JPH07149635A - ホスファチジルイノシトール ３−キナーゼに依存する状態の治療のための製剤 - Google Patents
ホスファチジルイノシトール ３−キナーゼに依存する状態の治療のための製剤Info
- Publication number
- JPH07149635A JPH07149635A JP6245278A JP24527894A JPH07149635A JP H07149635 A JPH07149635 A JP H07149635A JP 6245278 A JP6245278 A JP 6245278A JP 24527894 A JP24527894 A JP 24527894A JP H07149635 A JPH07149635 A JP H07149635A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- kinase
- formula
- phosphatidylinositol
- compound
- active ingredient
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
- A61K31/585—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin containing lactone rings, e.g. oxandrolone, bufalin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 ビリジン及びその類似体を用いてヒトにおけ
るホスフェチジルイノシトール ３−キナーゼに依存す
る状態、特に腫瘍を治療する。 【構成】 式Ｉ: 【化１】 （式中、Ｒはメトキシ、Ｒ1はＯＨ、Ｒ2は、＝Ｏ及びＲ3
は＝Ｏを表わす。）で示される化合物を活性成分とする
腫瘍治療のための製剤。
るホスフェチジルイノシトール ３−キナーゼに依存す
る状態、特に腫瘍を治療する。 【構成】 式Ｉ: 【化１】 （式中、Ｒはメトキシ、Ｒ1はＯＨ、Ｒ2は、＝Ｏ及びＲ3
は＝Ｏを表わす。）で示される化合物を活性成分とする
腫瘍治療のための製剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ビリジン（viridi
n）、デメトキシビリジン（demethoxyviridin)、ビリジ
オール(viridiol)、デメトキシビリジオール(demethoxyv
iridiol)、ビロン(viron)又はウオートマンノロン(wort
mannolone)又は上記の化合物の内の一つの類似体を用い
て、溶解した細胞、全細胞、組織調製物又は生物の細胞
質ホスファチジルイノシトール ３−キナーゼ（ＰＩ
３−キナーゼ）を阻害する方法に関する。そのような化
合物は脊椎動物、特にヒトのホスファチジルイノシトー
ル ３−キナーゼを選択的に阻害するために使用するこ
とも可能であり、ヒトにおけるホスファチジルイノシト
ール ３−キナーゼ依存状態、特に腫瘍を治療するため
に使用される。
n）、デメトキシビリジン（demethoxyviridin)、ビリジ
オール(viridiol)、デメトキシビリジオール(demethoxyv
iridiol)、ビロン(viron)又はウオートマンノロン(wort
mannolone)又は上記の化合物の内の一つの類似体を用い
て、溶解した細胞、全細胞、組織調製物又は生物の細胞
質ホスファチジルイノシトール ３−キナーゼ（ＰＩ
３−キナーゼ）を阻害する方法に関する。そのような化
合物は脊椎動物、特にヒトのホスファチジルイノシトー
ル ３−キナーゼを選択的に阻害するために使用するこ
とも可能であり、ヒトにおけるホスファチジルイノシト
ール ３−キナーゼ依存状態、特に腫瘍を治療するため
に使用される。
【０００２】
【従来の技術】イノシトール リン酸の代謝は種々のホ
ルモン及び成長因子に応答するレセプターが仲介する信
号導入通路（シグナルトランスダクション）の重要な一
部分であると信じられている[例えば、Berridge,M.J.
ら、Nature,312:315-321(1984)、Nishizuka,Y.,Scienc
e,225:1365-1370(1984)を参照]。
ルモン及び成長因子に応答するレセプターが仲介する信
号導入通路（シグナルトランスダクション）の重要な一
部分であると信じられている[例えば、Berridge,M.J.
ら、Nature,312:315-321(1984)、Nishizuka,Y.,Scienc
e,225:1365-1370(1984)を参照]。
【０００３】この信号の通路においては、ホスファチジ
ル 4,5−ビスリン酸がホスホリパーゼＣによって加水分
解されることにより、二つの細胞内セカンドメッセンジ
ャーであるイノシトール 1,4,5−三リン酸及びジアシル
グリセロールが産出される。イノシトール 1,4,5−三−
リン酸は細胞内のＣａ2+貯蔵室からＣａ2+を遊離し、Ｃ
ａ2+/カルモジュリン依存性キナーゼの活性化を引き起
こし、ジアセチルグリセロールはプロテインキナーゼＣ
を活性化する。続いて次の分解が起こる。すなわち、ホ
スファチジルイノシトール ４−キナーゼ及びホスファ
チジルイノシトール−４−ホスフェイトキナーゼによる
段階的リン酸化により迅速にホスファチジルイノシトー
ル 4,5−ビスリン酸が再合成される。これらの二つのキ
ナーゼはセカンドメッセンジャーの生産において重要な
役割を果たしているらしい[例えば、Duell,T.F.,米国特
許第5,001,064(1991)、Shibasaki,F.,ら、J.Biol.Che
m.,266(13):8108-8114(1991)を参照]。
ル 4,5−ビスリン酸がホスホリパーゼＣによって加水分
解されることにより、二つの細胞内セカンドメッセンジ
ャーであるイノシトール 1,4,5−三リン酸及びジアシル
グリセロールが産出される。イノシトール 1,4,5−三−
リン酸は細胞内のＣａ2+貯蔵室からＣａ2+を遊離し、Ｃ
ａ2+/カルモジュリン依存性キナーゼの活性化を引き起
こし、ジアセチルグリセロールはプロテインキナーゼＣ
を活性化する。続いて次の分解が起こる。すなわち、ホ
スファチジルイノシトール ４−キナーゼ及びホスファ
チジルイノシトール−４−ホスフェイトキナーゼによる
段階的リン酸化により迅速にホスファチジルイノシトー
ル 4,5−ビスリン酸が再合成される。これらの二つのキ
ナーゼはセカンドメッセンジャーの生産において重要な
役割を果たしているらしい[例えば、Duell,T.F.,米国特
許第5,001,064(1991)、Shibasaki,F.,ら、J.Biol.Che
m.,266(13):8108-8114(1991)を参照]。
【０００４】ごく最近、他のホスファチジルイノシトー
ルキナーゼが同定され、ある活性化されたチロシンキナ
ーゼと関連付けられている[Courtneidge,S.A.,ら、Cel
l,50:1031-1037(1987)、Kaplan,D.R.ら、Cell,50:1021-
1029(1987)]。このキナーゼはホスファチジルイノシトー
ル３−キナーゼと同定されたが、ホスファチジルイノシ
トール（PI)のイノシトール環の３位をリン酸化して、
ホスファチジルイノシトール ３−リン酸（PI-3P)を生
成することが知られてきた[Whitman,D.ら、Nature,332:
664-646(1988)]。
ルキナーゼが同定され、ある活性化されたチロシンキナ
ーゼと関連付けられている[Courtneidge,S.A.,ら、Cel
l,50:1031-1037(1987)、Kaplan,D.R.ら、Cell,50:1021-
1029(1987)]。このキナーゼはホスファチジルイノシトー
ル３−キナーゼと同定されたが、ホスファチジルイノシ
トール（PI)のイノシトール環の３位をリン酸化して、
ホスファチジルイノシトール ３−リン酸（PI-3P)を生
成することが知られてきた[Whitman,D.ら、Nature,332:
664-646(1988)]。
【０００５】PIに加えて、この酵素もまたホスファチジ
ルイノシトール ４−リン酸およびホスファチジルイノ
シトール 4,5−ビスリン酸をリン酸化して、ホスファチ
ジルイノシトール 3,4−ビスリン酸およびホスファチジ
ルイノシトール 3,4,5−トリリン酸(PIP3)を各々生成す
ることができる[Auger,K.R.ら、Cell,57:167-175(198
9)]。
ルイノシトール ４−リン酸およびホスファチジルイノ
シトール 4,5−ビスリン酸をリン酸化して、ホスファチ
ジルイノシトール 3,4−ビスリン酸およびホスファチジ
ルイノシトール 3,4,5−トリリン酸(PIP3)を各々生成す
ることができる[Auger,K.R.ら、Cell,57:167-175(198
9)]。
【０００６】PI ３−キナーゼはPP60v-src、ポリマーミ
ドルT/PP60c-src、血小板由来の成長因子レセプター、
コロニー刺激因子−1 レセプターおよびインスリンレセ
プターの様なチロシンキナーゼと物理的に結合するが
(例えば、Shibasaki 上記を参照)、それはPI ３−キナ
ーゼが信号導入、細胞分裂、細胞の形質転換およびPI３
−キナーゼと結合し、それを活性化するロテインチロシ
ンキナーゼが関与するその他の細胞内事情における、重
要な、しかしまだ定義されていない役割を有すること示
唆している。PI ３−キナーゼ活性はまた、好中球内お
よび好中球内の血小板内におけるＧ−タンパク質レセプ
ターと関係していることが確認されている［Traynor-Ka
plan,A.E.ら、Nature,334:353-356(1988)及びMitchell,
C.A.ら、Proc.Nat.Acad.Sci.,87:9396-9400(1990)］。
しかし、好中球内におけるPI ３−キナーゼの活性化は
チロシンのリン酸化とは独立して起こっている［Ｖｌａ
ｈｏｓ，Ｃ．Ｊ．ら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，３０
９（３）：２４２−２４８（１９９２）］。
ドルT/PP60c-src、血小板由来の成長因子レセプター、
コロニー刺激因子−1 レセプターおよびインスリンレセ
プターの様なチロシンキナーゼと物理的に結合するが
(例えば、Shibasaki 上記を参照)、それはPI ３−キナ
ーゼが信号導入、細胞分裂、細胞の形質転換およびPI３
−キナーゼと結合し、それを活性化するロテインチロシ
ンキナーゼが関与するその他の細胞内事情における、重
要な、しかしまだ定義されていない役割を有すること示
唆している。PI ３−キナーゼ活性はまた、好中球内お
よび好中球内の血小板内におけるＧ−タンパク質レセプ
ターと関係していることが確認されている［Traynor-Ka
plan,A.E.ら、Nature,334:353-356(1988)及びMitchell,
C.A.ら、Proc.Nat.Acad.Sci.,87:9396-9400(1990)］。
しかし、好中球内におけるPI ３−キナーゼの活性化は
チロシンのリン酸化とは独立して起こっている［Ｖｌａ
ｈｏｓ，Ｃ．Ｊ．ら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，３０
９（３）：２４２−２４８（１９９２）］。
【０００７】PI ３−キナーゼは85 KDa 調節サブユニッ
ト及び110 KDa 触媒サブユニットが堅く結合したヘテロ
ダイマーとして存在し、細胞の複合体の中で、ほとんど
全てのリガンドー活性化成長因子レセプター及び腫瘍遺
伝子タンパク質チロシンキナーゼと共に発見される[Can
tley,L.C.ら、Cell,64:281-302(1991)]。85 KDa 調節サ
