JPH07155198A - 尿中ペプシノーゲンの測定方法 - Google Patents
尿中ペプシノーゲンの測定方法Info
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- JPH07155198A JPH07155198A JP33947793A JP33947793A JPH07155198A JP H07155198 A JPH07155198 A JP H07155198A JP 33947793 A JP33947793 A JP 33947793A JP 33947793 A JP33947793 A JP 33947793A JP H07155198 A JPH07155198 A JP H07155198A
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 本発明は、尿中ペプシノーゲン（ウロペプシ
ン）が活性化される酸性条件下では変性しないが活性化
されたウロペプシンにより加水分解されて失活する性質
と、活性化されたウロペプシンが不活化されるpＨ条件
下で活性測定を行うことができる性質とを有する酵素
（以下、耐酸性酵素と略記する。）を用いてウロペプシ
ン量を測定することを特徴とする、ウロペプシンの測定
方法の発明である。 【効果】 本発明は、例えば凝乳法等の従来法に比較し
て極めて簡便に精度良く且つ高感度にウロペプシンを測
定し得る方法を提供するものであり、本発明を利用する
ことにより、自動分析装置を利用した、胃潰瘍、胃癌等
のスクリーニング（集団検診）用のウロペプシン測定が
可能となる。
ン）が活性化される酸性条件下では変性しないが活性化
されたウロペプシンにより加水分解されて失活する性質
と、活性化されたウロペプシンが不活化されるpＨ条件
下で活性測定を行うことができる性質とを有する酵素
（以下、耐酸性酵素と略記する。）を用いてウロペプシ
ン量を測定することを特徴とする、ウロペプシンの測定
方法の発明である。 【効果】 本発明は、例えば凝乳法等の従来法に比較し
て極めて簡便に精度良く且つ高感度にウロペプシンを測
定し得る方法を提供するものであり、本発明を利用する
ことにより、自動分析装置を利用した、胃潰瘍、胃癌等
のスクリーニング（集団検診）用のウロペプシン測定が
可能となる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、胃潰瘍、胃癌等の診断
に利用される、尿中ペプシノーゲン（ウロペプシン）の
測定方法に関する。
に利用される、尿中ペプシノーゲン（ウロペプシン）の
測定方法に関する。
【０００２】
【発明の背景】ペプシノーゲンは、酸性条件下でペプシ
ンとなる、ペプシンの不活性型前駆体であり、尿中にも
存在することは古くから知られている。尿中ペプシノー
ゲン（ウロペプシン）は、胃主細胞から分泌されたペプ
シノーゲンが血中に移行した後に腎臓から排泄されたも
ので、その量は胃ペプシン量と関係があり、例えばスト
レス下では鋭敏に増加し、例えば十二指腸潰瘍、胃潰
瘍、急性胃炎等の時には異常高値を示し、例えば萎縮性
胃炎（慢性胃炎）、胃癌等の時には異常低値を示すとい
われている。
ンとなる、ペプシンの不活性型前駆体であり、尿中にも
存在することは古くから知られている。尿中ペプシノー
ゲン（ウロペプシン）は、胃主細胞から分泌されたペプ
シノーゲンが血中に移行した後に腎臓から排泄されたも
ので、その量は胃ペプシン量と関係があり、例えばスト
レス下では鋭敏に増加し、例えば十二指腸潰瘍、胃潰
瘍、急性胃炎等の時には異常高値を示し、例えば萎縮性
胃炎（慢性胃炎）、胃癌等の時には異常低値を示すとい
われている。
【０００３】また、尿は、血液や血清等に比べて採取が
容易であるため、胃潰瘍、胃癌等のスクリーニング（集
