JPH07132092A - 新規ないんげん豆遺伝子 - Google Patents
新規ないんげん豆遺伝子Info
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- JPH07132092A JPH07132092A JP5305988A JP30598893A JPH07132092A JP H07132092 A JPH07132092 A JP H07132092A JP 5305988 A JP5305988 A JP 5305988A JP 30598893 A JP30598893 A JP 30598893A JP H07132092 A JPH07132092 A JP H07132092A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 耐虫性作物を作出するための、あるいはいん
げん豆ゲノム解析及びいんげん豆品種間の遺伝分析をす
るための、いんげん豆の品種名ケンタッキーワンダーの
レクチン様蛋白質遺伝子の単離と、その構造を解析する
ことにある。 【構成】 いんげん豆の品種名ケンタッキーワンダーの
レクチン様蛋白質のアミノ酸配列をコードしている塩基
配列を有することを特徴とする遺伝子。
げん豆ゲノム解析及びいんげん豆品種間の遺伝分析をす
るための、いんげん豆の品種名ケンタッキーワンダーの
レクチン様蛋白質遺伝子の単離と、その構造を解析する
ことにある。 【構成】 いんげん豆の品種名ケンタッキーワンダーの
レクチン様蛋白質のアミノ酸配列をコードしている塩基
配列を有することを特徴とする遺伝子。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、いんげん豆の品種名ケ
ンタッキーワンダーのレクチン様蛋白質クローン化ＤＮ
Ａ、その断片並びに、上記のクローン化ＤＮＡまたは断
片が組み込まれたプラスミド、または、植物、動物、微
生物に関する。
ンタッキーワンダーのレクチン様蛋白質クローン化ＤＮ
Ａ、その断片並びに、上記のクローン化ＤＮＡまたは断
片が組み込まれたプラスミド、または、植物、動物、微
生物に関する。
【０００２】
【従来の技術】いんげん豆には、アズキゾウムシなどに
対して耐虫性をもたらす因子であるα−アミラーゼイン
ヒビターが含まれている。このα−アミラーゼインヒビ
ターのうちの一つは、近年いんげん豆の品種テンダーグ
リーンよりクローニングされ、遺伝子レベルでもその構
造が明らかとなった。その結果、遺伝子としてはレクチ
ン様蛋白質遺伝子の一部としてコードされていることが
わかっている〔Ｌ．Ｍホフマン（Ｌ．Ｍ． Ｈｏｆｆｍ
ａｎｎ）分子及び応用遺伝学（Ｊ． Ｍｏｌ．Ａｐｐ
ｌ． Ｇｅｎｅｔ．）１９８４年 ２巻 ４４７ページ
から４５３ページ〕。従って、耐虫性α−アミラーゼイ
ンヒビターは遺伝子としては、レクチン様蛋白質である
と言える。このレクチン様蛋白質遺伝子、α−アミラー
ゼインヒビター、および耐虫性との関連は古くより詳細
に検討されてきた。しかしながら、α−アミラーゼイン
ヒビターとして総称される蛋白質は、いんげん豆で多く
の種類が検出される。そのうちのいくつかのものは、も
ともと１種類のものが修飾を受けた結果多くの種類のα
−アミラーゼが検出されるであることがわかっているが
〔ジャクイン・モレノとマーチン・Ｊ・クリスピールス
（ＪｏａｑｕｉｎＭｅｒｅｎｏ ａｎｄ Ｍａａｒｔｅ
ｎ Ｊ． Ｃｈｒｉｓｐｅｅｌｓ）、プロシーディング
ス オブ ザ ナショナル アカデミー オブ サイエ
ンシーズオブ ザ ＵＳＡ（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ）１９８９年 ８６巻
第７８８５ペーシから７８８９ページ〕、まだ未発見の
レクチン様蛋白質遺伝子及びα−アミラーゼインヒビタ
ー遺伝子も多数存在すると推定される。また、いんげん
豆では遺伝子が分子レベルで解析されているものは少な