ブユニットはPI ３−キナーゼの110 KDa 触媒サブユニ
ットの能力を調節し、成長因子レセプター及びチロシン
リン酸分解タンパク質とを相互作用させるMargolis,C.,
Cell Growth Differ.,3:73-80(1992)]。
ト及び110 KDa 触媒サブユニットが堅く結合したヘテロ
ダイマーとして存在し、細胞の複合体の中で、ほとんど
全てのリガンドー活性化成長因子レセプター及び腫瘍遺
伝子タンパク質チロシンキナーゼと共に発見される[Can
tley,L.C.ら、Cell,64:281-302(1991)]。85 KDa 調節サ
ブユニットはPI ３−キナーゼの110 KDa 触媒サブユニ
ットの能力を調節し、成長因子レセプター及びチロシン
リン酸分解タンパク質とを相互作用させるMargolis,C.,
Cell Growth Differ.,3:73-80(1992)]。
【０００８】PI ３−キナーゼは信号の導入において重
要な酵素であり、特に細胞分裂及び細胞の悪性の形質転
換に密接な関係があるらしいにもかかわらず、PI ３−
キナーゼに対して、阻害活性を有することが確認されて
いる化合物はわずかな数のみである［例えば、Matter,
W.F.ら、Biochem.Biophys.Res.Commun.,186:624-631(19
92)］。本発明方法にて使用される化合物の選択的なPI
３−キナーゼ活性とは異なり、Matterらによって使用さ
れたビオフラビノイド化合物、特にクエルセチン及びそ
の類似体はPI ３−キナーゼ及びプロテインキナーゼＣ
及びPI４−キナーゼのようなその他のキナーゼを阻害す
る（Matterら、前記）。
要な酵素であり、特に細胞分裂及び細胞の悪性の形質転
換に密接な関係があるらしいにもかかわらず、PI ３−
キナーゼに対して、阻害活性を有することが確認されて
いる化合物はわずかな数のみである［例えば、Matter,
W.F.ら、Biochem.Biophys.Res.Commun.,186:624-631(19
92)］。本発明方法にて使用される化合物の選択的なPI
３−キナーゼ活性とは異なり、Matterらによって使用さ
れたビオフラビノイド化合物、特にクエルセチン及びそ
の類似体はPI ３−キナーゼ及びプロテインキナーゼＣ
及びPI４−キナーゼのようなその他のキナーゼを阻害す
る（Matterら、前記）。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明はビリ
ジン、デメトキシビリジン、ビリジオール、デメトキシ
ビリジオール、ビロン又はウオートマンノロン又は上記
の化合物の内の一つの類似体を用いて、溶解した細胞、
全細胞、組織又は生物内のホスファチジルイノシトール
３ーキナーゼを阻害する方法に関する。
ジン、デメトキシビリジン、ビリジオール、デメトキシ
ビリジオール、ビロン又はウオートマンノロン又は上記
の化合物の内の一つの類似体を用いて、溶解した細胞、
全細胞、組織又は生物内のホスファチジルイノシトール
３ーキナーゼを阻害する方法に関する。
【００１０】本発明はまた、上記の化合物又はその類似
体を用いて、哺乳類、特にヒトにおいてホスファチジル
イノシトール ３−キナーゼを阻害する方法に関する。
体を用いて、哺乳類、特にヒトにおいてホスファチジル
イノシトール ３−キナーゼを阻害する方法に関する。
【００１１】さらに本発明は哺乳動物におけるホスファ
チジルイノシトール ３−キナーゼ依存状態、特に腫瘍
を治療する方法に関する。
チジルイノシトール ３−キナーゼ依存状態、特に腫瘍
を治療する方法に関する。
【００１２】
【課題を解決するための手段】本発明は溶解した細胞、
全細胞、組織又は生物内のホスファチジルイノシトール
３−キナーゼを阻害する方法であって、式Ｉ：、
全細胞、組織又は生物内のホスファチジルイノシトール
３−キナーゼを阻害する方法であって、式Ｉ：、
【００１３】
【化４】 [式中、ＲはＨ又はメトキシ； Ｒ1はＣＨ3、ＯＨ、ＯＡ
ｃ、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ又はメタンスルホネート； Ｒ2
は−ＯＨ、−ＯＡｃ、＝Ｏ又は−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキ
ル）；Ｒ3は−ＯＨ、−ＯＡｃ、＝Ｏ又は−Ｏ（Ｃ1−Ｃ
4アルキル）を表わす。但し、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3の二つ以
上が同時にＯＡｃではないことを条件とする。］で示さ
れる化合物、又は式II：
ｃ、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ又はメタンスルホネート； Ｒ2
は−ＯＨ、−ＯＡｃ、＝Ｏ又は−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキ
ル）；Ｒ3は−ＯＨ、−ＯＡｃ、＝Ｏ又は−Ｏ（Ｃ1−Ｃ
4アルキル）を表わす。但し、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3の二つ以
上が同時にＯＡｃではないことを条件とする。］で示さ
れる化合物、又は式II：
【００１４】
【化５】 （式中、Ｒ3’は＝Ｏ又は−ＯＨを表わす。）で示され
る化合物、又は式III：
る化合物、又は式III：
【００１５】
【化６】 （式中、Ｒ2'は＝Ｏ又は−ＯＨを表わし、Ｒ3'は上記の
定義と同意義である。）で示される化合物を上記の溶解
した細胞、全細胞、組織又は生物に接触させることを特
徴とする方法に関する。
定義と同意義である。）で示される化合物を上記の溶解
した細胞、全細胞、組織又は生物に接触させることを特
徴とする方法に関する。
【００１６】本発明はまた、脊椎動物におけるホスファ
チジルイノシトール ３−キナーゼを阻害する方法であ
って、該脊椎動物に、式Ｉ、式II又は式IIIの化合物
を、ホスファチジルイノシトール ３−キナーゼを阻害
する量、投与することを特徴とする方法に関する。 本発明はさらに、そのような治療が必要である脊椎動物
におけるホスファチジルイノシトール ３−キナーゼに
依存する状態を治療する方法であって、上記の脊椎動物
に、式Ｉ、式II又は式IIIの化合物を、ホスファチジル
イノシトール３−キナーゼを阻害する量、投与すること
を特徴とする方法に関する。 上記した様に、本発明は溶解した細胞、全細胞、組織、
調製物又は生物内のホスファチジルイノシトール ３−
キナーゼを阻害する方法であって、上記の全細胞、溶解
した細胞、組織又は生物に式Ｉ、式II又は式IIIの化合
物を接触させることを特徴とする方法に関する。
チジルイノシトール ３−キナーゼを阻害する方法であ
って、該脊椎動物に、式Ｉ、式II又は式IIIの化合物
を、ホスファチジルイノシトール ３−キナーゼを阻害
する量、投与することを特徴とする方法に関する。 本発明はさらに、そのような治療が必要である脊椎動物
におけるホスファチジルイノシトール ３−キナーゼに
依存する状態を治療する方法であって、上記の脊椎動物
に、式Ｉ、式II又は式IIIの化合物を、ホスファチジル
イノシトール３−キナーゼを阻害する量、投与すること
を特徴とする方法に関する。 上記した様に、本発明は溶解した細胞、全細胞、組織、
調製物又は生物内のホスファチジルイノシトール ３−
キナーゼを阻害する方法であって、上記の全細胞、溶解
した細胞、組織又は生物に式Ｉ、式II又は式IIIの化合
物を接触させることを特徴とする方法に関する。
【００１７】「Ｃ1−Ｃ4アルキル」とは炭素数１から４
の、直鎖又は分枝状脂肪鎖であって、例えば、エチル、
プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、se
c-ブチル及びtert-ブチル(t-ブチル）が含まれる。「Ｏ
Ａc」はアセトキシを意味する。式Iの２位の波線は２位
の置換基がα−又はβ−配置のいずれかであることを示
している。式Ｉ中、Ｂ環のＣ−５及びＣ−６の間の点線
及びＥ環のＣ−４及びＣ−20の間の点線は二重結合が存
在するか又は存在しないことを意味する。一般に、式Ｉ
の化合物は指摘された位置は不飽和である。しかし、Ｒ
がＨ、Ｒ2が＝Ｏであり、Ｒ1及びＲ3がＯＡｃである場
合（ジアセチルデメトキシビリジン）にはＣ−５及びＣ
−６の結合は飽和している。ＲがＨ、Ｒ1がＣＨ3であ
り、Ｒ2及びＲ3が＝Ｏである場合（ジヒドロキシビリジ
ン）及びＲがＨ、Ｒ1がＣＨ3であり、Ｒ2及びＲ3が−Ｏ
Ａｃである場合（ジアセチルデメトキシビリジン）には
Ｃ−４及びＣ−20の結合は飽和している。
の、直鎖又は分枝状脂肪鎖であって、例えば、エチル、
プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、se
c-ブチル及びtert-ブチル(t-ブチル）が含まれる。「Ｏ
Ａc」はアセトキシを意味する。式Iの２位の波線は２位
の置換基がα−又はβ−配置のいずれかであることを示
している。式Ｉ中、Ｂ環のＣ−５及びＣ−６の間の点線
及びＥ環のＣ−４及びＣ−20の間の点線は二重結合が存
在するか又は存在しないことを意味する。一般に、式Ｉ
の化合物は指摘された位置は不飽和である。しかし、Ｒ
がＨ、Ｒ2が＝Ｏであり、Ｒ1及びＲ3がＯＡｃである場
合（ジアセチルデメトキシビリジン）にはＣ−５及びＣ
−６の結合は飽和している。ＲがＨ、Ｒ1がＣＨ3であ
り、Ｒ2及びＲ3が＝Ｏである場合（ジヒドロキシビリジ
ン）及びＲがＨ、Ｒ1がＣＨ3であり、Ｒ2及びＲ3が−Ｏ
Ａｃである場合（ジアセチルデメトキシビリジン）には
Ｃ−４及びＣ−20の結合は飽和している。
【００１８】式Ｉ、式II又は式III中、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ2'
及びＲ3'置換基の各結合は一重結合であることが示され
ている。しかし置換基の内のいずれか一つが酸素である
場合には、カルボニル基を形成するために、二重結合が
存在することを当業者は理解できる。
及びＲ3'置換基の各結合は一重結合であることが示され
ている。しかし置換基の内のいずれか一つが酸素である
場合には、カルボニル基を形成するために、二重結合が
存在することを当業者は理解できる。
【００１９】式Ｉ、式II又は式IIIの化合物は当業界に
おいて一般に周知である。α，β−ビリジン（式Ｉにお
いて、Ｒがメトキシ、Ｒ1がＯＨ、Ｒ2及びＲ3が＝Ｏで
ある場合）は、一般人が容易に入手できる菌であるGlic
ladium virens(一度は誤ってTrichoderma virideととし
て分類された）の多数の株の内のいずれかを発酵させる
ことにより生合成的に合成できることが特によく知られ
ている[例えば、Grove,J.F.ら、J.Chem.Soc.,June:3803
-3811(1965)、Neidle,S.ら、J.Chem.Soc.Perkin Trans.
II:760-766(1972)、Blight,M.M.ら、J.Chem.Soc.Perkin
Trans.I：1317-1322(1986)及びJones,R.W.ら、Can.J.M
icrobiol. ,33:963-966(1987)を参照]。
おいて一般に周知である。α，β−ビリジン（式Ｉにお
いて、Ｒがメトキシ、Ｒ1がＯＨ、Ｒ2及びＲ3が＝Ｏで
ある場合）は、一般人が容易に入手できる菌であるGlic
ladium virens(一度は誤ってTrichoderma virideととし
て分類された）の多数の株の内のいずれかを発酵させる
ことにより生合成的に合成できることが特によく知られ
ている[例えば、Grove,J.F.ら、J.Chem.Soc.,June:3803
-3811(1965)、Neidle,S.ら、J.Chem.Soc.Perkin Trans.