団検診）に尿中ペプシノーゲンの測定が利用できればそ
の意義は大きい。
容易であるため、胃潰瘍、胃癌等のスクリーニング（集
団検診）に尿中ペプシノーゲンの測定が利用できればそ
の意義は大きい。
【０００４】しかしながら、現在行われている主な尿中
ペプシノーゲンの測定方法である凝乳法［臨床検査法提
要、金井正光編、689頁、昭和60年11月20日発行第29版
第５刷、金原出版(株)等］は、測定操作が煩雑で自動分
析装置に応用し難い方法であり、且つ１検体の測定に約
１時間かかる場合もあるという問題点をも有している方
法であるため、スクリーニング（集団検診）に利用する
のに適したものとは言い難い。
ペプシノーゲンの測定方法である凝乳法［臨床検査法提
要、金井正光編、689頁、昭和60年11月20日発行第29版
第５刷、金原出版(株)等］は、測定操作が煩雑で自動分
析装置に応用し難い方法であり、且つ１検体の測定に約
１時間かかる場合もあるという問題点をも有している方
法であるため、スクリーニング（集団検診）に利用する
のに適したものとは言い難い。
【０００５】また、最近、放射免疫測定法（ＲＩＡ）に
よる血中ペプシノーゲン測定法が開発されたが、この方
法も測定操作が煩雑であったり、特別な施設を使用する
必要があることや廃棄物処理上の問題があるため、スク
リーニング（集団検診）に利用するのに適したものとは
言い難い。そのため、尿中ペプシノーゲンの簡便で且つ
精度の高い測定法の開発が期待されている現状にある。
よる血中ペプシノーゲン測定法が開発されたが、この方
法も測定操作が煩雑であったり、特別な施設を使用する
必要があることや廃棄物処理上の問題があるため、スク
リーニング（集団検診）に利用するのに適したものとは
言い難い。そのため、尿中ペプシノーゲンの簡便で且つ
精度の高い測定法の開発が期待されている現状にある。
【０００６】
【発明の目的】本発明は上記した如き状況に鑑み成され
たもので、胃潰瘍、胃癌等の診断に利用される、尿中ペ
プシノーゲン（ウロペプシン）を簡便に且つ精度良く測
定する方法を提供することをその目的とする。
たもので、胃潰瘍、胃癌等の診断に利用される、尿中ペ
プシノーゲン（ウロペプシン）を簡便に且つ精度良く測
定する方法を提供することをその目的とする。
【０００７】
【発明の構成】本発明は、尿中ペプシノーゲンが活性化
される酸性条件下では変性しないが活性化された尿中ペ
プシノーゲン（ペプシン）により加水分解されて失活す
る性質と、活性化された尿中ペプシノーゲンが不活化さ
れるpＨ条件下で活性測定を行うことができる性質とを
有する酵素（以下、耐酸性酵素と略記する。）と尿と
を、尿中ペプシノーゲンが活性化される酸性条件下で反
応させた後、反応液のpＨを尿中ペプシンが不活化され
るpＨに調製して耐酸性酵素の活性測定を行い、得られ
た該酵素活性値に基づいて尿中ペプシノーゲン量を測定
することを特徴とする、尿中ペプシノーゲンの測定方
法、の発明である。
される酸性条件下では変性しないが活性化された尿中ペ
プシノーゲン（ペプシン）により加水分解されて失活す
る性質と、活性化された尿中ペプシノーゲンが不活化さ
れるpＨ条件下で活性測定を行うことができる性質とを
有する酵素（以下、耐酸性酵素と略記する。）と尿と
を、尿中ペプシノーゲンが活性化される酸性条件下で反
応させた後、反応液のpＨを尿中ペプシンが不活化され
るpＨに調製して耐酸性酵素の活性測定を行い、得られ
た該酵素活性値に基づいて尿中ペプシノーゲン量を測定
することを特徴とする、尿中ペプシノーゲンの測定方
法、の発明である。
【０００８】即ち、本発明者らは、尿中ペプシノーゲン
を簡便に精度良く且つ高感度に測定し得る方法を見出す
べく鋭意研究の結果、尿中ペプシノーゲンが活性化され
る酸性条件下では変性しないが活性化された尿中ペプシ
ノーゲン（ペプシン）により加水分解されて失活する性
