”か又は多少接
近し難い。作用範囲の長い放射性核種は、何らかの抗原
が結合体に接近可能である限り、隠れた病原体に達し得
る。さらに、照射は感染細胞の溶解を引き起こし、細胞
内病原体を結合体の抗微生物剤成分に暴露し得る。

治療製剤は、上記のような別個にパックされた二次抗体
を含有してもよい。好適なビヒクルは当業界で十分公知
であって、例えば本明細書中に上記のような診断用画像
形成剤の投与のために用いられるものと同様の滅菌PBS
溶液が挙げられる。

本発明の抗微生物多特異性画像形成結合体、及び単一特
異性又は多特異性治療結合体はさらに、感染病巣を標的
にする抗体のための治療又は診断キット中に提供される
のが便利である。一般に、このようなキットは、凍結乾
燥製剤として又は注射ビヒクル中に、本発明の抗体結合
体を含入するバイアルを包含する。結合体がシンチグラ
フィー画像形成用に、又は放射性同位元素療法に用いら
れるものである場合は、それは一般に、別々の容器中
に、放射能標識化のための試薬及び付属物とともに冷結
合体として提供されるが、一方MRI剤及び治療薬／毒素
結合体は一般に、常磁性種、又は抗体／断片複合物又は
単一特異性抗体／断片と既に結合した抗生物質／細胞毒
剤とともに供給される。キットはさらに、抗体又は断片
に対して特異的な二次の、別々にパックされた非標識化
抗体又は抗体断片、あるいはその担体、又は放射性核種
又は常磁性イオンのためのキレート化剤を含有し得る。

本発明の画像形成製剤及び方法は、相対的に小さな感染
病巣を検出及び画像診断することができるし、容易に且
つ安全に使用できる。本発明の治療試薬及び方法は、放
射性同位元素及び薬剤で感染部位を標的にする手段を提
供して、その治療指数を改良し、それらの全身的副作用
を低減し、そしてその効率を増強する。

放射性核種免疫結合体は、微生物治療に特に有効であ
る。標識化抗体が被験者の感染部位に局在することが確
認された後に、各々70kgの体重の患者を基準にして、一
般にＩ−131の場合20mCi〜15mCi、Ｙ−90の場合5mCi〜3
0mCi、又はRe−186の場合5mCi〜20mCiの高用量の標識化
抗体を注入する。注入は、静脈内、動脈内、リンパ管
内、莢膜内、又は体腔内（例えば非経口的に）であっ
て、反復注入してもよい。治療によって抗体又は抗体複
合物を複数回に分けて投与するのが有益であって、それ
によって、通常正常組織の放射を比例的に増加させず
に、高微生物毒性用量が提供される。

種々の放射性核種が治療に有用であって、それらは、上
記の標識法、並びに当業界で十分公知のその他の慣用的
方法によって特異的抗体中に取り込まれる。好ましい治
療的に有効な放射性核種は、アスタチン−211、ビスマ
ス−212、イットリウム−90、レニウム−186、レニウム
−188、銅−67、ヨウ素−131、及びヨウ素−125である
が、しかしその他の放射性核種並びに光増感剤も適して
いる。

本発明の別の態様は、少なくとも20％の天然存在量のホ
ウ素−10同位体を有する有意数のホウ素原子を含有する
抗体の使用に関する。ホウ素含有アデンド（addend）
は、種々の方法、例えば米国特許第4,824,659号（Hawth
orne）（この記載内容は、参照により本明細書中に含め
るものとする）に記載の方法によって導入され得る。ホ
ウ素−10含有抗体を、一つ又はそれ以上の上記の手法に
よって放射能標識化して、感染検出及び／又は治療のた
めの一つ又はそれ以上の放射能標識、並びに熱中性子の
吸収のための高含量のホウ素−10原子を含有する抗体を
産生する。あるいは、ホウ素標識化抗体は、抗体へのガ
ンマ線放出同位体の結合を伴わずに用い得る。次に、感
染病変に、優先的にホウ素含有アデンド上のホウ素−10
核により吸収される熱中性子の十分平行にした（collim
ated）光線を照射し、活性化核は急速にリチウム−７及
びα粒子に放射崩壊する。これらの結果生じたα粒子は
有毒であって、その産生により隣接微生物及び細胞が殺
される。