II:760-766(1972)、Blight,M.M.ら、J.Chem.Soc.Perkin
Trans.I：1317-1322(1986)及びJones,R.W.ら、Can.J.M
icrobiol. ,33:963-966(1987)を参照]。
【００２０】上記のGliocladium virensの株の内の一つ
を発酵させている間に、通常、ビリジオール（式Ｉにお
いて、Ｒがメトキシ、Ｒ1がＯＨ、Ｒ2が＝Ｏ及びＲ3が
ＯＨである場合）およびビロン（式IIにおいて、Ｒ3’
が＝Ｏである場合）を含む二次的な代謝物が生産され
る。同様に、ウオートマンノロン(wortmannolone)（式I
IIにおいて、Ｒ2'が＝Ｏ、Ｒ3'が−ＯＨである場合）は
用意に入手できるPenicillium wortmanii菌を培養する
ことにより生産される。一旦、生産されると、それらの
化合物の各々は発酵混合物から周知方法により分離さ
れ、精製される（例えば、前記のJones,R.W.ら及びBlig
ht,M.M.らを参照）。
を発酵させている間に、通常、ビリジオール（式Ｉにお
いて、Ｒがメトキシ、Ｒ1がＯＨ、Ｒ2が＝Ｏ及びＲ3が
ＯＨである場合）およびビロン（式IIにおいて、Ｒ3’
が＝Ｏである場合）を含む二次的な代謝物が生産され
る。同様に、ウオートマンノロン(wortmannolone)（式I
IIにおいて、Ｒ2'が＝Ｏ、Ｒ3'が−ＯＨである場合）は
用意に入手できるPenicillium wortmanii菌を培養する
ことにより生産される。一旦、生産されると、それらの
化合物の各々は発酵混合物から周知方法により分離さ
れ、精製される（例えば、前記のJones,R.W.ら及びBlig
ht,M.M.らを参照）。
【００２１】前記したように、ビリジン、ビリジオール
及びビロンを生産するGliocladiumvirens菌は一般人が
容易に入手できる。例えば、G.virens菌は以下の寄託番
号、ATCC 9645(G-21),ATCC 10043,ATCC 1044及びATCC10
045を有し、これらの各々はAmerican Type Culture Col
lection(ATCC)、12301Parklawn Drive,Rockville,MD208
52、から入手でき、菌CMI 24039及びCMI 45553はIntern
ational MycologicalInstitute(以前はCommonwealth My
cological Institute),Baykham Lane,Egham,Surrey,Eng
land TW209TYから入手できる。
及びビロンを生産するGliocladiumvirens菌は一般人が
容易に入手できる。例えば、G.virens菌は以下の寄託番
号、ATCC 9645(G-21),ATCC 10043,ATCC 1044及びATCC10
045を有し、これらの各々はAmerican Type Culture Col
lection(ATCC)、12301Parklawn Drive,Rockville,MD208
52、から入手でき、菌CMI 24039及びCMI 45553はIntern
ational MycologicalInstitute(以前はCommonwealth My
cological Institute),Baykham Lane,Egham,Surrey,Eng
land TW209TYから入手できる。
【００２２】その他の式Ｉの化合物であるデメトキシビ
リジン（式Ｉにおいて、ＲがＨ、Ｒ 1がＯＨ、Ｒ2及びＲ
3が＝Ｏである場合）およびデメトキシビリジオール
（式Ｉにおいて、ＲがＨ、Ｒ1がＯＨ、Ｒ2が＝Ｏ及びＲ
3が−ＯＨである場合）は当業者に周知の方法を用い
て、Nodulisporium hinnuleum菌の多数の株の内のいず
れか一つを発酵させ、標準的な単離及び精製技術により
生産される［例えば、Aldridge,D.C.ら、J.Chem.Soc.Pe
rkin Trans.I：943ー945(1975)、Hanson,J.R.ら、J.Che
m.Soc.Perkin Trans.I：1311ー1314(1985)を参照］。
リジン（式Ｉにおいて、ＲがＨ、Ｒ 1がＯＨ、Ｒ2及びＲ
3が＝Ｏである場合）およびデメトキシビリジオール
（式Ｉにおいて、ＲがＨ、Ｒ1がＯＨ、Ｒ2が＝Ｏ及びＲ
3が−ＯＨである場合）は当業者に周知の方法を用い
て、Nodulisporium hinnuleum菌の多数の株の内のいず
れか一つを発酵させ、標準的な単離及び精製技術により
生産される［例えば、Aldridge,D.C.ら、J.Chem.Soc.Pe
rkin Trans.I：943ー945(1975)、Hanson,J.R.ら、J.Che
m.Soc.Perkin Trans.I：1311ー1314(1985)を参照］。
【００２３】デメトキシビリジンおよびデメトキシビリ
ジオールを生物的に合成するNodulisporium hinnuleum
菌は例えば、以下の寄託番号、ATCC 24911(NRRL 6115)
及びATCC 36102(ACC 3199;CMI 214826)を有し、これら
もまた、前記の住所のATCCから一般人が容易に入手でき
る。ウオートマンノロン（式IIIの化合物において、
Ｒ2'が＝Ｏ、Ｒ3'が−ＯＨである場合）は例えばCMI 44
277のようなPenicillium wortmanii klocker(Taloromyc
es wortmanii)の菌及び種の容易に入手できる微生物の
多数の内の１つを発酵させることにより生産できる。
ジオールを生物的に合成するNodulisporium hinnuleum
菌は例えば、以下の寄託番号、ATCC 24911(NRRL 6115)
及びATCC 36102(ACC 3199;CMI 214826)を有し、これら
もまた、前記の住所のATCCから一般人が容易に入手でき
る。ウオートマンノロン（式IIIの化合物において、
Ｒ2'が＝Ｏ、Ｒ3'が−ＯＨである場合）は例えばCMI 44
277のようなPenicillium wortmanii klocker(Taloromyc
es wortmanii)の菌及び種の容易に入手できる微生物の
多数の内の１つを発酵させることにより生産できる。
【００２４】一旦、ビリジン、ビリジオール、デメトキ
シビリジン、デメトキシビリジオールが単離され、精製
されれば、各々の類似化合物は周知方法により生成さ
れ、周知の式Iの化合物が得られる（例えば、前記のGro
ve,J.F.らHanson,J.R.ら、Aldridge,D.C.ら及びBlight,
M.M.らを参照）。一般に、前記定義の式Ｉの各化合物の
Ｒ1位ヒドロキシ官能基はアセチル化、アルキル化、酸
化又は脱水及びアルキル化され得る。同様に上記の式Ｉ
の化合物の各々のＲ2位の官能基(=Ｏ）はアルキル化さ
れるか、又はアルコールを形成するように還元され得
る。式Ｉの化合物のＲ3位の官能基もまた、Ｒ3が=Ｏの
場合、アルキル化されてアセチル基を形成しても良い。 説明のために、下記の表１において式Ｉの代表的な化合
物の慣用名を示す。しかし、本発明は以下の例示によっ
て限定されることを意図していない。
シビリジン、デメトキシビリジオールが単離され、精製
されれば、各々の類似化合物は周知方法により生成さ
れ、周知の式Iの化合物が得られる（例えば、前記のGro
ve,J.F.らHanson,J.R.ら、Aldridge,D.C.ら及びBlight,
M.M.らを参照）。一般に、前記定義の式Ｉの各化合物の
Ｒ1位ヒドロキシ官能基はアセチル化、アルキル化、酸
化又は脱水及びアルキル化され得る。同様に上記の式Ｉ
の化合物の各々のＲ2位の官能基(=Ｏ）はアルキル化さ
れるか、又はアルコールを形成するように還元され得
る。式Ｉの化合物のＲ3位の官能基もまた、Ｒ3が=Ｏの
場合、アルキル化されてアセチル基を形成しても良い。 説明のために、下記の表１において式Ｉの代表的な化合
物の慣用名を示す。しかし、本発明は以下の例示によっ
て限定されることを意図していない。
【００２５】
【表１】ビリジン、ビリジオール、デメトキシビリジ
ン、デメトキシビリジオール及び代表的な類似体 官能基 慣用名 Ｒ Ｒ1 Ｒ2 Ｒ3 α／β−ビリジン α／β−ＯＣＨ3 ＯＨ =Ｏ =Ｏ １−アセチルビリジン ＯＣＨ3 ＯＡｃ =Ｏ =Ｏ ビリジンの １−メチルエーテル ＯＣＨ3 ＯＣＨ3 =Ｏ =Ｏ デメトキシビリジン Ｈ ＯＨ =Ｏ =Ｏ デメトキシビリジン モノアセテート Ｈ ＯＡｃ =Ｏ =Ｏ デヒドロキシビリジン Ｈ ＣＨ3 =Ｏ =Ｏ デメトキシビリジン モノ メタンスルホネート Ｈ ＯＭｓ =Ｏ =Ｏ ジアセチルデメトキシ ビリドール Ｈ ＯＡｃ =Ｏ −ＯＡｃ ビリジオール ＯＣＨ3 ＯＨ =Ｏ −ＯＨ １−Ｏ−アセチルビリジオール ＯＣＨ3 ＯＡｃ =Ｏ −ＯＨ ビリジオールの１−Ｏ−メチル− メチルエーテル ＯＣＨ3 ＯＣＨ3 =Ｏ −ＯＨ デメトキシビリジオール Ｈ ＯＨ =Ｏ −ＯＨ １−アセチル デメトキシビリジオール Ｈ ＯＡｃ =Ｏ −ＯＨ ジメトキシビリジオールの １−Ｏ−メチルエーテル Ｈ ＯＣＨ3 =Ｏ −ＯＨ
ン、デメトキシビリジオール及び代表的な類似体 官能基 慣用名 Ｒ Ｒ1 Ｒ2 Ｒ3 α／β−ビリジン α／β−ＯＣＨ3 ＯＨ =Ｏ =Ｏ １−アセチルビリジン ＯＣＨ3 ＯＡｃ =Ｏ =Ｏ ビリジンの １−メチルエーテル ＯＣＨ3 ＯＣＨ3 =Ｏ =Ｏ デメトキシビリジン Ｈ ＯＨ =Ｏ =Ｏ デメトキシビリジン モノアセテート Ｈ ＯＡｃ =Ｏ =Ｏ デヒドロキシビリジン Ｈ ＣＨ3 =Ｏ =Ｏ デメトキシビリジン モノ メタンスルホネート Ｈ ＯＭｓ =Ｏ =Ｏ ジアセチルデメトキシ ビリドール Ｈ ＯＡｃ =Ｏ −ＯＡｃ ビリジオール ＯＣＨ3 ＯＨ =Ｏ −ＯＨ １−Ｏ−アセチルビリジオール ＯＣＨ3 ＯＡｃ =Ｏ −ＯＨ ビリジオールの１−Ｏ−メチル− メチルエーテル ＯＣＨ3 ＯＣＨ3 =Ｏ −ＯＨ デメトキシビリジオール Ｈ ＯＨ =Ｏ −ＯＨ １−アセチル デメトキシビリジオール Ｈ ＯＡｃ =Ｏ −ＯＨ ジメトキシビリジオールの １−Ｏ−メチルエーテル Ｈ ＯＣＨ3 =Ｏ −ＯＨ
【００２６】さらにビロン（式IIにおいて、Ｒ3´が＝
Ｏである場合）のアルコールは周知方法により製造で
き、ウオートマンノロン（式IIIにおいて、Ｒ2´が＝
Ｏ、Ｒ3´が−ＯＨである場合）の類似体は、Ｒ2´官能
基を還元するか又はＲ3´官能基を酸化するか、又は両
方を周知方法により行うことによって製造できる。本発
明方法においては、式Ｉ、式II又は式IIIの化合物は、
溶解した細胞又は全細胞内のホスファチジルイノシトー