質と、活性化された尿中ペプシノーゲンが不活化される
pＨ条件下で活性測定を行うことができる性質とを有す
る酵素（耐酸性酵素）を尿中ペプシノーゲンが活性化さ
れるpＨ範囲で尿中ペプシノーゲンと反応させてその一
部を失活させた後、一旦活性化された尿中ペプシノーゲ
ン（ペプシン）が不活化されるようなpＨ範囲で該耐酸
性酵素の活性測定を行い、得られた該耐酸性酵素の活性
値を利用することにより尿中ペプシノーゲン量を簡便に
精度良く且つ高感度に測定できることを見出し、本発明
を完成するに至った。
を簡便に精度良く且つ高感度に測定し得る方法を見出す
べく鋭意研究の結果、尿中ペプシノーゲンが活性化され
る酸性条件下では変性しないが活性化された尿中ペプシ
ノーゲン（ペプシン）により加水分解されて失活する性
質と、活性化された尿中ペプシノーゲンが不活化される
pＨ条件下で活性測定を行うことができる性質とを有す
る酵素（耐酸性酵素）を尿中ペプシノーゲンが活性化さ
れるpＨ範囲で尿中ペプシノーゲンと反応させてその一
部を失活させた後、一旦活性化された尿中ペプシノーゲ
ン（ペプシン）が不活化されるようなpＨ範囲で該耐酸
性酵素の活性測定を行い、得られた該耐酸性酵素の活性
値を利用することにより尿中ペプシノーゲン量を簡便に
精度良く且つ高感度に測定できることを見出し、本発明
を完成するに至った。
【０００９】本発明の測定方法に於いて使用される耐酸
性酵素としては、尿中ペプシノーゲンが活性化されてペ
プシンとなるpＨ範囲では変性されないが該ペプシンに
より加水分解されて失活する性質と、該ペプシンが不活
化されるようなpＨ範囲で活性測定が可能な性質とを有
する酵素であれば特に限定されることなく挙げられる
が、例えばトリプシン，キモトリプシン等の酸性プロテ
アーゼ等が好ましく挙げられる。これらの使用濃度とし
ては、尿中ペプシノーゲンの活性測定が行える範囲であ
れば特に限定することなく挙げられるが、酸性条件下で
尿と反応させる際の反応液中の濃度として通常0.5〜5.0
mg/dl、好ましくは１〜３mg/dlの範囲が挙げられる。
性酵素としては、尿中ペプシノーゲンが活性化されてペ
プシンとなるpＨ範囲では変性されないが該ペプシンに
より加水分解されて失活する性質と、該ペプシンが不活
化されるようなpＨ範囲で活性測定が可能な性質とを有
する酵素であれば特に限定されることなく挙げられる
が、例えばトリプシン，キモトリプシン等の酸性プロテ
アーゼ等が好ましく挙げられる。これらの使用濃度とし
ては、尿中ペプシノーゲンの活性測定が行える範囲であ
れば特に限定することなく挙げられるが、酸性条件下で
尿と反応させる際の反応液中の濃度として通常0.5〜5.0
mg/dl、好ましくは１〜３mg/dlの範囲が挙げられる。
【００１０】本発明を実施するには例えば以下の如くし
て行えばよい。即ち、先ず尿中ペプシノーゲンが活性化
されてペプシンとなるpＨ範囲、より具体的には通常pＨ
1.5〜5.0、好ましくはpＨ1.8〜3.0の範囲に調整した緩
衝液（例えばリン酸緩衝液、グリシン・塩酸緩衝液、ク
エン酸緩衝液等）等に、検体尿と耐酸性酵素とを添加し
て例えば25〜37℃で５〜10分間程度反応させた後、反応
液のpＨをペプシンは失活するが耐酸性酵素の活性測定
が行えるpＨ範囲に再度調整して耐酸性酵素の活性測定
を常法により行う。得られた該活性値を、予め濃度既知
のペプシン溶液を検体尿の代りに用い、上記と同じ試薬
を用い、同様の操作を行って得られた、ペプシン量と耐
酸性酵素活性値との関係を表わす検量線に当てはめるこ
とにより検体尿中のペプシノーゲン量を求めることがで
きる。
て行えばよい。即ち、先ず尿中ペプシノーゲンが活性化
されてペプシンとなるpＨ範囲、より具体的には通常pＨ
1.5〜5.0、好ましくはpＨ1.8〜3.0の範囲に調整した緩
