JPH0716409B2 - 酵素を固定化する方法 - Google Patents
酵素を固定化する方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、酵素を担体へ固定化するに際し、担体への酵
素の固定化を助ける架橋剤としてイリドイド化合物を用
いることを特徴とする、酵素の固定化方法に関するもの
である。さらに詳しくは、イリドイド化合物で酵素間の
架橋重合を行わせ、および／または酵素と担体を架橋さ
せることにより、高い酵素活性を有し、安定でかつ人体
に毒性を持たず、食品素材の製造に特に有用な固定化酵
素の製造法を提供するものである。
素の固定化を助ける架橋剤としてイリドイド化合物を用
いることを特徴とする、酵素の固定化方法に関するもの
である。さらに詳しくは、イリドイド化合物で酵素間の
架橋重合を行わせ、および／または酵素と担体を架橋さ
せることにより、高い酵素活性を有し、安定でかつ人体
に毒性を持たず、食品素材の製造に特に有用な固定化酵
素の製造法を提供するものである。
（従来の技術） 微生物や動植物に由来する酵素を用いて、生化学的反応
を行わせることは、食品、医薬品の製造等を含めて種々
の分野で行われている。また、酵素をバッチ式で使用す
る代わりにその利用を効率的に行うため、適当な担体上
に固定化して工業規模の連続式工程に用いる研究も広く
行われている。固定化酵素はその効率の良さなどの理
由、とりわけ食品素材の製造分野で広く実用に供されて
いる。しかしながら、安全性が高く、高い酵素活性を保
ちかつ安定で、また汎用性の広い酵素の固定化方法は未
だ開発されていないのが現状である。
を行わせることは、食品、医薬品の製造等を含めて種々
の分野で行われている。また、酵素をバッチ式で使用す
る代わりにその利用を効率的に行うため、適当な担体上
に固定化して工業規模の連続式工程に用いる研究も広く
行われている。固定化酵素はその効率の良さなどの理
由、とりわけ食品素材の製造分野で広く実用に供されて
いる。しかしながら、安全性が高く、高い酵素活性を保
ちかつ安定で、また汎用性の広い酵素の固定化方法は未
だ開発されていないのが現状である。
即ち、酵素の固定化方法としては、これまで、担体結合
法、架橋重合法、ゲル包括法および複合法（担体結合法
または架橋重合法とゲル包括法との組合せ）が知られて
いる。これらのうち、ゲル包括法は、高分子マトリック
ス格子中またはマイクロカプセル中に酵素を封じ込める
もので、酵素の変性や最も少ないことや、毒性のある架
橋剤を使用しないことから、食品素材の製造に適する方
法であるが、酵素が架橋されていないためマトリックス
からの酵素の漏出や活性低下の問題を残している。
法、架橋重合法、ゲル包括法および複合法（担体結合法
または架橋重合法とゲル包括法との組合せ）が知られて
いる。これらのうち、ゲル包括法は、高分子マトリック
ス格子中またはマイクロカプセル中に酵素を封じ込める
もので、酵素の変性や最も少ないことや、毒性のある架
橋剤を使用しないことから、食品素材の製造に適する方
法であるが、酵素が架橋されていないためマトリックス
からの酵素の漏出や活性低下の問題を残している。
架橋重合法は、架橋剤として、２個以上の官能基を有す
る例えばグルタルアルデヒド等の試薬を、酵素に作用さ
せて酵素分子を架橋重合させることにより担体に固定化
するものである。これにより、酵素の逸失は防止される
が、しかしながら架橋剤の作用により酵素が失活した
り、反応に使用する試薬の安全性が充分でなく、食品素
材の製造には適当でないという問題がある。
る例えばグルタルアルデヒド等の試薬を、酵素に作用さ
せて酵素分子を架橋重合させることにより担体に固定化
するものである。これにより、酵素の逸失は防止される
が、しかしながら架橋剤の作用により酵素が失活した
り、反応に使用する試薬の安全性が充分でなく、食品素
材の製造には適当でないという問題がある。
担体結合法は、担体と酵素を適当な結合法、例えば共有
結合により結合して酵素の逸失を防止したものである