ル ３−キナーゼを選択的に阻害することに効果的であ
る。この方法はインビトロ系又はインビボ系において行
うことができ、例えば、有糸分裂、細胞増殖又は細胞分
化におけるPI ３−キナーゼの関連性の研究のために薬
理学の道具として利用できる。式Ｉ、式II又は式IIIの
化合物は、細胞内のそれらの化合物の検出を容易にする
ために放射能標識をすることもできる（例えば、トリチ
ウム化）。
Ｏである場合）のアルコールは周知方法により製造で
き、ウオートマンノロン（式IIIにおいて、Ｒ2´が＝
Ｏ、Ｒ3´が−ＯＨである場合）の類似体は、Ｒ2´官能
基を還元するか又はＲ3´官能基を酸化するか、又は両
方を周知方法により行うことによって製造できる。本発
明方法においては、式Ｉ、式II又は式IIIの化合物は、
溶解した細胞又は全細胞内のホスファチジルイノシトー
ル ３−キナーゼを選択的に阻害することに効果的であ
る。この方法はインビトロ系又はインビボ系において行
うことができ、例えば、有糸分裂、細胞増殖又は細胞分
化におけるPI ３−キナーゼの関連性の研究のために薬
理学の道具として利用できる。式Ｉ、式II又は式IIIの
化合物は、細胞内のそれらの化合物の検出を容易にする
ために放射能標識をすることもできる（例えば、トリチ
ウム化）。
【００２７】式Ｉ、式II又は式IIIの化合物を本発明方
法に使用する場合には、それらの化合物をジメチルスル
ホキシド（DMSO)のような有機溶媒に溶解し、HEPES緩衝
液(pH 7.5、MgCl215mM及びEGTA 1mMを含む)を用いて任
意の濃度に希釈する。次に得られた溶液を当業界におい
て周知の方法により、純粋なPI 3−キナーゼ又は細胞と
接触させる。 本発明方法の他の具体例は、脊椎動物、特にヒトのホス
ファチジルイノシトール ３−キナーゼを阻害する方法
を提供することであり、式Ｉ、式II又は式IIIの化合物
を、ホスファチジルイノシトール ３−キナーゼを阻害
する量、該脊椎動物に投与する方法を提供する。
法に使用する場合には、それらの化合物をジメチルスル
ホキシド（DMSO)のような有機溶媒に溶解し、HEPES緩衝
液(pH 7.5、MgCl215mM及びEGTA 1mMを含む)を用いて任
意の濃度に希釈する。次に得られた溶液を当業界におい
て周知の方法により、純粋なPI 3−キナーゼ又は細胞と
接触させる。 本発明方法の他の具体例は、脊椎動物、特にヒトのホス
ファチジルイノシトール ３−キナーゼを阻害する方法
を提供することであり、式Ｉ、式II又は式IIIの化合物
を、ホスファチジルイノシトール ３−キナーゼを阻害
する量、該脊椎動物に投与する方法を提供する。
【００２８】本発明方法の好ましい具体例は、脊椎動物
のホスファチジルイノシトール ３−キナーゼ依存状態
を治療する方法に関し、該脊椎動物に、式Ｉ、式II又は
式IIIの化合物を、ホスファチジルイノシトール ３−
キナーゼを阻害する量、該脊椎動物に投与することに関
する。PI ３−キナーゼ依存状態には、痛み、糖尿病、
炎症、血小板の凝集、アテローム性動脈硬化症及び再狭
窄のような血管の病気、オステオポローシスのような骨
の病気、歯周病、ステロイド又はグルココルチコイドの
処置による骨の減少、クッシング症、パゲット病、骨石
灰脱失症、骨軟化症、悪性の高カルシウム血症、骨転移
によるオステオペニア、上皮小体亢進症、リウマチ又は
変形性関節症などに関係する生化学的過程及び、特に腫
瘍に見られるような異常な細胞の増殖が含まれる。
のホスファチジルイノシトール ３−キナーゼ依存状態
を治療する方法に関し、該脊椎動物に、式Ｉ、式II又は
式IIIの化合物を、ホスファチジルイノシトール ３−
キナーゼを阻害する量、該脊椎動物に投与することに関
する。PI ３−キナーゼ依存状態には、痛み、糖尿病、
炎症、血小板の凝集、アテローム性動脈硬化症及び再狭
窄のような血管の病気、オステオポローシスのような骨
の病気、歯周病、ステロイド又はグルココルチコイドの
処置による骨の減少、クッシング症、パゲット病、骨石
灰脱失症、骨軟化症、悪性の高カルシウム血症、骨転移
によるオステオペニア、上皮小体亢進症、リウマチ又は
変形性関節症などに関係する生化学的過程及び、特に腫
瘍に見られるような異常な細胞の増殖が含まれる。
【００２９】従って、本発明方法の、特に好ましい具体
例はホスファチジルイノシトール３−キナーゼに依存す
る腫瘍、特にリンパ肉腫を、式Ｉ、式II又は式IIIの化
合物を用いて治療する方法に関する。その他のPI ３−
キナーゼに依存する腫瘍としては、例えば、女性の乳腺
癌、大腸癌、頭及び首の表皮癌、白血病、メラノーマ、
卵巣癌、カルシノーマ、プラスマ細胞骨髄腫及び鱗状の
又は小細胞の肺癌が含まれる。具体的に示される治療方
法としては、式Ｉ、式II又は式IIIの化合物はそのまま
で投与するか、又は非経口投与、経皮投与、経直腸投
与、経鼻投与、血中投与又は好ましくは経口投与のため
に、混合及び製剤化して、一回投与剤形の医薬組成物に
することができる。このような医薬組成物は当業界にお
いて周知の方法で調製することができ、少なくとも１以
上の活性のある式Ｉ、式II又は式IIIの化合物を薬剤用
の担体と組み合わせることが含まれる。本明細書にて使
用されている「活性化合物」とは、式Ｉ、式II又は式II
Iの化合物の少なくとも一つを意味する。
例はホスファチジルイノシトール３−キナーゼに依存す
る腫瘍、特にリンパ肉腫を、式Ｉ、式II又は式IIIの化
合物を用いて治療する方法に関する。その他のPI ３−
キナーゼに依存する腫瘍としては、例えば、女性の乳腺
癌、大腸癌、頭及び首の表皮癌、白血病、メラノーマ、
卵巣癌、カルシノーマ、プラスマ細胞骨髄腫及び鱗状の
又は小細胞の肺癌が含まれる。具体的に示される治療方
法としては、式Ｉ、式II又は式IIIの化合物はそのまま
で投与するか、又は非経口投与、経皮投与、経直腸投
与、経鼻投与、血中投与又は好ましくは経口投与のため
に、混合及び製剤化して、一回投与剤形の医薬組成物に
することができる。このような医薬組成物は当業界にお
いて周知の方法で調製することができ、少なくとも１以
上の活性のある式Ｉ、式II又は式IIIの化合物を薬剤用
の担体と組み合わせることが含まれる。本明細書にて使
用されている「活性化合物」とは、式Ｉ、式II又は式II
Iの化合物の少なくとも一つを意味する。
【００３０】そのような組成物中、活性化合物は「活性
成分」として知られている。組成物を製造する場合に、
通常、活性成分は担体と混合するか又は担体で希釈する
か又は担体内に封入して、カプセル、小さな袋、紙又は
その他の容器の形にすることができる。担体を希釈剤と
して作用させる場合、担体は固体、半固体又は媒体とし
て働く液状物質、活性成分のための溶媒の賦形剤でも良
い。従って、組成物は錠剤、丸剤、粉末、トローチ剤、
サシェ剤、カシェ剤、エリキシル、乳剤、溶液、シロッ
プ、懸濁液、ゼラチン軟カプセル、ゼラチン硬カプセ
ル、無菌注射溶液及び無菌パック粉末の形態を取り得
る。好適な担体、賦形剤及び希釈剤のいくつかの例とし
ては、ラクトース、デキストロース、シュークロース、
ソルビトール、マンンニトール、スターチ、アラビアガ
ム、カルシウムホスフェート、アルギネート、カルシウ
ムシリケート、微結晶セルロース、ポリビニルピロリド
ン、セルロース、トラガカントゴム、ゼラチン、シロッ
プ、メチルセルロース、メチルー及びプロピルーヒドロ
キシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアリン
酸、水及び鉱油がある。製剤はさらに潤滑剤、湿潤剤、
乳化剤及び懸濁化剤、保存剤、甘味剤又はフレーバー剤
を含んで良い。組成物は当業界の周知方法を用いること
によって、患者投与後に活性成分の迅速な、持続的な又
は遅れた放出が提供される様に処方することができる。
成分」として知られている。組成物を製造する場合に、
通常、活性成分は担体と混合するか又は担体で希釈する
か又は担体内に封入して、カプセル、小さな袋、紙又は
その他の容器の形にすることができる。担体を希釈剤と
して作用させる場合、担体は固体、半固体又は媒体とし
て働く液状物質、活性成分のための溶媒の賦形剤でも良
い。従って、組成物は錠剤、丸剤、粉末、トローチ剤、
サシェ剤、カシェ剤、エリキシル、乳剤、溶液、シロッ
プ、懸濁液、ゼラチン軟カプセル、ゼラチン硬カプセ
ル、無菌注射溶液及び無菌パック粉末の形態を取り得
る。好適な担体、賦形剤及び希釈剤のいくつかの例とし
ては、ラクトース、デキストロース、シュークロース、
ソルビトール、マンンニトール、スターチ、アラビアガ
ム、カルシウムホスフェート、アルギネート、カルシウ
ムシリケート、微結晶セルロース、ポリビニルピロリド
ン、セルロース、トラガカントゴム、ゼラチン、シロッ
プ、メチルセルロース、メチルー及びプロピルーヒドロ
キシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアリン
酸、水及び鉱油がある。製剤はさらに潤滑剤、湿潤剤、
乳化剤及び懸濁化剤、保存剤、甘味剤又はフレーバー剤
を含んで良い。組成物は当業界の周知方法を用いること
によって、患者投与後に活性成分の迅速な、持続的な又
は遅れた放出が提供される様に処方することができる。
【００３１】経口投与の為には、化合物は担体及び希釈
剤とともに混合され、錠剤の形とするか又はゼラチンカ
プセル内に封入することができる。さもなければ、混合
物は10％グルコース水溶液、等張生理食塩水、精製水の
ような溶液に溶解して静脈内に投与するか又は注射によ
り投与することもできる。再狭窄の治療においては、本
発明の化合物の投与は、局所的又は全身的デリバリーで
行い得る。全身的デリバリーは、生物全体に本発明化合
物を導入する技術を含む。全身的デリバリーの例として
は、前記した経口及び静脈内投与がある。本発明化合物
の局所的投与は増殖部位又はその近くに化合物を投与す
る種々の技術により行う。局所的デリバリー技術の例と
しては、利用できる技術が例示され、これらは限定を意
味しない。例には、局所的デリバリーカテーテル、位置
特異的担体、インプラント又は直接注射がある。
剤とともに混合され、錠剤の形とするか又はゼラチンカ
プセル内に封入することができる。さもなければ、混合
物は10％グルコース水溶液、等張生理食塩水、精製水の
ような溶液に溶解して静脈内に投与するか又は注射によ
り投与することもできる。再狭窄の治療においては、本
発明の化合物の投与は、局所的又は全身的デリバリーで
行い得る。全身的デリバリーは、生物全体に本発明化合
物を導入する技術を含む。全身的デリバリーの例として
は、前記した経口及び静脈内投与がある。本発明化合物