衝液（例えばリン酸緩衝液、グリシン・塩酸緩衝液、ク
エン酸緩衝液等）等に、検体尿と耐酸性酵素とを添加し
て例えば25〜37℃で５〜10分間程度反応させた後、反応
液のpＨをペプシンは失活するが耐酸性酵素の活性測定
が行えるpＨ範囲に再度調整して耐酸性酵素の活性測定
を常法により行う。得られた該活性値を、予め濃度既知
のペプシン溶液を検体尿の代りに用い、上記と同じ試薬
を用い、同様の操作を行って得られた、ペプシン量と耐
酸性酵素活性値との関係を表わす検量線に当てはめるこ
とにより検体尿中のペプシノーゲン量を求めることがで
きる。
【００１１】上記の測定に於いて、耐酸性酵素として例
えばトリプシンやキモトリプシン等尿中にそのインヒビ
ターが存在する酵素を使用する場合には、注意が必要で
ある。即ち、尿中に存在するトリプシンインヒビターに
よりトリプシン等が失活するため測定値に正誤差が生ず
る場合があるからである。このような測定への影響を避
けるためには、予め検体尿中のトリプシンインヒビター
によるトリプシンの失活量を盲検値として測定し、この
値を上記の操作により得られる耐酸性酵素活性値から差
し引く等の処置を行うことが望ましい。尚、該盲検値を
求める方法としては、トリプシンインヒビターによるト
リプシン等の失活量を測定し得る方法であれば特に限定
されない。
えばトリプシンやキモトリプシン等尿中にそのインヒビ
ターが存在する酵素を使用する場合には、注意が必要で
ある。即ち、尿中に存在するトリプシンインヒビターに
よりトリプシン等が失活するため測定値に正誤差が生ず
る場合があるからである。このような測定への影響を避
けるためには、予め検体尿中のトリプシンインヒビター
によるトリプシンの失活量を盲検値として測定し、この
値を上記の操作により得られる耐酸性酵素活性値から差
し引く等の処置を行うことが望ましい。尚、該盲検値を
求める方法としては、トリプシンインヒビターによるト
リプシン等の失活量を測定し得る方法であれば特に限定
されない。
【００１２】本発明を実施する際の、ペプシンは失活す
るが耐酸性酵素の活性測定が行えるpＨ範囲は、耐酸性
酵素の種類により異なるが、例えば耐酸性酵素としてト
リプシン、キモトリプシン等の酸性プロテアーゼを使用
する際には通常pＨ7.2〜9.0、好ましくはpＨ7.6〜8.5の
範囲が挙げられる。
るが耐酸性酵素の活性測定が行えるpＨ範囲は、耐酸性
酵素の種類により異なるが、例えば耐酸性酵素としてト
リプシン、キモトリプシン等の酸性プロテアーゼを使用
する際には通常pＨ7.2〜9.0、好ましくはpＨ7.6〜8.5の
範囲が挙げられる。
【００１３】また、耐酸性酵素の活性測定は、該耐酸性
酵素の活性測定の常法に準じて実施すればよく、使用す
る基質、緩衝液、賦活剤等の試薬類も常法に於いて使用
されるものの中から適宜選択して使用すれば足りるし、
これらの使用濃度も常法に於ける使用濃度範囲から適宜
選択して決定すれば足りる。尚、耐酸性酵素の基質は、
酸性条件下で変性されず且つペプシンにより分解されな
い性質を有するものであれば、耐酸性酵素と尿中ペプシ
ノーゲン（ペプシン）との反応時に共存させておいても
よいことは言うまでもない。
酵素の活性測定の常法に準じて実施すればよく、使用す
る基質、緩衝液、賦活剤等の試薬類も常法に於いて使用
されるものの中から適宜選択して使用すれば足りるし、
これらの使用濃度も常法に於ける使用濃度範囲から適宜
選択して決定すれば足りる。尚、耐酸性酵素の基質は、
酸性条件下で変性されず且つペプシンにより分解されな
い性質を有するものであれば、耐酸性酵素と尿中ペプシ
ノーゲン（ペプシン）との反応時に共存させておいても
よいことは言うまでもない。
【００１４】本発明の尿中ペプシノーゲンの測定に於い
ては、ペプシンにより分解されて失活する性質を有する
耐酸性酵素を利用して測定を行うため、極めて短時間で