が、酵素と担体との結合性に問題を残しており、用いら
れる酵素の種類に制限がある。この結合にグルタルアル
デヒドのような架橋剤を使用して、結合性を高める方法
は、前記の理由で安全性の面から食品素材の製造には適
当でない。
結合により結合して酵素の逸失を防止したものである
が、酵素と担体との結合性に問題を残しており、用いら
れる酵素の種類に制限がある。この結合にグルタルアル
デヒドのような架橋剤を使用して、結合性を高める方法
は、前記の理由で安全性の面から食品素材の製造には適
当でない。
複合法においても、架橋剤として従来はグルタルアルデ
ヒドが最も一般的に使用されており、その毒性のため、
食品素材の製造には適当でない。
ヒドが最も一般的に使用されており、その毒性のため、
食品素材の製造には適当でない。
一方、本発明の方法で架橋剤として使用するくちなし果
実等由来のイリドイド化合物は、第１級アミノ基含有化
合物と反応し、さらに酸化重合することにより青色色素
を生成することが報告されている（特公昭57−14781号
公報、特開昭61−47167号公報）。この青色色素は、天
然色素として食品の着色に広く用いられており、その安
全性は広く認められている。
実等由来のイリドイド化合物は、第１級アミノ基含有化
合物と反応し、さらに酸化重合することにより青色色素
を生成することが報告されている（特公昭57−14781号
公報、特開昭61−47167号公報）。この青色色素は、天
然色素として食品の着色に広く用いられており、その安
全性は広く認められている。
（発明が解決しようとする問題点） 本発明は、酵素を担体へ固定化する際に酵素活性が低下
せず、この高い活性が繰り返し使用後も安定に保持さ
れ、しかも毒性の強い成分を含まない固定化酵素を製造
する方法を提供せんとするものであり、特に、新たな架
橋剤の使用により、従来の架橋剤を使用した場合に比べ
て、上記要求を遥かに良好に満足させる酵素の固定化方
法を提供せんとするものである。
せず、この高い活性が繰り返し使用後も安定に保持さ
れ、しかも毒性の強い成分を含まない固定化酵素を製造
する方法を提供せんとするものであり、特に、新たな架
橋剤の使用により、従来の架橋剤を使用した場合に比べ
て、上記要求を遥かに良好に満足させる酵素の固定化方
法を提供せんとするものである。
（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、イリドイド化合物、例えばゲニピンを架
橋剤として使用したところ、驚くべきことにイリドイド
化合物は、酵素間および酵素とアミノ基のような官能基
を有する担体との間に強い架橋形成力を示し、かつ酵素
活性の低下に及ぼす影響が小さいことを見出し、本発明
を完成した。
橋剤として使用したところ、驚くべきことにイリドイド
化合物は、酵素間および酵素とアミノ基のような官能基
を有する担体との間に強い架橋形成力を示し、かつ酵素
活性の低下に及ぼす影響が小さいことを見出し、本発明
を完成した。
従って、本発明は酵素を固定化するに際し、酵素分子間
または酵素と担体との間の架橋形成のための架橋剤とし
て、イリドイド化合物を用いることを特徴とする、酵素
の固定化方法である。
または酵素と担体との間の架橋形成のための架橋剤とし
て、イリドイド化合物を用いることを特徴とする、酵素
の固定化方法である。
本発明の方法で、酵素を固定化するには、通常の固定化
酵素の製法と同様の操作で良いが、架橋剤としてイリド
イド化合物を使用する。例えば、架橋重合法で固定化酵
素を製造するには、固定化すべき酵素を水溶液中で担
体、例えばキトサンビーズと接触させて担体に酵素を吸
着させ、この酵素吸着担体をイリドイド化合物を含む溶
液中に置いて担体表面で酵素分子の架橋重合を起こさせ
る。この際、アミノ基のような官能基を持つ担体を使用
すれば、酵素と担体との間の架橋も生じ、活性の安定な
固定化酵素を得ることが出来る。架橋重合法とゲル包括
法の組合せによって固定化酵素を製造するには、例え
ば、水溶液中で酵素とイリドイド化合物の反応により酵