の局所的投与は増殖部位又はその近くに化合物を投与す
る種々の技術により行う。局所的デリバリー技術の例と
しては、利用できる技術が例示され、これらは限定を意
味しない。例には、局所的デリバリーカテーテル、位置
特異的担体、インプラント又は直接注射がある。
【００３２】カテーテルによる局所的デリバリーによる
と、医薬を直接、増殖病巣に投与することができる。バ
ルーンカテーテルを使用した局所デリバリーの例が、EP
0 383 492 A2及び米国特許第4,636,195号(Wolinsky,19
78年1月13日)に記載されている。 インプラントによる局所的デリバリーは、医薬を含むマ
トリックスを増殖部位に外科的に位置付けることを記載
している。インプラントされたマトリックスは、拡散、
化学反応又は溶媒の活性化によって、医薬を遊離する
［Langer,Science249:1527-1533(1990年9月)］。インプ
ラントによる局所的デリバリーの例はステントの使用で
ある。ステントは冠状動脈の崩壊及び再閉塞を機械的に
防ぐようにデザインされている。ステントへ医薬を挿入
することにより、薬は直接的に増殖性部位にデリバリー
される。この技術による局所的デリバリーはKohn,Pharm
aceutical Technology(1990年10月)に記載されている。
と、医薬を直接、増殖病巣に投与することができる。バ
ルーンカテーテルを使用した局所デリバリーの例が、EP
0 383 492 A2及び米国特許第4,636,195号(Wolinsky,19
78年1月13日)に記載されている。 インプラントによる局所的デリバリーは、医薬を含むマ
トリックスを増殖部位に外科的に位置付けることを記載
している。インプラントされたマトリックスは、拡散、
化学反応又は溶媒の活性化によって、医薬を遊離する
［Langer,Science249:1527-1533(1990年9月)］。インプ
ラントによる局所的デリバリーの例はステントの使用で
ある。ステントは冠状動脈の崩壊及び再閉塞を機械的に
防ぐようにデザインされている。ステントへ医薬を挿入
することにより、薬は直接的に増殖性部位にデリバリー
される。この技術による局所的デリバリーはKohn,Pharm
aceutical Technology(1990年10月)に記載されている。
【００３３】第二の例は医薬を含むポリマーを溶液の形
で局所に注射するデリバリーシステムである。次にポリ
マーは系中でインプラントを形成するように矯正され
る。この技術はPCT WO 90/03768 (Donn,1990年4月19日)
に記載されている。その他の例は、ポリマーの管腔内シ
ーリングによる医薬のデリバリーである。この技術は、
管腔内表面にポリマーのインプラントを適用するため
に、カテーテルを使用する。生物的に分解可能なポリマ
ーインプラント内に挿入された医薬は、手術部位におい
て放出される。それは、PCT WO 90/01969 (Schindler,19
89年8月23日)に記載されている。インプラントによる局
所的デリバリーの最後の例は、増殖部位にベシクル又は
微粒子を直接、注射することである。これらの微粒子は
タンパク質、脂質、炭水化物又は合成ポリマーのような
物質からなるものでも良い。これらの微粒子は、微粒子
に医薬が混合されているか又はコーティングにより微粒
子の表面に医薬を有している。微粒子を組み込んだデリ
バリーシステムはLange,Science 249:1527-1533(1990年
9月)およびMathiowitzら、J.App.Poly.Sci.,26:809(198
1)に記載されている。
で局所に注射するデリバリーシステムである。次にポリ
マーは系中でインプラントを形成するように矯正され
る。この技術はPCT WO 90/03768 (Donn,1990年4月19日)
に記載されている。その他の例は、ポリマーの管腔内シ
ーリングによる医薬のデリバリーである。この技術は、
管腔内表面にポリマーのインプラントを適用するため
に、カテーテルを使用する。生物的に分解可能なポリマ
ーインプラント内に挿入された医薬は、手術部位におい
て放出される。それは、PCT WO 90/01969 (Schindler,19
89年8月23日)に記載されている。インプラントによる局
所的デリバリーの最後の例は、増殖部位にベシクル又は
微粒子を直接、注射することである。これらの微粒子は
タンパク質、脂質、炭水化物又は合成ポリマーのような
物質からなるものでも良い。これらの微粒子は、微粒子
に医薬が混合されているか又はコーティングにより微粒
子の表面に医薬を有している。微粒子を組み込んだデリ
バリーシステムはLange,Science 249:1527-1533(1990年
9月)およびMathiowitzら、J.App.Poly.Sci.,26:809(198
1)に記載されている。
【００３４】部位に特異的な担体による局所的デリバリ
ーは、薬を増殖部位に導くか又は結合させる担体に医薬
を取り付けることを説明している。このデリバリー技術
の例としては、プロテインリガンド、モノクローナル抗
体又は膜固定リンカーなどのキャリヤーの使用がある
［Lange,Science 249:1527-1533(1990年9月)およびLang
worth,Genentic Engineering News(1990年9月)］。直接
的注射による局所的デリバリーは、無菌生理食塩水のよ
うな不活性のキャリヤーに懸濁された化合物の微粒子を
直接的に増殖性領域に注射することを記述する。 局所的デリバリーの例は例示にすぎず、相互排除的では
ない。例えば、増殖性平滑筋細胞への微粒子のデリバリ
ーは、局所的デリバリーカテーテル又は直接的注射によ
り行うことができる。
ーは、薬を増殖部位に導くか又は結合させる担体に医薬
を取り付けることを説明している。このデリバリー技術
の例としては、プロテインリガンド、モノクローナル抗
体又は膜固定リンカーなどのキャリヤーの使用がある
［Lange,Science 249:1527-1533(1990年9月)およびLang
worth,Genentic Engineering News(1990年9月)］。直接
的注射による局所的デリバリーは、無菌生理食塩水のよ
うな不活性のキャリヤーに懸濁された化合物の微粒子を
直接的に増殖性領域に注射することを記述する。 局所的デリバリーの例は例示にすぎず、相互排除的では
ない。例えば、増殖性平滑筋細胞への微粒子のデリバリ
ーは、局所的デリバリーカテーテル又は直接的注射によ
り行うことができる。
【００３５】組成物は好ましくは、一回投与剤形に製剤
化され、各投与量は活性成分を約１から500mg、より頻
繁には、約５から300mg含む。「一回投与剤形」の用語は、
ヒト及びその他の脊椎動物に対する一回分の投与量とし
て適している物理的に分離された単位を意味し、各単位
は、望ましい治療効果を発揮する為に、計算され、予め
決定された量の活性物質を、必要な製剤上許容される担
体と共に含んでいる。「製剤上許容される」とは、担体、
希釈剤又は賦形剤が、製剤のその他の成分と両立し得る
ものであり、処方される相手にとって有害でないことを
意味する。
化され、各投与量は活性成分を約１から500mg、より頻
繁には、約５から300mg含む。「一回投与剤形」の用語は、
ヒト及びその他の脊椎動物に対する一回分の投与量とし
て適している物理的に分離された単位を意味し、各単位
は、望ましい治療効果を発揮する為に、計算され、予め
決定された量の活性物質を、必要な製剤上許容される担
体と共に含んでいる。「製剤上許容される」とは、担体、
希釈剤又は賦形剤が、製剤のその他の成分と両立し得る
ものであり、処方される相手にとって有害でないことを
意味する。
【００３６】
【実施例】以下の製剤例は単なる例示であり、いかなる
意味においても本発明の範囲を限定する意図はない。
「活性成分」の用語の意味は前に定義した通りである。製剤例１ 硬ゼラチンカプセルが以下の成分を用いて製造される。 配合量（mg/カプセル) 活性成分 ２５０ 乾燥スターチ ２００ ステアリン酸マグネシウム １０ 合計 ４６０ mg
意味においても本発明の範囲を限定する意図はない。
「活性成分」の用語の意味は前に定義した通りである。製剤例１ 硬ゼラチンカプセルが以下の成分を用いて製造される。 配合量（mg/カプセル) 活性成分 ２５０ 乾燥スターチ ２００ ステアリン酸マグネシウム １０ 合計 ４６０ mg
【００３７】製剤例２ 下記の成分を用いて錠剤が製造される。 配合量（mg/カプセル) 活性成分 ２５０ 微結晶セルロース ４００ シリコンジオキシド、発煙した １０ ステアリン酸 ５ 合計 ６６５mg この成分が混合され、圧縮されて、各重量665mgの錠剤
が製造される。
が製造される。
【００３８】製剤例３ 以下の成分を含むエアゾル溶液が製造される。 活性成分をエタノールと混合し、この混合物をプロペラ
ント22の一部に加え、−30℃まで冷却し、充填装置に移
す。次に、必要量をステンレススチールの容器に注ぎ、
残りのプロペラントを用いて希釈する。次にバブル部分
を容器に取り付ける。
ント22の一部に加え、−30℃まで冷却し、充填装置に移
す。次に、必要量をステンレススチールの容器に注ぎ、
残りのプロペラントを用いて希釈する。次にバブル部分
を容器に取り付ける。
【００３９】製剤例４ 各々が活性成分60mgを含む錠剤を以下のように製造す
る。 配合量（mg/錠剤） 活性成分 ６０ｍｇ スターチ ４５ｍｇ 微結晶性セルロース ３５ｍｇ ポリビニルピロリドン （10％水溶液として） ４ｍｇ ソジウムカルボキシメチルスターチ ４．５ｍｇ ステアリン酸マグネシウム ０．５ｍｇ タルク １ｍｇ 合計 １５０ｍｇ 活性成分、スターチ及びセルロースをNo.45メッシュ U.
S.ふるいを通して混合する。得られた粉末とポリビニル
ーピロリドンを含む水溶液とを混合し、次に得られた混
合物をNo.14メッシュ U.S.ふるいを通す。生成した粒を
５０℃で乾燥し、No.18メッシュ U.S.ふるいを通す。先
にNo.60メッシュ U.S.ふるいを通したソジウムカルボキ
シメチルスターチ、ステアリン酸マグネシウム及びタル
クを次に粒に加えて、混合後、打錠機により打錠して、
各重量が150mgの錠剤を製造する。
る。 配合量（mg/錠剤） 活性成分 ６０ｍｇ スターチ ４５ｍｇ 微結晶性セルロース ３５ｍｇ ポリビニルピロリドン （10％水溶液として） ４ｍｇ ソジウムカルボキシメチルスターチ ４．５ｍｇ ステアリン酸マグネシウム ０．５ｍｇ タルク １ｍｇ 合計 １５０ｍｇ 活性成分、スターチ及びセルロースをNo.45メッシュ U.