目的の測定を行うことができる。即ち、耐酸性酵素はペ
プシンにより加水分解されて容易に失活するので反応時
間を短時間とした場合でも、活性化された尿中ペプシノ
ーゲン（ペプシン）量に対応した耐酸性酵素の失活が速
やかに起こるからである。
ては、ペプシンにより分解されて失活する性質を有する
耐酸性酵素を利用して測定を行うため、極めて短時間で
目的の測定を行うことができる。即ち、耐酸性酵素はペ
プシンにより加水分解されて容易に失活するので反応時
間を短時間とした場合でも、活性化された尿中ペプシノ
ーゲン（ペプシン）量に対応した耐酸性酵素の失活が速
やかに起こるからである。
【００１５】本発明は、上記した如き特徴を有している
ため、自動分析装置を利用した測定への応用が可能であ
るので、胃潰瘍、胃癌等のスクリーニング（集団検診）
用の尿中ペプシノーゲン測定方法として極めて有用な方
法である。以下に参考例、実施例等により、本発明を更
に詳細に述べるが、本発明はこれらにより何等限定され
るものではない。
ため、自動分析装置を利用した測定への応用が可能であ
るので、胃潰瘍、胃癌等のスクリーニング（集団検診）
用の尿中ペプシノーゲン測定方法として極めて有用な方
法である。以下に参考例、実施例等により、本発明を更
に詳細に述べるが、本発明はこれらにより何等限定され
るものではない。
【００１６】
実施例１．尿中ペプシノーゲンの測定 （試料）新鮮尿30検体を試料とした。 （測定試液） ・第１試液 トリプシン（和光純薬工業(株)製、結晶形）を２mg/d
l、N-α-ベンゾイル-DL-アルギニン-p-ニトロアニリド
・塩酸塩（ＢＡＰＮＡ、和光純薬工業(株)製）を60mg/d
l、及びポリオキシエチレン(10)オクチルフェニルエー
テル（和光純薬工業(株)製）を0.1％含む50mMグリシン
・塩酸緩衝液（pＨ2.5）を第１試液とした。 ・第２試液 ポリオキシエチレン(10)オクチルフェニルエーテル（和
光純薬工業(株)製）を0.1％含む１Ｍトリス（ヒドロキ
シメチル）アミノメタン（Tris）・塩酸緩衝液（pＨ8.
0）を第２試液とした。 （ペプシン標準液）ペプシン（結晶ペプシン、シグマ社
製）を所定濃度含む ５mMクエン酸緩衝液（pＨ5.5）を
標準液とした。 （測定機器）日立自動分析装置７０７０型を使用した。 （測定操作）試料25μｌと第１試液200μｌとを混合
し、37℃で５分間インキュベートした後、これに第２試
液200μlを添加、混合した。第２試液添加後１〜３分後
の吸光度変化を測定主波長405nm副波長505nmで測定し、
吸光度変化値１（ΔＥ１）を得た。また、試料25μｌと
第２試液200μｌとを混合し、37℃で５分間インキュベ
ートした後、これに第１試液200μlを添加、混合した。
第１試液添加後１〜３分後の吸光度変化を測定主波長40
5nm副波長505nmで測定し、吸光度変化値２（ΔＥ２）
（盲検値）を得た。得られた２つの吸光度変化値の差
（ΔＥ１−ΔＥ２）を、予め濃度既知のペプシン標準液
を試料として用い、上記と同じ試薬を用い、同様の操作
を行って得られた、ペプシン量と吸光度変化値との関係
を表わす検量線に当てはめることにより、試料中のペプ
シノーゲン量を求めた後、尿中クレアチニン１g当たり
の量（mg/g・CRE）に換算した。 （結果）得られた結果を表１に示す。
l、N-α-ベンゾイル-DL-アルギニン-p-ニトロアニリド
・塩酸塩（ＢＡＰＮＡ、和光純薬工業(株)製）を60mg/d
l、及びポリオキシエチレン(10)オクチルフェニルエー
テル（和光純薬工業(株)製）を0.1％含む50mMグリシン
・塩酸緩衝液（pＨ2.5）を第１試液とした。 ・第２試液 ポリオキシエチレン(10)オクチルフェニルエーテル（和
光純薬工業(株)製）を0.1％含む１Ｍトリス（ヒドロキ
シメチル）アミノメタン（Tris）・塩酸緩衝液（pＨ8.