本発明の方法及び組成物の特に有効な適用は、HIV感染
による後天性免疫不全症候群（AIDS）、及びAIDS関連複
合症候群（ARC）として公知の前駆免疫不全症の治療で
ある。AIDS又はARCに対する治療法はないけれども、HIV
レトロウイルスの独特の特徴である逆転写酵素活性を遮
断する薬剤をAIDS患者で研究中である。しかしながら、
患者は結局は耐性をもち、再発し、他の治療法を必要と
する。

AIDS患者は、異なるHIV成分、例えばウイルスコア抗
原、エンベロープ糖蛋白質抗原複合体、及びトランスメ
ンブラン蛋白質に対する循環抗体を発現する。AIDS患者
における主な反応活性は、分子量41,000（gp41）のおそ
らくウイルスエンベロープ糖蛋白質に向けられている。
患者自身の抗体は外因性HIV抗体の標的に必要な標的部
位を飽和することが予期されたために、抗体がヒトにお
けるHIVの標的化に有用であることは予測されなかっ
た。

HIVに対する外因性モノクローナル抗体、特にある種の
エンベロープ糖蛋白質エピトープに特異的な抗体が、ウ
イルスに対する高い選択性及び親和性を有することが目
下判明しており、事実、エピトープ特異性によって天然
ヒトHIV抗体とは区別し得る。HIVエンベロープ糖蛋白質
抗原抽出物でマウスを免疫化することによって、異なる
エンベロープ抗原エピトープと反応するモノクローナル
抗体が生じた。単一のこのようなモノクローナル抗体、
しかし好ましくはこのような抗体の組み合わせが、HIV
感染の検出、画像診断、及び治療に用いるための本発明
の抗体結合体の好ましい抗体成分である。あるいは、ヒ
ト又はサルの抗体を、慣用的免疫グロブリン単離及び精
製法によってその宿主から単離し、HIV感染細胞をin v
itroで（例えば免疫蛍光染色法によって）標的化するそ
の能力によって標的剤として選択する。ヒト抗体は、好
ましくは多数の抗原部位と区別される異なるウイルス上
のエピトープを標的化するものである。サル抗体は、好
ましくはHIV感染の有効なモデルが達成された動物中に
産生する。モノクローナルヒト又はサル抗体は、例えば
Gillies et al.,Biotechnology,7（８）:799−804,19
89;Nakatani es al.,Biotechnology,7（８）:805−81
0に記載されているような、例えば抗体産生のためのマ
ウス骨髄腫細胞のヒト又はサルDNAによるトランスフェ
クションを含めた公知の技法によって産生し得る。

したがって、放射性核腫、例えばビスマス−212又は別
の短範囲α線放出物と、あるいは逆転写酵素の阻害剤に
結合した複合物HIV抗体製剤は、AIDS患者を有効に治療
するために放射性核種又は薬剤の治療用量で用い得る。

その他の疾患も全身的化学療法に対して耐性又は免疫性
であることが立証されている。これらの例としては、種
々のウイルス、カビ、細菌、及び原生動物感染、並びに
特定の寄生虫感染が挙げられる。その他のウイルス感染
としては、インフルエンザウイルス、ヘルペスウイル
ス、例えばエプスタイン−バールウイルス及びサイトメ
ガロウイルス、狂犬病ウイルス（Rhabdoviridae）、並
びにパポーバウイルスによって引き起こされる感染が挙
げられるが、これらはすべて、全身性抗生物質／細胞毒
剤での治療が困難である。このようなウイルスを標的化
するための抗体結合体、特に抗体／断片複合物の結合体
の使用により、抗ウイルス剤及び毒素の有意に高い治療
指数が提供され、したがってその効率が増強されて、全
身性副作用が低減される。抗体／断片及び／又は治療放
射性同位体（熱中性子で活性化可能なホウ素アデンドを
含む）とのその複合物の結合体による標的化ラジオイム
ノセラピーは、抗ウイルス療法に新規のアプローチを提
供する。