素を架橋重合させ、この架橋重合酵素をゲル包括剤、例
えばアルギン酸塩で包括することにより固定化酵素を製
造する。本発明の方法は、酵素の架橋重合性が大きく、
しかも活性低下が小さいため、実質的にあらゆる種類の
酵素の固定化に使用できる。
酵素の製法と同様の操作で良いが、架橋剤としてイリド
イド化合物を使用する。例えば、架橋重合法で固定化酵
素を製造するには、固定化すべき酵素を水溶液中で担
体、例えばキトサンビーズと接触させて担体に酵素を吸
着させ、この酵素吸着担体をイリドイド化合物を含む溶
液中に置いて担体表面で酵素分子の架橋重合を起こさせ
る。この際、アミノ基のような官能基を持つ担体を使用
すれば、酵素と担体との間の架橋も生じ、活性の安定な
固定化酵素を得ることが出来る。架橋重合法とゲル包括
法の組合せによって固定化酵素を製造するには、例え
ば、水溶液中で酵素とイリドイド化合物の反応により酵
素を架橋重合させ、この架橋重合酵素をゲル包括剤、例
えばアルギン酸塩で包括することにより固定化酵素を製
造する。本発明の方法は、酵素の架橋重合性が大きく、
しかも活性低下が小さいため、実質的にあらゆる種類の
酵素の固定化に使用できる。
本発明の方法に用いるイリドイド化合物は、架橋力のあ
るものであれば特に限定されないが、毒性の無いものが
良く、例えばゲニポシド、ガーデノサイドおよびゲニポ
シド酸等のアグリコンがある。これらのうち、ゲニポシ
ドのアグリコンであるくちなし果実由来のゲニピンが最
も好ましい。
るものであれば特に限定されないが、毒性の無いものが
良く、例えばゲニポシド、ガーデノサイドおよびゲニポ
シド酸等のアグリコンがある。これらのうち、ゲニポシ
ドのアグリコンであるくちなし果実由来のゲニピンが最
も好ましい。
架橋重合法による酵素固定化の担体としては、キトサン
ビーズ、イオン交換樹脂、活性炭、合成吸着樹脂などが
用いられ、また複合法で用いることができる包括素材と
しては、アルギン酸塩、カラギーナン、寒天、アガロー
スなどの天然高分子、ポリアクリルアミド、ポリアクリ
ルアミドヒドラジド、ポリウレタンなどの合成高分子を
あげることができる。
ビーズ、イオン交換樹脂、活性炭、合成吸着樹脂などが
用いられ、また複合法で用いることができる包括素材と
しては、アルギン酸塩、カラギーナン、寒天、アガロー
スなどの天然高分子、ポリアクリルアミド、ポリアクリ
ルアミドヒドラジド、ポリウレタンなどの合成高分子を
あげることができる。
固定化酵素の製造において、イリドイド化合物による酵
素と酵素の架橋重合または酵素と担体との架橋は、pH4
〜10、好ましくはpH6〜８の水溶液中で、反応温度は５
〜50℃、好ましくは室温で、２〜70時間放置または撹拌
することにより架橋することができる。この架橋に用い
るイリドイド化合物の量は、乾燥重量で酵素１部に対し
てイリドイド化合物0.001部〜0.1部、好ましくは0.005
部〜0.05部である。
素と酵素の架橋重合または酵素と担体との架橋は、pH4
〜10、好ましくはpH6〜８の水溶液中で、反応温度は５
〜50℃、好ましくは室温で、２〜70時間放置または撹拌
することにより架橋することができる。この架橋に用い
るイリドイド化合物の量は、乾燥重量で酵素１部に対し
てイリドイド化合物0.001部〜0.1部、好ましくは0.005
部〜0.05部である。
以下、実施例により本発明を詳述する。
実施例1. グルコアミラーゼ〔グルクザイム天野〕4.0mg（40,000
ユニット）を含んだ水溶液40ml中にキトサンビーズBCW
−3013〔富士紡績（株）製〕1,000粒を加え、２時間お
だやかに撹拌した。ここに５％ゲニピン水溶液5mlを加
え18時間おだやかに撹拌した。キトサンビーズを集め、
蒸留水10mlで２度洗滌してグルコアミラーゼ固定化キト
サンビーズを得た。本ビーズの酵素活性は、4,000ユニ
ット/1,000ビーズであった。尚、酵素活性は、37℃で１
μｇのグルコースを１分間に遊離する単位を１ユニット
とした。