0）を第２試液とした。 （ペプシン標準液）ペプシン（結晶ペプシン、シグマ社
製）を所定濃度含む ５mMクエン酸緩衝液（pＨ5.5）を
標準液とした。 （測定機器）日立自動分析装置７０７０型を使用した。 （測定操作）試料25μｌと第１試液200μｌとを混合
し、37℃で５分間インキュベートした後、これに第２試
液200μlを添加、混合した。第２試液添加後１〜３分後
の吸光度変化を測定主波長405nm副波長505nmで測定し、
吸光度変化値１（ΔＥ１）を得た。また、試料25μｌと
第２試液200μｌとを混合し、37℃で５分間インキュベ
ートした後、これに第１試液200μlを添加、混合した。
第１試液添加後１〜３分後の吸光度変化を測定主波長40
5nm副波長505nmで測定し、吸光度変化値２（ΔＥ２）
（盲検値）を得た。得られた２つの吸光度変化値の差
（ΔＥ１−ΔＥ２）を、予め濃度既知のペプシン標準液
を試料として用い、上記と同じ試薬を用い、同様の操作
を行って得られた、ペプシン量と吸光度変化値との関係
を表わす検量線に当てはめることにより、試料中のペプ
シノーゲン量を求めた後、尿中クレアチニン１g当たり
の量（mg/g・CRE）に換算した。 （結果）得られた結果を表１に示す。
【００１７】参考例１．凝乳法による尿中ペプシノーゲ
ン量の測定 （試料）実施例１と同じものを用いた。 （基質液）市販の牛乳を４Ｍ酢酸緩衝液（pＨ4.5）で18
倍に希釈したものを基質液とした。 （ペプシン標準液）実施例１と同じものを用いた。 （操作法） (1)ペプシン変性試料の調製 試料に６Ｎ塩酸を滴下してpＨを4.0前後に調製した後、
37℃で１時間インキュベートしてペプシン変性試料を得
た。 (2)試料中のペプシノーゲン量の測定 上記(1)で得たペプシン変性試料500μlに、４Ｍ酢酸緩
衝液（pＨ4.5）500μl及び10％尿素水溶液1000μlを添
加、混合した。上記溶液50μlを分注した血小板凝集計
用キュベット（回転子入り）を血小板凝集計（二光バイ
オサイエンス社製、４チャンネルＰＡＴ−４Ａ）にセッ
トし、これに基質液15μlを分注すると同時に４チャン
ネル記録計（二光バイオサイエンス社製、Ｔ−６２６Ｄ
Ｓ）を作動させて記録を開始した。得られたデータをコ
ンピューターで解析し、透過率の最大変化点に到達する
までの時間を求めた。得られた最大変化点到達時間を、
予め濃度既知のペプシン標準液を試料として用い、上記
と同じ試薬を用い、同様の操作を行って得られた、ペプ
シン量と最大変化点到達時間との関係を表わす検量線に
当てはめることにより、試料中のペプシノーゲン量を求
めた後、尿中クレアチニン１g当たりの量（mg/g・CRE）
に換算した。 （結果）得られた結果を表１に併せて示す。
ン量の測定 （試料）実施例１と同じものを用いた。 （基質液）市販の牛乳を４Ｍ酢酸緩衝液（pＨ4.5）で18
倍に希釈したものを基質液とした。 （ペプシン標準液）実施例１と同じものを用いた。 （操作法） (1)ペプシン変性試料の調製 試料に６Ｎ塩酸を滴下してpＨを4.0前後に調製した後、
37℃で１時間インキュベートしてペプシン変性試料を得
た。 (2)試料中のペプシノーゲン量の測定 上記(1)で得たペプシン変性試料500μlに、４Ｍ酢酸緩
衝液（pＨ4.5）500μl及び10％尿素水溶液1000μlを添
加、混合した。上記溶液50μlを分注した血小板凝集計
用キュベット（回転子入り）を血小板凝集計（二光バイ
オサイエンス社製、４チャンネルＰＡＴ−４Ａ）にセッ
トし、これに基質液15μlを分注すると同時に４チャン
ネル記録計（二光バイオサイエンス社製、Ｔ−６２６Ｄ
Ｓ）を作動させて記録を開始した。得られたデータをコ
ンピューターで解析し、透過率の最大変化点に到達する
までの時間を求めた。得られた最大変化点到達時間を、
予め濃度既知のペプシン標準液を試料として用い、上記
と同じ試薬を用い、同様の操作を行って得られた、ペプ
シン量と最大変化点到達時間との関係を表わす検量線に
当てはめることにより、試料中のペプシノーゲン量を求
めた後、尿中クレアチニン１g当たりの量（mg/g・CRE）
に換算した。 （結果）得られた結果を表１に併せて示す。
【００１８】
【表１】 ＊相関係数（γ）＝0.9805。 ＊回帰直線式：Ｙ＝1.0973Ｘ−0.1121。 Ｙ：参考例１により得られた値。 Ｘ：実施例１により得られた値。 表１の結果から明らかな如く、本発明の方法は、従来法
である凝乳法と良好な相関を示すことが判る。
である凝乳法と良好な相関を示すことが判る。
【００１９】