全身性化学療法に相対的に耐性の原生動物としては、例
えばプラスモデューム（特にP.falciparum、マラリア病
原虫）、トキソプラスマゴンディ（トキソプラスマ症感
染因）、リーシュマニア（リーシュマニア症の感染
因）、及びEscherichia histolyticaが挙げられる。種
々の段階におけるマラリアの検出及び治療は、本発明の
抗体／断片結合体を用いて有意に増強される。上記のよ
うに、スポロゾイト抗原と結合するMAbsが公知である。
しかしながら、スポロゾイト抗原は血縁段階寄生虫によ
って保有されないために、標的化のためのスポロゾイト
抗原に対するMAbsの使用は、注入のそして宿主の肝細胞
中に発現する前及び直後のスポロゾイトが循環中に存在
しないかなり短期間に限定される。したがって、慣用的
化学療法に反応しないヒトにおけるマラリアのより有効
な治療のための標的剤として、例えば一つ以上の寄生虫
段階のP.falciparumに対してMAbsの混合物又はMAb複合
物を用いるのが好ましい。MAbsを、画像形成するのに好
適な放射性核種（例えばTc−99m）、又は治療に適した
放射性核種（例えばアスタチン−211;レニウム−186）
と、あるいはより選択的な治療のために抗マラリア剤
（例えばピリメタミン）と結合する。

トキソプラスマ症も全身性化学療法に耐性である。T.go
ndiiと、又は天然の宿主抗体と特異的に結合するMAbsが
トキソプラスマ症に対する免疫応答においてある役割を
演じるか否かは明らかではないが、しかしマラリア病原
虫の場合のように、おおかたの標的MAbsが治療剤の受け
渡しのための有効なビヒクルである。

広範に流行する寄生虫感染である往血吸虫症は、いくつ
かの淡水産巻貝が運搬する自由遊泳ケルカリアにより発
症する。マラリアの場合のように、異なる段階のケルカ
リアが感染過程に関与する。複数段階のケルカリアと、
任意に一つ又はそれ以上のその上の複数のエピトープ
と、そして好ましくは多特異性複合物の形態で結合する
MAbsは、有効な標的化、及び治療効率の増強のために、
画像形成剤又は治療剤と結合し得る。

一つ又はそれ以上の形態のシャーガス病の原因であるTr
ypanosoma cruziと結合するMAbsを作製し、この微生物
感染の検出及び治療のために用いる。細胞表面糖蛋白質
と反応する上記のMAbs、並びに分化段階のトリパノソー
マ上のその他の表面抗原と反応するMAbsは、身体の寄生
虫浸潤部位に対する画像形成剤及び治療剤に当てるのに
適している。

市販の薬剤では治療が非常に困難な別の感染性生物は、
らい病杆菌（Mycobacterium leprae）である。M.lepra
eの表面上の複数のエピトープと特異的に結合する抗体
は、例えばマウスに弱毒化又は断片化M.leprae又はその
表面抗原を投子して作製し得るし、これらは、単独又は
組み合わせて、画像形成剤及び／又は抗生物質／細胞毒
剤を杆菌に対する標的にするために用い得る。

化学療法剤に対してそれ自体相対的に抗治療性である寄
生虫感染、例えば糞線虫症及び旋毛虫症は、寄生虫上の
一つ、又は好ましくは複数のエピトープと特異的に結合
する抗体を用いる本発明の抗体標的化診断及び治療に適
した疾患候補である。

前記で説明したように、そして参考文献に引用したよう
に、ヒトにおける大多数の感染に関与する微生物及び寄
生虫の殆どと特異的に結合する抗体は、入手可能である
か、又は容易に産生しうる。これらの多くは、in vitr
o診断の目的で従来用いられており、本発明は、診断及
び治療剤で感染部位を標的化するための抗体結合体の成
分としてのその使用を示す。ヒト及び哺乳類の微生物病
原体及び無セキツイ寄生虫は、その種々の段階で発現さ
れる多様な抗原を有する複雑な生活環を持つ生物体であ
る。したがって、標的化療法は、異なる形態の抗原決定
基を認識する抗体結合体を、適切な治療法と結びついた
混合物として又は多特異性結合体として、組み合わせて
用いる場合に最もよく作用し得る。同様の原理は、画像
形成剤、例えば放射性核種及び／又はMRI増強剤の結合
による感染部位の検出のためのMAb試薬の使用に適用す
る。