S.ふるいを通して混合する。得られた粉末とポリビニル
ーピロリドンを含む水溶液とを混合し、次に得られた混
合物をNo.14メッシュ U.S.ふるいを通す。生成した粒を
５０℃で乾燥し、No.18メッシュ U.S.ふるいを通す。先
にNo.60メッシュ U.S.ふるいを通したソジウムカルボキ
シメチルスターチ、ステアリン酸マグネシウム及びタル
クを次に粒に加えて、混合後、打錠機により打錠して、
各重量が150mgの錠剤を製造する。
【００４０】製剤例５ 各々が活性成分80mgを含むカプセルを以下のように製造
する。 配合量（mg/カプセル) 活性成分 ８０ｍｇ スターチ ５９ｍｇ 微結晶性セルロース ５９ｍｇ ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ 合計 ２００ｍｇ 活性成分、セルロース、スターチ及びステアリン酸マグ
ネシウムを混合し、No.45メッシュ U.S.ふるいを通し
て、200mgの量をゼラチン硬カプセルに詰める。
する。 配合量（mg/カプセル) 活性成分 ８０ｍｇ スターチ ５９ｍｇ 微結晶性セルロース ５９ｍｇ ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ 合計 ２００ｍｇ 活性成分、セルロース、スターチ及びステアリン酸マグ
ネシウムを混合し、No.45メッシュ U.S.ふるいを通し
て、200mgの量をゼラチン硬カプセルに詰める。
【００４１】製剤例６ 各々が活性成分225mgを含む坐薬を以下のように製造す
る。 配合量（mg/ユニット) 活性成分 ２２５ｍｇ 飽和脂肪酸 ２，０００ｍｇ グリセライド 合計 ２，２２５ｍｇ 活性成分をNo.60メッシュ U.S.ふるいを通し、必要最小
限に加熱してあらかじめ溶解した飽和脂肪酸グリセライ
ドに懸濁させる。次に混合物を公称２ｇの容量の坐薬の
型に注ぎ、冷却する。
る。 配合量（mg/ユニット) 活性成分 ２２５ｍｇ 飽和脂肪酸 ２，０００ｍｇ グリセライド 合計 ２，２２５ｍｇ 活性成分をNo.60メッシュ U.S.ふるいを通し、必要最小
限に加熱してあらかじめ溶解した飽和脂肪酸グリセライ
ドに懸濁させる。次に混合物を公称２ｇの容量の坐薬の
型に注ぎ、冷却する。
【００４２】製剤例７ 各々が用量５ｍｌに対して、活性成分50mgを含む懸濁液
を以下のように製造する。 配合量 活性成分(群) ５０ｍｇ カルボキシメチルセルロースナトリウム ５０ｍｇ シロップ １.２５ｍｌ 安息香酸溶液 ０.１０ｍｌ 香料 適量 着色料 適量 精製水にて合計 ５ｍｌ 活性成分をNo.45メッシュ U.S.ふるいを通し、カルボキ
シメチルセルロースナトリウム及びシロップを混合して
滑らかなペーストを生成する。安息香酸溶液、香料及び着
色料を水の一部を用いて希釈し、加えて、撹拌する。次
に必要な容量となるのに十分な水を加える。
を以下のように製造する。 配合量 活性成分(群) ５０ｍｇ カルボキシメチルセルロースナトリウム ５０ｍｇ シロップ １.２５ｍｌ 安息香酸溶液 ０.１０ｍｌ 香料 適量 着色料 適量 精製水にて合計 ５ｍｌ 活性成分をNo.45メッシュ U.S.ふるいを通し、カルボキ
シメチルセルロースナトリウム及びシロップを混合して
滑らかなペーストを生成する。安息香酸溶液、香料及び着
色料を水の一部を用いて希釈し、加えて、撹拌する。次
に必要な容量となるのに十分な水を加える。
【００４３】製剤例８ 静脈内製剤をを以下のように製造する。 配合量 活性成分 １００ｍｇ 等張生理食塩水 １,０００ｍＬ 式Iの化合物は広い用量範囲にわたってPI ３−キナーゼ
及び３−キナーゼに依存する状態に対し効果的である。
例えば、通常、一日の用量が、体重１ Kg当たり、約 0.1
ｇから約50mgである。成人の治療において、用量は約５m
g/kgから約25mg/kgを一回にて又は分割して投与するこ
とが好ましい。しかし、実際に投与される化合物の量
は、病気症状の相対的重篤さ、投与する化合物の選択、
年令、体重及び個々の患者の応答及び選ばれた投与経路
を含む関連の事情を考慮して、医者が決定することが理
解される。従って、上記の用量範囲はいかなる意味にお
いても本発明の範囲を限定する意図はない。
及び３−キナーゼに依存する状態に対し効果的である。
例えば、通常、一日の用量が、体重１ Kg当たり、約 0.1
ｇから約50mgである。成人の治療において、用量は約５m
g/kgから約25mg/kgを一回にて又は分割して投与するこ
とが好ましい。しかし、実際に投与される化合物の量
は、病気症状の相対的重篤さ、投与する化合物の選択、
年令、体重及び個々の患者の応答及び選ばれた投与経路
を含む関連の事情を考慮して、医者が決定することが理
解される。従って、上記の用量範囲はいかなる意味にお
いても本発明の範囲を限定する意図はない。
【００４４】式Ｉ、ＩＩ及びIIIの化合物はPI ３−キナ
ーゼ酵素に対して活性である。以下はPI ３−キナーゼ
活性を評価するために使用される試験システムである。 精製されたPI ３−キナーゼは多数の方法により調製さ
れる。一つの方法においては、PI ３−キナーゼは、ア
メリカン タイプ カルチャー コレクション、Rockvill
e,MDから得られる融合性のスイス 3T3 細胞から調製さ
れる。PI ３−キナーゼを精製する前に、10％胎児子牛
血清を補充したDulbeccoの修飾されたイーグル培地(DME
M;Sigma,St.Louis,MO) 内において大量培養物として細
胞を維持し、0,25％トリプシン及び0.02％エチレンジア
ミン四酢酸（EDTA)を用いて継代させる。四つの100mm培
養板上の２４×１０6細胞をハンクス バランスド サル
ト溶液(HBSS;Sigma) pH7.4を用いて洗浄し、胎児子牛血
清不含のDMEM内に細胞を１時間維持した後、血小板由来
の成長因子（PDGF;Genzyme，Cambridge,MA)の組み換え
ヒトBB ホモダイマー100ng/mlを用いて15分間刺激す
る。溶媒を吸引して、137mMのNaCl ３ml、MｇCl2１mMを
含むトリス(pH8.0)20mM、10％グリセロール、１％トリ
トンX-100(Roman 及びHass、フイラデルフィア、PA）、
ロイヘプチン２μg/ml、アプロトニン２μg/ml、フェニ
ルメチルースルホニル フルオライド(PMSF）１mM及び
オルトバナジウム酸ナトリウム塩１mMを用いて溶解させ
る前に、細胞をHBSS10mlを用いて洗浄する。細胞を皿の
表面からかき取り、6,000xgにて10分間遠心分離する。
1.5mlチューブ内において、上清を、洗浄したIgG2bk抗
ホスホチロシン抗体ビーズ（Upstate Biotechnology In
c.,Lake Placid,NY)50μlと混合する。このチューブに
キャップをして、４℃において２時間回転し、ロイヘプ
チン２μg/ml、アプロトニン４μg/ml、PMSF１mM、アデ
ノシン200μM及びオルトバナジウム酸ナトリウム塩１mM
を含むHBSS 1mlを用いて、ビーズを二回洗浄する。10mM
トリス（pH7.5)、NaCl２M、EDTA１mM，アデノシン200μ
M及びフェニルホスフェートナトリウムを200μl/チュー
ブ10mMを用いて、チロシン リン酸化されたPI ３−キナ
ーゼをビーズから溶出する。
ーゼ酵素に対して活性である。以下はPI ３−キナーゼ
活性を評価するために使用される試験システムである。 精製されたPI ３−キナーゼは多数の方法により調製さ
れる。一つの方法においては、PI ３−キナーゼは、ア
メリカン タイプ カルチャー コレクション、Rockvill
e,MDから得られる融合性のスイス 3T3 細胞から調製さ
れる。PI ３−キナーゼを精製する前に、10％胎児子牛
血清を補充したDulbeccoの修飾されたイーグル培地(DME
M;Sigma,St.Louis,MO) 内において大量培養物として細
胞を維持し、0,25％トリプシン及び0.02％エチレンジア
ミン四酢酸（EDTA)を用いて継代させる。四つの100mm培
養板上の２４×１０6細胞をハンクス バランスド サル
ト溶液(HBSS;Sigma) pH7.4を用いて洗浄し、胎児子牛血
清不含のDMEM内に細胞を１時間維持した後、血小板由来
の成長因子（PDGF;Genzyme，Cambridge,MA)の組み換え
ヒトBB ホモダイマー100ng/mlを用いて15分間刺激す
る。溶媒を吸引して、137mMのNaCl ３ml、MｇCl2１mMを
含むトリス(pH8.0)20mM、10％グリセロール、１％トリ
トンX-100(Roman 及びHass、フイラデルフィア、PA）、
ロイヘプチン２μg/ml、アプロトニン２μg/ml、フェニ
ルメチルースルホニル フルオライド(PMSF）１mM及び
オルトバナジウム酸ナトリウム塩１mMを用いて溶解させ
る前に、細胞をHBSS10mlを用いて洗浄する。細胞を皿の
表面からかき取り、6,000xgにて10分間遠心分離する。
1.5mlチューブ内において、上清を、洗浄したIgG2bk抗
ホスホチロシン抗体ビーズ（Upstate Biotechnology In
c.,Lake Placid,NY)50μlと混合する。このチューブに
キャップをして、４℃において２時間回転し、ロイヘプ
チン２μg/ml、アプロトニン４μg/ml、PMSF１mM、アデ
ノシン200μM及びオルトバナジウム酸ナトリウム塩１mM
を含むHBSS 1mlを用いて、ビーズを二回洗浄する。10mM
トリス（pH7.5)、NaCl２M、EDTA１mM，アデノシン200μ
M及びフェニルホスフェートナトリウムを200μl/チュー
ブ10mMを用いて、チロシン リン酸化されたPI ３−キナ
ーゼをビーズから溶出する。
【００４５】その他の好ましい方法においては、PI ３
−キナーゼを牛の脳から調製した。近くの屠殺場から屠
殺後、数分内に得られた２つの牛の脳（湿重量、約900
g)を氷上に詰めて、１時間以内にホモジナイズした。脳
は余分な脂肪及び血管を切りとり、次にTekmar Tissuem
izer(Cincinnati,OH)を用いて、シュークロース250mM、
βーメルカプトエタノール６mM、ロイペプシン１μg/m
l、ペプスタシンＡ１μg/ml、PMSF 0.4mM及びMgCl2１mM
を含むトリス（pH8.3）20mM内において４℃にて、ホモ
ジナイズした。60分、10,000 ×ｇで遠心分離した後、
上清（約1200mL)のpHを４℃において、酢酸１Mを滴加す
ることにより、5.75まで下げた。４℃において15分間さ
らに撹拌後、得られた溶液を60分間、13,500 ×ｇで遠
心分離した。この上清を捨てた。ペレットをバッファー
Ａ（β−メルカプトエタノール６mM、エチレン グリコー
ル−ビス(β−アミノエチル エーテル）N,N,N',N'-四
酢酸（EGTA)0.1mM、ロイペプシン１μg/ml、ペプスタシ
ンＡ１μg/ml及びMgCl2１mMを含むトリス20mM（pH8.3)
に再び懸濁し、Fast Flow Q セファロース カラム(300
ml)上に、速度５ml／分、４℃にて載せた。載せた後、
カラムをKCl 0.1M及びキナーゼを含むバッファーＡを３
容量を用いて洗浄し、その後、バッファーＡ／KCl 0.1M
からバッファーＡ／KCl 0.6Mのリニアーグラジエントを
７容量、３mL/分、用いて、溶出した。
−キナーゼを牛の脳から調製した。近くの屠殺場から屠
殺後、数分内に得られた２つの牛の脳（湿重量、約900
g)を氷上に詰めて、１時間以内にホモジナイズした。脳
は余分な脂肪及び血管を切りとり、次にTekmar Tissuem
izer(Cincinnati,OH)を用いて、シュークロース250mM、
βーメルカプトエタノール６mM、ロイペプシン１μg/m
l、ペプスタシンＡ１μg/ml、PMSF 0.4mM及びMgCl2１mM
を含むトリス（pH8.3）20mM内において４℃にて、ホモ
ジナイズした。60分、10,000 ×ｇで遠心分離した後、
上清（約1200mL)のpHを４℃において、酢酸１Mを滴加す
ることにより、5.75まで下げた。４℃において15分間さ
らに撹拌後、得られた溶液を60分間、13,500 ×ｇで遠
心分離した。この上清を捨てた。ペレットをバッファー
Ａ（β−メルカプトエタノール６mM、エチレン グリコー
ル−ビス(β−アミノエチル エーテル）N,N,N',N'-四
酢酸（EGTA)0.1mM、ロイペプシン１μg/ml、ペプスタシ
ンＡ１μg/ml及びMgCl2１mMを含むトリス20mM（pH8.3)
に再び懸濁し、Fast Flow Q セファロース カラム(300
ml)上に、速度５ml／分、４℃にて載せた。載せた後、
カラムをKCl 0.1M及びキナーゼを含むバッファーＡを３
容量を用いて洗浄し、その後、バッファーＡ／KCl 0.1M
からバッファーＡ／KCl 0.6Mのリニアーグラジエントを
７容量、３mL/分、用いて、溶出した。
【００４６】フラクション10μＬ及び下記の基質として
のホスファチジルイノシトールを用いて、フラクション
のPI ３−キナーゼ活性を調べた。PI ４−キナーゼがブ
レイクスルーに溶出した。PI 3ーキナーゼはKCl約0.3M
において溶出した。このPI ３−キナーゼのプールを40
％リン酸アンモニウムで沈殿させた。遠心分離（60分
間、13,500 ×ｇ）後、ペレットをバッファーＢ（β−
メルカプトエタノール６mM、ロイペプシン１μg/ml、ペプ
スタシンＡ１μg/ml及びMgCl2１mMを含むリン酸カリウ
ム10mM、pH 7.4)に再懸濁し、ヒドロキシアパタイトカ
ラム（Calbiochem,Inc.,La Jolla,CA)50mLの上に2.5mL/
分で載せた。このカラムをバッファーＢ150mLを用い
て、Ａ280ベースラインがゼロに到達するまで洗浄し、
次にキナーゼを、１ml/分におけるKH2PO4 10-320mM、450
分以上のリニアーグラジエントを用いて溶出した。
のホスファチジルイノシトールを用いて、フラクション
のPI ３−キナーゼ活性を調べた。PI ４−キナーゼがブ
レイクスルーに溶出した。PI 3ーキナーゼはKCl約0.3M
において溶出した。このPI ３−キナーゼのプールを40
％リン酸アンモニウムで沈殿させた。遠心分離（60分
間、13,500 ×ｇ）後、ペレットをバッファーＢ（β−
メルカプトエタノール６mM、ロイペプシン１μg/ml、ペプ
スタシンＡ１μg/ml及びMgCl2１mMを含むリン酸カリウ
ム10mM、pH 7.4)に再懸濁し、ヒドロキシアパタイトカ
ラム（Calbiochem,Inc.,La Jolla,CA)50mLの上に2.5mL/
分で載せた。このカラムをバッファーＢ150mLを用い
て、Ａ280ベースラインがゼロに到達するまで洗浄し、
次にキナーゼを、１ml/分におけるKH2PO4 10-320mM、450
分以上のリニアーグラジエントを用いて溶出した。
【００４７】活性のあるフラクションをプールし、次
に、バッファーＣ（β−メルカプトエタノール６mM、EGT
A 0.1mM、ロイペプシン１μg/ml、ペプスタシンＡ１μg/
ml及びMgCl2１mMを含むMES 50mM、pH6.2)内において平衡
化したMonoS カラム(Pharmacia,Inc.,Piscatamag,NJ,)
（８ml）上に３mL/分で載せた。PI ３−キナーゼは、バ
ッファーＣにおける120分以上のKCl 0-0.4Ｍのリニアグ
ラジエントを用いて溶出した。分析されたフラクション
においては、PI 3-キナーゼ活性の２つのプールが型ど
おりに発見された。活性の大部分がフロースロー(flow-
through)において発見され、一方、活性の約20％はグラ
ジエントに溶出した。グラジエント内の物質は大量のPI
4ーキナーゼ活性を有していたが、フロースローにおい
て溶出したPI ３−キナーゼは本質的にPI ４−キナーゼ