【発明の効果】以上述べた如く、本発明は、例えば凝乳
法等の従来法に比較して極めて簡便に精度良く且つ高感
度に尿中ペプシノーゲンを測定し得る方法を提供するも
のであり、本発明を利用することにより、自動分析装置
を利用した、胃潰瘍、胃癌等のスクリーニング（集団検
診）用の尿中ペプシノーゲン測定が可能となるので、斯
業に貢献するところ極めて大なる発明である。
法等の従来法に比較して極めて簡便に精度良く且つ高感
度に尿中ペプシノーゲンを測定し得る方法を提供するも
のであり、本発明を利用することにより、自動分析装置
を利用した、胃潰瘍、胃癌等のスクリーニング（集団検
診）用の尿中ペプシノーゲン測定が可能となるので、斯
業に貢献するところ極めて大なる発明である。
【手続補正書】
【提出日】平成７年１月１８日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正内容】
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項３
【補正方法】変更
【補正内容】
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００７】
【発明の構成】本発明は、尿中ペプシノーゲンが活性化
される酸性条件下では変性しないが活性化された尿中ペ
プシノーゲン（ペプシン）により加水分解されて失活す
る性質と、活性化された尿中ペプシノーゲンが不活化さ
れるｐＨ条件下で活性測定を行うことができる性質とを
有する酵素（以下、耐酸性酵素と略記する。）と尿と
を、尿中ペプシノーゲンが活性化される酸性条件下で反
応させた後、反応液のｐＨを尿中ペプシンが不活化され
るｐＨに調整して耐酸性酵素の活性測定を行い、得られ
た該酵素活性値に基づいて尿中ペプシノーゲン量を測定
することを特徴とする、尿中ペプシノーゲンの測定方
法、の発明である。
される酸性条件下では変性しないが活性化された尿中ペ
プシノーゲン（ペプシン）により加水分解されて失活す
る性質と、活性化された尿中ペプシノーゲンが不活化さ
れるｐＨ条件下で活性測定を行うことができる性質とを
有する酵素（以下、耐酸性酵素と略記する。）と尿と
を、尿中ペプシノーゲンが活性化される酸性条件下で反
応させた後、反応液のｐＨを尿中ペプシンが不活化され
るｐＨに調整して耐酸性酵素の活性測定を行い、得られ
た該酵素活性値に基づいて尿中ペプシノーゲン量を測定
することを特徴とする、尿中ペプシノーゲンの測定方
法、の発明である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００９】本発明の測定方法に於いて使用される耐酸
性酵素としては、尿中ペプシノーゲンが活性化されてペ
プシンとなるｐＨ範囲では変性されないが該ペプシンに
より加水分解されて失活する性質と、該ペプシンが不活
化されるようなｐＨ範囲で活性測定が可能な性質とを有
する酵素であれば特に限定されることなく挙げられる
が、例えばトリプシン，キモトリプシン等が好ましく挙
げられる。これらの使用濃度としては、尿中ペプシノー
ゲンの活性測定が行える範囲であれば特に限定すること
なく挙げられるが、酸性条件下で尿と反応させる際の反
応液中の濃度として通常０．５〜５．０ｍｇ／ｄｌ、好
ましくは１〜３ｍｇ／ｄｌの範囲が挙げられる。
性酵素としては、尿中ペプシノーゲンが活性化されてペ
プシンとなるｐＨ範囲では変性されないが該ペプシンに
より加水分解されて失活する性質と、該ペプシンが不活
化されるようなｐＨ範囲で活性測定が可能な性質とを有
する酵素であれば特に限定されることなく挙げられる
が、例えばトリプシン，キモトリプシン等が好ましく挙
げられる。これらの使用濃度としては、尿中ペプシノー
ゲンの活性測定が行える範囲であれば特に限定すること
なく挙げられるが、酸性条件下で尿と反応させる際の反
応液中の濃度として通常０．５〜５．０ｍｇ／ｄｌ、好
ましくは１〜３ｍｇ／ｄｌの範囲が挙げられる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１２】本発明を実施する際の、ペプシンは失活す
るが耐酸性酵素の活性測定が行えるｐＨ範囲は、耐酸性
酵素の種類により異なるが、例えば耐酸性酵素としてト
リプシン、キモトリプシン等を使用する際には通常ｐＨ
７．２〜９．０、好ましくはｐＨ７．６〜５の範囲が挙
げられる。
るが耐酸性酵素の活性測定が行えるｐＨ範囲は、耐酸性
酵素の種類により異なるが、例えば耐酸性酵素としてト
リプシン、キモトリプシン等を使用する際には通常ｐＨ