治療用放射性同位元素、薬剤、毒素、及びその他の細胞
毒剤がその投与の副作用として造血毒性を生じる程度ま
で、このような毒性を軽減又は防止し、骨髄産生を刺激
するための有効量のサイトカイン、特にリンホカイン又
はその他の成長因子の投与は有益であり、本発明の一部
である。このような投与は、共に譲渡され、同時係属中
の米国特許出願第174,490号（この記載内容はすべて、
参照により本明細書中に含めるものとする）に開示され
ているものと同様に実施する。

さらに詳論しなくても、当業者は、前記の説明を用いて
本発明を十分に用い得ると考えられる。したがって、以
下の好ましい実施例は、本発明を説明するだけのもので
あって、本発明を限定するものではない。

実施例以下の実施例において、温度はすべて、摂氏に逆修正し
て説明する。別記しない限り、部及びパーセンテージは
すべて重量による。

実施例１ HIV−gp160に対する特異的マウスモノクローナル抗体マウスを、HIV−１のgp160エンベロープ前駆体蛋白質で
高度免疫化する。高度免疫化動物からの脾臓リンパ球を
SP2/0骨髄腫細胞と融合し、融合細胞をミクロ滴定プレ
ートウェル中のHATで希釈する。10日後、増殖中のハイ
ブリッドを含有するウェルからの上澄をgp160との反応
性に関してELISAにより試験する。次にgp160と反応する
モノクローナル抗体を含有するウェルを、HIV−１エン
ベロープ蛋白質gp120及びsp41（sp160産生物）との反応
性に関してスクリーニングする。血清陽性AIDS患者から
のヒト血清中の抗体によってブロックされないgp160に
特異的なクローンをサブクローン化する。高特異性及び
親和性を有する４つのクローンのうち、少なくとも２つ
は、別のもの（以後、集合的にMAb−160s、そして個々
にMAb−160s1、MAb−160s2、MAb−160s3、MAb160s4とす
る）の存在下でHIVと結合し、各々培養中で展開し、Bal
b−ｃマウスにおいて腹水液を生成するために用いる。
各MAb−160sを、蛋白質Ａ上での親和性クロマトグラフ
ィーによって腹水液から精製する。クローンは、IgG_1S
サブクラスのものであることを測定し、結合体を調製す
るために使用する。

その他のHIV−抗原に対するモノクローナル抗体は、有
意血液レベルの抗原、又は抗HIVモノクローナル抗体の
結合をブロックする有意血液レベルの抗体を有しない患
者に用い得る。

実施例２ 99m−Tc−MAb−160s1−FAb′画像形成剤の調製実施例１で調製した精製MAb−160s1を、ペプシンでＦ
（ab′）_２断片に変換し、そして二価断片をシスチンで
還元してFab′に変換する。ゲル濾過によってシスチン
を除去後、Fab′を緩衝化還元剤、好ましくはSnCl₂と混
合し、凍結乾燥する。凍結乾燥したMAb−160s1−Fab′
を含入するバイアルに滅菌塩水中の20mCiの99m−Tcペル
テクネテートを添加して患者に注射する直前に、99m−T
c−MAb−160s−FAb′を調製する。

実施例３ 131−Ｉ−MAb−160s1＋２−Ｆ（ab′）_２の調製実施例１で調製した精製MAb−160s1及びMAb−160s2を、
各々実施例２の記載のようにFab′断片を変換する。MAb
−160s2断片のチオール基をヨードアセトアミドでキャ
ップし、キャップ化断片をマレイミドヒドロキシスクシ
ンイミドｐ−ニトロ安息香酸エステルで誘導し、その断
片をゲル濾過により別々に精製する。精製断片を別のも
のと反応させてgp−160抗原に対して二重の特異性を有
する化学的結合した二価複合物を生成する。その複合物
をクロラミン−Ｔ法によってＩ−131で放射性ヨウ素化
して、180mCi/用量の活性を達成する。