ユニット）を含んだ水溶液40ml中にキトサンビーズBCW
−3013〔富士紡績（株）製〕1,000粒を加え、２時間お
だやかに撹拌した。ここに５％ゲニピン水溶液5mlを加
え18時間おだやかに撹拌した。キトサンビーズを集め、
蒸留水10mlで２度洗滌してグルコアミラーゼ固定化キト
サンビーズを得た。本ビーズの酵素活性は、4,000ユニ
ット/1,000ビーズであった。尚、酵素活性は、37℃で１
μｇのグルコースを１分間に遊離する単位を１ユニット
とした。
実施例2. ストレプトマイセス菌由来のプロテアーゼ（シグマ社
製）7.5mg（0.18ユニット）を15mlの蒸留水に溶解し、
実施例１と同様に処理してプロテアーゼ固定化キトサン
ビーズを製造した。本ビーズは0.023ユニット/1,000ビ
ーズの酵素活性を示した。尚、酵素活性は、37℃で１μ
ｇのチロシンを１分間に遊離する単位を１ユニットとし
た。
製）7.5mg（0.18ユニット）を15mlの蒸留水に溶解し、
実施例１と同様に処理してプロテアーゼ固定化キトサン
ビーズを製造した。本ビーズは0.023ユニット/1,000ビ
ーズの酵素活性を示した。尚、酵素活性は、37℃で１μ
ｇのチロシンを１分間に遊離する単位を１ユニットとし
た。
実施例3. アスペルギラス菌由来のナリンジナーゼ（シグマ社製）
5mg（3.8ユニット）を15mlの蒸留水に溶解し、実施例１
と同様に処理してナリンジナーゼ固定化キトサンビーズ
を得た。本ビーズは2.0ユニット/1,000ビーズの酵素活
性を示した。尚、酵素活性は37℃で１分間に１μmoleの
ナリンジンを分解する単位を１ユニットとした。
5mg（3.8ユニット）を15mlの蒸留水に溶解し、実施例１
と同様に処理してナリンジナーゼ固定化キトサンビーズ
を得た。本ビーズは2.0ユニット/1,000ビーズの酵素活
性を示した。尚、酵素活性は37℃で１分間に１μmoleの
ナリンジンを分解する単位を１ユニットとした。
実施例4. アルギン酸ナトリウム800mgを蒸留水40ml中にゆっくり
と撹拌しながら加えて溶解し、ここにセルラーゼTO（天
野製薬（株）製）500mg（150ユニット）を加えて溶解し
た。この溶液にゲニピン50mgを加えて18時間撹拌後、１
％塩化カルシウム水溶液200ml中に撹拌しながら滴加し
てビーズ状のゲルとした。このビーズ状のゲルを0.1％
塩化カルシウムを含む0.1M酢酸緩衝液（pH4.5）200mlで
２回洗滌して、セルラーゼTO固定化ビーズ32mlを得た。
本ビーズは、平均径2mm、平均容積６μで、酵素活性
は75ユニット/32mlビーズであった。尚、酵素活性は、3
7℃で１分間に１μmoleのゲニポシドを分解する単位を
１ユニットとした。
と撹拌しながら加えて溶解し、ここにセルラーゼTO（天
野製薬（株）製）500mg（150ユニット）を加えて溶解し
た。この溶液にゲニピン50mgを加えて18時間撹拌後、１
％塩化カルシウム水溶液200ml中に撹拌しながら滴加し
てビーズ状のゲルとした。このビーズ状のゲルを0.1％
塩化カルシウムを含む0.1M酢酸緩衝液（pH4.5）200mlで
２回洗滌して、セルラーゼTO固定化ビーズ32mlを得た。
本ビーズは、平均径2mm、平均容積６μで、酵素活性
は75ユニット/32mlビーズであった。尚、酵素活性は、3
7℃で１分間に１μmoleのゲニポシドを分解する単位を
１ユニットとした。
比較例1. 実施例１と同様の方法で、ゲニピン水溶液処理を行なわ
ない固定化キトサンビーズ（無処理固定化グルコアミラ
ーゼ）及びゲニピン水溶液処理のかわりに2.5％グルタ
ルアルデヒド水溶液5mlで処理した固定化キトサンビー
ス（グルタルアルデヒド処理固定化グルコアミラーゼ）
を得た。この様にして得られた無処理固定化グルコアミ
ラーゼ及びグルタルアルデヒド処理固定化グルコアミラ
ーゼの活性は共に3200ユニット/1000粒ビーズを示し
た。
ない固定化キトサンビーズ（無処理固定化グルコアミラ
ーゼ）及びゲニピン水溶液処理のかわりに2.5％グルタ