活性と関係が無かった。従って、MonoS フロースローを
Mini-Ultrasette Omega 50K メンブラン(Filtron,Inc.,
Northbrough,MA)を用いるタンジェンシャルフローフィ
ルトレーション(tangential flow filtration)により濃
縮し、伝導度を下げるためにバッファーＣで希釈した。
次に前記の条件を用いて、得られた物質をMonoS カラム
に再度載せた。PI ３−キナーゼは洗浄の間にカラムに
結合し、グラジエントで溶離した。グラジエントにおい
て２つのホスファチジルイノシトール キナーゼ活性の
プールが得られた。各々の３−キナーゼ活性及びPI ４
−キナーゼ活性を分析した。プールＩはPI ３−キナー
ゼ活性95％(及びPI ４−キナーゼ活性５％）を含み、一
方、プールIIはPI ４−キナーゼ活性を優位に含んでい
た。
に、バッファーＣ（β−メルカプトエタノール６mM、EGT
A 0.1mM、ロイペプシン１μg/ml、ペプスタシンＡ１μg/
ml及びMgCl2１mMを含むMES 50mM、pH6.2)内において平衡
化したMonoS カラム(Pharmacia,Inc.,Piscatamag,NJ,)
（８ml）上に３mL/分で載せた。PI ３−キナーゼは、バ
ッファーＣにおける120分以上のKCl 0-0.4Ｍのリニアグ
ラジエントを用いて溶出した。分析されたフラクション
においては、PI 3-キナーゼ活性の２つのプールが型ど
おりに発見された。活性の大部分がフロースロー(flow-
through)において発見され、一方、活性の約20％はグラ
ジエントに溶出した。グラジエント内の物質は大量のPI
4ーキナーゼ活性を有していたが、フロースローにおい
て溶出したPI ３−キナーゼは本質的にPI ４−キナーゼ
活性と関係が無かった。従って、MonoS フロースローを
Mini-Ultrasette Omega 50K メンブラン(Filtron,Inc.,
Northbrough,MA)を用いるタンジェンシャルフローフィ
ルトレーション(tangential flow filtration)により濃
縮し、伝導度を下げるためにバッファーＣで希釈した。
次に前記の条件を用いて、得られた物質をMonoS カラム
に再度載せた。PI ３−キナーゼは洗浄の間にカラムに
結合し、グラジエントで溶離した。グラジエントにおい
て２つのホスファチジルイノシトール キナーゼ活性の
プールが得られた。各々の３−キナーゼ活性及びPI ４
−キナーゼ活性を分析した。プールＩはPI ３−キナー
ゼ活性95％(及びPI ４−キナーゼ活性５％）を含み、一
方、プールIIはPI ４−キナーゼ活性を優位に含んでい
た。
【００４８】MonoS カラムからのプールＩをバッファー
Ａで希釈し、MonoQ(１ml)上でクロマトグラフィーにか
け、バッファーＡ中0-0.4 M KClのグラジエントを用い
て溶出した。最後のプールのPI ３−キナーゼ活性及び
PI ４−キナーゼ活性を分析した。最終生成物は99％以
上のPI ３−キナーゼ活性を含むことが分かった。 PI ３−キナーゼ活性は、以前にMatter.,W.F.ら、Bioche
mical and BiophysicalResearch Communications,186:6
24-631(1992)によって記載された様に測定された。最初
に抑制候補物質をDMSOに溶解し、次にMgCl2 15ml及びEG
TA 1mlを含むHEPESバッファー50mM、pH7.5を用いて10倍
に希釈した。この溶液の10μLを精製した牛の脳のPI ３
−キナーゼ（9μL)及びホスファチジルイノシトール(EG
TA 1mMを含むHEPESバッファー50mM,pH7.5におけるスト
ック溶液2mg/mLの5μL)と共にインキュベートした。最
後の反応混合物は抑制物質0.1-5ng/mL及びDMSO ３％
（v/v)を含む。このDMSO濃度はPI ３−キナーゼ活性に
影響を及ぼさない。コントロールの反応混合物は抑制物
質不含のDMSO ３％(v/v)を含む。反応物は最初に周囲温
度にて10分間、プレインキュベーションされ、次に［γ
-32Ｐ］ATP１μL（２mCi/mLストック溶液、500μM、最
後の濃縮物0.08mCi/mL、20μM、Dupont New England Nu
clear,Boston,MA)を加えて、酵素反応を開始させる。頻
繁に混合し、周囲温度にて10分間、反応を進行させ、そ
の後、１N HCl 40μLを加え、反応を止める。
Ａで希釈し、MonoQ(１ml)上でクロマトグラフィーにか
け、バッファーＡ中0-0.4 M KClのグラジエントを用い
て溶出した。最後のプールのPI ３−キナーゼ活性及び
PI ４−キナーゼ活性を分析した。最終生成物は99％以
上のPI ３−キナーゼ活性を含むことが分かった。 PI ３−キナーゼ活性は、以前にMatter.,W.F.ら、Bioche
mical and BiophysicalResearch Communications,186:6
24-631(1992)によって記載された様に測定された。最初
に抑制候補物質をDMSOに溶解し、次にMgCl2 15ml及びEG
TA 1mlを含むHEPESバッファー50mM、pH7.5を用いて10倍
に希釈した。この溶液の10μLを精製した牛の脳のPI ３
−キナーゼ（9μL)及びホスファチジルイノシトール(EG
TA 1mMを含むHEPESバッファー50mM,pH7.5におけるスト
ック溶液2mg/mLの5μL)と共にインキュベートした。最
後の反応混合物は抑制物質0.1-5ng/mL及びDMSO ３％
（v/v)を含む。このDMSO濃度はPI ３−キナーゼ活性に
影響を及ぼさない。コントロールの反応混合物は抑制物
質不含のDMSO ３％(v/v)を含む。反応物は最初に周囲温
度にて10分間、プレインキュベーションされ、次に［γ
-32Ｐ］ATP１μL（２mCi/mLストック溶液、500μM、最
後の濃縮物0.08mCi/mL、20μM、Dupont New England Nu
clear,Boston,MA)を加えて、酵素反応を開始させる。頻
繁に混合し、周囲温度にて10分間、反応を進行させ、そ
の後、１N HCl 40μLを加え、反応を止める。
【００４９】CHCl3:MeOH(1:1,v:v)80μLを加えて脂質を
抽出する。サンプルを混合し、遠心分離し、より低い有
機層をシリカゲルTLCプレート(EN Science,Gibbstown,N
J)に適用し、CHCl3:MeOH:H20:NH4OH(45:35:8.5:1.5,v:
v)で展開する。プレートを乾燥し、キナーゼ反応をオー
トラジオグラフィーによって可視化する。ホスファチジ
ルイノシトール ３−モノホスフェート領域をプレート
からかき取り、Ready Protein(Beckman Instruments,In
c.,Fullerton,CA)をシンチレーション カクテルとして
用い、液体シンチレーション分光を使用して定量する。
式Ｉ、II及びIIIの化合物の抑制レベルを対照と比較し
た１分間の［32Ｐ］−カウントのパーセンテージとして
決定される。
抽出する。サンプルを混合し、遠心分離し、より低い有
機層をシリカゲルTLCプレート(EN Science,Gibbstown,N
J)に適用し、CHCl3:MeOH:H20:NH4OH(45:35:8.5:1.5,v:
v)で展開する。プレートを乾燥し、キナーゼ反応をオー
トラジオグラフィーによって可視化する。ホスファチジ
ルイノシトール ３−モノホスフェート領域をプレート
からかき取り、Ready Protein(Beckman Instruments,In
c.,Fullerton,CA)をシンチレーション カクテルとして
用い、液体シンチレーション分光を使用して定量する。
式Ｉ、II及びIIIの化合物の抑制レベルを対照と比較し
た１分間の［32Ｐ］−カウントのパーセンテージとして
決定される。
【００５０】別法として、PI ３−キナーゼ反応生成物
を、Whitman,Nature,332:644-646(1988)によって討論さ
れた様にHPLCにより確認する。リン脂質はメチルアミン
試薬中で脱アシル化し、以前にAuger,K.R.,Cell,57:167
-175(1989)により記載された様にWhatman Partisphere
SAX アニオン交換カラムを用いて分離する。Radiomatic
Model A-140 Flo-One/Beta online 放射能検出器を用
いて脱アシル化された［32Ｐ］酵素生成物をモニターす
る。脱アシル化された[3Ｈ]PI ４−モノホスフェートを
内部標準として加える。
を、Whitman,Nature,332:644-646(1988)によって討論さ
れた様にHPLCにより確認する。リン脂質はメチルアミン
試薬中で脱アシル化し、以前にAuger,K.R.,Cell,57:167
-175(1989)により記載された様にWhatman Partisphere
SAX アニオン交換カラムを用いて分離する。Radiomatic
Model A-140 Flo-One/Beta online 放射能検出器を用
いて脱アシル化された［32Ｐ］酵素生成物をモニターす
る。脱アシル化された[3Ｈ]PI ４−モノホスフェートを
内部標準として加える。
【００５１】牛の脳の精製されたPI ３−キナーゼにつ
いて試験した場合、ビリジンが2分の1の最大抑制量、IC
50が、0.85 ng/mL(2.4nM)を示すという希な抑制物質で
あった。従って、本発明方法において使用された化合
物、特にビリジンはPI ３−キナーゼの有効な抑制（阻
害）物質である。
いて試験した場合、ビリジンが2分の1の最大抑制量、IC
50が、0.85 ng/mL(2.4nM)を示すという希な抑制物質で
あった。従って、本発明方法において使用された化合
物、特にビリジンはPI ３−キナーゼの有効な抑制（阻
害）物質である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 マサヒコ・サト アメリカ合衆国46033インディアナ州カー メル、ホーソーン・ドライブ96番 (72)発明者 クリス・ジョン・ブラホス アメリカ合衆国46033インディアナ州カー メル、ウェストミンスター・ウェイ11203 番
Claims (3)
- 【請求項１】 式Ｉ: 【化１】 [式中、ＲはＨ又はメトキシ； Ｒ1はＣＨ3、ＯＨ、ＯＡ
ｃ、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ又はメタンスルホネート； Ｒ2
は−ＯＨ、−ＯＡｃ、＝Ｏ又は−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキ
ル）；Ｒ3は−ＯＨ、−ＯＡｃ、＝Ｏ又は−Ｏ（Ｃ1−Ｃ
4アルキル）を表わす。但し、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3の二つ以
上が同時にＯＡｃではないことを条件とする。］で示さ
れる化合物、式II： 【化２】 （式中、Ｒ3'は＝Ｏ又は−ＯＨを表わす。）で示される
化合物、及び式III： 【化３】 （式中、Ｒ2'は＝Ｏ又は−ＯＨを表わし、Ｒ3'は上記の
定義と同意義である。）で示される化合物からなる群か
ら選択される１つの化合物を活性成分として含むホスフ
ァチジルイノシトール ３−キナーゼ依存状態の治療の
ための製剤。 - 【請求項２】 ホスファチジルイノシトール ３−キナ
ーゼ依存状態が腫瘍である請求項１に記載の製剤。 - 【請求項３】 活性成分として、式Ｉにおいて、Ｒがメ
トキシ、Ｒ1がＯＨ、Ｒ2が＝Ｏ及びＲ3が＝Ｏである化
合物を含有する請求項２又は請求項３に記載の製剤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US13433793A | 1993-10-12 | 1993-10-12 | |
| US134337 | 1993-10-12 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07149635A true JPH07149635A (ja) | 1995-06-13 |
Family
ID=22462890
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6245278A Pending JPH07149635A (ja) | 1993-10-12 | 1994-10-11 | ホスファチジルイノシトール ３−キナーゼに依存する状態の治療のための製剤 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5726167A (ja) |
| EP (1) | EP0648492A3 (ja) |
| JP (1) | JPH07149635A (ja) |
| CA (1) | CA2133815A1 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005509635A (ja) * | 2001-10-19 | 2005-04-14 | アイコス コーポレイション | 人間のホスファチジルイノシトール３−キナーゼデルタの阻害 |
| JP2009539988A (ja) * | 2006-06-12 | 2009-11-19 | バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | イオンチャネルの調節因子として有用なチエノピリミジン |
| JP2011037730A (ja) * | 2009-08-07 | 2011-02-24 | Kobe Gakuin | Ｄｎａ合成酵素阻害剤 |
Families Citing this family (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9521987D0 (en) * | 1995-10-26 | 1996-01-03 | Ludwig Inst Cancer Res | Phosphoinositide 3-kinase modulators |
| GB2302021A (en) * | 1996-10-16 | 1997-01-08 | Lilly Co Eli | Inhibiting bone loss or resorption |
| US8124630B2 (en) | 1999-01-13 | 2012-02-28 | Bayer Healthcare Llc | ω-carboxyaryl substituted diphenyl ureas as raf kinase inhibitors |
| ATE538794T1 (de) * | 1999-01-13 | 2012-01-15 | Bayer Healthcare Llc | Gamma carboxyarylsubstituierte diphenylharnstoffverbindungen als p38 kinasehemmer |
| US6777439B2 (en) * | 2000-05-30 | 2004-08-17 | Advanced Research & Technology Institute, Inc. | Compositions and methods for identifying agents which modulate PTEN function and PI-3 kinase pathways |
| US7371763B2 (en) * | 2001-04-20 | 2008-05-13 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of raf kinase using quinolyl, isoquinolyl or pyridyl ureas |