く、品種間差のある遺伝子はほとんど見いだされてな
い。従って、品種の遺伝子分析やゲノム解析のマーカー
として利用可能な遺伝子はほとんどない現状である。そ
して、すでにクローニングされているいんげん豆の品種
名テンダーグリーンのレクチン様蛋白質の他には、耐虫
性α−アミラーゼの遺伝子をコードするＤＮＡはクロー
ニングされておらず、またいんげん豆の場合は、品種特
異的遺伝子マーカーもない。従って、新規のレクチン様
蛋白質遺伝子をクローニングできれば、耐虫性作物の作
出に有用のみならず、品種の遺伝子分析やゲノム解析の
マーカーとしても有用である。
対して耐虫性をもたらす因子であるα−アミラーゼイン
ヒビターが含まれている。このα−アミラーゼインヒビ
ターのうちの一つは、近年いんげん豆の品種テンダーグ
リーンよりクローニングされ、遺伝子レベルでもその構
造が明らかとなった。その結果、遺伝子としてはレクチ
ン様蛋白質遺伝子の一部としてコードされていることが
わかっている〔Ｌ．Ｍホフマン（Ｌ．Ｍ． Ｈｏｆｆｍ
ａｎｎ）分子及び応用遺伝学（Ｊ． Ｍｏｌ．Ａｐｐ
ｌ． Ｇｅｎｅｔ．）１９８４年 ２巻 ４４７ページ
から４５３ページ〕。従って、耐虫性α−アミラーゼイ
ンヒビターは遺伝子としては、レクチン様蛋白質である
と言える。このレクチン様蛋白質遺伝子、α−アミラー
ゼインヒビター、および耐虫性との関連は古くより詳細
に検討されてきた。しかしながら、α−アミラーゼイン
ヒビターとして総称される蛋白質は、いんげん豆で多く
の種類が検出される。そのうちのいくつかのものは、も
ともと１種類のものが修飾を受けた結果多くの種類のα
−アミラーゼが検出されるであることがわかっているが
〔ジャクイン・モレノとマーチン・Ｊ・クリスピールス
（ＪｏａｑｕｉｎＭｅｒｅｎｏ ａｎｄ Ｍａａｒｔｅ
ｎ Ｊ． Ｃｈｒｉｓｐｅｅｌｓ）、プロシーディング
ス オブ ザ ナショナル アカデミー オブ サイエ
ンシーズオブ ザ ＵＳＡ（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ）１９８９年 ８６巻
第７８８５ペーシから７８８９ページ〕、まだ未発見の
レクチン様蛋白質遺伝子及びα−アミラーゼインヒビタ
ー遺伝子も多数存在すると推定される。また、いんげん
豆では遺伝子が分子レベルで解析されているものは少な
く、品種間差のある遺伝子はほとんど見いだされてな
い。従って、品種の遺伝子分析やゲノム解析のマーカー
として利用可能な遺伝子はほとんどない現状である。そ
して、すでにクローニングされているいんげん豆の品種
名テンダーグリーンのレクチン様蛋白質の他には、耐虫
性α−アミラーゼの遺伝子をコードするＤＮＡはクロー
ニングされておらず、またいんげん豆の場合は、品種特
異的遺伝子マーカーもない。従って、新規のレクチン様
蛋白質遺伝子をクローニングできれば、耐虫性作物の作
出に有用のみならず、品種の遺伝子分析やゲノム解析の
マーカーとしても有用である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、耐虫
性作物の作出に必要な耐虫性遺伝子を豊富化するととも
に、この遺伝子を組み込んだ新しい生物を提供する点に
ある。本発明の他の目的は、この新規遺伝子を品種の遺
伝子分析やいんげん豆ゲノム解析用マーカーとして利用
する道を提供する点にある。
性作物の作出に必要な耐虫性遺伝子を豊富化するととも
に、この遺伝子を組み込んだ新しい生物を提供する点に
ある。本発明の他の目的は、この新規遺伝子を品種の遺
伝子分析やいんげん豆ゲノム解析用マーカーとして利用
する道を提供する点にある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者は、前記課題解
決のために鋭意研究を重ねた結果、いんげん豆の品種名
ケンタッキーワンダーのレクチン様蛋白質遺伝子のクロ
ーニング及び塩基配列の解析に成功し、このいんげん豆