ルアルデヒド水溶液5mlで処理した固定化キトサンビー
ス（グルタルアルデヒド処理固定化グルコアミラーゼ）
を得た。この様にして得られた無処理固定化グルコアミ
ラーゼ及びグルタルアルデヒド処理固定化グルコアミラ
ーゼの活性は共に3200ユニット/1000粒ビーズを示し
た。
比較例2. 実施例２と同様の方法で、ゲニピン水溶液処理を行なわ
ない固定化キトサンビーズ（無処理固定化プロテアー
ゼ）及びゲニピン水溶液処理のかわりに2.5％グルタル
アルデヒド水溶液5mlで処理した固定化キトサンビーズ
（グルタルアルデヒド処理固定化プロテアーゼ）を得
た。この様にして得られた無処理固定化プロテアーゼ及
びグルタルアルデヒド処理固定化プロテアーゼの活性は
共に0.016ユニット/1000粒ビーズを示した。
ない固定化キトサンビーズ（無処理固定化プロテアー
ゼ）及びゲニピン水溶液処理のかわりに2.5％グルタル
アルデヒド水溶液5mlで処理した固定化キトサンビーズ
（グルタルアルデヒド処理固定化プロテアーゼ）を得
た。この様にして得られた無処理固定化プロテアーゼ及
びグルタルアルデヒド処理固定化プロテアーゼの活性は
共に0.016ユニット/1000粒ビーズを示した。
比較例3. 実施例３と同様の方法で、ゲニピン水溶液処理を行なわ
ない固定化キトサンビーズ（無処理固定化ナリンジナー
ゼ）及びゲニピン水溶液処理のかわりに2.5％グルタル
アルデヒド水溶液5mlで処理した固定化キトサンビーズ
（グルタルアルデヒド処理固定化ナリンジナーゼ）を得
た。この様にして得られた無処理固定化ナリンジナーゼ
活性は0.4ユニット/1000粒ビーズを示し、グルタルアル
デヒド処理固定化ナリンジナーゼの活性は2.1ユニット/
1000粒ビーズを示した。
ない固定化キトサンビーズ（無処理固定化ナリンジナー
ゼ）及びゲニピン水溶液処理のかわりに2.5％グルタル
アルデヒド水溶液5mlで処理した固定化キトサンビーズ
（グルタルアルデヒド処理固定化ナリンジナーゼ）を得
た。この様にして得られた無処理固定化ナリンジナーゼ
活性は0.4ユニット/1000粒ビーズを示し、グルタルアル
デヒド処理固定化ナリンジナーゼの活性は2.1ユニット/
1000粒ビーズを示した。
比較例4. 実施例４と同様の方法で、ゲニピン添加処理を行なわな
い固定化アルギン酸カルシウムビーズ（無処理固定化セ
ルラーゼ）及びゲニピン添加処理のかわりに25％グルタ
ルアルデヒド水溶液0.4mlを添加処理した固定化アルギ
ン酸カルシウムビーズ（グルタルアルデヒド処理固定化
セルラーゼ）を得た。この様にして得た無処理固定化セ
ルラーゼの活性は25ユニット/32mlビーズを示し、グル
タルアルデヒド処理固定化セルラーゼの活性は35ユニッ
ト/32mlビーズを示した。
い固定化アルギン酸カルシウムビーズ（無処理固定化セ
ルラーゼ）及びゲニピン添加処理のかわりに25％グルタ
ルアルデヒド水溶液0.4mlを添加処理した固定化アルギ
ン酸カルシウムビーズ（グルタルアルデヒド処理固定化
セルラーゼ）を得た。この様にして得た無処理固定化セ
ルラーゼの活性は25ユニット/32mlビーズを示し、グル
タルアルデヒド処理固定化セルラーゼの活性は35ユニッ
ト/32mlビーズを示した。
（発明の効果） 実施例１で得た固定化グルコアミラーゼ、比較例１で得
た無処理グルコアミラーゼ及びグルタルアルデヒド処理
固定化グルコアミラーゼそれぞれ100粒を0.6％可溶性澱
粉9ml中に加え40℃で30分間振とうして反応させた。反
応液を抜き出し、新たに同じ澱粉溶液を加えて反応さ
せ、この操作を６回くり返し、各反応液中の還元糖量を
ソモジ法を用いて定量した。その結果は第１図に示す通
りで、実施例１の固定化グルコアミラーゼの活性及びそ
の安定性はグルタルアルデヒド処理固定化アミラーゼに
優るとも劣らぬものであった。
た無処理グルコアミラーゼ及びグルタルアルデヒド処理
固定化グルコアミラーゼそれぞれ100粒を0.6％可溶性澱
粉9ml中に加え40℃で30分間振とうして反応させた。反
応液を抜き出し、新たに同じ澱粉溶液を加えて反応さ