| GB0119865D0 (en) | 2001-08-14 | 2001-10-10 | Cancer Res Campaign Tech | DNA-PK inhibitors |
| GB0119863D0 (en) | 2001-08-14 | 2001-10-10 | Cancer Res Campaign Tech | DNA-PK inhibitors |
| EP1442132A2 (en) * | 2001-10-26 | 2004-08-04 | Novartis AG | Methods for the treatment of osteoarthritis and compositions thereof |
| MXPA04007832A (es) | 2002-02-11 | 2005-09-08 | Bayer Pharmaceuticals Corp | Aril-ureas con actividad inhibitoria de angiogenesis. |
| US7049313B2 (en) | 2002-02-25 | 2006-05-23 | Kudos Pharmaceuticals Ltd. | ATM inhibitors |
| WO2004005532A2 (en) * | 2002-07-10 | 2004-01-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Solid-phase and solution-phase synthesis of glycosylphosphatidylinositol glycans |
| US7557129B2 (en) | 2003-02-28 | 2009-07-07 | Bayer Healthcare Llc | Cyanopyridine derivatives useful in the treatment of cancer and other disorders |
| WO2004113274A2 (en) * | 2003-05-20 | 2004-12-29 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Diaryl ureas with kinase inhibiting activity |
| EA010485B1 (ru) * | 2003-07-23 | 2008-10-30 | Байер Фамэсьютиклс Копэрейшн | Производное n,n'-дифенилмочевины, фармацевтическая композиция (варианты) и способ лечения и предупреждения заболеваний и состояний с его использованием (варианты) |
| EP1654257B1 (en) | 2003-08-13 | 2010-03-17 | Kudos Pharmaceuticals Limited | Aminopyrones and their use as atm inhibitors |
| US7374786B2 (en) | 2004-01-09 | 2008-05-20 | Biosys Corporation | Bioimmune-aggressin composition for suppression of xanthomonad infections in agriculture crops |
| TW200616986A (en) | 2004-09-20 | 2006-06-01 | Kudos Pharm Ltd | DNA-pk inhibitors |
| JP2008529995A (ja) | 2005-02-09 | 2008-08-07 | クドス ファーマシューティカルズ リミテッド | Ａｔｍ阻害剤 |
| AR054438A1 (es) | 2005-04-15 | 2007-06-27 | Kudos Pharm Ltd | Inhibidores de adn -pk |
| CA2651367A1 (en) * | 2005-05-11 | 2006-11-16 | Genetic Technologies Limited | Methods of enriching fetal cells |
| US10029034B2 (en) * | 2005-12-15 | 2018-07-24 | CARDINAL HEALTH SWITZERLAND 515 GmbH | Drug-eluting articles with improved drug release profiles |
| US20100233733A1 (en) * | 2009-02-10 | 2010-09-16 | Nodality, Inc., A Delaware Corporation | Multiple mechanisms for modulation of the pi3 kinase pathway |
| CN102532247B (zh) * | 2011-11-08 | 2013-11-13 | 华南农业大学 | 一种来自绿木霉的杀线虫化合物及其制备方法和应用 |
| WO2014203129A1 (en) | 2013-06-19 | 2014-12-24 | Olema Pharmaceuticals, Inc. | Combinations of benzopyran compounds, compositions and uses thereof |
| CN104774239B (zh) * | 2015-03-13 | 2017-01-04 | 暨南大学 | 多节孢绿胶霉素类化合物及其用途 |
-
1994
- 1994-10-06 CA CA002133815A patent/CA2133815A1/en not_active Abandoned
- 1994-10-07 EP EP94307393A patent/EP0648492A3/en not_active Withdrawn
- 1994-10-11 JP JP6245278A patent/JPH07149635A/ja active Pending
-
1997
- 1997-02-25 US US08/805,704 patent/US5726167A/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005509635A (ja) * | 2001-10-19 | 2005-04-14 | アイコス コーポレイション | 人間のホスファチジルイノシトール３−キナーゼデルタの阻害 |
| JP4945060B2 (ja) * | 2001-10-19 | 2012-06-06 | イコス・コーポレイション | 人間のホスファチジルイノシトール３−キナーゼデルタの阻害 |
| JP2009539988A (ja) * | 2006-06-12 | 2009-11-19 | バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | イオンチャネルの調節因子として有用なチエノピリミジン |
| JP2011037730A (ja) * | 2009-08-07 | 2011-02-24 | Kobe Gakuin | Ｄｎａ合成酵素阻害剤 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5726167A (en) | 1998-03-10 |
| CA2133815A1 (en) | 1995-04-13 |
| EP0648492A2 (en) | 1995-04-19 |
| EP0648492A3 (en) | 1997-02-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH07149635A (ja) | ホスファチジルイノシトール ３−キナーゼに依存する状態の治療のための製剤 | |
| Alhenc-Gelas et al. | Stimulation of prostaglandin formation by vasoactive mediators in cultured human endothelial cells | |
| HUT67667A (en) | Pharmaceutical composition causes inhibition of phosphatidylinositol-3-kinase containing wortmannin and analogs thereof and process for its production | |
| Kaibuchi et al. | Phosphatidylinositol turnover in platelet activation; calcium mobilization and protein phosphorylation | |
| US5504103A (en) | Inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase with 17 β-hydroxywortmannin and analogs thereof | |
| Matsuzawa et al. | Studies on drug-induced lipidosis: subcellular localization of phospholipid and cholesterol in the liver of rats treated with chloroquine or 4, 4'-bis (diethylaminoethoxy) alpha, beta-diethyldiphenylethane. | |
| Papadopoulos | Structure and function of the peripheral-type benzodiazepine receptor in steroidogenic cells | |
| US5602171A (en) | Methods of inhibiting phosphatase activity and treatment of disorders associated therewith using naphthopyrones and derivatives thereof | |
| Razzini et al. | Novel functional PI 3‐kinase antagonists inhibit cell growth and tumorigenicity in human cancer cell lines | |
| US20020037276A1 (en) | Phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors as stimulators of endocrine differentiation | |
| Berggren et al. | Inhibition of the signalling enzyme phosphatidylinositol-3-kinase by antitumor ether lipid analogues | |
| JPH10502373A (ja) | 立体化学的ワートマニン誘導体 | |
| Martelli et al. | Insulin selectively stimulates nuclear phosphoinositide-specific phospholipase C (PI-PLC) β1 activity through a mitogen-activated protein (MAP) kinase-dependent serine phosphorylation | |
| EP1402894B1 (en) | Cancerous metastasis inhibitors containing carbacyclic phosphatidic acid derivatives | |
| Diebold et al. | Influences of lovastatin administration on the respiratory burst of leukocytes and the phosphorylation potential of mitochondria in guinea pigs | |
| JP2001515916A (ja) | 悪性および伝染性疾患の治療用にニコチンアミド・アデニン・ジヌクレオチドならびにその類似物を用いる治療法 | |
| Hamdan et al. | Inhibition of mitochondrial carnitine palmitoyltransferase-1 by a trimetazidine derivative, S-15176 | |
| SE466683B (sv) | Spiroketalsteroidglykosider och/eller estrar daerav till anvaendning som laekemedel | |
| KR101110742B1 (ko) | 영지버섯 추출물 또는 에고스테롤 퍼옥사이드를 포함하는 또는 가나도마난디올을 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 성분 조성물 | |
| Roozemond et al. | Effect of altered membrane structure on NK cell-mediated cytotoxicity. III. Decreased susceptibility to natural killer cytotoxic factor (NKCF) and suppression of NKCF release by membrane rigidification. | |
| Kaufmann et al. | The serine proteinase thrombin promotes migration of human renal carcinoma cells by a PKA-dependent mechanism | |
| Takeuchi et al. | Inhibitory effect of mitoxantrone on activity of protein kinase C and growth of HL60 cells | |
| Ko et al. | Mesenchymal stromal cells regulate THP-1–differentiated macrophage cytokine production by activating Akt/mammalian target of rapamycin complex 1 pathway | |
| Hattori et al. | Inhibition of rat brain microsomal Na+, K+‐ATPase by S‐adenosylmethionine | |
| Davis et al. | Electron microscopic cytochemical localization of a basolateral calcium adenosine triphosphatase in vitamin D replete chick enterocytes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20040210 |