実施例４画像診断 24歳の男性患者をAZTで処置すると、薬剤耐性になり、
血液中にHIV−p24抗原を発現する。彼は倦怠感を示し、
毎日悪寒及び発熱を有する。実施例２で調製した画像形
成剤を用いて、免疫シンチグラフ試験を実施する。1mg
の凍結乾燥Fab′を含入するバイアルに、PBS中の20mCi
の発生器で生成したナトリウムペルテクネテートを添加
する。５分後、画像形成剤を注入し、３時間後に患者を
SPECT/モードのガンマカメラでスキャニングする。結合
Tc−99mの強病巣が、多数のリンパ節及び脾臓中に観察
される。

その他のウイルス感染の同様の検出及び画像形成は、放
射能標識した単一抗体又は多抗体、あるいはMRIエンハ
ンサー標識化結合体を用いて、前記実施例で説明した一
般的方法によって実施し得る。

実施例５ AIDS療法実施例４の患者に、実施例３にしたがって標準用量のア
ルコレートから調製した131−Ｉ−MAb−160s1＋２−Ｆ
（ab′）_２の5mCi線量注入を施す。ガンマカメラを用い
た平面画像形成は、99m−Tc−MAb−160s−Fab′で画像
形成された同一部位のＩ−131の強度の蓄積を示す。血
液薬物動態は、患者が180mCiの放射性ヨウ素化MAbで安
全に処置され得ることを示す。彼に、180mCiの131−Ｉ
−MAb−160s1＋２−Ｆ（ab′）_２を注射する。次の２週
間に、p24−HIV抗原の血液レベルは急速に低下し、３週
間後、抗原は検出できない。99m−Tc−MAb−160s−Fa
b′を用いた４時間後の第二画像形成試験は陰性であっ
て、リンパ節又は脾臓中に結合Tc−99mの局在化を示せ
ない。この時点で、患者は熱の低下を伴うその他の改善
の微候を示す。

同様の抗ウイルス治療結合体は、前記実施例で説明した
一般的方法を用いて、その他のウイルス感染の治療用に
作製し得る。

実施例６抗マラリア抗体マウスを、Plasmodium falciparumからのメロゾイトで
高度免疫化する。高度免疫化物からの脾臓細胞をSP2/0
骨髄腫細胞と融合し、融合細胞をミクロ滴定プレートウ
ェルにおいてHATで希釈する。10日後、増殖中のハイブ
リッドを含有するウェルからの上澄を、Ｉ−125−標準
化ウサギ抗マウスIgGを用いて、グルタルアルデヒドに
よりポリアクリルアミドビーズと結合するメロゾイトと
の特異的結合に関して試験する。メロゾイト結合モノク
ローナル抗体を含有するウェルからのハイブリドーマク
ローンをサブクローン化する。20個の陽性クローンの内
の３つは、各々別のもの（以後、集合的にａ−mer−MA
b、そして個々にａ−mer−MAb1、ａ−mer−MAb2、及び
ａ−mer−MAb3とする）の存在下でメロゾイトと結合
し、各々培養中で展開し、Balb−ｃマウスにおいて腹水
液を生成するために用いる。各ａ−mar−MAbを、蛋白質
Ａ上での親和性クロマトグラフィーによって腹水液から
精製する。クローンは、IgG1サブクラスのものであるこ
とを測定し、結合体を調製するために使用する。

全く同様の経路によって、P.falciparumスポロゾイトと
特異的に結合する３つのクローン（以後、集合的にａ−
spo−MAb、そして個々にａ−spo−MAb1、ａ−spo−MAb
2、及びａ−spo−MAb3とする）を作製し、展開して、腹
水生成モノクローナルを精製する。それらも、IgG₁サブ
クローンのものであることを測定する。