せ、この操作を６回くり返し、各反応液中の還元糖量を
ソモジ法を用いて定量した。その結果は第１図に示す通
りで、実施例１の固定化グルコアミラーゼの活性及びそ
の安定性はグルタルアルデヒド処理固定化アミラーゼに
優るとも劣らぬものであった。
実施例２の固定化プロテアーゼ、比較例２の無処理固定
化プロテアーゼ及びグルタルアルデヒド処理固定化プロ
テアーゼについて、それぞれ500粒を１％カゼイン水溶
液5ml中に加えて37℃で10分間振とうして反応させた。
反応液を抜き出し、新たに同じカゼイン溶液を加えて反
応させ、この操作を７回くり返し、各反応液をトリクロ
ロ酢酸を加えて除蛋白し、非沈澱性分解物の生成量をフ
ェノール試薬を加えて660nmの吸光度で測定した。結果
は第２図に示す通りで、実施例２の固定化プロテアーゼ
は、比較例２に比し活性及び安定性共勝っていた。
化プロテアーゼ及びグルタルアルデヒド処理固定化プロ
テアーゼについて、それぞれ500粒を１％カゼイン水溶
液5ml中に加えて37℃で10分間振とうして反応させた。
反応液を抜き出し、新たに同じカゼイン溶液を加えて反
応させ、この操作を７回くり返し、各反応液をトリクロ
ロ酢酸を加えて除蛋白し、非沈澱性分解物の生成量をフ
ェノール試薬を加えて660nmの吸光度で測定した。結果
は第２図に示す通りで、実施例２の固定化プロテアーゼ
は、比較例２に比し活性及び安定性共勝っていた。
実施例３の固定化ナリンジナーゼと比較例３の無処理固
定化ナリンジナーゼ及びグルタルアルデヒド処理固定化
ナリンジナーゼについて、それぞれ40ビーズを2mMナリ
ンジン水溶液（pH5.0）に加えて40℃で20分間振とうし
て反応させた。反応液を抜き出し、新たに同じナリンジ
ン溶液を加えて反応させ、同操作を５回くり返し、各反
応液中のナリンジン量を高圧液体クロマトグラフィーで
定量した。結果は第３図に示した通りで、実施例３の固
定化ナリンジナーゼはグルタルアルデヒド処理固定化ナ
リンジナーゼとほぼ同じ活性及び安定性を示した。
定化ナリンジナーゼ及びグルタルアルデヒド処理固定化
ナリンジナーゼについて、それぞれ40ビーズを2mMナリ
ンジン水溶液（pH5.0）に加えて40℃で20分間振とうし
て反応させた。反応液を抜き出し、新たに同じナリンジ
ン溶液を加えて反応させ、同操作を５回くり返し、各反
応液中のナリンジン量を高圧液体クロマトグラフィーで
定量した。結果は第３図に示した通りで、実施例３の固
定化ナリンジナーゼはグルタルアルデヒド処理固定化ナ
リンジナーゼとほぼ同じ活性及び安定性を示した。
次に実施例４の固定化セルラーゼ、比較例４の無処理固
定化セルラーゼ及びグルタルアルデヒド処理固定化セル
ラーゼについて、それぞれ1mlのビーズを130mMゲニポシ
ド水溶液10ml中に加え40℃で16時間ゆるやかに振とうし
て反応させた。反応液を抜き出し、新たに同じゲニポシ
ド溶液を加えて反応させ、同操作を６回くり返し、各反
応液中のゲニピンをHPLCで定量した。結果は第４図に示
す通りで、グルタルアルデヒド処理固定化セルラーゼと
同様に、６回のくり返し使用による活性低下を全く認め
られなかった。
定化セルラーゼ及びグルタルアルデヒド処理固定化セル
ラーゼについて、それぞれ1mlのビーズを130mMゲニポシ
ド水溶液10ml中に加え40℃で16時間ゆるやかに振とうし
て反応させた。反応液を抜き出し、新たに同じゲニポシ
ド溶液を加えて反応させ、同操作を６回くり返し、各反
応液中のゲニピンをHPLCで定量した。結果は第４図に示
す通りで、グルタルアルデヒド処理固定化セルラーゼと
同様に、６回のくり返し使用による活性低下を全く認め
られなかった。
第１図は実施例１及び比較例１の固定化グルコアミラー
ゼによる澱粉分解のくり返し使用の結果を示したグラフ
であり、第２図は実施例２と比較例２の固定化プロテア
ーゼによるカゼイン分解のくり返し使用の結果を示した
グラフであり、第３図は実施例３及び比較例３の固定化
ナリンジナーゼによるナリンジン分解のくり返し使用を