の品種名ケンタッキーワンダーのレクチン様蛋白質のア
ミノ酸配列をコードしている塩基配列が、いんげん豆の
品種テンダーグーリーンのそれと較べて、かなり異った
配列を持つものであり、そのホモロジーは約７１％であ
ることを発見し（図５参照）、本発明に至ったものであ
る。ちなみに、いんげん豆の品種名大正金時のレクチン
様蛋白質のアミノ酸配列をコードしている塩基配列は、
いんげん豆の品種テンダーグリーンのそれと較べてその
ホモロジーは約９９．８％であり（図４参照）、ほぼ同
一の遺伝子であった。
決のために鋭意研究を重ねた結果、いんげん豆の品種名
ケンタッキーワンダーのレクチン様蛋白質遺伝子のクロ
ーニング及び塩基配列の解析に成功し、このいんげん豆
の品種名ケンタッキーワンダーのレクチン様蛋白質のア
ミノ酸配列をコードしている塩基配列が、いんげん豆の
品種テンダーグーリーンのそれと較べて、かなり異った
配列を持つものであり、そのホモロジーは約７１％であ
ることを発見し（図５参照）、本発明に至ったものであ
る。ちなみに、いんげん豆の品種名大正金時のレクチン
様蛋白質のアミノ酸配列をコードしている塩基配列は、
いんげん豆の品種テンダーグリーンのそれと較べてその
ホモロジーは約９９．８％であり（図４参照）、ほぼ同
一の遺伝子であった。
【０００５】すなわち、本発明の第１は、いんげん豆の
品種名ケンタッキーワンダーのレクチン様蛋白質のアミ
ノ酸配列をコードしている塩基配列を有することを特徴
とする遺伝子に関する。
品種名ケンタッキーワンダーのレクチン様蛋白質のアミ
ノ酸配列をコードしている塩基配列を有することを特徴
とする遺伝子に関する。
【０００６】本発明の第２は、前記遺伝子を含むベクタ
ーに関する。
ーに関する。
【０００７】本発明の第３は、前記遺伝子が組み込まれ
た生物に関する。前記生物は植物、動物または微生物を
意味する。
た生物に関する。前記生物は植物、動物または微生物を
意味する。
【０００８】本発明の遺伝子は、つぎのようにして得る
ことができる。すなわち、前記遺伝子はレクチン様蛋白
質の適当な配列をもとにしたプライマーを化学合成し、
これを用いてゲノミックＤＮＡよりポリメリゼーション
・チェイン・リアクション法によりクローニングでき
る。また、既知の遺伝子か新規遺伝子であるかの区別
は、得られた遺伝子の電気泳動法による分子量測定によ
り推定できる。さらに、蛍光色素を用いた、ポリメリゼ
ーションチェインターミネーション法等により、ＤＮＡ
の全塩基配列決定を行うことができ、これにより新規遺
伝子であることを確認した。得られた遺伝子を構造解析
した結果、テンダーグリーンのレクチン様蛋白質の遺伝
子とホモロジーを有しており、このことが、得られた遺
伝子がいんげん豆の品種名ケンタッキーワンダーのレク
チン様蛋白質の遺伝子であることの確証となった。この
塩基配列は電子出願上１つの図ではおさまらないので図
１〜３に分けて記載した。
ことができる。すなわち、前記遺伝子はレクチン様蛋白
質の適当な配列をもとにしたプライマーを化学合成し、
これを用いてゲノミックＤＮＡよりポリメリゼーション
・チェイン・リアクション法によりクローニングでき
る。また、既知の遺伝子か新規遺伝子であるかの区別
は、得られた遺伝子の電気泳動法による分子量測定によ
り推定できる。さらに、蛍光色素を用いた、ポリメリゼ
ーションチェインターミネーション法等により、ＤＮＡ
の全塩基配列決定を行うことができ、これにより新規遺
伝子であることを確認した。得られた遺伝子を構造解析
した結果、テンダーグリーンのレクチン様蛋白質の遺伝
子とホモロジーを有しており、このことが、得られた遺
伝子がいんげん豆の品種名ケンタッキーワンダーのレク
チン様蛋白質の遺伝子であることの確証となった。この
塩基配列は電子出願上１つの図ではおさまらないので図
１〜３に分けて記載した。
【０００９】第３番目の本発明である前記ＤＮＡ鎖を含
む生物はつぎのようにして製造することができる。すな