実施例７抗マラリア結合体の調製実施例６にしたがって調製した精製ａ−mer−MAbs及び
ａ−spo−MAbsを、各々実施例２の手順と同様に、ペプ
シンでFab′断片に変換し、システム還元し、その後そ
の断片を過剰のヨードアセトアミドでキャップする。水
性溶液,pH4.5中の６つの異なるキャップ化Fab′断片の
等モル混合物に50倍モルの過剰のグルタルアルデヒドを
添加し、約５〜15分後に、30倍モルまでの過剰のピリメ
タミンを添加して（各々、抗体断片のモル総数に対し
て）、その混合物を37℃で６時間インキュベートする。
その結果生じる結合体は、結合体分子当たり、平均２〜
3Fab′断片、及び５〜10ピリメタミンを有する。結合体
を、短ポリアクリルアミドゲルカラム上で低分子試薬か
ら遊離し、滅菌濾過する。

実施例８マラリア治療 P.falciparumマラリアの後期発作に罹患し、悪寒及び発
熱を示す患者に、生理食塩水中の実施例７の抗マラリア
結合体の溶液を注入する。メロゾイトの血中レベルの急
速な低下が観察され、悪寒及び発熱が２〜３時間以内に
低減する。患者の肝臓は、メロゾイト結合体複合体及び
非複合結合体を受け入れ、この両方がスポロゾイトにピ
リメタミンを放出し、これによって発作の再発を阻害す
る。さらに、ピリメタミンとのSchiff塩基結合の緩徐な
加水分解性切断が薬剤の血漿レベル延長を生じ、これが
感染の抑制的治療をもたらす。患者の血液を頻繁に監視
すると、最適薬剤レベル及び治療効果を達成するように
注入を調節し得る。

トキソプラスマ症原生動物抗原、往血吸虫抗原、トリパ
ノソーマ抗原、細菌、カビ、及びその他の微生物又は寄
生虫抗原と結合する薬剤又は放射性核種の単一又は多抗
体／断片結合体を用いる同様の結合体は、当業者には考
え得る方法での前記説明の方法により変法により産生し
得るし、このような病原体によって引き起こされる感染
は、これらの結合体を用いて治療し得る。

実施例９らい菌 Mycobacterium lepraeに対する特異的モノク
ローナルらい病杆菌と特異的に結合する一連のモノクローナル抗
体を、Mycobacterium lepraeを音波破砕し、その結果
生じる脾臓細胞を融合し、次いで増殖中のハイブリッド
を含入するウェルからの上澄をフルオレセインと結合さ
せ結合体を固定M.lepraeとともにインキュベートし、洗
浄して、U.V.光線下で結合抗体を検出することによって
杆菌との特異的結合に関してクローンをスクリーニング
して産生する。

４つの陽性クローンをサブクローン化し、展開させて、
腹水生成抗体を実施例１と同様の手順によって精製す
る。

実施例10 らい病治療結合体の調製実施例９にしたがって産生した４つのモノクローナル抗
体の混合物を、過ヨウ素酸塩で静かに酸化させて、炭水
化物領域の平均１個の糖残基を切断する。平均20個のカ
ーボランと結合するアミノデキストランを酸化抗体と反
応させて、Schiff塩基結合体をホウ水素化物で安定化す
る。その結果生じる結合体を実施例３と同様の手順でＩ
−131で放射性ヨウ素化し、70mCi/用量の活性を達成す
る。

実施例11 らい病治療急性、散在性らい病に罹患し、高熱及び多数の皮膚病変
を示し、慣用的化学療法に抗治療性であった患者に、生
理食塩水中の70mCi用量の実施例10にしたがって生成し
た結合体を静脈内注入する。熱がしだいに下がり、皮下
病変及びその他の病巣部位での結合体の局在化がガンマ
シンチグラフで検出される。５日後、非局在化結合体を
実質的に除去し、排泄するが、しかし感染の病変及び病
巣は依然として結合結合体を含有する。次に、患者をシ
ンチグラフィーで検出された病変及び病巣に焦点を当て
た平行化熱中性子線に暴露する。次週内に、病変部位に
有意の壊死が観察され、病変の境界で組織の再生が開始
する。次に、慣用的化学療法を再開すると、さらに改善
が認められ、患者を結果的に首尾よく処置し得る。