示したグラフであり、第４図は実施例４及び比較例４の
固定化セルラーゼによるゲニポシド分解の繰り返し使用
の結果を示したグラフである。
ゼによる澱粉分解のくり返し使用の結果を示したグラフ
であり、第２図は実施例２と比較例２の固定化プロテア
ーゼによるカゼイン分解のくり返し使用の結果を示した
グラフであり、第３図は実施例３及び比較例３の固定化
ナリンジナーゼによるナリンジン分解のくり返し使用を
示したグラフであり、第４図は実施例４及び比較例４の
固定化セルラーゼによるゲニポシド分解の繰り返し使用
の結果を示したグラフである。
Claims (5)
- 【請求項１】酵素を担体へ固定化するに際し、担体への
酵素の固定化を助ける架橋剤としてイリドイド化合物を
用いることを特徴とする、酵素の固定化方法。 - 【請求項２】イリドイド化合物がゲニピンである特許請
求の範囲第１項記載の酵素の固定化方法。 - 【請求項３】担体に酵素を吸着させ、この酵素吸着担体
をイリドイド化合物を含む溶液中に置くことにより、酵
素間に架橋重合および酵素と担体の間に架橋を形成させ
る、特許請求の範囲第１項記載の酵素の固定化方法。 - 【請求項４】酵素をイリドイド化合物を含む溶液中に存
在させて酵素を架橋重合させ、この架橋重合酵素をゲル
包括剤で包括する、特許請求の範囲第１項記載の酵素の
固定化方法。 - 【請求項５】イリドイド化合物で架橋されてなる固定化
酵素。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61302966A JPH0716409B2 (ja) | 1986-12-19 | 1986-12-19 | 酵素を固定化する方法 |
| US07/135,354 US4983524A (en) | 1986-12-19 | 1987-12-21 | Method of immobilizing enzymes on a support with iridoid aglycone cross-linking agents |
| CA000554998A CA1291431C (en) | 1986-12-19 | 1987-12-21 | Method of immobilizing enzymes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61302966A JPH0716409B2 (ja) | 1986-12-19 | 1986-12-19 | 酵素を固定化する方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63157981A JPS63157981A (ja) | 1988-06-30 |
| JPH0716409B2 true JPH0716409B2 (ja) | 1995-03-01 |
Family
ID=17915300
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61302966A Expired - Lifetime JPH0716409B2 (ja) | 1986-12-19 | 1986-12-19 | 酵素を固定化する方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4983524A (ja) |
| JP (1) | JPH0716409B2 (ja) |
| CA (1) | CA1291431C (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20190139758A (ko) * | 2018-06-08 | 2019-12-18 | 주식회사 아이센스 | 제니핀을 포함하는 전기화학적 센서의 센싱 막 또는 확산제어막의 제조용 가교제 |
Families Citing this family (20)
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