わち、本発明の遺伝子を適当な植物用発現ベクター、例
えばＰＢＩ １２１（クローンテック社製）、ＢＩＮ１
９（Ｎｕｃｌｅｉｃ，Ａｃｉｄ，Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１
２，８７１１−８７２１，１９８２年）、などに接続す
ることにより、植物等でいんげん豆・ケンタッキーワン
ダーのレクチン様蛋白質を生産させる発現ベクターを構
築することができる。このようにして、いんげん豆・ケ
ンタッキーワンダーのレクチン様蛋白質遺伝子を連結し
て構築した発現ベクター、例えばアグロバクテリウムに
よる植物の形質転換法などによって、例えばタバコ、ジ
ャガイモ、アラビドプシス、アスパラガス、トマト、あ
ずき等に導入し、遺伝子組換え植物を作製できる。また
例えばエレクトロポレーション法、例えばパーティクル
ガン法によって、例えばダイズ、イネ、トウロモコシ等
の植物、動物または微生物に、直接遺伝子を導入し、形
質転換植物を作製することができる。またさらに、植物
等に導入したい遺伝子を、いんげん豆・ケンタッキーワ
ンダーのレクチン様蛋白質遺伝子のプロモーター部分に
連結し、前記と同様の植物等への遺伝子導入の手法を用
いて導入すれば、組織特異的発現のプロモーターとして
使用できる。
む生物はつぎのようにして製造することができる。すな
わち、本発明の遺伝子を適当な植物用発現ベクター、例
えばＰＢＩ １２１（クローンテック社製）、ＢＩＮ１
９（Ｎｕｃｌｅｉｃ，Ａｃｉｄ，Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１
２，８７１１−８７２１，１９８２年）、などに接続す
ることにより、植物等でいんげん豆・ケンタッキーワン
ダーのレクチン様蛋白質を生産させる発現ベクターを構
築することができる。このようにして、いんげん豆・ケ
ンタッキーワンダーのレクチン様蛋白質遺伝子を連結し
て構築した発現ベクター、例えばアグロバクテリウムに
よる植物の形質転換法などによって、例えばタバコ、ジ
ャガイモ、アラビドプシス、アスパラガス、トマト、あ
ずき等に導入し、遺伝子組換え植物を作製できる。また
例えばエレクトロポレーション法、例えばパーティクル
ガン法によって、例えばダイズ、イネ、トウロモコシ等
の植物、動物または微生物に、直接遺伝子を導入し、形
質転換植物を作製することができる。またさらに、植物
等に導入したい遺伝子を、いんげん豆・ケンタッキーワ
ンダーのレクチン様蛋白質遺伝子のプロモーター部分に
連結し、前記と同様の植物等への遺伝子導入の手法を用
いて導入すれば、組織特異的発現のプロモーターとして
使用できる。
【００１０】
（ａ） いんげん豆ＤＮＡの調製 いんげん豆の品種名ケンタッキーワンダー、大正金時を
含む４種類のいんげん豆の品種についてＤＮＡの抽出を
行った。豆より、セチル・トリメチル・アンモニウム・
ブロミド法（ＣＴＡＢ法）を用いてＤＮＡ調製を行っ
た。以下にその操作を示す。いんげん豆１０ｇを乳鉢で
荒く摩砕後コーヒーミルで粉末になるまでで摩砕した。
豆粉末に５０ｍｌの緩衝液（２％セチル・トリメチル・
アンモニウム・ブロミド；０．１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐ
Ｈ８．０；１．４Ｍ ＮａＣｌ；１％ポリビニルピロリ
ドン）を加えて撹拌し、さらに５０ｍｌのクロロホルム
・イソアミルアルコール混合液（クロロホルム２４に対
してイソアミルアルコール１の比率）を加えさらに撹拌
する。その後遠心分離機で遠心分離し、上清部に再び５
０ｍｌのクロロホルム・イソアミルアルコール混合液
（クロロホルム２４に対してイソアミルアルコール１の
比率）を加えさらに撹拌する。その後再び遠心分離機で
遠心分離し上清部に４ｍｌの１０％セチル・トリメチル
・アンモニウム・ブロミドを加え、さらに等容積の沈殿
用緩衝液（１％セチル・トリメチル・アンモニウム・ブ