その他の記載された反応体及び／又は本発明の操作条件
を前記実施例で用いたものに取り換えることにより、前
記実施例を繰り返して同様の成功を収め得る。したがっ
て、その他のヒト疾患を引き起こす病原体及び／又はそ
れらの抗原、例えば任意のその他の本明細書中に列記し
て説明した病原体に対する抗体を産生し、本発明の画像
形成及び治療薬中に組み込み得るし、患者に上首尾の診
断及び治療結果を達成し得る。

前記の説明から、当業者は本発明の本質的特徴を容易に
確認し得るし、本発明の精神及び範囲から逸脱しない限
り、種々の用途及び条件に種々の変更及び修正を適用し
得る。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 49/00 Ａ 51/00 Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｂ 33/577 ＡＡ６１Ｋ 49/02 Ａ (56)参考文献特表昭59−501315（ＪＰ，Ａ) 国際公開88／9181（ＷＯ，Ａ) 国際公開89／692（ＷＯ，Ａ) Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎｓ，Ｆｒａｎｋｅｌ，Ａ．Ｅ．，ＫｌｕｗｅｒＡｃａｄｅｎｉｃＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，1988, ＰＰ．515−35 ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｏｎｉｃａｌＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．80（1987），ＰＰ．573−577 ＣｈｅｍｉｃａｌＡｂｓｔｒａｃｔｓ，Ｖｏｌ．107，Ｎｏ．21，ａｂｓｔｒａｃｔＮｏ．196132ｇＣｈｅｍｉｃａｌＡｂｓｔｒａｃｔｓ，Ｖｏｌ．110，Ｎｏ．13，ａｂｓｔｒａｃｔＮｏ．112761ｖ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】抗体結合体を医薬的に許容可能な滅菌注入
ビヒクルと組み合わせて含有するヒト患者の感染病巣を
標的にする滅菌注入可能製剤であって、前記抗体結合体
が単一種の病原体又はそれに由来する抗原上の複数のエ
ピトープと結合する複数の化学的結合抗体もしくは抗体
断片及び少なくとも１つの診断及び治療薬からなり、前
記複数の化学的結合抗体もしくは抗体断片と診断又は治
療薬とは結合していることを特徴とする前記製剤。
【請求項２】抗体結合体を含有する感染病巣の診断又は
治療に用いるための製剤であって、前記抗体結合体が単
一種の病原体又はそれに由来する抗原上の複数のエピト
ープと結合する複数の化学的結合抗体もしくは抗体断片
及び少なくとも１つの診断又は治療薬からなり、前記複
数の化学的結合抗体もしくは抗体断片と診断又は治療薬
とは結合しており、上記抗体結合体を病原体に感染した
患者に非経口的に注入すると、結合されている診断又は
治療薬が上記病巣を標的してその診断又は治療効果を発
揮することを特徴とする前記製剤。
【請求項３】上記診断又は治療薬が、放射性同位元素、
磁気共鳴画像増強剤、治療用放射性同位元素、ホウ素ア
デンド、抗病原体剤及び細胞毒性剤から成る群から選択
される請求項１又は２記載の製剤。
【請求項４】上記抗体結合体が、患者の自然抗体によっ
て飽和又は遮断されない上記病原体又は病原体関連抗原
の１つ又は複数の接近可能なエピトープと得異的に結合
する請求項１又は２記載の製剤。
【請求項５】上記抗体もしくは抗体断片がモノクローン
抗体もしくはその断片である請求項１又は２記載の製
剤。
【請求項６】上記抗体結合体が抗血清の結合体である請
求項１又は２記載の製剤。
【請求項７】上記抗血清が、患者の血流中に有意レベル
で循環する上記病原体に関連する抗原と結合する抗体の
除去；及び／又は結合病原体又は病原体関連抗原との接