７．２〜９．０、好ましくはｐＨ７．６〜５の範囲が挙
げられる。
Claims (3)
- 【請求項１】尿中ペプシノーゲンが活性化される酸性条
件下では変性しないが活性化された尿中ペプシノーゲン
（ペプシン）により加水分解されて失活する性質と、活
性化された尿中ペプシノーゲンが不活化されるpＨ条件
下で活性測定を行うことができる性質とを有する酵素
（以下、耐酸性酵素と略記する。）と尿とを、尿中ペプ
シノーゲンが活性化される酸性条件下で反応させた後、
反応液のpＨを尿中ペプシンが不活化されるpＨに調製し
て耐酸性酵素の活性測定を行い、得られた該酵素活性値
に基づいて尿中ペプシノーゲン量を測定することを特徴
とする、尿中ペプシノーゲンの測定方法。 - 【請求項２】酸性条件がpＨ1.5〜5.0である、請求項１
に記載の測定方法。 - 【請求項３】耐酸性酵素が酸性プロテアーゼである、請
求項１又は２に記載の測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33947793A JPH07155198A (ja) | 1993-12-03 | 1993-12-03 | 尿中ペプシノーゲンの測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33947793A JPH07155198A (ja) | 1993-12-03 | 1993-12-03 | 尿中ペプシノーゲンの測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07155198A true JPH07155198A (ja) | 1995-06-20 |
Family
ID=18327844
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33947793A Withdrawn JPH07155198A (ja) | 1993-12-03 | 1993-12-03 | 尿中ペプシノーゲンの測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07155198A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5856117A (en) * | 1996-06-21 | 1999-01-05 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Method for measuring the concentration of protease inhibitors, kit for use in such a method and method for dissolving a substrate |
| US6130055A (en) * | 1997-08-29 | 2000-10-10 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Method for measuring the concentration or the activity of protease inhibitor |
-
1993
- 1993-12-03 JP JP33947793A patent/JPH07155198A/ja not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5856117A (en) * | 1996-06-21 | 1999-01-05 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Method for measuring the concentration of protease inhibitors, kit for use in such a method and method for dissolving a substrate |
| US6130055A (en) * | 1997-08-29 | 2000-10-10 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Method for measuring the concentration or the activity of protease inhibitor |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20010206 |