ロミド；５ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０；１０ｍＭ
ＥＤＴＡ）を加え撹拌後、遠心分離機で遠心分離す
る。遠心沈殿部に緩衝液（１０ｍＭトリス−ＨＣｌ；１
ｍＭ ＥＤＴＡ；ｐＨ８．０）５ｍｌを加え、溶解後エ
タノール沈殿を行い、ＤＮＡ標品とした。この操作の結
果４種類のいんげん豆より４種類のＤＮＡを得た。
含む４種類のいんげん豆の品種についてＤＮＡの抽出を
行った。豆より、セチル・トリメチル・アンモニウム・
ブロミド法（ＣＴＡＢ法）を用いてＤＮＡ調製を行っ
た。以下にその操作を示す。いんげん豆１０ｇを乳鉢で
荒く摩砕後コーヒーミルで粉末になるまでで摩砕した。
豆粉末に５０ｍｌの緩衝液（２％セチル・トリメチル・
アンモニウム・ブロミド；０．１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐ
Ｈ８．０；１．４Ｍ ＮａＣｌ；１％ポリビニルピロリ
ドン）を加えて撹拌し、さらに５０ｍｌのクロロホルム
・イソアミルアルコール混合液（クロロホルム２４に対
してイソアミルアルコール１の比率）を加えさらに撹拌
する。その後遠心分離機で遠心分離し、上清部に再び５
０ｍｌのクロロホルム・イソアミルアルコール混合液
（クロロホルム２４に対してイソアミルアルコール１の
比率）を加えさらに撹拌する。その後再び遠心分離機で
遠心分離し上清部に４ｍｌの１０％セチル・トリメチル
・アンモニウム・ブロミドを加え、さらに等容積の沈殿
用緩衝液（１％セチル・トリメチル・アンモニウム・ブ
ロミド；５ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０；１０ｍＭ
ＥＤＴＡ）を加え撹拌後、遠心分離機で遠心分離す
る。遠心沈殿部に緩衝液（１０ｍＭトリス−ＨＣｌ；１
ｍＭ ＥＤＴＡ；ｐＨ８．０）５ｍｌを加え、溶解後エ
タノール沈殿を行い、ＤＮＡ標品とした。この操作の結
果４種類のいんげん豆より４種類のＤＮＡを得た。
【００１１】（ｂ） いんげん豆のＤＮＡよりレクチン
様蛋白質のＤＮＡのクローニング。 実施例（ａ）によって得られたいんげん豆ＤＮＡを材料
としてポリメリゼーション・チェイン・リアクション反
応を行った。反応条件は、ＤＮＡ変性ステップ：９５
℃、１分、ＤＮＡアニール：５５℃、２分、ポリメリゼ
ーション反応：７２℃、３分、これを２５サイクル行っ
た。反応スケールは５０μｌで、１サンプルに付き３つ
反応を行った（３×５０μｌ）。反応物を分析した結
果、おのおのの品種のいんげん豆のＤＮＡよりいんげん
豆のレクチン様蛋白質をコードすると推定されるＤＮＡ
断片が得られた。この得られたＤＮＡ断片を０．８％ア
ガロースを用いる電気泳動法により、分子量の推定を試
みた結果、いんげん豆のうち、品種名ケンタッキーワン
ダーのレクチン様蛋白質遺伝子が、分子量に特に大きな
変異があることが判明した。
様蛋白質のＤＮＡのクローニング。 実施例（ａ）によって得られたいんげん豆ＤＮＡを材料
としてポリメリゼーション・チェイン・リアクション反
応を行った。反応条件は、ＤＮＡ変性ステップ：９５
℃、１分、ＤＮＡアニール：５５℃、２分、ポリメリゼ
ーション反応：７２℃、３分、これを２５サイクル行っ
た。反応スケールは５０μｌで、１サンプルに付き３つ
反応を行った（３×５０μｌ）。反応物を分析した結
果、おのおのの品種のいんげん豆のＤＮＡよりいんげん
豆のレクチン様蛋白質をコードすると推定されるＤＮＡ
断片が得られた。この得られたＤＮＡ断片を０．８％ア
ガロースを用いる電気泳動法により、分子量の推定を試
みた結果、いんげん豆のうち、品種名ケンタッキーワン
ダーのレクチン様蛋白質遺伝子が、分子量に特に大きな
変異があることが判明した。
【００１２】（ｃ） クローン化ケンタッキーワンダー
レクチン様蛋白質のＤＮＡ塩基配列の決定。 実施例（ｂ）によって得られたレクチン様蛋白質をコー
ドするＤＮＡ断片のうち、品種名ケンタッキーワンダー
および大正金時由来のＤＮＡ断片について、ＰＵＣ１９