触と、その後の、上記病原体又は病原体関連抗原と結合
する抗体を豊富に含有する抗血清の回収によってアフィ
ニティー精製される請求項６記載の製剤。
【請求項８】上記病原体が、ヒト免疫不全ウイルス（HI
V）、ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、狂犬
病ウイルス、インフルエンザウイルス、Ｂ型肝炎ウイル
ス、センダイウイルス、ネコ白血病ウイルス、レオウイ
ルス、ポリオウイルス、ヒト血清パルボ様ウイルス、シ
ミアンウイルス40、RSウイルス、マウス乳癌ウイルス、
水痘・帯状疱疹ウイルス、デング熱ウイルス、風疹ウイ
ルス、はしかウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞白
血病ウイルス、エプスタインバーウイルス、マウス白血
病ウイルス、おたふくかぜウイルム、水疱性口内炎ウイ
ルス、シンドビスウイルス、リンパ救性脈絡髄膜炎ウイ
ルス、いぼウイルス及びブルータングウイルスら成る群
から選択されるRNA又はDNAウイルスである請求項１又は
２記載の製剤。
【請求項９】上記病原体が、ストレプトコッカス・アガ
ラクチエ菌、レジオネラ・ニューモフィラ菌、化膿連鎖
球菌、大腸菌、淋菌、髄膜炎菌、肺炎球菌、Ｂ型インフ
ルエンザ菌、梅毒トレポネーマ、ライム病スピロヘー
タ、緑膿菌、らい菌、ウシ流産菌、ヒト結核菌及び破傷
風菌から成る群から選択される細菌である請求項１又は
２記載の製剤。
【請求項１０】上記病原体が、熱帯熱マラリア病原虫、
三日熱マラリア病原虫、トキソプラズマ・ゴンディ、ト
リパノソーマ・アルゼンチン、トリパノソーマ・クルー
ズ、トリパノソーマ・ローデシア、トリパノソーマ・ブ
ルース、マンソン住血吸虫、日本住血吸虫、ウシバベシ
ア、Elmeria tenella、回旋糸状虫、熱帯リーシュマニ
ア、旋毛虫、タイレリア・パルバ、胞虫様条虫、羊条
虫、無鉤条虫、単包条虫及びメソセストイド（Mesocest
oidescorti）から成る群から選択される原生動物である
請求項１又は２記載の製剤。
【請求項１１】上記病原体が蠕虫又はマラリア寄生虫で
ある請求項１又は２記載の製剤。
【請求項１２】上記病原体が、Mycoplasma arthritide
s、マイコプラズマ・ハイオライニス、マイコプラズマ
・オラーレ、M.arginini、Acholeplasma laidlawii、
マイコプラズマ・サリバリウム及び肺炎マイコプラズマ
から成る群から選択されるマイコプラズマである請求項
１又は２記載の製剤。
【請求項１３】２〜72時間以内に患者の循環中の上記結
合体の量を10〜85％まで低減するのに十分な量の、上記
結合体と特異的に結合する第２抗体を別個の成分として
医薬的に許容可能な滅菌注入ビヒクルと組み合わせてさ
らに含有する請求項１記載の製剤。
【請求項１４】上記結合体と特異的に結合する第２抗体
をさらに含有し、上記第２抗体は、上記感染の部位での
上記結合体の取り込みを最適化するのに十分な上記結合
体の投与後の時点で、２〜72時間以内に患者の循環中の
上記結合体の量を10〜85％まで低減するのに十分な患者
者に投与される請求項２記載の製剤。
【請求項１５】上記治療がその投与の副作用として造血
毒性を引き起こす抗生物質又は細胞毒性剤であり、上記
薬剤の造血毒性を軽減又は防止するのに十分な量のサイ
トカインをさらに含有する請求項１記載の製剤。
【請求項１６】上記治療薬がその投与の副作用として造
血毒性を引き起こす抗生物質又は細胞毒性剤であり、上
記薬剤の造血毒性を軽減又は防止するのに十分な量のサ
イトカインをさらに含有し、上記サイトカインは上記治
療用結合体投与の前、同時、又は後の時点で上記患者に
投与される請求項２記載の製剤。
【請求項１７】上記抗体もしくは抗体断片が病原体の種
々の段階で存在するエピトープを結合する請求項10また
は11記載の製剤。