プラスミドに組み込んだ。このレクチン様蛋白質をコー
ドするＤＮＡ断片をＰＵＣ１９プラスミドに組み込んだ
プラスミドを大腸菌ＪＭ１０３ストレインに導入し、こ
の大腸菌を増殖し、これよりアルカリ−ＳＤＳ法を用い
てプラスミドＤＮＡを抽出精製した。その結果このプラ
スミドを大量に増幅することに成功し、以降の実験に用
いた。
レクチン様蛋白質のＤＮＡ塩基配列の決定。 実施例（ｂ）によって得られたレクチン様蛋白質をコー
ドするＤＮＡ断片のうち、品種名ケンタッキーワンダー
および大正金時由来のＤＮＡ断片について、ＰＵＣ１９
プラスミドに組み込んだ。このレクチン様蛋白質をコー
ドするＤＮＡ断片をＰＵＣ１９プラスミドに組み込んだ
プラスミドを大腸菌ＪＭ１０３ストレインに導入し、こ
の大腸菌を増殖し、これよりアルカリ−ＳＤＳ法を用い
てプラスミドＤＮＡを抽出精製した。その結果このプラ
スミドを大量に増幅することに成功し、以降の実験に用
いた。
【００１３】ＤＮＡ塩基配列の決定は、前記のプラスミ
ド約１μｇを材料として、プライマーとしては、東洋紡
績株式会社製のＭ１３フォワード、リバースプライマー
および３種類のカスタムプライマーを用いた。塩基配列
決定反応は、ＡＢＩ社製のダイターミネターＤＮＡ塩基
配列決定用試薬キットを用いて、ＡＢＩ社指定のマニュ
アルに従い反応を行った。さらに反応物は緩衝液（トリ
ス−ＨＣｌ・１ｍＭＥＤＴＡ・ｐＨ８．０）にて平衡化
したバイオラッド社製バイオゲルＰ３０（４００μｌ）
により、ゲルろ過精製を行い、未反応物等を除去し、エ
タノール沈殿を行った。このサンプルをＡＢＩ社製ＤＮ
Ａシーケンサーを用いて電気泳動と遺伝子塩基配列決定
を行った。ＤＮＡとしては、いんげん豆の品種名ケンタ
ッキーワンダーおよび大正金時の２種類についてＤＮＡ
全塩基配列の決定を行った。
ド約１μｇを材料として、プライマーとしては、東洋紡
績株式会社製のＭ１３フォワード、リバースプライマー
および３種類のカスタムプライマーを用いた。塩基配列
決定反応は、ＡＢＩ社製のダイターミネターＤＮＡ塩基
配列決定用試薬キットを用いて、ＡＢＩ社指定のマニュ
アルに従い反応を行った。さらに反応物は緩衝液（トリ
ス−ＨＣｌ・１ｍＭＥＤＴＡ・ｐＨ８．０）にて平衡化
したバイオラッド社製バイオゲルＰ３０（４００μｌ）
により、ゲルろ過精製を行い、未反応物等を除去し、エ
タノール沈殿を行った。このサンプルをＡＢＩ社製ＤＮ
Ａシーケンサーを用いて電気泳動と遺伝子塩基配列決定
を行った。ＤＮＡとしては、いんげん豆の品種名ケンタ
ッキーワンダーおよび大正金時の２種類についてＤＮＡ
全塩基配列の決定を行った。
【００１４】（ｄ） 遺伝子の解析。 実施例（ｃ）によって決定された、いんげん豆のレクチ
ン様蛋白質をコードするＤＮＡ断片の塩基配列の解析を
行った結果、いんげん豆の品種名大正金時の遺伝子は、
既知のいんげん豆の品種名テンダーグリーンのレクチン
様蛋白質をコードするＤＮＡとほぼ完全に一致した（９
９．８％の一致）。このデータは図４に相同性プロット
として示す。しかしながら、いんげん豆の品種名ケンタ
ッキーワンダーのレクチン様蛋白質は７１％の相同性を
示し、大正金時やテンダーグリーンのレクチン様蛋白質
とは異なる遺伝子である。この結果は、図５に相同性プ
ロットとして示す。しかも十分な相同性を示すことから
レクチン様蛋白質であることは、明らかで、新規なレク
チン様蛋白質遺伝子であることが確証された。
ン様蛋白質をコードするＤＮＡ断片の塩基配列の解析を
行った結果、いんげん豆の品種名大正金時の遺伝子は、
既知のいんげん豆の品種名テンダーグリーンのレクチン
様蛋白質をコードするＤＮＡとほぼ完全に一致した（９
９．８％の一致）。このデータは図４に相同性プロット
として示す。しかしながら、いんげん豆の品種名ケンタ
ッキーワンダーのレクチン様蛋白質は７１％の相同性を
示し、大正金時やテンダーグリーンのレクチン様蛋白質
とは異なる遺伝子である。この結果は、図５に相同性プ
ロットとして示す。しかも十分な相同性を示すことから
レクチン様蛋白質であることは、明らかで、新規なレク
チン様蛋白質遺伝子であることが確証された。
【００１５】
【発明の効果】本発明は、いんげん豆のうちの１つの変
種であるケンタッキーワンダーに、従来のテンダーグリ
ーンのものとは遺伝子配列の異なる新たなレクチン様蛋
白質遺伝子を見出し、クローニングに成功し、さらに全
塩基配列を決定した。この遺伝子は、新規耐虫性遺伝子
としての利用が期待される。またその上流部分の塩基配
列は、従来のレクチン様蛋白質のプロモーターと著しく
異なるので新規プロモーター配列として産業上有用な利
用が期待される。さらにこれらの結果、レクチン様蛋白
質遺伝子は、いんげん豆の品種間において構造に違いが
あることがわかった。この違いより、このレクチン様蛋
白質遺伝子は、いんげん豆のゲノム解析あるいはいんげ
ん豆の品種の遺伝解析のＤＮＡマーカーとしても有用で
ある。
種であるケンタッキーワンダーに、従来のテンダーグリ
ーンのものとは遺伝子配列の異なる新たなレクチン様蛋
白質遺伝子を見出し、クローニングに成功し、さらに全
塩基配列を決定した。この遺伝子は、新規耐虫性遺伝子
としての利用が期待される。またその上流部分の塩基配
列は、従来のレクチン様蛋白質のプロモーターと著しく
異なるので新規プロモーター配列として産業上有用な利
用が期待される。さらにこれらの結果、レクチン様蛋白
質遺伝子は、いんげん豆の品種間において構造に違いが
あることがわかった。この違いより、このレクチン様蛋
白質遺伝子は、いんげん豆のゲノム解析あるいはいんげ
ん豆の品種の遺伝解析のＤＮＡマーカーとしても有用で
ある。
【図１】本発明のいんげん豆の品種名ケンタッキーワン
ダーのレクチン様蛋白質のアミノ酸配列をコードしてい
る塩基配列の一部を示す。
ダーのレクチン様蛋白質のアミノ酸配列をコードしてい
る塩基配列の一部を示す。
【図２】本発明のいんげん豆の品種名ケンタッキーワン
ダーのレクチン様蛋白質のアミノ酸配列をコードしてい
る塩基配列の一部（図１のつづき）を示す。
ダーのレクチン様蛋白質のアミノ酸配列をコードしてい
る塩基配列の一部（図１のつづき）を示す。
【図３】本発明のいんげん豆の品種名ケンタッキーワン
ダーのレクチン様蛋白質のアミノ酸配列をコードしてい
る塩基配列の一部（図２のつづき）を示す。
ダーのレクチン様蛋白質のアミノ酸配列をコードしてい
る塩基配列の一部（図２のつづき）を示す。
【図４】いんげん豆の品種名大正金時とテンダーグリー
ンのＬＬＰ遺伝子の相同性プロットを示す。重なってい
るところが同一であることを意味している。
ンのＬＬＰ遺伝子の相同性プロットを示す。重なってい
るところが同一であることを意味している。
【図５】いんげん豆の品種名ケンタッキーワンダーとテ
ンダーグリーンのＬＬＰ遺伝子の相同性プロットを示
す。重なっているところが同一であることを意味してい
る。
ンダーグリーンのＬＬＰ遺伝子の相同性プロットを示
す。重なっているところが同一であることを意味してい
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:19）
Claims (5)
- 【請求項１】 いんげん豆の品種名ケンタッキーワンダ
ーのレクチン様蛋白質のアミノ酸配列をコードしている
塩基配列を有することを特徴とする遺伝子。 - 【請求項２】 前記塩基配列が図１、２、３に示された
ものである請求項１記載の遺伝子 - 【請求項３】 請求項１または２記載の遺伝子を含むこ
とを特徴とするベクター。 - 【請求項４】 請求項１または２記載の遺伝子が組み込
まれたことを特徴とする生物。 - 【請求項５】 請求項１または２記載の遺伝子のプロモ
ーター領域のＤＮＡ鎖。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5305988A JPH07132092A (ja) | 1993-11-11 | 1993-11-11 | 新規ないんげん豆遺伝子 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5305988A JPH07132092A (ja) | 1993-11-11 | 1993-11-11 | 新規ないんげん豆遺伝子 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07132092A true JPH07132092A (ja) | 1995-05-23 |
Family
ID=17951725
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5305988A Pending JPH07132092A (ja) | 1993-11-11 | 1993-11-11 | 新規ないんげん豆遺伝子 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07132092A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009148286A (ja) * | 1997-08-12 | 2009-07-09 | Univ North Carolina | 遺伝子工学的に作製されるウキクサ |
| US20140366217A1 (en) * | 2011-06-08 | 2014-12-11 | Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuaria - Embrapa | Mutants of alpha-amylase inhibitors isolated from phaseolus vulgaris capable of controlling insect pests, compositions containing these mutants and method of using the same |
-
1993
- 1993-11-11 JP JP5305988A patent/JPH07132092A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009148286A (ja) * | 1997-08-12 | 2009-07-09 | Univ North Carolina | 遺伝子工学的に作製されるウキクサ |
| US20140366217A1 (en) * | 2011-06-08 | 2014-12-11 | Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuaria - Embrapa | Mutants of alpha-amylase inhibitors isolated from phaseolus vulgaris capable of controlling insect pests, compositions containing these mutants and method of using the same |
| US10941387B2 (en) * | 2011-06-08 | 2021-03-09 | Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuária—Embrapa | Alpha amylase mutant inhibitors isolated from phaseolus vulgaris with properties of controlling insect pests, compositions containing such mutants, and method of using thereof |
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